JP2015529071A - Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａｐｈａｓｅｏｌｉｎａ由来のペクチン分解酵素およびその使用 - Google Patents

Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａｐｈａｓｅｏｌｉｎａ由来のペクチン分解酵素およびその使用 Download PDF

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Abstract

本発明は、ペクチンの分解に関与する真菌Ｍａｃｒｏｐｈｏｍｉｎａ ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ（「Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ」）から誘導された酵素をコードする単離されたポリヌクレオチドを開示し、そしてこれは、配列番号、２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１に示されるヌクレオチド配列、もしくはこのような配列の相補物を備え、および／またはこのような配列または相補物からなる。本発明はまた、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３に示されるポリヌクレオチド配列によってコードされる単離されたポリペプチド；これらのポリヌクレオチドを備える組換え遺伝子構築物；ペクチン分解酵素の産生を伴うかまたはこれが増強されている、これらの組換え遺伝子構築物を備える形質転換体およびトランスジェニック真菌にも関する。本発明のポリペプチドは、数ある中でも、フルーツジュース、織物製品、パルプおよび紙、コーヒー、茶の製造、および油抽出、およびペクチン性排液処理のために使用できる。

Description

関連出願
本願は、２０１２年８月１６日に出願された米国仮特許出願シリアル番号６１／６８３９１４に対する優先権の利益を主張し；その内容は参照により組み込まれる。
技術分野
本発明は、ペクチン酸リアーゼ活性を有するＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａから単離されたポリペプチドおよびそのポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド、ならびにこれらのポリヌクレオチドおよびポリペプチドを製造する方法および使用する方法に関する。本発明はまた、これらのポリヌクレオチドを備える核酸構築物、ベクター、および宿主細胞、ならびにこれらのポリペプチドを製造する方法および使用する方法に関する。本発明のポリペプチドは、数ある中でも、繊維および織物の浸漬およびゴム除去のために繊維産業において；果物および野菜ジュースの抽出のために食品産業において；良質の紙の製造のために製紙産業において；ならびに、コーヒーおよび茶の発酵、油抽出、およびペクチン廃棄物水処理のためにもまた、使用することができる。
ペクチンは、植物の一次細胞壁の中層において存在し、細胞内セメントとして作用する一群の複合ヘテロポリマーである。これらはまた、それらのコロイド的性質により、植物の水調節において重要な役割を有する。細胞壁間に配置されている中層は、主として、プロトペクチン（不溶型のペクチン）から形成されている。
ペクチンは、２つの異なる明確な領域：「スムーズ」領域と「ヘアリー」領域から構成される。「スムーズ」領域は、α−１，４−結合型Ｄ−ガラクツロン酸のバックボーンからなり、メタノールでエステル化されたカルボキシル基をいくつか有するポリガラクツロン酸を形成する（Ｒｏｕｓｅ Ａ．Ｐｅｃｔｉｎ：ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ，ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．Ｉｎ：Ｎａｇｙ Ｓ，Ｓｈａｗ Ｐ，Ｖｅｌｄｈｕｉｓ Ｍｅｄｓ．Ｃｉｔｒｕｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ Ｉ．Ｗｅｓｔｐｏｒｔ ＣＴ：ＡＶＩ ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．１９７７）。「ヘアリー」領域においては、ガラクツロン酸のバックボーンは、α−１，２−結合型Ｌ−ラムノース単位によって壊れている。
ペクチン／ペクチン酸リアーゼは、スムーズ領域においてペクチンを脱重合し、これは、β−脱離を介してグリコシド結合を切断して、４，５−不飽和非還元末端であるオリゴマーを生じる（Ｌｏｍｂａｒｄ Ｖ，Ｂｅｒｎａｒｄ Ｔ，Ｒａｎｃｕｒｅｌ Ｃ，Ｂｒｕｍｅｒ Ｈ，Ｃｏｕｔｉｎｈｏ ＰＭ，Ｈｅｎｒｉｓｓａｔ Ｂ．Ａ ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｌｙａｓｅｓ ｆｏｒ ｇｌｙｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２０１０；４３２（３）：４３７−４４４）。一方、ラムノガラクツロナーゼは、ペクチンのヘアリー領域の中で切断を行う（Ｊｅｎｓｅｎ ＭＨ，Ｏｔｔｅｎ Ｈ，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ Ｕ，Ｂｏｒｃｈｅｒｔ ＴＶ，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ ＬＬ，Ｌａｒｓｅｎ Ｓ，Ｌｅｇｇｉｏ ＬＬ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｅｌｕｃｉｄａｔｅ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｒｈａｍｎｏｇａｌａｃｔｕｒｏｎａｎ ｌｙａｓｅ ｆｒｏｍ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１０；４０４（１）：１００−１１１）。
ペクチンエステラーゼは、ペクチンをメタノールとポリガラクツロン酸に加水分解する。この酵素は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｏｎｉｌｆｏｒｍｅ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ種などを含む数種の真菌によって産生できる（Ｐｏｌｉｚｅｌｉ ＭＬ，Ｊｏｒｇｅ ＪＡ，Ｔｅｒｅｎｚｉ ＨＦ．Ｐｅｃｔｉｎａｓｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ：ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｏｌｙｇａｌａｃｔｕｒｏｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９９１；１３７：１８１５−１８２３）。しかし、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓは、ペクチンエステラーゼの商業的製造のための主要な供給源である（Ｔｏｒｒｅｓ ＥＦ，Ａｇｕｉｌａｒ Ｃ，Ｅｓｑｕｉｖｅｌ ＪＣＣ，Ｇｏｎｚａｌｅｓ ＧＶ．Ｐｅｃｔｉｎａｓｅ．Ｉｎ：Ｅｎｚｙｍｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｎｄｅｙ，Ａ．，Ｗｅｂｂ，Ｃ，Ｓｏｃｃｏｌ，Ｃ．Ｒ．，Ｌａｒｒｏｃｈｅ，Ｃ （Ｅｄｓ），Ａｓｉａｔｅｃｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｅｒｓ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｄｅｌｈｉ，Ｉｎｄｉａ，２００５．ｐｐ．２７３−２９６）。
ペクチン分解酵素は、主として、フルーツジュース製造またはワイン製造などの果物および野菜を処理するための、食品産業における重要なツールである。他の応用分野には、パルプおよび製紙産業（Ｒｅｉｄ Ｉ，Ｒｉｃａｒｄ Ｍ．Ｐｅｃｔｉｎａｓｅ ｉｎ ｐａｐｅｒｍａｋｉｎｇ：ｓｏｌｖｉｎｇ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｐｒｏｂｌｅｍｓ ｉｎ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｐｕｌｐｓ ｂｌｅａｃｈｅｄ ｗｉｔｈ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｅｒｏｘｉｄｅ．Ｅｎｚ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．２０００；２６：１１５−１２３）、動物の飼料（Ｂａｒｒｅｔｏ ｄｅ Ｍｅｎｅｚｅｓ ＴＪ，Ｓａｌｖａ ＪＧ，Ｂａｌｄｉｎｉ ＶＬ，Ｐａｐｉｎｉ ＲＳ，Ｓａｌｅｓ ＡＭ．Ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｏｆ ｃｉｔｒｕｓ ｗａｓｔｅｓ ｂｙ ｓｏｌｉｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８９；２３：１６７−１７１）、亜麻およびその他の植物繊維の浸漬（Ｈｏｏｎｄａｌ ＧＳ，Ｔｉｗａｒｉ ＲＰ，Ｔｉｗａｒｉ Ｒ，Ｄａｈｉｙａ Ｎ，Ｂｅｇ ＱＫ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｅｃｔｉｎａｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：ａ ｒｅｖｉｅｗ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０００；９：４０９−４１８）、コーヒーおよび茶の発酵（Ｇａｒ ＪＧ．Ｔｅａ，ｃｏｆｆｅｅ ａｎｄ ｃｏｃｏａ．Ｉｎ：ｗｏｏｄ ＢＪＢ，ｅｄｉｔｏｒ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｆｏｏｄｓ．１９８５；ｖｏｌ ２．Ｌｏｎｄｏｎ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉ．Ｌｔｄ．ｐｐ：１３３−１５４）、油抽出（Ｓｃｏｔｔ Ｄ．Ｅｎｚｙｍｅｓ，ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ．Ｉｎ：Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｇｒａｙｓｏｎ Ｍ，Ｅｋａｒｔｈ Ｄ ａｎｄ Ｏｔｈｍｅｒ Ｋ（ｅｄｓ），１９７８；Ｗｉｌｅｙ，ＮＹ．ｐｐ：１７３−２２４）、綿繊維のバイオ精錬（Ｓｉｎｇｈ Ｒ，Ｓａｘｅｎａ Ｓ，Ｇｕｐｔａ Ｒ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｅｃｔｉｎｏｌｙｔｉｃ ｅｎｚｙｍｅｓ：Ａ ｒｅｖｉｅｗ．Ｐｒｏｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００５；４０：２９３１−２９４４）、植物靱皮繊維のゴム除去（Ｋａｐｏｏｒ Ｍ，Ｂｅｇ ＱＫ，Ｂｈｕｓｈａｎ Ｂ，Ｓｉｎｇｈ Ｋ，Ｄａｄｉｃｈ ＫＳ，Ｈｏｏｎｄａｌ ＧＳ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｋａｌｉｎｅ ａｎｄ ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｌｅ ｐｏｌｙｇａｌａｃｔｕｒｏｎａｓｅ ｆｒｏｍ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．ＭＧｃｐ−２ ｉｎ ｄｅｇｕｍｍｉｎｇ ｏｆ ｒａｍｉｅ（Ｂｏｅｈｍｅｒｉａ ｎｉｖｅａ） ａｎｄ ｓｕｎｎ ｈｅｍｐ（Ｃｒｏｔｏｌａｒｉａ ｊｕｎｃｉａ） ｂａｓｔ ｆｉｂｅｒｓ．Ｐｒｏｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００１；３６：８０３−８１７）、繊維産業（Ｋａｒｍａｋａｒ ＳＲ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｏｆ ｔｅｘｔｉｌｅｓ．Ｉｎ：Ｔｅｘｔｉｌｅ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｓｅｒｉｅｓ １ｓｔ ｅｄ．，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂ．Ｖ．１９９９；ｐ．１２）、および廃棄物管理（Ｋａｓｈｙａｐ ＤＲ，Ｖｏｈｒａ ＰＫ，Ｃｈｏｐｒａ Ｓ，Ｔｅｗａｒｉ Ｒ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｅｃｔｉｎａｓｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｓｅｃｔｏｒ：ａ ｒｅｖｉｅｗ．Ｂｉｏｒｅｓ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．２００１；７７：２１５−２２７）が挙げられる。ＷＯ ９８／４５３９３は、泥土に対して顕著な界面活性効果を有する、プロトペクチナーゼを含有する界面活性剤組成物を開示している。
これらの酵素は、業界において、個別にまたはカクテル型（混合型）のいずれかで使用される。例えば、食品業界において、これは、ゲル化（ｇｅｌｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）のために必要とされるペクチンエステラーゼなどの個別の酵素として、ならびに、ペクチンエステラーゼと、植物材料の液化のために必要とされるポリガラクツロナーゼなどの異なる酵素の組合せのいずれかとして使用される（Ｈｅｌｄｔ−Ｈａｎｓｅｎ ＨＰ，Ｋｏｆｏｄ ＬＶ，Ｂｕｄｏｌｆｓｅｎ Ｇ，Ｎｉｅｌｓｅｎ ＰＭ，Ｈｕｔｔｅｌ Ｓ，Ｂｌａｄｔ Ｔ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔａｉｌｏｒ ｍａｄｅ ｐｅｃｔｉｎａｓｅｓ．Ｉｎ：Ｖｉｓｓｅｒ Ｊ ａｎｄ Ｖｏｒａｇｅｎ ＡＪＧ （ｅｄｓ），Ｐｅｃｔｉｎ ａｎｄ Ｐｅａｃｔｎａｓｅｓ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１９９６；１４：４６３−４７４）。
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒから得られたこれらのいくつかの酵素のクローニングおよび発現が報告されてきた。ＥＰ ０ ２７８ ３５５は、ペクチンリアーゼ遺伝子のクローニング、その配列、および発現を記載している。ＥＰ ０ ３５３ １８８は、いくつかの他のペクチンリアーゼを加えている。ＥＯ ０ ４２１ ９１９は、２つのポリガラクツロナーゼを開示しており、別のエンド−ポリガラクツロナーゼがＥＰ ０ ３８８ ５９３に開示されている。これらの両方の特許出願は、遺伝子の供給源としてＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒを使用した。ＷＯ ９４／１４９５２は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓから入手可能であるエンド−ポリガラクツロナーゼ活性を有する３つの酵素を記載している。しかし、どの刊行物も、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ由来のペクチン分解酵素をコードしている遺伝子のクローニングに関して報告がされていない。
ヨーロッパ特許公開０ ２７８ ３５５号公報 ヨーロッパ特許公開０ ３５３ １８８号公報 ヨーロッパ特許公開０ ４２１ ９１９号公報 国際特許公開ＷＯ ９４／１４９５２号公報
Ｒｏｕｓｅ Ａ．Ｉｎ：Ｎａｇｙ Ｓ，Ｓｈａｗ Ｐ，Ｖｅｌｄｈｕｉｓ Ｍ ｅｄｓ．Ｃｉｔｒｕｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ Ｉ．Ｗｅｓｔｐｏｒｔ ＣＴ：ＡＶＩ ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．１９７７ Ｌｏｍｂａｒｄ Ｖ，Ｂｅｒｎａｒｄ Ｔ，Ｒａｎｃｕｒｅｌ Ｃ，Ｂｒｕｍｅｒ Ｈ，Ｃｏｕｔｉｎｈｏ ＰＭ，Ｈｅｎｒｉｓｓａｔ Ｂ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２０１０；４３２（３）：４３７−４４４ Ｊｅｎｓｅｎ ＭＨ，Ｏｔｔｅｎ Ｈ，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ Ｕ，Ｂｏｒｃｈｅｒｔ ＴＶ，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ ＬＬ，Ｌａｒｓｅｎ Ｓ，Ｌｅｇｇｉｏ ＬＬ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１０；４０４（１）：１００−１１１ Ｐｏｌｉｚｅｉｉ ＭＬ，Ｊｏｒｇｅ ＪＡ，Ｔｅｒｅｎｚｉ ＨＦ．，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９９１；１３７：１８１５−１８２３ Ｔｏｒｒｅｓ ＥＦ，Ａｇｕｉｌａｒ Ｃ，Ｅｓｑｕｉｖｅｌ ＪＣＣ，Ｇｏｎｚａｌｅｓ ＧＶ．Ｉｎ：Ｅｎｚｙｍｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｎｄｅｙ，Ａ．，Ｗｅｂｂ，Ｃ，Ｓｏｃｃｏｌ，Ｃ．Ｒ．，Ｌａｒｒｏｃｈｅ，Ｃ （Ｅｄｓ），Ａｓｉａｔｅｃｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｅｒｓ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｄｅｌｈｉ，Ｉｎｄｉａ，２００５．ｐｐ．２７３−２９６ Ｒｅｉｄ Ｉ，Ｒｉｃａｒｄ Ｍ．，Ｅｎｚ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．２０００；２６：１１５−１２３ Ｂａｒｒｅｔｏ ｄｅ Ｍｅｎｅｚｅｓ ＴＪ，Ｓａｌｖａ ＪＧ，Ｂａｌｄｉｎｉ ＶＬ，Ｐａｐｉｎｉ ＲＳ，Ｓａｌｅｓ ＡＭ．Ｐｒｏｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８９；２３：１６７−１７１ Ｈｏｏｎｄａｌ ＧＳ，Ｔｉｗａｒｉ ＲＰ，Ｔｉｗａｒｉ Ｒ，Ｄａｈｉｙａ Ｎ，Ｂｅｇ ＯＫ．，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０００；９：４０９−４１８ Ｇａｒ ＪＧ．Ｉｎ：ｗｏｏｄ ＢＪＢ，ｅｄｉｔｏｒ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｆｏｏｄｓ．１９８５；ｖｏｌ ２．Ｌｏｎｄｏｎ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉ．Ｌｔｄ．ｐｐ：１３３−１５４ Ｓｃｏｔｔ Ｄ．Ｉｎ：Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｇｒａｙｓｏｎ Ｍ，Ｅｋａｒｔｈ Ｄ ａｎｄ Ｏｔｈｍｅｒ Ｋ（ｅｄｓ），１９７８；Ｗｉｌｅｙ，ＮＹ．ｐｐ：１７３−２２４ Ｓｉｎｇｈ Ｒ，Ｓａｘｅｎａ Ｓ，Ｇｕｐｔａ Ｒ．，Ｐｒｏｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００５；４０：２９３１−２９４４ Ｋａｐｏｏｒ Ｍ，Ｂｅｇ ＱＫ，Ｂｈｕｓｈａｎ Ｂ，Ｓｉｎｇｈ Ｋ，Ｄａｄｉｃｈ ＫＳ，Ｈｏｏｎｄａｌ ＧＳ．，Ｐｒｏｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００１；３６：８０３−８１７ Ｋａｒｍａｋａｒ ＳＲ．，Ｉｎ：Ｔｅｘｔｉｌｅ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｓｅｒｉｅｓ１ｓｔ ｅｄ．，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂ．Ｖ．１９９９；ｐ．１２ Ｋａｓｈｙａｐ ＤＲ，Ｖｏｈｒａ ＰＫ，Ｃｈｏｐｒａ Ｓ，Ｔｅｗａｒｉ Ｒ．，Ｂｉｏｒｅｓ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．２００１；７７：２１５−２２７ Ｈｅｌｄｔ−Ｈａｎｓｅｎ ＨＰ，Ｋｏｆｏｄ ＬＶ，Ｂｕｄｏｌｆｓｅｎ Ｇ，Ｎｉｅｌｓｅｎ ＰＭ，Ｈｕｔｔｅｌ Ｓ，Ｂｌａｄｔ Ｔ．Ｉｎ：Ｖｉｓｓｅｒ Ｊ ａｎｄ Ｖｏｒａｇｅｎ ＡＪＧ （ｅｄｓ），Ｐｅｃｔｉｎ ａｎｄ Ｐｅａｃｔｎａｓｅｓ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１９９６；１４：４６３−４７４
本発明は、数ある中でも、工業的なプロセスまたは目的において使用できる、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａに由来するペクチン分解酵素の遺伝子およびそれらにコードされるタンパク質を開示するためのゲノミクスアプローチをとる。
数ある中でも、本発明は、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａから導き出せる少なくとも２１個のペクチン分解酵素に関する。本発明はまた、ペクチンの分解における真菌Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａの使用に関する。
本発明の第一の目的は、真菌Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａのペクチン酸リアーゼ（配列番号１、２、４、５、７、８、１０、１１、１３、１４、１６、１７、１９、２０、２２、２３、２５および２６）、ペクチン酸リアーゼＣ（配列番号．２８、２９、３１、３２、３４、３５、３７、３８、４０、４１、４３および４４）、ペクチンエステラーゼ（配列番号．４６、４７、４９、５０、５２、５３、５５および５６）、およびラムノガラクツロナーゼ（配列番号５８、５９、６１および６２）をコードするヌクレオチド配列のセットを開示することである。本発明の各遺伝子について、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）配列は、それぞれのゲノム配列から、予測されるイントロン配列を削除すること、およびエキソン配列を一緒にスプライシングすることによって、手動で導き出された。これらの酵素遺伝子を備えるベクター、発現ベクター、および宿主細胞もまた含まれる。
さらに、本発明は、遺伝子のＯＲＦ配列から推定されるポリペプチド配列を提供する。本発明のポリペプチド配列は、ペクチン酸リアーゼ（配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４および２７）、ペクチン酸リアーゼＣ（配列番号３０、３３、３６、３９、４２および４５）、ペクチンエステラーゼ（配列番号４８、５１、５４および５７）およびラムノガラクツロナーゼ（配列番号６０および６３）の配列に一致する。本発明はまた、上記に記載されたヌクレオチド配列の相補物を備える単離されたポリヌクレオチドに関する。
本発明の別の目的は、価値のある工業製品の製造のためにペクチン分解の調節、転換のために開発／利用される、第一の目的に示された遺伝子および酵素の分子生物学および遺伝子情報を提供することである。
さらに、本発明の目的は、ペクチン分解ポリペプチドのインビトロ産生を容易にすることであり、本発明はまた、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３に示されるような少なくとも７０％の連続するアミノ酸を含有するポリペプチドを発現することが可能である発現構築物も含む。好ましくは、この発現構築物は、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１に示されるような連続するヌクレオチドを有するＤＮＡまたはｃＤＮＡを挿入している。
本発明の別の目的は、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１に示されるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド鋳型を備える組換え発現構築物を開示し、ここで、このポリヌクレオチド鋳型は、ペクチンを分解する酵素を産生するために宿主細胞中で発現可能である。好ましくは、この組換え遺伝子構築物は、ポリヌクレオチド鋳型の発現を増強するために作動可能に連結されているプロモーター領域をさらに備える。
本発明の好ましい実施形態の１つは、感染ジュート植物から単離されたＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａのｍｓ６株である。単離されたポリペプチドもまた、好ましくは、この株から導き出される。
さらに、本発明の目的は、数ある中でも、フルーツジュース、織物製品、パルプおよび紙、コーヒー、茶の製造、ならびに油抽出のために、全世界的な需要に応じるために、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａからペクチン分解酵素を単離するために潜在的に商業的に実行可能なやり方を提供することである。
本発明のさらなる目的は、動物飼料、フルーツジュース、織物製品、パルプおよび紙、コーヒー、茶の加工、および油抽出、靱皮繊維の浸漬／ゴム除去におけるペクチン分解物質を利用することに向けられている。
これらの用途のいずれかまたはすべては、工業的使用および他の使用のために、研究用製品または供給品のいずれかとしての商業化のためにキットに開発できる。これらのキットは、１つ以上の本発明のＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ遺伝子に対応するポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、抗体、および／または他の試薬を備えてもよい。
当業者は、本発明が、目的を実行し、言及されるような結果および利点、ならびにそこに固有であるこれらのものを得るように十分に適合されることを容易に認識する。本明細書に記載される実施形態は、本発明の範囲の限定または制限としては意図されない。
本発明のこれらおよび他の特徴、局面、および利点は、以下の説明および特許請求の範囲を参照すると、より良好に理解されるようになる。
明細書の中に組み込まれかつ明細書の一部を形成する添付の図面は、本発明の実施形態を例証し、そして明細書の記載と一緒に、本発明の原理を説明するために役立つ。
図１は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号１のペクチン酸リアーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図２は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号４のペクチン酸リアーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図３は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号７のペクチン酸リアーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図４は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号１０のペクチン酸リアーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図５は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号１３のペクチン酸リアーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図６は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号１６のペクチン酸リアーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図７は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号１９のペクチン酸リアーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図８は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号２２のペクチン酸リアーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図９は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号２８のペクチン酸リアーゼＣのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１０は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号３１のペクチン酸リアーゼＣのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１１は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号３４のペクチン酸リアーゼＣのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１２は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号３７のペクチン酸リアーゼＣのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１３は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号４０のペクチン酸リアーゼＣのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１４は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号４３のペクチン酸リアーゼＣのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１５は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号４６のペクチンエステラーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１６は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号４９のペクチンエステラーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１７は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号５５のペクチンエステラーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１８は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号５８のラムノガラクツロナーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１９は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号６１のラムノガラクツロナーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。
本明細書に提供される定義および／または方法は、本発明を定義し、本発明の実施において当業者に指針を与える。他に言及されている場合を除いて、用語は、関連分野における当業者による従来的な用法に従って理解される。本明細書に組み込まれるいずれかの特許文献もしくは非特許文献において、または別の箇所で見い出されるいずれかの文献において提供されるいずれかの定義および／または方法に対して、定義および／または方法のいずれかが一致しないことが見い出される程度まで、本願において明確に提供／採用された上記の定義および／または方法は、本明細書で使用されることが理解される。文脈が明確に他のことを示していない限り、単数形の用語「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は複数形の言及を含む。同様に、文脈が明確に他のことを示していない限り、「または（もしくは、あるいは）」という語は「および（ならびに）」を含むことが意図される。従って、「ＡまたはＢを備える」は、Ａ、またはＢ、またはＡおよびＢを含むことを意味する。核酸またはポリペプチドについて与えられる、すべての塩基サイズまたはアミノ酸サイズ、およびすべての分子量または分子質量は、およその値であって、説明のために提供されることがさらに理解される。本明細書に記載されるものと同様または等価な方法および材料が、本開示の実施または試験において使用できるが、適切な方法および材料は以下に記載される。
本発明は、ペクチン分解に関与するＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ遺伝子のヌクレオチド配列を提供する。これらの遺伝子は、食品、動物の飼料、紙、油抽出、織物、排水を含む産業において使用されるか、または産業に対して関心対象であるかのいずれかである、ペクチン分解酵素活性を有するタンパク質をコードする。本発明の遺伝子、それらの同定、特徴付け、修飾、および様々な産業プロセスにおける使用の方法が、本明細書中以下に記載される。
Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａゲノムＤＮＡのヌクレオチド配列は、全ゲノムランダムショットガンＤＮＡ配列決定の試みによって得られた。このゲノムＤＮＡは、感染ジュート（Ｃｏｒｃｈｏｒｕｓ ｓｐｐ．）植物から単離されたＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ ｍｓ６の単離物から調製された。生成されたヌクレオチド配列は、Ｎｅｗｂｌｅｒアセンブラーによってコンティグおよびスキャフォールドを形成するようにアセンブルされた。ヌクレオチド配列は、最初に、推定コード領域、イントロン、およびスプライスジャンクションを同定できる、Ａｕｇｕｓｔｕｓ，Ｇｌｉｍｍｅｒ Ｍ（Ｔｈｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍｄ．）およびＥｖｉｄｅｎｃｅ Ｍｏｄｅｌｅｒ（ＥＶＭ）などのソフトウェアプログラムによって注釈が付けられた。ヌクレオチド配列のさらなる自動および手動の矯正（ｃｕｒａｔｉｏｎ）が、コード領域および他の遺伝子特徴の正確な特徴付けを洗練および確立するために実施された。
ペクチン分解酵素をコードする本発明のゲノム配列は、最初に、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａゲノムＤＮＡのヌクレオチド配列と、他の微生物の既知の酵素遺伝子のヌクレオチド配列との比較によって同定された。これらのＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ遺伝子のヌクレオチド配列、リーディングフレーム、エキソンおよびイントロンの位置、酵素の構造、ならびに、食品および飼料、飲料、織物、および界面活性剤の製造に関与するものなどの様々な産業におけるそれらの潜在的な有用性は不明であった。
Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａからの１４０００を超えるｃＤＮＡが部分的にまたは全体的に配列決定された。これらの中で、ペクチン分解において推定の役割を有する新たな酵素をコードする２１のｃＤＮＡが発見された。
オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）がＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ ｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡライブラリーのクローンの全体的または部分的な配列決定に続いて分析され、さらに、配列分析ソフトウェアを使用することによって、およびデータベース（公的／私的）における既知の配列に対する相同性を決定することによって分析される。
本開示の状況において、本明細書を通して使用される多数の用語は、異なる意味を有することが明確に示されていない限り、示された意味を有する。
「遺伝子」という用語は、本明細書で使用される場合、真菌Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａのゲノム配列、特に、一連の酵素のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列として定義される。この用語は、上流、下流、および／またはイントロンのヌクレオチド配列を備える核酸分子をさらに含むことができる。
「オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）」という用語は、いかなる終止コドンも伴うことなく、アミノ酸をコードする一連のヌクレオチドトリプレットを意味し、トリプレット配列は、特定の生物のために適切なコドン使用頻度情報を使用してタンパク質に翻訳可能である。
「コード配列」または「コード領域」とは、配列が発現されるときに、アミノ酸またはポリペプチドなどの遺伝子産物を産生するために必要な配列情報を有するアミノ酸分子をいう。コード配列は、翻訳領域内に非翻訳配列（例えば、イントロンまたは５’もしくは３’非翻訳領域）を備えてもよく、またはこのような介入する非翻訳配列を欠いてもよい（例えば、ｃＤＮＡにおけるように）。
本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」は、核酸フラグメントなどのヌクレオチド配列である。ポリヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖であるＲＮＡまたはＤＮＡのポリマーであってもよく、これは、任意に、合成、非天然、または変化したヌクレオチド塩基を含有する。ＤＮＡのポリマーの型のポリヌクレオチドは、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡ、またはこれらの混合物の１つ以上のセグメントから構成されてもよい。本発明の単離されたポリヌクレオチドはまた、配列番号１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８、６１、２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９および６２、またはこのような配列の相補物から導き出されてもよい。
「単離された」とは、天然の状態から「人の手によって」変化されたことを意味する。組成物または物質が天然に存在するならば、これは、そのもともとの環境から変化されたか、または取り除かれたか、またはその両方ならば、「単離されている」。例えば、生きている植物または動物の中で天然に存在しているポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離されて」いないが、しかし、その天然の状態の既存の物質から分けられた同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、この用語が本明細書で利用されるように、「単離されている」。
「組換え」という用語は、ポリペプチドまたはタンパク質をいうために本明細書で使用されるとき、ポリペプチドまたはタンパク質が組換え（例えば、微生物または哺乳動物）発現系から誘導されることを意味する。「微生物」とは、細菌または真菌発現系において作られた組換えポリペプチドまたはタンパク質をいう。多くの細菌系、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉにおいて発現されたポリペプチドまたはタンパク質はグリコシル化修飾がなく；真菌中で発現されたポリペプチドまたはタンパク質はグリコシル化される。
「ベクター」という用語は、ヌクレオチド配列からポリペプチドを発現するためのプラスミド、ファージ、コスミド、酵母、またはウイルス、人工複製配列（ＡＲＳ）、または人工染色体をいう。「ベクター」という用語はまた、それが連結されている別の核酸を輸送可能な核酸分子をいうことも意図される。１つの型のベクターは「プラスミド」であり、これは、さらなるＤＮＡセグメントがライゲーションされてもよい環状二本鎖ＤＮＡループをいう。別の型のベクターはウイルスベクターであり、ここでは、さらなるＤＮＡセグメントがウイルスゲノムにライゲーションされてもよい。特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞中で自律的複製が可能である（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム性哺乳動物ベクター）。他のベクターは、宿主細胞への導入の際に宿主細胞のゲノムに組み込むことができ、それによって、宿主ゲノムとともに複製される。さらに、特定のベクターは、それらが作動可能に連結されている遺伝子の発現を方向付けることが可能である。このようなベクターは、本明細書では、「組換え発現ベクター」（または単純に「発現ベクター」）といわれる。一般的に、組換えＤＮＡ技術における有用な発現ベクターは、しばしば、プラスミド型である。本明細書において、「プラスミド」と「ベクター」は交換可能に使用されてもよい。プラスミドは最も一般的に使用されるベクターの型であるからである。しかし、本発明は、等価な機能を果たす、ウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ関連ウイルス）などのこのような他の型の発現ベクターを含むことを意図する。
「発現ベクター」という用語は、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを備える線状または環状ＤＮＡ分子として本明細書では定義され、これは、その発現を提供するさらなるヌクレオチドに作動可能に連結されている。
「発現構築物」という用語は、遺伝子発現において調節的な役割を有する遺伝子エレメントのアセンブリー、例えば、プロモーターもしくはエンハンサー、または、ＲＮＡ、ｍＲＮＡに転写され、およびタンパク質に翻訳され、そしてプロモーターまたは適切な転写開始配列および終結配列に作動可能に連結されているコード配列を備えることができる。
「作動可能に連結されている」という用語は、本明細書では、制御配列がポリペプチドのコード配列の発現を方向付けるように、制御配列がポリヌクレオチド配列のコード配列に対して適切な位置に配置されている構成を意味する。
「宿主細胞」という用語は、本明細書で使用される場合、本発明のポリヌクレオチドを備える核酸構築物または発現ベクターを用いる形質転換、トランスフェクション、形質導入などに対して感受性がある任意の細胞型を含む。
「組換え宿主細胞」という用語は、一般的に、組換え転写単位を備え、そして組換え転写単位中のＤＮＡセグメントまたは合成遺伝子によってコードされる異種ポリペプチドまたはタンパク質、およびＲＮＡを発現する、培養細胞を意味する。この細胞は原核生物または真核生物であり得る。
「ポリペプチド」は、本明細書で使用される場合、ペプチド結合によって一緒に結合され、そして１００アミノ酸長よりも長い配列を有する、アミノ酸の単一の直鎖である。
「プロモーター」という用語は、本明細書で使用される場合、下流の遺伝子の転写を方向付けるように機能する核酸配列をいう。プロモーターは、一般的に、標的遺伝子が発現される宿主細胞に対して適切である。プロモーターは、他の転写および翻訳調節核酸配列（「制御配列」とも呼ばれる）と一緒に、所定の配列を発現するために必要である。一般的に、転写および翻訳調節配列には、プロモーター配列、リボソーム結合部位、転写開始配列および終結配列、翻訳開始配列および終結配列、ならびにエンハンサー配列またはアクチベーター配列が挙げられるがこれらに限定されない。
「インビトロ」という用語は、本明細書で使用される場合、一般的に、生きている生物の外部の人工的な環境で起こる生物学的反応をいい、これは、通常は、より詳細なまたはより便利な分析が実施されることを可能にするために、それらの通常の生物学的状況から単離されている生物の成分を使用して実験室内で実施される。
「％相同性」という用語は、本明細書では、「％同一性」という用語と交換可能に使用され、通常は、配列アラインメントプログラムを使用してアラインするときに、本発明のポリペプチドのいずれか１つをコードする核酸配列または本発明のポリペプチドのアミノ酸配列の間の核酸配列またはアミノ酸配列の同一性のレベルをいう。
例えば、本明細書で使用される場合、８０％相同性とは、規定のアルゴリズムによって決定された８０％配列同一性と同じものを意味し、従って、所定の配列のホモログは所定の配列の長さにわたって、８０％配列同一性よりも高い。
例示的なレベルの配列同一性には、所定の配列、例えば、本明細書に記載されるような、本発明のポリペプチドのいずれか１つについてのコード配列に対して８０、８５、９０、９５、９８％以上の配列同一性が挙げられるがこれに限定されない。
２つの配列間の同一性を決定するために使用できる例示的なコンピュータプログラムには、ＢＬＡＳＴプログラムのパッケージソフト、例えば、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴで公的にアクセス可能なＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＸ、およびＴＢＬＡＳＴＸ、ＢＬＡＳＴＰおよびＴＢＬＡＳＴＮが挙げられるがこれらに限定されない。
配列検索は、典型的には、ＧｅｎＢａｎｋ ＤＮＡ配列および他の公的なデータベース中の核酸配列と比較して、所定の核酸配列を評価するときに、ＢＬＡＳＴＮプログラムを使用して実行される。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、ＧｅｎＢａｎｋタンパク質配列および他の公的なデータベース中のアミノ酸配列に対して、すべてのリーディングフレームで翻訳された核酸配列を検索するために好ましい。
２つ以上の配列間の「％同一性」を決定するための選択された配列の好ましいアラインメントは、例えば、ＣＬＵＳＴＡＬ−Ｗプログラムを使用して実施される。
「プライマー」という用語は、本明細書で使用される場合、標的核酸配列に結合可能で、核酸合成を開始可能であるオリゴヌクレオチドである。増幅ヌクレオチドは、本明細書で定義される場合、好ましくは、１０〜５０ヌクレオチド長、最も好ましくは１５〜２５ヌクレオチド長である。本発明の増幅オリゴヌクレオチドは、化学合成されてもよい。
ヌクレオチド配列を備える核酸をいうために本明細書を通して使用される略号は、従来的な１文字略号である。従って、核酸中に含まれるとき、天然に存在するコードヌクレオチドは以下のように略号で表記される：アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）およびウラシル（Ｕ）。また、他に特定されない限り、本明細書に提示される核酸配列は５’→３’方向である。
本明細書で使用される場合、「相補性」という用語およびその派生語は、ＡがＴまたはＵと対合し、ＣがＧと対合するという周知の規則による核酸の対合に関して使用される。相補性は「部分的」または「完全」であり得る。部分的相補性において、ある核酸塩基のみが塩基対合規則に従って一致し；一方、完全または全体的相補性においては、すべての塩基が対合規則に従って一致している。核酸鎖間の相補性の程度は、当該分野において周知であるように、核酸鎖間のハイブリダイゼーションの効率および強度に顕著な影響を与える可能性がある。これは、核酸間の結合に依存する検出方法においては特に可能性がある。
本発明のＤＮＡ配列は、配列決定反応によって生成され、誤って同定されたヌクレオチド、挿入、および／または欠失として存在するかもしれないマイナーなエラーを含有するかもしれない。しかし、このようなマイナーなエラーは、存在する場合、産業的に興味が持たれる酵素をコードするＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａの遺伝子としての配列の同定を妨害するはずはなく、本発明の範囲内に具体的に含まれる。
産業的に興味が持たれるＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａの酵素をコードする遺伝子のゲノムヌクレオチド配列およびコード配列が本発明に包含される。従って、１つの実施形態において、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９および６２、および／またはそのいずれかの混合物／組合せが提供され、これらの各々が、同定された遺伝子のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）のヌクレオチド配列を同定する。別の実施形態において、配列番号１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１、および／またはそのいずれかの混合物／組合せによって同定された遺伝子のゲノム配列が提供される。
本明細書で使用される場合、「遺伝子」とは、（ｉ）配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１に示されるヌクレオチド配列および／またはそのフラグメントの少なくとも１つを備えおよび／またはこれらからなる遺伝子；（ｉｉ）配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３に示されるアミノ酸配列をコードする任意のヌクレオチド配列および／またはそのフラグメント；（ｉｉｉ）中程度のストリンジェント条件下で、例えば、（約）４５℃などの適切な／有効なレベルの温度での適切な／有効な量の６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でのフィルター結合ＤＮＡに対するハイブリダイゼーション、続いて（約）５０〜６５℃などの適切な／有効なレベルの温度での、０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳなどの適切な／有効な量のＳＤＳ中での１回以上の洗浄の条件下で、または、高ストリンジェント条件下で、例えば、（約）４５℃などの適切な／有効なレベルの温度での、６×ＳＳＣなどの適切な／有効な量のＳＳＣ中でのフィルター結合核酸に対するハイブリダイゼーション、続いて（約）６８℃などの適切な／有効なレベルの温度で、０．１×ＳＳＣ／０．２％ ＳＤＳなどの適切な／有効な量のＳＤＳ中での１回以上の洗浄の条件下で、または当業者に明白である他のハイブリダイゼーションの条件下で（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ，Ｂｒｅｎｔ Ｒ，Ｋｉｎｇｓｔｏｎ ＲＥ，Ｍｏｏｒｅ ＤＤ，Ｓｅｉｄｍａｎ ＪＧ，Ｓｍｉｔｈ ＪＡ，Ｓｔｒｕｈｌ Ｋ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９４； Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと）、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１に示されるヌクレオチド配列セットの相補物にハイブリダイズする任意のヌクレオチド配列をいう。好ましくは、本明細書に開示されるＤＮＡ配列の相補物にハイブリダイズするポリヌクレオチドは、遺伝子産物、例えば、酵素遺伝子、またはそのフラグメントの１つによってコードされる遺伝子産物に機能的に等価である遺伝子産物をコードする。
上記に記載されるように、遺伝子配列は、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３のアミノ酸配列をコードする縮重ヌクレオチド配列のみならず、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ以外の生物中で翻訳されたときに、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３のアミノ酸配列、またはそのフラグメントの１つを備えるポリペプチドを生じる縮重ヌクレオチド配列もまた含む。当業者は、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａまたは他の生物の中で遺伝子配列を使用するときに、適切なコドンをいかにして選択するか、または配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１のヌクレオチド配列をいかにして修飾するかを知っている。例えば、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓにおいて、コドンＣＴＧはロイシン残基の代わりにセリン残基をコードしている。
本発明のヌクレオチド配列は、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａゲノムの遺伝子マップ、物理的マップ、または配列マップの開発を補助するために、遺伝子マーカーおよび／または配列マーカーとして使用できる。本発明のヌクレオチド配列および対応する遺伝子産物もまた、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａの存在を検出するために使用できる。当該分野において周知であるハイブリダイゼーションおよび抗体ベースの方法が、本発明のヌクレオチド配列および対応する遺伝子産物の存在および濃度を決定するために使用できる。
ヌクレオチド配列はまた、酵素が感染の間に宿主の侵入において役割を果たすかもしれないという事実があるならば、治療効果を有するかもしれない酵素の阻害剤を同定するためにも使用できる。
別の実施形態において、上記に記載されたＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａのヌクレオチド配列に加えて、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａおよび他の真菌種に存在し得る本発明の遺伝子のホモログまたはオルソログもまた含まれる。特に好ましいものは、糸状菌におけるホモログまたはオルソログである。これらの酵素遺伝子は、当該分野において周知である分子生物学的技術によって同定および単離することができる。
「真菌」という用語は、本明細書で使用される場合、ｐｈｙｌａ Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ、Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔａ、Ｃｈｙｔｒｉｄｉｏｍｙｃｏｔａ、およびＺｙｇｏｍｙｃｏｔａ（Ｈａｗｋｓｗｏｒｔｈ ＤＬ，Ｋｉｒｋ ＰＭ，Ｓｕｔｔｏｎ ＢＣ，Ｐｅｇｌｅｒ ＤＮ．ＡｉｎｓｗｏｒｔｈおよびＢｉｓｂｙ’ｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｕｎｇｉ（８ｔｈ Ｅｄ．）．１９９５；ＣＡＢ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｗａｌｌｉｎｇｆｏｒｄ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ．６１６ｐ）および酵母を含む。Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａの代表的なグループには、例えば、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓが含まれる。Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔａの代表的なグループには、マッシュルーム、さび菌類、および黒穂菌が含まれる。Ｃｈｙｔｒｉｄｉｏｍｙｃｏｔａの代表的なグループには、Ａｌｌｏｍｙｃｅｓ、Ｂｌａｓｔｏｃｌａｄｉｅｌｌａ、Ｃｏｅｌｏｍｏｍｙｃｅｓが含まれる。Ｚｙｇｏｍｙｃｏｔａの代表的なグループには、例えば、ＲｈｉｚｏｐｕｓおよびＭｕｃｏｒが含まれる。
「糸状菌」という用語は、すべての糸状型の真菌を含む。糸状菌は、キチン、セルロース、グルカン、キトサン、マンナン、および他の複合ポリサッカリドから構成される栄養菌糸によって特徴付けられる。栄養増殖は菌糸伸長によって行われ、炭素異化は偏性好気性である。
従って、本発明はまた、遺伝子のポリヌクレオチドにハイブリダイズ可能である真菌ヌクレオチド配列を提供する。１つの実施形態において、本発明は、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１、および／またはそのいずれかの混合物／組合せを備え、および／またはこれらからなる群より選択されるヌクレオチド配列に対して、少なくとも５０％同一であるヌクレオチド配列を備え、および／またはこれらからなる単離された核酸を含む。
別の実施形態において、本発明は、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１、および／またはそのいずれかの混合物／組合せを備え、および／またはこれらからなる群より選択されるヌクレオチド配列からなり、および／またはこれらを備える第２の核酸に対して、中程度のストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする真菌ヌクレオチド配列を備える単離された核酸を含む。
なお別の実施形態において、本発明は、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３を備え、および／またはこれらからなる群より選択されるアミノ酸配列に対して、アミノ酸配列が少なくとも５０％同一であるポリペプチドをコードする真菌ヌクレオチド配列を備える単離された核酸分子を含む。
本発明のヌクレオチド配列は、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１に示されるヌクレオチド配列に対して、少なくとも４０％同一である真菌ヌクレオチド配列をなおさらに含む。
相同遺伝子を単離するために、上記に記載されるＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ遺伝子配列は、標識することができ、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａを含むがこれに限定されない関心対象の動物から得られたｍＲＮＡから構築されたｃＤＮＡをスクリーニングするために使用できる。従って、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１のヌクレオチド配列のいずれか１つからなる、好ましくは検出可能に標識されている核酸プローブが含められる。標識された配列が導き出された生物の型とは異なる生物からｃＤＮＡライブラリーが導き出されたときには、ハイブリダイゼーション条件は、好ましくはより低ストリンジェンシーであり得る。ｃＤＮＡスクリーニングはまた、同じ種における選択的スプライシングを受けた転写物から導き出されたクローンを同定することもできる。あるいは、標識プローブは、適切なストリンジェント条件を使用して、再度、関心対象の生物から導き出されたゲノムライブラリーをスクリーニングするために使用できる。低ストリンジェンシー条件は当業者に周知であり、ライブラリーおよび標識配列が導き出された特定の生物に依存して予測可能に変動する（詳細については、Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ，Ｒｕｓｓｅｌｌ ＤＷ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｔｈｉｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．；およびＡｕｓｕｂｅｌ ＦＭ，Ｂｒｅｎｔ Ｒ，Ｋｉｎｇｓｔｏｎ ＲＥ，Ｍｏｏｒｅ ＤＤ，Ｓｅｉｄｍａｎ ＪＧ，Ｓｍｉｔｈ ＪＡ，Ｓｔｒｕｈｌ Ｋ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９４；Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。
さらに、相同遺伝子配列は、関心対象の遺伝子の中のアミノ酸配列に基づいて設計された２つの縮重オリゴヌクレオチドプライマープールを使用するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を実施することによって単離できる。反応のための鋳型は、関心対象の生物から調製されたｍＲＮＡの逆転写によって得られたｃＤＮＡであり得る。ＰＣＲ産物は、増幅された配列が相同酵素遺伝子配列の配列を表すことを確実にするために、サブクローニングおよび配列決定することができる。
次いで、ＰＣＲフラグメントは、当業者に周知である様々な方法によって全長ｃＤＮＡクローンを単離するために使用できる。あるいは、標識フラグメントは、ゲノムライブラリーをスクリーニングするために使用できる。
本発明の別の実施形態において、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ遺伝子配列は、特に望ましい化学的および／または物理的特性を示す修飾酵素または新規な酵素を開発する際に使用できる。Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａおよび他の糸状菌の酵素の間で、アミノ酸配列の明白な関連性／類似性により、別の真菌の酵素の構造は、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ酵素の構造を予測するために使用でき、そして有用かつ優れた特性のためにＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ酵素の合理的修飾を補助できる。本発明によって提供される配列はまた、要求されるプロセスにおいて酵素がより良好に性能を発揮することを可能にする特徴を有する新規な酵素の合理的修飾または設計のための準備材料として使用できる。
