JP2023503200A - 多価不飽和脂肪酸で強化された微生物油組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、多価不飽和脂肪酸で強化された、微生物油組成物、特に、微細藻類の微生物油組成物であって、組成物の４０ｍｇ／ｇ以下の飽和脂肪酸含有量、組成物の５００ｍｇ／ｇ以上のオメガ３多価不飽和脂肪酸含有量を有し、かつ、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドおよび脂肪酸エステルの総量に対して、７０％未満のトリグリセリドの量、１０～３５％のジグリセリドの量、１～５％のモノグリセリドの量を含むことを特徴とする、微生物油組成物に関する。【選択図】なし

Description

多価不飽和脂肪酸は、多くの生理学的反応および医薬機能におけるそれらの知られた有益な役割のために、数年前から、食事を多価不飽和脂肪酸で強化することが推奨されている。

目的とする多価不飽和脂肪酸の中には、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）などのオメガ３ファミリーに属するもの、ならびにアラキドン酸（ＡＲＡ）などのオメガ６ファミリーに属するものがある。

ＤＨＡおよびＥＰＡは、多くの生理学的研究の対象であり、現在、その不可欠な役割は、乳児、小児および成人で知られている。したがって、ＤＨＡは、脳および網膜の発達ならびに認知機能の保存におけるその不可欠な役割で知られている。ＥＰＡについては、これは良好な心機能に寄与し、抗炎症性を有する。

多価不飽和脂肪酸が最も豊富な食事は海洋由来で、定期的な魚の摂取による。しかしながら、期待される治療効果を得るためには、摂取しなければならない魚の量は多くなければならない。

多価不飽和脂肪酸の摂取を増加させる１つの方法は、魚油に基づく食品サプリメントまたは濃縮物を摂取することである。これらの生成物は、トリグリセリドの形態またはエチルエステルの形態の、天然油または高濃度のＤＨＡまたはＥＰＡを有する油の形態にある。

魚油では、多価不飽和脂肪酸は、主にトリグリセリドの形態で見出される。魚油中のＤＨＡまたはＥＰＡを濃縮する方法は、最初に、化学触媒を使用するエタノールエステル交換によって、または酵素的エタノールエステル交換によって、脂肪酸をグリセロールから分離することを含む。第２の段階では、ＤＨＡまたはＥＰＡの強化は、分子蒸留によって実施され、その分子量に従って化合物の分離をもたらす。

仏国特許第２９５５４５９号は、例えば、本質的にモノグリセリドの形態のＤＨＡで魚油を強化するための方法を記載する。本方法は、グリセロール上の位置（１／３）の脂肪酸を特異的に溶解する酵素の存在下で実施される酵素エタノール分解の工程を含む。ＤＨＡは主にｓｎ２位に位置するため、本方法は、他の多価不飽和脂肪酸を排除することを可能にする。脂肪酸のエチルエステルおよびエタノールは、真空下でのその後の蒸留工程の間に除去される。

しかしながら、多価不飽和脂肪酸の高まる需要を踏まえて、魚油はもはや単一の供給源としては役立たない。さらに、それらは、多くの消費者にとって不快な味および臭いの特徴、ならびに潜在的に高いコレステロール含有量を有する。最後に、季節に応じた脂肪酸の生成という点から不規則性が見出される。

脂肪酸を生産するための魚油の代替品を特定することが必要となった。

微細藻類もまた、高い多価不飽和脂肪酸含有量を有し、したがって、有利な代替供給源を表す。それらのいくつかは、バイオマスの最大４０～５０％を占める多価不飽和脂肪酸を生成し得る。加えて、それらは制御された条件下で栽培され得るという利点がある。海洋微細藻類は、魚油の臭いおよび味の負の特徴を有しない。また、それらはコレステロールを生成しない。

Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ属またはＳｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ属に属する微細藻類は、オメガ３長鎖多価不飽和脂肪酸が豊富な供給源である。例えば、微細藻類Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ ｓｐは、脂肪酸の総重量で２０％～３５％のドコサヘキサエン酸を産生し得る（Ｈａｄｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，２０１７）（Ｈａｍｍｏｎｄ ｅｔ ａｌ．，２００１）。

