JPH0859678A - ドコサヘキサエノイルホスファチジルコリンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 経済的に高収率にて、出来るだけ簡単な工程
によりｓｎ−２位にドコサヘキサエン酸を含むホスファ
チジルコリンを製造する方法を提供する。 【構成】 ｓｎ−２位にドコサヘキサエン酸を有するド
コサヘキサエノイルホスファチジルコリンの製造にあた
り、水産動物の卵を原料として溶媒抽出により得られた
総リン脂質からホスファチジルコリンを分離することを
特徴とする。 【効果】 水産動物の卵を原料として精製処理すること
により、脳・神経系の構成脂質、細胞分化に関与する形
質膜の物性を支配する脂質等で注目される生理活性物質
として有用なドコサヘキサエン酸含有ホスファチジルコ
リンを、特別な合成をせず、しかも天然の立体特異性を
維持したまま、高収率で得ることができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はｓｎ−２位にドコサヘキ
サエン酸を有するホスファチジルコリンを製造する方法
に関する。

【０００２】

【従来の技術】ドコサヘキサエン酸はエイコサペンタエ
ン酸と同様に、コレステロール及び中性脂質低下作用も
大きく、その生理的重要性が認められるようになった。
一方、生化学分野の進歩によりドコサヘキサエン酸は脳
や神経系の構成脂質であるリン脂質中で何らかの作用を
司っていることが示唆されている。また形質膜の物性を
支配するリン脂質中のドコサヘキサエン酸が細胞分化の
因子として注目され、これらの中に存在するドコサヘキ
サエン酸を含有するホスファチジルコリンに強い関心が
集まっている。

【０００３】ドコサヘキサエン酸やアラキドン酸の様な
高度不飽和脂肪酸は、生体組織においては脂肪の豊富な
脂肪組織中のトリアシルグリセロールやコレステロール
エステル中には少なく、微量成分である細胞膜の構成成
分中の極性脂質に偏在している。特に、ドコサヘキサエ
ン酸に関しては脳の髄鞘、視神経の桿体等の脳神経系に
エステル型のホスファチジルコリンやホスファチジルエ
タノールアミンおよびエーテル型のホスファチジルコリ
ンやホスファチジルエタノールアミンに多いことが知ら
れている。また鶏卵の卵黄脂質中のリン脂質のホスファ
チジルコリンやホスファチジルエタノールアミンに数％
含まれている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】このようにドコサヘキ
サエン酸を含むホスファチジルコリンは生体の特殊な部
位に存在するが、その部位のみを特異的に採取する事は
難しく、また、その含有量は非常に少なく適当な原料が
ない。例えば、入手が容易な市販卵黄レシチン中のリン
脂質のホスファチジルコリンやホスファチジルエタノー
ルアミンに、ドコサヘキサエン酸が数％含まれているこ
とが知られている（東京化学同人社、生化学実験講座
３、脂質の化学 257頁) 。しかし、ホスファチジルコリ
ンやホスファチジルエタノールアミンを個々に単離し
て、各々のドコサヘキサエン酸量を定量すると、卵黄レ
シチンのリン脂質に存在するドコサヘキサエン酸はホス
ファチジルエタノールアミンに局在し、ホスファチジル
コリン中にはあまり含まれていない。そのため卵黄レシ
チン中のホスファチジルコリンからドコサヘキサエン酸
を含むホスファチジルコリンを効率良く分画するには特
別な工夫が必要である。

【０００５】ドコサヘキサエン酸を含むホスファチジル
コリンが、生体膜において生理的役割、例えばホルモン
作用の発現（秋野豊明、油化学 30、705(1981))を果た
すには、ドコサヘキサエン酸がホスファチジルコリンの
ｓｎ−２位に、パルミチン酸やオレイン酸の様な飽和モ
ノエン酸がホスファチジルコリンのｓｎ−１位に結合し
ていることが重要である。しかしながらドコサヘキサエ
ン酸をホスファチジルコリンのｓｎ−１位とｓｎ−２位
に結合するにはグリセロホスホリルコリンの塩化カドミ
ウム錯体にドコサヘキサエン酸の酸無水物やハロゲン化
物を反応させればよいが、ｓｎ−２位にドコサヘキサエ
ン酸を結合した状態でｓｎ−１位にドコサヘキサエン酸
以外の脂肪酸を結合させるにはこの様な直接反応では難
しいのが現状である。