遺伝子のヌクレオチド配列は、（Ａｒｎｏｌｄ ＦＨ．Ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｆｏｒ ｕｎｕｓａｌ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９３；４：４５０−４５５）に記載された方法などであるがこれらに限定されないランダムおよび部位特異的変異誘発技術または指向性分子進化技術、オリゴヌクレオチド指向性変異誘発（Ｒｅｉｄｈａａｒ−Ｏｌｓｏｎ ＪＦ，Ｓａｕｅｒ ＲＴ．Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ ｃａｓｓｅｔｔｅ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ ａｓ ａ ｐｒｏｂｅ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８８；２４１：５３−５７）、化学変異誘発（Ｅｃｋｅｒｔ ＫＡ，Ｄｒｉｎｋｗａｔｅｒ ＮＲ．ｒｅｃＡ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｎｄ ｒｅｃＡ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｎ−ｅｔｈｙｌ−Ｎ−ｎｉｔｒｏｓｏｕｒｅａ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ ａｔ ａ ｐｌａｓｍｉｄ−ｅｎｃｏｄｅｄ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｇｅｎｅ ｉｎ Ｅ．ｃｏｌｉ．Ｍｕｔａｔ Ｒｅｓ．１９８７；１７８：１−１０）、部位特異的変異誘発（Ｋｕｎｋｅｌ ＴＡ．Ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｓｉｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８５；８２：４８８−４９２；Ｏｌｉｐｈａｎｔ Ａ，Ｎｕｓｓｂａｕｍ ＡＬ，Ｓｔｒｕｈｌ Ｋ．Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｒａｎｄｏｍ−ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ．Ｇｅｎｅ １９８６；４４ １７７−１８３）、エラープローンＰＣＲ（Ｃａｄｗｅｌｌ ＲＣ，Ｊｏｙｃｅ ＧＦ．Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅｓ ｂｙ ＰＣＲ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ．ＰＣＲ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｐｐｌ．１９９２；２：２８−３３）、カセット変異誘発（Ｓｔａｕｓｓ Ｈｊ，Ｄａｖｉｅｓ Ｈ，Ｓａｄｏｖｎｉｋｏｖａ Ｅ，Ｃｈａｉｎ Ｂ，Ｈｏｒｏｗｉｔｚ Ｎ，Ｓｉｎｃｌａｉｒ Ｃ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｗｉｔｈ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ：ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｎｄｉｄａｔｅ Ｔ−ｃｅｌｌ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍａ ｖｉｒｕｓ．ＰＮＡＳ １９９２； ８９（１７）：７８７１−７８７５）、Ｓｔｅｍｍｅｒ ＷＰ．ＤＮＡ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ ｂｙ ｒａｎｄｏｍ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅａｓｓｅｍｂｌｙ：ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ．ＰＮＡＳ １９９４；９１（２２）：１０７４７−１０７５１および米国特許第５，６０５，７９３号；同第６，１１７，６７９号；および同第６，１３２，９７０号において記載されたようなＤＮＡシャッフリング法、ならびに同第５，９３９，２５０号、同第５，９６５，４０８号、同第６，１７１，８２０号に記載されたような方法によって変化させることができる。ヌクレオチド配列中の変異はクローン中の遺伝子を配列決定することによって決定できる。
１つの実施形態において、配列番号２に図示された７４７ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号３におけるような２４８アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約２６ｋＤと計算された。配列番号２のＳＭＡＲＴ分析を通して、これは配列中にＰｆａｍペクチン酸リアーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼは細胞外酵素であり、この酵素はペクチン酸の脱離的切断を触媒し、それらの非還元末端に４−デオキシ−α−Ｄ−グルコ−４−エンウロノシル基を有するオリゴサッカリドを産生する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
好ましくは、配列番号５に図示された７３５ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号６におけるような２４４アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約２５ｋＤと計算された。配列番号５のＳＭＡＲＴ分析を通して、これは配列中にＰｆａｍペクチン酸リアーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼは細胞外酵素であり、この酵素はペクチン酸の脱離的切断を触媒し、それらの非還元末端に４−デオキシ−α−Ｄ−グルコ−４−エンウロノシル基を有するオリゴサッカリドを産生する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
同様に、配列番号８に図示された７５６ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号９におけるような２５１アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約２６ｋＤと計算された。配列番号８のＳＭＡＲＴ分析を通して、これは配列中にＰｆａｍペクチン酸リアーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼは細胞外酵素であり、この酵素はペクチン酸の脱離的切断を触媒し、それらの非還元末端に４−デオキシ−α−Ｄ−グルコ−４−エンウロノシル基を有するオリゴサッカリドを産生する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
別の局面において、配列番号１１に図示された７７１ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号１２におけるような２５６アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約２７ｋＤと計算された。配列番号１１のＳＭＡＲＴ分析を通して、これは配列中にＰｆａｍペクチン酸リアーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼは細胞外酵素であり、この酵素はペクチン酸の脱離的切断を触媒し、それらの非還元末端に４−デオキシ−α−Ｄ−グルコ−４−エンウロノシル基を有するオリゴサッカリドを産生する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
さらに別の局面において、配列番号１４に図示された７５０ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号１５におけるような２４９アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約２６ｋＤと計算された。配列番号１４のＳＭＡＲＴ分析を通して、これは配列中にＰｆａｍペクチン酸リアーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼは細胞外酵素であり、この酵素はペクチン酸の脱離的切断を触媒し、それらの非還元末端に４−デオキシ−α−Ｄ−グルコ−４−エンウロノシル基を有するオリゴサッカリドを産生する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
なおさらなる局面では、配列番号１７に図示された７５６ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号１８におけるような２５１アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約２６ｋＤと計算された。配列番号１７のＳＭＡＲＴ分析を通して、これは配列中にＰｆａｍペクチン酸リアーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼは細胞外酵素であり、この酵素はペクチン酸の脱離的切断を触媒し、それらの非還元末端に４−デオキシ−α−Ｄ−グルコ−４−エンウロノシル基を有するオリゴサッカリドを産生する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
なお別の局面では、配列番号２０に図示された８９４ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号２１におけるような２９７アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約３０ｋＤと計算された。配列番号２０のＳＭＡＲＴ分析を通して、これは配列中にＰｆａｍペクチン酸リアーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼは細胞外酵素であり、この酵素はペクチン酸の脱離的切断を触媒し、それらの非還元末端に４−デオキシ−α−Ｄ−グルコ−４−エンウロノシル基を有するオリゴサッカリドを産生する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
なお別の局面では、配列番号２３に図示された７４７ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号２４におけるような２４８アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約２６ｋＤと計算された。配列番号２３のＳＭＡＲＴ分析を通して、これは配列中にＰｆａｍペクチン酸リアーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼは細胞外酵素であり、この酵素はペクチン酸の脱離的切断を触媒し、それらの非還元末端に４−デオキシ−α−Ｄ−グルコ−４−エンウロノシル基を有するオリゴサッカリドを産生する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
なお別の局面では、配列番号２６に図示された１７０７ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号２７におけるような５６８アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約６４ｋＤと計算された。配列番号２６のＳＭＡＲＴ分析を通して、これは配列中にＰｆａｍペクチン酸リアーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼは細胞外酵素であり、この酵素はペクチン酸の脱離的切断を触媒し、それらの非還元末端に４−デオキシ−α−Ｄ−グルコ−４−エンウロノシル基を有するオリゴサッカリドを産生する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
別の局面において、配列番号２９に図示された１３１４ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号３０におけるような４３７アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼＣタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約４６ｋＤと計算された。配列番号２９の配列分析を通して、これは配列中にペクチン酸リアーゼＣドメインモチーフの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼＣは細胞外酵素であり、この酵素は、植物細胞壁の主要成分であるポリガラクツロン酸を切断する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
別の局面において、配列番号３２に図示された９７２ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号３３におけるような３２３アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼＣタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約３４ｋＤと計算された。配列番号３２の配列分析を通して、これは配列中にペクチン酸リアーゼＣドメインモチーフの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼＣは細胞外酵素であり、この酵素は、植物細胞壁の主要成分であるポリガラクツロン酸を切断する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
別の局面において、配列番号３５に図示された９６６ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号３６におけるような３２１アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼＣタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約３３ｋＤと計算された。配列番号３５の配列分析を通して、これは配列中にペクチン酸リアーゼＣドメインモチーフの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼＣは細胞外酵素であり、この酵素は、植物細胞壁の主要成分であるポリガラクツロン酸を切断する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
別の局面において、配列番号３８に図示された１５３６ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号３９におけるような５１１アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼＣタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約５６ｋＤと計算された。配列番号３８の配列分析を通して、これは配列中にペクチン酸リアーゼＣドメインモチーフの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼＣは細胞外酵素であり、この酵素は、植物細胞壁の主要成分であるポリガラクツロン酸を切断する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
別の局面において、配列番号４１に図示された１１３７ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号４２におけるような３７８アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼＣタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約３９ｋＤと計算された。配列番号４１の配列分析を通して、これは配列中にペクチン酸リアーゼＣドメインモチーフの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼＣは細胞外酵素であり、この酵素は、植物細胞壁の主要成分であるポリガラクツロン酸を切断する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
別の局面において、配列番号４４に図示された１１３７ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号４５におけるような３７８アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼＣタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約３９ｋＤと計算された。配列番号４４の配列分析を通して、これは配列中にペクチン酸リアーゼＣドメインモチーフの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼＣは細胞外酵素であり、この酵素は、植物細胞壁の主要成分であるポリガラクツロン酸を切断する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
別の局面において、配列番号４７に図示された１１８２ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号４８におけるような３９３アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチンエステラーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約４２ｋＤと計算された。配列番号４７のＳＭＡＲＴ配列分析を通して、これは配列中にペクチンエステラーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチンエステラーゼは細胞外酵素であり、この酵素は、ペクチン性物質のガラクツロナン骨格のメチルエスエル結合の脱エステル化を触媒して、酸性ペクチンとメタノールを遊離する。次いで、得られるペクチンはポリガラクツロナーゼおよびリアーゼによる作用を受ける。
別の局面において、配列番号５０に図示された９７５ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号５１におけるような３２４アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチンエステラーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約３５ｋＤと計算された。配列番号５０のＳＭＡＲＴ配列分析を通して、これは配列中にペクチンエステラーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチンエステラーゼは細胞外酵素であり、この酵素は、ペクチン性物質のガラクツロナン骨格のメチルエスエル結合の脱エステル化を触媒して、酸性ペクチンとメタノールを遊離する。次いで、得られるペクチンはポリガラクツロナーゼおよびリアーゼによる作用を受ける。
別の局面において、配列番号５３に図示された５８９５ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号５４におけるような１９６４アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチンエステラーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約２０６ｋＤと計算された。配列番号５３のＳＭＡＲＴ配列分析を通して、これは配列中に複数のペクチンエステラーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチンエステラーゼは細胞外酵素であり、この酵素は、ペクチン性物質のガラクツロナン骨格のメチルエスエル結合の脱エステル化を触媒して、酸性ペクチンとメタノールを遊離する。次いで、得られるペクチンはポリガラクツロナーゼおよびリアーゼによる作用を受ける。
別の局面において、配列番号５６に図示された９８１ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号５７におけるような３２６アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチンエステラーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約３４ｋＤと計算された。配列番号５６のＳＭＡＲＴ配列分析を通して、これは配列中にペクチンエステラーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチンエステラーゼは細胞外酵素であり、この酵素は、ペクチン性物質のガラクツロナン骨格のメチルエスエル結合の脱エステル化を触媒して、酸性ペクチンとメタノールを遊離する。次いで、得られるペクチンはポリガラクツロナーゼおよびリアーゼによる作用を受ける。
別の局面において、配列番号５９に図示された１５９３ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号６０におけるような５３０アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ラムノガラクツロナーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約５７ｋＤと計算された。配列番号５９のＳＭＡＲＴ配列分析を通して、これは配列中にラムノガラクツロナーゼドメインの存在を明らかにする。ラムノガラクツロナーゼは、植物細胞壁ポリサッカリド、ペクチンの主要成分であるラムノガラクツロナン−Ｉの骨格におけるＬ−ラムノースとＤ−ガラクツロン酸の間のα−１，４グリコシド結合を切断する。
さらに別の局面において、配列番号６２に図示された１６０５ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号６３におけるような５３４アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ラムノガラクツロナーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約５７ｋＤと計算された。配列番号６２のＳＭＡＲＴ配列分析を通して、これは配列中にラムノガラクツロナーゼドメインの存在を明らかにする。ラムノガラクツロナーゼは、植物細胞壁ポリサッカリド、ペクチンの主要成分であるラムノガラクツロナン−Ｉの骨格におけるＬ−ラムノースとＤ−ガラクツロン酸の間のα−１，４グリコシド結合を切断する。
本発明はまた、（ａ）前述の遺伝子の配列および／またはそれらの相補物のいずれかを備えるヌクレオチド配列を備え、および／またはこれらからなる核酸ベクター；（ｂ）コード配列の発現を方向付ける調節エレメントと作動可能に連結されている前述の遺伝子のコード配列のいずれかからなり、および／またはこれらを備えるヌクレオチド配列を備える発現構築物；ならびに（ｃ）宿主細胞中でのコード配列の発現を方向付ける調節エレメントと作動可能に連結されているコード領域を含む、前述の遺伝子の配列のいずれかを備え、および／またはこれらからなる組換え宿主細胞にも関する。
組換えＤＮＡを利用してポリヌクレオチド配列を修飾するための技術は当該分野において周知である。様々な配列が、制限、相補性制限部位の結合およびライゲーション、突出末端を埋めることによるブラント末端作製およびブラントライゲーションなどの公知の技術に従って結合されてもよい。ポリリンカーおよびアダプターが利用されてもよく、適切な場合、ＤＮＡベクターと発現カセットのアセンブリーの容易さを可能にするために、公知の技術によって導入または除去されてもよい。クローニングおよび遺伝子操作のために、多数のベクターが利用可能である。通常、クローニングはＥ．ｃｏｌｉの中で実施できる。
本発明の別の実施形態において、本発明の酵素遺伝子配列を備えるベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、糸状菌細胞、酵母細胞、およびバシラス細胞を含むがこれらに限定されない、１種以上の宿主細胞の中でのベクターの移入、維持、および増殖を可能にする複製機能をさらに備えてもよい。ベクターは、自己複製を保証するためのいかなる手段も含有してもよい。あるいは、ベクターは、宿主細胞に導入されるときに、ゲノムに組み込まれ、かつそれが組み込まれた染色体と一緒に複製されるものであってもよい。ベクターの選択は、典型的には、ベクターが導入される宿主細胞とのベクターの適合性に依存する。
本発明の発現構築物は、プロモーター、本発明の遺伝子配列をコードするヌクレオチド配列、転写終結配列、および選択マーカー（任意）を備えるか、またはこれらからなる。この発現構築物を宿主細胞に導入するために当該分野において公知である任意の方法が使用できる。真菌細胞は、それ自体公知の様式で、プロトプラスト形成、プロトプラストの形質転換、および細胞壁の再生を包含するプロセスによって形質転換されてもよい。ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓおよびＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ宿主細胞の形質転換のための適切な手順は、ＥＰ ２３８ ０２３およびＹｅｌｔｏｎ ＭＭ，Ｈａｍｅｓ ＪＥ，Ｔｉｍｂｅｒｌａｋｅ ＷＥ．Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ａ ｔｒｐＣ ｐｌａｓｍｉｄ．ＰＮＡＳ，１９８４；８１（５）：１４７０−１４７４に記載されている。Ｆｕｓａｒｉｕｍ種を形質転換するために適切な方法は、Ｍａｌａｒｄｉｅｒ Ｌ，Ｄａｂｏｕｓｓｉ ＭＪ，Ｊｕｌｉｅｎ Ｊ，Ｒｏｕｓｓｅｌ Ｆ，Ｓｃａｚｚｏｃｃｈｉｏ Ｃ，Ｂｒｙｇｏｏ Ｙ．Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｎｉｔｒａｔｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｇｅｎｅ（ｎｉａＤ）ｏｆ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｕｓｅ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ．Ｇｅｎｅ １９８９；７８：１４７−１５６、およびＷＯ ９６／００７８７によって記載されている。酵母は、Ｂｅｃｋｅｒ ＤＭ，Ｇｕａｒｅｎｔｅ Ｌ．Ｈｉｇｈ−ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｙｅａｓｔ ｂｙ ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ．Ｉｎ：Ａｂｅｌｓｏｎ ＪＮ ａｎｄ Ｓｉｍｏｎ ＭＩ（ｅｄｓ），Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｙｅａｓｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１９９１；１９４：１８２−１８７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｉｔｏ Ｈ，Ｆｕｋｕｄａ Ｙ，Ｍｕｒａｔａ Ｋ，Ｋｉｍｕｒａ Ａ．Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔａｃｔ ｙｅａｓｔ ｃｅｌｌｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｌｋａｌｉ ｃａｔｉｏｎｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１９８３；１５３：１６３−１６８ およびＨｉｎｎｅｎ Ａ，Ｈｉｃｋｓ ＪＢ，Ｆｉｎｋ ＧＲ．Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｙｅａｓｔ．ＰＮＡＳ，１９７８；７５（４）：１９２９−１９３３によって記載されている手順を使用して形質転換されてもよい。
産業的応用のために、本発明の酵素は真菌細胞によって産生される。好ましくは、発現宿主細胞は、大スケール工業的発酵において使用されてきた糸状菌細胞である。適切な細胞株または宿主系は、正確な修飾および発現される外来性タンパク質の処理を保証するように選択できる。好ましくは、それらの内因性タンパク質の効率的な分泌が可能である発現宿主が選択される。分泌された酵素は培養培地中で分解されるかもしれないので、宿主細胞はまた、細胞外プロテアーゼ活性が欠けていることについて選択されてもよい。
本発明はまた、本発明のポリペプチドを産生するための方法に関し、この方法は、（ｉ）ポリペプチドの産生のために助けとなる条件下で、野生型でポリペプチドを産生することが可能である細胞を培養する工程；および（ｉｉ）ポリペプチドを回収する工程を備える。好ましい局面においては、細胞はＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａである。
本発明の別の実施形態はまた、本発明のポリペプチドを産生するための方法に関し、この方法は、（ｉ）ポリペプチドの産生のために助けとなる条件下で、宿主細胞を培養する工程であって、ここで、この宿主細胞は、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８または６１のヌクレオチド配列を備え、このヌクレオチド配列は、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０または６３の成熟ポリペプチドを備え、またはこれらのポリペプチドからなるポリペプチドをコードしている、工程；および（ｉｉ）ポリペプチドを回収する工程を備える。
本発明の別の実施形態において、発現宿主細胞または形質転換体は、当該分野において周知である方法を使用して、増殖およびタンパク質の発現のために適切な栄養培地中で培養される。例えば、細胞は、適切な培地中で、かつポリペプチドが発現されおよび／または単離されることを可能にする条件下で実施される、実験室用または工業用ファーメンター中での振盪フラスコ培養、および小スケールまたは大スケール発酵（連続、バッチ、流加培養、または固相発酵）によって培養されてもよい。培養は、当該分野において公知の手順（Ｍｏｒｅ Ｇｅｎｅ Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｆｕｎｇｉ．Ｂｅｎｎｅｔｔ Ｊ Ｗ，Ｌａｓｕｒｅ Ｌ，（ｅｄｓ）．１９９１；Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ所収を参照のこと）を使用して、炭素源および窒素源および無機塩を備えた適切な栄養培地中で行われる。もしポリペプチドが栄養培地中に分泌されるならば、ポリペプチドは培地から直接回収できる。もしポリペプチドが培地中に分泌されないならば、これは細胞溶解物から回収できる。
ポリペプチドは、ポリペプチドについて特異的である当該分野において公知である方法を使用して検出されてもよい。これらの検出方法は、特異的抗体の使用、酵素生成物の形成、または酵素基質の消失を含んでもよい。酵素アッセイは、ポリペプチドの活性を決定するために使用されてもよい。
産生したポリペプチドは当該分野において公知である方法を使用して回収されてもよい。ポリペプチドは、濾過、遠心分離、抽出、スプレードライ、エバポレーション、および沈殿、またはこれらの組合せを含むがこれらに限定されない従来的な手順によって、栄養培地から様々な方法で回収されてもよい。
本発明のポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドを得るために、クロマトグラフィー方法（イオン交換、アフィニティー、疎水性、クロマトフォーカシング、およびサイズ排除など）、電気泳動手順（等電点電気泳動など）、溶解度の差（硫酸アンモニウム沈殿など）、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、または抽出を含むがこれらに限定されない当該分野において周知である様々な手順によって精製されてもよい（詳細については、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｈｉｇｈ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｊａｎｓｏｎ ＪＣ，Ｒｙｄｅｎ Ｌ．（ｅｄｓ）．１９８９； ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと）。
本発明はまた、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９および６２に示される遺伝子配列によってコードされている遺伝子産物（例えば、ＲＮＡまたはタンパク質）に関する。本発明の酵素遺伝子産物はまた、配列番号１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１に示されるような遺伝子のゲノム配列によってコードされているＲＮＡまたはタンパク質も含む。本発明の酵素は、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３を備え、および／またはこれらからなる群より選択されるアミノ酸配列を備える。
本発明の酵素は、ペクチン酸リアーゼ、ペクチン酸リアーゼＣ，ペクチンエステラーゼおよびラムノガラクツロナーゼを備え、および／またはこれらからなる群より選択される酵素の活性の少なくとも１つを示す。本発明の酵素遺伝子産物は、当該分野において周知である技術を使用して、例えば、合成技術によって、または組換えＤＮＡ技術の方法によって、容易に産生できる（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ ＴＥ．Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，１９８３； Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ．を参照のこと）。
別の実施形態において、本発明の方法および組成物はまた、機能的に等価な遺伝子産物を表すタンパク質およびポリペプチドも含む。このような機能的に等価な遺伝子産物には、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドの天然の改変体が含まれるがこれらに限定されない。
このような等価な遺伝子産物は、例えば、アミノ酸配列の中のアミノ酸残基の欠失、付加、または置換を含有することができ、これは、上記に記載された酵素遺伝子配列によってコードされるが、しかし、サイレント変化を生じ、従って、機能的に等価な産物を産生する。アミノ酸置換は、関与する残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性、および／または両親媒的性質の類似性に基づいて行うことができる。
上記の遺伝子産物コード配列の他の修飾は、例えば、選択された宿主細胞中でのスケールアップなどのために、発現のためにより良好に適合されているポリペプチドを生成するために行うことができる。例えば、システイン残基は、ジスルフィド架橋を排除するために、欠失でき、または別のアミノ酸での置換ができる。
本発明の別の実施形態は、固体型の本発明の酵素をさらに含む。固体型の酵素または酵素顆粒は、例えば、固体界面活性剤および動物飼料の中で使用できる。固形型酵素を作製する方法は当該分野において周知であり、小球化（ワックス性材料中でのスプレードライ）、押し出し、凝集、または顆粒化（不活性材料と結合剤での希釈）などであるがこれらに限定されない。混合粉末、錠剤などの型での本発明の固形型酵素を備える固体酵素組成物が意図される。
本開示は、添付の特許請求の範囲に含有されるように、前述の記載を同様に含む。本発明は、一定の程度の独自性を伴って、その好ましい型で記載されてきたが、本開示の好ましい型は例示としてのみ行われてきたこと、ならびに、部品の組合せおよび配置の構築の詳細における多くの変化は、本発明の範囲および特許請求の範囲から逸脱することなく用いてもよいことが理解される。
様々な参考文献が本明細書で引用されており、これらの開示は、それらの全体が参照により組み込まれる。
実施例
以下の実施例は、本発明をさらに例証するために意図され、本明細書に記載された特定の実施形態に本発明を限定ことは全く意図されていない。
実施例１ Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａからのゲノムＤＮＡの単離
ゲノムＤＮＡは、Ｋｉｅｓｅｒ Ｔ，Ｂｉｂｂ ＭＪ，Ｂｕｔｔｎｅｒ ＭＪ，Ｃｈａｔｅｒ ＫＦ，Ｈｏｐｗｏｏｄ ＤＡ．Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２０００；Ｊｏｈｎ Ｉｎｎｅｓ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｗｉｃｈ，ＵＫ，ｐｐ．１６２−２０８によって記載された手順を使用して、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ菌株ｍｓ６から単離された。手短に述べると、菌糸体はストックペトリプレートから接種ループを使用してこすりとり、コニカルフラスコ中の液体ポテトデキストロース培地に接種された。このコニカルフラスコは、振盪なしで、３０℃にて約７２時間インキュベートされた。菌糸体は、空気−培地界面の表面上で増殖する。菌糸体は滅菌ようじを使用して収集され、滅菌ペーパータオル間に置かれ、そしていくつかが生理学的溶液（リン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ ７．０）で洗浄された。菌糸体は過度の液体を除去するために搾り取られ、収集された菌糸体は３０分間、風乾された。半乾燥菌糸体は液体窒素中に置かれ、すりつぶされて微細粉末を生じ、最終的に、Ｋｉｅｓｅｒ Ｔ，Ｂｉｂｂ ＭＪ，Ｂｕｔｔｎｅｒ ＭＪ，Ｃｈａｔｅｒ ＫＦ，Ｈｏｐｗｏｏｄ ＤＡ．Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２０００；Ｊｏｈｎ Ｉｎｎｅｓ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｗｉｃｈ，ＵＫ，ｐｐ．１６２−２０８に記載されたプロトコールに従ってＤＮＡを単離した。
実施例２ プライマーの設計および合成
本研究において使用されるプライマーは、完全ＯＲＦを用いて手動で配列を選択すること、または類似の遺伝子が他の植物から首尾よく単離されているデータベースを使用することのいずれかによって、手動で矯正されたトランスクリプトームから、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ ｍｓ６のゲノム配列から予測される「遺伝子モデル」から設計された。トランスクリプトームから得られたヌクレオチド配列の比較バイオインフォマティクス分析は、関連遺伝子のホモログを同定するため、および遺伝子の適切な同定のために、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴＰ、ＲＰＳ−ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴＸおよびＰＳＩ−ＢＬＡＳＴを使用して実行された。複数の配列が「遺伝子プール」から見い出されるときは常に、ヌクレオチド配列アラインメントはｃｌｕｓｔａｌＷバージョン１．８２を使用して実施された。次いで、アラインメントが編集された。遺伝子特異的プライマー（フォワードとリバースの両方）が、手動で、またはＰｒｉｍｅｒ ３ ｐｌｕｓ ｔｏｏｌを通して選択され、プライマーはカスタム合成された。
本研究において使用されたすべてのオリゴヌクレオチドは、供給業者によって合成され、ＨＰＬＣ精製され、そしてＩｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ＩＤＴ）から入手された。１００ｐｍｏｌのストック溶液が、オートクレーブされたｄｄＨ２Ｏ中で調製され、使用のためのアリコートで、−２０℃で保存された。
実施例３ Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ ｍｓ６からのペクチン酸リアーゼ、ペクチン酸リアーゼＣ、ペクチンエステラーゼ、およびラムノガラクツロナーゼの増幅、クローニング、および配列決定
総ＲＮＡは、Ｃｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉ Ｐ ａｎｄ Ｓａｃｃｈｉ Ｎ，Ｓｉｎｇｌｅ−ｓｔｅｐ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ＲＮＡ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｂｙ ａｃｉｄ ｇｕａｎｉｄｉｎｉｕｍ ｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ−ｐｈｅｎｏｌ−ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ（Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ １９８７，．１６２：１５６−１５９）によって以前に記載されたように、液体培地で増殖された３日めの菌糸体から単離された。ＲＮＡの品質および完全性は、標準的な手順に従って、アガロースゲル電気泳動によってチェックされ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｎａｎｏ Ｄｒｏｐ ２０００を使用して定量された。ｃＤＮＡ第１鎖は、製造業者の説明書に従って、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ逆転写酵素（Ｉｎｖｔｒｏｇｅｎ）を使用して合成された。遺伝子は、遺伝子特異的プライマーを使用するＰＣＲによってｃＤＮＡから増幅された。ＰＣＲ反応（５０μＬ）は、１μＬのｃＤＮＡ、２０ｐモルの各プライマー、５μＬの１０×ＰＣＲ緩衝液、５μＬの２．５ｍＭ ｄＮＴＰミックス、および１．０単位のＰｆｕＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼを含有した。ＰＣＲは、Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）中で、以下の条件を使用して実行された：９５℃、５分間の初期変性、続いて、９５℃３０秒間の変性と、５９〜６１℃で３０秒間のアニーリングと、７２℃で標的遺伝子の長さに依存して１〜２．０分間の伸長とからなる３５サイクル、そして７２℃で７分間の最終伸長。ＰＣＲ産物は、１×ＴＡＥ緩衝液を使用して１％アガロースゲルによって分析され、アンプリコンは、製造業者の説明書に従って、ＱＩＡＧＥＮゲル抽出キットを使用して、ゲルから溶出された。精製されたＰＣＲ産物は、ｐＣＲ（登録商標）８／ＧＷ／ＴＯＰＯ（登録商標）ＴＡクローニングキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にライゲーションされ、コンピテントＥ．ｃｏｌｉ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に形質転換された。プラスミドは、製造業者の説明書に従って、ＱＩＡｐｒｉｐ Ｓｐｉｎ Ｍｉｎｉｐｒｅｐキット（ＱＩＡＧＥＮ）を使用して推定のコロニーから単離された。インサートの存在は遺伝子特異的プライマーを使用することによってチェックされ、陽性プラスミドが配列決定に供された。
実施例４ 配列の分析
ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列はＢＬＡＳＴＮプログラムおよびＢＬＡＳＴＰプログラムによってそれぞれ分析された。他の植物から報告されている配列はＣｌｕｓｔａｌＷを用いてアラインされた。系統発生分析はネイバージョイニング（ＮＪ）を使用して実行された。
配列番号：１
長さ：１０４７（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
GAAGAGTATATAGAGGTGGCCACGACTGCACTGTTGAACTCATCACCGACCCACAATCGCTTTCTTTCTGCCCACTCTCGTTCACAACACAGATCTCTGATCTACCACATTCGTTCTTACCGAGGATCAAAAATTCCTCCCATCTCCACAATGCAGTACAAGTACACCGTCCTTGCCGCCACTATGGCCGCCGTTGCCTTCGCCCAGCAGAACTTGATTGGCATTCCTACCGGTACTAAAGCTAAGCCTTTCACCCAGCCCGAGACCATTACCTTCTTCGACGGTAAAATGATGGAATACGGCCGCGGCAAGCCCTGTGGCACCGACGATGACAAGGGTGACCTTGAGGCCGTCTTCATCATCAAGCCCGGCGGCACGCTGCAGAACGCCATCATCGGCGCCGACTCCCTTGAGGGCGTGCACTGCGAGGGCGCCTGCACCATCAAGAACGTCTGGTTCAAGGACGTGTGCGAAGACGCCATCACCCTCAAGGGCAACGGCCCGTACCTGATCACCGGTGGCGGTGCGCAGCACGCCAAGGACAAGGTCGTCCAGCACAACGGCAAGGGCACCGTGACCATCTCCGATTACAAGATCGGCGCCGTCGGTAAGCTGTACCGCAGCTGTGGCAACTGCAGCAACAACGGCGGCCCCCGCAACGTCGTCCTCGACCGCATCTCTTCCTTCGGCCCCGGCACCACGTCCGACCTTGTCGGCATCAACTCCAACTACAACGACGTCGCCACCATCAGTGGCGTCTGCGGCCCTGTCAAGAACATGTGTCAGGAGTTCACCGGCATCGAGAAGGACGGCAACAAGGAGAGCCCCCACAGGGAGCCCCCGATTGGTGCTTGCAAGGGCCCCCAGGGCCAGCTCAAGACGGCTCCCGCTTGCTAAGCGCCTCACGGAATTATCATGGGTGTGCAGTTACGGGAAAGGAAATCGATATCGACCTCCCTATTGGTAACATCAATCTGGCTCCAAATTGCATCATCCGCCACTGGTCGGCCATGACAGGACAGAGCGAAGTCAAAAGTTTCGGTGTAC
配列番号：２
長さ：７４７
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（７４７）
atgcagtacaagtacaccgtccttgccgccactatggccgccgttgccttcgcccagcag
M Q Y K Y T V L A A T M A A V A F A Q Q
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N L I G I P T G T K A K P F T Q P E T I
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P G T T S D L V G I N S N Y N D V A T I
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G N K E S P H R E P P I G A C K G P Q G
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Q L K T A P A C -
配列番号：３
長さ：２４８
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MQYKYTVLAATMAAVAFAQQNLIGIPTGTKAKPFTQPETITFFDGKMMEYGRGKPCGTDDDKGDLEAVFIIKPGGTLQNAIIGADSLEGVHCEGACTIKNVWFKDVCEDAITLKGNGPYLITGGGAQHAKDKVVQHNGKGTVTISDYKIGAVGKLYRSCGNCSNNGGPRNVVLDRISSFGPGTTSDLVGINSNYNDVATISGVCGPVKNMCQEFTGIEKDGNKESPHREPPIGACKGPQGQLKTAPAC*
配列番号：４
長さ：１１６７（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
CTACCACGAATCGGAATTAAACGACGAATCTCCTGGTGAAGACTATAAAAGGCAGACAACGGCGTCGACAGTAAAGACCATCGCAATCCAACAGTCCAGTTCCTCCTCAAGTCTCTCACTCCCATCCTCCACTTTCCAATCACTTCCAACATGAAGTTCATCTACGCCGCTATCACCGCCACCGTGGCTGGCCTTGCCTCTGCGCAGTCCCTGACCATCCCCACCCGCTCCGGCAGCAAGGTCGTCCTCTCCGCGCCCAGTACCATCTCCGGCTCGCAAGACTTTGGTAACAAGGAGTTCGACCGCGGAATCCCCTGCGACTCGGACGATGACACTGGCAGCTCCAGCGCCGTCTTCATCCTCAAGAACGGCGCCAGCATCTCCAACGTCATCATTGGTACCGACGCGCTCGAGGGCGTCCACTGCGAGGGTGCCTGCACCCTGACCAACGTCTGGTTCCGTGACGTCTGCGAGGGTGAGCTAAATCCACAACATACCATCAAACACTCAAGTAGTGCACACGAATGCTAATGGGAAAATCCAGACGCCATCTCCGCGCTCGGCACCGGCAATGTCCTCATCCAGGGCGGCGGTGCGCAGAACGCCAAGGACAAGGTCGTCCAGCACAACGGCCGCGGCACCGTCACCATCAAGAACTACACCGTCGTCAACGCCGGCAAGCTGTACCGCAGCTGCGGCGACTGCACCAACAACGGCGGCCCCCGCAACGTCGTCGTGGACAACGTCCGCGTCAACGGCATGACCTCTGACCTCGTCGGCATCAACTCCAACTACGGTGACAGTAAGTCGGCAAAAGATACTTCAAATCGTTGGAGGAACACTCAATACTGACTGTCGATTCCAGCTGCTACCATCAGCAACTCTTGCGGCGTCTCCAAGAAGGTCTGCCAGGAGTACAAGGGCGTCACCAAGGGCAACGGCGACAGCGAGAAGGTCTCCACCACTGCCAACTGCAAGGGTGCTCAGGGTACTCTGTCTAAGCTTCCCACTTGCTAGACAACCTAAAAGCAAAACCAAACTAGAGCTTGGGCACGGATCACTCGCGTTGGATGTGGTCCGTGGAATCCTTGGTCAGTGCTCAATCGCCTGCTTCGAGTGGGAAACGGCCGTCTCAATTGATACCGGGCGAGTGTCTGCGCATGGATG
配列番号：５
長さ：７３５
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（７３５）
atgaagttcatctacgccgctatcaccgccaccgtggctggccttgcctctgcgcagtcc
M K F I Y A A I T A T V A G L A S A Q S
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L P T C -
配列番号：６
長さ：２４４
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MKFIYAAITATVAGLASAQSLTIPTRSGSKVVLSAPSTISGSQDFGNKEFDRGIPCDSDDDTGSSSAVFILKNGASISNVIIGTDALEGVHCEGACTLTNVWFRDVCEDAISALGTGNVLIQGGGAQNAKDKVVQHNGRGTVTIKNYTVVNAGKLYRSCGDCTNNGGPRNVVVDNVRVNGMTSDLVGINSNYGDTATISNSCGVSKKVCQEYKGVTKGNGDSEKVSTTANCKGAQGTLSKLPTC*
配列番号：７
長さ：１１１０（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
CAGCGGTATATAAATGCCCTGGTACCCTGCCCCAAAATGCCTTCTTCACCACCACAGTCCTTCGTTTCAATCGTTCAGCACATTCACTCTTTCATTCACACTCACTAACCGATCTGCGATCGTGTTCTTTGCCTTCCACTACCAGACACAATGTTCTCCAAGCTTTTCCTGCTTCCCCTCCTGGCGGCTTCCGCCCTGGCTGCTCCTGCCGACGACACTTTCGGCTACGAGCTCGTTCGCCGCGCGAACTTCCCCATTCCTGCCTCCAAGGGCAACGTCAAGCTCAGCGCTGCCAAGTCCGTGTCCGGCACCTTCGATGGTGGCATGAAGACCTACGGCCGTGGTGTCAAGTGCACCGGTCAGGCCGAGGGTGGTGACAAGGACGCCGTCTTCATCCTCGAGAACGGTGCTACCCTCAAGAACGCCATCATTGGTACCGACCAGATCGAGGGCGTCCACTGCAAGGGCTCCTGCACCATCGAAAACGTCTGGTGGGCCGGTGTCTGCGAGGACGCGCTCTCCCTGAAGGGTGACGGTTCCGCCAAGGTCATCGGCGGCGGCGCTACTGGCGCTGAAGACAAGGTACGTACGCCTCTGATACGCCTTCGCTCAGATTGCTGACCAGATCTGGTACAGGTCATCCAGCACAACGGCGTTGGCTCCGTCTCGATTGATGGCTTCACTGTTGCCGACTTCGGCAAGCTCTACCGCTCGTGCGGAAACTGCAAGAAGATGGGCAAGAGAACCGTCACCATCAAGAACGTGAAGGCTAGCAACGGAAAGCTTTTGGCTGGCATCAACTCCAACTACGGCGACACTGCTACCATCACCGGCACCTGCGCTACCTCCGTCAAGAAGGTCTGCACCGAGTTCAAGGGCAACAACAGCGGCAAGGAGCCCACCGAGATCAGCTCCGGCCCCAGCAACGCCTGCAAGTACTCCTCCCTCAAGGCCTGCTAGGGCCTGCTAGACGGTTGCTCAACAAACAAACATGGCATTTGCCGCGTGAGCCCGGGACCTTTCCGGGCTCGGGAGAAGAAAGTGGATGGCATTCTATTCTTGTATCGACTTCTAGTACTAGAGCATCTTCTATACCTCTAATTTACTGTG
配列番号：８
長さ：７５６
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（７５６）
atgttctccaagcttttcctgcttcccctcctggcggcttccgccctggctgctcctgcc
M F S K L F L L P L L A A S A L A A P A
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D D T F G Y E L V R R A N F P I P A S K
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F I L E N G A T L K N A I I G T D Q I E
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配列番号：９
長さ：２５１
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MFSKLFLLPLLAASALAAPADDTFGYELVRRANFPIPASKGNVKLSAAKSVSGTFDGGMKTYGRGVKCTGQAEGGDKDAVFILENGATLKNAIIGTDQIEGVHCKGSCTIENVWWAGVCEDALSLKGDGSAKVIGGGATGAEDKVIQHNGVGSVSIDGFTVADFGKLYRSCGNCKKMGKRTVTIKNVKASNGKLLAGINSNYGDTATITGTCATSVKKVCTEFKGNNSGKEPTEISSGPSNACKYSSLKAC*
配列番号：１０
長さ：１１２７（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
CCGCTCCTCTGTGCGTTGTTGAACCTTGCTGTTTGTAGGTATAAAGCCCCCCCGTCATTGCTGAGGACGTGTATGGACAGGATCCCTCAAACAGATTGTCTTCTACATCTCAGCGCATTAAGAACCCCATAAATACCAAGAGTTACAAACATGCGTTCTACAAATCTGCTCGTCCTCCTCGCAACCTCCCTCAGCCTGGTCGCAGCGAGCCCGTTGGATGCGCCGACCAAAGTGATGGGCAAGCGGTTCGCCACCAATGTTCTACCCGCATCATCTGGACATGTTGTCCTCCCCTCAGCAACCACTGTGAGCACTTTTGACGGCGGAATGAAGAAGTACGACCGTGGTACCTCTTGCACTGGTCAGTCCGAAGGGGGGGATGCGGACGCTGTCTTCCTCGTTCAGTCCGGAGGCACCCTCAAGAATGTCATCATTGGTGCGGACCAATCTGAAGGTGTCCACTGTCTCGGCCCGTGCACGATCCAGAACGTGTGGTGGGAGGCCGTCTGCGAGGGTGAGAGCCAGACGCTTCGCGTTGTAAAGGGGCGAAATGCTGACCTCAAGACCCAGACGCCTTGACCATCAAACAAACTTCTGGGACCTCCTACGTCGTTGGCGGCGGTGCTTTTGGCGCGTCAGACAAAATTATCCAGCACAACGGAGGCGGTACCGTCTCGATCAAGGACTTCTACGCCCAAGATTTCGGCAAAGTTTACCGCAGCTGCGGCAATTGCGGCACTCAGTACAAACGCACCGTCACCATGTCTGGGATTTGGGCCGTTAATGGTGATCTCCTTGCCGGCGTTAACTCCAATTACGGTGATACCGCGACCATTTCCGGCACTTGTGCAGACAACGTGGACAACATCTGCGCCTGGTACGAAGGAAACGATGATGGCGATGAGCCCACCAAGTTGGGCACTGGCATCAGCTCTTACTGTGTCTATACCGCCAATGGTGTCGATGACTGCCCTTGAGTTGAACATTGGCTTCTATTTGCCACGACACTATGATCGTGTTGCGGCTCTATCGCTGTTGTGTCCGGTTGGTGAGGGCACCCGTACATATGTGGAATGGAGGTCACGTGGTGGATAGCATGTACATATTCTTGCCTGTTATGCCTACAC
配列番号：１１
長さ：７７１
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（７７１）
atgcgttctacaaatctgctcgtcctcctcgcaacctccctcagcctggtcgcagcgagc
M R S T N L L V L L A T S L S L V A A S
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P L D A P T K V M G K R F A T N V L P A
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K K Y D R G T S C T G Q S E G G D A D A
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V F L V Q S G G T L K N V I I G A D Q S
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I S S Y C V Y T A N G V D D C P -
配列番号：１２
長さ：２５６
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MRSTNLLVLLATSLSLVAASPLDAPTKVMGKRFATNVLPASSGHVVLPSATTVSTFDGGMKKYDRGTSCTGQSEGGDADAVFLVQSGGTLKNVIIGADQSEGVHCLGPCTIQNVWWEAVCEDALTIKQTSGTSYVVGGGAFGASDKIIQHNGGGTVSIKDFYAQDFGKVYRSCGNCGTQYKRTVTMSGIWAVNGDLLAGVNSNYGDTATISGTCADNVDNICAWYEGNDDGDEPTKLGTGISSYCVYTANGVDDCP*
配列番号：１３
長さ：１１６４（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
AGTGACATATAAGTCCTCTGTTCTGCCATCGGAAAATGCTTCTCATCACCAACATTCTCTTCCTTCTTTCCTCACCACCACTTCCCCTCTTTCAAACAATTACCGGATAGATCTGTGATCATCCCCTACTTTCGTTTAACAACATACAAAATGCAGTCCAAGATCGTTCTCGGCCTTTCTCTCCTCGCCGCCACCGGCATGGCGGCTCCCTCCGAGCCCCTCCGCGTCCGCGCCACCCTCCCCATCCCCTCCTCCAAGGGCTCTGTCACCTACGATGAGGTCAAGTCCATCACCGGCACTTTCGACGGTGGCATGAAGACCTACGGCCGTGGTGTTTCCTGCACTGGCCAGAAGGAGGGTGGCAACAAGGACGCCGTCTTCCAGCTTGAGGACGGTGCTACCCTCAAGAACGTCATCATTGGCGAGGACCAGATCGAGGGTATCCACTGCATGGGCAGCTGCACCCTGGAGAACGTCTGGTGGAGCGCCGTCTGCGAGGGTTTGTCTTCTTCCATCCACTGAAGCACTTCACAGCTAACGTCATCTCAGACGCTCTTACCTTCAAGGGTGACGGTGACGCCAAGGTCATCGGCGGCGGTGCCCAGGGCGCCGACGACAAGGTCCTCCAGCACAACGGTGTCGGCGATGTGACCATCGACGGCTTCACCGTTGTCGATTTCGGCAAGCTGTATCGCTCTTGCGGCAGTAAGTTCCCCCCGGCTTCTGCCCACCTCCATCCCTCATTCACCTGCTCACACACGTGTTCCAGACTGCAAGCAGAACGGCGGCACCCGCAACGTCAACATCTCCAACGTCAAGGCCTACAACGGCAAGGTCCTCACCGGCATCAACTCCAACTACGGCGACGTCGCCACCTTCAAGGACACCTGCGCCTCTTCCGTCAAGGACATCTGCGTCGAGTACAAGGGTACCAACAACAACGACGAGGAGCCCTCCAAGATCGGCTCCGGTCCTTCCGACAACTGCGTCTACTCCGACATCCCCTCTTGCTAGACGGCTCGCCAACGGTCGCTTGGGCTGGCTTTCGCGGATGCCCATTGTGAATAATCCGCTTGTTTCTTGTATGTAATTATTTTAAAGGCAAGAAGACCATTTAAATCAATAAATAGAGACGGGGCTAGACCTCGCTTGTACTACGCACAC
配列番号：１４
長さ：７５０
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（７５０）
atgcagtccaagatcgttctcggcctttctctcctcgccgccaccggcatggcggctccc
M Q S K I V L G L S L L A A T G M A A P
tccgagcccctccgcgtccgcgccaccctccccatcccctcctccaagggctctgtcacc
S E P L R V R A T L P I P S S K G S V T
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Y D E V K S I T G T F D G G M K T Y G R
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G V S C T G Q K E G G N K D A V F Q L E
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D G A T L K N V I I G E D Q I E G I H C
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M G S C T L E N V W W S A V C E D A L T