例示として、国際特許出願第２０１３／１７８９３６号が挙げられるであろう。この出願は、Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉａｌｅｓ ｓｐに属する微細藻類油をエチルエステルの形態のＤＨＡで強化する方法を記載する。

得られる多価不飽和脂肪酸の量とは別に、油の別の重要な定性的要素は、飽和脂肪酸含有量である。なぜなら、いくつかの研究が、飽和脂肪酸の消費と心血管疾患または高コレステロール血症のリスクとの関連を示しているためである。しかしながら、その消費が完全に排除されるべきではない場合、不飽和脂肪酸を選択してそれを制限することが推奨される。

したがって、多価不飽和脂肪酸、特に、限定的な飽和脂肪酸含有量を有するＤＨＡおよびＥＰＡなどのオメガ３の濃度を有する油を提案し得ることが必要であると思われる。

さらに、物質の良好な補充は、この物質の量だけでなく、そのバイオアベイラビリティにも依存する。研究は、いわゆる再構成トリグリセリドの形態の魚油から生じる長鎖多価不飽和脂肪酸の吸収が、天然トリグリセリドの形態またはエチルエステルの形態の脂肪酸の吸収よりも優れていることを証明した（Ｓｃｈｕｃｈａｒｄｔ ｅｔ ａｌ．；Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ，ｌｅｕｋｏｔｒｉｅｎｅｓ ａｎｄ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ；８９（２０１３）１－８）。再構成されたトリグリセリドは、エステル交換／再エステル化法によって油の天然のトリグリセリドから得られる。これらの方法では、脂肪酸はエチルエステル（脂肪酸エチルエステル）の形態で移されるか、または次いで長鎖多価不飽和脂肪酸画分を強化するように分子蒸留を受ける。これらの脂肪酸は、次いで、グリセリド、特にトリグリセリドの形態で酵素的に変換される。

加えて、Ｆｕｍｉａｋｉ ｅｔ ａｌ．により行われた研究（Ｌｙｍｐｈａｔｉｃ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ ｏｆ ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｇｉｖｅｎ ａｓ ｍｏｎｏｇｌｙｃｅｒｉｄｅ，ｄｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ，ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ ａｎｄ ｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ ｉｎ ｒａｔｓ；Ｊ．Ｎｕｔｒ．Ｓｃｉ．Ｖｉｔａｍｉｎｏｌ；４８，３０－３５，２００２）は、以前にモノおよびジグリセリドの形態で摂取されたＤＨＡのリンパ用量が、以前にトリグリセリドおよびエチルエステルの形態で摂取されたＤＨＡで得られたものよりも優れていたことを示した。モノグリセリド形態の長鎖多価不飽和脂肪酸の良好なバイオアベイラビリティも別の研究で検証された（Ｖａｌｅｎｚｕｌｅａａ ｅｔ ａｌ．）。この研究は、ＤＨＡモノグリセリドの補充により、ＤＨＡがエチルエステルの形態で供給されたときに見出されるものよりも高い血漿および赤血球中のＤＨＡ含有量を見出すことが可能であることを示している（Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ Ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃ Ａｃｉｄ Ｅｔｈｙｌ Ｅｓｔｅｒ ａｎｄ ｓｎ－２ Ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｙｌ Ｍｏｎｏａｃｙｌｇｌｙｃｅｒｉｄｅ ｏｎ Ｐｌａｓｍａ ａｎｄ Ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄｓ ｉｎ Ｒａｔｓ，Ａｎｎ Ｎｕｔｒ Ｍｅｔａｂ，２００５；４９：４９－５３）。

したがって、本質的にトリグリセリド、ジグリセリドおよびモノグリセリドの形態にある高濃度の多価不飽和脂肪酸、特にオメガ３を有する油を提供し得ることもまた必要であると思われる。