【０００６】従って、本発明の目的は、経済的に高収率
にて、出来るだけ簡単な工程によりｓｎ−２位にドコサ
ヘキサエン酸を含むホスファチジルコリンを製造する方
法を提供することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明は、ｓｎ−２位に
ドコサヘキサエン酸を有するドコサヘキサエノイルホス
ファチジルコリンの製造にあたり、水産動物の卵を原料
として溶媒抽出により得られた総リン脂質からホスファ
チジルコリンを分離することを特徴とする。以下、本発
明につき更に詳細に説明する。

【０００８】本発明者らは脂質量が豊富で、構成脂肪酸
中にドコサヘキサエン酸を多量に含む水産動物の卵の脂
質を詳細に検討した。天然脂質原料の脂肪組成は系統発
生系とは関係なく、環境因子が重要であり、特に動物で
はその食餌環境が同一である場合、その組成は著しく類
似することが知られている。即ち、ドコサヘキサエン酸
は植物性原料からは見出し難く、動物性原料でも陸上動
物よりも水産動物から見出されるので、これらの動物の
卵が原料として好ましい。天然原料にはシャケやニシン
等の水産動物の卵が入手が容易であり、また養殖が盛ん
な、ハマチ、コイ、ウナギ、ニジマス、クルマエビ等の
卵も原料として好ましい。

【０００９】原料となる水産動物の卵は可能な限り新鮮
であることが望ましく、採取後直ちに冷凍、凍結乾燥ま
たは真空乾燥処理した原料を使用すると、原料中の酸価
の上昇、得られる目的物の過酸化物価の上昇による品質
低下を避けることができ、良質な目的物を得ることが出
来る。目的物中に過酸化物が存在すると生体中において
細胞障害を引き起こす原因となり、高度不飽和脂肪酸の
過酸化反応は共役ジエンの生成を伴うため二重結合の移
動を生じる。

【００１０】原料（水産動物由来の卵）を精製処理する
には、新鮮な材料を無酸素状態下に溶剤抽出することが
好ましい。その際、材料に対して例えば蒸留水およびメ
タノール−クロロホルム系溶媒、アセトン、エーテル、
ヘキサン等の溶剤を加え、必要に応じてその混合物をロ
ウルデス・ホモジナイザー、ソルバール・オムニミキサ
ー、ワーリングブレンダー、ポッター・エルベージェム
・ガラスホモミキサー等によってホモジナイズする。無
酸素状態下として、例えば真空下、窒素気流下および二
酸化炭素気流下に、０℃〜60℃、10〜 180分間、溶剤抽
出することが出来る。溶剤は水産動物の卵１部に対し１
〜５部添加するのが好ましい。

【００１１】溶剤抽出した粗脂質からホスファチジルコ
リンを分離する方法として例えば次の様な方法がある。
粗脂質を冷アセトン処理して総リン脂質を分画してから
カラムクロマト法で分離する方法、粗脂質を冷アセトン
処理して総リン脂質を分画してからマグネシウム塩を加
えてリン脂質マグネシウム錯体として濾別分離する方
法、粗脂質を冷アセトン処理して総リン脂質を分画して
エタノール系溶媒による溶剤分別する方法、粗脂質を直
接シリカゲルカラムクロマトグラフィーに付し、ヘキサ
ン→クロロホルム→メタノールと溶媒の混合比率を無極
性から極性へ変化させながら分離する方法等である。