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K G T N N N D E E P S K I G S G P S D N
tgcgtctactccgacatcccctcttgctag
C V Y S D I P S C -
配列番号：１５
長さ：２４９
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MQSKIVLGLSLLAATGMAAPSEPLRVRATLPIPSSKGSVTYDEVKSITGTFDGGMKTYGRGVSCTGQKEGGNKDAVFQLEDGATLKNVIIGEDQIEGIHCMGSCTLENVWWSAVCEDALTFKGDGDAKVIGGGAQGADDKVLQHNGVGDVTIDGFTVVDFGKLYRSCGNCKQNGGTRNVNISNVKAYNGKVLTGINSNYGDVATFKDTCASSVKDICVEYKGTNNNDEEPSKIGSGPSDNCVYSDIPSC*
配列番号：１６
長さ：１２３８（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
CTATAAAGATGGAGACCAGCCAGCTTCTAGAGGCTTTTCCCTCCAGGCAAGCATCCTCTCTCCGGCCATCACTTTCATTCTTTCGCATTCTTCCACTCTTTTGTCCAACTCCGACCCGAACAGATCTGTGATCGTTCACTACACTACACAATGTTGACCAAGACTCTTCTTCCCCTCCTCGCCATCTCTGGCGCCGTCTCTGCCGTCAAGACCAAGACCTTCGGCAAGAACCTCGTCCGCCGTGCGGACTTCCCTATCCCTGAATCCCAGGGTTCCGTCACCTTTGACGCCGCCGAGGAGGTCGATGGCGAGTACGACGGTGGCTACAAGACGTACGGCCGTGGTGTTTCTTGCACTGGCCAGGAGGAGGGTGGCGACTCTGACGCCGTCTTCATCCTGAAGGACGGTGCTTCCCTCAAGAACGCCATCATCGGCTCTGACCAGATTGAGGGTGTCCACTGCGAGGGCTCCTGCACTCTTGAGAACGTTTGGTGGGAGGCCGTCTGCGAGGACGCTCTGTCCTTCAAGGGTGACGGTGATGCCACCGTCACTGGCGGTGGTGCAACTGGTGCTGAGGACAAAGTCCTCCAGCAAAACGGTATTGGCTCCATCACCGTCGATGGCTTCACCGTTGTGGACTTCGGCAAGCTGTACCGCTCTTGCGGTAACTGCGACGAGATGGGCCAGCGCACTGTACGTCAATGCTATCGCTCATTCTGTAGGGCAGAGAGTGCTGACATGGCTGTGCGACTTAGATCACCCTCAAGAACGTCAAGGCCTACTCCGGCAAGAAGCTTGTCGGCATCAACTCCAACTACGGTGACAGTGCGTCATGTTCCTTTAGGCTTTCAACCCTTGAGCCATGTGCTAATAGCATCCTCAGCTGCCACCATCACCGACACTTGCGCGACCGACGTCTCTGACATTTGCACGGAGTACGTAGTCACTCGGACGATGGGCCTCAGGAACGAAGACACTAACATAATTATCTTTACAGGTACGAAGGAAACGATACCGGAGACGAACCTGAAGAGATCAGCTCCGGCCCCTCTGATGCCTGCATTTACAGCGACGTTCCGGAGTGCTAGACGCACAGCTCGAACATGCCGCCTCAAAGCAAGCATTCTGATGGAGGGCCAGGGGGTGGGAAGGGATTTAGAGCCTCCGAAAAGGTGGAAGTGGGTTTAGGACTTCGTTGTATAATATAAACTTGTTTCCGAAAATAAGAACCATCCTGC
配列番号：１７
長さ：７５６
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（７５６）
atgttgaccaagactcttcttcccctcctcgccatctctggcgccgtctctgccgtcaag
M L T K T L L P L L A I S G A V S A V K
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T K T F G K N L V R R A D F P I P E S Q
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G S V T F D A A E E V D G E Y D G G Y K
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T Y G R G V S C T G Q E E G G D S D A V
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F I L K D G A S L K N A I I G S D Q I E
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G V H C E G S C T L E N V W W E A V C E
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D A L S F K G D G D A T V T G G G A T G
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A E D K V L Q Q N G I G S I T V D G F T
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V V D F G K L Y R S C G N C D E M G Q R
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T I T L K N V K A Y S G K K L V G I N S
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N Y G D T A T I T D T C A T D V S D I C
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T E Y E G N D T G D E P E E I S S G P S
gatgcctgcatttacagcgacgttccggagtgctag
D A C I Y S D V P E C -
配列番号：１８
長さ：２５１
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MLTKTLLPLLAISGAVSAVKTKTFGKNLVRRADFPIPESQGSVTFDAAEEVDGEYDGGYKTYGRGVSCTGQEEGGDSDAVFILKDGASLKNAIIGSDQIEGVHCEGSCTLENVWWEAVCEDALSFKGDGDATVTGGGATGAEDKVLQQNGIGSITVDGFTVVDFGKLYRSCGNCDEMGQRTITLKNVKAYSGKKLVGINSNYGDTATITDTCATDVSDICTEYEGNDTGDEPEEISSGPSDACIYSDVPEC*
配列番号：１９
長さ：１２４５（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
GGTTCACCTCATCAACTCGCTTCTTCATTCGTTCCTTGCTGTGCAAGACACCATCCAGACGGACATTCCATTACAACGGTCTTTGATAGCCAATCCAACTTTGTCTACTCCCTGCCTCTCCATCCTACCCTACCAATAAGCCCATCCAAAATGCAGTACAGCATCCGCTCGCTCGCCTTCGGCCTCGCCGCCCTGGCCGTCTCCACCGACGCTTTCATGGTTCCCCGTGACCCTAGCAAGGGCTGGGGCTTCCCCAACGCCAACAACGCTCGCGTTGCTGCTGCCGCCGCCTCCACTCCTGTCCAGACCCCCGGCAACACCCCTACCACTCCCGTGGCCACCCCTGGTGTCACTGGCGGCGCCACTGCCGCCGCTGGCTTCCCCGCCTCGTCCGGCACCAGCCAGCTCAGCGCCCCCATGACCGTCACCGGCAGCTTCGACGGTGGCATGAAGGCCTTCGGCCGCGGTGTCTCCTGCACTGGCCAGGCTGAGGGTGGCGACAGCGACGCTGTCTTCATGATCGAGGAGGGCGGTACTCTCTCCAACGTCATCATCGCCGCCGATCAGATCGAGGGTGTCCACTGCTTCGGTTCCTGCACTCTCAAGAACGTCTGGTGGGTCGCCGTCTGCGAGGACGCTTTCACCATCAAGGAGCAGGGCGCCTCTGGCACTACCCACATCATCGGCGGTGGTGCTCAGGGCGCCGAAGACAAGGTTCTCCAGCACAACGGCGGCGGCACTCTCGCTGTCTCTGGCTTCCTCGCCAAGGACTTCGGTAAGCTCTACCGCAGCTGCGGCAACTGCGACGAGATGCCCGAGCGCCACGTTACCATCGACGGCGTTACCGCTGAGTCTGGTGACATCCTGGTCGGCATCAACTCCAACATGGGCGACAGTAAGTAACTCCTGATTTTGCAAGCGATGAGGCAATGCTAACAATGCGCAGCTGCTACCATCACCAACACCTGCGCCACCGGCGTCGAGACCATCTGCCAGGAGTTCAACGGTGTCACGGACGGCAGCGAGCCCGAGGCTGCCGGCAGCGGCCCTAGCACTGCTTGCAAGTACACTGCCGCTGACGCCCAGGCCTGCTAAGCACATCCCTTTCTTGATTGACCAGTAAAAGTTCGACGGCCACACGGTTGGGTAATGCAGGGATTGGCAAAATGTCCGTCCGGCATAATTAGCACTTCTTTGATGTAGATATTGGGCCGGGTGTCCACAATGTATAACTCTGACATGTCA
配列番号：２０
長さ：８９４
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（８９４）
atgcagtacagcatccgctcgctcgccttcggcctcgccgccctggccgtctccaccgac
M Q Y S I R S L A F G L A A L A V S T D
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A F M V P R D P S K G W G F P N A N N A
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P V A T P G V T G G A T A A A G F P A S
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S G T S Q L S A P M T V T G S F D G G M
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K A F G R G V S C T G Q A E G G D S D A
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V F M I E E G G T L S N V I I A A D Q I
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G A Q G A E D K V L Q H N G G G T L A V
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S G F L A K D F G K L Y R S C G N C D E
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M P E R H V T I D G V T A E S G D I L V
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G I N S N M G D T A T I T N T C A T G V
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E T I C Q E F N G V T D G S E P E A A G
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S G P S T A C K Y T A A D A Q A C -
配列番号：２１
長さ：２９７
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MQYSIRSLAFGLAALAVSTDAFMVPRDPSKGWGFPNANNARVAAAAASTPVQTPGNTPTTPVATPGVTGGATAAAGFPASSGTSQLSAPMTVTGSFDGGMKAFGRGVSCTGQAEGGDSDAVFMIEEGGTLSNVIIAADQIEGVHCFGSCTLKNVWWVAVCEDAFTIKEQGASGTTHIIGGGAQGAEDKVLQHNGGGTLAVSGFLAKDFGKLYRSCGNCDEMPERHVTIDGVTAESGDILVGINSNMGDTATITNTCATGVETICQEFNGVTDGSEPEAAGSGPSTACKYTAADAQAC*
配列番号：２２
長さ：１０４７（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
GAATGGTATAAAGAGCGGTGGGATATCCATCATTGAGCTCATCACCAACCCACAATTACTTTCGTTCTACACTCCTCTCGTTTACACAACGGATCACTGATCTACCACATTCGCTCTTACCAAAGATCCTGTCTACCAACCATCTACAACATGCAGTTCAAGTACGCCGCTCTCGCTGCCGCCCTGGCCGCCGTCGGCTCCACGCAGAGCCTCCCCATCCCCGCCTCCCGCGGAGTTGATCCCAACAAGGGCCAAAGGATCGTCAAGCCCGGCAATCCTTTCGACGGCGGGATGAAGGAGTTTGGCCGTGGTGTCGTCTGCAACGACAAGGCCGACACTGGCGTCAGGAACGCCGTCTTCGTCATCGAGGACGGCGGTGTTCTGCGCAACGCCATCATCGGCGCCGACGCCGTCGAGGGCATCCACTGCGAGGGCAAGTGCACCATCGAGAACGTCTGGTTCCGCGACGTGTGCGAGGACGCCATCACGCTGAAGGGCAACGGCCCTTACACCATCACTGGCGGCGGCGCCCAGAACGCCGGCGACAAGGTCATCCAGCACAACGGCAAGGGCGAGCTGCGCATCTCAAACTACCAGGTCAACAACGTCGGCAAGCTGTTCCGCACCTGCGGCAACTGCAGCAACAACGGCGGCCCGCGCAGCATCGTCGCCACCGGCATCAGGGCCTTCGGCGTCACCAGCGACCTCATCGGCATCAACTCCAACTACGGCGACAAGGCCTCCATCACCGGCTCCTGCGGCAACACCAAGACGGTCTGCCAGGAATATGTCGGCATCGAGAAGGGCGCCAACGGCGGGAAGGACAGCGAGAAGAGGGTCCCGCCGGTCGGCGCTTGCACCGGCCAGGGCGGTCTCGCCAGGCTCCCTTCCTGCTAGACGCCTCGCGGAATCTTGCGCTGAGTATGGGATGGGAGGAATGGATTGACCGCCTCAGTTTGGGATCCGTGCGAACAGTCGGGAACTTCGCAACTGCCTCATCCGTCAAGAGGTGTGGGCCCCTGCCGGACAGGATGAAACGCGTTTATG
配列番号：２３
長さ：７４７
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（７４７）
atgcagttcaagtacgccgctctcgctgccgccctggccgccgtcggctccacgcagagc
M Q F K Y A A L A A A L A A V G S T Q S
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L P I P A S R G V D P N K G Q R I V K P
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G N P F D G G M K E F G R G V V C N D K
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A D T G V R N A V F V I E D G G V L R N
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A I I G A D A V E G I H C E G K C T I E
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T I T G G G A Q N A G D K V I Q H N G K
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G E L R I S N Y Q V N N V G K L F R T C
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G S C G N T K T V C Q E Y V G I E K G A
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N G G K D S E K R V P P V G A C T G Q G
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G L A R L P S C -
配列番号：２４
長さ：２４８
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MQFKYAALAAALAAVGSTQSLPIPASRGVDPNKGQRIVKPGNPFDGGMKEFGRGVVCNDKADTGVRNAVFVIEDGGVLRNAIIGADAVEGIHCEGKCTIENVWFRDVCEDAITLKGNGPYTITGGGAQNAGDKVIQHNGKGELRISNYQVNNVGKLFRTCGNCSNNGGPRSIVATGIRAFGVTSDLIGINSNYGDKASITGSCGNTKTVCQEYVGIEKGANGGKDSEKRVPPVGACTGQGGLARLPSC*
配列番号：２５
長さ：２４９５（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
GTTTGGTGCGTGGGAACGCATTTAACGGTGGATGAATCGATCCAAGGCTTCCAAGGCAGAGCCTCCGAAACAGTCAATATTCCATCCAAACCAACGCCTATTGGATTCAAGATTTGGGCACTTTGTAACGAGGCTTTTTTGGTTGATTGGATGTTCCATTCAAATGGCGAAGGACCGTGGGATCTTGACGAGTATTACACCGACGAACAGTACGAAATTAACCTCACACAGACGGCTGCAGTGGTGCCCGATTTGGTGGCTCAGTTATGCCCACATGAGCTGCCATTTGACAGCCCAAAATACATCGTTTGGATAGACAATCTGCTTACTTCTGCGCGGCTTATGACAACGCTCCGGAACGAGAATATTGGCGCTGCAGGGACTGTTCGAATGGGCAAGACACAGCGTGAGAAGAATGAAGAGAAGGCAGCTAGCAAAAAGAAGCAAGCCACCAAAGAAGATAACCGTGGTTTACACCAAAGGCTTCGAGATTTGAGGTCAAAAAATGAAGGACAGATCGAATGGGGCACGCAGTATTGCTGTCTATCACAGGACGAGCAGTCAATGCAATTTGGCTGGCAGGATGCAAGAATTGTGCTATTCATGAGCACTGTTCATGACGGTAAACAATGGGTGATTCGACGACGACGGCGGCCCACAAAGACCTCCACCAATTCGAAGATCACTCAGAAGCCATTTGGTGATAACGTGGAACAAGATATGGAGATTCCGAGGTGGGCAGACGAGTACAATCACAACAAGAATGCGGTTGACCGTTTTGACCAATTCAAAGCCGAACGCCAAATCAATCGACTTTGTTATCGAACATGGAAGCCTCTTTGGAACTTCCTCTTCCAATCATCGATCATCAGTGCATATCTGCTCACTTGTAGAGGCTTGGATGACGATGAGAAACCTCCATTCGCGTCCCTGAACGCATTCCGCCAGAGGCTTTGGGAGCAGCTCTTTGAACGCTCAGAACGCGTTGACGGACGCCGTGGACGAGCAGAGCCTCGTTATCGTGAGATTCCACGCGAAGAACATCAATATGAGAGGCTTAAGGTCCAAGGGAACTGCAGTGAATGTATGGCTAACATGCGCAAATCAACGCGTATTCGAAGGCCACTTGCAGAGCGTTCCACCAACATTCGGCCACCAAGGCCAAGGTGGGGCTGTGGGCTATGTAATCTGAATCTTTGTGAAGGCATTTGCTTCAAAAATCACTTGAATCGGGTGATAGGAAGCAGTTGAATTTGATGTGGAAGTTGGGCTCGATTTGGTCGCGAATTCGTCGCGATTTAGATCTAAAACACCAAGATTTGGGCCGTAAATCGAATATATATAAATGCAAATAGACTCATTTGAATTTGACAGCTTATGCGACCTCAAAACACTACGTTTTAGTTGAATTATTGCGATTATTGGGCTGCGAAAAGCCCCTGATGACTTTGGTGTTCTGACCCCTGTCACCACCCCTGTCGCTCTCAAGCTCTCCATAGATTGAGAGCATATCCAGCCTACGAAGGGATACCACTGCCCCCTCCTGGCGGCTTCCGCCCTGGCTGCTCCTGCCGACGACACTTTCGGCTACGAGCTCGTTCGCCGTGCGAACTTCCCTATTCCTGCCTCCAAGGGCACCGTCAAGTACAGCGCTGCCAAGTCCATCTCCGGCACTTTCGATGGTGGCCTGAAGACCCTACAGCCGTGGTGTCAAGTGCATCGGTCAGGCTGAGGGCGGTGACAAAAAAGCCGTCTTCATCCCTGAGGACGGTGCTAGCCTCAAGAGCGCCATCACTGGCACCGAGCAGATCGAGGGCGTCCACTGCAAGGGGCTCCTGCACTATCGAGAACGTCTGGTGGGCTGGTGTCTGCGAGGATGCTCTCTCCCTCAAGGGCAACGGCAACGCCAAGATCATTGGTGGCGGTGCCACTGGTGCCGAAGACAAGGGTAAGCTCTCTTCTGCAAGAGCGTTGCGATCGGATTTCTAACACTCTCTGGTGCAGGTCATCCAGCACCGGTTTTGGATCCGTCTCTATTGACGGCTTCACTGTTGCCGATTTCGGCAAGCTCTACCGCTCTTGCGGAAACTGCAAGAAGCAGGGCAAGAGAACTGTCACCATCAAGAATGTCAAGGCATCATCCGGCAAGCTGCTCGCTGGTATCAACTCCAACTACGGCGACACTGCTACCATCACCGGCACCTGCGCTGCCTCCGTCAAGAAGATCTGCACCGAGTTCATGGGCAACAACAGCGGCAAGGAGCCCAGTGTGGTTTTCAATCTCGATCTTATCAATCTTATCAATCGATCCCTATCAATCGATATCAAGTCCATCATGGAATTGAATTGACGATTGATAAGGATCGACAGCCTCCTGGTTGCCCTGCCAAACGCCACCAAACAAACGCCATAAAACACGCCCGCAGGGAGCCGCAGGACCCGAAATGCATCAAACAGTCCTCTTCTATTGCATTATCAATTATCGGGCATGGATG
配列番号：２６
長さ：１７０７
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（１７０７）
atgttccattcaaatggcgaaggaccgtgggatcttgacgagtattacaccgacgaacag
M F H S N G E G P W D L D E Y Y T D E Q
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Y E I N L T Q T A A V V P D L V A Q L C
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M G K T Q R E K N E E K A A S K K K Q A
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W V I R R R R R P T K T S T N S K I T Q
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K P F G D N V E Q D M E I P R W A D E Y
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R L C Y R T W K P L W N F L F Q S S I I
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S A Y L L T C R G L D D D E K P P F A S
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L N A F R Q R L W E Q L F E R S E R V D
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G R R G R A E P R Y R E I P R E E H Q Y
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E R L K V Q G N C S E S Y E G I P L P P
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P G G F R P G C S C R R H F R L R A R S
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I E N V W W A G V C E D A L S L K G N G
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H P A S C S L V S T P T T A T L L P S P
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A P A L P P S R R S A P S S W A T T A A
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R S P V W F S I S I L S I L S I D P Y Q
tcgatatcaagtccatcatggaattga
S I S S P S W N -
配列番号：２７
長さ：５６８
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MFHSNGEGPWDLDEYYTDEQYEINLTQTAAVVPDLVAQLCPHELPFDSPKYIVWIDNLLTSARLMTTLRNENIGAAGTVRMGKTQREKNEEKAASKKKQATKEDNRGLHQRLRDLRSKNEGQIEWGTQYCCLSQDEQSMQFGWQDARIVLFMSTVHDGKQWVIRRRRRPTKTSTNSKITQKPFGDNVEQDMEIPRWADEYNHNKNAVDRFDQFKAERQINRLCYRTWKPLWNFLFQSSIISAYLLTCRGLDDDEKPPFASLNAFRQRLWEQLFERSERVDGRRGRAEPRYREIPREEHQYERLKVQGNCSESYEGIPLPPPGGFRPGCSCRRHFRLRARSPCELPYSCLQGHRQVQRCQVHLRHFRWWPEDPTAVVSSASVRLRAVTKKPSSSLRTVLASRAPSLAPSRSRASTARGSCTIENVWWAGVCEDALSLKGNGNAKIIGGGATGAEDKGHPAPVLDPSLLTASLLPISASSTALAETARSRARELSPSRMSRHHPASCSLVSTPTTATLLPSPAPALPPSRRSAPSSWATTAARSPVWFSISILSILSIDPYQSISSPSWN*
配列番号：２８
長さ：１９２２（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
CAAGATGTGCTTTTGCTCTCCAGGACATTCCTCTCCATCCCTCGTTTCCAATCACTTTCAGTCTTTGCCACTCCTTCGCTGTCCACTGTAGTCCGGAACTACATCAGTAAACCACCTTCTTTTCCAACAGACCCCATCACATCCGCCAAAATGGTCAACATTGCTGCCGTCTGCCGCGCTGCGGCTTTCTTTCTTCCTGTCCTCGCCGCCGCCCAGAGCGGTGTCGTTGGTACCCCTTCCGGTTTCGCCGCCGGCACCACTGGTGGTGGTGACGCTGCCGCCGCCGCTCCCTCCGACGTTGCTGAGCTCATCTCTTGGCTTGAGGATGAGACTCCCCGTGTCATCCTCATCGACAAGGAGTTCAACTTCCTCGGCACGGAGGGCACCAAGAGCGATCAGGGCTGCCGTCCCGACAGCAACAAGTGCCCTGGCAAGGGTGGCCAGGATGCCATCAACCAGGCCAACTGGTGCGACAACGGCAACGCTGGCGAGGGTGTCTCGGCCGTCACCGTCAAGTACGACCAGGCTGCGCTCAAGGGCATCGCTGTCAAGAGCAACAAGTCCATCGTCGGTGTTGGCGACAAGGGTGTCCTCAAGGGCAAGGGCCTCAGCCTGACTGGTGGCGTTGAGAACGTTATCATCCAGAACATCCACATCACCGACCTGAACCCCGAGTACATCTGGGGTGGTGATGCCATCACGCTCGCTGGTTCCGACAAGGTCTGGAGTAAGTACTTCCGAACTGTTTCGATCCCATACGGTTGGCCTTGAAACCCAAATCGGGAAACGCACTATACCCAATATGGCAATTTTCTACGAACATCGAGACACCGCAGCAGAACACGAGTTTCACGCCATTGCTTGTTTCTGTGGCTGTCAATGCTGTCTCGAAGTCCCTGTATGCTGTTTGGCTTGATGCGCTAGTGCGTTTCCTGAGAGAGGTGCCCACCACACCATCATGCCCCAAGCTCCCTTACCCCTTTCCCAGCATCCCACATCATGCTATATCCTTTACTATGCTTTCAACAGTAAAACTAACGCCCGAAACGTCGATCATGTCAAAATTTCTCTCGTCGGTCGCCAGATGATCGTTACCGGCTACGACAAGGCCGGTAGGGTCACGATCTCCAACTCCGAGTTCGACGGCCAGACCGACTGGTCCGCCTCCTGCAACGGCGAACACTACTGGACCGTCCTCGTGTACGGTGCCGACGACCAGATCACCTTCGCAAACAACTACATGCACGACACCTCGGGCCGTTCGCCCAAGATCGGTGGTGCCGACGGCGCTGGCATCACCTTCCACGCGGTCAACAACGTCTTCCAGACCAACAAGGGCCATAACTTCGACATCGGCTCCGGTGCCGAGGTTTTGCTCGAGGGTAACACCTTCAACGAGTGCAACCAGCCCATCACCTCCAAGTCGGCCAACGAGGGCGGCGCCATCTTCAACACCCCCTCCGGCTCCGAGAGCTCCTGCTCCAGCTACCTCAAGCGCGCCTGCCAGGCCAACACTCTCACCAGCTCCGGTGACTTCGGCACTTACAAGGACACCTCGGTTCTCGAGGGCTTCAACGGCGCCACCTCCATCTGGGAGGCCGTCAGCGCTGAGGAGGCTGCTGCGTCCGTCATCGCCAACGCCGGTATTGGCAAGCTCCAGGGCGGTGCTAGCAACTCCACTGCCAAGTTCAGTATGTCTTCTCCCTTCAACCCTGTATCACAGGAGACATGTACTAATAATTCTCTCCTCTGCAGGGCGCTTCCAATCCTAGATTAATAAGCACGATCGACCGAATACTAGCATCAGTACGGTTTTTAGATAAAAAGGGATCTGTCTGGTTTACTGTAGATATTTAGCCTTCCTTTCTTTGGCTTCACATATTTTTAACTTTACAGCCCAAGAGGGCTCAATGCAAATACTT
配列番号：２９
長さ：１３１４
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（１３１４）
atggtcaacattgctgccgtctgccgcgctgcggctttctttcttcctgtcctcgccgcc
M V N I A A V C R A A A F F L P V L A A
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A Q S G V V G T P S G F A A G T T G G G
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D A A A A A P S D V A E L I S W L E D E
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T P R V I L I D K E F N F L G T E G T K
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S D Q G C R P D S N K C P G K G G Q D A
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I N Q A N W C D N G N A G E G V S A V T
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V K Y D Q A A L K G I A V K S N K S I V
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N V I I Q N I H I T D L N P E Y I W G G
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D A I T L A G S D K V W M R F L R E H P
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T S C Y I L Y Y A F N S K T N A R N V D
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H V K I S L V G R Q M I V T G Y D K A G
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R V T I S N S E F D G Q T D W S A S C N
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G E H Y W T V L V Y G A D D Q I T F A N
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N Y M H D T S G R S P K I G G A D G A G
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I T F H A V N N V F Q T N K G H N F D I
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G S G A E V L L E G N T F N E C N Q P I
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T S K S A N E G G A I F N T P S G S E S
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S C S S Y L K R A C Q A N T L T S S G D
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F G T Y K D T S V L E G F N G A T S I W
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E A V S A E E A A A S V I A N A G I G K
ctccagggcggtgctagcaactccactgccaagttcaggcgcttccaatcctag
L Q G G A S N S T A K F R R F Q S -
配列番号：３０
長さ：４３７
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MVNIAAVCRAAAFFLPVLAAAQSGVVGTPSGFAAGTTGGGDAAAAAPSDVAELISWLEDETPRVILIDKEFNFLGTEGTKSDQGCRPDSNKCPGKGGQDAINQANWCDNGNAGEGVSAVTVKYDQAALKGIAVKSNKSIVGVGDKGVLKGKGLSLTGGVENVIIQNIHITDLNPEYIWGGDAITLAGSDKVWMRFLREHPTSCYILYYAFNSKTNARNVDHVKISLVGRQMIVTGYDKAGRVTISNSEFDGQTDWSASCNGEHYWTVLVYGADDQITFANNYMHDTSGRSPKIGGADGAGITFHAVNNVFQTNKGHNFDIGSGAEVLLEGNTFNECNQPITSKSANEGGAIFNTPSGSESSCSSYLKRACQANTLTSSGDFGTYKDTSVLEGFNGATSIWEAVSAEEAAASVIANAGIGKLQGGASNSTAKFRRFQS*
配列番号：３１
長さ：１３２６（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
ACCAATCGTCACAGATCCGCTGGACACGATGCAGCGTGCACATATAGATCGGCTCCGCAGCGTTAATGCTGTCCTCCAGCAGCAGCCTCAACTTTCTCTTCACCTTTCTCTTCACCTTTCTCTTCACCACCAGCCCAGCCCACCCTCACCATGAAGTTTCTTTCCACTTTGGCCCTGGCGGCCCTCGCGCACCTGGCGTGCGCCGTCCCCATGGCCGAGAAGCGTGCCCCCGCGGCCACGCCCGTCGGCTACGCCTCGCAGAACGGCGGCGTGACCGGCGGTCAGGGCGGCACCACCACCACCGTCTCCTCGCTGCCCGAGATGACGGCTGCCCTTAAGAAGGGGGACACGGAGAAGAAGGTCGTCTACGTCAAGGGCAAGATCTCCGGCAAGGCGAAGATCTACGTTGGCTCGAACAAGGTGCGGCCTCACCCCTTCACTCCATGACATCCGGGTAGCTAACGCAGCCTGCAGTCCATCCTCGGCGTTGACTCCAGCTCCGGCCTCGAGGGCATCGGACTCCTCGTCCGTGACGCCAAGAACGTCATCATCCGCAACCTGGCCATCTCCAAGGTCGAGGCCGACACGGGCGGCGACGCCATCGCCATCGACGGCTCCACCAACGTCTGGGTCGACCACTGCGACCTGTCCAGCGACCTGGCCGCCGACAAGGACTTCTACGACGGCCTGCTCGACATCTCCCACGGCGCCGACTACGTCACCGTCTCGAACGTCTACTTCCACGACCACCACAAGAACTCGCTCGTCGGCCACTCCGACTCCAACGCCGGCGAGGACACGGGCAAGCTGCACGTCACCTACGCCAACAACTACTGGAGCAACGTCGGCTCGCGCTGCCCGCTCGTGCGCTTCGGCACCGTCCACATCGTCAACAACTACTTCGAGGACGTCTCCGTCTCCGGCATCAACACCCGCATGGGCGCCCAGGTCCTCGTCGAGAACAACGTCTTCAACAACGTCGTGCAGGCCCTCGTCTCGATCGACTCCAAGGAGCTCGGCTACGCCGTCGCGCGAGGCAACGACTGGGGCACCTCCAAGAACGAGGCCCCCGAGGGTACCCTTACCAAGGTGCCTTACACCTACACCGCTGTTGAAGCGAGCGCGGTCAAGGCTGCTGTTGTTGGCAGCGCGGGCAACACCCTCTCTGGCTTGTAAACATTTGACCTCGACGGGTTGCTCGAGAGAAGCCTATCTACATAGCCTGTGTTTACAAGCAATTCTCTGTAGATATTTTTATACAATCTCTAATTGTAAATACGAAATCAAATCCGAATTAGTGGAATGCTTGCCTTAAGCTCTTCGGAG
配列番号：３２
長さ：９７２
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（９７２）
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M K F L S T L A L A A L A H L A C A V P
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M A E K R A P A A T P V G Y A S Q N G G
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V T G G Q G G T T T T V S S L P E M T A
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K A K I Y V G S N K S I L G V D S S S G
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V W V D H C D L S S D L A A D K D F Y D
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D H H K N S L V G H S D S N A G E D T G
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T A V E A S A V K A A V V G S A G N T L
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S G L -
配列番号：３３
長さ：３２３
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MKFLSTLALAALAHLACAVPMAEKRAPAATPVGYASQNGGVTGGQGGTTTTVSSLPEMTAALKKGDTEKKVVYVKGKISGKAKIYVGSNKSILGVDSSSGLEGIGLLVRDAKNVIIRNLAISKVEADTGGDAIAIDGSTNVWVDHCDLSSDLAADKDFYDGLLDISHGADYVTVSNVYFHDHHKNSLVGHSDSNAGEDTGKLHVTYANNYWSNVGSRCPLVRFGTVHIVNNYFEDVSVSGINTRMGAQVLVENNVFNNVVQALVSIDSKELGYAVARGNDWGTSKNEAPEGTLTKVPYTYTAVEASAVKAAVVGSAGNTLSGL*
配列番号：３４
長さ：１３２０（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
TCTCCAAGTTCATCTTCATCTTCAGTCTTTCTCTATTAAACGCGTTGACTCGCGCCATTCTTTGACAGCCATCAGCCTGCTGAGCACGCTTGACCACATATTCCTTCCCTTGAAAGTTCCCGTTTGCTCAACAACACTTCCACCGCAACCATGAAGGCCACCACCCTCGCTACTTTTGCTCTTTCCGCCGTGAGCGCTCTGGCAGCGCCCACCAAGACCTTCGCCAAGCGTGCCGCCATCACTGACGGCCCCGACGTCGGCTATGCCACCCTGAACGGTGGCACCACTGGCGGTGCTGGCGGTTCCACCACCACCGTCTCCAGCCTGGCCCAGTTCACCGCTGCCGCCGAGGCTGATGGCGCCGCCGTCATTGTCGTCTCCGGCAACATCTCTGGCGCCGCCAAGGTCCGCGTCGGCAGCGACAAGACCATCATCGGCAAGGACTCCAGCGCCGTGCTCGAGGGCGTCGGTCTCTACATCAACAAGCAGAAGAACGTCATCGTCCGCAACCTGTCCATCAAGAATGTGCTTGCGGAGAATGGTGACGCCATCGGCATCCAGGCTTCCCAGAACGTCTGGATCGACCACTGCGACCTGTCCTCGGACCGTGACCACGACAAGGACTACTACGACGGTCTCCTCGACGTGACCCACGCCTCTGACTACATCACCCTGTCCAACAACTACCTCCATGACCACTGGAAGGCCTCGCTCGTCGGCCACTCCGACTCCAACGGCTCTGAGGACAAGGGCCACTTGACCGTCACCTACTACCAGAACCACTTCGAGAACCTGAACTCGCGTGGTCCTTCTTTCCGCTTCGGCACCGGTCACATTGTATGTTGCCCACCAACCTGACACCACAGTAATGATTCTAACGGCAAATGCTAGGTCAACAACCTCTACACCAGCGTCAGCGACGGTATCAACGCTCGCCAGGGCGCCCAGCTCCTTGTTGAGGGCAACGTCTTCACTGGCAGCAAGAAGCCGCTGTACAGCACCGATGCCGGCTACGCCGCCGTCAACGACAACGACTTCGGCGGCGCTGAGAACACTGCTGAGGCTGGCACCCTCACTGCCTCTGACCTCGGCTACAAGTATACCGCTCTGAAGTCTTCCGAGGTCTCTGCCGCCGTCTCCAAGTCGGCTGGCGCCACGCTCACTTTCTAAACGAAGTCGCGACGCTCTCTCGTTTTGGAACTCGCCGCAATGCCCGAGCCAGGGTTCGGATGCATGGAAGGAATGCATTGTGATGGATGAAGAGCAACATACTTTTTTGGGGGGGAAAAAGCACAGGGCGTGCTACTTTTTCATGTACAT
配列番号：３５
長さ：９６６
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（９６６）
atgaaggccaccaccctcgctacttttgctctttccgccgtgagcgctctggcagcgccc
M K A T T L A T F A L S A V S A L A A P
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T K T F A K R A A I T D G P D V G Y A T
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Q F T A A A E A D G A A V I V V S G N I
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S G A A K V R V G S D K T I I G K D S S
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A V L E G V G L Y I N K Q K N V I V R N
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L S I K N V L A E N G D A I G I Q A S Q
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N V W I D H C D L S S D R D H D K D Y Y
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D G L L D V T H A S D Y I T L S N N Y L
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H D H W K A S L V G H S D S N G S E D K
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G H L T V T Y Y Q N H F E N L N S R G P
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S F R F G T G H I V N N L Y T S V S D G
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I N A R Q G A Q L L V E G N V F T G S K
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A E N T A E A G T L T A S D L G Y K Y T
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A L K S S E V S A A V S K S A G A T L T
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F -
配列番号：３６
長さ：３２１
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MKATTLATFALSAVSALAAPTKTFAKRAAITDGPDVGYATLNGGTTGGAGGSTTTVSSLAQFTAAAEADGAAVIVVSGNISGAAKVRVGSDKTIIGKDSSAVLEGVGLYINKQKNVIVRNLSIKNVLAENGDAIGIQASQNVWIDHCDLSSDRDHDKDYYDGLLDVTHASDYITLSNNYLHDHWKASLVGHSDSNGSEDKGHLTVTYYQNHFENLNSRGPSFRFGTGHIVNNLYTSVSDGINARQGAQLLVEGNVFTGSKKPLYSTDAGYAAVNDNDFGGAENTAEAGTLTASDLGYKYTALKSSEVSAAVSKSAGATLTF*
配列番号：３７
長さ：１８９６（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
CAGCCAATACGGTGGCCTGAAACATACTCATATTCCTATATCCAATTCCACCCAGAAACATATTTACACGGCCCGTCCCTTAGCCCAATTGACCCCGGAAGCGTCTCTCTTTTTCCCTTACGCTCGTTTCTTTTTCTCCCTGTCATGCTGATGGCGTCCTGTCTTCCCCTGGCCCTAGTGGCCTTTTCTTCACTTTCCTATGCTCTTCAGCCCTACAGTGGCCCGGCGCCAGACCTTCCTGATCGTAAGCCATTCGGCTTCGGTGCCGCCGCCACAGGTGGCGGTACCCCCACGCCGAACAATACCTACCTGGTCGACAACATGCCTGATCTGCGGACCGTTCTAAAGATGGAGACTCCCCGCACAGTTTACGTGAAGGGCGAGATCAAAGGCAACGAAATCAACGAGACCACGACCGGCAATTGCCAATTCTACATTGACAGCAGCAACAACTCCAAGTTCAACTTTACCCTCTACATCCAGAGCTACAACGAGACCTACATGGGCCAGGTTAAGGCTGCCTCCGAAGCGGGCCAGCTATTCGACGGACAGAACGCCACCGAGCTCCTCAATCTACTCGGCCGCCAGAACGTGAGCTTCCATGTGCCCGGAAAGGTTTCAAAATAACAGCAACGCTAACCCACCTCGCAGGGCTGGCGCGGCCAAGTGCAAAACGTGCAAAAGTCCTACGAAGCCATTGACGTGGCCAGCAACCTTACGCTTATCGGCTGGGACTCGTCCGCGTACCTGAATGGCGTCAATCTCGGGTTCAACTCGCGCTCCAACATCATCATGCGCAACCTGCGCATTTCGTCGCCGCGTGACTGCTTCCCGTCGCCGGAAACCTACCCCAGCAGCTGGAACGCGCGTTACGACGCCGTGTCCATGGTGTCGACGACGACCGCGTGGCTCGACGGCAACATCTTCGAGGACGGCCCCGTCGCCGTCGCGCCCGACGACTTCGCGGGCGGGTGGAAGGTCGACCGGTACGACGGCTTGTTTGACGCCGAGGACGGCAGCGACGACATCACCTTCTCGCACAACATCGTCACCAACCACCACAAGAGCCTGCTGTGGGGCGGCGGCAACAAGGAGGCGGACCGCGACATCGGCAAGATGAAGTTCACCGTCTTCGGCAACCGCTTCGTCGACAGCTTGTCGCGCAACCCGCTGATGCGCTTCGGCACCTTCTACATCGTCGCCAACGTCTTCGAGAACTACGCCGAGCGCGCGCCGCTGTTCGAGGACGACAGCGTCGCCGCGAGCGCGGCCGCCTCGCGGCTCGTTCGACGCGCGGACAATGCCACCACCTACAGGCCGGACTTCCAGTACAACATGGGCATCTACAACGCCAGCACCGTGTACGTCGCGGCGAATGCGTTTGTCCAGACGGGCACCTATGCGGACGATTCGTCGCGCGTCTTCTCCTTCTCGGACCTTGCGACGCCGGGCCTGCCCGCGACGCTGTGCTCGCCGGCTGATGGCGCGAACGGGACGGCGTCGGCGTCGTCCCTGCCGAAGAGCGTTTTCAATGGCAGGCCTATCGACCTTGCGAAGAATGCCAAGAACACGTGGGCGTATTTCCTGGAGAGCAAGAATGAGGACGGCGAGTTCGCCGAGGGTGGGTTCGTGATTGGATGTGACGGGCTGGAGGAGCAGGAGACGCCGGTTGCGTTTAAGGATGGTAACGAGGTCGATGCATATGTGCGGAAGAATGCAGGGCAGGTAGGGAGGGCGACGCCGTAGGGGTGCAAGTGGATGCCAGGCTGATGGTTGGTGGTGGAATGTTTGTGGAACCGCGAGCGGATAGACTTGGCGGGAAGTGCCTCCTCTTGGCGGAAGGTATGCATGTACAATGGGTCAACGGTAGAGATCTGCGGCTTTTCCGGCGGCGGG
配列番号：３８
長さ：１５３６
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（１５３６）
atggcgtcctgtcttcccctggccctagtggccttttcttcactttcctatgctcttcag
M A S C L P L A L V A F S S L S Y A L Q
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P Y S G P A P D L P D R K P F G F G A A
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L R T V L K M E T P R T V Y V K G E I K
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G N E I N E T T T G N C Q F Y I D S S N
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N S K F N F T L Y I Q S Y N E T Y M G Q
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V K A A S E A G Q L F D G Q N A T E L L
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N L L G R Q N G W R G Q V Q N V Q K S Y
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S S P R D C F P S P E T Y P S S W N A R
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S K N E D G E F A E G G F V I G C D G L
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E E Q E T P V A F K D G N E V D A Y V R
aagaatgcagggcaggtagggagggcgacgccgtag
K N A G Q V G R A T P -
配列番号：３９
長さ：５１１
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MASCLPLALVAFSSLSYALQPYSGPAPDLPDRKPFGFGAAATGGGTPTPNNTYLVDNMPDLRTVLKMETPRTVYVKGEIKGNEINETTTGNCQFYIDSSNNSKFNFTLYIQSYNETYMGQVKAASEAGQLFDGQNATELLNLLGRQNGWRGQVQNVQKSYEAIDVASNLTLIGWDSSAYLNGVNLGFNSRSNIIMRNLRISSPRDCFPSPETYPSSWNARYDAVSMVSTTTAWLDGNIFEDGPVAVAPDDFAGGWKVDRYDGLFDAEDGSDDITFSHNIVTNHHKSLLWGGGNKEADRDIGKMKFTVFGNRFVDSLSRNPLMRFGTFYIVANVFENYAERAPLFEDDSVAASAAASRLVRRADNATTYRPDFQYNMGIYNASTVYVAANAFVQTGTYADDSSRVFSFSDLATPGLPATLCSPADGANGTASASSLPKSVFNGRPIDLAKNAKNTWAYFLESKNEDGEFAEGGFVIGCDGLEEQETPVAFKDGNEVDAYVRKNAGQVGRATP*
配列番号：４０
長さ：１７９８（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
CGGGTTTTGGGAATATCTCCGGGCTTCGGTGGACCGTCCTATCCGTCTGAGCATGCCAATATGTTTTCTTGCCTTTCTGTCCGTATATAAAATGCCAGTCAAGAAGAATTCTCGTGTTTCACACCTTTCTTCATCCGATCTCGCCTCAGTATGCGTGCATCAGTCTCAATTACGGTCTCGCTACTGGCATTTGCCCTGAGGGCGTGCGCTGTTGGTGTGGTTGGGAGTCCGGAGGGATTTGGCTCCGGGACAACAGGTGGAGGTAGTGCCACGCCGGTTTATCCTTCGACCACGAGCGAATTGCAGTCCTACTTGGAAGACGATGTTGCCCGAGTTATCGTCCTGAACAAGGAGTATGCAACCAAACAATTGTTTAATAAGCCTAAAACTGACCATGTCCAGGTTCAACTTCAAGGGCACCACCACCACTGCGACGGGCTGCAGACCCACATCCAACACTTGCCCCGGTAATGGTGGCCAAGATGCAATTAATGCCAACGGTTGGTTAGTATCTGCTGGTTGCTCTCATCTGGTTCTTTGTGACTAATGTTCAACGCAGGTGCGGAAGTGCTCCGGCGGTCTCCGTGAAGTACGACACGGCCGCTATTACGCCCATAAATCTCGGCTCTAACAAGTCTCTTATCGGCATTGGCACATCTGGTGTCATCCGCGGAAAGGGTCTCCGTATCGTCAGTAAAACTAATTCTTGCTATCAGTTGACGAAGAAACTTACAGTTGATGAAATCTCTTCAGGCCAACGGAGCTAAAAATGTCATCATCCAAAATATTCATATTACCGATCTCAACCCGCAGTACATCTGGGGTGGAGATGCCATTACCCTGGATGGTGCTGATCTGGTTTGGGTGGACCACGTTAAGGGACGTATACTCCCGAACCCTCGCTCGAGCATTATTCTGACCTTGCCAACTACAGATCTCTCTCATCGGCCGCCAGATGTTTGTCGCGGGCTACGGGGCATCTAACAGAGTAACTATCAGCAACACGGAGTTCGACGGCTCAACCTCCTGGAGCGCAACTTGCGACGGGCATGTACGTGCCGCCTCCCAGCCCACCACCACCTCCTTTCTTTCACTGGAGTAGCTTAGATGCTAATATGCCTTATCTTTCCTTCTAGCACTACTGGACTATTTTGCTTTTGGGCTCAAACGACTTGATCACAATGAAAGGCAACTATATCCACCACACCAGCGGCCGTGGACCCAAGATCGGAGGCAACACCCTGCTCCACGCCGTAAGTTCCGCCCCACAAACACCCTTGCCTCACCAATCGCCTGCTGAAACATGCTATTTCCACAGGTCAATAATGAGTGGTACGCCGTTTCGGGCCACGCCTTCGACCTGGGCGAGTCGGGCGCCATGGCCGTTGCCGAGGGCAACGTTTTCCAGAACGTCGTCACGCCGCTGCTTTCGCCCGTCGAGGGCCGCATCTTCACGGCGCCCAGCACTAGCGCCAACACCGCCTGCGCGACCTACCTTGGCCGCAACTGCGTCGTCAACGCCTTCGGCAGCAGCGGCACCTTCTCCGGAACCGACACCAGCTTCTTCTCCAACTTCAACGGCAAGACGATCGCGAGTGCAGCCGCCGCCGCATACAAGGATTCGACAGCGGGTGTGGGGAAGATTTAAGGGCGGAGCGGGTGGTTTTGCATTTAGGGGCTGTGATATTGCGTTGGATGTTGGAATGAGGTCAGCAAAAGAAAATCTAAAATCAACGATCATGAATGCTGGCTGGAAGGAAATTGTTTGAGAACTACTTGTGCTTTTTTTTtATTACTG
