JP2015529464A - Fad2性能座および標的化切断を誘導することができる対応する標的部位特異的結合タンパク質 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、これによりその開示の全体が参照により組み込まれる、2012年9月7日出願の米国仮特許出願第61/697,886号の利益に対する優先権を主張するものである。
核酸配列は、米国特許法施行規則第1.822条に定義されるヌクレオチド塩基についての標準的な文字略語を用いて示される。1本鎖のみの各核酸配列が示されるが、示される鎖への任意の言及により、相補鎖が含まれると理解される。
本発明の実施形態は、組み込まれた核酸によって影響を及ぼされるものを超えて宿主の他の表現型に大いに悪影響を及ぼすことのない、外因性核酸(例えば、導入遺伝子)の宿主ゲノムへの標的化組込みのための手法を確立する。単一の宿主ゲノム中の複数の核酸を「スタッキングする」ために、いくつかの実施形態が使用され得る。このような手法は、4つの相互接続技術の開発および配置を要する:特異的ゲノムDNA位置への二本鎖切断の導入を可能にする標的化技術(例えば、Puchta et al.(1993) Nucleic Acids Res.21:5034-40;Siebert and Puchta (2002) Plant Cell 14:1121-31;D'Halluin et al.(2008) Plant Biotechnol.J.6(1):93-102;Cai et al.(2009) Plant Mol.Biol.69(6):699-709;Shukla et al.(2009) Nature 459(7245):437-41);Shan et al.(2103) Nature Biotechnol.31:686-680;Le et al.(2013) Nature Biotechnol 31: 688-691;Nekrasov et al.(2013) Nature Biotechnol.31:691-693、Ainely et al.(2013) Plant Biotechnol.J.(On Line 19 Aug)参照);最適化外因性(ドナー)核酸の送達を可能にする送達技術(Bibikova et al.(2003) Science 300(5620):764);標的化ドナーDNA組込みのためにHDRまたはNHEJ頻度を増加させるための、(相同組換えまたはNHEJ経路のいずれかに位置する)宿主遺伝子の修飾を伴う組込み技術;標的化組込みイベントを富化し特徴付けるための分析ツール;および遺伝的に十分定義されかつ形質転換された宿主生物に大いに悪影響を及ぼすことなく世代にわたる安定な遺伝子発現を支持する特異的な所望の宿主ゲノム位置(「性能座」)。また、米国特許出願公開第20030232410号明細書;第20050208489号明細書;第20050026157号明細書;第20050064474号明細書;第20060188987号明細書;第20090263900号明細書;第20090117617号明細書;第20100047805号明細書;第20110207221号明細書;第20110301073号明細書;第2011089775号明細書;第20110239315号明細書;第20110145940号明細書;第20080182332号明細書;第20090205083号明細書;第20100199389号明細書;第20110167521号明細書も参照されたい。例えば、植物では、性能座は、座で導入遺伝子が組み込まれたトランスジェニック植物の農学的または品質特性に対する負の影響が無視できるまたは存在しない座である。
特許請求の範囲を含む本出願で使用される場合、例えば、「a」、「an」および「the」という単数および単数形の用語は、別段の明確な指示がない限り、複数指示対象を含む。したがって、例えば、「植物(plant)」、「植物(the plant)」または「植物(a plant)」への言及は、複数の植物も指す。さらに、文脈に応じて、「植物(plant)」という用語の使用は、その植物の遺伝的に類似または同一の子孫も指し得る。同様に、「核酸」という用語は、核酸分子の多くのコピーを指し得る。同様に、「プローブ」という用語は、多くの類似または同一のプローブ分子を指し得る。
FAD2(脂肪酸デサチュラーゼ2)と命名される座は、植物中の脂肪酸含量の複雑な多遺伝子形質の遺伝に関与するQTLに含まれる。FAD2は、オレイン酸(18:1)のリノール酸(C18:2)への不飽和化を担う酵素をコードしている。Tanhuanpaa et al.(1998) Mol. Breed. 4:543-50; Schierholt et al.(2001) Crop Sci. 41:1444-9。
C18:0→C18:1→C18:2→C18:3
FAD2 FAD3
FAD2遺伝子は、それだけに限らないが、トウモロコシ、大豆、ワタ、シロイヌナズナ、コムギ、イネ科牧草、イネ、ヒマワリおよびアブラナ属を含む主要な植物および藻類の種で同定されており、FAD2発現の修飾は、このような生物における脂肪酸プロファイルの変化をもたらす。さらに、修飾FAD2遺伝子を含む植物が商品化されており、FAD2遺伝子の破壊は、宿主植物への農学的不利益なしに宿主植物によって産生される油の栄養的および機能的特性を改善することができることが示されている。例えば、Nexera(登録商標)ブランド(Dow AgroSciences,LLC)で商品化されているアブラナおよびヒマワリ品種は、野生型アブラナおよびヒマワリのプロファイルと比べると、高いオレイン酸、低いリノール酸および低いリノレン酸(および低い飽和脂肪酸)組成によって特徴付けられる。
IV.FAD2座における核酸の標的化組込み
いくつかの実施形態では、部位特異的組込みが、例えば、宿主生物のゲノム中の特定のヌクレオチド配列を認識し、これに結合することができる因子を利用することによって達成され得る。例えば、多くのタンパク質が、部位特異的様式でDNAを認識し、これに結合することができるポリペプチドドメインを含む。DNA結合ポリペプチドによって認識されるDNA配列は、「標的」配列と呼ばれ得る。部位特異的様式でDNAを認識し、これに結合することができるポリペプチドドメインは、一般的にドメインが元々単離されたタンパク質以外のポリペプチド中で発現する場合でさえ、正確に折り畳み、独立に機能して部位特異的様式でDNAに結合する。同様に、DNA結合ポリペプチドによる認識および結合のための標的配列は、一般的に大型DNA構造(例えば、染色体)中に存在する場合でさえ、特に標的配列が位置する部位が可溶性細胞タンパク質にアクセス可能であることが知られているもの(例えば、遺伝子)である場合に、このようなポリペプチドによって認識され、結合され得る。
特定の実施形態では、キメラポリペプチドに標的配列との特異的結合を与えるために、標的ヌクレオチド配列を特異的に認識し、これに結合するDNA結合ポリペプチドが、キメラポリペプチドに含まれ得る。例では、これらのポリペプチドは上に記載されているので、このようなキメラポリペプチドは、例えば、限定されないが、ヌクレアーゼ、リコンビナーゼおよび/またはリガーゼポリペプチドを含み得る。DNA結合ポリペプチド、ならびにヌクレアーゼ、リコンビナーゼおよび/またはリガーゼポリペプチドを含むキメラポリペプチドは、他の機能的ポリペプチドモチーフおよび/またはドメイン、例えば、限定されないが、キメラタンパク質中の機能的ポリペプチド間に位置するスペーサー配列;リーダーペプチド;融合タンパク質を小器官(例えば、核)に標的化するペプチド;細胞酵素によって切断されるポリペプチド;ペプチドタグ(例えば、Myc、His等);およびキメラポリペプチドの機能に干渉しない他のアミノ酸配列を含んでもよい。
具体的な実施形態では、キメラポリペプチドが、外因性核酸またはドナーDNAが組み込まれ得る標的化部位特異的二本鎖DNA切断に送達されるよう設計され得るカスタム設計のジンクフィンガーヌクレアーゼ(ZFN)である(参照により本明細書に組み込まれる、共有されている米国特許出願公開第20100257638号明細書参照)。ZFNは、制限エンドヌクレアーゼ(例えば、FokI)からの非特異的切断ドメインと、ジンクフィンガーDNA結合ドメインポリペプチドとを含むキメラポリペプチドである。例えば、Huang et al.(1996) J.Protein Chem.15:481-9;Kim et al.(1997a) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:3616-20;Kim et al.(1996) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93:1156-60;Kim et al.(1994) Proc Natl.Acad.Sci.USA 91:883-7;Kim et al.(1997b) Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:12875-9;Kim et al.(1997c) Gene 203:43-9;Kim et al.(1998) Biol.Chem.379:489-95;Nahon and Raveh (1998) Nucleic Acids Res.26:1233-9;Smith et al.(1999) Nucleic Acids Res.27:674-81を参照されたい。いくつかの実施形態では、ZFNが非標準ジンクフィンガーDNA結合ドメインを含む(参照により本明細書に組み込まれる、共有されている米国特許出願公開第20080182332号明細書参照)。FokI制限エンドヌクレアーゼは、DNAを切断し、二本鎖切断を導入するために、ヌクレアーゼドメインを介して二量体化しなければならない。結果として、このようなエンドヌクレアーゼからのヌクレアーゼドメインを含むZFNも、標的DNAを切断するためにヌクレアーゼドメインの二量体化を要する。Mani et al.(2005) Biochem.Biophys.Res.Commun.334:1191-7; Smith et al.(2000) Nucleic Acids Res.28:3361-9。ZFNの二量体化は、2つの隣接する正反対に配向したDNA結合部位によって促進され得る。前記。
V.FAD2座における組込みのための外因性核酸
上記のように、例えば、ポリペプチドの発現、突然変異遺伝子の修正または野生型遺伝子の発現増加のために、外因性配列(「ドナー配列」または「ドナー」または「導入遺伝子」とも呼ばれる)が組み込まれる。ドナー配列が典型的には配置されるゲノム配列と同一ではないことが容易に明らかであるだろう。ドナー配列は、対象となる位置での効率的なHDRを可能にするための相同性の2つの領域が隣接した非相同性配列を含むことができる。さらに、ドナー配列は、細胞クロマチン中の対象となる領域と相同性でない配列を含むベクター分子を含むことができる。ドナー分子は、細胞クロマチンと相同性のいくつかの不連続領域を含むことができる。例えば、対象となる領域中に通常は存在しない配列の標的化組込みのために、前記配列がドナー核酸分子中に存在し、対象となる領域中の配列と相同性の領域が隣接していてもよい。
いくつかの実施形態では、標的化エンドヌクレアーゼをコードするヌクレオチド配列が、標的化エンドヌクレアーゼ中に含まれるポリペプチドをコードする野生のヌクレオチド配列の操作(例えば、ライゲーション)によって操作され得る。例えば、DNA結合ポリペプチドに対応する遺伝子のヌクレオチド配列を同定するために、DNA結合ポリペプチドを含むタンパク質をコードする遺伝子のヌクレオチド配列が調査され得、このヌクレオチド配列がDNA結合ポリペプチドを含む標的化エンドヌクレアーゼをコードするヌクレオチド配列の要素として使用され得る。あるいは、例えば、遺伝暗号の縮重にしたがって、標的化エンドヌクレアーゼをコードするヌクレオチド配列を推定するために、標的化エンドヌクレアーゼのアミノ酸配列が使用され得る。
いくつかの実施形態では、対象となるポリペプチドおよび/または標的化エンドヌクレアーゼをコードする少なくとも1つの外因性ポリヌクレオチド配列を含む少なくとも1つの核酸分子が、発現のために細胞、組織または生物に導入され得る。例えば、少なくとも1つのFAD2座中に含まれるヌクレオチド配列を特異的に認識する標的化エンドヌクレアーゼをコードするポリヌクレオチド配列を含む核酸分子が、標的化エンドヌクレアーゼの発現のために細胞に導入され得、また対象となるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列が、例えば、発現した標的エンドヌクレアーゼによる座における二本鎖切断の導入後の相同組換えによって少なくとも1つのFAD2座に組み込まれ、対象となるポリペプチドが組み込まれたポリヌクレオチド配列から発現するように、対象となるポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列を含む核酸分子が細胞に導入され得る。
いくつかの実施形態では、少なくとも1つの修飾された(例えば、外因性配列の破壊および/または標的化組込み)FAD2座を含む植物細胞を含むトランスジェニック植物が提供される。特定の実施形態では、このような植物が、植物組織または植物細胞の形質転換、および全植物の再生によって産生され得る。さらなる実施形態では、このような植物が、部位特異的様式での少なくとも1つのFAD2座における外因性核酸の導入、または修飾FAD2座の生殖質への遺伝子移入を通して得られ得る。このような植物細胞を含む植物材料も提供される。このような植物材料は、植物細胞を含む植物から得られ得る。
アブラナ属の種においてfad2と連結した(例えば、密に連結した)分子マーカーが提供される。例えば、HO形質(fad2)に関与する配列を含むDNAセグメントが同定される。これらのセグメントは、ゲノム連鎖群中の突然変異対立遺伝子と連結した(例えば、密に連結した)マーカーの周りおよびその間に位置している。したがって、不活性化突然変異を有する突然変異FAD2遺伝子を含む核酸分子も提供される。同定されるセグメント、およびそのマーカーは、一部はセイヨウアブラナゲノムの連鎖群中の位置によって、本主題に含まれる。例えば、FAD2およびそれと連結している分子マーカーは、N5およびN1連鎖群に位置し得る。
BACライブラリー構築
細菌人工染色体(BAC)ライブラリーを商業的販売業者(Amplicon Express、Pullman、WA)から調達した。 BACライブラリーは、セイヨウアブラナL.var.DH10275から単離された高分子量ゲノムDNA(gDNA)断片を含む110,592個のBACクローンを含んでいた。gDNAをBamHIまたはHindIII制限酵素のいずれかを用いて消化した。約135Kbpの単離gDNA断片をpCC1BACベクター(Epicentre、Madison、WI)に連結し、大腸菌菌株DH10B(Invitrogen)に形質転換した。BACライブラリーを、2つの異なる制限酵素を用いて構築した偶数のBACクローンで構成した。よって、HindIII構築BACライブラリーを144個の個々の384ウェルプレートに含ませた。同様に、BamHI構築BACライブラリーを144個の個々の384ウェルプレートに含ませた。合計110,592個のBACクローンを単離し、288個の個々の384ウェルプレートに配列した。288個の個々の384ウェルプレートの各々は、急速PCRに基づくスクリーニングのための単一DNA抽出として販売業者から供給された。得られたBACライブラリーは約15GbpのgDNAを網羅し、これはセイヨウアブラナL.var.DH10275ゲノム(セイヨウアブラナL.のゲノムの推定値は、Johnston et al.(2005) Annals of Botany 95:229-235に記載されているように約1.132Gbpである)の12倍のゲノム被覆率に相当する。
構築したBACライブラリーを使用してFAD2遺伝子コード配列を単離した。シーケンシング実験を行ってセイヨウアブラナL.var.DH10275から4つのFAD2遺伝子パラログの特異的遺伝子配列を同定した。
上記BACライブラリーをスクリーニングするようにPCRプライマーのコホートを設計した。プライマーを遺伝子ファミリーの全てのメンバーを増幅するユニバーサルプライマー、または標的化対立遺伝子増幅用の遺伝子特異的プライマーとして設計した。PCRプライマーを、20bp長(+/−1bp)となり、かつ50%(+/−8%)のG/C含量を含むように設計した。表2は設計および合成したプライマーを列挙している。BACライブラリーのクローンをポリメラーゼ連鎖反応(PCR)を介してプールおよびスクリーニングした。
