CN104837991A - 来自菜豆壳球孢菌的果胶降解酶及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开来源于真菌菜豆壳球孢菌(Macrophomina phaseolina)(“菜豆壳球孢菌(M.phaseolina)”)、负责降解果胶的分离的多核苷酸,且其包含如在以下序列中所列的核苷酸序列或所述序列的互补序列和/或由所述核苷酸序列或所述序列的互补序列组成:SEQ ID No.2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59、62、1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58和61。本发明还涉及由在SEQ ID No.3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60和63中所列的核苷酸序列编码的分离的多肽;包含所述多核苷酸的重组基因构建体;包含所述重组基因构建体的转化体和转基因真菌,其增强果胶降解酶的制备。本发明的多肽可用于尤其是生产果汁、纺织品、纸浆和纸、咖啡、茶和石油开采及果胶废水处理。

Description

来自菜豆壳球孢菌的果胶降解酶及其用途
相关申请
本申请要求保护2012年8月16日提交的美国临时专利申请序号61/683914的优先权权益,其内容通过引用结合到本文中。
发明领域
本发明涉及具有果胶裂解酶活性的来自菜豆壳球孢菌的分离的多肽和编码所述多肽的分离的多核苷酸以及制备和使用这些多核苷酸和多肽的方法。本发明还涉及包含所述多核苷酸的核酸构建体、载体和宿主细胞以及制备和使用所述多肽的方法。本发明的多肽尤其可用于使纤维和织物浸解和脱胶的纺织工业;提取果汁和蔬菜汁的食品工业;制造优质纸的造纸工业;以及咖啡和茶发酵、石油开采和果胶废水处理。
发明背景
果胶是存在于初级植物细胞壁的胞间层中并充当胞间粘结质的一组复杂的杂聚物。它们由于其胶体性质还在植物的水调节中起重要作用。位于细胞壁之间的胞间层主要由原果胶(不溶形式的果胶)构成。
果胶由两个不同限定区构成:“平滑区”和“毛状区”。“平滑”区由α-1,4-连接的D-半乳糖醛酸的主链组成,形成聚半乳糖醛酸,其中一些羧基用甲醇酯化(在Nagy S,Shaw P,Veldhuis Meds.Citrus Scienceand Technology,第I卷.Westport CT:AVI publishing Inc.1977中)。在“毛状”区中,半乳糖醛酸主链被α-1,2-连接的L-鼠李糖单元分解。
果胶/果胶酸酯裂解酶使在平滑区中的果胶解聚,其经由β-消除裂解糖苷键以产生为4,5-不饱和非还原端的寡聚物(Lombard V,Bernard T,Rancurel C,Brumer H,Coutinho PM,Henrissat B.Ahierarchical classification of polysaccharide lyases for glycogenomics.Biochem J.2010;432(3):437-444)。而鼠李糖半乳糖醛酸酶在果胶的毛状区内裂解(Jensen MH,Otten H,Christensen U,Borchert TV,Christensen LL,Larsen S,Leggio LL.Structural and biochemical studieselucidate the mechanism of rhamnogalacturonan lyase from Aspergillusaculeatus.J Mol Biol.2010;404(1):100-111)。
果胶酯酶将果胶水解成甲醇和聚半乳糖醛酸。该酶可由包括曲霉属(Aspergillus sp)、灰葡萄孢(Botrytis cinerea)、串珠镰孢菌(Fusariummonilforme)、葡枝根霉(Rhizopus stolonifer)、木霉属(Trichoderma sp.)等的多种真菌生成(Polizeli ML,Jorge JA,Terenzi HF.Pectinaseproduction by Neurospora crassa:purification and biochemicalcharacterization of extracellular polygalacturonase activity,J.Gen.Microbiol.1991;137:1815-1823)。但曲霉属是果胶酯酶的工业生产的主要来源(Torres EF,Aguilar C,Esquivel JCC,Gonzales GV.Pectinase.在Enzyme Technology,Pandey,A.,Webb,C.,Soccol,C.R.,Larroche,C(编),Asiatech Publishiers Inc.,New Delhi,India,2005.第273-296页中)。
果胶降解酶是在食品工业中、主要用于水果和蔬菜加工,例如果汁生产或酿酒的主要工具。其它应用领域包括纸浆造纸工业(Reid I,Ricard M.Pectinase in papermaking:solving retention problems inmechanical pulps bleached with hydrogen peroxide.Enz.Microbiol.Technol.2000;26:115-123)、动物饲料(Barreto de Menezes TJ,Salva JG,Baldini VL,Papini RS,Sales AM.Protein enrichment of citrus wastes bysolid substrate fermentation.Proc.Biochem.1989;23:167-171)、亚麻及其它植物纤维浸解(Hoondal GS,Tiwari RP,Tiwari R,Dahiya N,BegQK.Microbial alkaline pectinases and their applications:a review.Appl.Microbiol.Biotechnol.2000;9:409-418)、咖啡和茶发酵(Gar JG.Tea,coffee and cocoa.在wood BJB编.Microbiology of fermented foods.1985;第2卷.London:Elsevier Sci.Ltd.第133-154页中)、石油开采(Scott D.Enzymes,industrial.在Encyclopedia of Chemical Technology.Grayson M,Ekarth D and Othmer K(eds),1978;Wiley,NY.