配列番号：４１
長さ：１１３７
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（１１３７）
atgcgtgcatcagtctcaattacggtctcgctactggcatttgccctgagggcgtgcgct
M R A S V S I T V S L L A F A L R A C A
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V G V V G S P E G F G S G T T G G G S A
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T P V Y P S T T S E L Q S Y L E D D V A
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R V I V L N K E F N F K G T T T T A T G
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C R P T S N T C P G N G G Q D A I N A N
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I N L G S N K S L I G I G T S G V I R G
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K G L R I L M K S L Q A N G A K N V I I
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Q N I H I T D L N P Q Y I W G G D A I T
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L D G A D L V W V D H I S L I G R Q M F
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V A G Y G A S N R V T I S N T E F D G S
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T S W S A T C D G H H Y W T I L L L G S
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N D L I T M K G N Y I H H T S G R G P K
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I G G N T L L H A V N N E W Y A V S G H
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A F D L G E S G A M A V A E G N V F Q N
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V V T P L L S P V E G R I F T A P S T S
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A N T A C A T Y L G R N C V V N A F G S
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S G T F S G T D T S F F S N F N G K T I
gcgagtgcagccgccgccgcatacaaggattcgacagcgggtgtggggaagatttaa
A S A A A A A Y K D S T A G V G K I -
配列番号：４２
長さ：３７８
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MRASVSITVSLLAFALRACAVGVVGSPEGFGSGTTGGGSATPVYPSTTSELQSYLEDDVARVIVLNKEFNFKGTTTTATGCRPTSNTCPGNGGQDAINANGWCGSAPAVSVKYDTAAITPINLGSNKSLIGIGTSGVIRGKGLRILMKSLQANGAKNVIIQNIHITDLNPQYIWGGDAITLDGADLVWVDHISLIGRQMFVAGYGASNRVTISNTEFDGSTSWSATCDGHHYWTILLLGSNDLITMKGNYIHHTSGRGPKIGGNTLLHAVNNEWYAVSGHAFDLGESGAMAVAEGNVFQNVVTPLLSPVEGRIFTAPSTSANTACATYLGRNCVVNAFGSSGTFSGTDTSFFSNFNGKTIASAAAAAYKDSTAGVGKI*
配列番号：４３
長さ：１６３１（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
GGTGGTGGTCTTGCACCTCTTCCGGTCCACTACTCACATTAACCCGTTCAATCGTTCCCACACATTCACTTATATTCCAACTCTCACACATTCGTTCTGTATCACGCAATCAATCTTTTTGTTTTTGTTTTTTGATCTATTTTAGCAAACATGAAGCTCACTCTCTTGTCTATTGTTCTCGCTCTTGCCCACCAGACTCGGGCCACCAGGGTTACGGGCGCTGCCGAAGGCTTCGCCAAAGGCGTCACAGGGGGTGGCTCTGCTGCCCCTGTCACCCCCAAAAATATTGTTGAGCTGACCAAATACCTTGCCGACGCTCAGCCCCGTGTCATCATCTTGGACAAGGAGTAAGTCCGCTATCACGGGAGGGCTTCAACCGCTCTATCTGGGGGATTTTCTCCAGCCGAACGAACGCTGACATCTATCTTCCTCAGATTCAACTTCAAGGGCTCAGAGGGAACCGTCAAGGAGATGGGCTGCCGTCCTCGTACCAAATGCTCCGAGACTGGCGGTGGCCAAGATGCCATCAACCACGCTAGCTGGTGCACAAACGGCAACGCTGGTGCCGGCTCCAAAGCCGTTTCTGTCACCTATGATAGAGCGGGAACCCTCGCCTTAAAGGTAAACTCCAACAAATCCATTGTCGGTGTCGGCAACAAGGGTGTCATCCGCGGCAAGGGTCTCCGTCTCGCCGGCGCTAAGAACGTCATCATCCAAAACATCCACATTACCGAGCTTAACCCTCAGTACATCTGGGGCGGTGACGGCATTCAGATCGACGGCGCCGACATGGTCTGGATCGACAGGTCCAAGATCTCTCTCGTGGGCCGGCAGATGCTTGTCCTTGGCAACGGCGCGTCCGGCAGGGTCTCGGTCACCAACAACGAATTCGACGGCTCTACTAGTATGCTGATCTCCATAGCCCCCTTGATCACCAAACGGCTAATCGCTCTTTCCAGGCTGGTCGGCTACCTGTGACGGTCACCACTACTGGGCCCTCTACTTCACCGGTTCCAACGACATGGTCACGTTCAAGGGTAACTACATCCACCACACTTCTGGCCGGAGCCCCAAGATCGGCGGTACCACGCTCCTCCACGCTGTAAGATCCCCAATGATCCGTGTCTCGTGACTCGCGCTGATTCCACGCCCAGGTCAACAACGTCTGGTATGCCAACTCCGGCCACGCTTTCGAGATCCTCGCGCCCAAGTCGAACGCCCTCATCGAGGGCAACATCTTCCAGAACGTCGTCCGACCCATGAAGGCCAGCACGGGCAAGGTCTTTGCTCCCTCTTCGGTCCAGGCCGTCTGCAATCGCGCTCTTGGCCGCGCTTGCCAGGCCAACTCTTTCGGCTCCTCTGGCCCCTTGACCGGCACCGACAGCAGCTTCCTCGGTCTGTTCAAGGGCAAGAACCCCGCTACTGCTTCCGCCGCCAGCCCCGCCATTTCTGGCCGCGCTGGTGTCGGGAAGATTGCCTAAATGCTGGCTATGTTCTGGGTTGGACGCTTGCTGAGCAAGCTGTCTTGGCTGGTTGGGTGCATGCACTCAGTTGATAGGCACAACCAACAATCTCTGGACGTGTTATCTCACTTGTCTGGCACTGAGTGGGAATGATTTATGACAGTTTTT
配列番号：４４
長さ：１１３７
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（１１３７）
atgaagctcactctcttgtctattgttctcgctcttgcccaccagactcgggccaccagg
M K L T L L S I V L A L A H Q T R A T R
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V T G A A E G F A K G V T G G G S A A P
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V T P K N I V E L T K Y L A D A Q P R V
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I I L D K E F N F K G S E G T V K E M G
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C R P R T K C S E T G G G Q D A I N H A
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S W C T N G N A G A G S K A V S V T Y D
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R A G T L A L K V N S N K S I V G V G N
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K G V I R G K G L R L A G A K N V I I Q
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N I H I T E L N P Q Y I W G G D G I Q I
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D G A D M V W I D R S K I S L V G R Q M
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S T S W S A T C D G H H Y W A L Y F T G
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S N D M V T F K G N Y I H H T S G R S P
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K I G G T T L L H A V N N V W Y A N S G
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N V V R P M K A S T G K V F A P S S V Q
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A V C N R A L G R A C Q A N S F G S S G
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P L T G T D S S F L G L F K G K N P A T
gcttccgccgccagccccgccatttctggccgcgctggtgtcgggaagattgcctaa
A S A A S P A I S G R A G V G K I A -
配列番号：４５
長さ：３７８
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MKLTLLSIVLALAHQTRATRVTGAAEGFAKGVTGGGSAAPVTPKNIVELTKYLADAQPRVIILDKEFNFKGSEGTVKEMGCRPRTKCSETGGGQDAINHASWCTNGNAGAGSKAVSVTYDRAGTLALKVNSNKSIVGVGNKGVIRGKGLRLAGAKNVIIQNIHITELNPQYIWGGDGIQIDGADMVWIDRSKISLVGRQMLVLGNGASGRVSVTNNEFDGSTSWSATCDGHHYWALYFTGSNDMVTFKGNYIHHTSGRSPKIGGTTLLHAVNNVWYANSGHAFEILAPKSNALIEGNIFQNVVRPMKASTGKVFAPSSVQAVCNRALGRACQANSFGSSGPLTGTDSSFLGLFKGKNPATASAASPAISGRAGVGKIA*
配列番号：４６
長さ：１５７３（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
CGGATGCCGTGCAGCTGTCAAAGTCATGATAAAAGTCCCCACTCCCAGGTACATAATGTGATCGGTAGTTCTGCGCTCTCCTTTCCAACGGTTGTCCCTTGAGCTTCCCGTGCCATGGTAGCCTTTTCTTCCCTTACGTCTGGCAATGCCATGGCGTCCCTCCTGTCTCTATCCGTCCTTTCAGCTTTTCTTGCTTCACCGACACTTGCATACAGTCGTGCTGAATGCCAGGCTCCATCTGCCGACCCCCTGGCGGGCTGCGTACCCGGAACGCTGCTCGTCAGTCCAAACAGCACCGTGACGGCTAACAACAGCACCTCCTTTACCTCTGTCCAATCAGCTATCCTTTCCCTCGGCAACACCACCACACCCGCCACCATCCTCATTCTTCCCGGCACCTATGTTGAGCAAGTCAATATCACCCGCCCGGGACCAGTGACGCTCCTCGGGCAGACTTCATCCCCGAACAATTCCTCCACCAACGGCGTTAAGATCCTCTGGCGTCAGGCCACTGGCAACTCGGTCAACACCTTCGACAACGCCTATACCTCTGTCCTCACTGTCGCGCCGACCCTCGAGAGCAGCCTAACAGGCAGCGGGCCCACCGGATACGCCGTCCCCGCCGGCACGCCCTTCGGCAACGAGGACTTCCGCGCATACAACGTCGACTTCGTCAACGACTACGCGCCCTACTCGGCCGGCCCGGCACTCGCCATTAGCATCAGCTACGCCAACGCGGGCTTCTACTTCTGCGGCTTCTACAGCTATCAGGACACCGTAAGTGTCATCTCCACTCGTCCACTACACGCAACAAACAAACATGCATCCGAGAATCCCTTTTCCCCACCAACTAACGCCAAACCGCAAGGTCTACATCGGCAAGCTCGGCAACGCCTACTTCTACGACTCCATCATCGCCGGCCAAACCGACTTCCTCTACGGCTTCGGCACCGCCTGGATCCAGTCATCGCAGCTCTCTCTCCGCTCCTGCGGCGGCGGCATCACCGCCTGGAAGGGCACCAATACGTCCTTCCCCAACGCCTACGGCGTCTACATCCACGACAGCGTCGTCGAGAAGGCCAACGCCTCGCTCTCCATCGCCGGGCTCTGCGCCCTCGGCAGGCCCTGGAATGCGCAGCATCGCTCCATCTTCGCGAACACGTGGCTCGATGACAGCATCAAGCCGAGCGGGTACATCATCTGGGGGAGCACGGATCCGAGGACCAACAATTACACGTTTATGGCGGAGTATGAGGACTTTGGGCCGGGTTGGAATGAGACCGGGAGGAGGGCGGCGAATATTACGAAGGTGTTGACGGAGGCCGAGTATGAGCCGTATGACAGTCTGGAGAAGGTGTTCCAGTATCCGTTCAGTGGCGAGTTCGGGAACGTGGGGTGGATCGATGAGAGTCCGGAGGCTTGAGCCGGTGGGGATAGTGTGGATTGTGGTGGCCAGCGGCGTAGACGAGGCGGATCTGGTAAGAACTGCGTAGCATGAATGAAATTCGTTTGTACATACGTCTTTATATCGAGCAGCGCTTATGCAAGTTAAATGACGCCGTATTTGCATGCG
配列番号：４７
長さ：１１８２
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（１１８２）
atggcgtccctcctgtctctatccgtcctttcagcttttcttgcttcaccgacacttgca
M A S L L S L S V L S A F L A S P T L A
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Y S R A E C Q A P S A D P L A G C V P G
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T L L V S P N S T V T A N N S T S F T S
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V Q S A I L S L G N T T T P A T I L I L
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P G T Y V E Q V N I T R P G P V T L L G
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Q T S S P N N S S T N G V K I L W R Q A
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T G N S V N T F D N A Y T S V L T V A P
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T L E S S L T G S G P T G Y A V P A G T
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P F G N E D F R A Y N V D F V N D Y A P
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Y S A G P A L A I S I S Y A N A G F Y F
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C G F Y S Y Q D T V Y I G K L G N A Y F
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Y D S I I A G Q T D F L Y G F G T A W I
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Q S S Q L S L R S C G G G I T A W K G T
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N T S F P N A Y G V Y I H D S V V E K A
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N A S L S I A G L C A L G R P W N A Q H
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R S I F A N T W L D D S I K P S G Y I I
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W G S T D P R T N N Y T F M A E Y E D F
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G P G W N E T G R R A A N I T K V L T E
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A E Y E P Y D S L E K V F Q Y P F S G E
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F G N V G W I D E S P E A -
配列番号：４８
長さ：３９３
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MASLLSLSVLSAFLASPTLAYSRAECQAPSADPLAGCVPGTLLVSPNSTVTANNSTSFTSVQSAILSLGNTTTPATILILPGTYVEQVNITRPGPVTLLGQTSSPNNSSTNGVKILWRQATGNSVNTFDNAYTSVLTVAPTLESSLTGSGPTGYAVPAGTPFGNEDFRAYNVDFVNDYAPYSAGPALAISISYANAGFYFCGFYSYQDTVYIGKLGNAYFYDSIIAGQTDFLYGFGTAWIQSSQLSLRSCGGGITAWKGTNTSFPNAYGVYIHDSVVEKANASLSIAGLCALGRPWNAQHRSIFANTWLDDSIKPSGYIIWGSTDPRTNNYTFMAEYEDFGPGWNETGRRAANITKVLTEAEYEPYDSLEKVFQYPFSGEFGNVGWIDESPEA*
配列番号：４９
長さ：１３３０（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
TCAGGCTCGTATGCCTTGTCCTTCATTTGCTTGCACTCTAGGGCTGGCTAAGACCTCCTTACTTGAATAATGTATCTCTCTACGTCCGCCTTTATAGTCTGCCTGGCGGCTCCAAAACCCCTGAGCCTCACAACATTCATTCGCTTAACC
ATGCATAGTTCTTCCATCCTTTTCAGCCTTTTCGGCTCCGCACTCGCTCTGACATCTCCACCGCCAGGAGCGCTGACTGTTGGAGGCTCTGAGGGAAAATTCTCCACCGTTCAAGCTGCGGTTGACGCTCTCCAGAACACCACTGCTCGGCAATCCATATTCATCTACTCCGGCACTTACGAGGAGCAGGTGTATATCGCCAAACACAATGGCCCCATTTCCATTTATGGACAAGCCTCGGATGACAGCTCATACCACACCAATACTGTCACTCTCTCTTTCGGCCTCAGCCAGGCCTTCAACCTTAGCAACGACCTCACGGCCACCCTCCGCGCTCACTCTCCCGATTTCAACTTGTACAACGTGAATGTGGAGAACACCTACGGCAAAGGGAGCCAGGCCGTCGCTGTCTCGGCCTACGGTACCGAGCAGGCATACTACGGCTGCAAGCTCACGGGCTTCCAAGACACCCTCCTCACCCAGAGAGGCAGGCACTACTTCGTAAACACCTACATTGAAGGTAAGGAGGTCTTTCTCAAGCTGCGGAAAGCGCGGTCTCTGACGGACATGCACAGGCGCCACCGACTTCATTTTCGGCCAGTATTCCGCGGCCTGGTTTGAGAACTGCGACCTGCGCGTCCCCGCGGCCAAGCAGGGATGGGTCACCGCGAGCGGCCGCAACACGACCAACGACGGCTGGTATGTCATCAACGGAGGCAGCGTGCAAGCGGCACCCGGCCAGAACGTAACTGCCGGCGCGTACTTCCTGGGCCGGCCGTGGCGCAGCTTCGCGCGCGCCGTCTTCCAGAACGTCTACTTGAGCGAGGTCATCAACCCTGCGGGCTGGGCCATCTGGTCCACGAGCACGCCCAACACGGGCAACGTCACGTTCGCGGAGTACAACAACACCGGACCTGGTGCTTCCAACGGGACGCGGGCCAGCTTTTCGCAGCAGCTGGCGGAGCCGGTGGACATCACGGAGGTGCTAGGATCGAACTACACACTCTGGATTGATCCCAAGTTCTTGTGAATAGCAAGCGGGTAGAAAGCCGCGGTACGAACGCCTTTGCCGTAATTAGATAATCCCAGGAAGACGGAGAGAATGATTATCTTCTCCTCTAATGCGCCGTGGGACGACGGATCCGTGACTGAATAGTGAGAGCAAAAGTGCGCCTGCATG
配列番号：５０
長さ：９７５
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（９７５）
atgcatagttcttccatccttttcagccttttcggctccgcactcgctctgacatctcca
M H S S S I L F S L F G S A L A L T S P
ccgccaggagcgctgactgttggaggctctgagggaaaattctccaccgttcaagctgcg
P P G A L T V G G S E G K F S T V Q A A
gttgacgctctccagaacaccactgctcggcaatccatattcatctactccggcacttac
V D A L Q N T T A R Q S I F I Y S G T Y
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E E Q V Y I A K H N G P I S I Y G Q A S
gatgacagctcataccacaccaatactgtcactctctctttcggcctcagccaggccttc
D D S S Y H T N T V T L S F G L S Q A F
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N L S N D L T A T L R A H S P D F N L Y
aacgtgaatgtggagaacacctacggcaaagggagccaggccgtcgctgtctcggcctac
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G T E Q A Y Y G C K L T G F Q D T L L T
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Q R G R H Y F V N T Y I E G A T D F I F
ggccagtattccgcggcctggtttgagaactgcgacctgcgcgtccccgcggccaagcag
G Q Y S A A W F E N C D L R V P A A K Q
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G W V T A S G R N T T N D G W Y V I N G
ggcagcgtgcaagcggcacccggccagaacgtaactgccggcgcgtacttcctgggccgg
G S V Q A A P G Q N V T A G A Y F L G R
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P W R S F A R A V F Q N V Y L S E V I N
cctgcgggctgggccatctggtccacgagcacgcccaacacgggcaacgtcacgttcgcg
P A G W A I W S T S T P N T G N V T F A
gagtacaacaacaccggacctggtgcttccaacgggacgcgggccagcttttcgcagcag
E Y N N T G P G A S N G T R A S F S Q Q
ctggcggagccggtggacatcacggaggtgctaggatcgaactacacactctggattgat
L A E P V D I T E V L G S N Y T L W I D
cccaagttcttgtga
P K F L -
配列番号：５１
長さ：３２４
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MHSSSILFSLFGSALALTSPPPGALTVGGSEGKFSTVQAAVDALQNTTARQSIFIYSGTYEEQVYIAKHNGPISIYGQASDDSSYHTNTVTLSFGLSQAFNLSNDLTATLRAHSPDFNLYNVNVENTYGKGSQAVAVSAYGTEQAYYGCKLTGFQDTLLTQRGRHYFVNTYIEGATDFIFGQYSAAWFENCDLRVPAAKQGWVTASGRNTTNDGWYVINGGSVQAAPGQNVTAGAYFLGRPWRSFARAVFQNVYLSEVINPAGWAIWSTSTPNTGNVTFAEYNNTGPGASNGTRASFSQQLAEPVDITEVLGSNYTLWIDPKFL*
配列番号：５２
長さ：７７０６（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
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配列番号：５３
長さ：５８９５
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（５８９５）
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ccccgacgctggaagcgccttgggcactggcttggcagtatcgagctggccggggaacat
P R R W K R L G H W L G S I E L A G E H
gccaggccagatgtgctcgcaactcgtattgcatacgggataatacaacgtgcacactct
A R P D V L A T R I A Y G I I Q R A H S
tggcgtgcaatataa
W R A I -
配列番号：５４
長さ：１９６４
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MYIYGSTLTPTASNALLVYNKGVSSGTVVTTNSTVVFDSCTVTPKPGTTVTGISLAAANGVGSIVVYRNSVLPGFILSTGIHVDAKTQAAQNFYGEFGNTGAGSYSSNSAARASYVKSLSVDQLSQFSVDQVFGTANTNWIDSSVISLVQDSDASQAAKATTAGVVSYTTTSSSSSTTSSVLSSSLVTASGSSVSTSSSSVSSTSSTSASASDAPSLSSSAALASSVPGSSSNTTVTTSGTASSSSVTGSSFALSTSSISSSVSTPGDTASSTAAASNSTSSCALPSSVPTTARVVGPAGSCANYTSIADAVKDLSTDQSKTEYVYILAGTYTEQIIFSRVGPTVFRGETSSELDQSSNKVTIKSSTGVPSSSGGSSSTAPFQATQYYSKSISFYNINFENTYAAATGYNAVALSSKALKAYYYNCGITSSQGALLLNFGAHFFSGCKITGTTDIVWGQGGAYIYNSKIVSTGTTTGQSLSAQSYQSQYNPSQFVFDTCAFVPNDSTVPKASTYLGRDYTASARVAVINSYLDAHITPVGWLIASKTTNVTFVEASNSGPGASTASRVSQIVTDTSAYAANNVLGSLSIDTAAVAPVAAFPDSVYGSPLSPSSSTVLANSTTATSVSASTSSTSAAATAANTLIVSTTPASGEYGNVTAAIAALPNDSKEYTIYIRAGTYQEQFTIVRNGKVTLRGETAFPNDFSQNQVTIQFSYGVLTSAGQNELTPVINAKKNDGSGLALYNINFINTYPQTKNTAALAADFYGTNMAAYGCKFVGYQDTLLANKGTQVFSNSYIEGSIDYIWGFSTAYFHQCYIASNTAGGYISAMSRASASATGGYVFDSCYVTYTSTYGSTFGTSYLGRPYSSYSIAVYMNSFIDKHISPAGWAVWQTSNPQTDNVLFGEFNNTGPGSWSSSRASFATNLTESQADAYKLSTWIGSTSWLDMDAYNYVPSYDISGAAGASTTTPSASASSTTATATATWAHPSSGATPPIGAVLVSVGGSVNGSYSNLTAALASLPSDSSTQVIFMYPGTYNEQPPAVNRPGPIQIIGAQDGNPGQSYKTNKVILTQSRGLSVSPLPTGHSDAETATFSTTSNKIAMYNIDIINSDNLDGSLSSYVTLAGSIYGSRIAFYGCSFIGWQDTLLTGSTSGYQYYESCYIDGAIDFIWGYSKAYFKGCTIGAKRQKSAITAHSRASSSAVGGYIFDQCLFTAASSATVDLTQSVYLGRPYSKYALVVVKNSYLDKTIQPAGWKIWSATDPRTDYVTFAEFNNSGPGNWENNAAARTAFGYCTLLTSDTYSLSAVMDSPSDWIDMTYWDSITTPTVAAVATGNTTTAVNGTSVYDGTTPPAGALIVSKTAIEGVTTYDTIQSALNALPTSSSKTGTIFIYPGVYSEQLVLSKSGTTVFIGYSNSTDDYLQNQVTIDFNKGIDTQADASNSDSATVYATGNYFQAYNINFKNSFGTTEDYASLGFGVKSSKYASLYGCQVWGNQDSLLINGYFFAFNSLIVGNIDMIWGSGAGYFLSSTISPNTDDVSLTASKRATNTTAAGFVFDQCTVKPAPGTGPFTEISLGRPWNNLARVAYIETYLDSSVEAAGWSQWSKSNPQTEGVTFAEYGNYGPGASTSGRAKFSTQLSAADAAQFQLANFFAVTSWINFTRIDVQPFVASEVVVPTSAVTSSVLLSSTLSTPISSSTLILSTLFLTKVTTDKETLFTTVTGAVPTLTSTQTITLDMGATVTPDPVYKTSTVKSTTTIIETVSQPDVTQTSTVVVTSDIGTTITPEPSTITTVLKQTTTVFATSTKAPQTITEKSTITSTSLATRTLDPITSTLSLGSTVYVTSVFTPKAARVTSSLTITTGTGGTSTKTTKATTTYVTVTSMISPETTRRTEGTWGKLENSLSVCPTSIPCHLWPFDGELPRRWKRLGHWLGSIELAGEHARPDVLATRIAYGIIQRAHSWRAI*
配列番号： 55
長さ: 1281 (150 bp 5’ UTRおよび150 bp 3’ UTRを含む)
型: DNA
生物: M. phaseolina
CACCGGTTGTTGATCATTTACACCCTCAGCGAGCATTCCCGGCCAGGCGCCTCTTGTTGAACACTGTCCAGTCCTTCACTCCTCTCCTTCCACCCGCTACCCGGTCTTTTTCCTTTTGCCATTCCAATTGCGTGAACCGTCCATCACAGCATGCCTCGCCTCGCCAGCCTCCTCGCCCTTGCAAGCCCAGTGCTTGCCCTGACCTCCCCTCCGTCAGGCGCCCTCACCGTCGGCTCCAGCGGCAAGTACTCGACCATCCAGGACGCCGTCGACGCGCTCAGCACCAGCTCCTCGTCGGCCCAGACCATCTTCATCTACCAGGGCACCTACAAGGAACAAGTCGTGATCCCGAAGCTATCGGGCGCCCTCACCATCTACGGCTACTCGAAGGATGGATCATCGTACAGCGGCAACACCGTGACCATCAGCGCGGGCAAGTCGCAGGCCGACGGCCTCTCCAACGACGGCACCGCCACCCTCGCCGTCCACACGGGCAACATCAAGGTCTACAACATCAACGTCGCCAACACGTACGGCTCCGGCTCGCAGGCCGTCGCGCTGTCGGCCTACGCCAGCGGCAACCACGGCTACTACGGCGTCAAGCTCACGGGCTTCCAAGACACGCTCCTGGCGCAGGAGGGCAAACAAGTCTACGCCAACTCGTACATCGAGGGCGCGACCGATTTCATTTTCGGCCAGAAGGCCGTCGCGTGGTTTGAGAACTGCGACCTGCGCATCGCCTCGGCCTCGCTCGGCTACGTGACGGCCAACGGCCGCGACAGCAGCTCCAACCCATCCTACTACGTCATCAACAACTCGACCGTCGCCGCCGCCGACGGCGCCACCGTCAAGAGCGGCGGCATCTACCTCGGCCGCCCCTGGCGCAACTACGCCCGCGTCGTCTTCCAGGAGACCAGCCTGTCCAACATCATCAACAGCGCCGGCTGGGTCCAATGGGGCAGCAGCGACCCACGCACCGACAATGTCAACTTCGCCGAGTACAAAAACTCGGGCGCCGGCGCCTCTACCAGCGGCCGTGCTAGCTTTTCCAAGCAGTTGAGCAGCCCCGTCAGCATCTCGGAAGTCTTGGGCAGCAACTACGCCGACTGGATCGACACCAGCTACTTCTAAACGCGTGAGGCTTCGCTAATGTCGGTTGGATCGGATGGAGGCGGGATGTAGCATGCAAGGAACCGGCAGGACTGTTTTAACTTTCTAATGTGGATATTtttGTCTCTCGGACAAATATAAAAATAAGCTTTCTGGAGTGACTTTTGATGA
配列番号： 56
長さ: 981
型: DNA
生物: M. phaseolina
特徴名/キー: CDS
位置: (1)……(981)
atgcctcgcctcgccagcctcctcgcccttgcaagcccagtgcttgccctgacctcccct
M P R L A S L L A L A S P V L A L T S P
ccgtcaggcgccctcaccgtcggctccagcggcaagtactcgaccatccaggacgccgtc
P S G A L T V G S S G K Y S T I Q D A V
gacgcgctcagcaccagctcctcgtcggcccagaccatcttcatctaccagggcacctac
D A L S T S S S S A Q T I F I Y Q G T Y
aaggaacaagtcgtgatcccgaagctatcgggcgccctcaccatctacggctactcgaag
K E Q V V I P K L S G A L T I Y G Y S K
gatggatcatcgtacagcggcaacaccgtgaccatcagcgcgggcaagtcgcaggccgac
D G S S Y S G N T V T I S A G K S Q A D
ggcctctccaacgacggcaccgccaccctcgccgtccacacgggcaacatcaaggtctac
G L S N D G T A T L A V H T G N I K V Y
aacatcaacgtcgccaacacgtacggctccggctcgcaggccgtcgcgctgtcggcctac
N I N V A N T Y G S G S Q A V A L S A Y
gccagcggcaaccacggctactacggcgtcaagctcacgggcttccaagacacgctcctg
A S G N H G Y Y G V K L T G F Q D T L L
gcgcaggagggcaaacaagtctacgccaactcgtacatcgagggcgcgaccgatttcatt
A Q E G K Q V Y A N S Y I E G A T D F I
ttcggccagaaggccgtcgcgtggtttgagaactgcgacctgcgcatcgcctcggcctcg
F G Q K A V A W F E N C D L R I A S A S
ctcggctacgtgacggccaacggccgcgacagcagctccaacccatcctactacgtcatc
L G Y V T A N G R D S S S N P S Y Y V I
aacaactcgaccgtcgccgccgccgacggcgccaccgtcaagagcggcggcatctacctc
N N S T V A A A D G A T V K S G G I Y L
ggccgcccctggcgcaactacgcccgcgtcgtcttccaggagaccagcctgtccaacatc
G R P W R N Y A R V V F Q E T S L S N I
atcaacagcgccggctgggtccaatggggcagcagcgacccacgcaccgacaatgtcaac
I N S A G W V Q W G S S D P R T D N V N
ttcgccgagtacaaaaactcgggcgccggcgcctctaccagcggccgtgctagcttttcc
F A E Y K N S G A G A S T S G R A S F S
aagcagttgagcagccccgtcagcatctcggaagtcttgggcagcaactacgccgactgg
K Q L S S P V S I S E V L G S N Y A D W
atcgacaccagctacttctaa
I D T S Y F -
配列番号： 57
長さ: 326
型: PRT
生物: M. phaseolina
MPRLASLLALASPVLALTSPPSGALTVGSSGKYSTIQDAVDALSTSSSSAQTIFIYQGTYKEQVVIPKLSGALTIYGYSKDGSSYSGNTVTISAGKSQADGLSNDGTATLAVHTGNIKVYNINVANTYGSGSQAVALSAYASGNHGYYGVKLTGFQDTLLAQEGKQVYANSYIEGATDFIFGQKAVAWFENCDLRIASASLGYVTANGRDSSSNPSYYVINNSTVAAADGATVKSGGIYLGRPWRNYARVVFQETSLSNIINSAGWVQWGSSDPRTDNVNFAEYKNSGAGASTSGRASFSKQLSSPVSISEVLGSNYADWIDTSYF*
配列番号： 58
長さ: 1943 (150 bp 5’ UTRおよび150 bp 3’ UTRを含む)
型: DNA
生物: M. phaseolina
CTATATTTCCATTTTTGGGAACGTACGCGTACGCCTTCTGTGGGGCCCCTTACTCCCGGAGGATTGCTGCGGGACTTGGAGAATGTATAAAGTACAGCAATCGAGTTGTCTGCGAGCTAGAGCGTTCTCCAGGCAGTGTCTAAACGTTTCATGATGTTGTCTAACGTCATCGTCGGCCTTCTAGCTGCCGCCTATGGAAAGCCTGTGCTGGCAGCGTTTGGGCTCACAGACAATGGCGACAGTTACACCATTGATGCTGGCTCCACCAATCCCCTGGTAATCACTGTCGACAGTTCCAACTGCGACATCACCTCTTTCGTCTACCGGAGCCAGAAATACCAGTATGCCTCGAAAGGATCCCACATTAGCTCAGGCCTTGGCTCGGCTGATGTGACGGCAGAGACTATTGATGGTAAAGCCTGAAGACTGTGATGCAACTTCCCATCCGCTGACCACCCGCAGATGTAATCAAGGTCACTTGCACAACCGACACACTGATCCACTACTATGTCGTCAAATCCGGAGAGAGCAACGTCTACATGGCTACGTACACTTCAGCTGAGCCTTCAGTGGGAGAGCTGCGCTACATCGCACGACTTGATCCTTCGCTGCTTCCATATGAGTACCCCTTCGGCGACGTCTCCACCACCGCCGACAGCACTTCGACAGTGGAAGGTTCTGACGTCTTCATCGTCGACGGAGAGACTCGCAGCAAATTCTACTCCAGCCAGCGCTTCATCGACGACGACGTCCACTGCGTCTACAGCGACGACGTCCACGCGTGCATGCTGATGCCCCAGTACGAGACCTCGTCCGGCGGGCCGTTCCACCGAGACATCAACACCAACAACGCCGGCGACTCGACCAACCTGTACTGGTACATGAACAGCGGACACGTGCAGACCGAGGCCTTCCGGATGGGCCTCCACGGGCCCTACGCCCTCACGTGGTCGCGCTCTGGCGTGCCCAGTCTCAGCGGCCTCGACTTCTCCTTCATGGCGGACCTCGACCTGGAAGGCTACGTCGCCGACAGCGGGCGCGGCACCGTCTCGGGCACAGCATCCGGCGTCTCCAGCGACTATGAGGTCGTGGTGCACTGGTACAACGACGACGCGCAGTACTGGACGTACGCCTCTTCGTCCGGCGCCTTCACGTCGCCCGCCATGAAGCCGGGGACCTACACCATGGCCCTGTACCAGACCGAACTCAAAGTGGCCACGTCCTCGGTGACGGTCAAGGCCGGATCGGCCACCAGCGCCAACATCGCCAGCACCTGGAGCTCCAATACCACGCTCTTCCAGATCGGCGACTGGGACGGGCAGCCGACCGGCTTCCTCAACGCGGCCAGCCAGCTGCGCATGCACCCGTCCGACTCGCGCATGGCCGACTGGGGCCCCGTCACCTACACCGTCGGCTCGTCCTCCGACAGCTCCGTCCCGATGGCGCTGTTCAAGGACGTCAACGACCCGCTGACCATCAGCTTCACGCTGGCGTCTTCGCAGGCCAGCGGCGCGGCGACGCTGCGCGTCGGCACCACGCTGTCGTTCGCGGGCGGGCGGCCGAGCGTCACCGTCAACGACTACAGCGACTCCGCCGCCGCGCCGACCAAGATCGACTCCCGGGGCGTGACGCGCGGCGCGTATCGCGGGTACGGCGAGATCTACGACTTCGAGCTGCCGGACGGGACGCTGTCGACGAGCAATACGATCACCATTTCGGTGATTTCGGGGAGCAGTGGGGCGGATTTCCTGGAGCCGAATTTTGTGAGTTCTCGCATTCCTCTTGGCCACTAGCATGTTTGAGAGGAATGTGACGCTGACGGTGTGACAGATCCTTGATGCTATTGAGCTGTGGAGATAGGGTTGATAGGTCTGCGGACGTGTTGTGGATGGTTTCGCGGGTCTGGGATCTTGATTGGTTGTTGGGATGGTATGCAGCAAAGA
配列番号： 59
長さ: 1593
型: DNA
生物: M. phaseolina
特徴名/キー: CDS
位置: (1)……(1593)
atgatgttgtctaacgtcatcgtcggccttctagctgccgcctatggaaagcctgtgctg
M M L S N V I V G L L A A A Y G K P V L
gcagcgtttgggctcacagacaatggcgacagttacaccattgatgctggctccaccaat
A A F G L T D N G D S Y T I D A G S T N
cccctggtaatcactgtcgacagttccaactgcgacatcacctctttcgtctaccggagc
P L V I T V D S S N C D I T S F V Y R S
cagaaataccagtatgcctcgaaaggatcccacattagctcaggccttggctcggctgat
Q K Y Q Y A S K G S H I S S G L G S A D
gtgacggcagagactattgatgatgtaatcaaggtcacttgcacaaccgacacactgatc
V T A E T I D D V I K V T C T T D T L I
cactactatgtcgtcaaatccggagagagcaacgtctacatggctacgtacacttcagct
H Y Y V V K S G E S N V Y M A T Y T S A
gagccttcagtgggagagctgcgctacatcgcacgacttgatccttcgctgcttccatat
E P S V G E L R Y I A R L D P S L L P Y
gagtaccccttcggcgacgtctccaccaccgccgacagcacttcgacagtggaaggttct
E Y P F G D V S T T A D S T S T V E G S
gacgtcttcatcgtcgacggagagactcgcagcaaattctactccagccagcgcttcatc
D V F I V D G E T R S K F Y S S Q R F I
gacgacgacgtccactgcgtctacagcgacgacgtccacgcgtgcatgctgatgccccag
D D D V H C V Y S D D V H A C M L M P Q
tacgagacctcgtccggcgggccgttccaccgagacatcaacaccaacaacgccggcgac
Y E T S S G G P F H R D I N T N N A G D
tcgaccaacctgtactggtacatgaacagcggacacgtgcagaccgaggccttccggatg
S T N L Y W Y M N S G H V Q T E A F R M
ggcctccacgggccctacgccctcacgtggtcgcgctctggcgtgcccagtctcagcggc
G L H G P Y A L T W S R S G V P S L S G
ctcgacttctccttcatggcggacctcgacctggaaggctacgtcgccgacagcgggcgc
L D F S F M A D L D L E G Y V A D S G R
ggcaccgtctcgggcacagcatccggcgtctccagcgactatgaggtcgtggtgcactgg
G T V S G T A S G V S S D Y E V V V H W
tacaacgacgacgcgcagtactggacgtacgcctcttcgtccggcgccttcacgtcgccc
Y N D D A Q Y W T Y A S S S G A F T S P
gccatgaagccggggacctacaccatggccctgtaccagaccgaactcaaagtggccacg
A M K P G T Y T M A L Y Q T E L K V A T
tcctcggtgacggtcaaggccggatcggccaccagcgccaacatcgccagcacctggagc
S S V T V K A G S A T S A N I A S T W S
tccaataccacgctcttccagatcggcgactgggacgggcagccgaccggcttcctcaac
S N T T L F Q I G D W D G Q P T G F L N
gcggccagccagctgcgcatgcacccgtccgactcgcgcatggccgactggggccccgtc
A A S Q L R M H P S D S R M A D W G P V
acctacaccgtcggctcgtcctccgacagctccgtcccgatggcgctgttcaaggacgtc
T Y T V G S S S D S S V P M A L F K D V
aacgacccgctgaccatcagcttcacgctggcgtcttcgcaggccagcggcgcggcgacg
N D P L T I S F T L A S S Q A S G A A T
ctgcgcgtcggcaccacgctgtcgttcgcgggcgggcggccgagcgtcaccgtcaacgac
L R V G T T L S F A G G R P S V T V N D
tacagcgactccgccgccgcgccgaccaagatcgactcccggggcgtgacgcgcggcgcg
Y S D S A A A P T K I D S R G V T R G A
tatcgcgggtacggcgagatctacgacttcgagctgccggacgggacgctgtcgacgagc
Y R G Y G E I Y D F E L P D G T L S T S
aatacgatcaccatttcggtgatttcggggagcagtggggcggatttcctggagccgaat
N T I T I S V I S G S S G A D F L E P N
tttgtgagttctcgcattcctcttggccactag
F V S S R I P L G H -
配列番号：６０
長さ：５３０
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MMLSNVIVGLLAAAYGKPVLAAFGLTDNGDSYTIDAGSTNPLVITVDSSNCDITSFVYRSQKYQYASKGSHISSGLGSADVTAETIDDVIKVTCTTDTLIHYYVVKSGESNVYMATYTSAEPSVGELRYIARLDPSLLPYEYPFGDVSTTADSTSTVEGSDVFIVDGETRSKFYSSQRFIDDDVHCVYSDDVHACMLMPQYETSSGGPFHRDINTNNAGDSTNLYWYMNSGHVQTEAFRMGLHGPYALTWSRSGVPSLSGLDFSFMADLDLEGYVADSGRGTVSGTASGVSSDYEVVVHWYNDDAQYWTYASSSGAFTSPAMKPGTYTMALYQTELKVATSSVTVKAGSATSANIASTWSSNTTLFQIGDWDGQPTGFLNAASQLRMHPSDSRMADWGPVTYTVGSSSDSSVPMALFKDVNDPLTISFTLASSQASGAATLRVGTTLSFAGGRPSVTVNDYSDSAAAPTKIDSRGVTRGAYRGYGEIYDFELPDGTLSTSNTITISVISGSSGADFLEPNFVSSRIPLGH*
配列番号：６１
長さ：２００９（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
TCGCTGATCGTCTTGGATATGCGCCTGGCAGTGCATTCGCGCCGGGGACTACAAAAGCAGGGGACGCATGCCACAACAGAATTGGCTTTTCTTGTCACTGCACTTCCTGCCGCTCCAAGTCCCCCCCTCGCGTTTGAGGGAACCGCCACAATGGCTCTCTTTGCTCTGTTTCTGACCTTTATCTCTCTTTTCGCACCGTCGGTGCTGGCCGCCTTTGGAGTGACTACATCCTCTTCCAGCTATGTTGTCGATGCCGGCTCATCCAACCCCTTCGTTGTTACCATTTCGCGCAGCAGTTGCGACATTACCTCGATCAAGTACCGTGGAGAGGAATTCCAGTACTCCGGCAAGGGTTCGCACATCTCGTCCGGCCTTGGATCTGCGACCGTAACGTCAGAGATCGTCAGCAGTGAGCGTCTCTTGCAACCCGTCATACGCCCCTCAGGCTAACAATCGACAGGCACTTATGCCAAGATCACCTGCACGGCTGGCAGCTTGACCCATTACATTATTGTCAAGTCCGGAGAGAGCTCTTTGTACATGGGCACTTACTTCACTGAGGAGCCCTCGATTGGTGAAGCCCGTTTCATCGCTCGCTTGGACCCGGCCAAGCTCCCTCTCGAATACCCCTACGGCACTGCCTCCACTACTGCTGGGAGCAGCAGCACCGTCGAGGGATCCGACGTCTTTGTTGTGAATGGCCAGACCCGCAGCAAGTTCTACTCTAGCCAACGTTTCATCGACGACAAGGTGCAGTGCGTGTACCGCGATGATGATGCTGTCCACGCTTGCATGATCTTGCAGCCTCTCTCCTACGAGGGATCCAGCGGCGGTCCCTTCTTCAGGGACATCAACACCAACAACGCCGGTGACTCGACCAACCTGTACTTCTACATGAACTCCAACCATGCTCAGACTGAGAGTTACCGTATGGGCTTCCACGGCCCGTACCAGTTGCAGTTCAGCCGCTCTGGTATTCCCAACAGCTTTGACGCTTCGTTCTTCGCCGACCTCAAGCTCTCCGGCTACGTTGCTGAGTCTGCTCGTGGCTACGTCAAGGGTACTGCTTCTGGAGTTGGTAGCTCTTACCAGAAAGTCCTTCATTGGTACAACAGCAACGCGCAGTACTGGGTCTATGCCTCGTCTAACGGTGCCTTTACTTCTCCTGCCATGAAGCCTGGCACCTACACCCAGGTCCTCTACCAGGACGAACTCAAGGTTGCCACCGACTCGGTCACTGTCTCTGCTGGATCGACGGTCACCAAGAACATTGCATCTACCTTCTCTTTCCCTTCGACCATCTGGACAATTGGCGACTGGGACGGCCAGCCATTCGGCTTCCGCAACGCCGACAAGATCGAGCGCATGCACCCGTCCGACAGCCGCATGAGCAGCTGGGGGCCGTTGACCTACACGGTCGGCTCCAGCGCACTGACTGACGTTCCCATGGCGCTCTTCAAGGGCGTCAACACGCCTTTCACCATCAAGTTCACGCTCTCCTCGTCGCAGACAGGTGCGGCGGTCCTCCGGATCGGCACGACTCTGGCCTTCGCCAGCGGCAGGCCGCAGCCCAAGATCAACAGCTACAGCCCTTCGGCGCCGGCGGCACCGACGAAGATCGATTCGCGCGGCGTCACACGTGGCACTTACCGCGGTTTGGGTGAGATCTACACCTTCGACATTCCCGCGGGCACTCTCGTGAGTGGCTCGAACACGATCACCATCGACTGCATCTCGGGAAGCTCGGGCGACACCTACCTGTCTCCCAACTTTGTAAGTTTCGCTCTGCATACCTCCGCCATGCGCCGTGCTAACGCAAGAAACAGATCCTTGACGCCATTGACCTGTACCTCAAGTGAGCGAGGGTCAGGAGAAGGGTGCTAGCTGAGGTTCGCTTCTGTAAATAAGTTTACGTCCTACATTGAACATACATTTTGGCTTTGATTGCCGGTCTGCATTACTCGTCAATACGAAGCTTCGCGAGCGCGCAGCTCCACCGAATGCGTGGC
配列番号：６２
長さ：１６０５
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（１６０５）
atggctctctttgctctgtttctgacctttatctctcttttcgcaccgtcggtgctggcc
M A L F A L F L T F I S L F A P S V L A
gcctttggagtgactacatcctcttccagctatgttgtcgatgccggctcatccaacccc
A F G V T T S S S S Y V V D A G S S N P

ttcgttgttaccatttcgcgcagcagttgcgacattacctcgatcaagtaccgtggagag
F V V T I S R S S C D I T S I K Y R G E
gaattccagtactccggcaagggttcgcacatctcgtccggccttggatctgcgaccgta
E F Q Y S G K G S H I S S G L G S A T V
acgtcagagatcgtcagcagcacttatgccaagatcacctgcacggctggcagcttgacc
T S E I V S S T Y A K I T C T A G S L T
cattacattattgtcaagtccggagagagctctttgtacatgggcacttacttcactgag
H Y I I V K S G E S S L Y M G T Y F T E
gagccctcgattggtgaagcccgtttcatcgctcgcttggacccggccaagctccctctc
E P S I G E A R F I A R L D P A K L P L
gaatacccctacggcactgcctccactactgctgggagcagcagcaccgtcgagggatcc
E Y P Y G T A S T T A G S S S T V E G S
gacgtctttgttgtgaatggccagacccgcagcaagttctactctagccaacgtttcatc
D V F V V N G Q T R S K F Y S S Q R F I
gacgacaaggtgcagtgcgtgtaccgcgatgatgatgctgtccacgcttgcatgatcttg
D D K V Q C V Y R D D D A V H A C M I L
cagcctctctcctacgagggatccagcggcggtcccttcttcagggacatcaacaccaac
Q P L S Y E G S S G G P F F R D I N T N
aacgccggtgactcgaccaacctgtacttctacatgaactccaaccatgctcagactgag
N A G D S T N L Y F Y M N S N H A Q T E
agttaccgtatgggcttccacggcccgtaccagttgcagttcagccgctctggtattccc
S Y R M G F H G P Y Q L Q F S R S G I P
aacagctttgacgcttcgttcttcgccgacctcaagctctccggctacgttgctgagtct
N S F D A S F F A D L K L S G Y V A E S
gctcgtggctacgtcaagggtactgcttctggagttggtagctcttaccagaaagtcctt