FAD2遺伝子座の種々の機能配列をコードするDNA配列に向けられた新規なジンクフィンガータンパク質を本質的に前記のように設計した。例えば、Urnov et al.(2005) Nature 435:646-651を参照されたい。代表的な標的配列および認識ヘリックスを表4(認識ヘリックス領域設計)および表5(標的部位)に示す。表5では、ZFP認識ヘリックスが接触する標的部位のヌクレオチドが大文字で示されており、非接触ヌクレオチドが小文字で示されている。
構築物アセンブリ
実施例2に記載されるように、酵母アッセイを用いて同定された、代表的なジンクフィンガーヌクレアーゼのZFN発現構築物を含むプラスミドベクターを、当分野で一般的に公知の技能および技術を用いて設計し、完成させた。各ジンクフィンガーコード配列を、ジンクフィンガーヌクレアーゼの上流に位置するオペーク−2核移行シグナル(Maddaloni et al.(1989) Nuc.Acids Res.17(18):7532)をコードする配列に融合した。
上記ベクターのプラスミドDNAを沈殿および100%(v/v)エタノール中での洗浄により滅菌し、ラミナーフローフード中で乾燥させた。DNAペレットを、下記のプロトプラスト細胞へのトランスフェクションのために0.7μg/μlの最終濃度で滅菌再蒸留水30μlに懸濁した。プラスミドDNAの調製を行って、一過性トランスフェクション用のスーパーコイルプラスミドDNAおよび安定性トランスフェクション用の線状プラスミドDNAを得た。キャリアDNA(例えば、魚類精子DNA)の形質転換プラスミドへの付加はプロトプラスト細胞の一過性トランスフェクションに要求されない。一過性試験のために、1回の形質転換当たり、106個のプロトプラスト当たり約30μgのプラスミドを使用した。
セイヨウアブラナL.var.DH10275のトランスフェクションをSpangenberg et al., (1986) Plant Physiology 66: 1-8に記載されているように完了し、培地処方物はSpangenberg G.and Protrykus I.(1995) Polyethylene Glycol-Mediated Direct Gene Transfer in Tobacco Protoplasts. In: Gene Transfer to Plants. (Protrykus I.and Spangenberg G.Eds.) Springer-Verlag, Berlinに記載されている。セイヨウアブラナ種子を70%エタノールで表面消毒した。種子を70%エタノール溶液12mLに浸漬し、カクテルを10分間穏やかに揺動することによって混合した。70%エタノール溶液を、デカントすることによって取り出し、1%w/v自亜塩素酸カルシウムおよび0.1%v/v Tween−20からなる種子消毒液と交換した。種子を種子消毒液に浸漬し、カクテルを25分間穏やかに揺動することによって混合した。種子消毒液をデカントし、消毒した種子を滅菌水50mLで3回すすいだ。最後に、種子を、ペトリ皿中に置かれた滅菌80mmのWhatman濾紙ディスク(登録商標)(Fisher−Scientific、St.Louis、MO)に移し、種子を滅菌水で軽く飽和させた。ペトリ皿をParafilm(登録商標)(Fisher−Scientific、St.Louis、MO)で密閉し、プレートを完全暗所下25℃で1〜2日間インキュベートした。種子から実生出芽の兆候が観察された後、実生を固化GEM培地を含むペトリ皿に移してさらなる種子の発芽を促した。実生をGEM培地において25℃で4〜5日間インキュベートした。
トランスフェクトプロトプラストを、個々の1.5または2.0mLマイクロチューブに供給した。細胞をバッファ溶液中チューブの底部でペレット化した。細胞を液体窒素中で瞬間凍結し、引き続いて、細胞を−40℃および約133x10−3mBar圧力でLabconco Freezone 4.5(登録商標)(Labconco、Kansas City、MO)において約48時間凍結乾燥することによって、DNA抽出を行った。凍結乾燥細胞を、組織破壊を要さず、プロトプラスト細胞を溶解バッファに直接添加したことを除いて、製造業者の指示にしたがってDNeasy(登録商標)(QIAGEN、Carlsbad、CA)植物キットを用いたDNA抽出に供した。
FAD2A遺伝子座中のZFN標的部位の設計を、複数対のZFNが重複標的部位に設計されるようにクラスター化した。ZFN標的部位のクラスター化は、PCRプライマーが、重複ZFN標的部位の全てを包含するように100bpウィンドウ内の全てのFAD2A遺伝子ファミリーメンバーから周囲ゲノム配列を増幅するよう設計されることを可能にした。よって、Illumina短解読配列技術を用いて、トランスフェクトプロトプラストの標的ZFN部位の完全性を評価することができた。さらに、PCRプライマー設計は、配列解読をFAD2Aファミリーの特異的遺伝子メンバーに帰する特異的ヌクレオチド塩基を含むことを必要とされる。そのため、非相同末端結合(NHEJ)活性がプライミング部位を除去し、増幅を阻害し、それゆえにNHEJ活性の評価を歪め得る小さな欠失を引き起こすことが知られているので、PCRプライマーの全てが、いずれかのZFN標的切断部位から5〜10ヌクレオチド離れて結合することが要求されるだろう。
シーケンシング反応および塩基呼び出し(base calling)のためにIllumina生物情報学パイプラインを用いて行われる一次データ呼び出しの完了後、各例において完全な解析を行って標的ZFN部位における欠失塩基を同定した。入力配列のリストに計算的にしたがってカスタムPERLスクリプトを、DNA配列からバーコードを抽出およびソートするように設計した。バーコードは、誤帰属配列解読を減少させるために、許容される30超のPhredスコアで基準配列に一致しなければならなかった。配列解読を使用された異なるバーコード群にビニングした後、品質フィルタを全ての配列に通過させた。品質フィルタは、第2のカスタム開発PERLスクリプトであった。「N」と呼ばれる塩基が4つ以上存在する場合、または中央Phredスコアが20未満である場合、または20未満のPhredスコアの連続塩基が3つ存在する場合、または配列解読の長さが40より短い場合、配列解読を除外した。残りの配列を併合し、ここでは対の配列解読の両方がNextGENe(登録商標)(SoftGenetics、State College、PA)パッケージを用いて入手可能であった。次いで、残りの合併配列解読を、残りの配列識別子の終わりに記録された同定された冗長配列の数のカウントと共に第3のカスタムPERLスクリプトを用いて、特有の配列解読の集合に減少させた。次いで、特有の配列解読を、ギャップドFASTAアラインメントファイルを作成するNextGENe(登録商標)ソフトウェアを用いてFAD2基準配列にアラインメントした。
当業者に一般的に公知の方法および技術を用いて、下記のプラスミドベクター構築物を構築した。この段落中に記載される特定の試薬および技術の適用は当業者に容易に公知となり、プラスミドベクター構築物を構築する所望の目的を達成するために、他の試薬および技術と容易に交換され得るだろう。制限エンドヌクレアーゼは、New England BioLabs(NEB;Ipswich、MA)から得た。T4 DNAリガーゼ(Invitrogen、Carlsbad、CA)を用いてライゲーションを完了した。1つのエントリーベクターを単一デスティネーションベクターに組み立てるために、GATEWAY(登録商標)LR CLONASE(登録商標)酵素ミックス(Invitrogen)を用いてGateway反応を行った。1つのエントリーベクターを単一デスティネーションベクターに組み立てるために、IN−FUSION(商標)Advantage Technology(Clontech、Mountain View、CA)を用いてIN−FUSION(商標)反応を行った。供給業者の指示にしたがってNUCLEOSPIN(登録商標)Plasmid Kit(Macherey−Nagel Inc.、Bethlehem、PA)またはPlasmid Midi Kit(登録商標)(Qiagen)を用いてプラスミド調製を行った。アガローストリス酢酸ゲル電気泳動後にQIAquick Gel Extraction Kit(商標)(Qiagen)を用いてDNA断片を単離した。全てのアセンブルしたプラスミドのコロニーを最初にミニプレップDNAの制限消化によってスクリーニングした。選択されたクローンのプラスミドDNAを、商業的シーケンシング販売業者(Eurofins MWG Operon、Huntsville、AL)によってシーケンシングした。配列データを、SEQUENCHER(商標)ソフトウェア(Gene Codes Corp.、Ann Arbor、MI)を用いてアセンブルおよび分析した。
標準的なクローニング法を、セイヨウアブラナのFAD2A遺伝子への特異的組込みのためのETIP含有ベクターpDAS000130(図6、配列番号61としてのT鎖インサート)の構築に使用した。この構築物を、ジンクフィンガーヌクレアーゼ構築物pDAB104010を用いてアブラナプロトプラスト中に送達されるように設計した。ジンクフィンガーヌクレアーゼ構築物がFAD2A座を切断し、次いで、pDAS000130が相同組換えまたは非相同末端結合修復機構を介してアブラナゲノムに組み込まれる。ETIPは、さらなるZFN認識配列、および別のZFN認識配列を含む操作されたランディングパッド(ELP)によって分離された4つの発現カセット(2つは不完全)を含む。さらなるZFN認識配列は特有であり、ETIP中のポリヌクレオチド配列の導入およびELP導入遺伝子挿入のために標的化されるよう設計した。同様に、ZFN認識配列を、ポリヌクレオチド配列の切除に利用することができる。第1の遺伝子発現カセットは不完全dsRED発現カセットであり、シロイヌナズナ(Arabidopsis thaliana)ポリユビキチン10(AtUbiプロモーター)遺伝子からのプロモーター、5’未翻訳領域およびイントロン(Callis, et al., (1990) J.Biol.Chem., 265: 12486-12493)、引き続いて双子葉植物中での発現のためにコドン最適化された珊瑚礁イソギンチャクモドキ属(Discosoma)の種(Clontech、Mountain View、CA)の210bpのdsRed遺伝子(dsRED(双子葉植物最適化)エクソン1)、引き続いてシロイヌナズナチオレダクターゼ様遺伝子からのイントロン(Atチオレダクターゼからのイントロン1:寄託番号NC_00374)ならびにトウモロコシViviparous−1(Vp1)遺伝子の転写ターミネーターおよびポリアデニル化部位を含む3’未翻訳領域(Zmlipターミネーター:Paek et al., (1998) Molecules and Cells , 8(3): 336-342)を含んでいた。第2の発現カセットは、カリフラワーモザイクウイルスからの5’UTRを含む19Sプロモーター(CaMV19S:Cook and Penon (1990) Plant Molecular Biology 14(3): 391-405)、引き続いて双子葉植物中での発現のためにコドン最適化された大腸菌からのhph遺伝子(hph(HygR):Kaster et al., (1983) Nucleic Acids Research 11(19): 6895-6911)、ならびにアグロバクテリウム・ツメファシエンスpTi15955のオープンリーディングフレーム1の転写ターミネーターおよびポリアデニル化部位を含む3’UTR(At−ORF1ターミネーター:Barker et al., (1983) Plant Molecular Biology 2(6): 335-50)を含んでいた。第3の発現カセットは不完全PAT発現カセットであり、アラビドプシス4−クマリル−CoAシンターゼからの第1のイントロン(イントロン番号2 4−クマリル−CoAシンターゼv:寄託番号At3g21320/NC003074)、引き続いてホスフィノトリシン、グルホシネートおよびビアラホスを含むグルタミンシンテターゼの阻害剤に対する耐性を与えるタンパク質をコードする、ストレプトマイセス・ビリドクロモゲネス(Streptomyces viridochromogenes)から単離されたホスフィノトリシンアセチルトランスフェラーゼ遺伝子の合成した植物最適化バージョンの最後の256bp(PAT(v6)3’末端:Wohlleben et al., (1988) Gene 70(1): 25-37)を含んでいた。このカセットは、アグロバクテリウム・ツメファシエンスpTi15955のオープンリーディングフレーム23の転写ターミネーターおよびポリアデニル化部位を含む3’UTR(AtuORF23ターミネーター:Barker et al., (1983) Plant Molecular Biology 2(6): 335-50)で終結した。第4の発現カセットはipt遺伝子カセットであり、アラビドプシスDNA結合タンパク質MYB32遺伝子(U26933)からのプロモーターおよび5’UTRの588bpのトランケートバージョン(truncated version)(AtMYB32(T)プロモーター:Li et al., (1999) Plant Physiology 121: 313)、引き続いてアグロバクテリウム・ツメファシエンスからのイソペンチルトランスフェラーゼ(ipt)遺伝子、ならびにカリフラワーモザイクウイルスからの転写ターミネーターおよびポリアデニル化部位を含む35sターミネーター(CaMV35Sターミネーター:Chenault et al., (1993) Plant Physiology 101 (4): 1395-1396)を含んでいた。FAD2Aへの送達のために、ETIP配列の各末端が、pDAB104010中にコードされているZFNのセイヨウアブラナのFAD2A遺伝子への送達によって誘導される二本鎖切断の位置のいずれかの側の1kbのFAD2Aゲノム配列によって隣接されていた。
コントロールベクターを使用して蛍光活性化セルソーティング(FACS)細胞系ソーティング法を展開した。標準的なクローニング法を、2つの遺伝子発現カセットを含むコントロールベクター、pDAS000031(図7:配列番号62としてのT鎖インサート)の構築に使用した。第1の遺伝子発現カセットは、カリフラワーモザイクウイルス19sプロモーター(CaMV19Sプロモーター;Shillito, et al., (1985) Bio/Technology 3; 1099-1103)::ハイグロマイシン耐性遺伝子(hph(HygR);米国特許第4,727,028号明細書)::およびアグロバクテリウム・ツメファシエンスオープンリーディングフレーム1 3’未翻訳領域(AtORF1ターミネーター;Huang et al., (1990) J.Bacteriol.1990 172:1814-1822)を含んでいた。第2の遺伝子発現カセットは、トランス配向(例えば、頭部−頭部配向)のインフレーム融合体として、シロイヌナズナユビキチン10プロモーター(AtUbi10プロモーター;Callis, et al., (1990) J.Biol.Chem., 265: 12486-12493)::dsRED(dsRED(D);米国特許第6,852,849号明細書)およびアラビドプシスのイントロン(イントロン番号1;Genbank:AB025639.1)::アグロバクテリウム・ツメファシエンスオープンリーディングフレーム23 3’未翻訳領域(AtORF23ターミネーター;米国特許第5,428,147号明細書)を含んでいた。IN−FUSION(商標)Advantage Technology(Clontech、Mountain View、CA)を用いてプラスミドベクターをアセンブルした。
セイヨウアブラナの形質転換
FAD2A部位特異的組込みは、ETIP構築物(pDAS000130)、付随するジンクフィンガーヌクレアーゼ(pDAB104010)、および実施例4に記載されるDS−Redコントロール構築物(pDAS000031)の使用を展開する。このバイナリーベクターを、アグロバクテリウム・ツメファシエンス菌株GV3101:PM90に形質転換した。いくらかの修正をした実施例3に記載のトランスフェクションプロトコルを用いて、セイヨウアブラナプロトプラスト細胞の形質転換を完了した。