【００１２】

【発明の効果】本発明の方法によれば、水産動物の卵を
原料として精製処理することにより、脳・神経系の構成
脂質、細胞分化に関与する形質膜の物性を支配する脂質
等で注目される生理活性物質として有用なドコサヘキサ
エン酸含有ホスファチジルコリンを、特別な合成をせ
ず、しかも天然の立体特異性を維持したまま、高収率で
得ることができる。さらに無酸素下状態で処理するとき
は、細胞障害の原因となる過酸化脂質の産生を抑制した
ままドコサヘキサエン酸含有ホスファチジルコリンを得
ることができる。

【００１３】

【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
る。実施例１ 採卵後直ちに冷凍したニジマスの卵を窒素気流下で解凍
した。この原料1300ｇをアセトン２リットルに入れ、窒
素気流下、T.H.ホモミキサー（特殊機工工業製）で荒く
ホモゲナイズしてからエクセル・オート・ホモゲナイザ
ー（日本精器製作所製) で氷冷状態下30分ホモゲナイズ
した。

【００１４】懸濁液をブッフナー漏斗で濾過し、濾液と
湿ケーキに分けた。濾液からアセトン抽出物10ｇを得
た。乳灰色の湿ケーキ830gをエチルエーテル３リットル
に入れ、スリーワンモータータイプ 600ＧＭ（新東科学
製）で200rpmで回転しながら30分間抽出した。懸濁液を
ブッフナー漏斗で濾過し、濾液と湿ケーキに分けた。濾
液からエチルエーテル抽出物48ｇを得た。

【００１５】乳灰色の湿ケーキ770gをクロロホルム−メ
タノール（１／1, vol/vol）混液１リットルで２回、分
液漏斗中で抽出した。懸濁液をブッフナー漏斗で濾過
し、濾液と湿ケーキに分けた。濾液からクロロホルム−
メタノール抽出物55ｇを得た。乳灰色の湿ケーキ690gを
クロロホルム−メタノール（２／1,vol/vol)混液 1.5リ
ットルで２回、分液漏斗中で抽出した。懸濁液をブッフ
ナー漏斗で濾過し、濾液と湿ケーキに分けた。濾液から
クロロホルム−メタノール抽出物を５ｇ得た。各抽出物
を一緒にした。得られた粗脂質量は118gであった（対原
料収率9.1 ％)。粗脂質の全量をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィー（シリカ60、和光純薬製：８φ×40cmカ
ラムに２リットル）に付した後、ヘキサン中にクロロホ
ルムの比率を上げていく溶離液系で中性脂質を除去し
た。中性脂質の回収量69ｇで、組成は薄層クロマトグラ
フィー（展開溶媒：ヘキサン−エチルエーテル−酢酸
50／50／1, vol/vol/vol）分析でトリアシルグリセロー
ルが主体であった。

【００１６】中性脂質を除いたカラムに、クロロホルム
中にメタノールの比率を上げていく溶離液系を流した。
クロロホルム対メタノールの比率が35：65〜25：75の範
囲にホスファチジルコリンを主成分とする区分が溶出
し、脱溶媒後28ｇのホスファチジルコリンを得た。ホス
ファチジルコリン区分の判定は薄層クロマトグラフィー
（展開溶媒：クロロホルム−メタノール−水 65／25／
4, vol/vol/vol）で行った。薄層クロマトグラフィー上
のRf値0.20〜0.30（ホスファチジルコリン) にシングル
スポットのみが認められる分画を集めて、窒素気流下で
脱溶媒を行い、純ホスファチジルコリンを19ｇ得た。

【００１７】分取されたホスファチジルコリンを三弗化
ホウ素メタノール法でメチルエステル化し、キャピラリ
ーカラムガスクロマトグラフィー（液相：カーボワック
ス−20Ｍ、25ｍ、170 ℃) で脂肪酸組成を測定した。そ
の結果、ドコサヘキサエン酸は46％でパルミチン酸、ス
テアリン酸、オレイン酸が各約10％を占めていた。この
ホスファチジルコリンをホスホリパーゼＡ₂ で加水分解
し、三弗化ホウ素メタノール法でメチルエステル化し、
キャピラリーカラムガスクロマトグラフィーで脂肪酸組
成を測定した。その結果、ドコサヘキサエン酸は80％で
あった。