したがって、本発明は、多価不飽和脂肪酸で強化された微生物油組成物であって、
－組成物の４０ｍｇ／ｇ以下の飽和脂肪酸含有量、
－組成物の５００ｍｇ／ｇ以上のオメガ３多価不飽和脂肪酸含有量、を有し、
かつ、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドおよび脂肪酸エチルエステルの総量に対して、
－７０％未満のトリグリセリドの量、
－１０～３５％のジグリセリドの量、
－１～５％のモノグリセリドの量、を含むことを特徴とする、微生物油組成物に関する。

したがって、本発明による組成物は、高いオメガ３多価不飽和脂肪酸含有量および非常に低い飽和脂肪酸含有量を有する優れた脂肪酸プロファイルを有する。また、それは、最も効果的な化学形態を好む優れたバイオアベイラビリティを有する。

有利には、本発明による組成物の飽和脂肪酸含有量は、組成物の３０ｍｇ／ｇ以下であり、優先的には、組成物の２５ｍｇ／ｇ以下である。

油組成物は、Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ、Ｓｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ、Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ、Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ、Ｐｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍ、Ｎｉｔｚｃｈｉａ、Ｓｔａｕｒｏｓｉｒａ、ＣｒｙｐｔｈｅｃｏｄｉｎｉｕｍまたはＵｌｋｅｎｉａ属の微細藻類から得ることができる。

Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ属およびＳｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ属の微細藻類は、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）で強化された油組成物を得ることを可能にする。

Ｎａｎｎｏｃｈｌｏｒｏｐｓｉｓ、Ｉｓｏｃｈｒｙｓｉｓ、ＰｈａｅｏｄａｃｔｙｌｕｍまたはＮｉｔｚｃｈｉａ属の微細藻類は、エイコサペンタエン酸（ＥＰ Ａ）で強化された油組成物を得ることを可能にする。

本発明の意味において、「多価不飽和脂肪酸で強化された」とは、採用された濃縮方法の実施後に、組成物が最初に有していた多価不飽和脂肪酸の量の２倍超を含む組成物を意味する。

好ましくは、組成物は、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドおよび脂肪酸エチルエステルの総量に対して、４０～６７％、より優先的には５５～６５％のトリグリセリドの量を含む。

また、優先的には、組成物は、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドおよび脂肪酸エチルエステルの総量に対して、２５～３５％のジグリセリドを含む。

また、優先的には、組成物は、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、および脂肪酸エチルエステルの総量に対して、１～２％のモノグリセリドを含む。

本発明の文脈において、エチルエステルの量は、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドおよび脂肪酸エチルエステルの総量に対して、２％未満である。

第１の実施形態によれば、組成物は、組成物の６００ｍｇ／ｇ以上、より優先的には、組成物の７００ｍｇ／ｇを超えるＤＨＡ含有量を含む。

第２の実施形態によれば、組成物は、組成物の６００ｍｇ／ｇ以上、優先的には、組成物の７００ｍｇ／ｇを超えるＥＰＡ含有量を含む。

本発明の第１の実施形態によれば、組成物は、組成物の少なくとも４ｍｇ／ｇ、優先的には、組成物の４ｍｇ／ｇ～８ｍｇ／ｇのオメガ３エイコサテトラエン酸を含む。

オメガ３ファミリーに属する多価不飽和脂肪酸が、数年間にわたって多数の研究および科学的発表の対象であるならば、後者は、実際には、主にＥＰＡおよびＤＨＡに関するものにすぎない。現在、科学コミュニティの関心は、おそらく多数の生理学的機構において重要かつ独立した役割を有するであろう他のオメガ３に向かっている。例えば、オメガ３エイコサテトラエン酸（ＥＴＡ）がそうである。この脂肪酸は、約２０年前に、ＣａｒｅａｇａおよびＳｐｒｅｃｈｅｒ（Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ ８，１１，１４，１７－ｅｉｃｏｓａｔｅｔｒａｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ ａｎｄ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，Ｖｏｌｕｍｅ ９２０，ｐ９４－１０１．）ならびにＣｒｏｓｅｔ ｅｔ ａｌ．（Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ Ｈ Ｓｙｎｔｈａｓｅ ａｎｄ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ １２－Ｌｉｐｏｘｙｇｅｎａｓｅ ｂｙ ８，１１，１４，１７－ｅｉｃｏｓａｔｅｔｒａｅｎｏｉｃ Ａｃｉｄ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ５７，ｐ６３１－６３８）の研究によって同定された。これらの研究は、エイコサテトラエン酸の抗炎症作用、炎症促進化合物の形態の減少、および血小板凝集に対する阻害作用を明らかにした。