組織をAEバッファ80μlに溶出させたことを除いて、製造業者の指示にしたがって、DNeasy Plant Mini Kit(商標)(Qiagen)を用いて、ゲノムDNAを全ての推定トランスジェニック植物の葉組織から抽出した。再生植物からの若葉組織30mgを、粉状に粉砕する前に液体窒素中で瞬間凍結した。
リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応による導入遺伝子組込みの同定
優勢なアッセイである、破壊された座の試験で、内因性標的の増幅の存在または不在について各植物を分析した。このアッセイはSYBR(登録商標)Green I qPCRアッセイでありシングルプレックス(singleplex)であるが、各反応を同じPCRプレートで同時に行い、内因性座(FAD2A/2C.RB.UnE.F1、配列番号69、5’CTTCCACTCCTTCCTCCTCGT*C3’およびFAD2A/2C.RB.UnE.R1、5’配列番号70、GCGTCCCAAAGGGTTGTTGA*G3’)およびZFN座(ZFN pDAB104010が結合し、ゲノムを切断する座)(FAD2A.UnE.F1、配列番号71、5’TCTCTACTGGGCCTGCCAGGG*C3’およびFAD2A.UnE.R1、配列番号72、5’CCCCGAGACGTTGAAGGCTAAGTACAA*A3’)(図9)を標的化する。以下の条件を用いて両プライマー対を増幅した:98℃で30秒間、引き続いて35サイクルの(98℃で10秒間、65℃で20秒間、72℃で90秒間)、次いで引き続いて95℃で10秒間、次いで0.05秒間0.5℃の増分および各増分でのプレート読取で50℃から95℃までの融解分析。反応条件を表9に列挙する。
相同組換え修復を介したFAD2Aにおける導入遺伝子組換えのPCR検出
5’ゲノム−導入遺伝子隣接標的産物の増幅および/または3’導入遺伝子−ゲノム隣接標的の増幅を有した、あるいはZFN座標的の増幅を有さなかった、あるいはその両方の植物を、FAD2A座における導入遺伝子組込みの検出についてサザン解析に供した。修正CTAB法(Maguire, T.L., G.G.Collins, and M.Sedgley A modified CTAB DNA extraction procedure for plants belonging to the family proteaceae. Plant Molecular Biology Reporter, 1994.12(2): p.106-109)を用いて、ゲノムDNAを葉組織5gから精製した。次に、ゲノムDNA12μgをKpn1−HF(New England BioLabs)を用いて消化し、消化断片を、標準的サザンブロット法プロトコルを用いて膜に移動させる前に0.8%アガロースゲル上での電気泳動によって分離した。製造業者の指示にしたがって、DIG Easy Hyb System(登録商標)(Roche、South San Francisco、CA)を用いて、FAD2A 5’標的領域(F、配列番号81、5’AGAGAGGAGACAGAGAGAGAGT3’およびR、配列番号82、5’AGACAGCATCAAGATTTCACACA3’)、FAD2A 3’標的領域(F、配列番号83、5’CAACGGCGAGCGTAATCTTAG3’およびR、配列番号84、5’GTTCCCTGGAATTGCTGATAGG3’)およびhph(F、配列番号85、5’TGTTGGTGGAAGAGGATACG3’およびR、配列番号86、5’ATCAGCAGCAGCGATAGC3’)に対するプライマーを使用して、FAD2A座中のETIPの存在を検出するためのプローブを作成した(図11)。ハイブリダイゼーションを、FAD2A 5’領域については42℃、FAD2A 3’領域については45℃およびhphの検出については42℃で行った。
トランスフェクション、培養および選択後、トランスジェニック植物を土壌に移した。この工程から、139の植物が生き残り、gDNA抽出および解析用にサンプル採取される組織を有していた。全139の植物をコピー数推定のために分析した。これらの139の植物のうち、56がETIPについてポジティブであり、56のポジティブ植物のうちの11が推定単一コピー組込みを有していた(図13)(表11)。ETIP組込みについてポジティブであった56の植物のうち、FAD2A 5’ゲノム−導入遺伝子隣接配列の増幅は7の植物で起こった。FAD2A 3’−導入遺伝子−ゲノム隣接配列の増幅は、ETIP組込みについてポジティブであった56の植物のいずれにおいても起こらなかった。さらに、導入遺伝子組込みについてポジティブであった56の植物のうち、11の植物が破壊された座のqPCR試験についてポジティブであった。FAD2A 5’ゲノム−導入遺伝子隣接配列の増幅についてポジティブおよび/または破壊された座のqPCR試験についてポジティブであった14の植物を、上記の3つのプローブを用いてサザン解析に供した。FAD2A 5’プローブ、FAD2A 3’およびhphプローブを用いてプローブすると、サザン解析で前進した14の植物のうち、これらの植物の全てがFAD2A座への部分的組込みを示したが、これらの植物のいずれもHDRを介したFAD2A座におけるETIPの完全全長組込みの証拠を示さなかった。FAD2A 3’プローブを用いてプローブすると、i)WTより大きいおよびii)バンドと同一であるように見えるバンドはこれらのサンプルで観察されなかった(表11)。
pDAS000130およびpDAB104010の形質転換を介して産生したトランスジェニックセイヨウアブラナイベントは、FAD2A座への単一コピーの組込み、pDAS000130からのETIPポリヌクレオチド配列の全長T鎖挿入をもたらす。3〜4つのイベントを完全に特徴付け、組込みETIPを含むことを確認する。確認を、イン−アウトPCR増幅法を用いて完了し、サザンブロット法を介してさらに検証する。選択されたT0イベントをT1発達段階に成長させる。T1植物を再スクリーニングして組み込まれたT鎖の接合状態を決定する。スクリーニングイベントをホモ接合性、ヘミ接合性または無として分類する。
DS−Redコントロール構築物、pDAS000031を用いてトランスフェクトされたセイヨウアブラナプロトプラストを、BD Biosciences Influx−Cellソーター(商標)(San Jose、CA)を用いてFACS媒介細胞ソーティングを介してソートした。実施例3に記載されるように、プロトプラスト細胞を単離およびトランスフェクトした。細胞をpDAS000031を用いてトランスフェクトした後、表12に記載される条件でFACSソーターを用いて細胞をソートした。
FAD2Aに特異的なジンクフィンガー結合ドメインの選択
同祖FAD2遺伝子についての転写領域を同定し、特徴付け、ジンクフィンガーヌクレアーゼを、ドナー配列のNHEJ媒介標的化のためにこれらの部位に結合し、これを切断するように設計した。FAD2配列のホモログからのDNA配列に向けられたジンクフィンガータンパク質(ZFP)を、上記のように設計および試験した。オンターゲット活性を示すZFNから、高効率でFAD2標的を切断する1つのジンクフィンガータンパク質を選択した:ZFP24828−2A−24829は配列番号35 5’−agGCCCAGtAGAGAGGCCaggcgaagta−3’および配列番号36 5’−ccAGGGCTGCGTCCTAACCGgcgtctgg−3’を認識する。このZFNは、FAD2Aゲノム座に特異的に結合し、これを切断することが示された。
HDRを介したドナー配列の組込みのために、単一ベクターを構築した。ベクターはハイグロマイシン(hphまたはhpt)耐性遺伝子発現カセットをコードしていた。ハイグロマイシン耐性遺伝子発現カセットは、カリフラワーモザイクウイルス(CaMV)からの5’UTR(Cook and Penon Plant Molecular Biology 1990 14(3), 391-405)、続いてハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ(hph)遺伝子(Kaster et al Nucleic Acids Research 1983 11 (19), 6895-6911)を含む19Sプロモーターを含んでいた。hph遺伝子は、双子葉植物における発現のためにコドン最適化されており、アグロバクテリウム・ツメファシエンスpTi15955のオープンリーディングフレーム1(ORF1)の転写ターミネーターおよびポリアデニル化部位を含む3’UTRが隣接していた(Barker et al, Plant Molecular Biology 1983, 2(6), 335-50)。カセットは、商業的遺伝子合成販売業者(GeneArt、Life Technologies、Regensberg、ドイツ)によって合成された。 隣接FAD2A配列を遺伝子発現カセットの上流および下流に付加した。ハイグロマイシン耐性カセットを各ベクターの特異的制限酵素部位にクローニングすると、「ドナー」ベクター:pDAS000129(ハイグロマイシン耐性遺伝子スプライシングドナー:配列番号87 図14)が得られた。
FAD2aおよびFAD2a ZFN(精度イベント)を標的化するETIPのPEG媒介プロトプラストトランスフェクションおよび再生
葉肉由来プロトプラストを、セイヨウアブラナ(DH10275)の3週齢滅菌シュート培養物から単離した。対応する種子を発芽させた。種子を、穏やかに振盪することによって、70%エタノールを用いて1分間表面消毒し、引き続いて滅菌再蒸留水で3〜4回すすぎ、その後、20%漂白剤および10μlのTween20(商標)を用いて消毒した;種子を振盪機(卓上型振盪機約100RPM)で15分間漂白剤により処理し、引き続いて滅菌再蒸留水で3〜4回すすぎ、種子を滅菌濾紙に慎重に移して過剰な水分を除去し、種子発芽培地(1/2濃度のMS/B5ビタミン+1%スクロース+0.8%寒天;pH5.8、約50〜60mlの培地を各Petri皿(15×100mm)に注ぎ入れ、これを、支持体を用いてわずかな角度をつけて置いた)に蒔き;約50個の種子を各プレートに入れた。プレートを16時間/日の光(20μmolm−2s−1)下22℃で6日間直立でインキュベートした。0.5cmサイズの胚軸セグメントを、6日齢実生から切り裂き、シュート誘導培地(MS/B5ビタミン+3%スクロース+500mg/L MES+BAP(13μm)+ゼアチン(5μm)+硝酸銀(5mg/L)+0.8%寒天(pH5.8)および100×20mm滅菌Petri皿に注ぎ入れた)上で培養し、約20個の外植片を各プレート上に配置した。3〜4週間後に現れたシュート成長点をシュート伸長培地(MS/B5ビタミン+2%スクロース+500mg/L MES+BAP(2μm)+GA−3(0.1μm)+0.8%寒天(pH5.8)、および250ml培養容器に注ぎ込んだ)に移し、培養物を間に1ラウンドの継代培養を含む4週間、この培地に維持した。次いで、2〜3cm高さのシュートを、根の発育のために根発生培地(1/2濃度のMS/B5ビタミン+1%スクロース+500mg/L MES+IBA(2.5μm)+0.6%寒天(pH5.8)、および700ml培養容器に注ぎ込んだ)に移した。根づいたシュートを、使用前に2〜3ラウンドの間、茎挿しとして3〜4週間の間隔で、新鮮な根発生培地中で継代培養した。培養物を16時間/日の光(30μmolm−2s−1)下22℃で終始維持した。
インビトロで成長させたDH12075セイヨウアブラナ植物を、葉肉プロトプラストを単離するための外植片源として使用した。プロトプラスト単離のために、3〜4週齢の小植物からの第3〜第4の上完全展開葉を、鋭利なメスを用いて小片(0.5〜1mm)に切断した。葉材料250〜500mgを消化バッファ(K4培地に溶解した1.2%(w/v)セルラーゼ「Onozuka」R10(登録商標)および0.2%(w/v)Macerozyme(登録商標)R10(Spangenberg et al., 1998))25mlで処理することによって、酵素消化を行った。葉材料および消化バッファを含むPetri皿をParafilm(商標)で密閉し、暗所中室温で12〜15時間インキュベートした。一晩のインキュベーション後、消化物を、BD(登録商標)セルストレーナー(メッシュサイズ70μm)を通して濾過した。プロトプラスト懸濁液(5〜6ml)を14ml丸底チューブに回収し、これに洗浄液W5バッファ(154mM NaCl、125mM CaCl2、5mM KClおよび5mMグルコース;pH5.8 Mcnczel et al.(1981))1mlを重ね、400RPMで10分間遠心分離した。遠心分離後、界面相に浮遊したプロトプラストを引き込み、W5バッファ10mlを用いて400RPMで10分間の遠心分離によって洗浄した。最後の洗浄後、単離プロトプラストを、W5バッファ1mL当たり1×106個のプロトプラストの密度で再懸濁し、トランスフェクション前に1時間インキュベートした。
Sambrook and Russel, 2006にしたがって、血球計算器を用いてプロトプラスト収率を評価し、わずかな修正をしたHuang et al. 1996にしたがって、エバンスブルー染色剤(0.5Mのマンニトールに溶解した400mg/L)を用いて生存率を試験した。
PEG4000媒介安定DNA送達
包埋する前に、トランスフェクトプロトプラストを400RPMで10分間遠心分離し、W5バッファを慎重に除去した。次いで、プロトプラストをK3培地0.5mlに再懸濁した(Spangenberg et al.1998)。正確に0.5mlのトランスフェクトプロトプラスト懸濁液(約5×105個のプロトプラスト)を6cmのPetri皿に入れ、これに、0.6%Sea Plaque(商標)アガロースを含む4.5mlの予備加温した(マイクロ波オーブン中で溶融および40〜45℃の水浴でインキュベートした)1:1ミックスのK3:H培地(Spangenberg et al.1998)を添加した。アガロースおよびプロトプラスト懸濁液を穏やかに混合し、凝固させた。凝固後(20〜30分後)、皿をParafilm(登録商標)で密閉し、プロトプラストを暗所中24℃で24時間、引き続いて連続薄明かり(5〜10μmolm−2s−1)下6日間培養した(ここで第1のおよび複数の細胞分裂が起こる)。6日後、アガロースに包埋したプロトプラストを4つのクアドラントに切断し、700ml培養容器中の100mlのA培地(Spangenberg et al.1998)に入れた。液体A培地に1.5mg/lハイグロマイシンを補充した。培養物を連続薄明かり下24℃で80〜100RPMのロータリーシェーカー上でインキュベートした。耐性コロニーは、sea−plaqueアガロースおよびアルギン酸ナトリウム法の場合、それぞれプロトプラストを蒔いた5〜6週間および3〜4週間後に現れる。直径2〜3mmの間のサイズのミクロカルスを、アガロースビーズを穏やかに破壊することによって、B1培地(MS/MS ビタミン+3.5%スクロース+500mg/L MES+BAP(5μm)+NAA(5μm)+2,4−D(5μm)+1.5mg/Lハイグロマイシン+0.7%アガロースI型(pH6.0)および100×20mm滅菌Petri皿に注ぎ込んだ)に移した。こうして得られたミクロカルスを、十分な量の液体A(液体A 50mlを設定された細胞体積(SCV:これは全ての放出されたミクロカルスを滅菌50または15mlファルコンチューブに移し、5分間沈降させた後に測定した)1mlに使用した)に再懸濁した。ミクロカルスを均一に混合した後、液体A培地中に懸濁したミクロカルス0.5mlをB1プレートに移し、さらなる液体A培地1〜2mlを用いて、ミクロカルスをB1培地に均一に分配し、過剰の液体A培地を各プレートから慎重に除去した。微小孔テープを用いてプレートを密閉し、胚成熟を強化した。