A R G Y V K G T A S G V G S S Y Q K V L
cattggtacaacagcaacgcgcagtactgggtctatgcctcgtctaacggtgcctttact
H W Y N S N A Q Y W V Y A S S N G A F T
tctcctgccatgaagcctggcacctacacccaggtcctctaccaggacgaactcaaggtt
S P A M K P G T Y T Q V L Y Q D E L K V
gccaccgactcggtcactgtctctgctggatcgacggtcaccaagaacattgcatctacc
A T D S V T V S A G S T V T K N I A S T
ttctctttcccttcgaccatctggacaattggcgactgggacggccagccattcggcttc
F S F P S T I W T I G D W D G Q P F G F
cgcaacgccgacaagatcgagcgcatgcacccgtccgacagccgcatgagcagctggggg
R N A D K I E R M H P S D S R M S S W G
ccgttgacctacacggtcggctccagcgcactgactgacgttcccatggcgctcttcaag
P L T Y T V G S S A L T D V P M A L F K
ggcgtcaacacgcctttcaccatcaagttcacgctctcctcgtcgcagacaggtgcggcg
G V N T P F T I K F T L S S S Q T G A A
gtcctccggatcggcacgactctggccttcgccagcggcaggccgcagcccaagatcaac
V L R I G T T L A F A S G R P Q P K I N
agctacagcccttcggcgccggcggcaccgacgaagatcgattcgcgcggcgtcacacgt
S Y S P S A P A A P T K I D S R G V T R
ggcacttaccgcggtttgggtgagatctacaccttcgacattcccgcgggcactctcgtg
G T Y R G L G E I Y T F D I P A G T L V
agtggctcgaacacgatcaccatcgactgcatctcgggaagctcgggcgacacctacctg
S G S N T I T I D C I S G S S G D T Y L
tctcccaactttatccttgacgccattgacctgtacctcaagtga
S P N F I L D A I D L Y L K -
配列番号：６３
長さ：５３４
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MALFALFLTFISLFAPSVLAAFGVTTSSSSYVVDAGSSNPFVVTISRSSCDITSIKYRGEEFQYSGKGSHISSGLGSATVTSEIVSSTYAKITCTAGSLTHYIIVKSGESSLYMGTYFTEEPSIGEARFIARLDPAKLPLEYPYGTASTTAGSSSTVEGSDVFVVNGQTRSKFYSSQRFIDDKVQCVYRDDDAVHACMILQPLSYEGSSGGPFFRDINTNNAGDSTNLYFYMNSNHAQTESYRMGFHGPYQLQFSRSGIPNSFDASFFADLKLSGYVAESARGYVKGTASGVGSSYQKVLHWYNSNAQYWVYASSNGAFTSPAMKPGTYTQVLYQDELKVATDSVTVSAGSTVTKNIASTFSFPSTIWTIGDWDGQPFGFRNADKIERMHPSDSRMSSWGPLTYTVGSSALTDVPMALFKGVNTPFTIKFTLSSSQTGAAVLRIGTTLAFASGRPQPKINSYSPSAPAAPTKIDSRGVTRGTYRGLGEIYTFDIPAGTLVSGSNTITIDCISGSSGDTYLSPNFILDAIDLYLK*
参照による組み込み
本明細書において引用されたすべての米国特許、米国公開特許出願、およびＰＣＴ出願公開は参照により組み込まれる。
等価物
本明細書において、いくつかの本発明の実施形態が記載されかつ例証されてきたが、当業者は、本明細書に記載された、機能を実施するため、ならびに／または結果および／もしくは１つ以上の利点を得るために、様々な他の手段および／または構造を容易に想定でき、そしてこのようなバリエーションおよび／または改変の各々が、本明細書の範囲内にあると見なされる。当業者は、日常的な実験を超えない程度を用いて、本明細書に記載された本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を認識し、または確認することが可能である。従って、前述の実施形態は、例示目的のみのために提示されることが理解され、そして添付の特許請求の範囲内およびそれに対する等価物の範囲内で；具体的に記載されかつ特許請求されているとしているもの以外として、本発明は実施されてもよい。
関連出願
本願は、２０１２年８月１６日に出願された米国仮特許出願シリアル番号６１／６８３９１４に対する優先権の利益を主張し；その内容は参照により組み込まれる。
技術分野
本発明は、ペクチン酸リアーゼ活性を有するＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａから単離されたポリペプチドおよびそのポリペプチドをコードする単離されたポリヌクレオチド、ならびにこれらのポリヌクレオチドおよびポリペプチドを製造する方法および使用する方法に関する。本発明はまた、これらのポリヌクレオチドを備える核酸構築物、ベクター、および宿主細胞、ならびにこれらのポリペプチドを製造する方法および使用する方法に関する。本発明のポリペプチドは、数ある中でも、繊維および織物の浸漬およびゴム除去のために繊維産業において；果物および野菜ジュースの抽出のために食品産業において；良質の紙の製造のために製紙産業において；ならびに、コーヒーおよび茶の発酵、油抽出、およびペクチン廃棄物水処理のためにもまた、使用することができる。
ペクチンは、植物の一次細胞壁の中層において存在し、細胞内セメントとして作用する一群の複合ヘテロポリマーである。これらはまた、それらのコロイド的性質により、植物の水調節において重要な役割を有する。細胞壁間に配置されている中層は、主として、プロトペクチン（不溶型のペクチン）から形成されている。
ペクチンは、２つの異なる明確な領域：「スムーズ」領域と「ヘアリー」領域から構成される。「スムーズ」領域は、α−１，４−結合型Ｄ−ガラクツロン酸のバックボーンからなり、メタノールでエステル化されたカルボキシル基をいくつか有するポリガラクツロン酸を形成する（Ｒｏｕｓｅ Ａ．Ｐｅｃｔｉｎ：ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ，ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．Ｉｎ：Ｎａｇｙ Ｓ，Ｓｈａｗ Ｐ，Ｖｅｌｄｈｕｉｓ Ｍｅｄｓ．Ｃｉｔｒｕｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ Ｉ．Ｗｅｓｔｐｏｒｔ ＣＴ：ＡＶＩ ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．１９７７）。「ヘアリー」領域においては、ガラクツロン酸のバックボーンは、α−１，２−結合型Ｌ−ラムノース単位によって壊れている。
ペクチン／ペクチン酸リアーゼは、スムーズ領域においてペクチンを脱重合し、これは、β−脱離を介してグリコシド結合を切断して、４，５−不飽和非還元末端であるオリゴマーを生じる（Ｌｏｍｂａｒｄ Ｖ，Ｂｅｒｎａｒｄ Ｔ，Ｒａｎｃｕｒｅｌ Ｃ，Ｂｒｕｍｅｒ Ｈ，Ｃｏｕｔｉｎｈｏ ＰＭ，Ｈｅｎｒｉｓｓａｔ Ｂ．Ａ ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｌｙａｓｅｓ ｆｏｒ ｇｌｙｃｏｇｅｎｏｍｉｃｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２０１０；４３２（３）：４３７−４４４）。一方、ラムノガラクツロナーゼは、ペクチンのヘアリー領域の中で切断を行う（Ｊｅｎｓｅｎ ＭＨ，Ｏｔｔｅｎ Ｈ，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ Ｕ，Ｂｏｒｃｈｅｒｔ ＴＶ，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ ＬＬ，Ｌａｒｓｅｎ Ｓ，Ｌｅｇｇｉｏ ＬＬ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｅｌｕｃｉｄａｔｅ ｔｈｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｒｈａｍｎｏｇａｌａｃｔｕｒｏｎａｎ ｌｙａｓｅ ｆｒｏｍ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１０；４０４（１）：１００−１１１）。
ペクチンエステラーゼは、ペクチンをメタノールとポリガラクツロン酸に加水分解する。この酵素は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種、Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｍｏｎｉｌｆｏｒｍｅ、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｓｔｏｌｏｎｉｆｅｒ、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ種などを含む数種の真菌によって産生できる（Ｐｏｌｉｚｅｌｉ ＭＬ，Ｊｏｒｇｅ ＪＡ，Ｔｅｒｅｎｚｉ ＨＦ．Ｐｅｃｔｉｎａｓｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ ｃｒａｓｓａ：ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｏｌｙｇａｌａｃｔｕｒｏｎａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９９１；１３７：１８１５−１８２３）。しかし、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓは、ペクチンエステラーゼの商業的製造のための主要な供給源である（Ｔｏｒｒｅｓ ＥＦ，Ａｇｕｉｌａｒ Ｃ，Ｅｓｑｕｉｖｅｌ ＪＣＣ，Ｇｏｎｚａｌｅｓ ＧＶ．Ｐｅｃｔｉｎａｓｅ．Ｉｎ：Ｅｎｚｙｍｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｎｄｅｙ，Ａ．，Ｗｅｂｂ，Ｃ，Ｓｏｃｃｏｌ，Ｃ．Ｒ．，Ｌａｒｒｏｃｈｅ，Ｃ （Ｅｄｓ），Ａｓｉａｔｅｃｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｅｒｓ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｄｅｌｈｉ，Ｉｎｄｉａ，２００５．ｐｐ．２７３−２９６）。
ペクチン分解酵素は、主として、フルーツジュース製造またはワイン製造などの果物および野菜を処理するための、食品産業における重要なツールである。他の応用分野には、パルプおよび製紙産業（Ｒｅｉｄ Ｉ，Ｒｉｃａｒｄ Ｍ．Ｐｅｃｔｉｎａｓｅ ｉｎ ｐａｐｅｒｍａｋｉｎｇ：ｓｏｌｖｉｎｇ ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｐｒｏｂｌｅｍｓ ｉｎ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｐｕｌｐｓ ｂｌｅａｃｈｅｄ ｗｉｔｈ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｅｒｏｘｉｄｅ．Ｅｎｚ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．２０００；２６：１１５−１２３）、動物の飼料（Ｂａｒｒｅｔｏ ｄｅ Ｍｅｎｅｚｅｓ ＴＪ，Ｓａｌｖａ ＪＧ，Ｂａｌｄｉｎｉ ＶＬ，Ｐａｐｉｎｉ ＲＳ，Ｓａｌｅｓ ＡＭ．Ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｏｆ ｃｉｔｒｕｓ ｗａｓｔｅｓ ｂｙ ｓｏｌｉｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８９；２３：１６７−１７１）、亜麻およびその他の植物繊維の浸漬（Ｈｏｏｎｄａｌ ＧＳ，Ｔｉｗａｒｉ ＲＰ，Ｔｉｗａｒｉ Ｒ，Ｄａｈｉｙａ Ｎ，Ｂｅｇ ＱＫ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｅｃｔｉｎａｓｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：ａ ｒｅｖｉｅｗ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０００；９：４０９−４１８）、コーヒーおよび茶の発酵（Ｇａｒ ＪＧ．Ｔｅａ，ｃｏｆｆｅｅ ａｎｄ ｃｏｃｏａ．Ｉｎ：ｗｏｏｄ ＢＪＢ，ｅｄｉｔｏｒ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｆｏｏｄｓ．１９８５；ｖｏｌ ２．Ｌｏｎｄｏｎ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉ．Ｌｔｄ．ｐｐ：１３３−１５４）、油抽出（Ｓｃｏｔｔ Ｄ．Ｅｎｚｙｍｅｓ，ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ．Ｉｎ：Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｇｒａｙｓｏｎ Ｍ，Ｅｋａｒｔｈ Ｄ ａｎｄ Ｏｔｈｍｅｒ Ｋ（ｅｄｓ），１９７８；Ｗｉｌｅｙ，ＮＹ．ｐｐ：１７３−２２４）、綿繊維のバイオ精錬（Ｓｉｎｇｈ Ｒ，Ｓａｘｅｎａ Ｓ，Ｇｕｐｔａ Ｒ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｐｅｃｔｉｎｏｌｙｔｉｃ ｅｎｚｙｍｅｓ：Ａ ｒｅｖｉｅｗ．Ｐｒｏｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００５；４０：２９３１−２９４４）、植物靱皮繊維のゴム除去（Ｋａｐｏｏｒ Ｍ，Ｂｅｇ ＱＫ，Ｂｈｕｓｈａｎ Ｂ，Ｓｉｎｇｈ Ｋ，Ｄａｄｉｃｈ ＫＳ，Ｈｏｏｎｄａｌ ＧＳ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｋａｌｉｎｅ ａｎｄ ｔｈｅｒｍｏｓｔａｂｌｅ ｐｏｌｙｇａｌａｃｔｕｒｏｎａｓｅ ｆｒｏｍ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐ．ＭＧｃｐ−２ ｉｎ ｄｅｇｕｍｍｉｎｇ ｏｆ ｒａｍｉｅ（Ｂｏｅｈｍｅｒｉａ ｎｉｖｅａ） ａｎｄ ｓｕｎｎ ｈｅｍｐ（Ｃｒｏｔｏｌａｒｉａ ｊｕｎｃｉａ） ｂａｓｔ ｆｉｂｅｒｓ．Ｐｒｏｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００１；３６：８０３−８１７）、繊維産業（Ｋａｒｍａｋａｒ ＳＲ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ ｏｆ ｔｅｘｔｉｌｅｓ．Ｉｎ：Ｔｅｘｔｉｌｅ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｓｅｒｉｅｓ １ｓｔ ｅｄ．，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂ．Ｖ．１９９９；ｐ．１２）、および廃棄物管理（Ｋａｓｈｙａｐ ＤＲ，Ｖｏｈｒａ ＰＫ，Ｃｈｏｐｒａ Ｓ，Ｔｅｗａｒｉ Ｒ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｐｅｃｔｉｎａｓｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ ｓｅｃｔｏｒ：ａ ｒｅｖｉｅｗ．Ｂｉｏｒｅｓ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．２００１；７７：２１５−２２７）が挙げられる。ＷＯ ９８／４５３９３は、泥土に対して顕著な界面活性効果を有する、プロトペクチナーゼを含有する界面活性剤組成物を開示している。
これらの酵素は、業界において、個別にまたはカクテル型（混合型）のいずれかで使用される。例えば、食品業界において、これは、ゲル化（ｇｅｌｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）のために必要とされるペクチンエステラーゼなどの個別の酵素として、ならびに、ペクチンエステラーゼと、植物材料の液化のために必要とされるポリガラクツロナーゼなどの異なる酵素の組合せのいずれかとして使用される（Ｈｅｌｄｔ−Ｈａｎｓｅｎ ＨＰ，Ｋｏｆｏｄ ＬＶ，Ｂｕｄｏｌｆｓｅｎ Ｇ，Ｎｉｅｌｓｅｎ ＰＭ，Ｈuｔｔｅｌ Ｓ，Ｂｌａｄｔ Ｔ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔａｉｌｏｒ ｍａｄｅ ｐｅｃｔｉｎａｓｅｓ．Ｉｎ：Ｖｉｓｓｅｒ Ｊ ａｎｄ Ｖｏｒａｇｅｎ ＡＪＧ （ｅｄｓ），Ｐｅｃｔｉｎ ａｎｄ Ｐｅａｃｔｎａｓｅｓ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１９９６；１４：４６３−４７４）。
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒから得られたこれらのいくつかの酵素のクローニングおよび発現が報告されてきた。ＥＰ ０ ２７８ ３５５は、ペクチンリアーゼ遺伝子のクローニング、その配列、および発現を記載している。ＥＰ ０ ３５３ １８８は、いくつかの他のペクチンリアーゼを加えている。ＥＯ ０ ４２１ ９１９は、２つのポリガラクツロナーゼを開示しており、別のエンド−ポリガラクツロナーゼがＥＰ ０ ３８８ ５９３に開示されている。これらの両方の特許出願は、遺伝子の供給源としてＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒを使用した。ＷＯ ９４／１４９５２は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｃｕｌｅａｔｕｓから入手可能であるエンド−ポリガラクツロナーゼ活性を有する３つの酵素を記載している。しかし、どの刊行物も、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ由来のペクチン分解酵素をコードしている遺伝子のクローニングに関して報告がされていない。
ヨーロッパ特許公開０ ２７８ ３５５号公報 ヨーロッパ特許公開０ ３５３ １８８号公報 ヨーロッパ特許公開０ ４２１ ９１９号公報 国際特許公開ＷＯ ９４／１４９５２号公報
Ｒｏｕｓｅ Ａ．Ｉｎ：Ｎａｇｙ Ｓ，Ｓｈａｗ Ｐ，Ｖｅｌｄｈｕｉｓ Ｍ ｅｄｓ．Ｃｉｔｒｕｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ Ｉ．Ｗｅｓｔｐｏｒｔ ＣＴ：ＡＶＩ ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｉｎｃ．１９７７ Ｌｏｍｂａｒｄ Ｖ，Ｂｅｒｎａｒｄ Ｔ，Ｒａｎｃｕｒｅｌ Ｃ，Ｂｒｕｍｅｒ Ｈ，Ｃｏｕｔｉｎｈｏ ＰＭ，Ｈｅｎｒｉｓｓａｔ Ｂ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．２０１０；４３２（３）：４３７−４４４ Ｊｅｎｓｅｎ ＭＨ，Ｏｔｔｅｎ Ｈ，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ Ｕ，Ｂｏｒｃｈｅｒｔ ＴＶ，Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ ＬＬ，Ｌａｒｓｅｎ Ｓ，Ｌｅｇｇｉｏ ＬＬ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１０；４０４（１）：１００−１１１ Ｐｏｌｉｚｅｉｉ ＭＬ，Ｊｏｒｇｅ ＪＡ，Ｔｅｒｅｎｚｉ ＨＦ．，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１９９１；１３７：１８１５−１８２３ Ｔｏｒｒｅｓ ＥＦ，Ａｇｕｉｌａｒ Ｃ，Ｅｓｑｕｉｖｅｌ ＪＣＣ，Ｇｏｎｚａｌｅｓ ＧＶ．Ｉｎ：Ｅｎｚｙｍｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｎｄｅｙ，Ａ．，Ｗｅｂｂ，Ｃ，Ｓｏｃｃｏｌ，Ｃ．Ｒ．，Ｌａｒｒｏｃｈｅ，Ｃ （Ｅｄｓ），Ａｓｉａｔｅｃｈ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｅｒｓ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｄｅｌｈｉ，Ｉｎｄｉａ，２００５．ｐｐ．２７３−２９６ Ｒｅｉｄ Ｉ，Ｒｉｃａｒｄ Ｍ．，Ｅｎｚ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．２０００；２６：１１５−１２３ Ｂａｒｒｅｔｏ ｄｅ Ｍｅｎｅｚｅｓ ＴＪ，Ｓａｌｖａ ＪＧ，Ｂａｌｄｉｎｉ ＶＬ，Ｐａｐｉｎｉ ＲＳ，Ｓａｌｅｓ ＡＭ．Ｐｒｏｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９８９；２３：１６７−１７１ Ｈｏｏｎｄａｌ ＧＳ，Ｔｉｗａｒｉ ＲＰ，Ｔｉｗａｒｉ Ｒ，Ｄａｈｉｙａ Ｎ，Ｂｅｇ ＯＫ．，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０００；９：４０９−４１８ Ｇａｒ ＪＧ．Ｉｎ：ｗｏｏｄ ＢＪＢ，ｅｄｉｔｏｒ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｆｅｒｍｅｎｔｅｄ ｆｏｏｄｓ．１９８５；ｖｏｌ ２．Ｌｏｎｄｏｎ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉ．Ｌｔｄ．ｐｐ：１３３−１５４ Ｓｃｏｔｔ Ｄ．Ｉｎ：Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｇｒａｙｓｏｎ Ｍ，Ｅｋａｒｔｈ Ｄ ａｎｄ Ｏｔｈｍｅｒ Ｋ（ｅｄｓ），１９７８；Ｗｉｌｅｙ，ＮＹ．ｐｐ：１７３−２２４ Ｓｉｎｇｈ Ｒ，Ｓａｘｅｎａ Ｓ，Ｇｕｐｔａ Ｒ．，Ｐｒｏｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００５；４０：２９３１−２９４４ Ｋａｐｏｏｒ Ｍ，Ｂｅｇ ＱＫ，Ｂｈｕｓｈａｎ Ｂ，Ｓｉｎｇｈ Ｋ，Ｄａｄｉｃｈ ＫＳ，Ｈｏｏｎｄａｌ ＧＳ．，Ｐｒｏｃ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００１；３６：８０３−８１７ Ｋａｒｍａｋａｒ ＳＲ．，Ｉｎ：Ｔｅｘｔｉｌｅ ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｓｅｒｉｅｓ１ｓｔ ｅｄ．，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂ．Ｖ．１９９９；ｐ．１２ Ｋａｓｈｙａｐ ＤＲ，Ｖｏｈｒａ ＰＫ，Ｃｈｏｐｒａ Ｓ，Ｔｅｗａｒｉ Ｒ．，Ｂｉｏｒｅｓ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．２００１；７７：２１５−２２７ Ｈｅｌｄｔ−Ｈａｎｓｅｎ ＨＰ，Ｋｏｆｏｄ ＬＶ，Ｂｕｄｏｌｆｓｅｎ Ｇ，Ｎｉｅｌｓｅｎ ＰＭ，Ｈuｔｔｅｌ Ｓ，Ｂｌａｄｔ Ｔ．Ｉｎ：Ｖｉｓｓｅｒ Ｊ ａｎｄ Ｖｏｒａｇｅｎ ＡＪＧ （ｅｄｓ），Ｐｅｃｔｉｎ ａｎｄ Ｐｅａｃｔｎａｓｅｓ．Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．１９９６；１４：４６３−４７４
本発明は、数ある中でも、工業的なプロセスまたは目的において使用できる、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａに由来するペクチン分解酵素の遺伝子およびそれらにコードされるタンパク質を開示するためのゲノミクスアプローチをとる。
数ある中でも、本発明は、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａから導き出せる少なくとも２１個のペクチン分解酵素に関する。本発明はまた、ペクチンの分解における真菌Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａの使用に関する。
本発明の第一の目的は、真菌Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａのペクチン酸リアーゼ（配列番号１、２、４、５、７、８、１０、１１、１３、１４、１６、１７、１９、２０、２２、２３、２５および２６）、ペクチン酸リアーゼＣ（配列番号．２８、２９、３１、３２、３４、３５、３７、３８、４０、４１、４３および４４）、ペクチンエステラーゼ（配列番号．４６、４７、４９、５０、５２、５３、５５および５６）、およびラムノガラクツロナーゼ（配列番号５８、５９、６１および６２）をコードするヌクレオチド配列のセットを開示することである。本発明の各遺伝子について、オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）配列は、それぞれのゲノム配列から、予測されるイントロン配列を削除すること、およびエキソン配列を一緒にスプライシングすることによって、手動で導き出された。これらの酵素遺伝子を備えるベクター、発現ベクター、および宿主細胞もまた含まれる。
さらに、本発明は、遺伝子のＯＲＦ配列から推定されるポリペプチド配列を提供する。本発明のポリペプチド配列は、ペクチン酸リアーゼ（配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４および２７）、ペクチン酸リアーゼＣ（配列番号３０、３３、３６、３９、４２および４５）、ペクチンエステラーゼ（配列番号４８、５１、５４および５７）およびラムノガラクツロナーゼ（配列番号６０および６３）の配列に一致する。本発明はまた、上記に記載されたヌクレオチド配列の相補物を備える単離されたポリヌクレオチドに関する。
本発明の別の目的は、価値のある工業製品の製造のためにペクチン分解の調節、転換のために開発／利用される、第一の目的に示された遺伝子および酵素の分子生物学および遺伝子情報を提供することである。
さらに、本発明の目的は、ペクチン分解ポリペプチドのインビトロ産生を容易にすることであり、本発明はまた、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３に示されるような少なくとも７０％の連続するアミノ酸を含有するポリペプチドを発現することが可能である発現構築物も含む。好ましくは、この発現構築物は、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１に示されるような連続するヌクレオチドを有するＤＮＡまたはｃＤＮＡを挿入している。
本発明の別の目的は、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１に示されるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド鋳型を備える組換え発現構築物を開示し、ここで、このポリヌクレオチド鋳型は、ペクチンを分解する酵素を産生するために宿主細胞中で発現可能である。好ましくは、この組換え遺伝子構築物は、ポリヌクレオチド鋳型の発現を増強するために作動可能に連結されているプロモーター領域をさらに備える。
本発明の好ましい実施形態の１つは、感染ジュート植物から単離されたＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａのｍｓ６株である。単離されたポリペプチドもまた、好ましくは、この株から導き出される。
さらに、本発明の目的は、数ある中でも、フルーツジュース、織物製品、パルプおよび紙、コーヒー、茶の製造、ならびに油抽出のために、全世界的な需要に応じるために、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａからペクチン分解酵素を単離するために潜在的に商業的に実行可能なやり方を提供することである。
本発明のさらなる目的は、動物飼料、フルーツジュース、織物製品、パルプおよび紙、コーヒー、茶の加工、および油抽出、靱皮繊維の浸漬／ゴム除去におけるペクチン分解物質を利用することに向けられている。
これらの用途のいずれかまたはすべては、工業的使用および他の使用のために、研究用製品または供給品のいずれかとしての商業化のためにキットに開発できる。これらのキットは、１つ以上の本発明のＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ遺伝子に対応するポリヌクレオチドもしくはポリペプチド、抗体、および／または他の試薬を備えてもよい。
当業者は、本発明が、目的を実行し、言及されるような結果および利点、ならびにそこに固有であるこれらのものを得るように十分に適合されることを容易に認識する。本明細書に記載される実施形態は、本発明の範囲の限定または制限としては意図されない。
本発明のこれらおよび他の特徴、局面、および利点は、以下の説明および特許請求の範囲を参照すると、より良好に理解されるようになる。
明細書の中に組み込まれかつ明細書の一部を形成する添付の図面は、本発明の実施形態を例証し、そして明細書の記載と一緒に、本発明の原理を説明するために役立つ。
図１は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号１のペクチン酸リアーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図２は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号４のペクチン酸リアーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図３は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号７のペクチン酸リアーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図４は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号１０のペクチン酸リアーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図５は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号１３のペクチン酸リアーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図６は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号１６のペクチン酸リアーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図７は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号１９のペクチン酸リアーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図８は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号２２のペクチン酸リアーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図９は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号２８のペクチン酸リアーゼＣのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１０は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号３１のペクチン酸リアーゼＣのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１１は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号３４のペクチン酸リアーゼＣのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１２は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号３７のペクチン酸リアーゼＣのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１３は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号４０のペクチン酸リアーゼＣのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１４は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号４３のペクチン酸リアーゼＣのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１５は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号４６のペクチンエステラーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１６は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号４９のペクチンエステラーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１７は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号５５のペクチンエステラーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１８は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号５８のラムノガラクツロナーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。 図１９は、ＰＣＲ増幅結果を示す電気泳動したアガロースゲルの画像であり、レーン１は配列番号６１のラムノガラクツロナーゼのポリヌクレオチドであり、レーンＭはＤＮＡ分子量ラダーである。
本明細書に提供される定義および／または方法は、本発明を定義し、本発明の実施において当業者に指針を与える。他に言及されている場合を除いて、用語は、関連分野における当業者による従来的な用法に従って理解される。本明細書に組み込まれるいずれかの特許文献もしくは非特許文献において、または別の箇所で見い出されるいずれかの文献において提供されるいずれかの定義および／または方法に対して、定義および／または方法のいずれかが一致しないことが見い出される程度まで、本願において明確に提供／採用された上記の定義および／または方法は、本明細書で使用されることが理解される。文脈が明確に他のことを示していない限り、単数形の用語「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は複数形の言及を含む。同様に、文脈が明確に他のことを示していない限り、「または（もしくは、あるいは）」という語は「および（ならびに）」を含むことが意図される。従って、「ＡまたはＢを備える」は、Ａ、またはＢ、またはＡおよびＢを含むことを意味する。核酸またはポリペプチドについて与えられる、すべての塩基サイズまたはアミノ酸サイズ、およびすべての分子量または分子質量は、およその値であって、説明のために提供されることがさらに理解される。本明細書に記載されるものと同様または等価な方法および材料が、本開示の実施または試験において使用できるが、適切な方法および材料は以下に記載される。
本発明は、ペクチン分解に関与するＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ遺伝子のヌクレオチド配列を提供する。これらの遺伝子は、食品、動物の飼料、紙、油抽出、織物、排水を含む産業において使用されるか、または産業に対して関心対象であるかのいずれかである、ペクチン分解酵素活性を有するタンパク質をコードする。本発明の遺伝子、それらの同定、特徴付け、修飾、および様々な産業プロセスにおける使用の方法が、本明細書中以下に記載される。
Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａゲノムＤＮＡのヌクレオチド配列は、全ゲノムランダムショットガンＤＮＡ配列決定の試みによって得られた。このゲノムＤＮＡは、感染ジュート（Ｃｏｒｃｈｏｒｕｓ ｓｐｐ．）植物から単離されたＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ ｍｓ６の単離物から調製された。生成されたヌクレオチド配列は、Ｎｅｗｂｌｅｒアセンブラーによってコンティグおよびスキャフォールドを形成するようにアセンブルされた。ヌクレオチド配列は、最初に、推定コード領域、イントロン、およびスプライスジャンクションを同定できる、Ａｕｇｕｓｔｕｓ，Ｇｌｉｍｍｅｒ Ｍ（Ｔｈｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍｄ．）およびＥｖｉｄｅｎｃｅ Ｍｏｄｅｌｅｒ（ＥＶＭ）などのソフトウェアプログラムによって注釈が付けられた。ヌクレオチド配列のさらなる自動および手動の矯正（ｃｕｒａｔｉｏｎ）が、コード領域および他の遺伝子特徴の正確な特徴付けを洗練および確立するために実施された。
ペクチン分解酵素をコードする本発明のゲノム配列は、最初に、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａゲノムＤＮＡのヌクレオチド配列と、他の微生物の既知の酵素遺伝子のヌクレオチド配列との比較によって同定された。これらのＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ遺伝子のヌクレオチド配列、リーディングフレーム、エキソンおよびイントロンの位置、酵素の構造、ならびに、食品および飼料、飲料、織物、および界面活性剤の製造に関与するものなどの様々な産業におけるそれらの潜在的な有用性は不明であった。
Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａからの１４０００を超えるｃＤＮＡが部分的にまたは全体的に配列決定された。これらの中で、ペクチン分解において推定の役割を有する新たな酵素をコードする２１のｃＤＮＡが発見された。
オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）がＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ ｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡライブラリーのクローンの全体的または部分的な配列決定に続いて分析され、さらに、配列分析ソフトウェアを使用することによって、およびデータベース（公的／私的）における既知の配列に対する相同性を決定することによって分析される。
本開示の状況において、本明細書を通して使用される多数の用語は、異なる意味を有することが明確に示されていない限り、示された意味を有する。
「遺伝子」という用語は、本明細書で使用される場合、真菌Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａのゲノム配列、特に、一連の酵素のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド配列として定義される。この用語は、上流、下流、および／またはイントロンのヌクレオチド配列を備える核酸分子をさらに含むことができる。
「オープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）」という用語は、いかなる終止コドンも伴うことなく、アミノ酸をコードする一連のヌクレオチドトリプレットを意味し、トリプレット配列は、特定の生物のために適切なコドン使用頻度情報を使用してタンパク質に翻訳可能である。
「コード配列」または「コード領域」とは、配列が発現されるときに、アミノ酸またはポリペプチドなどの遺伝子産物を産生するために必要な配列情報を有するアミノ酸分子をいう。コード配列は、翻訳領域内に非翻訳配列（例えば、イントロンまたは５’もしくは３’非翻訳領域）を備えてもよく、またはこのような介入する非翻訳配列を欠いてもよい（例えば、ｃＤＮＡにおけるように）。
本明細書で使用される場合、「ポリヌクレオチド」は、核酸フラグメントなどのヌクレオチド配列である。ポリヌクレオチドは、一本鎖または二本鎖であるＲＮＡまたはＤＮＡのポリマーであってもよく、これは、任意に、合成、非天然、または変化したヌクレオチド塩基を含有する。ＤＮＡのポリマーの型のポリヌクレオチドは、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、合成ＤＮＡ、またはこれらの混合物の１つ以上のセグメントから構成されてもよい。本発明の単離されたポリヌクレオチドはまた、配列番号１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８、６１、２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９および６２、またはこのような配列の相補物から導き出されてもよい。
「単離された」とは、天然の状態から「人の手によって」変化されたことを意味する。組成物または物質が天然に存在するならば、これは、そのもともとの環境から変化されたか、または取り除かれたか、またはその両方ならば、「単離されている」。例えば、生きている植物または動物の中で天然に存在しているポリヌクレオチドまたはポリペプチドは「単離されて」いないが、しかし、その天然の状態の既存の物質から分けられた同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、この用語が本明細書で利用されるように、「単離されている」。
「組換え」という用語は、ポリペプチドまたはタンパク質をいうために本明細書で使用されるとき、ポリペプチドまたはタンパク質が組換え（例えば、微生物または哺乳動物）発現系から誘導されることを意味する。「微生物」とは、細菌または真菌発現系において作られた組換えポリペプチドまたはタンパク質をいう。多くの細菌系、例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉにおいて発現されたポリペプチドまたはタンパク質はグリコシル化修飾がなく；真菌中で発現されたポリペプチドまたはタンパク質はグリコシル化される。
「ベクター」という用語は、ヌクレオチド配列からポリペプチドを発現するためのプラスミド、ファージ、コスミド、酵母、またはウイルス、人工複製配列（ＡＲＳ）、または人工染色体をいう。「ベクター」という用語はまた、それが連結されている別の核酸を輸送可能な核酸分子をいうことも意図される。１つの型のベクターは「プラスミド」であり、これは、さらなるＤＮＡセグメントがライゲーションされてもよい環状二本鎖ＤＮＡループをいう。別の型のベクターはウイルスベクターであり、ここでは、さらなるＤＮＡセグメントがウイルスゲノムにライゲーションされてもよい。特定のベクターは、それらが導入される宿主細胞中で自律的複製が可能である（例えば、細菌複製起点を有する細菌ベクターおよびエピソーム性哺乳動物ベクター）。他のベクターは、宿主細胞への導入の際に宿主細胞のゲノムに組み込むことができ、それによって、宿主ゲノムとともに複製される。さらに、特定のベクターは、それらが作動可能に連結されている遺伝子の発現を方向付けることが可能である。このようなベクターは、本明細書では、「組換え発現ベクター」（または単純に「発現ベクター」）といわれる。一般的に、組換えＤＮＡ技術における有用な発現ベクターは、しばしば、プラスミド型である。本明細書において、「プラスミド」と「ベクター」は交換可能に使用されてもよい。プラスミドは最も一般的に使用されるベクターの型であるからである。しかし、本発明は、等価な機能を果たす、ウイルスベクター（例えば、複製欠損レトロウイルス、アデノウイルス、およびアデノ関連ウイルス）などのこのような他の型の発現ベクターを含むことを意図する。
「発現ベクター」という用語は、本発明のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを備える線状または環状ＤＮＡ分子として本明細書では定義され、これは、その発現を提供するさらなるヌクレオチドに作動可能に連結されている。
「発現構築物」という用語は、遺伝子発現において調節的な役割を有する遺伝子エレメントのアセンブリー、例えば、プロモーターもしくはエンハンサー、または、ＲＮＡ、ｍＲＮＡに転写され、およびタンパク質に翻訳され、そしてプロモーターまたは適切な転写開始配列および終結配列に作動可能に連結されているコード配列を備えることができる。
「作動可能に連結されている」という用語は、本明細書では、制御配列がポリペプチドのコード配列の発現を方向付けるように、制御配列がポリヌクレオチド配列のコード配列に対して適切な位置に配置されている構成を意味する。
「宿主細胞」という用語は、本明細書で使用される場合、本発明のポリヌクレオチドを備える核酸構築物または発現ベクターを用いる形質転換、トランスフェクション、形質導入などに対して感受性がある任意の細胞型を含む。
「組換え宿主細胞」という用語は、一般的に、組換え転写単位を備え、そして組換え転写単位中のＤＮＡセグメントまたは合成遺伝子によってコードされる異種ポリペプチドまたはタンパク質、およびＲＮＡを発現する、培養細胞を意味する。この細胞は原核生物または真核生物であり得る。
「ポリペプチド」は、本明細書で使用される場合、ペプチド結合によって一緒に結合され、そして１００アミノ酸長よりも長い配列を有する、アミノ酸の単一の直鎖である。
「プロモーター」という用語は、本明細書で使用される場合、下流の遺伝子の転写を方向付けるように機能する核酸配列をいう。プロモーターは、一般的に、標的遺伝子が発現される宿主細胞に対して適切である。プロモーターは、他の転写および翻訳調節核酸配列（「制御配列」とも呼ばれる）と一緒に、所定の配列を発現するために必要である。一般的に、転写および翻訳調節配列には、プロモーター配列、リボソーム結合部位、転写開始配列および終結配列、翻訳開始配列および終結配列、ならびにエンハンサー配列またはアクチベーター配列が挙げられるがこれらに限定されない。
「インビトロ」という用語は、本明細書で使用される場合、一般的に、生きている生物の外部の人工的な環境で起こる生物学的反応をいい、これは、通常は、より詳細なまたはより便利な分析が実施されることを可能にするために、それらの通常の生物学的状況から単離されている生物の成分を使用して実験室内で実施される。
「％相同性」という用語は、本明細書では、「％同一性」という用語と交換可能に使用され、通常は、配列アラインメントプログラムを使用してアラインするときに、本発明のポリペプチドのいずれか１つをコードする核酸配列または本発明のポリペプチドのアミノ酸配列の間の核酸配列またはアミノ酸配列の同一性のレベルをいう。
例えば、本明細書で使用される場合、８０％相同性とは、規定のアルゴリズムによって決定された８０％配列同一性と同じものを意味し、従って、所定の配列のホモログは所定の配列の長さにわたって、８０％配列同一性よりも高い。
例示的なレベルの配列同一性には、所定の配列、例えば、本明細書に記載されるような、本発明のポリペプチドのいずれか１つについてのコード配列に対して８０、８５、９０、９５、９８％以上の配列同一性が挙げられるがこれに限定されない。
２つの配列間の同一性を決定するために使用できる例示的なコンピュータプログラムには、ＢＬＡＳＴプログラムのパッケージソフト、例えば、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴで公的にアクセス可能なＢＬＡＳＴＮ、ＢＬＡＳＴＸ、およびＴＢＬＡＳＴＸ、ＢＬＡＳＴＰおよびＴＢＬＡＳＴＮが挙げられるがこれらに限定されない。
配列検索は、典型的には、ＧｅｎＢａｎｋ ＤＮＡ配列および他の公的なデータベース中の核酸配列と比較して、所定の核酸配列を評価するときに、ＢＬＡＳＴＮプログラムを使用して実行される。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、ＧｅｎＢａｎｋタンパク質配列および他の公的なデータベース中のアミノ酸配列に対して、すべてのリーディングフレームで翻訳された核酸配列を検索するために好ましい。
２つ以上の配列間の「％同一性」を決定するための選択された配列の好ましいアラインメントは、例えば、ＣＬＵＳＴＡＬ−Ｗプログラムを使用して実施される。
「プライマー」という用語は、本明細書で使用される場合、標的核酸配列に結合可能で、核酸合成を開始可能であるオリゴヌクレオチドである。増幅ヌクレオチドは、本明細書で定義される場合、好ましくは、１０〜５０ヌクレオチド長、最も好ましくは１５〜２５ヌクレオチド長である。本発明の増幅オリゴヌクレオチドは、化学合成されてもよい。
ヌクレオチド配列を備える核酸をいうために本明細書を通して使用される略号は、従来的な１文字略号である。従って、核酸中に含まれるとき、天然に存在するコードヌクレオチドは以下のように略号で表記される：アデニン（Ａ）、グアニン（Ｇ）、シトシン（Ｃ）、チミン（Ｔ）およびウラシル（Ｕ）。また、他に特定されない限り、本明細書に提示される核酸配列は５’→３’方向である。
本明細書で使用される場合、「相補性」という用語およびその派生語は、ＡがＴまたはＵと対合し、ＣがＧと対合するという周知の規則による核酸の対合に関して使用される。相補性は「部分的」または「完全」であり得る。部分的相補性において、ある核酸塩基のみが塩基対合規則に従って一致し；一方、完全または全体的相補性においては、すべての塩基が対合規則に従って一致している。核酸鎖間の相補性の程度は、当該分野において周知であるように、核酸鎖間のハイブリダイゼーションの効率および強度に顕著な影響を与える可能性がある。これは、核酸間の結合に依存する検出方法においては特に可能性がある。
本発明のＤＮＡ配列は、配列決定反応によって生成され、誤って同定されたヌクレオチド、挿入、および／または欠失として存在するかもしれないマイナーなエラーを含有するかもしれない。しかし、このようなマイナーなエラーは、存在する場合、産業的に興味が持たれる酵素をコードするＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａの遺伝子としての配列の同定を妨害するはずはなく、本発明の範囲内に具体的に含まれる。
産業的に興味が持たれるＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａの酵素をコードする遺伝子のゲノムヌクレオチド配列およびコード配列が本発明に包含される。従って、１つの実施形態において、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９および６２、および／またはそのいずれかの混合物／組合せが提供され、これらの各々が、同定された遺伝子のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）のヌクレオチド配列を同定する。別の実施形態において、配列番号１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１、および／またはそのいずれかの混合物／組合せによって同定された遺伝子のゲノム配列が提供される。
本明細書で使用される場合、「遺伝子」とは、（ｉ）配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１に示されるヌクレオチド配列および／またはそのフラグメントの少なくとも１つを備えおよび／またはこれらからなる遺伝子；（ｉｉ）配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３に示されるアミノ酸配列をコードする任意のヌクレオチド配列および／またはそのフラグメント；（ｉｉｉ）中程度のストリンジェント条件下で、例えば、（約）４５℃などの適切な／有効なレベルの温度での適切な／有効な量の６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でのフィルター結合ＤＮＡに対するハイブリダイゼーション、続いて（約）５０〜６５℃などの適切な／有効なレベルの温度での、０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳなどの適切な／有効な量のＳＤＳ中での１回以上の洗浄の条件下で、または、高ストリンジェント条件下で、例えば、（約）４５℃などの適切な／有効なレベルの温度での、６×ＳＳＣなどの適切な／有効な量のＳＳＣ中でのフィルター結合核酸に対するハイブリダイゼーション、続いて（約）６８℃などの適切な／有効なレベルの温度で、０．１×ＳＳＣ／０．２％ ＳＤＳなどの適切な／有効な量のＳＤＳ中での１回以上の洗浄の条件下で、または当業者に明白である他のハイブリダイゼーションの条件下で（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭ，Ｂｒｅｎｔ Ｒ，Ｋｉｎｇｓｔｏｎ ＲＥ，Ｍｏｏｒｅ ＤＤ，Ｓｅｉｄｍａｎ ＪＧ，Ｓｍｉｔｈ ＪＡ，Ｓｔｒｕｈｌ Ｋ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９４； Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと）、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１に示されるヌクレオチド配列セットの相補物にハイブリダイズする任意のヌクレオチド配列をいう。好ましくは、本明細書に開示されるＤＮＡ配列の相補物にハイブリダイズするポリヌクレオチドは、遺伝子産物、例えば、酵素遺伝子、またはそのフラグメントの１つによってコードされる遺伝子産物に機能的に等価である遺伝子産物をコードする。
上記に記載されるように、遺伝子配列は、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３のアミノ酸配列をコードする縮重ヌクレオチド配列のみならず、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ以外の生物中で翻訳されたときに、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３のアミノ酸配列、またはそのフラグメントの１つを備えるポリペプチドを生じる縮重ヌクレオチド配列もまた含む。当業者は、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａまたは他の生物の中で遺伝子配列を使用するときに、適切なコドンをいかにして選択するか、または配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１のヌクレオチド配列をいかにして修飾するかを知っている。例えば、Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓにおいて、コドンＣＴＧはロイシン残基の代わりにセリン残基をコードしている。
本発明のヌクレオチド配列は、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａゲノムの遺伝子マップ、物理的マップ、または配列マップの開発を補助するために、遺伝子マーカーおよび／または配列マーカーとして使用できる。本発明のヌクレオチド配列および対応する遺伝子産物もまた、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａの存在を検出するために使用できる。当該分野において周知であるハイブリダイゼーションおよび抗体ベースの方法が、本発明のヌクレオチド配列および対応する遺伝子産物の存在および濃度を決定するために使用できる。
ヌクレオチド配列はまた、酵素が感染の間に宿主の侵入において役割を果たすかもしれないという事実があるならば、治療効果を有するかもしれない酵素の阻害剤を同定するためにも使用できる。
別の実施形態において、上記に記載されたＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａのヌクレオチド配列に加えて、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａおよび他の真菌種に存在し得る本発明の遺伝子のホモログまたはオルソログもまた含まれる。特に好ましいものは、糸状菌におけるホモログまたはオルソログである。これらの酵素遺伝子は、当該分野において周知である分子生物学的技術によって同定および単離することができる。
「真菌」という用語は、本明細書で使用される場合、ｐｈｙｌａ Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａ、Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔａ、Ｃｈｙｔｒｉｄｉｏｍｙｃｏｔａ、およびＺｙｇｏｍｙｃｏｔａ（Ｈａｗｋｓｗｏｒｔｈ ＤＬ，Ｋｉｒｋ ＰＭ，Ｓｕｔｔｏｎ ＢＣ，Ｐｅｇｌｅｒ ＤＮ．ＡｉｎｓｗｏｒｔｈおよびＢｉｓｂｙ’ｓ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｆｕｎｇｉ（８ｔｈ Ｅｄ．）．１９９５；ＣＡＢ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｗａｌｌｉｎｇｆｏｒｄ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ．６１６ｐ）および酵母を含む。Ａｓｃｏｍｙｃｏｔａの代表的なグループには、例えば、Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓが含まれる。Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｏｔａの代表的なグループには、マッシュルーム、さび菌類、および黒穂菌が含まれる。Ｃｈｙｔｒｉｄｉｏｍｙｃｏｔａの代表的なグループには、Ａｌｌｏｍｙｃｅｓ、Ｂｌａｓｔｏｃｌａｄｉｅｌｌａ、Ｃｏｅｌｏｍｏｍｙｃｅｓが含まれる。Ｚｙｇｏｍｙｃｏｔａの代表的なグループには、例えば、ＲｈｉｚｏｐｕｓおよびＭｕｃｏｒが含まれる。
「糸状菌」という用語は、すべての糸状型の真菌を含む。糸状菌は、キチン、セルロース、グルカン、キトサン、マンナン、および他の複合ポリサッカリドから構成される栄養菌糸によって特徴付けられる。栄養増殖は菌糸伸長によって行われ、炭素異化は偏性好気性である。
従って、本発明はまた、遺伝子のポリヌクレオチドにハイブリダイズ可能である真菌ヌクレオチド配列を提供する。１つの実施形態において、本発明は、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１、および／またはそのいずれかの混合物／組合せを備え、および／またはこれらからなる群より選択されるヌクレオチド配列に対して、少なくとも５０％同一であるヌクレオチド配列を備え、および／またはこれらからなる単離された核酸を含む。
別の実施形態において、本発明は、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１、および／またはそのいずれかの混合物／組合せを備え、および／またはこれらからなる群より選択されるヌクレオチド配列からなり、および／またはこれらを備える第２の核酸に対して、中程度のストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする真菌ヌクレオチド配列を備える単離された核酸を含む。
なお別の実施形態において、本発明は、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３を備え、および／またはこれらからなる群より選択されるアミノ酸配列に対して、アミノ酸配列が少なくとも５０％同一であるポリペプチドをコードする真菌ヌクレオチド配列を備える単離された核酸分子を含む。
本発明のヌクレオチド配列は、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１に示されるヌクレオチド配列に対して、少なくとも４０％同一である真菌ヌクレオチド配列をなおさらに含む。
相同遺伝子を単離するために、上記に記載されるＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ遺伝子配列は、標識することができ、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａを含むがこれに限定されない関心対象の動物から得られたｍＲＮＡから構築されたｃＤＮＡをスクリーニングするために使用できる。従って、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１のヌクレオチド配列のいずれか１つからなる、好ましくは検出可能に標識されている核酸プローブが含められる。標識された配列が導き出された生物の型とは異なる生物からｃＤＮＡライブラリーが導き出されたときには、ハイブリダイゼーション条件は、好ましくはより低ストリンジェンシーであり得る。ｃＤＮＡスクリーニングはまた、同じ種における選択的スプライシングを受けた転写物から導き出されたクローンを同定することもできる。あるいは、標識プローブは、適切なストリンジェント条件を使用して、再度、関心対象の生物から導き出されたゲノムライブラリーをスクリーニングするために使用できる。低ストリンジェンシー条件は当業者に周知であり、ライブラリーおよび標識配列が導き出された特定の生物に依存して予測可能に変動する（詳細については、Ｓａｍｂｒｏｏｋ Ｊ，Ｒｕｓｓｅｌｌ ＤＷ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｔｈｉｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．；およびＡｕｓｕｂｅｌ ＦＭ，Ｂｒｅｎｔ Ｒ，Ｋｉｎｇｓｔｏｎ ＲＥ，Ｍｏｏｒｅ ＤＤ，Ｓｅｉｄｍａｎ ＪＧ，Ｓｍｉｔｈ ＪＡ，Ｓｔｒｕｈｌ Ｋ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９４；Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。
さらに、相同遺伝子配列は、関心対象の遺伝子の中のアミノ酸配列に基づいて設計された２つの縮重オリゴヌクレオチドプライマープールを使用するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を実施することによって単離できる。反応のための鋳型は、関心対象の生物から調製されたｍＲＮＡの逆転写によって得られたｃＤＮＡであり得る。ＰＣＲ産物は、増幅された配列が相同酵素遺伝子配列の配列を表すことを確実にするために、サブクローニングおよび配列決定することができる。
次いで、ＰＣＲフラグメントは、当業者に周知である様々な方法によって全長ｃＤＮＡクローンを単離するために使用できる。あるいは、標識フラグメントは、ゲノムライブラリーをスクリーニングするために使用できる。