【００１８】次にホスファチジルコリンの分子種を分析
するため、ＦＡＢ−ＭＳ(Pos.)で分子量Ｍに相当するm/
z を測定した。その結果、m/z 806(パルミトイルドコサ
ヘキサエニルホスファチジルコリンに相当) 、m/z 832
(オレオイルドコサヘキサエニルホスファチジルコリン
に相当) 、m/z 834(ステアロイルドコサヘキサエニルホ
スファチジルコリンに相当) が強く認められた。

【００１９】ホスファチジルコリン中のアルキル鎖の分
布を分析をするため、高速液体クロマトグラフィー（シ
ョーデックスＯＤＳpak Ｆ−611 Ａ) にメタノール（１
ml／min)で展開し、ＵＶ210nm でモニターした。その結
果、一本のメインピークと数本の小さなピークが認めら
れ、このホスファチジルコリンのアルキル鎖の分布は少
なかった。ホスファチジルコリンの過酸化脂質量は電位
差滴定法（自動滴定装置ＧＴ−05、三菱化成工業（株）
製) で測定した。原材料の魚卵粗脂質の過酸化物量が1
2.3meq./kgであるのに対し、ホスファチジルコリン画分
は18.4meq./kgであった。

【００２０】実施例２ 採卵後直ちに冷凍したニジマスの受精卵を窒素気流下で
解凍した。この原料1500ｇをクロロホルム／メタノール
（２／1, vol/vol) 混液６リットルに入れ、窒素気流
下、T.H.ホモミキサー（特殊機工工業製）で高速で剪断
抽出しながら氷冷状態下30分間ホモゲナイズした。

【００２１】懸濁液をブッフナー漏斗で濾過し、濾液と
乳灰色の湿ケーキに分けた。乳灰色の湿ケーキ910gを上
記溶媒２リットルに入れ、上記と同一の条件で処理し
た。同様に懸濁液から濾液と湿ケーキに分けた。乳灰色
の湿ケーキ780gを上記溶媒２リットルに入れ同一条件で
処理した。さらに、３回目の懸濁液から濾液と湿ケーキ
の濾別を行った。全濾液を集めて遠心分離し、上澄液に
クロロホルム３リットルと蒸留水３リットルを加えて、
よく水洗した後、遠心分離で二層に分離した。

【００２２】下層のクロロホルム層を集めて、窒素気流
下、ロータリーエバポレーターを用い、30℃で濃縮し、
溶媒留去の最後にベンゼン 100mlを加えて脱水を行いな
がら脱溶媒した。溶媒を留去した抽出物を真空デシケー
ターで一昼夜乾燥して得られた全粗脂質の重量は、127g
（対原料収率 8.5％）であった。得られた全粗脂質を氷
冷アセトン1.3リットル中に入れ、窒素気流下、スリー
ワンモータータイプ600 ＧＭ（新東科学製）で200rpmで
回転しながら10分間抽出した。アセトン懸濁液を冷却し
たブッフナー漏斗で濾過し、沈澱を回収した。この沈澱
に、上記同様の冷アセトン処理を４回繰り返して、完全
に中性脂質を除いた総リン脂質分画57g(粗脂質中45.2
％）を得た。