包埋する前に、トランスフェクトプロトプラストを400RPMで10分間遠心分離し、W5バッファを慎重に除去した。次いで、プロトプラストを0.5Mマンニトール1.0mlに再懸濁し、氷上でインキュベートした。これに、等体積の1.0%アルギン酸ナトリウムを添加し、穏やかに混合した。プロトプラスト懸濁液を、包埋するまで氷中でインキュベートした。ビーズ形成溶液(0.4Mマンニトール+50mM CaCl2(pH5.8))を、血清ピペットを用いて滅菌6ウェルプレートに移した(1ウェル当たり3〜4ml)。正確に1.0mlのプロトプラスト懸濁液を、1mlピペットを用いてビーズ形成溶液に滴加し、各トランスフェクトサンプル(約5×105個のプロトプラスト)を1ウェル当たりに包埋させた。プロトプラスト懸濁液を室温で1〜2時間インキュベートしてアルギン酸ナトリウムビーズを形成した。インキュベーション期間後、ビーズ形成溶液を慎重に取り出し、1.5mg/Lのハイグロマイシンを補充したK3+H:Aの1:2混合物培地(Spangenberg et al. 1998)4〜5mlと交換した。プロトプラストを振盪機(50RPM)において暗所中22℃で3〜4週間培養した。3〜4週間後、脱重合バッファ(0.3Mマンニトール+20mMクエン酸ナトリウム(pH5.8))で処理することによって、耐性ミクロカルス(0.5〜1.0mm)を放出した。液体培地を除去した後、脱重合バッファ3〜4mlを、ビーズ型培養物を含む各ウェルに添加し、室温で2時間インキュベートした。滅菌鉗子を用いて、ビーズを穏やかに混合してミクロカルスの効率的な放出を強化した。滅菌1.0mlピペットを使用して、穏やかに混合し、脱重合バッファに放出したゲル化剤を除去した。ミクロカルスを、液体A培地5mlを用いて2回洗浄し、ミクロカルスを十分な量の液体A(液体A 50mlを設定された細胞体積(SCV:これは全ての放出されたミクロカルスを滅菌50または15mlファルコンチューブに移し、5分間沈降させた後に測定した)1mlに使用した)に再懸濁した。ミクロカルスを均一に混合した後、液体A培地中に懸濁したミクロカルス0.5mlをB1培地(MS/MS ビタミン+3.5%スクロース+500mg/L MES+BAP(5μm)+NAA(5μm)+2,4−D(5μm)+1.5mg/Lハイグロマイシン+0.7%アガロースI型(pH6.0)および100×20mm滅菌Petri皿に注ぎ込んだ)に移し、さらなる液体A培地1〜2mlを用いて、ミクロカルスをB1培地に均一に分配し、過剰の液体A培地を各プレートから慎重に除去した。微小孔テープを用いてプレートを密閉し、胚成熟を強化した。培養物を16時間/日の光(30μmolm−2s−1)下22℃で維持した。
トランスフェクトプロトプラストを3cmPETRI(商標)皿から2mLマイクロチューブに移した。70gでの遠心分離によって細胞をペレット化し、上清を除去した。トランスフェクトプロトプラストの回収を最大化するために、PETRI(商標)皿を洗浄バッファ1mLで3回すすいだ。各すすぎは、PETRI(商標)皿中の洗浄バッファを1分間旋回し、引き続いて、液体を同じ2mLのマイクロチューブに移すことによって行った。各すすぎの最後に、70gでの遠心分離によって細胞をペレット化し、上清を除去した。ペレット化プロトプラストを、−40℃および133×10−3mBar圧力でLABCONCO FREEZONE 4.5(登録商標)(Labconco、Kansas City、MO)中24時間凍結乾燥する前に、液体窒素中で瞬間凍結した。凍結乾燥細胞を、組織破壊を要さず、プロトプラスト細胞を溶解バッファに直接添加したことを除いて、製造業者の指示にしたがってDNEASY(登録商標)PLANT DNA EXTRACTION MINI KIT(Qiagen)を用いたDNA抽出に供した。
個々のカルスを、−40℃および133×10−3mBar圧力でLABCONCO FREEZONE 4.5(登録商標)(Labconco、Kansas City、MO)中24時間凍結乾燥する前に、液体窒素中で瞬間凍結した。凍結乾燥カルスを、製造業者の指示にしたがってDNEASY(登録商標)PLANT DNA EXTRACTION MAXIキット(Qiagen、Hilden、ドイツ)を用いたDNA抽出に供した。
機能的HGHレポーターカセットをコードするドナーDNA(pDAS000129)、ZFN DNA(pDAB104010)またはドナーとZFN DNAの混合物が24時間前に送達されたプロトプラストプール(1プール当たり100万個のプロトプラスト)からゲノムDNAを抽出した。形質転換のために送達されたDNAの量は上に記載される。PCR産物をプラスミドベクターにクローニングした。プラスミドベクターにクローニングすることによって、ゲノム編集が各細胞で独立に起こり、種々の異なる挿入イベントをもたらし、各ゲノム編集を曖昧さなしにシーケンシングすることができる。いくつかのクローンをABI3730XL(登録商標)自動化キャピラリー電気泳動プラットホームでシーケンシングした。SEQUENCHER SOFTWARE V5.0(商標)(GeneCodes、Ann Arbor、MI)を用いて遺伝子配列の解析を行った。
FAD2Aに特異的なジンクフィンガー結合ドメインの選択
同祖FAD2遺伝子についての転写領域を同定し、特徴付け、ジンクフィンガーヌクレアーゼを、ドナー配列のNHEJ媒介標的化のためにこれらの部位に結合し、これを切断するように設計した。 FAD2配列のホモログからのDNA配列に向けられたジンクフィンガータンパク質(ZFP)を、上記のように設計および試験した。オンターゲット活性を示すZFNから、高効率でFAD2A標的を切断する1つのジンクフィンガータンパク質を選択した:ZFP24828−2A−24829は配列番号35 5’−agGCCCAGtAGAGAGGCCaggcgaagta−3’および配列番号36 5’−ccAGGGCTGCGTCCTAACCGgcgtctgg−3’を認識する。このZFNは、FAD2Aゲノム座に特異的に結合し、これを切断することが示された。上で前記のプラスミド構築物、pDAB104010を構築し、形質転換実験のために使用する。
FAD2Aに特異的なジンクフィンガーヌクレアーゼおよびドナーベクターをコードする
NHEJを介したドナー配列の組込みのために、単一ドナーベクターを構築した。ベクターはdsREDレポーター遺伝子発現カセットをコードしていた。dsREDレポーター遺伝子発現カセットは、dsRED遺伝子(Dietrich et al.(2002) Biotechniques 2(2):286-293)が続くシロイヌナズナユビキチン10プロモーター(Callis, et al., 1990, J.Biol.Chem., 265:12486-12493)を含んでいた。dsRED遺伝子は、双子葉植物における発現のためにコドン最適化されており、アグロバクテリウム・ツメファシエンスpTi15955のオープンリーディングフレーム23(ORF23)の転写ターミネーターおよびポリアデニル化部位を含む3’UTRが隣接していた(Barker et al, Plant Molecular Biology 1983, 2(6), 335-50)。選択可能なマーカーカセットは、pat導入遺伝子に融合したCsVMVプロモーターを含んでいた。pat導入遺伝子は、アグロバクテリウム・ツメファシエンスpTi15955のオープンリーディングフレーム1(ORF1)で終結していた(Barker et al, Plant Molecular Biology 1983, 2(6), 335-50)。dsRED耐性カセットを各ベクターの特異的制限酵素部位にクローニングすると、「ドナー」ベクター:pDAS000097(配列番号88、図16)が得られた。ZFN pDAB104010によるFAD2Aゲノム座の切断時に線状DNAまたは環状DNAとして植物細胞に送達され、FAD2A座に組み込まれるようにpDAS00097ドナーを設計する。線状DNA媒介組込みは、形質転換中の線状化pDAS000097プラスミドの植物細胞への組込みの結果である。プラスミドは、特有の制限酵素部位において切断によって直線化され得る。環状DNA媒介組込みは、形質転換中の環状化pDAS000097プラスミドの植物細胞への組込みの結果である。pDAS000097を、ZFP24828−2A−24829ジンクフィンガーヌクレアーゼによって切断することができるジンクフィンガー結合部位を含むように修飾する。環状プラスミド、pDAS000097を、pDAB104010コードジンクフィンガーヌクレアーゼによって植物細胞中で切断し、dsRED遺伝子カセットをFAD2Aゲノム座に組み込む。
葉肉由来プロトプラストを上記のようにセイヨウアブラナ(DH10275)植物から単離および調製する。プロトプラストを、精製プラスミドDNAを用いて形質転換する。ドナーおよびZFNプラスミドDNAのアリコートを3つのモル比で調製する:1:1(各プラスミド30μg)、5:1(プラスミドDNA計30μgに対するドナープラスミド:ZFNプラスミド)および10:1(プラスミドDNA計30μgに対するドナープラスミド:ZFNプラスミド)。さらに、ドナーのみおよびZFNのみのアリコート(30μg)をコントロールとして調製する。PEG4000媒介形質転換を介してセイヨウアブラナプロトプラストに送達されたDNAの量を表14に要約する。形質転換プロトプラスト細胞を前記のように培養し、ここでは選択培地はグルホシネート選択培地とし、推定形質転換体を導入遺伝子挿入についてqPCR解析を介してアッセイする。
機能的dsRFPレポーターカセットをコードするドナーDNA(pDAS000097)、ZFN DNA(pDAB104010)またはドナーとZFN DNAの混合物が24時間前に送達されるプロトプラストプール(1プール当たり100万個のプロトプラスト)からゲノムDNAを抽出する。形質転換のために送達されたDNAの量は上に記載される。PCR産物をプラスミドベクターにクローニングする。プラスミドベクターにクローニングすることによって、ゲノム編集が各細胞で独立に起こり、種々の異なる挿入イベントをもたらし、各ゲノム編集を曖昧さなしにシーケンシングすることができる。いくつかのクローンをABI3730XL(登録商標)自動化キャピラリー電気泳動プラットホームでシーケンシングする。SEQUENCHER SOFTWARE V5.0(商標)(GeneCodes、Ann Arbor、MI)を用いて遺伝子配列の解析を行う。
FAD2A座のスプライシングおよび編集のさらなる証拠を、dsREDカセットをコードするドナーDNA(pDAS000097)、ZFN DNAのみ(pDAB104010)、またはドナーとZFN DNAが送達される選択プロトプラストから再生されたカルス組織から得た。各比について約80個のカルスからDNAを抽出する。
プロトプラストから再生し、ポッティング培地に移した植物からDNAを抽出する。回収した植物の大多数が、ドナーDNAにコードされているdsREDカセットの1〜2コピーしか含まないと推定される。植物を、カルス組織について記載したのと同じ組のアッセイならびにカセットがFAD2A座に挿入されたかどうかを決定するためのアッセイによって分析する。
除草剤グリホサートに対する耐性を与えるDGT−28導入遺伝子(参照により本明細書に組み込まれる、国際特許出願公開第2013/116700号パンフレット)を含む構築物を、セイヨウアブラナのFAD2Aゲノム座への組込みのために設計および構築する。代表的なドナー構築物は、FAD2A座へのNHEJ組込みのためのpDAS000389(図17、配列番号89)、FAD2A座へのNHEJ組込みのためのpDAS000391(図18、配列番号90)、FAD2A座へのNHEJ組込みのためのpDAS000392(図19、配列番号91)、FAD2A座へのNHEJ組込みのためのpDAS000393(図20、配列番号92)、FAD2A座のETIP部位へのHDR組込みのためのpDAS000394(図21、配列番号93)、FAD2A座のETIP部位へのHDR組込みのためのpDAS000395(図22、配列番号208)、FAD2A座へのHDR組込みのためのpDAS000396(図23、配列番号209)およびFAD2A座へのHDR組込みのためのpDAS000397(図24、配列番号210)を含む。構築物および関連するジンクフィンガーヌクレアーゼ構築物(例えば、pDAB104010)を、前記のようにセイヨウアブラナ細胞に形質転換する。形質転換体を、前記のように分子確認アッセイを介して同定および確認する。組込みdgt−28導入遺伝子を含むFAD2A染色体組み込み体を単離する。dgt−28導入遺伝子のFAD2A座への組み込みは、NHEJ媒介組込みおよびHDR媒介組込みを介して示される。FAD2A座への組込みは、FAD2A内因性配列またはFAD2A座に安定的に組み込まれる前記ETIP(pDAS000130)に向けられ得る。NHEJ媒介機構を介したFAD2A座への組込みは、線状ドナーまたは環状ドナーDNA設計を用いて行われ得る。形質転換DGT−28セイヨウアブラナイベントを得て、DGT−28の堅牢な発現およびその後の除草剤グリホサートに対する耐性について試験する。
Claims (21)
- 部位特異的様式で細胞中のFAD2遺伝子中の標的部位を切断して、それによって前記FAD2遺伝子中の破壊を引き起こす工程を含む、細胞のゲノムを修飾する方法であって、前記FAD2遺伝子が切断後に修飾される方法。
- 対象となる核酸配列を前記破壊に組み込む工程をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記FAD2遺伝子がFAD2A、FAD2A’、FAD2Cおよび/またはFAD2C’遺伝子である、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 部位特異的様式での前記切断が、DNA結合ドメイン、および切断ドメインまたは切断ハーフドメインを含む融合タンパク質あるいは前記融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドを前記細胞に導入する工程を含み、前記融合タンパク質が特異的に前記標的部位に結合し、前記標的部位またはその近くを切断して、それによって前記破壊を引き起こす、請求項1から3のいずれかに記載の方法。
- 前記DNA結合ドメインが、メガヌクレアーゼDNA結合ドメイン、ロイシンジッパーDNA結合ドメイン、転写活性化物質様(TAL)DNA結合ドメイン、RNAガイド化CRISPR−Cas9、リコンビナーゼ、ジンクフィンガータンパク質DNA結合ドメイン、および前記のいずれかのキメラ組み合わせからなる群から選択される、請求項4に記載の方法。
- 前記切断ドメインまたは切断ハーフドメインがIIS型制限エンドヌクレアーゼからの切断ハーフドメイン、FokIエンドヌクレアーゼからの切断ハーフドメイン、StsIエンドヌクレアーゼからの切断ハーフドメイン、およびホーミングエンドヌクレアーゼからなる群から選択される、請求項4または請求項5に記載の方法。
- 前記融合タンパク質がジンクフィンガーヌクレアーゼである、請求項4から6のいずれかに記載の方法。
- 前記ジンクフィンガーヌクレアーゼが3〜6個のジンクフィンガードメインを含み、各ジンクフィンガードメインが認識ヘリックス領域を含み、前記ジンクフィンガータンパク質が表3の一列に整列され、示される前記認識ヘリックス領域を含む、請求項7に記載の方法。
- 部位特異的様式での前記切断がFAD2A、FAD2A’、FAD2Cおよび/またはFAD2C’のいくつかであるが全てではないコピーに特異的である、請求項1から8のいずれかに記載の方法。
- 前記標的部位が配列番号22〜26および配列番号28〜33および配列番号35〜38からなる群から選択される、請求項1から9のいずれかに記載の方法。
- 前記細胞が植物、真菌、細菌または藻類細胞である、請求項1から10のいずれかに記載の方法。
- 前記植物細胞が単子葉植物細胞または双子葉植物細胞である、請求項11に記載の方法。
- 前記植物細胞がアブラナ属の種、セイヨウアブラナ;ブラッシカ・ラパ;カラシナ(Brassica juencea);ブラッシカ・オレラセア(Brassica oleracea);クロガラシ(Brassica nigra);トウモロコシ属の種;トウモロコシ;ダイズ属の種;ダイズ(Glycine max);コムギ属の種;コムギ(Triticum aestivum);イネ属の種;イネ(Oryza sativa);トリティカエ属(Triticae)の種;トリティカエ・トリティクム(Triticae triticum);ヘリアンテアエ属(Heliantheae)の種;ヘリアンテアエ・ヘリアンサス(Heliantheae helianthus);ワタ属の種;ワタ(Gossypium hirsutum);およびオオムギ(Hordeum vulgar)からなる群から選択される、請求項12に記載の方法。