本発明の別の実施形態において、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ遺伝子配列は、特に望ましい化学的および／または物理的特性を示す修飾酵素または新規な酵素を開発する際に使用できる。Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａおよび他の糸状菌の酵素の間で、アミノ酸配列の明白な関連性／類似性により、別の真菌の酵素の構造は、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ酵素の構造を予測するために使用でき、そして有用かつ優れた特性のためにＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ酵素の合理的修飾を補助できる。本発明によって提供される配列はまた、要求されるプロセスにおいて酵素がより良好に性能を発揮することを可能にする特徴を有する新規な酵素の合理的修飾または設計のための準備材料として使用できる。
遺伝子のヌクレオチド配列は、（Ａｒｎｏｌｄ ＦＨ．Ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｆｏｒ ｕｎｕｓａｌ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｓ．Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９３；４：４５０−４５５）に記載された方法などであるがこれらに限定されないランダムおよび部位特異的変異誘発技術または指向性分子進化技術、オリゴヌクレオチド指向性変異誘発（Ｒｅｉｄｈａａｒ−Ｏｌｓｏｎ ＪＦ，Ｓａｕｅｒ ＲＴ．Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ ｃａｓｓｅｔｔｅ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ ａｓ ａ ｐｒｏｂｅ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８８；２４１：５３−５７）、化学変異誘発（Ｅｃｋｅｒｔ ＫＡ，Ｄｒｉｎｋｗａｔｅｒ ＮＲ．ｒｅｃＡ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ａｎｄ ｒｅｃＡ−ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｎ−ｅｔｈｙｌ−Ｎ−ｎｉｔｒｏｓｏｕｒｅａ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ ａｔ ａ ｐｌａｓｍｉｄ−ｅｎｃｏｄｅｄ ｈｅｒｐｅｓ ｓｉｍｐｌｅｘ ｖｉｒｕｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ ｋｉｎａｓｅ ｇｅｎｅ ｉｎ Ｅ．ｃｏｌｉ．Ｍｕｔａｔ Ｒｅｓ．１９８７；１７８：１−１０）、部位特異的変異誘発（Ｋｕｎｋｅｌ ＴＡ．Ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｓｉｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８５；８２：４８８−４９２；Ｏｌｉｐｈａｎｔ Ａ，Ｎｕｓｓｂａｕｍ ＡＬ，Ｓｔｒｕｈｌ Ｋ．Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｒａｎｄｏｍ−ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ．Ｇｅｎｅ １９８６；４４ １７７−１８３）、エラープローンＰＣＲ（Ｃａｄｗｅｌｌ ＲＣ，Ｊｏｙｃｅ ＧＦ．Ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｅｓ ｂｙ ＰＣＲ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ．ＰＣＲ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａｐｐｌ．１９９２；２：２８−３３）、カセット変異誘発（Ｓｔａｕｓｓ Ｈｊ，Ｄａｖｉｅｓ Ｈ，Ｓａｄｏｖｎｉｋｏｖａ Ｅ，Ｃｈａｉｎ Ｂ，Ｈｏｒｏｗｉｔｚ Ｎ，Ｓｉｎｃｌａｉｒ Ｃ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｗｉｔｈ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ：ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃａｎｄｉｄａｔｅ Ｔ−ｃｅｌｌ ｅｐｉｔｏｐｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍａ ｖｉｒｕｓ．ＰＮＡＳ １９９２； ８９（１７）：７８７１−７８７５）、Ｓｔｅｍｍｅｒ ＷＰ．ＤＮＡ ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ ｂｙ ｒａｎｄｏｍ ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅａｓｓｅｍｂｌｙ：ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ．ＰＮＡＳ １９９４；９１（２２）：１０７４７−１０７５１および米国特許第５，６０５，７９３号；同第６，１１７，６７９号；および同第６，１３２，９７０号において記載されたようなＤＮＡシャッフリング法、ならびに同第５，９３９，２５０号、同第５，９６５，４０８号、同第６，１７１，８２０号に記載されたような方法によって変化させることができる。ヌクレオチド配列中の変異はクローン中の遺伝子を配列決定することによって決定できる。
１つの実施形態において、配列番号２に図示された７４７ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号３におけるような２４８アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約２６ｋＤと計算された。配列番号２のＳＭＡＲＴ分析を通して、これは配列中にＰｆａｍペクチン酸リアーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼは細胞外酵素であり、この酵素はペクチン酸の脱離的切断を触媒し、それらの非還元末端に４−デオキシ−α−Ｄ−グルコ−４−エンウロノシル基を有するオリゴサッカリドを産生する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
好ましくは、配列番号５に図示された７３５ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号６におけるような２４４アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約２５ｋＤと計算された。配列番号５のＳＭＡＲＴ分析を通して、これは配列中にＰｆａｍペクチン酸リアーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼは細胞外酵素であり、この酵素はペクチン酸の脱離的切断を触媒し、それらの非還元末端に４−デオキシ−α−Ｄ−グルコ−４−エンウロノシル基を有するオリゴサッカリドを産生する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
同様に、配列番号８に図示された７５６ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号９におけるような２５１アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約２６ｋＤと計算された。配列番号８のＳＭＡＲＴ分析を通して、これは配列中にＰｆａｍペクチン酸リアーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼは細胞外酵素であり、この酵素はペクチン酸の脱離的切断を触媒し、それらの非還元末端に４−デオキシ−α−Ｄ−グルコ−４−エンウロノシル基を有するオリゴサッカリドを産生する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
別の局面において、配列番号１１に図示された７７１ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号１２におけるような２５６アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約２７ｋＤと計算された。配列番号１１のＳＭＡＲＴ分析を通して、これは配列中にＰｆａｍペクチン酸リアーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼは細胞外酵素であり、この酵素はペクチン酸の脱離的切断を触媒し、それらの非還元末端に４−デオキシ−α−Ｄ−グルコ−４−エンウロノシル基を有するオリゴサッカリドを産生する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
さらに別の局面において、配列番号１４に図示された７５０ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号１５におけるような２４９アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約２６ｋＤと計算された。配列番号１４のＳＭＡＲＴ分析を通して、これは配列中にＰｆａｍペクチン酸リアーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼは細胞外酵素であり、この酵素はペクチン酸の脱離的切断を触媒し、それらの非還元末端に４−デオキシ−α−Ｄ−グルコ−４−エンウロノシル基を有するオリゴサッカリドを産生する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
なおさらなる局面では、配列番号１７に図示された７５６ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号１８におけるような２５１アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約２６ｋＤと計算された。配列番号１７のＳＭＡＲＴ分析を通して、これは配列中にＰｆａｍペクチン酸リアーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼは細胞外酵素であり、この酵素はペクチン酸の脱離的切断を触媒し、それらの非還元末端に４−デオキシ−α−Ｄ−グルコ−４−エンウロノシル基を有するオリゴサッカリドを産生する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
なお別の局面では、配列番号２０に図示された８９４ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号２１におけるような２９７アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約３０ｋＤと計算された。配列番号２０のＳＭＡＲＴ分析を通して、これは配列中にＰｆａｍペクチン酸リアーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼは細胞外酵素であり、この酵素はペクチン酸の脱離的切断を触媒し、それらの非還元末端に４−デオキシ−α−Ｄ−グルコ−４−エンウロノシル基を有するオリゴサッカリドを産生する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
なお別の局面では、配列番号２３に図示された７４７ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号２４におけるような２４８アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約２６ｋＤと計算された。配列番号２３のＳＭＡＲＴ分析を通して、これは配列中にＰｆａｍペクチン酸リアーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼは細胞外酵素であり、この酵素はペクチン酸の脱離的切断を触媒し、それらの非還元末端に４−デオキシ−α−Ｄ−グルコ−４−エンウロノシル基を有するオリゴサッカリドを産生する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
なお別の局面では、配列番号２６に図示された１７０７ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号２７におけるような５６８アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約６４ｋＤと計算された。配列番号２６のＳＭＡＲＴ分析を通して、これは配列中にＰｆａｍペクチン酸リアーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼは細胞外酵素であり、この酵素はペクチン酸の脱離的切断を触媒し、それらの非還元末端に４−デオキシ−α−Ｄ−グルコ−４−エンウロノシル基を有するオリゴサッカリドを産生する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
別の局面において、配列番号２９に図示された１３１４ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号３０におけるような４３７アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼＣタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約４６ｋＤと計算された。配列番号２９の配列分析を通して、これは配列中にペクチン酸リアーゼＣドメインモチーフの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼＣは細胞外酵素であり、この酵素は、植物細胞壁の主要成分であるポリガラクツロン酸を切断する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
別の局面において、配列番号３２に図示された９７２ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号３３におけるような３２３アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼＣタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約３４ｋＤと計算された。配列番号３２の配列分析を通して、これは配列中にペクチン酸リアーゼＣドメインモチーフの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼＣは細胞外酵素であり、この酵素は、植物細胞壁の主要成分であるポリガラクツロン酸を切断する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
別の局面において、配列番号３５に図示された９６６ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号３６におけるような３２１アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼＣタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約３３ｋＤと計算された。配列番号３５の配列分析を通して、これは配列中にペクチン酸リアーゼＣドメインモチーフの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼＣは細胞外酵素であり、この酵素は、植物細胞壁の主要成分であるポリガラクツロン酸を切断する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
別の局面において、配列番号３８に図示された１５３６ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号３９におけるような５１１アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼＣタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約５６ｋＤと計算された。配列番号３８の配列分析を通して、これは配列中にペクチン酸リアーゼＣドメインモチーフの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼＣは細胞外酵素であり、この酵素は、植物細胞壁の主要成分であるポリガラクツロン酸を切断する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
別の局面において、配列番号４１に図示された１１３７ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号４２におけるような３７８アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼＣタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約３９ｋＤと計算された。配列番号４１の配列分析を通して、これは配列中にペクチン酸リアーゼＣドメインモチーフの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼＣは細胞外酵素であり、この酵素は、植物細胞壁の主要成分であるポリガラクツロン酸を切断する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
別の局面において、配列番号４４に図示された１１３７ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号４５におけるような３７８アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチン酸リアーゼＣタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約３９ｋＤと計算された。配列番号４４の配列分析を通して、これは配列中にペクチン酸リアーゼＣドメインモチーフの存在を明らかにする。ペクチン酸リアーゼＣは細胞外酵素であり、この酵素は、植物細胞壁の主要成分であるポリガラクツロン酸を切断する。この酵素はペクチンの分解に関与している。
別の局面において、配列番号４７に図示された１１８２ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号４８におけるような３９３アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチンエステラーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約４２ｋＤと計算された。配列番号４７のＳＭＡＲＴ配列分析を通して、これは配列中にペクチンエステラーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチンエステラーゼは細胞外酵素であり、この酵素は、ペクチン性物質のガラクツロナン骨格のメチルエスエル結合の脱エステル化を触媒して、酸性ペクチンとメタノールを遊離する。次いで、得られるペクチンはポリガラクツロナーゼおよびリアーゼによる作用を受ける。
別の局面において、配列番号５０に図示された９７５ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号５１におけるような３２４アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチンエステラーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約３５ｋＤと計算された。配列番号５０のＳＭＡＲＴ配列分析を通して、これは配列中にペクチンエステラーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチンエステラーゼは細胞外酵素であり、この酵素は、ペクチン性物質のガラクツロナン骨格のメチルエスエル結合の脱エステル化を触媒して、酸性ペクチンとメタノールを遊離する。次いで、得られるペクチンはポリガラクツロナーゼおよびリアーゼによる作用を受ける。
別の局面において、配列番号５３に図示された５８９５ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号５４におけるような１９６４アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチンエステラーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約２０６ｋＤと計算された。配列番号５３のＳＭＡＲＴ配列分析を通して、これは配列中に複数のペクチンエステラーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチンエステラーゼは細胞外酵素であり、この酵素は、ペクチン性物質のガラクツロナン骨格のメチルエスエル結合の脱エステル化を触媒して、酸性ペクチンとメタノールを遊離する。次いで、得られるペクチンはポリガラクツロナーゼおよびリアーゼによる作用を受ける。
別の局面において、配列番号５６に図示された９８１ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号５７におけるような３２６アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ペクチンエステラーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約３４ｋＤと計算された。配列番号５６のＳＭＡＲＴ配列分析を通して、これは配列中にペクチンエステラーゼドメインの存在を明らかにする。ペクチンエステラーゼは細胞外酵素であり、この酵素は、ペクチン性物質のガラクツロナン骨格のメチルエスエル結合の脱エステル化を触媒して、酸性ペクチンとメタノールを遊離する。次いで、得られるペクチンはポリガラクツロナーゼおよびリアーゼによる作用を受ける。
別の局面において、配列番号５９に図示された１５９３ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号６０におけるような５３０アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ラムノガラクツロナーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約５７ｋＤと計算された。配列番号５９のＳＭＡＲＴ配列分析を通して、これは配列中にラムノガラクツロナーゼドメインの存在を明らかにする。ラムノガラクツロナーゼは、植物細胞壁ポリサッカリド、ペクチンの主要成分であるラムノガラクツロナン−Ｉの骨格におけるＬ−ラムノースとＤ−ガラクツロン酸の間のα−１，４グリコシド結合を切断する。
さらに別の局面において、配列番号６２に図示された１６０５ｂｐ長ポリヌクレオチドは、配列番号６３におけるような５３４アミノ酸ポリペプチドをコードするオープンリーディングフレームを示す、ラムノガラクツロナーゼタンパク質をコードする全長ｃＤＮＡクローンであり、分子質量は約５７ｋＤと計算された。配列番号６２のＳＭＡＲＴ配列分析を通して、これは配列中にラムノガラクツロナーゼドメインの存在を明らかにする。ラムノガラクツロナーゼは、植物細胞壁ポリサッカリド、ペクチンの主要成分であるラムノガラクツロナン−Ｉの骨格におけるＬ−ラムノースとＤ−ガラクツロン酸の間のα−１，４グリコシド結合を切断する。
本発明はまた、（ａ）前述の遺伝子の配列および／またはそれらの相補物のいずれかを備えるヌクレオチド配列を備え、および／またはこれらからなる核酸ベクター；（ｂ）コード配列の発現を方向付ける調節エレメントと作動可能に連結されている前述の遺伝子のコード配列のいずれかからなり、および／またはこれらを備えるヌクレオチド配列を備える発現構築物；ならびに（ｃ）宿主細胞中でのコード配列の発現を方向付ける調節エレメントと作動可能に連結されているコード領域を含む、前述の遺伝子の配列のいずれかを備え、および／またはこれらからなる組換え宿主細胞にも関する。
組換えＤＮＡを利用してポリヌクレオチド配列を修飾するための技術は当該分野において周知である。様々な配列が、制限、相補性制限部位の結合およびライゲーション、突出末端を埋めることによるブラント末端作製およびブラントライゲーションなどの公知の技術に従って結合されてもよい。ポリリンカーおよびアダプターが利用されてもよく、適切な場合、ＤＮＡベクターと発現カセットのアセンブリーの容易さを可能にするために、公知の技術によって導入または除去されてもよい。クローニングおよび遺伝子操作のために、多数のベクターが利用可能である。通常、クローニングはＥ．ｃｏｌｉの中で実施できる。
本発明の別の実施形態において、本発明の酵素遺伝子配列を備えるベクターは、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、糸状菌細胞、酵母細胞、およびバシラス細胞を含むがこれらに限定されない、１種以上の宿主細胞の中でのベクターの移入、維持、および増殖を可能にする複製機能をさらに備えてもよい。ベクターは、自己複製を保証するためのいかなる手段も含有してもよい。あるいは、ベクターは、宿主細胞に導入されるときに、ゲノムに組み込まれ、かつそれが組み込まれた染色体と一緒に複製されるものであってもよい。ベクターの選択は、典型的には、ベクターが導入される宿主細胞とのベクターの適合性に依存する。
本発明の発現構築物は、プロモーター、本発明の遺伝子配列をコードするヌクレオチド配列、転写終結配列、および選択マーカー（任意）を備えるか、またはこれらからなる。この発現構築物を宿主細胞に導入するために当該分野において公知である任意の方法が使用できる。真菌細胞は、それ自体公知の様式で、プロトプラスト形成、プロトプラストの形質転換、および細胞壁の再生を包含するプロセスによって形質転換されてもよい。ＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓおよびＴｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ宿主細胞の形質転換のための適切な手順は、ＥＰ ２３８ ０２３およびＹｅｌｔｏｎ ＭＭ，Ｈａｍｅｓ ＪＥ，Ｔｉｍｂｅｒｌａｋｅ ＷＥ．Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ａ ｔｒｐＣ ｐｌａｓｍｉｄ．ＰＮＡＳ，１９８４；８１（５）：１４７０−１４７４に記載されている。Ｆｕｓａｒｉｕｍ種を形質転換するために適切な方法は、Ｍａｌａｒｄｉｅｒ Ｌ，Ｄａｂｏｕｓｓｉ ＭＪ，Ｊｕｌｉｅｎ Ｊ，Ｒｏｕｓｓｅｌ Ｆ，Ｓｃａｚｚｏｃｃｈｉｏ Ｃ，Ｂｒｙｇｏｏ Ｙ．Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｎｉｔｒａｔｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｇｅｎｅ（ｎｉａＤ）ｏｆ Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｄｕｌａｎｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｕｓｅ ｆｏｒ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ．Ｇｅｎｅ １９８９；７８：１４７−１５６、およびＷＯ ９６／００７８７によって記載されている。酵母は、Ｂｅｃｋｅｒ ＤＭ，Ｇｕａｒｅｎｔｅ Ｌ．Ｈｉｇｈ−ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｙｅａｓｔ ｂｙ ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ．Ｉｎ：Ａｂｅｌｓｏｎ ＪＮ ａｎｄ Ｓｉｍｏｎ ＭＩ（ｅｄｓ），Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｙｅａｓｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１９９１；１９４：１８２−１８７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｉｔｏ Ｈ，Ｆｕｋｕｄａ Ｙ，Ｍｕｒａｔａ Ｋ，Ｋｉｍｕｒａ Ａ．Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔａｃｔ ｙｅａｓｔ ｃｅｌｌｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｌｋａｌｉ ｃａｔｉｏｎｓ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１９８３；１５３：１６３−１６８ およびＨｉｎｎｅｎ Ａ，Ｈｉｃｋｓ ＪＢ，Ｆｉｎｋ ＧＲ．Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｙｅａｓｔ．ＰＮＡＳ，１９７８；７５（４）：１９２９−１９３３によって記載されている手順を使用して形質転換されてもよい。
産業的応用のために、本発明の酵素は真菌細胞によって産生される。好ましくは、発現宿主細胞は、大スケール工業的発酵において使用されてきた糸状菌細胞である。適切な細胞株または宿主系は、正確な修飾および発現される外来性タンパク質の処理を保証するように選択できる。好ましくは、それらの内因性タンパク質の効率的な分泌が可能である発現宿主が選択される。分泌された酵素は培養培地中で分解されるかもしれないので、宿主細胞はまた、細胞外プロテアーゼ活性が欠けていることについて選択されてもよい。
本発明はまた、本発明のポリペプチドを産生するための方法に関し、この方法は、（ｉ）ポリペプチドの産生のために助けとなる条件下で、野生型でポリペプチドを産生することが可能である細胞を培養する工程；および（ｉｉ）ポリペプチドを回収する工程を備える。好ましい局面においては、細胞はＭ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａである。
本発明の別の実施形態はまた、本発明のポリペプチドを産生するための方法に関し、この方法は、（ｉ）ポリペプチドの産生のために助けとなる条件下で、宿主細胞を培養する工程であって、ここで、この宿主細胞は、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８または６１のヌクレオチド配列を備え、このヌクレオチド配列は、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０または６３の成熟ポリペプチドを備え、またはこれらのポリペプチドからなるポリペプチドをコードしている、工程；および（ｉｉ）ポリペプチドを回収する工程を備える。
本発明の別の実施形態において、発現宿主細胞または形質転換体は、当該分野において周知である方法を使用して、増殖およびタンパク質の発現のために適切な栄養培地中で培養される。例えば、細胞は、適切な培地中で、かつポリペプチドが発現されおよび／または単離されることを可能にする条件下で実施される、実験室用または工業用ファーメンター中での振盪フラスコ培養、および小スケールまたは大スケール発酵（連続、バッチ、流加培養、または固相発酵）によって培養されてもよい。培養は、当該分野において公知の手順（Ｍｏｒｅ Ｇｅｎｅ Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｆｕｎｇｉ．Ｂｅｎｎｅｔｔ Ｊ Ｗ，Ｌａｓｕｒｅ Ｌ，（ｅｄｓ）．１９９１；Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ所収を参照のこと）を使用して、炭素源および窒素源および無機塩を備えた適切な栄養培地中で行われる。もしポリペプチドが栄養培地中に分泌されるならば、ポリペプチドは培地から直接回収できる。もしポリペプチドが培地中に分泌されないならば、これは細胞溶解物から回収できる。
ポリペプチドは、ポリペプチドについて特異的である当該分野において公知である方法を使用して検出されてもよい。これらの検出方法は、特異的抗体の使用、酵素生成物の形成、または酵素基質の消失を含んでもよい。酵素アッセイは、ポリペプチドの活性を決定するために使用されてもよい。
産生したポリペプチドは当該分野において公知である方法を使用して回収されてもよい。ポリペプチドは、濾過、遠心分離、抽出、スプレードライ、エバポレーション、および沈殿、またはこれらの組合せを含むがこれらに限定されない従来的な手順によって、栄養培地から様々な方法で回収されてもよい。
本発明のポリペプチドは、実質的に純粋なポリペプチドを得るために、クロマトグラフィー方法（イオン交換、アフィニティー、疎水性、クロマトフォーカシング、およびサイズ排除など）、電気泳動手順（等電点電気泳動など）、溶解度の差（硫酸アンモニウム沈殿など）、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、または抽出を含むがこれらに限定されない当該分野において周知である様々な手順によって精製されてもよい（詳細については、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｈｉｇｈ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｊａｎｓｏｎ ＪＣ，Ｒｙｄｅｎ Ｌ．（ｅｄｓ）．１９８９； ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと）。
本発明はまた、配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９および６２に示される遺伝子配列によってコードされている遺伝子産物（例えば、ＲＮＡまたはタンパク質）に関する。本発明の酵素遺伝子産物はまた、配列番号１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１に示されるような遺伝子のゲノム配列によってコードされているＲＮＡまたはタンパク質も含む。本発明の酵素は、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３を備え、および／またはこれらからなる群より選択されるアミノ酸配列を備える。
本発明の酵素は、ペクチン酸リアーゼ、ペクチン酸リアーゼＣ，ペクチンエステラーゼおよびラムノガラクツロナーゼを備え、および／またはこれらからなる群より選択される酵素の活性の少なくとも１つを示す。本発明の酵素遺伝子産物は、当該分野において周知である技術を使用して、例えば、合成技術によって、または組換えＤＮＡ技術の方法によって、容易に産生できる（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ ＴＥ．Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，１９８３； Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｎ．Ｙ．を参照のこと）。
別の実施形態において、本発明の方法および組成物はまた、機能的に等価な遺伝子産物を表すタンパク質およびポリペプチドも含む。このような機能的に等価な遺伝子産物には、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドの天然の改変体が含まれるがこれらに限定されない。
このような等価な遺伝子産物は、例えば、アミノ酸配列の中のアミノ酸残基の欠失、付加、または置換を含有することができ、これは、上記に記載された酵素遺伝子配列によってコードされるが、しかし、サイレント変化を生じ、従って、機能的に等価な産物を産生する。アミノ酸置換は、関与する残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性、および／または両親媒的性質の類似性に基づいて行うことができる。
上記の遺伝子産物コード配列の他の修飾は、例えば、選択された宿主細胞中でのスケールアップなどのために、発現のためにより良好に適合されているポリペプチドを生成するために行うことができる。例えば、システイン残基は、ジスルフィド架橋を排除するために、欠失でき、または別のアミノ酸での置換ができる。
本発明の別の実施形態は、固体型の本発明の酵素をさらに含む。固体型の酵素または酵素顆粒は、例えば、固体界面活性剤および動物飼料の中で使用できる。固形型酵素を作製する方法は当該分野において周知であり、小球化（ワックス性材料中でのスプレードライ）、押し出し、凝集、または顆粒化（不活性材料と結合剤での希釈）などであるがこれらに限定されない。混合粉末、錠剤などの型での本発明の固形型酵素を備える固体酵素組成物が意図される。
本開示は、添付の特許請求の範囲に含有されるように、前述の記載を同様に含む。本発明は、一定の程度の独自性を伴って、その好ましい型で記載されてきたが、本開示の好ましい型は例示としてのみ行われてきたこと、ならびに、部品の組合せおよび配置の構築の詳細における多くの変化は、本発明の範囲および特許請求の範囲から逸脱することなく用いてもよいことが理解される。
様々な参考文献が本明細書で引用されており、これらの開示は、それらの全体が参照により組み込まれる。
実施例
以下の実施例は、本発明をさらに例証するために意図され、本明細書に記載された特定の実施形態に本発明を限定ことは全く意図されていない。
実施例１ Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａからのゲノムＤＮＡの単離
ゲノムＤＮＡは、Ｋｉｅｓｅｒ Ｔ，Ｂｉｂｂ ＭＪ，Ｂｕｔｔｎｅｒ ＭＪ，Ｃｈａｔｅｒ ＫＦ，Ｈｏｐｗｏｏｄ ＤＡ．Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２０００；Ｊｏｈｎ Ｉｎｎｅｓ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｗｉｃｈ，ＵＫ，ｐｐ．１６２−２０８によって記載された手順を使用して、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ菌株ｍｓ６から単離された。手短に述べると、菌糸体はストックペトリプレートから接種ループを使用してこすりとり、コニカルフラスコ中の液体ポテトデキストロース培地に接種された。このコニカルフラスコは、振盪なしで、３０℃にて約７２時間インキュベートされた。菌糸体は、空気−培地界面の表面上で増殖する。菌糸体は滅菌ようじを使用して収集され、滅菌ペーパータオル間に置かれ、そしていくつかが生理学的溶液（リン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ ７．０）で洗浄された。菌糸体は過度の液体を除去するために搾り取られ、収集された菌糸体は３０分間、風乾された。半乾燥菌糸体は液体窒素中に置かれ、すりつぶされて微細粉末を生じ、最終的に、Ｋｉｅｓｅｒ Ｔ，Ｂｉｂｂ ＭＪ，Ｂｕｔｔｎｅｒ ＭＪ，Ｃｈａｔｅｒ ＫＦ，Ｈｏｐｗｏｏｄ ＤＡ．Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２０００；Ｊｏｈｎ Ｉｎｎｅｓ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｎｏｒｗｉｃｈ，ＵＫ，ｐｐ．１６２−２０８に記載されたプロトコールに従ってＤＮＡを単離した。
実施例２ プライマーの設計および合成
本研究において使用されるプライマーは、完全ＯＲＦを用いて手動で配列を選択すること、または類似の遺伝子が他の植物から首尾よく単離されているデータベースを使用することのいずれかによって、手動で矯正されたトランスクリプトームから、Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ ｍｓ６のゲノム配列から予測される「遺伝子モデル」から設計された。トランスクリプトームから得られたヌクレオチド配列の比較バイオインフォマティクス分析は、関連遺伝子のホモログを同定するため、および遺伝子の適切な同定のために、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴＰ、ＲＰＳ−ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴＸおよびＰＳＩ−ＢＬＡＳＴを使用して実行された。複数の配列が「遺伝子プール」から見い出されるときは常に、ヌクレオチド配列アラインメントはｃｌｕｓｔａｌＷバージョン１．８２を使用して実施された。次いで、アラインメントが編集された。遺伝子特異的プライマー（フォワードとリバースの両方）が、手動で、またはＰｒｉｍｅｒ ３ ｐｌｕｓ ｔｏｏｌを通して選択され、プライマーはカスタム合成された。
本研究において使用されたすべてのオリゴヌクレオチドは、供給業者によって合成され、ＨＰＬＣ精製され、そしてＩｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（ＩＤＴ）から入手された。１００ｐｍｏｌのストック溶液が、オートクレーブされたｄｄＨ２Ｏ中で調製され、使用のためのアリコートで、−２０℃で保存された。
実施例３ Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ ｍｓ６からのペクチン酸リアーゼ、ペクチン酸リアーゼＣ、ペクチンエステラーゼ、およびラムノガラクツロナーゼの増幅、クローニング、および配列決定
総ＲＮＡは、Ｃｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉ Ｐ ａｎｄ Ｓａｃｃｈｉ Ｎ，Ｓｉｎｇｌｅ−ｓｔｅｐ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ＲＮＡ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｂｙ ａｃｉｄ ｇｕａｎｉｄｉｎｉｕｍ ｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ−ｐｈｅｎｏｌ−ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ（Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ １９８７，．１６２：１５６−１５９）によって以前に記載されたように、液体培地で増殖された３日めの菌糸体から単離された。ＲＮＡの品質および完全性は、標準的な手順に従って、アガロースゲル電気泳動によってチェックされ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｎａｎｏ Ｄｒｏｐ ２０００を使用して定量された。ｃＤＮＡ第１鎖は、製造業者の説明書に従って、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ逆転写酵素（Ｉｎｖｔｒｏｇｅｎ）を使用して合成された。遺伝子は、遺伝子特異的プライマーを使用するＰＣＲによってｃＤＮＡから増幅された。ＰＣＲ反応（５０μＬ）は、１μＬのｃＤＮＡ、２０ｐモルの各プライマー、５μＬの１０×ＰＣＲ緩衝液、５μＬの２．５ｍＭ ｄＮＴＰミックス、および１．０単位のＰｆｕＴａｑ ＤＮＡポリメラーゼを含有した。ＰＣＲは、Ｔｈｅｒｍａｌ Ｃｙｃｌｅｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）中で、以下の条件を使用して実行された：９５℃、５分間の初期変性、続いて、９５℃３０秒間の変性と、５９〜６１℃で３０秒間のアニーリングと、７２℃で標的遺伝子の長さに依存して１〜２．０分間の伸長とからなる３５サイクル、そして７２℃で７分間の最終伸長。ＰＣＲ産物は、１×ＴＡＥ緩衝液を使用して１％アガロースゲルによって分析され、アンプリコンは、製造業者の説明書に従って、ＱＩＡＧＥＮゲル抽出キットを使用して、ゲルから溶出された。精製されたＰＣＲ産物は、ｐＣＲ（登録商標）８／ＧＷ／ＴＯＰＯ（登録商標）ＴＡクローニングキット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にライゲーションされ、コンピテントＥ．ｃｏｌｉ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に形質転換された。プラスミドは、製造業者の説明書に従って、ＱＩＡｐｒｉｐ Ｓｐｉｎ Ｍｉｎｉｐｒｅｐキット（ＱＩＡＧＥＮ）を使用して推定のコロニーから単離された。インサートの存在は遺伝子特異的プライマーを使用することによってチェックされ、陽性プラスミドが配列決定に供された。
実施例４ 配列の分析
ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列はＢＬＡＳＴＮプログラムおよびＢＬＡＳＴＰプログラムによってそれぞれ分析された。他の植物から報告されている配列はＣｌｕｓｔａｌＷを用いてアラインされた。系統発生分析はネイバージョイニング（ＮＪ）を使用して実行された。
配列番号：１
長さ：１０４７（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
GAAGAGTATATAGAGGTGGCCACGACTGCACTGTTGAACTCATCACCGACCCACAATCGCTTTCTTTCTGCCCACTCTCGTTCACAACACAGATCTCTGATCTACCACATTCGTTCTTACCGAGGATCAAAAATTCCTCCCATCTCCACAATGCAGTACAAGTACACCGTCCTTGCCGCCACTATGGCCGCCGTTGCCTTCGCCCAGCAGAACTTGATTGGCATTCCTACCGGTACTAAAGCTAAGCCTTTCACCCAGCCCGAGACCATTACCTTCTTCGACGGTAAAATGATGGAATACGGCCGCGGCAAGCCCTGTGGCACCGACGATGACAAGGGTGACCTTGAGGCCGTCTTCATCATCAAGCCCGGCGGCACGCTGCAGAACGCCATCATCGGCGCCGACTCCCTTGAGGGCGTGCACTGCGAGGGCGCCTGCACCATCAAGAACGTCTGGTTCAAGGACGTGTGCGAAGACGCCATCACCCTCAAGGGCAACGGCCCGTACCTGATCACCGGTGGCGGTGCGCAGCACGCCAAGGACAAGGTCGTCCAGCACAACGGCAAGGGCACCGTGACCATCTCCGATTACAAGATCGGCGCCGTCGGTAAGCTGTACCGCAGCTGTGGCAACTGCAGCAACAACGGCGGCCCCCGCAACGTCGTCCTCGACCGCATCTCTTCCTTCGGCCCCGGCACCACGTCCGACCTTGTCGGCATCAACTCCAACTACAACGACGTCGCCACCATCAGTGGCGTCTGCGGCCCTGTCAAGAACATGTGTCAGGAGTTCACCGGCATCGAGAAGGACGGCAACAAGGAGAGCCCCCACAGGGAGCCCCCGATTGGTGCTTGCAAGGGCCCCCAGGGCCAGCTCAAGACGGCTCCCGCTTGCTAAGCGCCTCACGGAATTATCATGGGTGTGCAGTTACGGGAAAGGAAATCGATATCGACCTCCCTATTGGTAACATCAATCTGGCTCCAAATTGCATCATCCGCCACTGGTCGGCCATGACAGGACAGAGCGAAGTCAAAAGTTTCGGTGTAC
配列番号：２
長さ：７４７
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（７４７）
atgcagtacaagtacaccgtccttgccgccactatggccgccgttgccttcgcccagcag
M Q Y K Y T V L A A T M A A V A F A Q Q
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N L I G I P T G T K A K P F T Q P E T I
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T F F D G K M M E Y G R G K P C G T D D
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D K G D L E A V F I I K P G G T L Q N A
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I I G A D S L E G V H C E G A C T I K N
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V W F K D V C E D A I T L K G N G P Y L
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I T G G G A Q H A K D K V V Q H N G K G
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T V T I S D Y K I G A V G K L Y R S C G
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N C S N N G G P R N V V L D R I S S F G
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P G T T S D L V G I N S N Y N D V A T I
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S G V C G P V K N M C Q E F T G I E K D
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G N K E S P H R E P P I G A C K G P Q G
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Q L K T A P A C -
配列番号：３
長さ：２４８
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MQYKYTVLAATMAAVAFAQQNLIGIPTGTKAKPFTQPETITFFDGKMMEYGRGKPCGTDDDKGDLEAVFIIKPGGTLQNAIIGADSLEGVHCEGACTIKNVWFKDVCEDAITLKGNGPYLITGGGAQHAKDKVVQHNGKGTVTISDYKIGAVGKLYRSCGNCSNNGGPRNVVLDRISSFGPGTTSDLVGINSNYNDVATISGVCGPVKNMCQEFTGIEKDGNKESPHREPPIGACKGPQGQLKTAPAC*
配列番号：４
長さ：１１６７（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
CTACCACGAATCGGAATTAAACGACGAATCTCCTGGTGAAGACTATAAAAGGCAGACAACGGCGTCGACAGTAAAGACCATCGCAATCCAACAGTCCAGTTCCTCCTCAAGTCTCTCACTCCCATCCTCCACTTTCCAATCACTTCCAACATGAAGTTCATCTACGCCGCTATCACCGCCACCGTGGCTGGCCTTGCCTCTGCGCAGTCCCTGACCATCCCCACCCGCTCCGGCAGCAAGGTCGTCCTCTCCGCGCCCAGTACCATCTCCGGCTCGCAAGACTTTGGTAACAAGGAGTTCGACCGCGGAATCCCCTGCGACTCGGACGATGACACTGGCAGCTCCAGCGCCGTCTTCATCCTCAAGAACGGCGCCAGCATCTCCAACGTCATCATTGGTACCGACGCGCTCGAGGGCGTCCACTGCGAGGGTGCCTGCACCCTGACCAACGTCTGGTTCCGTGACGTCTGCGAGGGTGAGCTAAATCCACAACATACCATCAAACACTCAAGTAGTGCACACGAATGCTAATGGGAAAATCCAGACGCCATCTCCGCGCTCGGCACCGGCAATGTCCTCATCCAGGGCGGCGGTGCGCAGAACGCCAAGGACAAGGTCGTCCAGCACAACGGCCGCGGCACCGTCACCATCAAGAACTACACCGTCGTCAACGCCGGCAAGCTGTACCGCAGCTGCGGCGACTGCACCAACAACGGCGGCCCCCGCAACGTCGTCGTGGACAACGTCCGCGTCAACGGCATGACCTCTGACCTCGTCGGCATCAACTCCAACTACGGTGACAGTAAGTCGGCAAAAGATACTTCAAATCGTTGGAGGAACACTCAATACTGACTGTCGATTCCAGCTGCTACCATCAGCAACTCTTGCGGCGTCTCCAAGAAGGTCTGCCAGGAGTACAAGGGCGTCACCAAGGGCAACGGCGACAGCGAGAAGGTCTCCACCACTGCCAACTGCAAGGGTGCTCAGGGTACTCTGTCTAAGCTTCCCACTTGCTAGACAACCTAAAAGCAAAACCAAACTAGAGCTTGGGCACGGATCACTCGCGTTGGATGTGGTCCGTGGAATCCTTGGTCAGTGCTCAATCGCCTGCTTCGAGTGGGAAACGGCCGTCTCAATTGATACCGGGCGAGTGTCTGCGCATGGATG
配列番号：５
長さ：７３５
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（７３５）
atgaagttcatctacgccgctatcaccgccaccgtggctggccttgcctctgcgcagtcc
M K F I Y A A I T A T V A G L A S A Q S
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G S Q D F G N K E F D R G I P C D S D D
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D T G S S S A V F I L K N G A S I S N V
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I I G T D A L E G V H C E G A C T L T N
gtctggttccgtgacgtctgcgaggacgccatctccgcgctcggcaccggcaatgtcctc
V W F R D V C E D A I S A L G T G N V L
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I Q G G G A Q N A K D K V V Q H N G R G
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T V T I K N Y T V V N A G K L Y R S C G
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D C T N N G G P R N V V V D N V R V N G
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M T S D L V G I N S N Y G D T A T I S N
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D S E K V S T T A N C K G A Q G T L S K
cttcccacttgctag
L P T C -
配列番号：６
長さ：２４４
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MKFIYAAITATVAGLASAQSLTIPTRSGSKVVLSAPSTISGSQDFGNKEFDRGIPCDSDDDTGSSSAVFILKNGASISNVIIGTDALEGVHCEGACTLTNVWFRDVCEDAISALGTGNVLIQGGGAQNAKDKVVQHNGRGTVTIKNYTVVNAGKLYRSCGDCTNNGGPRNVVVDNVRVNGMTSDLVGINSNYGDTATISNSCGVSKKVCQEYKGVTKGNGDSEKVSTTANCKGAQGTLSKLPTC*
配列番号：７
長さ：１１１０（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
CAGCGGTATATAAATGCCCTGGTACCCTGCCCCAAAATGCCTTCTTCACCACCACAGTCCTTCGTTTCAATCGTTCAGCACATTCACTCTTTCATTCACACTCACTAACCGATCTGCGATCGTGTTCTTTGCCTTCCACTACCAGACACAATGTTCTCCAAGCTTTTCCTGCTTCCCCTCCTGGCGGCTTCCGCCCTGGCTGCTCCTGCCGACGACACTTTCGGCTACGAGCTCGTTCGCCGCGCGAACTTCCCCATTCCTGCCTCCAAGGGCAACGTCAAGCTCAGCGCTGCCAAGTCCGTGTCCGGCACCTTCGATGGTGGCATGAAGACCTACGGCCGTGGTGTCAAGTGCACCGGTCAGGCCGAGGGTGGTGACAAGGACGCCGTCTTCATCCTCGAGAACGGTGCTACCCTCAAGAACGCCATCATTGGTACCGACCAGATCGAGGGCGTCCACTGCAAGGGCTCCTGCACCATCGAAAACGTCTGGTGGGCCGGTGTCTGCGAGGACGCGCTCTCCCTGAAGGGTGACGGTTCCGCCAAGGTCATCGGCGGCGGCGCTACTGGCGCTGAAGACAAGGTACGTACGCCTCTGATACGCCTTCGCTCAGATTGCTGACCAGATCTGGTACAGGTCATCCAGCACAACGGCGTTGGCTCCGTCTCGATTGATGGCTTCACTGTTGCCGACTTCGGCAAGCTCTACCGCTCGTGCGGAAACTGCAAGAAGATGGGCAAGAGAACCGTCACCATCAAGAACGTGAAGGCTAGCAACGGAAAGCTTTTGGCTGGCATCAACTCCAACTACGGCGACACTGCTACCATCACCGGCACCTGCGCTACCTCCGTCAAGAAGGTCTGCACCGAGTTCAAGGGCAACAACAGCGGCAAGGAGCCCACCGAGATCAGCTCCGGCCCCAGCAACGCCTGCAAGTACTCCTCCCTCAAGGCCTGCTAGGGCCTGCTAGACGGTTGCTCAACAAACAAACATGGCATTTGCCGCGTGAGCCCGGGACCTTTCCGGGCTCGGGAGAAGAAAGTGGATGGCATTCTATTCTTGTATCGACTTCTAGTACTAGAGCATCTTCTATACCTCTAATTTACTGTG
配列番号：８
長さ：７５６
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（７５６）
atgttctccaagcttttcctgcttcccctcctggcggcttccgccctggctgctcctgcc
M F S K L F L L P L L A A S A L A A P A
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T Y G R G V K C T G Q A E G G D K D A V
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A E D K V I Q H N G V G S V S I D G F T
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V A D F G K L Y R S C G N C K K M G K R
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T E F K G N N S G K E P T E I S S G P S
aacgcctgcaagtactcctccctcaaggcctgctag
N A C K Y S S L K A C -
配列番号：９
長さ：２５１
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MFSKLFLLPLLAASALAAPADDTFGYELVRRANFPIPASKGNVKLSAAKSVSGTFDGGMKTYGRGVKCTGQAEGGDKDAVFILENGATLKNAIIGTDQIEGVHCKGSCTIENVWWAGVCEDALSLKGDGSAKVIGGGATGAEDKVIQHNGVGSVSIDGFTVADFGKLYRSCGNCKKMGKRTVTIKNVKASNGKLLAGINSNYGDTATITGTCATSVKKVCTEFKGNNSGKEPTEISSGPSNACKYSSLKAC*
配列番号：１０
長さ：１１２７（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
CCGCTCCTCTGTGCGTTGTTGAACCTTGCTGTTTGTAGGTATAAAGCCCCCCCGTCATTGCTGAGGACGTGTATGGACAGGATCCCTCAAACAGATTGTCTTCTACATCTCAGCGCATTAAGAACCCCATAAATACCAAGAGTTACAAACATGCGTTCTACAAATCTGCTCGTCCTCCTCGCAACCTCCCTCAGCCTGGTCGCAGCGAGCCCGTTGGATGCGCCGACCAAAGTGATGGGCAAGCGGTTCGCCACCAATGTTCTACCCGCATCATCTGGACATGTTGTCCTCCCCTCAGCAACCACTGTGAGCACTTTTGACGGCGGAATGAAGAAGTACGACCGTGGTACCTCTTGCACTGGTCAGTCCGAAGGGGGGGATGCGGACGCTGTCTTCCTCGTTCAGTCCGGAGGCACCCTCAAGAATGTCATCATTGGTGCGGACCAATCTGAAGGTGTCCACTGTCTCGGCCCGTGCACGATCCAGAACGTGTGGTGGGAGGCCGTCTGCGAGGGTGAGAGCCAGACGCTTCGCGTTGTAAAGGGGCGAAATGCTGACCTCAAGACCCAGACGCCTTGACCATCAAACAAACTTCTGGGACCTCCTACGTCGTTGGCGGCGGTGCTTTTGGCGCGTCAGACAAAATTATCCAGCACAACGGAGGCGGTACCGTCTCGATCAAGGACTTCTACGCCCAAGATTTCGGCAAAGTTTACCGCAGCTGCGGCAATTGCGGCACTCAGTACAAACGCACCGTCACCATGTCTGGGATTTGGGCCGTTAATGGTGATCTCCTTGCCGGCGTTAACTCCAATTACGGTGATACCGCGACCATTTCCGGCACTTGTGCAGACAACGTGGACAACATCTGCGCCTGGTACGAAGGAAACGATGATGGCGATGAGCCCACCAAGTTGGGCACTGGCATCAGCTCTTACTGTGTCTATACCGCCAATGGTGTCGATGACTGCCCTTGAGTTGAACATTGGCTTCTATTTGCCACGACACTATGATCGTGTTGCGGCTCTATCGCTGTTGTGTCCGGTTGGTGAGGGCACCCGTACATATGTGGAATGGAGGTCACGTGGTGGATAGCATGTACATATTCTTGCCTGTTATGCCTACAC