【００２３】総リン脂質全量をシリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（富士ゲルＣＧ−３、水戸化学製、５φ×
40cmカラムに700cc)に付した後、クロロホルム−メタノ
ール（４／1, vol/vol）混液の溶離液系でホスファチジ
ルコリン以前に溶出するホスファチジルエタノールアミ
ン等のリン脂質を除去した。さらに純粋なホスファチジ
ルコリンを分画するためクロロホルム−メタノール（３
／2, vol/vol) 混液の溶離液系で溶出させた。溶離液 5
00mlずつを分画し、各分画を薄層クロマトグラフィー
（展開溶媒：クロロホルム−メタノール−水65／25／4,
vol/vol/vol）で測定した。各分画の内、薄層クロマト
グラフィーでRf値0.20〜0.35（ホスファチジルコリン)
にシングルスポットのみが認められる分画19ｇを得た。

【００２４】分取されたホスファチジルコリンを三弗化
ホウ素メタノール法でメチルエステル化し、キャピラリ
ーカラムガスクロマトグラフィー( 液相：カーボワック
ス−20Ｍ、25ｍ、170 ℃) で脂肪酸組成を測定した。そ
の結果、ドコサヘキサエン酸は45％でパルミチン酸、ス
テアリン酸およびオレイン酸が、各約10％を占めてい
た。

【００２５】このホスファチジルコリンをホスホリパー
ゼＡ₂ で加水分解し、三弗化ホウ素メタノール法でメチ
ルエステル化し、キャピラリーガスクロマトグラフィー
で脂肪酸組成を測定した。その結果ドコサヘキサエン酸
は78％であった。次に、ホスファチジルコリンの分子種
を分析するため、ＦＡＢ−ＭＳ(Pos.)で分子量に相当す
るm/z を測定した（第１図）。得られた質量スペクトル
はm/z 806(パルミトイルドコサヘキサエニルホスファチ
ジルコリンに相当) 、m/z 832(オレオイルドコサヘキサ
エニルホスファチジルコリンに相当) およびm/z 834(ス
テアロイルドコサヘキサエニルホスファチジルコリンに
相当) が強く認められた。ホスファチジルコリン中のア
ルキル鎖の分布を分析するため、ＯＤＳカラム（ショー
デックスＯＤＳpak Ｆ−611 Ａ、昭光通商製) を装備し
た高速液体クロマトグラフィーに、メタノール（１ml／
min)で展開し、ＵＶ210nm でモニターした。得られたク
ロマトグラムは一本のメインピークと数本の小さなピー
クが認められ、このホスファチジルコリンのアルキル鎖
の分布は少なかった。ホスファチジルコリンの過酸化脂
質量は、18.7meq./kgであった。

【００２６】実施例３ 採卵後直ちに冷凍したサケの卵（イクラ）を窒素気流下
で解凍した。この原料500gにクロロホルム／メタノール
（２／1, vol/vol) 混液２リットルを加え、ホモミキサ
ーで充分に混和した後、濾過し、窒素気流下で残渣を同
混液１リットルで２回同様の操作を行った。濾液を合わ
せ、水洗した後、溶媒を留去して、真空デシケーター中
で３時間乾燥して得られた粗脂質の重量は、73.5g(対原
料収率14.7％) であった。

【００２７】得られた全粗脂質を氷冷アセトン 0.4リッ
トル中に入れ、窒素気流下で回転しながら10分間抽出し
た。アセトン懸濁液を冷却したブッフナー漏斗で濾過
し、沈澱を回収した。この沈澱に、上記同様の冷アセト
ン処理を４回繰り返して、完全に中性脂質を除いた総リ
ン脂質分画23.7g(粗脂質中32.2％）を得た。総リン脂質
全量をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士ゲル
ＣＧ−３、水戸化学製、５φ×40cmカラムに400cc)に付
した後、クロロホルム−メタノール（３／2, vol/vol）
混液の溶離液系でホスファチジルコリン以前に溶出する
ホスファチジルエタノールアミン等のリン脂質を除去し
た。

【００２８】さらに、純粋なホスファチジルコリンを分
画するため、同混液の溶離液系で溶出させた。溶離液50
0 mlずつを分画し、各分画を薄層クロマトグラフィー
（展開溶媒：クロロホルム−メタノール−水 65 ／25／
4, vol/vol/vol）で測定した。各分画のうち、薄層クロ
マトグラフィーで、Rf値0.20〜0.35（ホスファチジルコ
リン) にシングルスポットが認められる分画6.1gを得
た。