- 対象となる前記核酸配列が標的部位に結合するDNA結合ドメインを含む配列、1つまたはそれ以上の殺虫剤耐性遺伝子、1つまたはそれ以上の除草剤耐性遺伝子、1つまたはそれ以上の窒素利用効率遺伝子、1つまたはそれ以上の水利用効率遺伝子、1つまたはそれ以上の栄養価遺伝子、1つまたはそれ以上のDNA結合遺伝子、1つまたはそれ以上の選択可能なマーカー遺伝子、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項2から13のいずれかに記載の方法。
- 請求項1から14のいずれかに記載の方法によって修飾された細胞を含む細胞、種子または植物。
- FAD2A、FAD2A’、FAD2Cおよび/またはFAD2C’遺伝子の1つまたはそれ以上のコピーに組み込まれた対象となるヌクレオチド配列を含むトランスジェニック細胞、種子または植物である、請求項15に記載の細胞、種子または植物。
- 前記ヌクレオチド配列が前記細胞と異種性または相同性である、請求項16に記載の細胞、種子または植物。
- 前記相同性配列が少なくとも1つの一塩基多型を含む、請求項14に記載の細胞、種子または植物。
- 前記核酸配列が配列番号22〜26および配列番号28〜33および配列番号35〜38からなる群から選択される標的部位またはその近くで組み込まれた、請求項16から18のいずれかに記載の細胞、種子または植物。
- 配列番号22〜26および配列番号28〜33および配列番号35〜38からなる群から選択される核酸標的部位またはその近くを切断する、部位特異的ジンクフィンガーヌクレアーゼ。
- 前記ジンクフィンガーヌクレアーゼが3〜6個のジンクフィンガードメインを含み、各ジンクフィンガードメインが認識ヘリックス領域を含み、前記ジンクフィンガータンパク質が表3の一列に整列され、示される前記認識ヘリックス領域を含む、請求項20に記載のジンクフィンガーヌクレアーゼ。
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EA202091316A1 (ru) * | 2016-12-22 | 2020-08-18 | Тулджин Инкорпорейтид | Обогащенный олеиновой кислотой растительный организм, имеющий генетически модифицированный fad2, и способ его получения |
WO2018119359A1 (en) | 2016-12-23 | 2018-06-28 | President And Fellows Of Harvard College | Editing of ccr5 receptor gene to protect against hiv infection |
EP3592853A1 (en) | 2017-03-09 | 2020-01-15 | President and Fellows of Harvard College | Suppression of pain by gene editing |
WO2018165629A1 (en) | 2017-03-10 | 2018-09-13 | President And Fellows Of Harvard College | Cytosine to guanine base editor |
CA3057192A1 (en) | 2017-03-23 | 2018-09-27 | President And Fellows Of Harvard College | Nucleobase editors comprising nucleic acid programmable dna binding proteins |
WO2018198049A1 (en) | 2017-04-25 | 2018-11-01 | Cellectis | Alfalfa with reduced lignin composition |
US11560566B2 (en) | 2017-05-12 | 2023-01-24 | President And Fellows Of Harvard College | Aptazyme-embedded guide RNAs for use with CRISPR-Cas9 in genome editing and transcriptional activation |
CN107217070A (zh) * | 2017-05-22 | 2017-09-29 | 广东省农业科学院作物研究所 | 一种基于TALENs基因编辑花生育种方法 |
JP2020534795A (ja) | 2017-07-28 | 2020-12-03 | プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ | ファージによって支援される連続的進化(pace)を用いて塩基編集因子を進化させるための方法および組成物 |
US11319532B2 (en) | 2017-08-30 | 2022-05-03 | President And Fellows Of Harvard College | High efficiency base editors comprising Gam |
CN107502621B (zh) * | 2017-09-22 | 2021-04-13 | 福建农林大学 | 一种快速检测体内dna末端连接的方法 |
US11795443B2 (en) | 2017-10-16 | 2023-10-24 | The Broad Institute, Inc. | Uses of adenosine base editors |
WO2019173125A1 (en) * | 2018-03-09 | 2019-09-12 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods for modification of fatty acids in soybean |
EP3829292A4 (en) * | 2018-06-01 | 2022-06-08 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | BRASSICA GENOME EDITING SYSTEMS AND METHODS |
CN109182373B (zh) * | 2018-09-18 | 2020-10-09 | 武汉市农业科学院 | 一种利用基因编辑技术获得高油酸油菜的方法 |
AU2019369418A1 (en) * | 2018-10-31 | 2021-03-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Compositions and methods for Ochrobactrum-mediated gene editing |
WO2020097026A1 (en) * | 2018-11-05 | 2020-05-14 | University Of Tennessee Research Foundation | High throughput protoplast isolation and transformation of plant cells from a novel leaf-based cell culture-derived system |
WO2020191153A2 (en) | 2019-03-19 | 2020-09-24 | The Broad Institute, Inc. | Methods and compositions for editing nucleotide sequences |
CN110004173B (zh) * | 2019-04-08 | 2023-03-14 | 天津吉诺沃生物科技有限公司 | 一种获得非转基因耐储存鲜食枸杞的方法 |
KR20230019843A (ko) | 2020-05-08 | 2023-02-09 | 더 브로드 인스티튜트, 인코퍼레이티드 | 표적 이중 가닥 뉴클레오티드 서열의 두 가닥의 동시 편집을 위한 방법 및 조성물 |
US11884915B2 (en) | 2021-09-10 | 2024-01-30 | Agilent Technologies, Inc. | Guide RNAs with chemical modification for prime editing |
WO2023163946A1 (en) * | 2022-02-22 | 2023-08-31 | Peter Biotherapeutics, Inc. | Technologies for genetic modification |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005028630A2 (en) * | 2003-09-19 | 2005-03-31 | Sangamo Biosciences, Inc. | Engineered zinc finger proteins for regulation of gene expression |
US20080168586A1 (en) * | 2005-01-28 | 2008-07-10 | Bayer Bioscience N.V. | Brassica Plant Comprising a Mutant Fatty Acid Desaturase |
WO2010150901A1 (ja) * | 2009-06-22 | 2010-12-29 | 国立大学法人佐賀大学 | ダイズ油脂中のオレイン酸含量を増加させる突然変異体及びその原因遺伝子 |
WO2011005998A1 (en) * | 2009-07-08 | 2011-01-13 | The Curators Of The University Of Missouri | Method to develop high oleic acid soybeans using conventional soybean breeding techniques |
WO2011049627A1 (en) * | 2009-10-22 | 2011-04-28 | Dow Agrosciences Llc | Engineered zinc finger proteins targeting plant genes involved in fatty acid biosynthesis |
JP2011207893A (ja) * | 1999-01-12 | 2011-10-20 | Sanagamo Biosciences Inc | ジンクフィンガータンパク質を用いた、細胞における内因性遺伝子発現の調節 |
WO2011146121A1 (en) * | 2010-05-17 | 2011-11-24 | Sangamo Biosciences, Inc. | Novel dna-binding proteins and uses thereof |
JP2015531202A (ja) * | 2012-08-01 | 2015-10-29 | マイクロソフト テクノロジー ライセンシング,エルエルシー | 写真を使用したオペレーティングシステムカラーの設定 |
Family Cites Families (163)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US789538A (en) | 1904-11-11 | 1905-05-09 | Colin E Ham | Dumb-bell. |
US1173508A (en) | 1913-10-27 | 1916-02-29 | Oscar F Heartwell Jr | Ironing-board. |
US4178330A (en) | 1977-08-29 | 1979-12-11 | Velsicol Chemical Corporation | Haloaryl halobenzenesulfonate flame retardants |
US4179475A (en) | 1978-05-11 | 1979-12-18 | Phillips Petroleum Company | Olefin feed in HF alkylation of isoparaffin with olefin |
US4727028A (en) | 1981-06-22 | 1988-02-23 | Eli Lilly And Company | Recombinant DNA cloning vectors and the eukaryotic and prokaryotic transformants thereof |
US4693977A (en) | 1982-08-23 | 1987-09-15 | Queen's University At Kingston | Enzyme immobilization for producing cephalosporin antibiotics |
US4536475A (en) | 1982-10-05 | 1985-08-20 | Phytogen | Plant vector |
US4535060A (en) | 1983-01-05 | 1985-08-13 | Calgene, Inc. | Inhibition resistant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthetase, production and use |
US5352605A (en) | 1983-01-17 | 1994-10-04 | Monsanto Company | Chimeric genes for transforming plant cells using viral promoters |
NL8300698A (nl) | 1983-02-24 | 1984-09-17 | Univ Leiden | Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van tweezaadlobbige planten; agrobacterium tumefaciens bacterien en werkwijze voor het produceren daarvan; planten en plantecellen met gewijzigde genetische eigenschappen; werkwijze voor het bereiden van chemische en/of farmaceutische produkten. |
US5428147A (en) | 1983-04-15 | 1995-06-27 | Mycogen Plant Science, Inc. | Octopine T-DNA promoters |
NZ207765A (en) | 1983-04-15 | 1987-03-06 | Lubrizol Genetics Inc | Plant expression of transferred dna(t-dna)from plasmids associated with agrobacterium sp |
US5447858A (en) | 1984-04-13 | 1995-09-05 | Mycogen Plant Sciences, Inc. | Heat shock promoter and gene |
US4943674A (en) | 1987-05-26 | 1990-07-24 | Calgene, Inc. | Fruit specific transcriptional factors |
US5753475A (en) | 1985-01-17 | 1998-05-19 | Calgene, Inc. | Methods and compositions for regulated transcription and expression of heterologous genes |
US5420034A (en) | 1986-07-31 | 1995-05-30 | Calgene, Inc. | Seed-specific transcriptional regulation |
US4886937A (en) | 1985-05-20 | 1989-12-12 | North Carolina State University | Method for transforming pine |