結果として、エイコサテトラエン酸は、アスピリンまたはインドメタシンなどの非ステロイド性抗炎症阻害剤の好適な代替物質となるであろう。

したがって、本発明による組成物は、オメガ３エイコサテトラエン酸の少なくない量を提供するため、明らかに有利である。

本発明の第１の実施形態によれば、組成物はまた、組成物の１４０ｍｇ／ｇ以下、優先的には、組成物の７０～１４０ｍｇ／ｇのオメガ６ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）含有量を含む。

本発明の別の目的は、上記の特徴を有する微生物油組成物を調製する方法を提案することである。

この目的のために、本発明による方法は、
（ｉ）化学触媒または酵素触媒の存在下での、トリグリセリド形態のオメガ３多価不飽和脂肪酸を含む微生物油とアルコールとの反応の工程、
（ｉｉ）少なくとも７枚の理論プレートを含む精留塔に結合されたスクレーパーフィルム蒸発器内での、高真空下での分子蒸留による、オメガ３多価不飽和脂肪酸の濃縮の工程、
（ｉｉｉ）酵素およびグリセロールの存在下で、オメガ３多価不飽和脂肪酸のモノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリドを再構成する工程、
（ｉｖ）真空下での短経路分子蒸留の工程、を含む。

天然油では、オメガ３多価不飽和脂肪酸は、本質的にトリグリセリドの形態にあるり、すなわち、グリセロール骨格上でエステル化されている。次いで、これらの脂肪酸を濃縮するための１つの方法は、最初に、グリセロールからそれらを放出することからなる。

触媒の存在下での油とアルコールとの反応工程（ｉ）は、エチルエステル（ＥＥ）形態の脂肪酸を得ることを可能にするエステル交換工程である。

好ましくは、エステル交換反応は、アルコールとしてのエタノールおよび触媒としてのエチル酸ナトリウムを用いて行われる。

油／エタノール／触媒重量比は、優先的には、１：０．５未満：０．０５未満である。

この反応は、４０～１２０℃の温度、優先的には、４０～６０℃で、１～１２時間の時間、優先的には、１～２時間にわたって行われる。

反応の終了時に、９５％を超える脂肪酸がエチルエステルの形態にある。

次いで、形成された脂肪酸エチルエステルは、分子蒸留によって蒸留されて、工程（ｉｉ）の間、目的とする濃縮された多価不飽和脂肪酸画分をそれらから収集し得る。

高真空下で蒸留することにより、エチルエステルをその揮発性に従って分離することが可能になる。これは、その分子量および脂肪酸鎖の長さに依存する。

したがって、ＤＨＡまたはＥＰＡなどの目的とする多価不飽和脂肪酸に関して油組成物を濃縮するという目的のために、この工程は、その鎖が２０未満の炭素原子を含む脂肪酸を最大限排除することを可能にするであろう。

重要なことに、分子蒸留は、少なくとも７枚の理論プレートを含む精留塔に結合されたスクレーパーフィルム蒸発器内で行われる。精留塔を使用することにより、蒸留残渣中の飽和脂肪酸の量を減少させることおよび分離能を向上させることが可能になる。

さらに、目的とする脂肪酸の多価不飽和度が高く、したがってそれらの酸化に対する感受性が高いため、高真空下での蒸留が必要である。適用されるパラメータは、ＥＰＡまたはＤＨＡの異性化のリスクを防止しなければならない。