【００２９】分取されたホスファチジルコリンを三弗化
ホウ素メタノール法でメチルエステル化し、キャピラリ
ーカラムガスクロマトグラフィー( 液相：カーボワック
ス−20Ｍ、25ｍ、170 ℃) で脂肪酸組成を測定した。そ
の結果、ドコサヘキサエン酸31％で、パルミチン酸、ス
テアリン酸およびオレイン酸が、各約10％を占めてい
た。

【００３０】このホスファチジルコリンをホスホリパー
ゼＡ₂ で加水分解し、三弗化ホウ素メタノール法でメチ
ルエステル化し、キャピラリーガスクロマトグラフィー
で脂肪酸組成を測定した。その結果ドコサヘキサエン酸
は58％であった。次にホスファチジルコリンの分子種を
分析するため、ＦＡＢ−ＭＳ(Pos.)で分子量に相当する
m/z を測定した。得られた質量スペクトルはm/z 806(パ
ルミトイルドコサヘキサエニルホスファチジルコリンに
相当) 、m/z 832(オレオイルドコサヘキサエニルホスフ
ァチジルコリンに相当) およびm/z 834(ステアロイルド
コサヘキサエニルホスファチジルコリンに相当) が強く
認められた。ホスファチジルコリン中のアルキル鎖の分
布を分析するため、ＯＤＳカラム（ショーデックスＯＤ
Ｓpak Ｆ−611 Ａ、昭光通商製) を装備した高速液体ク
ロマトグラフィーにメタノール（１ml／min)で展開し、
ＵＶ210nm でモニターした。得られたクロマトグラムは
一本のメインピークと数本の小さなピークが認められ、
このホスファチジルコリンのアルキル鎖の分布は少なか
った。ホスファチジルコリンの過酸化脂質量は、12.4me
q./kgであった。

【００３１】実施例４ ニシンの卵500gを実施例１と同様に溶剤処理して粗脂質
14ｇ（対原料収率 2.8％）を得た。この粗脂質の全量を
シリカゲルカラムクロマトグラフィー（キーゼルゲル6
0、メルク社製、４φ×40cmカラム 0.4リットル) に付
した後、クロロホルムを中性脂質が出なくなるまで流し
て、さらにメタノールを流してリン脂質画分の溶媒を留
去した。得られた総リン脂質分画は8.3g（粗脂質中59.2
％）であった。

【００３２】中性脂質を除いた上記カラムに、クロロホ
ルム−メタノール（３／２ vol/vol）混液の溶離液を用
いて、薄層クロマトグラフィーで、Rf値0.20〜0.35のシ
ングルスポットを示す純ホスファチジルコリン分画3.1g
を得た。このホスファチジルコリンを実施例１と同様に
分析したところ、脂肪酸組成としてドコサヘキサエン酸
を40％含有しており、また、ホスホリパーゼＡ₂ で加水
分解して得たｓｎ−２位の脂肪酸組成は、ドコサヘキサ
エン酸を81％含有していた。また、過酸化脂質量は10.2
meq./kg であった。

【００３３】卵ホスファチジルコリンは、逆相分配カラ
ムクロマトグラフィー、質量分析計およびホスホリパー
ゼＡ₂ の解析から、このホスファチジルコリンの主成分
の分子種がドコサヘキサエン酸をｓｎ−２位に結合する
ホスファチジルコリンであることがわかった。即ち、魚
卵ホスファチジルコリンの主成分はｓｎ−２位にドコサ
ヘキサエン酸を有するホスファチジルコリンである。