US4940835A (en) | 1985-10-29 | 1990-07-10 | Monsanto Company | Glyphosate-resistant plants |
US4810648A (en) | 1986-01-08 | 1989-03-07 | Rhone Poulenc Agrochimie | Haloarylnitrile degrading gene, its use, and cells containing the gene |
DE3765449D1 (de) | 1986-03-11 | 1990-11-15 | Plant Genetic Systems Nv | Durch gentechnologie erhaltene und gegen glutaminsynthetase-inhibitoren resistente pflanzenzellen. |
US4975374A (en) | 1986-03-18 | 1990-12-04 | The General Hospital Corporation | Expression of wild type and mutant glutamine synthetase in foreign hosts |
US5015580A (en) | 1987-07-29 | 1991-05-14 | Agracetus | Particle-mediated transformation of soybean plants and lines |
EP0270496B1 (de) | 1986-12-05 | 1993-03-17 | Ciba-Geigy Ag | Verbessertes Verfahren zur Transformation von pflanzlichen Protoplasten |
US5359142A (en) | 1987-01-13 | 1994-10-25 | Monsanto Company | Method for enhanced expression of a protein |
US5322938A (en) | 1987-01-13 | 1994-06-21 | Monsanto Company | DNA sequence for enhancing the efficiency of transcription |
EP0333033A1 (en) | 1988-03-09 | 1989-09-20 | Meiji Seika Kaisha Ltd. | Glutamine synthesis gene and glutamine synthetase |
US5416011A (en) | 1988-07-22 | 1995-05-16 | Monsanto Company | Method for soybean transformation and regeneration |
US5302523A (en) | 1989-06-21 | 1994-04-12 | Zeneca Limited | Transformation of plant cells |
US5501967A (en) | 1989-07-26 | 1996-03-26 | Mogen International, N.V./Rijksuniversiteit Te Leiden | Process for the site-directed integration of DNA into the genome of plants |
US5550318A (en) | 1990-04-17 | 1996-08-27 | Dekalb Genetics Corporation | Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof |
US7705215B1 (en) | 1990-04-17 | 2010-04-27 | Dekalb Genetics Corporation | Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof |
US6051753A (en) | 1989-09-07 | 2000-04-18 | Calgene, Inc. | Figwort mosaic virus promoter and uses |
DK0426641T3 (da) | 1989-10-31 | 2000-10-23 | Monsanto Co | Promotor til transgene planter |
US5641876A (en) | 1990-01-05 | 1997-06-24 | Cornell Research Foundation, Inc. | Rice actin gene and promoter |
US5484956A (en) | 1990-01-22 | 1996-01-16 | Dekalb Genetics Corporation | Fertile transgenic Zea mays plant comprising heterologous DNA encoding Bacillus thuringiensis endotoxin |
CA2074355C (en) | 1990-01-22 | 2008-10-28 | Ronald C. Lundquist | Method of producing fertile transgenic corn plants |
US6403865B1 (en) | 1990-08-24 | 2002-06-11 | Syngenta Investment Corp. | Method of producing transgenic maize using direct transformation of commercially important genotypes |
US5633435A (en) | 1990-08-31 | 1997-05-27 | Monsanto Company | Glyphosate-tolerant 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthases |
US5266317A (en) | 1990-10-04 | 1993-11-30 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Insect-specific paralytic neurotoxin genes for use in biological insect control: methods and compositions |
US5384253A (en) | 1990-12-28 | 1995-01-24 | Dekalb Genetics Corporation | Genetic transformation of maize cells by electroporation of cells pretreated with pectin degrading enzymes |
GB9104617D0 (en) | 1991-03-05 | 1991-04-17 | Nickerson Int Seed | Pest control |
GB9115909D0 (en) | 1991-07-23 | 1991-09-04 | Nickerson Int Seed | Recombinant dna |
DK39692D0 (da) | 1992-03-25 | 1992-03-25 | Danisco | Biologisk materiale |
US5487994A (en) | 1992-04-03 | 1996-01-30 | The Johns Hopkins University | Insertion and deletion mutants of FokI restriction endonuclease |
US5436150A (en) | 1992-04-03 | 1995-07-25 | The Johns Hopkins University | Functional domains in flavobacterium okeanokoities (foki) restriction endonuclease |
US5356802A (en) | 1992-04-03 | 1994-10-18 | The Johns Hopkins University | Functional domains in flavobacterium okeanokoites (FokI) restriction endonuclease |
ATE398679T1 (de) | 1992-07-07 | 2008-07-15 | Japan Tobacco Inc | Verfahren zur transformation einer monokotyledon pflanze |
WO1994002620A2 (en) | 1992-07-27 | 1994-02-03 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | An improved method of agrobacterium-mediated transformation of cultured soybean cells |
US5607914A (en) | 1993-01-13 | 1997-03-04 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Synthetic antimicrobial peptides |
US6118047A (en) | 1993-08-25 | 2000-09-12 | Dekalb Genetic Corporation | Anthranilate synthase gene and method of use thereof for conferring tryptophan overproduction |
US5362865A (en) | 1993-09-02 | 1994-11-08 | Monsanto Company | Enhanced expression in plants using non-translated leader sequences |
US5580852A (en) | 1993-12-17 | 1996-12-03 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Derivatives of tachyplesin having inhibitory activity towards plant pathogenic fungi |
US6140466A (en) | 1994-01-18 | 2000-10-31 | The Scripps Research Institute | Zinc finger protein derivatives and methods therefor |
WO1995019431A1 (en) | 1994-01-18 | 1995-07-20 | The Scripps Research Institute | Zinc finger protein derivatives and methods therefor |
US6242568B1 (en) | 1994-01-18 | 2001-06-05 | The Scripps Research Institute | Zinc finger protein derivatives and methods therefor |
JP4118327B2 (ja) | 1994-08-20 | 2008-07-16 | ゲンダック・リミテッド | Dna認識のための結合タンパク質におけるまたはそれに関連する改良 |
GB9824544D0 (en) | 1998-11-09 | 1999-01-06 | Medical Res Council | Screening system |
US5789538A (en) | 1995-02-03 | 1998-08-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Zinc finger proteins with high affinity new DNA binding specificities |
US5994627A (en) | 1995-03-31 | 1999-11-30 | Common Wealth Scientific And Industrial Research Organisation | Genetic sequences conferring nematode resistance in plants and uses therefor |
US5639463A (en) | 1995-05-23 | 1997-06-17 | The Mennen Company | Clear cosmetic stick composition |
US5693512A (en) | 1996-03-01 | 1997-12-02 | The Ohio State Research Foundation | Method for transforming plant tissue by sonication |
US5850019A (en) | 1996-08-06 | 1998-12-15 | University Of Kentucky Research Foundation | Promoter (FLt) for the full-length transcript of peanut chlorotic streak caulimovirus (PCLSV) and expression of chimeric genes in plants |
US5925523A (en) | 1996-08-23 | 1999-07-20 | President & Fellows Of Harvard College | Intraction trap assay, reagents and uses thereof |
CA2236770A1 (en) | 1996-09-05 | 1998-03-12 | Unilever Plc | Salt-inducible promoter derivable from a lactic acid bacterium, and its use in a lactic acid bacterium for production of a desired protein |
WO1998027878A1 (en) | 1996-12-20 | 1998-07-02 | Fundação E.J. Zerbini | A prosthesis for thoracostomy and method for its implantation |
AU720780B2 (en) | 1997-01-20 | 2000-06-15 | Plant Genetic Systems N.V. | Pathogen-induced plant promoters |
US5981840A (en) | 1997-01-24 | 1999-11-09 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Methods for agrobacterium-mediated transformation |
GB9703369D0 (en) | 1997-02-18 | 1997-04-09 | Lindqvist Bjorn H | Process |
GB2338237B (en) | 1997-02-18 | 2001-02-28 | Actinova Ltd | In vitro peptide or protein expression library |
US5922564A (en) | 1997-02-24 | 1999-07-13 | Performance Plants, Inc. | Phosphate-deficiency inducible promoter |
US5925521A (en) | 1997-03-31 | 1999-07-20 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Human serine carboxypeptidase |