配列番号：１１
長さ：７７１
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（７７１）
atgcgttctacaaatctgctcgtcctcctcgcaacctccctcagcctggtcgcagcgagc
M R S T N L L V L L A T S L S L V A A S
ccgttggatgcgccgaccaaagtgatgggcaagcggttcgccaccaatgttctacccgca
P L D A P T K V M G K R F A T N V L P A
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S S G H V V L P S A T T V S T F D G G M
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K K Y D R G T S C T G Q S E G G D A D A
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V F L V Q S G G T L K N V I I G A D Q S
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atcagctcttactgtgtctataccgccaatggtgtcgatgactgcccttga
I S S Y C V Y T A N G V D D C P -
配列番号：１２
長さ：２５６
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MRSTNLLVLLATSLSLVAASPLDAPTKVMGKRFATNVLPASSGHVVLPSATTVSTFDGGMKKYDRGTSCTGQSEGGDADAVFLVQSGGTLKNVIIGADQSEGVHCLGPCTIQNVWWEAVCEDALTIKQTSGTSYVVGGGAFGASDKIIQHNGGGTVSIKDFYAQDFGKVYRSCGNCGTQYKRTVTMSGIWAVNGDLLAGVNSNYGDTATISGTCADNVDNICAWYEGNDDGDEPTKLGTGISSYCVYTANGVDDCP*
配列番号：１３
長さ：１１６４（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
AGTGACATATAAGTCCTCTGTTCTGCCATCGGAAAATGCTTCTCATCACCAACATTCTCTTCCTTCTTTCCTCACCACCACTTCCCCTCTTTCAAACAATTACCGGATAGATCTGTGATCATCCCCTACTTTCGTTTAACAACATACAAAATGCAGTCCAAGATCGTTCTCGGCCTTTCTCTCCTCGCCGCCACCGGCATGGCGGCTCCCTCCGAGCCCCTCCGCGTCCGCGCCACCCTCCCCATCCCCTCCTCCAAGGGCTCTGTCACCTACGATGAGGTCAAGTCCATCACCGGCACTTTCGACGGTGGCATGAAGACCTACGGCCGTGGTGTTTCCTGCACTGGCCAGAAGGAGGGTGGCAACAAGGACGCCGTCTTCCAGCTTGAGGACGGTGCTACCCTCAAGAACGTCATCATTGGCGAGGACCAGATCGAGGGTATCCACTGCATGGGCAGCTGCACCCTGGAGAACGTCTGGTGGAGCGCCGTCTGCGAGGGTTTGTCTTCTTCCATCCACTGAAGCACTTCACAGCTAACGTCATCTCAGACGCTCTTACCTTCAAGGGTGACGGTGACGCCAAGGTCATCGGCGGCGGTGCCCAGGGCGCCGACGACAAGGTCCTCCAGCACAACGGTGTCGGCGATGTGACCATCGACGGCTTCACCGTTGTCGATTTCGGCAAGCTGTATCGCTCTTGCGGCAGTAAGTTCCCCCCGGCTTCTGCCCACCTCCATCCCTCATTCACCTGCTCACACACGTGTTCCAGACTGCAAGCAGAACGGCGGCACCCGCAACGTCAACATCTCCAACGTCAAGGCCTACAACGGCAAGGTCCTCACCGGCATCAACTCCAACTACGGCGACGTCGCCACCTTCAAGGACACCTGCGCCTCTTCCGTCAAGGACATCTGCGTCGAGTACAAGGGTACCAACAACAACGACGAGGAGCCCTCCAAGATCGGCTCCGGTCCTTCCGACAACTGCGTCTACTCCGACATCCCCTCTTGCTAGACGGCTCGCCAACGGTCGCTTGGGCTGGCTTTCGCGGATGCCCATTGTGAATAATCCGCTTGTTTCTTGTATGTAATTATTTTAAAGGCAAGAAGACCATTTAAATCAATAAATAGAGACGGGGCTAGACCTCGCTTGTACTACGCACAC
配列番号：１４
長さ：７５０
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（７５０）
atgcagtccaagatcgttctcggcctttctctcctcgccgccaccggcatggcggctccc
M Q S K I V L G L S L L A A T G M A A P
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S E P L R V R A T L P I P S S K G S V T
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Y D E V K S I T G T F D G G M K T Y G R
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D G A T L K N V I I G E D Q I E G I H C
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M G S C T L E N V W W S A V C E D A L T
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F K G D G D A K V I G G G A Q G A D D K
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V L Q H N G V G D V T I D G F T V V D F
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D V A T F K D T C A S S V K D I C V E Y
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K G T N N N D E E P S K I G S G P S D N
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C V Y S D I P S C -
配列番号：１５
長さ：２４９
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MQSKIVLGLSLLAATGMAAPSEPLRVRATLPIPSSKGSVTYDEVKSITGTFDGGMKTYGRGVSCTGQKEGGNKDAVFQLEDGATLKNVIIGEDQIEGIHCMGSCTLENVWWSAVCEDALTFKGDGDAKVIGGGAQGADDKVLQHNGVGDVTIDGFTVVDFGKLYRSCGNCKQNGGTRNVNISNVKAYNGKVLTGINSNYGDVATFKDTCASSVKDICVEYKGTNNNDEEPSKIGSGPSDNCVYSDIPSC*
配列番号：１６
長さ：１２３８（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
CTATAAAGATGGAGACCAGCCAGCTTCTAGAGGCTTTTCCCTCCAGGCAAGCATCCTCTCTCCGGCCATCACTTTCATTCTTTCGCATTCTTCCACTCTTTTGTCCAACTCCGACCCGAACAGATCTGTGATCGTTCACTACACTACACAATGTTGACCAAGACTCTTCTTCCCCTCCTCGCCATCTCTGGCGCCGTCTCTGCCGTCAAGACCAAGACCTTCGGCAAGAACCTCGTCCGCCGTGCGGACTTCCCTATCCCTGAATCCCAGGGTTCCGTCACCTTTGACGCCGCCGAGGAGGTCGATGGCGAGTACGACGGTGGCTACAAGACGTACGGCCGTGGTGTTTCTTGCACTGGCCAGGAGGAGGGTGGCGACTCTGACGCCGTCTTCATCCTGAAGGACGGTGCTTCCCTCAAGAACGCCATCATCGGCTCTGACCAGATTGAGGGTGTCCACTGCGAGGGCTCCTGCACTCTTGAGAACGTTTGGTGGGAGGCCGTCTGCGAGGACGCTCTGTCCTTCAAGGGTGACGGTGATGCCACCGTCACTGGCGGTGGTGCAACTGGTGCTGAGGACAAAGTCCTCCAGCAAAACGGTATTGGCTCCATCACCGTCGATGGCTTCACCGTTGTGGACTTCGGCAAGCTGTACCGCTCTTGCGGTAACTGCGACGAGATGGGCCAGCGCACTGTACGTCAATGCTATCGCTCATTCTGTAGGGCAGAGAGTGCTGACATGGCTGTGCGACTTAGATCACCCTCAAGAACGTCAAGGCCTACTCCGGCAAGAAGCTTGTCGGCATCAACTCCAACTACGGTGACAGTGCGTCATGTTCCTTTAGGCTTTCAACCCTTGAGCCATGTGCTAATAGCATCCTCAGCTGCCACCATCACCGACACTTGCGCGACCGACGTCTCTGACATTTGCACGGAGTACGTAGTCACTCGGACGATGGGCCTCAGGAACGAAGACACTAACATAATTATCTTTACAGGTACGAAGGAAACGATACCGGAGACGAACCTGAAGAGATCAGCTCCGGCCCCTCTGATGCCTGCATTTACAGCGACGTTCCGGAGTGCTAGACGCACAGCTCGAACATGCCGCCTCAAAGCAAGCATTCTGATGGAGGGCCAGGGGGTGGGAAGGGATTTAGAGCCTCCGAAAAGGTGGAAGTGGGTTTAGGACTTCGTTGTATAATATAAACTTGTTTCCGAAAATAAGAACCATCCTGC
配列番号：１７
長さ：７５６
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（７５６）
atgttgaccaagactcttcttcccctcctcgccatctctggcgccgtctctgccgtcaag
M L T K T L L P L L A I S G A V S A V K
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T K T F G K N L V R R A D F P I P E S Q
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G S V T F D A A E E V D G E Y D G G Y K
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T Y G R G V S C T G Q E E G G D S D A V
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F I L K D G A S L K N A I I G S D Q I E
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G V H C E G S C T L E N V W W E A V C E
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D A L S F K G D G D A T V T G G G A T G
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A E D K V L Q Q N G I G S I T V D G F T
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T E Y E G N D T G D E P E E I S S G P S
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D A C I Y S D V P E C -
配列番号：１８
長さ：２５１
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MLTKTLLPLLAISGAVSAVKTKTFGKNLVRRADFPIPESQGSVTFDAAEEVDGEYDGGYKTYGRGVSCTGQEEGGDSDAVFILKDGASLKNAIIGSDQIEGVHCEGSCTLENVWWEAVCEDALSFKGDGDATVTGGGATGAEDKVLQQNGIGSITVDGFTVVDFGKLYRSCGNCDEMGQRTITLKNVKAYSGKKLVGINSNYGDTATITDTCATDVSDICTEYEGNDTGDEPEEISSGPSDACIYSDVPEC*
配列番号：１９
長さ：１２４５（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
GGTTCACCTCATCAACTCGCTTCTTCATTCGTTCCTTGCTGTGCAAGACACCATCCAGACGGACATTCCATTACAACGGTCTTTGATAGCCAATCCAACTTTGTCTACTCCCTGCCTCTCCATCCTACCCTACCAATAAGCCCATCCAAAATGCAGTACAGCATCCGCTCGCTCGCCTTCGGCCTCGCCGCCCTGGCCGTCTCCACCGACGCTTTCATGGTTCCCCGTGACCCTAGCAAGGGCTGGGGCTTCCCCAACGCCAACAACGCTCGCGTTGCTGCTGCCGCCGCCTCCACTCCTGTCCAGACCCCCGGCAACACCCCTACCACTCCCGTGGCCACCCCTGGTGTCACTGGCGGCGCCACTGCCGCCGCTGGCTTCCCCGCCTCGTCCGGCACCAGCCAGCTCAGCGCCCCCATGACCGTCACCGGCAGCTTCGACGGTGGCATGAAGGCCTTCGGCCGCGGTGTCTCCTGCACTGGCCAGGCTGAGGGTGGCGACAGCGACGCTGTCTTCATGATCGAGGAGGGCGGTACTCTCTCCAACGTCATCATCGCCGCCGATCAGATCGAGGGTGTCCACTGCTTCGGTTCCTGCACTCTCAAGAACGTCTGGTGGGTCGCCGTCTGCGAGGACGCTTTCACCATCAAGGAGCAGGGCGCCTCTGGCACTACCCACATCATCGGCGGTGGTGCTCAGGGCGCCGAAGACAAGGTTCTCCAGCACAACGGCGGCGGCACTCTCGCTGTCTCTGGCTTCCTCGCCAAGGACTTCGGTAAGCTCTACCGCAGCTGCGGCAACTGCGACGAGATGCCCGAGCGCCACGTTACCATCGACGGCGTTACCGCTGAGTCTGGTGACATCCTGGTCGGCATCAACTCCAACATGGGCGACAGTAAGTAACTCCTGATTTTGCAAGCGATGAGGCAATGCTAACAATGCGCAGCTGCTACCATCACCAACACCTGCGCCACCGGCGTCGAGACCATCTGCCAGGAGTTCAACGGTGTCACGGACGGCAGCGAGCCCGAGGCTGCCGGCAGCGGCCCTAGCACTGCTTGCAAGTACACTGCCGCTGACGCCCAGGCCTGCTAAGCACATCCCTTTCTTGATTGACCAGTAAAAGTTCGACGGCCACACGGTTGGGTAATGCAGGGATTGGCAAAATGTCCGTCCGGCATAATTAGCACTTCTTTGATGTAGATATTGGGCCGGGTGTCCACAATGTATAACTCTGACATGTCA
配列番号：２０
長さ：８９４
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（８９４）
atgcagtacagcatccgctcgctcgccttcggcctcgccgccctggccgtctccaccgac
M Q Y S I R S L A F G L A A L A V S T D
gctttcatggttccccgtgaccctagcaagggctggggcttccccaacgccaacaacgct
A F M V P R D P S K G W G F P N A N N A
cgcgttgctgctgccgccgcctccactcctgtccagacccccggcaacacccctaccact
R V A A A A A S T P V Q T P G N T P T T
cccgtggccacccctggtgtcactggcggcgccactgccgccgctggcttccccgcctcg
P V A T P G V T G G A T A A A G F P A S
tccggcaccagccagctcagcgcccccatgaccgtcaccggcagcttcgacggtggcatg
S G T S Q L S A P M T V T G S F D G G M
aaggccttcggccgcggtgtctcctgcactggccaggctgagggtggcgacagcgacgct
K A F G R G V S C T G Q A E G G D S D A
gtcttcatgatcgaggagggcggtactctctccaacgtcatcatcgccgccgatcagatc
V F M I E E G G T L S N V I I A A D Q I
gagggtgtccactgcttcggttcctgcactctcaagaacgtctggtgggtcgccgtctgc
E G V H C F G S C T L K N V W W V A V C
gaggacgctttcaccatcaaggagcagggcgcctctggcactacccacatcatcggcggt
E D A F T I K E Q G A S G T T H I I G G
ggtgctcagggcgccgaagacaaggttctccagcacaacggcggcggcactctcgctgtc
G A Q G A E D K V L Q H N G G G T L A V
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S G F L A K D F G K L Y R S C G N C D E
atgcccgagcgccacgttaccatcgacggcgttaccgctgagtctggtgacatcctggtc
M P E R H V T I D G V T A E S G D I L V
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G I N S N M G D T A T I T N T C A T G V
gagaccatctgccaggagttcaacggtgtcacggacggcagcgagcccgaggctgccggc
E T I C Q E F N G V T D G S E P E A A G
agcggccctagcactgcttgcaagtacactgccgctgacgcccaggcctgctaa
S G P S T A C K Y T A A D A Q A C -
配列番号：２１
長さ：２９７
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MQYSIRSLAFGLAALAVSTDAFMVPRDPSKGWGFPNANNARVAAAAASTPVQTPGNTPTTPVATPGVTGGATAAAGFPASSGTSQLSAPMTVTGSFDGGMKAFGRGVSCTGQAEGGDSDAVFMIEEGGTLSNVIIAADQIEGVHCFGSCTLKNVWWVAVCEDAFTIKEQGASGTTHIIGGGAQGAEDKVLQHNGGGTLAVSGFLAKDFGKLYRSCGNCDEMPERHVTIDGVTAESGDILVGINSNMGDTATITNTCATGVETICQEFNGVTDGSEPEAAGSGPSTACKYTAADAQAC*
配列番号：２２
長さ：１０４７（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
GAATGGTATAAAGAGCGGTGGGATATCCATCATTGAGCTCATCACCAACCCACAATTACTTTCGTTCTACACTCCTCTCGTTTACACAACGGATCACTGATCTACCACATTCGCTCTTACCAAAGATCCTGTCTACCAACCATCTACAACATGCAGTTCAAGTACGCCGCTCTCGCTGCCGCCCTGGCCGCCGTCGGCTCCACGCAGAGCCTCCCCATCCCCGCCTCCCGCGGAGTTGATCCCAACAAGGGCCAAAGGATCGTCAAGCCCGGCAATCCTTTCGACGGCGGGATGAAGGAGTTTGGCCGTGGTGTCGTCTGCAACGACAAGGCCGACACTGGCGTCAGGAACGCCGTCTTCGTCATCGAGGACGGCGGTGTTCTGCGCAACGCCATCATCGGCGCCGACGCCGTCGAGGGCATCCACTGCGAGGGCAAGTGCACCATCGAGAACGTCTGGTTCCGCGACGTGTGCGAGGACGCCATCACGCTGAAGGGCAACGGCCCTTACACCATCACTGGCGGCGGCGCCCAGAACGCCGGCGACAAGGTCATCCAGCACAACGGCAAGGGCGAGCTGCGCATCTCAAACTACCAGGTCAACAACGTCGGCAAGCTGTTCCGCACCTGCGGCAACTGCAGCAACAACGGCGGCCCGCGCAGCATCGTCGCCACCGGCATCAGGGCCTTCGGCGTCACCAGCGACCTCATCGGCATCAACTCCAACTACGGCGACAAGGCCTCCATCACCGGCTCCTGCGGCAACACCAAGACGGTCTGCCAGGAATATGTCGGCATCGAGAAGGGCGCCAACGGCGGGAAGGACAGCGAGAAGAGGGTCCCGCCGGTCGGCGCTTGCACCGGCCAGGGCGGTCTCGCCAGGCTCCCTTCCTGCTAGACGCCTCGCGGAATCTTGCGCTGAGTATGGGATGGGAGGAATGGATTGACCGCCTCAGTTTGGGATCCGTGCGAACAGTCGGGAACTTCGCAACTGCCTCATCCGTCAAGAGGTGTGGGCCCCTGCCGGACAGGATGAAACGCGTTTATG
配列番号：２３
長さ：７４７
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（７４７）
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G L A R L P S C -
配列番号：２４
長さ：２４８
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
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配列番号：２５
長さ：２４９５（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
GTTTGGTGCGTGGGAACGCATTTAACGGTGGATGAATCGATCCAAGGCTTCCAAGGCAGAGCCTCCGAAACAGTCAATATTCCATCCAAACCAACGCCTATTGGATTCAAGATTTGGGCACTTTGTAACGAGGCTTTTTTGGTTGATTGGATGTTCCATTCAAATGGCGAAGGACCGTGGGATCTTGACGAGTATTACACCGACGAACAGTACGAAATTAACCTCACACAGACGGCTGCAGTGGTGCCCGATTTGGTGGCTCAGTTATGCCCACATGAGCTGCCATTTGACAGCCCAAAATACATCGTTTGGATAGACAATCTGCTTACTTCTGCGCGGCTTATGACAACGCTCCGGAACGAGAATATTGGCGCTGCAGGGACTGTTCGAATGGGCAAGACACAGCGTGAGAAGAATGAAGAGAAGGCAGCTAGCAAAAAGAAGCAAGCCACCAAAGAAGATAACCGTGGTTTACACCAAAGGCTTCGAGATTTGAGGTCAAAAAATGAAGGACAGATCGAATGGGGCACGCAGTATTGCTGTCTATCACAGGACGAGCAGTCAATGCAATTTGGCTGGCAGGATGCAAGAATTGTGCTATTCATGAGCACTGTTCATGACGGTAAACAATGGGTGATTCGACGACGACGGCGGCCCACAAAGACCTCCACCAATTCGAAGATCACTCAGAAGCCATTTGGTGATAACGTGGAACAAGATATGGAGATTCCGAGGTGGGCAGACGAGTACAATCACAACAAGAATGCGGTTGACCGTTTTGACCAATTCAAAGCCGAACGCCAAATCAATCGACTTTGTTATCGAACATGGAAGCCTCTTTGGAACTTCCTCTTCCAATCATCGATCATCAGTGCATATCTGCTCACTTGTAGAGGCTTGGATGACGATGAGAAACCTCCATTCGCGTCCCTGAACGCATTCCGCCAGAGGCTTTGGGAGCAGCTCTTTGAACGCTCAGAACGCGTTGACGGACGCCGTGGACGAGCAGAGCCTCGTTATCGTGAGATTCCACGCGAAGAACATCAATATGAGAGGCTTAAGGTCCAAGGGAACTGCAGTGAATGTATGGCTAACATGCGCAAATCAACGCGTATTCGAAGGCCACTTGCAGAGCGTTCCACCAACATTCGGCCACCAAGGCCAAGGTGGGGCTGTGGGCTATGTAATCTGAATCTTTGTGAAGGCATTTGCTTCAAAAATCACTTGAATCGGGTGATAGGAAGCAGTTGAATTTGATGTGGAAGTTGGGCTCGATTTGGTCGCGAATTCGTCGCGATTTAGATCTAAAACACCAAGATTTGGGCCGTAAATCGAATATATATAAATGCAAATAGACTCATTTGAATTTGACAGCTTATGCGACCTCAAAACACTACGTTTTAGTTGAATTATTGCGATTATTGGGCTGCGAAAAGCCCCTGATGACTTTGGTGTTCTGACCCCTGTCACCACCCCTGTCGCTCTCAAGCTCTCCATAGATTGAGAGCATATCCAGCCTACGAAGGGATACCACTGCCCCCTCCTGGCGGCTTCCGCCCTGGCTGCTCCTGCCGACGACACTTTCGGCTACGAGCTCGTTCGCCGTGCGAACTTCCCTATTCCTGCCTCCAAGGGCACCGTCAAGTACAGCGCTGCCAAGTCCATCTCCGGCACTTTCGATGGTGGCCTGAAGACCCTACAGCCGTGGTGTCAAGTGCATCGGTCAGGCTGAGGGCGGTGACAAAAAAGCCGTCTTCATCCCTGAGGACGGTGCTAGCCTCAAGAGCGCCATCACTGGCACCGAGCAGATCGAGGGCGTCCACTGCAAGGGGCTCCTGCACTATCGAGAACGTCTGGTGGGCTGGTGTCTGCGAGGATGCTCTCTCCCTCAAGGGCAACGGCAACGCCAAGATCATTGGTGGCGGTGCCACTGGTGCCGAAGACAAGGGTAAGCTCTCTTCTGCAAGAGCGTTGCGATCGGATTTCTAACACTCTCTGGTGCAGGTCATCCAGCACCGGTTTTGGATCCGTCTCTATTGACGGCTTCACTGTTGCCGATTTCGGCAAGCTCTACCGCTCTTGCGGAAACTGCAAGAAGCAGGGCAAGAGAACTGTCACCATCAAGAATGTCAAGGCATCATCCGGCAAGCTGCTCGCTGGTATCAACTCCAACTACGGCGACACTGCTACCATCACCGGCACCTGCGCTGCCTCCGTCAAGAAGATCTGCACCGAGTTCATGGGCAACAACAGCGGCAAGGAGCCCAGTGTGGTTTTCAATCTCGATCTTATCAATCTTATCAATCGATCCCTATCAATCGATATCAAGTCCATCATGGAATTGAATTGACGATTGATAAGGATCGACAGCCTCCTGGTTGCCCTGCCAAACGCCACCAAACAAACGCCATAAAACACGCCCGCAGGGAGCCGCAGGACCCGAAATGCATCAAACAGTCCTCTTCTATTGCATTATCAATTATCGGGCATGGATG
配列番号：２６
長さ：１７０７
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（１７０７）
atgttccattcaaatggcgaaggaccgtgggatcttgacgagtattacaccgacgaacag
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S I S S P S W N -
配列番号：２７
長さ：５６８
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MFHSNGEGPWDLDEYYTDEQYEINLTQTAAVVPDLVAQLCPHELPFDSPKYIVWIDNLLTSARLMTTLRNENIGAAGTVRMGKTQREKNEEKAASKKKQATKEDNRGLHQRLRDLRSKNEGQIEWGTQYCCLSQDEQSMQFGWQDARIVLFMSTVHDGKQWVIRRRRRPTKTSTNSKITQKPFGDNVEQDMEIPRWADEYNHNKNAVDRFDQFKAERQINRLCYRTWKPLWNFLFQSSIISAYLLTCRGLDDDEKPPFASLNAFRQRLWEQLFERSERVDGRRGRAEPRYREIPREEHQYERLKVQGNCSESYEGIPLPPPGGFRPGCSCRRHFRLRARSPCELPYSCLQGHRQVQRCQVHLRHFRWWPEDPTAVVSSASVRLRAVTKKPSSSLRTVLASRAPSLAPSRSRASTARGSCTIENVWWAGVCEDALSLKGNGNAKIIGGGATGAEDKGHPAPVLDPSLLTASLLPISASSTALAETARSRARELSPSRMSRHHPASCSLVSTPTTATLLPSPAPALPPSRRSAPSSWATTAARSPVWFSISILSILSIDPYQSISSPSWN*
配列番号：２８
長さ：１９２２（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
CAAGATGTGCTTTTGCTCTCCAGGACATTCCTCTCCATCCCTCGTTTCCAATCACTTTCAGTCTTTGCCACTCCTTCGCTGTCCACTGTAGTCCGGAACTACATCAGTAAACCACCTTCTTTTCCAACAGACCCCATCACATCCGCCAAAATGGTCAACATTGCTGCCGTCTGCCGCGCTGCGGCTTTCTTTCTTCCTGTCCTCGCCGCCGCCCAGAGCGGTGTCGTTGGTACCCCTTCCGGTTTCGCCGCCGGCACCACTGGTGGTGGTGACGCTGCCGCCGCCGCTCCCTCCGACGTTGCTGAGCTCATCTCTTGGCTTGAGGATGAGACTCCCCGTGTCATCCTCATCGACAAGGAGTTCAACTTCCTCGGCACGGAGGGCACCAAGAGCGATCAGGGCTGCCGTCCCGACAGCAACAAGTGCCCTGGCAAGGGTGGCCAGGATGCCATCAACCAGGCCAACTGGTGCGACAACGGCAACGCTGGCGAGGGTGTCTCGGCCGTCACCGTCAAGTACGACCAGGCTGCGCTCAAGGGCATCGCTGTCAAGAGCAACAAGTCCATCGTCGGTGTTGGCGACAAGGGTGTCCTCAAGGGCAAGGGCCTCAGCCTGACTGGTGGCGTTGAGAACGTTATCATCCAGAACATCCACATCACCGACCTGAACCCCGAGTACATCTGGGGTGGTGATGCCATCACGCTCGCTGGTTCCGACAAGGTCTGGAGTAAGTACTTCCGAACTGTTTCGATCCCATACGGTTGGCCTTGAAACCCAAATCGGGAAACGCACTATACCCAATATGGCAATTTTCTACGAACATCGAGACACCGCAGCAGAACACGAGTTTCACGCCATTGCTTGTTTCTGTGGCTGTCAATGCTGTCTCGAAGTCCCTGTATGCTGTTTGGCTTGATGCGCTAGTGCGTTTCCTGAGAGAGGTGCCCACCACACCATCATGCCCCAAGCTCCCTTACCCCTTTCCCAGCATCCCACATCATGCTATATCCTTTACTATGCTTTCAACAGTAAAACTAACGCCCGAAACGTCGATCATGTCAAAATTTCTCTCGTCGGTCGCCAGATGATCGTTACCGGCTACGACAAGGCCGGTAGGGTCACGATCTCCAACTCCGAGTTCGACGGCCAGACCGACTGGTCCGCCTCCTGCAACGGCGAACACTACTGGACCGTCCTCGTGTACGGTGCCGACGACCAGATCACCTTCGCAAACAACTACATGCACGACACCTCGGGCCGTTCGCCCAAGATCGGTGGTGCCGACGGCGCTGGCATCACCTTCCACGCGGTCAACAACGTCTTCCAGACCAACAAGGGCCATAACTTCGACATCGGCTCCGGTGCCGAGGTTTTGCTCGAGGGTAACACCTTCAACGAGTGCAACCAGCCCATCACCTCCAAGTCGGCCAACGAGGGCGGCGCCATCTTCAACACCCCCTCCGGCTCCGAGAGCTCCTGCTCCAGCTACCTCAAGCGCGCCTGCCAGGCCAACACTCTCACCAGCTCCGGTGACTTCGGCACTTACAAGGACACCTCGGTTCTCGAGGGCTTCAACGGCGCCACCTCCATCTGGGAGGCCGTCAGCGCTGAGGAGGCTGCTGCGTCCGTCATCGCCAACGCCGGTATTGGCAAGCTCCAGGGCGGTGCTAGCAACTCCACTGCCAAGTTCAGTATGTCTTCTCCCTTCAACCCTGTATCACAGGAGACATGTACTAATAATTCTCTCCTCTGCAGGGCGCTTCCAATCCTAGATTAATAAGCACGATCGACCGAATACTAGCATCAGTACGGTTTTTAGATAAAAAGGGATCTGTCTGGTTTACTGTAGATATTTAGCCTTCCTTTCTTTGGCTTCACATATTTTTAACTTTACAGCCCAAGAGGGCTCAATGCAAATACTT
配列番号：２９
長さ：１３１４
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（１３１４）
atggtcaacattgctgccgtctgccgcgctgcggctttctttcttcctgtcctcgccgcc
M V N I A A V C R A A A F F L P V L A A
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D A A A A A P S D V A E L I S W L E D E
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I N Q A N W C D N G N A G E G V S A V T
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配列番号：３０
長さ：４３７
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MVNIAAVCRAAAFFLPVLAAAQSGVVGTPSGFAAGTTGGGDAAAAAPSDVAELISWLEDETPRVILIDKEFNFLGTEGTKSDQGCRPDSNKCPGKGGQDAINQANWCDNGNAGEGVSAVTVKYDQAALKGIAVKSNKSIVGVGDKGVLKGKGLSLTGGVENVIIQNIHITDLNPEYIWGGDAITLAGSDKVWMRFLREHPTSCYILYYAFNSKTNARNVDHVKISLVGRQMIVTGYDKAGRVTISNSEFDGQTDWSASCNGEHYWTVLVYGADDQITFANNYMHDTSGRSPKIGGADGAGITFHAVNNVFQTNKGHNFDIGSGAEVLLEGNTFNECNQPITSKSANEGGAIFNTPSGSESSCSSYLKRACQANTLTSSGDFGTYKDTSVLEGFNGATSIWEAVSAEEAAASVIANAGIGKLQGGASNSTAKFRRFQS*
配列番号：３１
長さ：１３２６（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
ACCAATCGTCACAGATCCGCTGGACACGATGCAGCGTGCACATATAGATCGGCTCCGCAGCGTTAATGCTGTCCTCCAGCAGCAGCCTCAACTTTCTCTTCACCTTTCTCTTCACCTTTCTCTTCACCACCAGCCCAGCCCACCCTCACCATGAAGTTTCTTTCCACTTTGGCCCTGGCGGCCCTCGCGCACCTGGCGTGCGCCGTCCCCATGGCCGAGAAGCGTGCCCCCGCGGCCACGCCCGTCGGCTACGCCTCGCAGAACGGCGGCGTGACCGGCGGTCAGGGCGGCACCACCACCACCGTCTCCTCGCTGCCCGAGATGACGGCTGCCCTTAAGAAGGGGGACACGGAGAAGAAGGTCGTCTACGTCAAGGGCAAGATCTCCGGCAAGGCGAAGATCTACGTTGGCTCGAACAAGGTGCGGCCTCACCCCTTCACTCCATGACATCCGGGTAGCTAACGCAGCCTGCAGTCCATCCTCGGCGTTGACTCCAGCTCCGGCCTCGAGGGCATCGGACTCCTCGTCCGTGACGCCAAGAACGTCATCATCCGCAACCTGGCCATCTCCAAGGTCGAGGCCGACACGGGCGGCGACGCCATCGCCATCGACGGCTCCACCAACGTCTGGGTCGACCACTGCGACCTGTCCAGCGACCTGGCCGCCGACAAGGACTTCTACGACGGCCTGCTCGACATCTCCCACGGCGCCGACTACGTCACCGTCTCGAACGTCTACTTCCACGACCACCACAAGAACTCGCTCGTCGGCCACTCCGACTCCAACGCCGGCGAGGACACGGGCAAGCTGCACGTCACCTACGCCAACAACTACTGGAGCAACGTCGGCTCGCGCTGCCCGCTCGTGCGCTTCGGCACCGTCCACATCGTCAACAACTACTTCGAGGACGTCTCCGTCTCCGGCATCAACACCCGCATGGGCGCCCAGGTCCTCGTCGAGAACAACGTCTTCAACAACGTCGTGCAGGCCCTCGTCTCGATCGACTCCAAGGAGCTCGGCTACGCCGTCGCGCGAGGCAACGACTGGGGCACCTCCAAGAACGAGGCCCCCGAGGGTACCCTTACCAAGGTGCCTTACACCTACACCGCTGTTGAAGCGAGCGCGGTCAAGGCTGCTGTTGTTGGCAGCGCGGGCAACACCCTCTCTGGCTTGTAAACATTTGACCTCGACGGGTTGCTCGAGAGAAGCCTATCTACATAGCCTGTGTTTACAAGCAATTCTCTGTAGATATTTTTATACAATCTCTAATTGTAAATACGAAATCAAATCCGAATTAGTGGAATGCTTGCCTTAAGCTCTTCGGAG
配列番号：３２
長さ：９７２
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（９７２）
atgaagtttctttccactttggccctggcggccctcgcgcacctggcgtgcgccgtcccc
M K F L S T L A L A A L A H L A C A V P
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M A E K R A P A A T P V G Y A S Q N G G
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V T G G Q G G T T T T V S S L P E M T A
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T A V E A S A V K A A V V G S A G N T L
tctggcttgtaa
S G L -
配列番号：３３
長さ：３２３
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MKFLSTLALAALAHLACAVPMAEKRAPAATPVGYASQNGGVTGGQGGTTTTVSSLPEMTAALKKGDTEKKVVYVKGKISGKAKIYVGSNKSILGVDSSSGLEGIGLLVRDAKNVIIRNLAISKVEADTGGDAIAIDGSTNVWVDHCDLSSDLAADKDFYDGLLDISHGADYVTVSNVYFHDHHKNSLVGHSDSNAGEDTGKLHVTYANNYWSNVGSRCPLVRFGTVHIVNNYFEDVSVSGINTRMGAQVLVENNVFNNVVQALVSIDSKELGYAVARGNDWGTSKNEAPEGTLTKVPYTYTAVEASAVKAAVVGSAGNTLSGL*
配列番号：３４
長さ：１３２０（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
TCTCCAAGTTCATCTTCATCTTCAGTCTTTCTCTATTAAACGCGTTGACTCGCGCCATTCTTTGACAGCCATCAGCCTGCTGAGCACGCTTGACCACATATTCCTTCCCTTGAAAGTTCCCGTTTGCTCAACAACACTTCCACCGCAACCATGAAGGCCACCACCCTCGCTACTTTTGCTCTTTCCGCCGTGAGCGCTCTGGCAGCGCCCACCAAGACCTTCGCCAAGCGTGCCGCCATCACTGACGGCCCCGACGTCGGCTATGCCACCCTGAACGGTGGCACCACTGGCGGTGCTGGCGGTTCCACCACCACCGTCTCCAGCCTGGCCCAGTTCACCGCTGCCGCCGAGGCTGATGGCGCCGCCGTCATTGTCGTCTCCGGCAACATCTCTGGCGCCGCCAAGGTCCGCGTCGGCAGCGACAAGACCATCATCGGCAAGGACTCCAGCGCCGTGCTCGAGGGCGTCGGTCTCTACATCAACAAGCAGAAGAACGTCATCGTCCGCAACCTGTCCATCAAGAATGTGCTTGCGGAGAATGGTGACGCCATCGGCATCCAGGCTTCCCAGAACGTCTGGATCGACCACTGCGACCTGTCCTCGGACCGTGACCACGACAAGGACTACTACGACGGTCTCCTCGACGTGACCCACGCCTCTGACTACATCACCCTGTCCAACAACTACCTCCATGACCACTGGAAGGCCTCGCTCGTCGGCCACTCCGACTCCAACGGCTCTGAGGACAAGGGCCACTTGACCGTCACCTACTACCAGAACCACTTCGAGAACCTGAACTCGCGTGGTCCTTCTTTCCGCTTCGGCACCGGTCACATTGTATGTTGCCCACCAACCTGACACCACAGTAATGATTCTAACGGCAAATGCTAGGTCAACAACCTCTACACCAGCGTCAGCGACGGTATCAACGCTCGCCAGGGCGCCCAGCTCCTTGTTGAGGGCAACGTCTTCACTGGCAGCAAGAAGCCGCTGTACAGCACCGATGCCGGCTACGCCGCCGTCAACGACAACGACTTCGGCGGCGCTGAGAACACTGCTGAGGCTGGCACCCTCACTGCCTCTGACCTCGGCTACAAGTATACCGCTCTGAAGTCTTCCGAGGTCTCTGCCGCCGTCTCCAAGTCGGCTGGCGCCACGCTCACTTTCTAAACGAAGTCGCGACGCTCTCTCGTTTTGGAACTCGCCGCAATGCCCGAGCCAGGGTTCGGATGCATGGAAGGAATGCATTGTGATGGATGAAGAGCAACATACTTTTTTGGGGGGGAAAAAGCACAGGGCGTGCTACTTTTTCATGTACAT
配列番号：３５
長さ：９６６
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（９６６）
atgaaggccaccaccctcgctacttttgctctttccgccgtgagcgctctggcagcgccc
M K A T T L A T F A L S A V S A L A A P
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T K T F A K R A A I T D G P D V G Y A T
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L S I K N V L A E N G D A I G I Q A S Q
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N V W I D H C D L S S D R D H D K D Y Y
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D G L L D V T H A S D Y I T L S N N Y L
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H D H W K A S L V G H S D S N G S E D K
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G H L T V T Y Y Q N H F E N L N S R G P
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S F R F G T G H I V N N L Y T S V S D G
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A E N T A E A G T L T A S D L G Y K Y T
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A L K S S E V S A A V S K S A G A T L T
ttctaa
F -
配列番号：３６
長さ：３２１
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MKATTLATFALSAVSALAAPTKTFAKRAAITDGPDVGYATLNGGTTGGAGGSTTTVSSLAQFTAAAEADGAAVIVVSGNISGAAKVRVGSDKTIIGKDSSAVLEGVGLYINKQKNVIVRNLSIKNVLAENGDAIGIQASQNVWIDHCDLSSDRDHDKDYYDGLLDVTHASDYITLSNNYLHDHWKASLVGHSDSNGSEDKGHLTVTYYQNHFENLNSRGPSFRFGTGHIVNNLYTSVSDGINARQGAQLLVEGNVFTGSKKPLYSTDAGYAAVNDNDFGGAENTAEAGTLTASDLGYKYTALKSSEVSAAVSKSAGATLTF*
配列番号：３７
長さ：１８９６（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
CAGCCAATACGGTGGCCTGAAACATACTCATATTCCTATATCCAATTCCACCCAGAAACATATTTACACGGCCCGTCCCTTAGCCCAATTGACCCCGGAAGCGTCTCTCTTTTTCCCTTACGCTCGTTTCTTTTTCTCCCTGTCATGCTGATGGCGTCCTGTCTTCCCCTGGCCCTAGTGGCCTTTTCTTCACTTTCCTATGCTCTTCAGCCCTACAGTGGCCCGGCGCCAGACCTTCCTGATCGTAAGCCATTCGGCTTCGGTGCCGCCGCCACAGGTGGCGGTACCCCCACGCCGAACAATACCTACCTGGTCGACAACATGCCTGATCTGCGGACCGTTCTAAAGATGGAGACTCCCCGCACAGTTTACGTGAAGGGCGAGATCAAAGGCAACGAAATCAACGAGACCACGACCGGCAATTGCCAATTCTACATTGACAGCAGCAACAACTCCAAGTTCAACTTTACCCTCTACATCCAGAGCTACAACGAGACCTACATGGGCCAGGTTAAGGCTGCCTCCGAAGCGGGCCAGCTATTCGACGGACAGAACGCCACCGAGCTCCTCAATCTACTCGGCCGCCAGAACGTGAGCTTCCATGTGCCCGGAAAGGTTTCAAAATAACAGCAACGCTAACCCACCTCGCAGGGCTGGCGCGGCCAAGTGCAAAACGTGCAAAAGTCCTACGAAGCCATTGACGTGGCCAGCAACCTTACGCTTATCGGCTGGGACTCGTCCGCGTACCTGAATGGCGTCAATCTCGGGTTCAACTCGCGCTCCAACATCATCATGCGCAACCTGCGCATTTCGTCGCCGCGTGACTGCTTCCCGTCGCCGGAAACCTACCCCAGCAGCTGGAACGCGCGTTACGACGCCGTGTCCATGGTGTCGACGACGACCGCGTGGCTCGACGGCAACATCTTCGAGGACGGCCCCGTCGCCGTCGCGCCCGACGACTTCGCGGGCGGGTGGAAGGTCGACCGGTACGACGGCTTGTTTGACGCCGAGGACGGCAGCGACGACATCACCTTCTCGCACAACATCGTCACCAACCACCACAAGAGCCTGCTGTGGGGCGGCGGCAACAAGGAGGCGGACCGCGACATCGGCAAGATGAAGTTCACCGTCTTCGGCAACCGCTTCGTCGACAGCTTGTCGCGCAACCCGCTGATGCGCTTCGGCACCTTCTACATCGTCGCCAACGTCTTCGAGAACTACGCCGAGCGCGCGCCGCTGTTCGAGGACGACAGCGTCGCCGCGAGCGCGGCCGCCTCGCGGCTCGTTCGACGCGCGGACAATGCCACCACCTACAGGCCGGACTTCCAGTACAACATGGGCATCTACAACGCCAGCACCGTGTACGTCGCGGCGAATGCGTTTGTCCAGACGGGCACCTATGCGGACGATTCGTCGCGCGTCTTCTCCTTCTCGGACCTTGCGACGCCGGGCCTGCCCGCGACGCTGTGCTCGCCGGCTGATGGCGCGAACGGGACGGCGTCGGCGTCGTCCCTGCCGAAGAGCGTTTTCAATGGCAGGCCTATCGACCTTGCGAAGAATGCCAAGAACACGTGGGCGTATTTCCTGGAGAGCAAGAATGAGGACGGCGAGTTCGCCGAGGGTGGGTTCGTGATTGGATGTGACGGGCTGGAGGAGCAGGAGACGCCGGTTGCGTTTAAGGATGGTAACGAGGTCGATGCATATGTGCGGAAGAATGCAGGGCAGGTAGGGAGGGCGACGCCGTAGGGGTGCAAGTGGATGCCAGGCTGATGGTTGGTGGTGGAATGTTTGTGGAACCGCGAGCGGATAGACTTGGCGGGAAGTGCCTCCTCTTGGCGGAAGGTATGCATGTACAATGGGTCAACGGTAGAGATCTGCGGCTTTTCCGGCGGCGGG
配列番号：３８
長さ：１５３６
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（１５３６）
atggcgtcctgtcttcccctggccctagtggccttttcttcactttcctatgctcttcag
M A S C L P L A L V A F S S L S Y A L Q
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P Y S G P A P D L P D R K P F G F G A A
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A T G G G T P T P N N T Y L V D N M P D
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L R T V L K M E T P R T V Y V K G E I K
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G N E I N E T T T G N C Q F Y I D S S N
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N S K F N F T L Y I Q S Y N E T Y M G Q
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V K A A S E A G Q L F D G Q N A T E L L
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N L L G R Q N G W R G Q V Q N V Q K S Y
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E A I D V A S N L T L I G W D S S A Y L
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N G V N L G F N S R S N I I M R N L R I
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S S P R D C F P S P E T Y P S S W N A R
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D G P V A V A P D D F A G G W K V D R Y
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D G L F D A E D G S D D I T F S H N I V
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T N H H K S L L W G G G N K E A D R D I
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G K M K F T V F G N R F V D S L S R N P
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L M R F G T F Y I V A N V F E N Y A E R
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R A D N A T T Y R P D F Q Y N M G I Y N
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A S T V Y V A A N A F V Q T G T Y A D D
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S S R V F S F S D L A T P G L P A T L C
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S P A D G A N G T A S A S S L P K S V F
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N G R P I D L A K N A K N T W A Y F L E
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S K N E D G E F A E G G F V I G C D G L
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E E Q E T P V A F K D G N E V D A Y V R
aagaatgcagggcaggtagggagggcgacgccgtag
K N A G Q V G R A T P -
配列番号：３９
長さ：５１１
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MASCLPLALVAFSSLSYALQPYSGPAPDLPDRKPFGFGAAATGGGTPTPNNTYLVDNMPDLRTVLKMETPRTVYVKGEIKGNEINETTTGNCQFYIDSSNNSKFNFTLYIQSYNETYMGQVKAASEAGQLFDGQNATELLNLLGRQNGWRGQVQNVQKSYEAIDVASNLTLIGWDSSAYLNGVNLGFNSRSNIIMRNLRISSPRDCFPSPETYPSSWNARYDAVSMVSTTTAWLDGNIFEDGPVAVAPDDFAGGWKVDRYDGLFDAEDGSDDITFSHNIVTNHHKSLLWGGGNKEADRDIGKMKFTVFGNRFVDSLSRNPLMRFGTFYIVANVFENYAERAPLFEDDSVAASAAASRLVRRADNATTYRPDFQYNMGIYNASTVYVAANAFVQTGTYADDSSRVFSFSDLATPGLPATLCSPADGANGTASASSLPKSVFNGRPIDLAKNAKNTWAYFLESKNEDGEFAEGGFVIGCDGLEEQETPVAFKDGNEVDAYVRKNAGQVGRATP*
配列番号：４０
長さ：１７９８（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
CGGGTTTTGGGAATATCTCCGGGCTTCGGTGGACCGTCCTATCCGTCTGAGCATGCCAATATGTTTTCTTGCCTTTCTGTCCGTATATAAAATGCCAGTCAAGAAGAATTCTCGTGTTTCACACCTTTCTTCATCCGATCTCGCCTCAGTATGCGTGCATCAGTCTCAATTACGGTCTCGCTACTGGCATTTGCCCTGAGGGCGTGCGCTGTTGGTGTGGTTGGGAGTCCGGAGGGATTTGGCTCCGGGACAACAGGTGGAGGTAGTGCCACGCCGGTTTATCCTTCGACCACGAGCGAATTGCAGTCCTACTTGGAAGACGATGTTGCCCGAGTTATCGTCCTGAACAAGGAGTATGCAACCAAACAATTGTTTAATAAGCCTAAAACTGACCATGTCCAGGTTCAACTTCAAGGGCACCACCACCACTGCGACGGGCTGCAGACCCACATCCAACACTTGCCCCGGTAATGGTGGCCAAGATGCAATTAATGCCAACGGTTGGTTAGTATCTGCTGGTTGCTCTCATCTGGTTCTTTGTGACTAATGTTCAACGCAGGTGCGGAAGTGCTCCGGCGGTCTCCGTGAAGTACGACACGGCCGCTATTACGCCCATAAATCTCGGCTCTAACAAGTCTCTTATCGGCATTGGCACATCTGGTGTCATCCGCGGAAAGGGTCTCCGTATCGTCAGTAAAACTAATTCTTGCTATCAGTTGACGAAGAAACTTACAGTTGATGAAATCTCTTCAGGCCAACGGAGCTAAAAATGTCATCATCCAAAATATTCATATTACCGATCTCAACCCGCAGTACATCTGGGGTGGAGATGCCATTACCCTGGATGGTGCTGATCTGGTTTGGGTGGACCACGTTAAGGGACGTATACTCCCGAACCCTCGCTCGAGCATTATTCTGACCTTGCCAACTACAGATCTCTCTCATCGGCCGCCAGATGTTTGTCGCGGGCTACGGGGCATCTAACAGAGTAACTATCAGCAACACGGAGTTCGACGGCTCAACCTCCTGGAGCGCAACTTGCGACGGGCATGTACGTGCCGCCTCCCAGCCCACCACCACCTCCTTTCTTTCACTGGAGTAGCTTAGATGCTAATATGCCTTATCTTTCCTTCTAGCACTACTGGACTATTTTGCTTTTGGGCTCAAACGACTTGATCACAATGAAAGGCAACTATATCCACCACACCAGCGGCCGTGGACCCAAGATCGGAGGCAACACCCTGCTCCACGCCGTAAGTTCCGCCCCACAAACACCCTTGCCTCACCAATCGCCTGCTGAAACATGCTATTTCCACAGGTCAATAATGAGTGGTACGCCGTTTCGGGCCACGCCTTCGACCTGGGCGAGTCGGGCGCCATGGCCGTTGCCGAGGGCAACGTTTTCCAGAACGTCGTCACGCCGCTGCTTTCGCCCGTCGAGGGCCGCATCTTCACGGCGCCCAGCACTAGCGCCAACACCGCCTGCGCGACCTACCTTGGCCGCAACTGCGTCGTCAACGCCTTCGGCAGCAGCGGCACCTTCTCCGGAACCGACACCAGCTTCTTCTCCAACTTCAACGGCAAGACGATCGCGAGTGCAGCCGCCGCCGCATACAAGGATTCGACAGCGGGTGTGGGGAAGATTTAAGGGCGGAGCGGGTGGTTTTGCATTTAGGGGCTGTGATATTGCGTTGGATGTTGGAATGAGGTCAGCAAAAGAAAATCTAAAATCAACGATCATGAATGCTGGCTGGAAGGAAATTGTTTGAGAACTACTTGTGCTTTTTTTTtATTACTG