【００３４】実施例５ 採卵後直ちに冷凍したクルマエビの卵を窒素気流下で解
凍した。この原料1000ｇをアセトン1.5リットルに入
れ、窒素気流下、T.H.ホモミキサー（特殊機工工業製）
で荒くホモゲナイズしてからエクセル・オート・ホモゲ
ナイザー（日本精器製作所製) で氷冷状態下30分ホモゲ
ナイズした。

【００３５】懸濁液をブッフナー漏斗で濾過し、濾液と
湿ケーキに分けた。濾液からアセトン抽出物７ｇを得
た。乳灰色の湿ケーキ630gをエチルエーテル2.5リット
ルに入れ、スリーワンモータータイプ 600ＧＭ（新東科
学製）で200rpmで回転しながら30分間抽出した。懸濁液
をブッフナー漏斗で濾過し、濾液と湿ケーキに分けた。
濾液からエチルエーテル抽出物35ｇを得た。

【００３６】乳灰色の湿ケーキ580gをクロロホルム−メ
タノール（１／1, vol/vol）混液１リットルで２回、分
液漏斗中で抽出した。懸濁液をブッフナー漏斗で濾過
し、濾液と湿ケーキに分けた。濾液からクロロホルム−
メタノール抽出物40ｇを得た。乳灰色の湿ケーキ535gを
クロロホルム−メタノール（２／1,vol/vol)混液 1.5リ
ットルで２回、分液漏斗中で抽出した。懸濁液をブッフ
ナー漏斗で濾過し、濾液と湿ケーキに分けた。濾液から
クロロホルム−メタノール抽出物を４ｇ得た。各抽出物
を一緒にした。得られた粗脂質量86ｇであった（対原料
収率8.6％)。

【００３７】粗脂質の全量をシリカゲルカラムクロマト
グラフィー（シリカ60、和光純薬製：８φ×40cmカラム
に２リットル）に付した後、ヘキサン中にクロロホルム
の比率を上げていく溶離液系で中性脂質を除去した。中
性脂質の回収量54ｇで、組成は薄層クロマトグラフィー
（展開溶媒：ヘキサン−エチルエーテル−酢酸 50／50
／1, vol/vol/vol）分析でトリアシルグリセロールが主
体であった。

【００３８】中性脂質を除いたカラムに、クロロホルム
中にメタノールの比率を上げていく溶離液系を流した。
クロロホルム対メタノールの比率が35：65〜25：75の範
囲にホスファチジルコリンを主成分とする区分が溶出
し、脱溶媒後24.7ｇのホスファチジルコリンを得た。ホ
スファチジルコリン区分の判定は薄層クロマトグラフィ
ー（展開溶媒：クロロホルム−メタノール−水 65／25
／4, vol/vol/vol）で行った。薄層クロマトグラフィー
上のRf値0.20〜0.30（ホスファチジルコリン) にシング
ルスポットのみが認められる分画を集めて、窒素気流下
で脱溶媒を行い、純ホスファチジルコリンを15.1ｇ得
た。

【００３９】その結果、ドコサヘキサエン酸は30％で、
パルミチン酸、オレイン酸が各約20％を占めていた。こ
のホスファチジルコリンをホスホリパーゼＡ₂ で加水分
解し、三弗化ホウ素メタノール法でメチルエステル化
し、キャピラリーカラムガスクロマトグラフィーで脂肪
酸組成を測定した。その結果、ドコサヘキサエン酸は61
％であり、オレイン酸が30％、その他に数本の微小ピー
クが認められた。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 桜井 成 東京都杉並区南荻窪１丁目33番12号 (72)発明者 旭 健一 埼玉県和光市諏訪原団地１−４−108 (72)発明者 高橋 信孝 東京都杉並区荻窪４丁目27番２号

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】ｓｎ−２位にドコサヘキサエン酸を有する
   ドコサヘキサエノイルホスファチジルコリンの製造にあ
   たり、水産動物の卵を原料として溶媒抽出により得られ
   た総リン脂質からホスファチジルコリンを分離すること
   を特徴とするドコサヘキサエノイルホスファチジルコリ
   ンの製造法。