したがって、蒸留パラメータは、本発明の文脈において、一般に以下の通りである。

蒸留真空０．０１～０．２０ｍｂａｒ、
スクレーパーフィルム蒸発器内の温度１９０～２４０°、
塔頂部の温度１３０～２００℃。

この工程の終了時に、長鎖脂肪酸エステルが豊富なラフィネートおよび
短鎖脂肪酸エステルが豊富な蒸留物が得られる。

次に、脂肪酸エチルエステルを、トリグリセリド、モノグリセリドおよびジグリセリドの形態での再エステル化の工程（ｉｉｉ）において、先に説明したようなより良いバイオアベイラビリティを有する形態に変換する。

優先的には、この工程で使用される酵素は、リパーゼであり、有利には、Ｃａｎｄｉｄａ ａｎｔａｒｃｔｉｃａリパーゼＢである。

この反応は、４０～６０℃の温度で、１５～３０時間、優先的には、２０～２５時間の時間にわたって実施される。

モノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリドの再構成の工程（ｉｉｉ）に続いて、高真空下での短経路分子蒸留の工程（ｉｖ）を行って残留エチルエステルおよび臭気揮発性化合物を除去するとともに、任意の残留する潜在的な酵素活性を不活性化する。この工程により、モノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリドの組成物をさらに濃縮することが可能となる。

一実施形態によれば、本発明による方法はまた、以下の（ｖ）脱臭および／または（ｖｉ）酸化防止剤の添加の後続工程を含む。

脱臭工程（ｖ）は、蒸気の存在下で起こる任意の工程である。その実施は、分子蒸留の工程（ｉｖ）に続く。蒸気は、分子蒸留の工程（ｉｖ）で除去されなかった分子を取り込む。得られた油の多価不飽和度は非常に高く、１ｍｂａｒ未満の真空下で乾燥蒸気を注入してスクレーパーフィルム蒸発器を使用することにより、１分未満の短い滞留時間での脱臭が可能になる。酸化、過酸化物（ＩＰ）およびアニシジン（ｌａｎ）指標もまた、この方法によって低下させる。

抗酸化物質を添加する工程（ｖｉ）は任意でもある工程であり、その目的は、組成物の酸化に対する耐性を向上させることである。パルミチン酸アスコルビル、ローズマリー抽出物、リン脂質、トコフェロールおよび当業者に既知である任意の他の抗酸化物質などの抗酸化物質が使用され得る。

本発明はまた、前述の組成物を含む食品サプリメントまたは医薬、栄養補助食品もしくは食品組成物、特に小児用食品組成物に関する。

食品サプリメントは、カプセル、軟質カプセル、錠剤、粉末、ゲル、シロップまたは当業者に既知である任意の他の形態であり得る。

医薬、栄養補助食品または食品組成物は、成人、小児または乳児に適合した固体もしくは液体組成物またはゲルであり得る。そのような組成物は、タンパク質および炭水化物などの他の化合物を含み得る。

本発明は、以下の実施例を読むことによってよりよく理解されるであろう。

実施例１：主にモノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリドの形態のＤＨＡに関しての微細藻類油の濃縮。

本実施例は、本発明による方法を例示し、Ｍａｒａ Ｒｅｎｅｗａｂｌｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社によって販売されているＳｃｈｉｚｏｃｈｙｔｒｉｕｍ ｓｐ Ｔ １８微細藻類株によって製造された原料油を使用して実施する。

油は、当初、３２９ｍｇ／ｇのＤＨＡを含有する。ここでの目的は、少なくともＤＨＡ濃度を２倍にすることである。

工程（ｉ）：エステル交換
エステル交換反応は、適切な反応器中、４５０ｋｇのエタノールおよび２１．６ｋｇのエチル酸ナトリウムを使用して、１８００ｋｇの微細藻類油のバイオマス上で行われる。

反応温度は５０℃であり、反応時間は１時間である。反応の終了時に、過剰のエタノールを真空下で蒸発させ、次いで、混合物を約３０℃の温度まで冷却し、次いで１時間沈降させる。軽質相を回収し、次いでグリセロールを排出する。第２の沈降は、３０秒間行われる。グリセロールおよび残留モノグリセリドを排出する。