配列番号：４１
長さ：１１３７
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（１１３７）
atgcgtgcatcagtctcaattacggtctcgctactggcatttgccctgagggcgtgcgct
M R A S V S I T V S L L A F A L R A C A
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V G V V G S P E G F G S G T T G G G S A
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T P V Y P S T T S E L Q S Y L E D D V A
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R V I V L N K E F N F K G T T T T A T G
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C R P T S N T C P G N G G Q D A I N A N
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G W C G S A P A V S V K Y D T A A I T P
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I N L G S N K S L I G I G T S G V I R G
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K G L R I L M K S L Q A N G A K N V I I
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Q N I H I T D L N P Q Y I W G G D A I T
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L D G A D L V W V D H I S L I G R Q M F
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V A G Y G A S N R V T I S N T E F D G S
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T S W S A T C D G H H Y W T I L L L G S
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N D L I T M K G N Y I H H T S G R G P K
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A F D L G E S G A M A V A E G N V F Q N
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V V T P L L S P V E G R I F T A P S T S
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A N T A C A T Y L G R N C V V N A F G S
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S G T F S G T D T S F F S N F N G K T I
gcgagtgcagccgccgccgcatacaaggattcgacagcgggtgtggggaagatttaa
A S A A A A A Y K D S T A G V G K I -
配列番号：４２
長さ：３７８
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MRASVSITVSLLAFALRACAVGVVGSPEGFGSGTTGGGSATPVYPSTTSELQSYLEDDVARVIVLNKEFNFKGTTTTATGCRPTSNTCPGNGGQDAINANGWCGSAPAVSVKYDTAAITPINLGSNKSLIGIGTSGVIRGKGLRILMKSLQANGAKNVIIQNIHITDLNPQYIWGGDAITLDGADLVWVDHISLIGRQMFVAGYGASNRVTISNTEFDGSTSWSATCDGHHYWTILLLGSNDLITMKGNYIHHTSGRGPKIGGNTLLHAVNNEWYAVSGHAFDLGESGAMAVAEGNVFQNVVTPLLSPVEGRIFTAPSTSANTACATYLGRNCVVNAFGSSGTFSGTDTSFFSNFNGKTIASAAAAAYKDSTAGVGKI*
配列番号：４３
長さ：１６３１（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
GGTGGTGGTCTTGCACCTCTTCCGGTCCACTACTCACATTAACCCGTTCAATCGTTCCCACACATTCACTTATATTCCAACTCTCACACATTCGTTCTGTATCACGCAATCAATCTTTTTGTTTTTGTTTTTTGATCTATTTTAGCAAACATGAAGCTCACTCTCTTGTCTATTGTTCTCGCTCTTGCCCACCAGACTCGGGCCACCAGGGTTACGGGCGCTGCCGAAGGCTTCGCCAAAGGCGTCACAGGGGGTGGCTCTGCTGCCCCTGTCACCCCCAAAAATATTGTTGAGCTGACCAAATACCTTGCCGACGCTCAGCCCCGTGTCATCATCTTGGACAAGGAGTAAGTCCGCTATCACGGGAGGGCTTCAACCGCTCTATCTGGGGGATTTTCTCCAGCCGAACGAACGCTGACATCTATCTTCCTCAGATTCAACTTCAAGGGCTCAGAGGGAACCGTCAAGGAGATGGGCTGCCGTCCTCGTACCAAATGCTCCGAGACTGGCGGTGGCCAAGATGCCATCAACCACGCTAGCTGGTGCACAAACGGCAACGCTGGTGCCGGCTCCAAAGCCGTTTCTGTCACCTATGATAGAGCGGGAACCCTCGCCTTAAAGGTAAACTCCAACAAATCCATTGTCGGTGTCGGCAACAAGGGTGTCATCCGCGGCAAGGGTCTCCGTCTCGCCGGCGCTAAGAACGTCATCATCCAAAACATCCACATTACCGAGCTTAACCCTCAGTACATCTGGGGCGGTGACGGCATTCAGATCGACGGCGCCGACATGGTCTGGATCGACAGGTCCAAGATCTCTCTCGTGGGCCGGCAGATGCTTGTCCTTGGCAACGGCGCGTCCGGCAGGGTCTCGGTCACCAACAACGAATTCGACGGCTCTACTAGTATGCTGATCTCCATAGCCCCCTTGATCACCAAACGGCTAATCGCTCTTTCCAGGCTGGTCGGCTACCTGTGACGGTCACCACTACTGGGCCCTCTACTTCACCGGTTCCAACGACATGGTCACGTTCAAGGGTAACTACATCCACCACACTTCTGGCCGGAGCCCCAAGATCGGCGGTACCACGCTCCTCCACGCTGTAAGATCCCCAATGATCCGTGTCTCGTGACTCGCGCTGATTCCACGCCCAGGTCAACAACGTCTGGTATGCCAACTCCGGCCACGCTTTCGAGATCCTCGCGCCCAAGTCGAACGCCCTCATCGAGGGCAACATCTTCCAGAACGTCGTCCGACCCATGAAGGCCAGCACGGGCAAGGTCTTTGCTCCCTCTTCGGTCCAGGCCGTCTGCAATCGCGCTCTTGGCCGCGCTTGCCAGGCCAACTCTTTCGGCTCCTCTGGCCCCTTGACCGGCACCGACAGCAGCTTCCTCGGTCTGTTCAAGGGCAAGAACCCCGCTACTGCTTCCGCCGCCAGCCCCGCCATTTCTGGCCGCGCTGGTGTCGGGAAGATTGCCTAAATGCTGGCTATGTTCTGGGTTGGACGCTTGCTGAGCAAGCTGTCTTGGCTGGTTGGGTGCATGCACTCAGTTGATAGGCACAACCAACAATCTCTGGACGTGTTATCTCACTTGTCTGGCACTGAGTGGGAATGATTTATGACAGTTTTT
配列番号：４４
長さ：１１３７
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（１１３７）
atgaagctcactctcttgtctattgttctcgctcttgcccaccagactcgggccaccagg
M K L T L L S I V L A L A H Q T R A T R
gttacgggcgctgccgaaggcttcgccaaaggcgtcacagggggtggctctgctgcccct
V T G A A E G F A K G V T G G G S A A P
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V T P K N I V E L T K Y L A D A Q P R V
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I I L D K E F N F K G S E G T V K E M G
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C R P R T K C S E T G G G Q D A I N H A
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S W C T N G N A G A G S K A V S V T Y D
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R A G T L A L K V N S N K S I V G V G N
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K G V I R G K G L R L A G A K N V I I Q
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N I H I T E L N P Q Y I W G G D G I Q I
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D G A D M V W I D R S K I S L V G R Q M
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S N D M V T F K G N Y I H H T S G R S P
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K I G G T T L L H A V N N V W Y A N S G
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H A F E I L A P K S N A L I E G N I F Q
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N V V R P M K A S T G K V F A P S S V Q
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A V C N R A L G R A C Q A N S F G S S G
cccttgaccggcaccgacagcagcttcctcggtctgttcaagggcaagaaccccgctact
P L T G T D S S F L G L F K G K N P A T
gcttccgccgccagccccgccatttctggccgcgctggtgtcgggaagattgcctaa
A S A A S P A I S G R A G V G K I A -
配列番号：４５
長さ：３７８
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MKLTLLSIVLALAHQTRATRVTGAAEGFAKGVTGGGSAAPVTPKNIVELTKYLADAQPRVIILDKEFNFKGSEGTVKEMGCRPRTKCSETGGGQDAINHASWCTNGNAGAGSKAVSVTYDRAGTLALKVNSNKSIVGVGNKGVIRGKGLRLAGAKNVIIQNIHITELNPQYIWGGDGIQIDGADMVWIDRSKISLVGRQMLVLGNGASGRVSVTNNEFDGSTSWSATCDGHHYWALYFTGSNDMVTFKGNYIHHTSGRSPKIGGTTLLHAVNNVWYANSGHAFEILAPKSNALIEGNIFQNVVRPMKASTGKVFAPSSVQAVCNRALGRACQANSFGSSGPLTGTDSSFLGLFKGKNPATASAASPAISGRAGVGKIA*
配列番号：４６
長さ：１５７３（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
CGGATGCCGTGCAGCTGTCAAAGTCATGATAAAAGTCCCCACTCCCAGGTACATAATGTGATCGGTAGTTCTGCGCTCTCCTTTCCAACGGTTGTCCCTTGAGCTTCCCGTGCCATGGTAGCCTTTTCTTCCCTTACGTCTGGCAATGCCATGGCGTCCCTCCTGTCTCTATCCGTCCTTTCAGCTTTTCTTGCTTCACCGACACTTGCATACAGTCGTGCTGAATGCCAGGCTCCATCTGCCGACCCCCTGGCGGGCTGCGTACCCGGAACGCTGCTCGTCAGTCCAAACAGCACCGTGACGGCTAACAACAGCACCTCCTTTACCTCTGTCCAATCAGCTATCCTTTCCCTCGGCAACACCACCACACCCGCCACCATCCTCATTCTTCCCGGCACCTATGTTGAGCAAGTCAATATCACCCGCCCGGGACCAGTGACGCTCCTCGGGCAGACTTCATCCCCGAACAATTCCTCCACCAACGGCGTTAAGATCCTCTGGCGTCAGGCCACTGGCAACTCGGTCAACACCTTCGACAACGCCTATACCTCTGTCCTCACTGTCGCGCCGACCCTCGAGAGCAGCCTAACAGGCAGCGGGCCCACCGGATACGCCGTCCCCGCCGGCACGCCCTTCGGCAACGAGGACTTCCGCGCATACAACGTCGACTTCGTCAACGACTACGCGCCCTACTCGGCCGGCCCGGCACTCGCCATTAGCATCAGCTACGCCAACGCGGGCTTCTACTTCTGCGGCTTCTACAGCTATCAGGACACCGTAAGTGTCATCTCCACTCGTCCACTACACGCAACAAACAAACATGCATCCGAGAATCCCTTTTCCCCACCAACTAACGCCAAACCGCAAGGTCTACATCGGCAAGCTCGGCAACGCCTACTTCTACGACTCCATCATCGCCGGCCAAACCGACTTCCTCTACGGCTTCGGCACCGCCTGGATCCAGTCATCGCAGCTCTCTCTCCGCTCCTGCGGCGGCGGCATCACCGCCTGGAAGGGCACCAATACGTCCTTCCCCAACGCCTACGGCGTCTACATCCACGACAGCGTCGTCGAGAAGGCCAACGCCTCGCTCTCCATCGCCGGGCTCTGCGCCCTCGGCAGGCCCTGGAATGCGCAGCATCGCTCCATCTTCGCGAACACGTGGCTCGATGACAGCATCAAGCCGAGCGGGTACATCATCTGGGGGAGCACGGATCCGAGGACCAACAATTACACGTTTATGGCGGAGTATGAGGACTTTGGGCCGGGTTGGAATGAGACCGGGAGGAGGGCGGCGAATATTACGAAGGTGTTGACGGAGGCCGAGTATGAGCCGTATGACAGTCTGGAGAAGGTGTTCCAGTATCCGTTCAGTGGCGAGTTCGGGAACGTGGGGTGGATCGATGAGAGTCCGGAGGCTTGAGCCGGTGGGGATAGTGTGGATTGTGGTGGCCAGCGGCGTAGACGAGGCGGATCTGGTAAGAACTGCGTAGCATGAATGAAATTCGTTTGTACATACGTCTTTATATCGAGCAGCGCTTATGCAAGTTAAATGACGCCGTATTTGCATGCG
配列番号：４７
長さ：１１８２
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（１１８２）
atggcgtccctcctgtctctatccgtcctttcagcttttcttgcttcaccgacacttgca
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配列番号：４８
長さ：３９３
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
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配列番号：４９
長さ：１３３０（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
TCAGGCTCGTATGCCTTGTCCTTCATTTGCTTGCACTCTAGGGCTGGCTAAGACCTCCTTACTTGAATAATGTATCTCTCTACGTCCGCCTTTATAGTCTGCCTGGCGGCTCCAAAACCCCTGAGCCTCACAACATTCATTCGCTTAACC
ATGCATAGTTCTTCCATCCTTTTCAGCCTTTTCGGCTCCGCACTCGCTCTGACATCTCCACCGCCAGGAGCGCTGACTGTTGGAGGCTCTGAGGGAAAATTCTCCACCGTTCAAGCTGCGGTTGACGCTCTCCAGAACACCACTGCTCGGCAATCCATATTCATCTACTCCGGCACTTACGAGGAGCAGGTGTATATCGCCAAACACAATGGCCCCATTTCCATTTATGGACAAGCCTCGGATGACAGCTCATACCACACCAATACTGTCACTCTCTCTTTCGGCCTCAGCCAGGCCTTCAACCTTAGCAACGACCTCACGGCCACCCTCCGCGCTCACTCTCCCGATTTCAACTTGTACAACGTGAATGTGGAGAACACCTACGGCAAAGGGAGCCAGGCCGTCGCTGTCTCGGCCTACGGTACCGAGCAGGCATACTACGGCTGCAAGCTCACGGGCTTCCAAGACACCCTCCTCACCCAGAGAGGCAGGCACTACTTCGTAAACACCTACATTGAAGGTAAGGAGGTCTTTCTCAAGCTGCGGAAAGCGCGGTCTCTGACGGACATGCACAGGCGCCACCGACTTCATTTTCGGCCAGTATTCCGCGGCCTGGTTTGAGAACTGCGACCTGCGCGTCCCCGCGGCCAAGCAGGGATGGGTCACCGCGAGCGGCCGCAACACGACCAACGACGGCTGGTATGTCATCAACGGAGGCAGCGTGCAAGCGGCACCCGGCCAGAACGTAACTGCCGGCGCGTACTTCCTGGGCCGGCCGTGGCGCAGCTTCGCGCGCGCCGTCTTCCAGAACGTCTACTTGAGCGAGGTCATCAACCCTGCGGGCTGGGCCATCTGGTCCACGAGCACGCCCAACACGGGCAACGTCACGTTCGCGGAGTACAACAACACCGGACCTGGTGCTTCCAACGGGACGCGGGCCAGCTTTTCGCAGCAGCTGGCGGAGCCGGTGGACATCACGGAGGTGCTAGGATCGAACTACACACTCTGGATTGATCCCAAGTTCTTGTGAATAGCAAGCGGGTAGAAAGCCGCGGTACGAACGCCTTTGCCGTAATTAGATAATCCCAGGAAGACGGAGAGAATGATTATCTTCTCCTCTAATGCGCCGTGGGACGACGGATCCGTGACTGAATAGTGAGAGCAAAAGTGCGCCTGCATG
配列番号：５０
長さ：９７５
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（９７５）
atgcatagttcttccatccttttcagccttttcggctccgcactcgctctgacatctcca
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L A E P V D I T E V L G S N Y T L W I D
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配列番号：５１
長さ：３２４
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
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配列番号：５２
長さ：７７０６（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
GCTGCTTCTCTGAGCGGCTCCAAGAACGCCTTTTACAACTGCCAATTCATCTCCGCCGGCGATTTAGGAATATCCTCGTCCACCGGTACCACGTTCGTCTACAATTCGTACATCGAAGCGCGTTCTAAGCTCATCTACAATACGCCTAACATGTACATTTACGGCTCAACTCTCACGCCTACGGCGAGCAACGCACTCTTGGTTTATAACAAGGGCGTGTCTTCTGGCACGGTGGTGACCACCAACTCCACCGTTGTCTTCGACTCCTGCACCGTCACTCCGAAGCCGGGCACCACTGTGACCGGTATTTCCCTTGCCGCAGCGAACGGTGTTGGGTCAATTGTGGTCTATAGAAACTCCGTCCTGCCAGGCTTCATTCTCAGCACCGGTATTCACGTTGACGCCAAGACCCAGGCAGCACAGAACTTCTACGGCGAGTTCGGTAACACAGGTGCCGGATCCTACTCTTCCAACTCCGCCGCGAGGGCCTCCTACGTGAAGAGCCTGAGCGTCGATCAGCTTTCTCAATTCTCCGTTGATCAAGTGTTCGGCACCGCAAACACTAACTGGATCGACTCTTCAGTCATCTCCCTCGTCCAGGATTCGGATGCATCTCAAGCGGCAAAGGCGACCACGGCAGGTGTGGTGTCATACACTACTACGTCTTCCTCTTCAAGTACTACAAGCTCTGTACTGTCGAGCAGCTTGGTCACCGCATCGGGCAGCTCCGTGTCCACATCATCAAGCTCGGTGTCGTCTACGTCTTCAACCTCCGCCTCTGCCAGTGACGCGCCTTCGCTTTCCAGCAGTGCTGCTCTCGCTTCATCAGTACCTGGATCTTCCTCCAACACTACAGTGACCACCAGCGGCACAGCAAGCTCAAGCTCTGTCACTGGTTCCTCGTTCGCACTGTCCACTAGCTCGATCTCCTCCAGCGTGAGCACTCCGGGGGACACAGCGAGCTCCACCGCCGCTGCGTCTAATTCGACTTCGAGTTGCGCTCTTCCTTCCTCAGTGCCCACCACTGCTCGCGTCGTGGGTCCGGCTGGGTCCTGCGCCAACTACACCAGCATCGCCGATGCCGTCAAAGACCTTTCTACGGATCAATCTAAGACGGAATATGTGTACATTCTCGCTGGCACCTATACCGAGCAGATCATTTTCAGCCGTGTAGGTCCCACCGTCTTCCGCGGCGAGACATCAAGCGAGCTCGATCAGTCCAGCAACAAAGTGACTATCAAGTCTTCTACTGGTGTGCCCTCCAGTAGCGGGGGATCTTCCAGTACCGCCCCGTTCCAGGCGACTCAGTACTACAGCAAGAGTATCAGTTTCTATAACATCAATTTCGAGAACACCTACGCTGCAGCTACGGGTTACAATGCGGTTGCATTGTCCAGCAAAGCTTTGAAGGCCTATTATTACAACTGCGGGATCACTTCCTCTCAAGGAGCTCTGCTGCTCAACTTCGGCGCCCACTTCTTCTCGGGCTGCAAGATTACCGGTACCACCGACATCGTCTGGGGCCAAGGTGGCGCTTACATCTACAATTCGAAGATCGTTAGCACCGGAACCACGACTGGTCAGTCTCTCTCCGCACAGTCGTACCAGTCACAATACAATCCTTCGCAGTTTGTCTTCGACACTTGCGCTTTCGTGCCGAACGACAGCACCGTGCCGAAGGCGAGCACGTACTTGGGCCGCGACTATACAGCTTCGGCACGTGTTGCGGTGATCAACTCTTACCTGGACGCTCATATTACTCCTGTTGGATGGTTGATTGCGTCCAAGACTACGAACGTGACGTTTGTTGAGGCCAGCAACTCCGGGCCTGGAGCGTCGACCGCATCTAGAGTTTCCCAGATTGTGACCGATACGTCTGCCTACGCCGCCAACAACGTGCTCGGTTCTCTTTCGATCGACACCGCCGCTGTTGCTCCTGTTGCTGCCTTCCCCGACAGCGTCTACGGTAGTCCTCTTTCCCCCAGCTCTTCTACTGTCTTGGCCAACTCAACGACAGCGACTTCCGTGTCTGCTTCGACATCCAGCACTTCTGCTGCTGCAACTGCGGCCAACACCCTCATTGTCTCAACCACGCCTGCCTCTGGCGAATACGGCAACGTCACAGCAGCCATCGCCGCCCTTCCCAACGATAGCAAGGAGTACACCATCTACATCCGCGCCGGCACCTACCAGGAGCAGTTCACCATTGTGCGGAATGGCAAGGTCACACTGCGTGGCGAGACGGCGTTCCCCAACGACTTCTCGCAGAACCAGGTCACCATCCAGTTCTCCTATGGTGTTCTCACCAGCGCTGGCCAGAACGAGTTGACGCCCGTTATCAACGCCAAGAAGAACGATGGCTCCGGCCTCGCGTTGTACAACATCAACTTCATCAACACGTACCCGCAGACGAAGAACACGGCTGCGCTTGCGGCTGACTTCTACGGTACCAATATGGCTGCCTATGGCTGCAAGTTCGTCGGCTACCAGGACACCCTCCTCGCCAACAAGGGCACCCAAGTCTTTTCCAACAGCTACATTGAAGGCTCTATTGACTATATCTGGGGTTTCTCGACGGCCTACTTCCACCAGTGCTACATCGCATCCAACACAGCTGGTGGCTACATTTCTGCCATGAGCCGCGCTTCGGCTTCGGCTACTGGAGGTTATGTCTTTGACAGCTGCTATGTCACCTACACGAGCACCTACGGATCGACCTTTGGCACCAGCTACCTCGGTCGCCCGTACTCGAGCTACAGCATCGCCGTCTACATGAACTCGTTCATTGACAAGCACATTAGCCCCGCCGGTTGGGCTGTGTGGCAAACGAGTAACCCGCAGACGGACAACGTCCTGTTTGGAGAGTTCAACAACACCGGCCCCGGAAGCTGGTCCAGCTCTCGCGCGTCTTTCGCGACGAACTTGACCGAGTCCCAGGCGGATGCTTACAAGCTGTCTACTTGGATCGGCAGCACGTCGTGGCTTGACATGGATGCTTACAACTACGTGCCTTCGTACGATATTTCCGGCGCAGCTGGTGCATCAACCACGACCCCCTCGGCGTCAGCTTCCTCTACCACTGCCACAGCCACTGCCACCTGGGCGCATCCCTCGAGTGGTGCTACCCCACCTATCGGTGCCGTCCTGGTGTCCGTTGGAGGCTCCGTCAACGGGTCATACAGCAATCTTACCGCCGCCCTCGCGTCTCTGCCATCGGATAGCTCGACACAGGTCATCTTCATGTACCCCGGAACCTACAACGAGCAGCCCCCGGCCGTAAACAGGCCCGGCCCCATCCAGATCATCGGTGCTCAAGATGGCAATCCAGGCCAGAGCTACAAGACCAATAAAGTCATTCTGACCCAGTCTCGCGGCTTGTCGGTCTCTCCGTTGCCGACCGGACACTCTGACGCTGAAACCGCAACATTCTCCACTACCAGCAACAAAATTGCCATGTACAACATCGACATCATCAACTCCGATAATCTTGACGGTTCGCTTTCCTCTTACGTGACGCTGGCCGGCTCAATTTATGGCTCGCGCATTGCGTTCTATGGGTGCAGCTTCATTGGCTGGCAGGATACGCTGTTGACTGGAAGCACCAGTGGCTACCAGTACTACGAATCCTGCTACATTGATGGCGCCATCGATTTCATCTGGGGCTACTCTAAGGCTTACTTCAAAGGCTGCACCATCGGCGCCAAAAGGCAAAAGTCGGCCATCACGGCTCACAGCCGTGCTTCCTCCAGCGCAGTCGGAGGCTACATCTTCGACCAGTGCCTGTTCACTGCTGCCTCGTCTGCGACGGTTGACCTTACGCAGTCTGTTTACCTCGGCCGCCCTTACAGCAAGTACGCCCTCGTGGTTGTCAAGAACTCGTACCTGGACAAGACGATCCAGCCTGCTGGTTGGAAGATCTGGTCTGCCACCGACCCGCGTACCGACTACGTTACCTTCGCCGAGTTCAACAACTCCGGACCTGGTAACTGGGAGAACAACGCCGCGGCGCGTACCGCTTTCGGCTACTGCACCCTGTTGACGTCGGACACGTACTCCCTATCTGCCGTCATGGACTCACCCTCTGACTGGATTGACATGACGTACTGGGACTCGATCACCACACCGACAGTGGCCGCTGTTGCTACGGGAAACACCACTACGGCGGTCAACGGTACTTCGGTCTATGATGGCACCACCCCACCTGCCGGCGCATTGATTGTCTCCAAGACGGCCATTGAGGGCGTGACGACGTACGATACCATCCAGAGCGCTCTGAATGCGCTGCCTACTTCGAGCAGCAAGACCGGCACCATCTTCATCTACCCCGGTGTGTACTCGGAGCAGCTTGTGCTGAGCAAGTCTGGTACCACCGTGTTCATCGGCTACTCAAACTCCACCGACGATTACCTGCAGAACCAGGTGACGATCGACTTCAACAAGGGAATCGATACGCAAGCAGATGCTTCCAACTCTGACAGCGCTACTGTGTATGCCACAGGCAACTACTTCCAGGCATACAACATCAACTTCAAGAACTCTTTCGGCACAACCGAGGACTACGCCTCGCTCGGCTTCGGTGTCAAGTCCAGCAAGTACGCATCGCTGTATGGCTGCCAGGTCTGGGGCAATCAGGACTCGCTACTCATCAACGGCTACTTCTTCGCCTTCAACTCGCTGATTGTCGGTAACATCGACATGATCTGGGGCTCCGGCGCGGGCTATTTCCTCAGCTCAACCATCTCACCCAACACCGACGACGTCAGCCTGACCGCCAGCAAGCGCGCGACCAACACTACAGCTGCCGGTTTTGTCTTCGACCAGTGCACCGTTAAGCCCGCCCCCGGTACCGGCCCCTTCACCGAGATCAGCCTCGGACGTCCGTGGAACAACCTTGCCCGTGTCGCGTATATCGAGACGTATCTCGATTCCAGCGTTGAGGCTGCAGGCTGGAGCCAGTGGTCCAAGTCCAATCCACAGACCGAAGGAGTGACTTTTGCCGA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配列番号：５３
長さ：５８９５
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（５８９５）
atgtacatttacggctcaactctcacgcctacggcgagcaacgcactcttggtttataac
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S S C A L P S S V P T T A R V V G P A G
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配列番号：５４
長さ：１９６４
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
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配列番号： 55
長さ: 1281 (150 bp 5’ UTRおよび150 bp 3’ UTRを含む)
型: DNA
生物: M. phaseolina
CACCGGTTGTTGATCATTTACACCCTCAGCGAGCATTCCCGGCCAGGCGCCTCTTGTTGAACACTGTCCAGTCCTTCACTCCTCTCCTTCCACCCGCTACCCGGTCTTTTTCCTTTTGCCATTCCAATTGCGTGAACCGTCCATCACAGCATGCCTCGCCTCGCCAGCCTCCTCGCCCTTGCAAGCCCAGTGCTTGCCCTGACCTCCCCTCCGTCAGGCGCCCTCACCGTCGGCTCCAGCGGCAAGTACTCGACCATCCAGGACGCCGTCGACGCGCTCAGCACCAGCTCCTCGTCGGCCCAGACCATCTTCATCTACCAGGGCACCTACAAGGAACAAGTCGTGATCCCGAAGCTATCGGGCGCCCTCACCATCTACGGCTACTCGAAGGATGGATCATCGTACAGCGGCAACACCGTGACCATCAGCGCGGGCAAGTCGCAGGCCGACGGCCTCTCCAACGACGGCACCGCCACCCTCGCCGTCCACACGGGCAACATCAAGGTCTACAACATCAACGTCGCCAACACGTACGGCTCCGGCTCGCAGGCCGTCGCGCTGTCGGCCTACGCCAGCGGCAACCACGGCTACTACGGCGTCAAGCTCACGGGCTTCCAAGACACGCTCCTGGCGCAGGAGGGCAAACAAGTCTACGCCAACTCGTACATCGAGGGCGCGACCGATTTCATTTTCGGCCAGAAGGCCGTCGCGTGGTTTGAGAACTGCGACCTGCGCATCGCCTCGGCCTCGCTCGGCTACGTGACGGCCAACGGCCGCGACAGCAGCTCCAACCCATCCTACTACGTCATCAACAACTCGACCGTCGCCGCCGCCGACGGCGCCACCGTCAAGAGCGGCGGCATCTACCTCGGCCGCCCCTGGCGCAACTACGCCCGCGTCGTCTTCCAGGAGACCAGCCTGTCCAACATCATCAACAGCGCCGGCTGGGTCCAATGGGGCAGCAGCGACCCACGCACCGACAATGTCAACTTCGCCGAGTACAAAAACTCGGGCGCCGGCGCCTCTACCAGCGGCCGTGCTAGCTTTTCCAAGCAGTTGAGCAGCCCCGTCAGCATCTCGGAAGTCTTGGGCAGCAACTACGCCGACTGGATCGACACCAGCTACTTCTAAACGCGTGAGGCTTCGCTAATGTCGGTTGGATCGGATGGAGGCGGGATGTAGCATGCAAGGAACCGGCAGGACTGTTTTAACTTTCTAATGTGGATATTtttGTCTCTCGGACAAATATAAAAATAAGCTTTCTGGAGTGACTTTTGATGA
配列番号： 56
長さ: 981
型: DNA
生物: M. phaseolina
特徴名/キー: CDS
位置: (1)……(981)
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I D T S Y F -
配列番号： 57
長さ: 326
型: PRT
生物: M. phaseolina
MPRLASLLALASPVLALTSPPSGALTVGSSGKYSTIQDAVDALSTSSSSAQTIFIYQGTYKEQVVIPKLSGALTIYGYSKDGSSYSGNTVTISAGKSQADGLSNDGTATLAVHTGNIKVYNINVANTYGSGSQAVALSAYASGNHGYYGVKLTGFQDTLLAQEGKQVYANSYIEGATDFIFGQKAVAWFENCDLRIASASLGYVTANGRDSSSNPSYYVINNSTVAAADGATVKSGGIYLGRPWRNYARVVFQETSLSNIINSAGWVQWGSSDPRTDNVNFAEYKNSGAGASTSGRASFSKQLSSPVSISEVLGSNYADWIDTSYF*
配列番号： 58
長さ: 1943 (150 bp 5’ UTRおよび150 bp 3’ UTRを含む)
型: DNA
生物: M. phaseolina
CTATATTTCCATTTTTGGGAACGTACGCGTACGCCTTCTGTGGGGCCCCTTACTCCCGGAGGATTGCTGCGGGACTTGGAGAATGTATAAAGTACAGCAATCGAGTTGTCTGCGAGCTAGAGCGTTCTCCAGGCAGTGTCTAAACGTTTCATGATGTTGTCTAACGTCATCGTCGGCCTTCTAGCTGCCGCCTATGGAAAGCCTGTGCTGGCAGCGTTTGGGCTCACAGACAATGGCGACAGTTACACCATTGATGCTGGCTCCACCAATCCCCTGGTAATCACTGTCGACAGTTCCAACTGCGACATCACCTCTTTCGTCTACCGGAGCCAGAAATACCAGTATGCCTCGAAAGGATCCCACATTAGCTCAGGCCTTGGCTCGGCTGATGTGACGGCAGAGACTATTGATGGTAAAGCCTGAAGACTGTGATGCAACTTCCCATCCGCTGACCACCCGCAGATGTAATCAAGGTCACTTGCACAACCGACACACTGATCCACTACTATGTCGTCAAATCCGGAGAGAGCAACGTCTACATGGCTACGTACACTTCAGCTGAGCCTTCAGTGGGAGAGCTGCGCTACATCGCACGACTTGATCCTTCGCTGCTTCCATATGAGTACCCCTTCGGCGACGTCTCCACCACCGCCGACAGCACTTCGACAGTGGAAGGTTCTGACGTCTTCATCGTCGACGGAGAGACTCGCAGCAAATTCTACTCCAGCCAGCGCTTCATCGACGACGACGTCCACTGCGTCTACAGCGACGACGTCCACGCGTGCATGCTGATGCCCCAGTACGAGACCTCGTCCGGCGGGCCGTTCCACCGAGACATCAACACCAACAACGCCGGCGACTCGACCAACCTGTACTGGTACATGAACAGCGGACACGTGCAGACCGAGGCCTTCCGGATGGGCCTCCACGGGCCCTACGCCCTCACGTGGTCGCGCTCTGGCGTGCCCAGTCTCAGCGGCCTCGACTTCTCCTTCATGGCGGACCTCGACCTGGAAGGCTACGTCGCCGACAGCGGGCGCGGCACCGTCTCGGGCACAGCATCCGGCGTCTCCAGCGACTATGAGGTCGTGGTGCACTGGTACAACGACGACGCGCAGTACTGGACGTACGCCTCTTCGTCCGGCGCCTTCACGTCGCCCGCCATGAAGCCGGGGACCTACACCATGGCCCTGTACCAGACCGAACTCAAAGTGGCCACGTCCTCGGTGACGGTCAAGGCCGGATCGGCCACCAGCGCCAACATCGCCAGCACCTGGAGCTCCAATACCACGCTCTTCCAGATCGGCGACTGGGACGGGCAGCCGACCGGCTTCCTCAACGCGGCCAGCCAGCTGCGCATGCACCCGTCCGACTCGCGCATGGCCGACTGGGGCCCCGTCACCTACACCGTCGGCTCGTCCTCCGACAGCTCCGTCCCGATGGCGCTGTTCAAGGACGTCAACGACCCGCTGACCATCAGCTTCACGCTGGCGTCTTCGCAGGCCAGCGGCGCGGCGACGCTGCGCGTCGGCACCACGCTGTCGTTCGCGGGCGGGCGGCCGAGCGTCACCGTCAACGACTACAGCGACTCCGCCGCCGCGCCGACCAAGATCGACTCCCGGGGCGTGACGCGCGGCGCGTATCGCGGGTACGGCGAGATCTACGACTTCGAGCTGCCGGACGGGACGCTGTCGACGAGCAATACGATCACCATTTCGGTGATTTCGGGGAGCAGTGGGGCGGATTTCCTGGAGCCGAATTTTGTGAGTTCTCGCATTCCTCTTGGCCACTAGCATGTTTGAGAGGAATGTGACGCTGACGGTGTGACAGATCCTTGATGCTATTGAGCTGTGGAGATAGGGTTGATAGGTCTGCGGACGTGTTGTGGATGGTTTCGCGGGTCTGGGATCTTGATTGGTTGTTGGGATGGTATGCAGCAAAGA
配列番号： 59
長さ: 1593
型: DNA
生物: M. phaseolina
特徴名/キー: CDS
位置: (1)……(1593)
atgatgttgtctaacgtcatcgtcggccttctagctgccgcctatggaaagcctgtgctg
M M L S N V I V G L L A A A Y G K P V L
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配列番号：６０
長さ：５３０
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MMLSNVIVGLLAAAYGKPVLAAFGLTDNGDSYTIDAGSTNPLVITVDSSNCDITSFVYRSQKYQYASKGSHISSGLGSADVTAETIDDVIKVTCTTDTLIHYYVVKSGESNVYMATYTSAEPSVGELRYIARLDPSLLPYEYPFGDVSTTADSTSTVEGSDVFIVDGETRSKFYSSQRFIDDDVHCVYSDDVHACMLMPQYETSSGGPFHRDINTNNAGDSTNLYWYMNSGHVQTEAFRMGLHGPYALTWSRSGVPSLSGLDFSFMADLDLEGYVADSGRGTVSGTASGVSSDYEVVVHWYNDDAQYWTYASSSGAFTSPAMKPGTYTMALYQTELKVATSSVTVKAGSATSANIASTWSSNTTLFQIGDWDGQPTGFLNAASQLRMHPSDSRMADWGPVTYTVGSSSDSSVPMALFKDVNDPLTISFTLASSQASGAATLRVGTTLSFAGGRPSVTVNDYSDSAAAPTKIDSRGVTRGAYRGYGEIYDFELPDGTLSTSNTITISVISGSSGADFLEPNFVSSRIPLGH*
配列番号：６１
長さ：２００９（１５０ｂｐ ５’ＵＴＲおよび１５０ｂｐ ３’ＵＴＲを含む）
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
TCGCTGATCGTCTTGGATATGCGCCTGGCAGTGCATTCGCGCCGGGGACTACAAAAGCAGGGGACGCATGCCACAACAGAATTGGCTTTTCTTGTCACTGCACTTCCTGCCGCTCCAAGTCCCCCCCTCGCGTTTGAGGGAACCGCCACAATGGCTCTCTTTGCTCTGTTTCTGACCTTTATCTCTCTTTTCGCACCGTCGGTGCTGGCCGCCTTTGGAGTGACTACATCCTCTTCCAGCTATGTTGTCGATGCCGGCTCATCCAACCCCTTCGTTGTTACCATTTCGCGCAGCAGTTGCGACATTACCTCGATCAAGTACCGTGGAGAGGAATTCCAGTACTCCGGCAAGGGTTCGCACATCTCGTCCGGCCTTGGATCTGCGACCGTAACGTCAGAGATCGTCAGCAGTGAGCGTCTCTTGCAACCCGTCATACGCCCCTCAGGCTAACAATCGACAGGCACTTATGCCAAGATCACCTGCACGGCTGGCAGCTTGACCCATTACATTATTGTCAAGTCCGGAGAGAGCTCTTTGTACATGGGCACTTACTTCACTGAGGAGCCCTCGATTGGTGAAGCCCGTTTCATCGCTCGCTTGGACCCGGCCAAGCTCCCTCTCGAATACCCCTACGGCACTGCCTCCACTACTGCTGGGAGCAGCAGCACCGTCGAGGGATCCGACGTCTTTGTTGTGAATGGCCAGACCCGCAGCAAGTTCTACTCTAGCCAACGTTTCATCGACGACAAGGTGCAGTGCGTGTACCGCGATGATGATGCTGTCCACGCTTGCATGATCTTGCAGCCTCTCTCCTACGAGGGATCCAGCGGCGGTCCCTTCTTCAGGGACATCAACACCAACAACGCCGGTGACTCGACCAACCTGTACTTCTACATGAACTCCAACCATGCTCAGACTGAGAGTTACCGTATGGGCTTCCACGGCCCGTACCAGTTGCAGTTCAGCCGCTCTGGTATTCCCAACAGCTTTGACGCTTCGTTCTTCGCCGACCTCAAGCTCTCCGGCTACGTTGCTGAGTCTGCTCGTGGCTACGTCAAGGGTACTGCTTCTGGAGTTGGTAGCTCTTACCAGAAAGTCCTTCATTGGTACAACAGCAACGCGCAGTACTGGGTCTATGCCTCGTCTAACGGTGCCTTTACTTCTCCTGCCATGAAGCCTGGCACCTACACCCAGGTCCTCTACCAGGACGAACTCAAGGTTGCCACCGACTCGGTCACTGTCTCTGCTGGATCGACGGTCACCAAGAACATTGCATCTACCTTCTCTTTCCCTTCGACCATCTGGACAATTGGCGACTGGGACGGCCAGCCATTCGGCTTCCGCAACGCCGACAAGATCGAGCGCATGCACCCGTCCGACAGCCGCATGAGCAGCTGGGGGCCGTTGACCTACACGGTCGGCTCCAGCGCACTGACTGACGTTCCCATGGCGCTCTTCAAGGGCGTCAACACGCCTTTCACCATCAAGTTCACGCTCTCCTCGTCGCAGACAGGTGCGGCGGTCCTCCGGATCGGCACGACTCTGGCCTTCGCCAGCGGCAGGCCGCAGCCCAAGATCAACAGCTACAGCCCTTCGGCGCCGGCGGCACCGACGAAGATCGATTCGCGCGGCGTCACACGTGGCACTTACCGCGGTTTGGGTGAGATCTACACCTTCGACATTCCCGCGGGCACTCTCGTGAGTGGCTCGAACACGATCACCATCGACTGCATCTCGGGAAGCTCGGGCGACACCTACCTGTCTCCCAACTTTGTAAGTTTCGCTCTGCATACCTCCGCCATGCGCCGTGCTAACGCAAGAAACAGATCCTTGACGCCATTGACCTGTACCTCAAGTGAGCGAGGGTCAGGAGAAGGGTGCTAGCTGAGGTTCGCTTCTGTAAATAAGTTTACGTCCTACATTGAACATACATTTTGGCTTTGATTGCCGGTCTGCATTACTCGTCAATACGAAGCTTCGCGAGCGCGCAGCTCCACCGAATGCGTGGC
配列番号：６２
長さ：１６０５
型：ＤＮＡ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
特徴名／キー：ＣＤＳ
位置：（１）……（１６０５）
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配列番号：６３
長さ：５３４
型：ＰＲＴ
生物：Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａ
MALFALFLTFISLFAPSVLAAFGVTTSSSSYVVDAGSSNPFVVTISRSSCDITSIKYRGEEFQYSGKGSHISSGLGSATVTSEIVSSTYAKITCTAGSLTHYIIVKSGESSLYMGTYFTEEPSIGEARFIARLDPAKLPLEYPYGTASTTAGSSSTVEGSDVFVVNGQTRSKFYSSQRFIDDKVQCVYRDDDAVHACMILQPLSYEGSSGGPFFRDINTNNAGDSTNLYFYMNSNHAQTESYRMGFHGPYQLQFSRSGIPNSFDASFFADLKLSGYVAESARGYVKGTASGVGSSYQKVLHWYNSNAQYWVYASSNGAFTSPAMKPGTYTQVLYQDELKVATDSVTVSAGSTVTKNIASTFSFPSTIWTIGDWDGQPFGFRNADKIERMHPSDSRMSSWGPLTYTVGSSALTDVPMALFKGVNTPFTIKFTLSSSQTGAAVLRIGTTLAFASGRPQPKINSYSPSAPAAPTKIDSRGVTRGTYRGLGEIYTFDIPAGTLVSGSNTITIDCISGSSGDTYLSPNFILDAIDLYLK*
参照による組み込み
本明細書において引用されたすべての米国特許、米国公開特許出願、およびＰＣＴ出願公開は参照により組み込まれる。
等価物
本明細書において、いくつかの本発明の実施形態が記載されかつ例証されてきたが、当業者は、本明細書に記載された、機能を実施するため、ならびに／または結果および／もしくは１つ以上の利点を得るために、様々な他の手段および／または構造を容易に想定でき、そしてこのようなバリエーションおよび／または改変の各々が、本明細書の範囲内にあると見なされる。当業者は、日常的な実験を超えない程度を用いて、本明細書に記載された本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を認識し、または確認することが可能である。従って、前述の実施形態は、例示目的のみのために提示されることが理解され、そして添付の特許請求の範囲内およびそれに対する等価物の範囲内で；具体的に記載されかつ特許請求されているとしているもの以外として、本発明は実施されてもよい。

Claims (30)

  1. 配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３の各々に示されるアミノ酸配列、および／またはこれらのいずれかの混合物／組合せを備え、および／またはこれらの配列からなるポリペプチドをコードする、真菌Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａに由来する単離されたポリヌクレオチド配列。
  2. 配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１の各々に示されるような真菌Ｍ．ｐｈａｓｅｏｌｉｎａに由来する単離されたポリヌクレオチド配列、および／またはそのいずれかの混合物／組合せ、またはその相補体。
  3. 単離されたポリヌクレオチド配列であって、前記ポリヌクレオチド配列は、中程度のストリンジェンシー条件下で、
    ｉ．配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１を備え、および／もしくはこれらからなる群より選択されるヌクレオチド配列、ならびに／またはそのいずれかの混合物／組合せ、またはこれらの相補体、
    ｉｉ．配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３を備え、および／もしくはこれらからなる群より選択されるアミノ酸配列からなるポリペプチドをコードするヌクレオチド配列、ならびに／またはそのいずれかの混合物／組合せ
    からなる核酸プローブにハイブリダイズし、
    ここで、前記中程度のストリンジェンシー条件が、６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中、約４５℃でのフィルター結合ＤＮＡへのハイブリダイゼーション、続いて、０．２×ＳＳＣ／０．１％ＳＤＳ中、約５０〜約６５℃での１回以上の洗浄を含む、
    ポリヌクレオチド配列。
  4. ゲノムＤＮＡである、請求項１、２、または３に記載の単離された核酸分子。
  5. ｃＤＮＡである、請求項１、２、または３に記載の単離された核酸分子。
  6. ＲＮＡである、請求項１、２、または３に記載の単離された核酸分子。
  7. 一本鎖である、請求項１、２、または３に記載の単離された核酸分子。
  8. 異種タンパク質またはペプチドをコードするコード配列の中で終止コドンによって中断されていない、請求項１、２、または３に記載のヌクレオチド配列を備え、および／またはこれらの配列からなる核酸分子。
  9. 請求項１、２、もしくは３に記載の核酸分子を備え、および／または前記核酸分子からなる組換えベクター。
  10. 請求項１、２、もしくは３に記載の核酸分子を備え、および／または前記核酸分子からなる発現ベクター／構築物であって、前記ヌクレオチド配列は、宿主細胞において前記ヌクレオチド配列の発現を制御する転写および／または翻訳調節シグナルを含有する調節ヌクレオチド配列と作動可能に結合されている、発現ベクター／構築物。
  11. 請求項１、２、３、６、もしくは７に記載の核酸分子を備え、および／または前記核酸分子からなる遺伝子操作された宿主細胞。
  12. ｉ．ポリペプチドを産生するために適切な／有効な条件下で請求項１０に記載の細胞を培養する工程、および
    ｉｉ．ポリペプチドを単離する工程
    を備え、ならびに／または前記工程からなる、ポリペプチドを作製する方法。
  13. 配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０、および６３、および／またはそのいずれかの混合物／組合せを備え、および／またはこれらからなる群より選択されるアミノ酸配列を備え、および／またはこれらのアミノ酸配列からなる単離されたポリペプチド。
  14. 配列番号２、５、８、１１、１４、１７、２０、２３、２６、２９、３２、３５、３８、４１、４４、４７、５０、５３、５６、５９、６２、１、４、７、１０、１３、１６、１９、２２、２５、２８、３１、３４、３７、４０、４３、４６、４９、５２、５５、５８および６１、および／またはそのいずれかの混合物／組合せを備え、および／またはこれらからなる群より選択されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を備える単離されたポリペプチド。
  15. 単離されたポリペプチドであって、そのアミノ酸配列が、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３、および／またはそのいずれかの混合物／組合せを備え、および／またはこれらからなる群より選択されるアミノ酸配列を備え、および／またはこれらからなる、ポリペプチド。
  16. 配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３、および／またはそのいずれかの混合物／組合せを備え、および／またはこれらからなる群より選択されるアミノ酸配列の少なくとも６個の連続する残基を有する、請求項１５に記載の単離されたポリペプチド。
  17. 単離されたポリペプチドであって、そのアミノ酸配列が、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３、および／またはそのいずれかの混合物／組合せを備え、および／またはこれらからなる群より選択される、ポリペプチド。
  18. 少なくとも１個の保存性置換を有する、請求項１７に記載の単離されたポリペプチド。
  19. アミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドであって、前記アミノ酸配列は、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３、および／またはそのいずれかの混合物／組合せを備え、および／またはこれらからなる群より選択されるアミノ酸配列に対して少なくとも６０％同一であり、かつ、ペクチン酸リアーゼ、ペクチン酸リアーゼ（ｌｙｓｅ）Ｃ、ペクチンエステラーゼ、およびラムノガラクツロナーゼ、および／またはこれらのいずれかの混合物／組合せを備え、および／またはこれらからなる群より選択される酵素の触媒活性を示す、単離されたポリペプチド。
  20. 共有結合を介して第２のポリペプチドのアミノ酸配列に融合されている請求項１５に記載のポリペプチドを含むキメラタンパク質。
  21. 請求項１３、１４、または１７に記載のポリペプチドを備える酵素組成物。
  22. 組成物が固形である、請求項１９に記載の酵素組成物。
  23. １つ以上の固相をさらに備え、ポリペプチドが前記固相に存在している、請求項１９に記載の酵素組成物。
  24. 少なくとも６０％同一であるポリペプチドで富化された酵素組成物であって、そのアミノ酸配列が、配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０、３３、３６、３９、４２、４５、４８、５１、５４、５７、６０および６３、および／またはそのいずれかの混合物／組合せを備え、および／またはこれらからなる群より選択され、かつ、ペクチン酸リアーゼ、ペクチン酸リアーゼ（ｌｙｓｅ）Ｃ、ペクチンエステラーゼ、およびラムノガラクツロナーゼ、および／またはこれらのいずれかの混合物／組合せを備え、および／またはこれらからなる群より選択される酵素の触媒活性を示す、酵素組成物。
  25. 前記酵素組成物を変化させることによってペクチン酸リアーゼの産生を調節するための方法であって、ここで、前記ペクチン酸リアーゼが：
    （ａ）配列番号３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４および２７、および／またはそのいずれかの混合物／組合せのアミノ酸配列を備えるポリペプチド
    （ｂ）配列番号１、２、４、５、７、８、１０、１１、１３、１４、１６、１７、１９、２０、２２、２３、２５および２６、および／またはこれらのいずれかの混合物／組合せを備え、および／またはこれらからなる群から選択されるヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド、あるいは
    （ｃ）前記請求項２５（ａ）のポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも６０％同一であり、かつペクチン酸リアーゼの触媒活性を示すアミノ酸配列を備えるポリペプチド
    に由来する、方法。
  26. 前記酵素組成物を変化させることによってペクチン酸リアーゼＣの産生を調節するための方法であって、ここで、前記ペクチン酸リアーゼＣが：
    （ａ）配列番号３０、３３、３６、３９、４２および４５のアミノ酸配列、および／またはそのいずれかの混合物／組合せを備えるポリペプチド、
    （ｂ）配列番号２８、２９、３１、３２、３４、３５、３７、３８、４０、４１、４３、４４、および／またはこれらのいずれかの混合物／組合せを備え、および／またはこれらからなる群より選択されるヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド、あるいは
    （ｃ）前記請求項２６（ａ）のポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも６０％同一であり、かつペクチン酸リアーゼＣの触媒活性を示すアミノ酸配列を備えるポリペプチド
    に由来する、方法。
  27. 前記酵素組成物を変化させることによってペクチンエステラーゼの産生を調節するための方法であって、ここで、前記ペクチンエステラーゼが：
    （ａ）配列番号４８、５１、５４、５７のアミノ酸配列、および／またはそのいずれかの混合物／組合せを備えるポリペプチド、
    （ｂ）配列番号４６、４７、４９、５０、５２、５３、５５、５６、および／またはこれらのいずれかの混合物／組合せを備え、および／またはこれらからなる群より選択されるヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド、あるいは
    （ｃ）前記請求項２７（ａ）のポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも６０％同一であり、かつペクチンエステラーゼの触媒活性を示すアミノ酸配列を備えるポリペプチド
    に由来する、方法。
  28. 前記酵素組成物を変化させることによってラムノガラクツロナーゼの産生を調節するための方法であって、ここで、前記ラムノガラクツロナーゼが：
    （ａ）配列番号４８、５１、５４、５７のアミノ酸配列、および／またはこれらのいずれかの混合物／組合せを備えるポリペプチド、
    （ｂ）配列番号４６、４７、４９、５０、５２、５３、５５、５６、および／またはこれらのいずれかの混合物／組合せを備え、および／またはこれらからなる群より選択されるヌクレオチド配列によってコードされるポリペプチド、あるいは
    （ｃ）（ａ）のポリペプチドのアミノ酸配列に少なくとも６０％同一であり、かつラムノガラクツロナーゼの触媒活性を示すアミノ酸配列を備えるポリペプチド
    に由来する、方法。
  29. 修飾された化学的および／または物理的特性を有する酵素を同定するための方法であって：（ａ）前記酵素をコードするヌクレオチド配列を変異誘発させる工程；ならびに／または（ｂ）変異誘発させたヌクレオチド配列の発現の結果として産生される前記酵素の化学的および／もしくは物理的特性を決定する工程を備える、方法。
  30. 前記変異誘発工程が、配列アラインメントにおける酵素のヌクレオチド配列に不完全に一致している別の酵素のヌクレオチド配列の一部を使用する工程を備える、請求項２９に記載の方法。
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