GB9710807D0 (en) | 1997-05-23 | 1997-07-23 | Medical Res Council | Nucleic acid binding proteins |
GB9710809D0 (en) | 1997-05-23 | 1997-07-23 | Medical Res Council | Nucleic acid binding proteins |
WO1998056239A1 (en) * | 1997-06-12 | 1998-12-17 | Cargill, Incorporated | Fatty acid desaturases and mutant sequences thereof |
US6087166A (en) | 1997-07-03 | 2000-07-11 | Basf Aktiengesellschaft | Transcriptional activators with graded transactivation potential |
US6410248B1 (en) | 1998-01-30 | 2002-06-25 | Massachusetts Institute Of Technology | General strategy for selecting high-affinity zinc finger proteins for diverse DNA target sites |
HUP0100787A3 (en) | 1998-02-20 | 2003-04-28 | Syngenta Ltd | Pollen specific promoter |
CA2315549A1 (en) | 1998-02-26 | 1999-09-02 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Family of maize pr-1 genes and promoters |
ES2273127T3 (es) | 1998-02-26 | 2007-05-01 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Promotor alfa-tubulin 3-18 del maiz. |
ATE466952T1 (de) | 1998-03-02 | 2010-05-15 | Massachusetts Inst Technology | Poly-zinkfinger-proteine mit verbesserten linkern |
US6635806B1 (en) | 1998-05-14 | 2003-10-21 | Dekalb Genetics Corporation | Methods and compositions for expression of transgenes in plants |
US6307123B1 (en) | 1998-05-18 | 2001-10-23 | Dekalb Genetics Corporation | Methods and compositions for transgene identification |
US6140815A (en) | 1998-06-17 | 2000-10-31 | Dover Instrument Corporation | High stability spin stand platform |
JP2000083680A (ja) | 1998-07-16 | 2000-03-28 | Nippon Paper Industries Co Ltd | 光誘導型プロモ―タ―の制御下に置かれた不定芽再分化遺伝子を選抜マ―カ―遺伝子とする植物への遺伝子導入方法及びこれに用いる植物への遺伝子導入用ベクタ― |
US6140081A (en) | 1998-10-16 | 2000-10-31 | The Scripps Research Institute | Zinc finger binding domains for GNN |
US6453242B1 (en) | 1999-01-12 | 2002-09-17 | Sangamo Biosciences, Inc. | Selection of sites for targeting by zinc finger proteins and methods of designing zinc finger proteins to bind to preselected sites |
US7070934B2 (en) | 1999-01-12 | 2006-07-04 | Sangamo Biosciences, Inc. | Ligand-controlled regulation of endogenous gene expression |
US6599692B1 (en) | 1999-09-14 | 2003-07-29 | Sangamo Bioscience, Inc. | Functional genomics using zinc finger proteins |
JP2002534129A (ja) | 1999-01-14 | 2002-10-15 | モンサント テクノロジー エルエルシー | ダイズ形質転換方法 |
US7030215B2 (en) | 1999-03-24 | 2006-04-18 | Sangamo Biosciences, Inc. | Position dependent recognition of GNN nucleotide triplets by zinc fingers |
US6794136B1 (en) | 2000-11-20 | 2004-09-21 | Sangamo Biosciences, Inc. | Iterative optimization in the design of binding proteins |
US6232526B1 (en) | 1999-05-14 | 2001-05-15 | Dekalb Genetics Corp. | Maize A3 promoter and methods for use thereof |
US6207879B1 (en) | 1999-05-14 | 2001-03-27 | Dekalb Genetics Corporation | Maize RS81 promoter and methods for use thereof |
US6194636B1 (en) | 1999-05-14 | 2001-02-27 | Dekalb Genetics Corp. | Maize RS324 promoter and methods for use thereof |
US6429357B1 (en) | 1999-05-14 | 2002-08-06 | Dekalb Genetics Corp. | Rice actin 2 promoter and intron and methods for use thereof |
US6677503B1 (en) | 1999-06-23 | 2004-01-13 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Sunflower anti-pathogene proteins and genes and their uses |
DE60023936T2 (de) | 1999-12-06 | 2006-05-24 | Sangamo Biosciences Inc., Richmond | Methoden zur verwendung von randomisierten zinkfingerprotein-bibliotheken zur identifizierung von genfunktionen |
MXPA02007130A (es) | 2000-01-21 | 2002-12-13 | Pioneer Hi Bred Int | Elementos promotores novedosos preferidos de raiz y metodos de uso.. |
AU5077401A (en) | 2000-02-08 | 2001-08-20 | Sangamo Biosciences Inc | Cells for drug discovery |
US20020061512A1 (en) | 2000-02-18 | 2002-05-23 | Kim Jin-Soo | Zinc finger domains and methods of identifying same |
US6388170B1 (en) | 2000-04-07 | 2002-05-14 | University Of Kentucky Research Foundation | Bidirectional promoters and methods related thereto |
AU2001263155A1 (en) | 2000-05-16 | 2001-11-26 | Massachusetts Institute Of Technology | Methods and compositions for interaction trap assays |
JP2002060786A (ja) | 2000-08-23 | 2002-02-26 | Kao Corp | 硬質表面用殺菌防汚剤 |
US6586251B2 (en) * | 2000-10-31 | 2003-07-01 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Methods of modifying eukaryotic cells |
US7067317B2 (en) | 2000-12-07 | 2006-06-27 | Sangamo Biosciences, Inc. | Regulation of angiogenesis with zinc finger proteins |
US7022826B2 (en) | 2001-02-26 | 2006-04-04 | The Regents Of The University Of California | Non-oligomerizing fluorescent proteins |
GB0108491D0 (en) | 2001-04-04 | 2001-05-23 | Gendaq Ltd | Engineering zinc fingers |
US20040224385A1 (en) | 2001-08-20 | 2004-11-11 | Barbas Carlos F | Zinc finger binding domains for cnn |
AU2003235589A1 (en) * | 2002-01-14 | 2003-07-30 | Brookhaven Science Associates, Llc | Modified fatty acid hydroxylase protein and genes |
US7262054B2 (en) | 2002-01-22 | 2007-08-28 | Sangamo Biosciences, Inc. | Zinc finger proteins for DNA binding and gene regulation in plants |
CN100575485C (zh) | 2002-01-23 | 2009-12-30 | 犹他大学研究基金会 | 使用锌指核酸酶的定向染色体诱变 |
US20060080750A1 (en) * | 2002-03-21 | 2006-04-13 | Fillatti Joanne J | Nucleic acid constructs and methods for producing altered seed oil compositions |
EP2368982A3 (en) | 2002-03-21 | 2011-10-12 | Sangamo BioSciences, Inc. | Methods and compositions for using zinc finger endonucleases to enhance homologous recombination |
US7361635B2 (en) | 2002-08-29 | 2008-04-22 | Sangamo Biosciences, Inc. | Simultaneous modulation of multiple genes |
US9447434B2 (en) | 2002-09-05 | 2016-09-20 | California Institute Of Technology | Use of chimeric nucleases to stimulate gene targeting |
WO2004099367A2 (en) * | 2002-10-23 | 2004-11-18 | The General Hospital Corporation | Methods for producing zinc finger proteins that bind to extended dna target sequences |
WO2004070035A2 (en) * | 2003-02-03 | 2004-08-19 | Sungene Gmbh & Co. Kgaa | Method for increasing efficiency of homologous recombination in plants |
WO2004072259A2 (en) * | 2003-02-11 | 2004-08-26 | Dow Agrosciences Llc | Altered fad2 and fad3 genes in brassica and the molecular marker-assisted detection thereof |
BRPI0409816B8 (pt) | 2003-04-29 | 2022-12-06 | Pioneer Hi Bred Int | Genes de glifosato-n-acetiltransferase (gat), construtos os compreendendo, célula bacteriana, polipeptídeo tendo atividade de gat, bem como método para a produção de uma planta transgênica resistente ao glifosato e métodos para controlar ervas daninhas em um campo contendo uma safra |
US8409861B2 (en) | 2003-08-08 | 2013-04-02 | Sangamo Biosciences, Inc. | Targeted deletion of cellular DNA sequences |
US7888121B2 (en) | 2003-08-08 | 2011-02-15 | Sangamo Biosciences, Inc. | Methods and compositions for targeted cleavage and recombination |
WO2005028620A2 (en) | 2003-09-16 | 2005-03-31 | The Rockefeller University | Histone modifications as binary switches controlling gene expression |
KR100537955B1 (ko) | 2003-10-29 | 2005-12-20 | 학교법인고려중앙학원 | 꽃가루 특이적 유전자 발현 프로모터 |
US7972854B2 (en) | 2004-02-05 | 2011-07-05 | Sangamo Biosciences, Inc. | Methods and compositions for targeted cleavage and recombination |
JP2008506359A (ja) | 2004-04-08 | 2008-03-06 | サンガモ バイオサイエンシズ インコーポレイテッド | ジンクフィンガータンパク質による神経因性疼痛の処置 |