次に、２．５％のリン酸（７５％）を含有する１７％の脱塩水を攪拌下で２０秒間にわたって添加することにより、酸性水での洗浄を行う。混合物を２０秒間沈降させ、水相を排出する。真空下での乾燥は、６０℃で２時間を超える時間にわたって（圧力＜９０ｍｂａｒ）続く。

この工程の最後に、油は、３２９ｍ／ｇのエチルエステルの形態のＤＨＡを含有する。

工程（ｉｉ）：分子蒸留によるＤＨＡの濃縮
次に、油を脱気器に導き、次いで、スクレーパーフィルム蒸発器を通過させる。次に、蒸気を、ＵＩＣ ＧｍｂＨ社から供給された蒸発器に結合された精留塔を通して蒸留する。蒸留物の還流、すなわち、カラム内への蒸留物の再導入は、その分離効率を増加させることを可能にし得る。使用される塔には、およそ７枚の理論プレートが含まれる。蒸留残渣を回収し、ＤＨＡで強化された画分を表す。

運用条件は以下の通りである。蒸発器のＴ°：２２５℃；精留器の真空：０．１ｍｂａｒ；還流レベル７５％、Ｔ°（カラムの上部）：１９５℃。

次の表１は、本工程（ｉｉ）後に得られた油の脂肪酸プロファイルと、第１の工程（ｉ）前の初期脂肪酸プロファイルとを比較する。量は、１ｇの油当たりの各脂肪酸のｍｇで表される。

ＤＨＡの９７％超が回収残渣中に保存されている。ＤＨＡの量は、エチルエステル形態のＤＨＡ３２９ｍｇ／ｇから７５８ｍｇ／ｇに変化した。ＤＨＡを最大限に維持し、Ｃ２０：４ｎ－３ ＥＴＡを最良に維持しながらＣ２０カットを行うように、操作条件を調整した。次いで、オメガ３ ＥＴＡは３ｍｇ／ｇから５ｍｇ／ｇ超に変化する。これらの操作条件下では、ＥＰＡも濃縮されるが、比較的低い値に留まる。ＤＨＡと非常に類似したＤＰＡｎ－６は必ずしも強化されるとは限らないが、達成された濃度は依然として限定的である。

残渣中の飽和脂肪酸の量は最小である。Ｃ１６：０パルミチン酸は、例えば、残留物からほとんど除去される。当初の含有量の２．５％しか保存されていないことに留意すべきである。

工程（ｉｉｉ）：トリグリセリド、ジグリセリドおよびモノグリセリドの合成
反応は、固定化酵素の存在下、反応器内で起こる。Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａの画分Ｂのリパーゼの場合である（Ｎｏｖｏｚｙｍ社によりＬｉｐｏｚｙｍ ４３５の名称で販売されている）。

約７５８ｍｇ／ｇのＤＨＡ、３３ｇのグリセロールおよび２０ｇの酵素を含有する４８０ｇの蒸留残渣を、反応器に導入する。

反応は、適度な攪拌下、約６０℃の制御された温度、生成されたエタノールの蒸発および縮合を伴う真空下で起こる。反応時間は、２５時間である。

反応物の収率は、９５％超である。

この工程の終了時に、油は、以下のグリセリドプロファイルを有する（表２）。

経時的なモノ、ジおよびトリグリセリドとしてのエチルエステルの形態のＤＨＡの変換動態を図示する。

工程（ｉｖ）：短経路分子蒸留
合成後、生成物は、残留エチルエステルおよび臭気揮発性物質を除去し、また潜在的な残留酵素活性を不活性化するために、（ＵＩＣ ＧｍｂＨ社によって販売されている）短い経路を通過するように取り込まれる。

条件は、１６０～２２０℃の蒸発器の壁の温度および０．０２ｍｂａｒ未満の真空である。真空は、蒸留温度を低下させることを可能にするために、好ましくは０．００５ｍｂａｒである。