JP4903689B2 (ja) | 2004-04-08 | 2012-03-28 | サンガモ バイオサイエンシズ インコーポレイテッド | 神経障害および神経変性症状を治療するための方法と組成物 |
CA2897475C (en) | 2004-04-30 | 2018-07-10 | Dow Agrosciences Llc | Novel herbicide resistance genes |
EP1877583A2 (en) | 2005-05-05 | 2008-01-16 | Arizona Board of Regents on behalf of the Unversity of Arizona | Sequence enabled reassembly (seer) - a novel method for visualizing specific dna sequences |
EP1913149A4 (en) | 2005-07-26 | 2009-08-05 | Sangamo Biosciences Inc | TARGETED INTEGRATION AND EXPRESSION OF EXOGENOUS NUCLEIC ACID SEQUENCES |
WO2009134714A2 (en) * | 2008-04-28 | 2009-11-05 | Precision Biosciences, Inc. | Fusion molecules of rationally-designed dna-binding proteins and effector domains |
AU2006308959B2 (en) | 2005-10-28 | 2012-09-06 | Corteva Agriscience Llc | Novel herbicide resistance genes |
EP1806398A1 (en) | 2006-01-04 | 2007-07-11 | Monsanto S.A.S. | Fad-2 mutants and high oleic plants |
EP2213731B1 (en) | 2006-05-25 | 2013-12-04 | Sangamo BioSciences, Inc. | Variant foki cleavage half-domains |
EP1862551A1 (en) * | 2006-05-29 | 2007-12-05 | Institut National De La Recherche Agronomique (Inra) | Genetic markers for high oleic acid content in plants |
SI2049663T1 (sl) | 2006-08-11 | 2015-12-31 | Dow Agrosciences Llc | Homologna rekombinacija, posredovana z nukleazo s cinkovim prstom |
WO2008076290A2 (en) | 2006-12-14 | 2008-06-26 | Dow Agrosciences Llc | Optimized non-canonical zinc finger proteins |
EP1944375A1 (en) | 2007-01-11 | 2008-07-16 | Monsanto S.A.S. | FAD2 mutants and high oleic acid plants |
EP2171052B1 (en) | 2007-07-12 | 2014-08-27 | Sangamo BioSciences, Inc. | Methods and compositions for inactivating alpha 1,6 fucosyltransferase (fut 8) gene expression |
CA2700231C (en) | 2007-09-27 | 2018-09-18 | Sangamo Biosciences, Inc. | Rapid in vivo identification of biologically active nucleases |
DK2205749T3 (en) | 2007-09-27 | 2016-08-22 | Dow Agrosciences Llc | MODIFIED PROTEINS zinc finger, which target the 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase genes |
WO2009054985A1 (en) | 2007-10-25 | 2009-04-30 | Sangamo Biosciences, Inc. | Methods and compositions for targeted integration |
US9418219B2 (en) | 2008-04-11 | 2016-08-16 | Microsoft Technology Licensing, Llc | Inter-process message security |
AU2009238629C1 (en) | 2008-04-14 | 2015-04-30 | Sangamo Therapeutics, Inc. | Linear donor constructs for targeted integration |
EP2313515B1 (en) | 2008-08-22 | 2015-03-04 | Sangamo BioSciences, Inc. | Methods and compositions for targeted single-stranded cleavage and targeted integration |
AR074783A1 (es) | 2008-12-17 | 2011-02-09 | Dow Agrosciences Llc | Metodos y composiciones para expresar uno o mas productos de un acido nucleico exogeno integrado al locus zp15 de una celula vegetal |
EP2206723A1 (en) | 2009-01-12 | 2010-07-14 | Bonas, Ulla | Modular DNA-binding domains |
US20110239315A1 (en) | 2009-01-12 | 2011-09-29 | Ulla Bonas | Modular dna-binding domains and methods of use |
CA2770312A1 (en) | 2009-08-11 | 2011-02-17 | Sangamo Biosciences, Inc. | Organisms homozygous for targeted modification |
US10340778B2 (en) | 2009-10-19 | 2019-07-02 | Qm Power, Inc. | Parallel magnetic circuit motor |
EP2510096B2 (en) | 2009-12-10 | 2018-02-07 | Regents of the University of Minnesota | Tal effector-mediated dna modification |
CN102812034B (zh) | 2010-01-22 | 2016-08-03 | 陶氏益农公司 | 靶向基因组改造 |
WO2011091317A2 (en) | 2010-01-22 | 2011-07-28 | Dow Agrosciences Llc | Engineered landing pads for gene targeting in plants |
JP6137596B2 (ja) | 2010-02-08 | 2017-05-31 | サンガモ セラピューティクス, インコーポレイテッド | 遺伝子操作された切断ハーフドメイン |
WO2011100058A1 (en) | 2010-02-09 | 2011-08-18 | Sangamo Biosciences, Inc. | Targeted genomic modification with partially single-stranded donor molecules |
EP2572192A4 (en) | 2010-05-17 | 2013-12-11 | Uab Research Foundation | GENERAL MASS SPECTROMETRY ASSAY WITH CONTINUOUS ELIMINATION OF CO-FRACTIONATIVE REPORTERS BY MASS SPECTROMETRIC DETECTION EFFICIENCY |
CA3039432A1 (en) | 2010-05-28 | 2011-12-01 | Corbion Biotech, Inc. | Tailored oils produced from recombinant heterotrophic microorganisms |
WO2013116700A1 (en) | 2012-02-01 | 2013-08-08 | Dow Agrosciences Llc | Glyphosate resistant plants and associated methods |
WO2013169802A1 (en) * | 2012-05-07 | 2013-11-14 | Sangamo Biosciences, Inc. | Methods and compositions for nuclease-mediated targeted integration of transgenes |
US10536934B2 (en) * | 2012-08-03 | 2020-01-14 | Telefonaktiebolaget Lm Ericsson (Publ) | EPDCCH search space design |
UA118090C2 (uk) * | 2012-09-07 | 2018-11-26 | ДАУ АГРОСАЙЄНСІЗ ЕлЕлСі | Спосіб інтегрування послідовності нуклеїнової кислоти, що представляє інтерес, у ген fad2 у клітині сої та специфічний для локусу fad2 білок, що зв'язується, здатний індукувати спрямований розрив |
BR112015022778B1 (pt) | 2013-03-15 | 2023-04-11 | Cellectis | Método para a produção de uma planta de soja, método para a obtenção de óleo de soja apresentando teor de ácido oleico aumentado e teor de ácido linoleico reduzido e método para gerar uma planta de soja |
US9417070B1 (en) | 2013-04-01 | 2016-08-16 | Nextgen Aerosciences, Inc. | Systems and methods for continuous replanning of vehicle trajectories |
JP5937635B2 (ja) | 2014-03-28 | 2016-06-22 | ファナック株式会社 | 電磁接触器の溶着検出機能を有するモータ駆動装置 |
-
2013
- 2013-05-09 UA UAA201503224A patent/UA118090C2/uk unknown
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2020
- 2020-02-03 JP JP2020016485A patent/JP2020096611A/ja not_active Withdrawn
- 2020-02-18 JP JP2020025358A patent/JP2020110150A/ja not_active Withdrawn
-
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Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2011207893A (ja) * | 1999-01-12 | 2011-10-20 | Sanagamo Biosciences Inc | ジンクフィンガータンパク質を用いた、細胞における内因性遺伝子発現の調節 |
WO2005028630A2 (en) * | 2003-09-19 | 2005-03-31 | Sangamo Biosciences, Inc. | Engineered zinc finger proteins for regulation of gene expression |
US20080168586A1 (en) * | 2005-01-28 | 2008-07-10 | Bayer Bioscience N.V. | Brassica Plant Comprising a Mutant Fatty Acid Desaturase |
WO2010150901A1 (ja) * | 2009-06-22 | 2010-12-29 | 国立大学法人佐賀大学 | ダイズ油脂中のオレイン酸含量を増加させる突然変異体及びその原因遺伝子 |
WO2011005998A1 (en) * | 2009-07-08 | 2011-01-13 | The Curators Of The University Of Missouri | Method to develop high oleic acid soybeans using conventional soybean breeding techniques |
WO2011049627A1 (en) * | 2009-10-22 | 2011-04-28 | Dow Agrosciences Llc | Engineered zinc finger proteins targeting plant genes involved in fatty acid biosynthesis |
WO2011146121A1 (en) * | 2010-05-17 | 2011-11-24 | Sangamo Biosciences, Inc. | Novel dna-binding proteins and uses thereof |
JP2015531202A (ja) * | 2012-08-01 | 2015-10-29 | マイクロソフト テクノロジー ライセンシング,エルエルシー | 写真を使用したオペレーティングシステムカラーの設定 |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
BMC PLANT BIOLOGY (2009) VOL.9, NO.89, PP.1-11, JPN6017019297, ISSN: 0003566750 * |
BMC PLANT BIOLOGY (2010) VOL.10, NO.195, PP.1-13, JPN6017019291, ISSN: 0003566748 * |
CROP SCI. (2005) VOL.45, PP.1997-2000, JPN6017019294, ISSN: 0003566749 * |
J. AMER. OIL CHEM. SOC. (2007) VOL.84, PP.229-235, JPN6017019288, ISSN: 0003566747 * |
PLANT CELL (1994) VOL.6, PP.147-158, JPN6017019302, ISSN: 0003566751 * |
SCIENCE (2012.8) VOL.337, PP.816-821, JPN6017019304, ISSN: 0003566752 * |
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