この工程の終了時に、油は、表３に示されるプロファイルを有する。

工程（ｖｉ）：脱臭
油は、ドライスチームが注入されるスクレーパーフィルム蒸発器に運ばれる。反応は、少なくとも１分間の短い滞留時間中に、少なくとも１ｍｂａｒの真空下で行われる。

工程（ｖｉ）：抗酸化物質の添加
油は、パルミチン酸アスコルビル、ローズマリー抽出物、リン脂質、トコフェロールまたは当業者に既知である任意の他の抗酸化物質などの抗酸化物質を添加することによって、酸化にもかかわらず安定化される。

Claims (12)

1. 多価不飽和脂肪酸で強化された微生物油組成物であって、
   －組成物の４０ｍｇ／ｇ以下の飽和脂肪酸含有量、
   －組成物の５００ｍｇ／ｇ以上のオメガ３多価不飽和脂肪酸含有量、を有し、
   かつ、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドおよび脂肪酸エチルエステルの総量に対して、
   －４０～６７％のトリグリセリドの量、
   －１０～３５％のジグリセリドの量、
   －１～５％のモノグリセリドの量、を含むことを特徴とする、微生物油組成物。
2. 前記飽和脂肪酸含有量が、組成物の３０ｍｇ／ｇ以下、優先的には、組成物の２５ｍｇ／ｇ以下であることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
3. モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドおよび脂肪酸エチルエステルの前記総量に対して、５５～６５％のトリグリセリドの量を含むことを特徴とする、先行請求項のいずれか一項に記載の組成物。
4. モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドおよび脂肪酸エチルエステルの前記総量に対して、２５～３５％のジグリセリドを含むことを特徴とする、先行請求項のいずれか一項に記載の組成物。
5. モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリドおよび脂肪酸エチルエステルの前記総量に対して、１～２％のモノグリセリドを含むことを特徴とする、先行請求項のいずれか一項に記載の組成物。
6. 組成物の６００ｍｇ／ｇ以上、より優先的には、組成物の７００ｍｇ／ｇを超えるドコサヘキサエン酸含有量を含むことを特徴とする、先行請求項のいずれか一項に記載の組成物。
7. 組成物の６００ｍｇ／ｇ以上、優先的には、組成物の７００ｍｇ／ｇを超えるエイコサペンタエン酸含有量を含むことを特徴とする、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
8. 組成物の少なくとも４ｍｇ／ｇ、優先的には組成物の４～８ｍｇ／ｇのオメガ３エイコサテトラエン酸を含むことを特徴とする、請求項１～５のいずれか一項に記載の組成物。
9. 組成物の１４０ｍｇ／ｇ以下、優先的には、組成物の７０～１４０ｍｇ／ｇのオメガ６ドコサペンタエン酸含有量を含むことを特徴とする、請求項１～６および８のいずれか一項に記載の組成物。
10. 特に小児用の、食品サプリメントまたは医薬、栄養補助食品または食品組成物の形態にあることを特徴とする、先行請求項のいずれか一項に記載の組成物。
11. オメガ３多価不飽和脂肪酸で強化された微生物油組成物の調製方法であって、
    （ｉ）化学触媒または酵素触媒の存在下での、トリグリセリド形態のオメガ３多価不飽和脂肪酸を含む微生物油とアルコールとの反応の工程、
    （ｉｉ）少なくとも７枚の理論プレートを含む精留塔に結合されたスクレーパーフィルム蒸発器内での、高真空下での分子蒸留による、オメガ３多価不飽和脂肪酸の濃縮の工程、
    （ｉｉｉ）酵素およびグリセロールの存在下で、オメガ３多価不飽和脂肪酸のモノグリセリド、ジグリセリドおよびトリグリセリドを再構成する工程、
    （ｉｖ）真空下での短経路分子蒸留の工程、を含むことを特徴とする、方法。
12. （ｖ）消臭および／または（ｖｉ）酸化防止剤を添加する以下の後続工程もまた含むことを特徴とする、請求項１１に記載の組成物。

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