第173-224页中)、棉纤维的生物酶精炼(Singh R,Saxena S,Gupta R.Microbialpectinolytic enzymes:A review.Proc.Biochem.2005;40:2931-2944)、植物韧皮纤维脱胶(Kapoor M,Beg QK,Bhushan B,Singh K,Dadich KS,Hoondal GS.Application of alkaline and thermostable polygalacturonasefrom Bacillus sp.MGcp-2in degumming of ramie(Boehmeria nivea)andsunn hemp(Crotolaria juncia)bast fibers.Proc.Biochem.2001;36:803-817)、纺织工业(Karmakar SR.Chemical technology in thepretreatment processes of textiles.在Textile science and technologyseries1st ed.,Amsterdam:Elsevier Science B.V.1999;12页中)和废物管理(Kashyap DR,Vohra PK,Chopra S,Tewari R.Applications ofpectinases in the commercial sector:a review.Biores.Technol.2001;77:215-227)。WO 98/45393公开了对于淤泥具有显著去污力的含有原果胶酶的洗涤剂组合物。
这些酶可在工业中单个地或以混合形式使用。例如,在食品工业中,其作为例如凝胶化所需要的果胶酯酶的单个酶使用以及例如植物材料液化所需要的果胶酯酶和聚半乳糖醛酸酶的不同酶的组合使用(Heldt-Hansen HP,Kofod LV,Budolfsen G,Nielsen PM,Hüttel S,BladtT.Application of tailor made pectinases.在Visser J和Voragen AJG(编),Pectin and Peactnases.Progress in Biotechnology.1996;14:463-474中)。
已经报道了从黑曲霉中获得的这些酶中的多种的克隆和表达。EP 0 278 355描述果胶裂解酶基因的克隆、其序列及表达。EP 0 353188增加了一些其它的果胶裂解酶。EO 0 421 919公开了两种聚半乳糖醛酸酶且另一种内-聚半乳糖醛酸酶已经公开在EP 0 388 593中。这两个专利申请都使用黑曲霉作为该基因的来源。WO 94/14952描述三种具有内-聚半乳糖醛酸酶活性的酶,其可自棘孢曲霉获得。然而,没有报道关于克隆编码来自菜豆壳球孢菌的果胶降解酶的基因的出版物。
本发明采用基因组方法来公开来源于菜豆壳球孢菌的果胶降解酶的基因和它们编码的蛋白质,其尤其可用于工业方法或用途中。
发明概述
其中,本发明涉及可来源于菜豆壳球孢菌的至少21种果胶降解酶。本发明还涉及真菌菜豆壳球孢菌在果胶降解中的用途。
本发明的主要目的在于公开编码真菌菜豆壳球孢菌的以下酶的核苷酸序列集:果胶裂解酶(SEQ ID No.1、2、4、5、7、8、10、11、13、14、16、17、19、20、22、23、25和26)、果胶裂解酶C(SEQ IDNo.28、29、31、32、34、35、37、38、40、41、43和44)、果胶酯酶(SEQ ID No.46、47、49、50、52、53、55和56)和鼠李糖半乳糖醛酸酶(SEQ ID No.58、59、61和62)。对于本发明的各基因,开放阅读框(ORF)序列通过缺失预测的内含子序列并将外显子序列剪接在一起而由相应基因组序列手动得到。还包括包含所述酶基因的载体、表达载体和宿主细胞。
另外,本发明提供从所述基因的ORF序列推导出的多肽序列。本发明的多肽序列对应于以下酶的那些:果胶裂解酶(SEQ ID No.3、6、9、12、15、18、21、24和27)、果胶裂解酶C(SEQ ID No.30、33、36、39、42和45)、果胶酯酶(SEQ ID No.48、51、54和57)和鼠李糖半乳糖醛酸酶(SEQ ID No.60和63)。本发明还涉及包含上述核苷酸序列的互补序列的分离的多核苷酸。
本发明的另一目的在于提供在所述主要目的中列出的基因和酶的分子生物学和遗传信息,以在果胶降解的调节、转化中采用/利用,从而制备有价值的工业产物。
此外,本发明的目的在于促进体外制备果胶降解多肽,并且本发明还包括能够表达含有至少70%的如在以下序列中所列的连续氨基酸的多肽的表达构建体:SEQ ID No.3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60和63。优选所述表达构建体具有具有如在以下序列中所列出的连续核苷酸的插入的DNA或cDNA:SEQ ID No.2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59、62、1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58和61。
本发明的又一目的公开包含具有在以下序列中列出的核苷酸序列的多核苷酸模板的重组基因构建体:SEQ ID No.2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59、62、1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58和61,其中所述多核苷酸模板可在宿主细胞中表达以生成降解果胶的酶。优选所述重组基因构建体还包含操作式连接以增强所述多核苷酸模板的表达的启动子区。
本发明的优选实施方案之一为从感染的黄麻植物分离的菜豆壳球孢菌的ms6菌株。所述分离的多肽也优选来源于该菌株。
此外,本发明的目的在于提供从菜豆壳球孢菌中分离果胶降解酶以跟得上尤其对于制造果汁、纺织品、纸浆和纸、咖啡、茶和石油开采的日益增加的全球需求的潜在商业可行的方法。
本发明的另一目的涉及在加工动物饲料、果汁、纺织品、纸浆和纸、咖啡、茶和石油开采、韧皮纤维浸解/脱胶中利用果胶降解物质。
任何或所有这些用途都能够开发作为研究产品或作为工业和其它用途的供应的商业化试剂盒。所述试剂盒可包含对应于一种或多种本发明的菜豆壳球孢菌基因、抗体和/或其它试剂的多核苷酸和/或多肽。
本领域的技术人员将容易地了解本发明非常适合实现这些目的并且获得所提到的结果和优势以及其中固有的那些。本文所述的实施方案并非旨在限制或约束本发明的范围。
参考以下描述和权利要求书,将更加透彻地理解本发明的这些和其它特征、方面和优势。
附图简述
结合在本说明书中并构成本说明书的一部分的附图说明本发明的实施方案并且与所述描述一起用来解释本发明的原理。
图1为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.1的果胶裂解酶的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带;
图2为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.4的果胶裂解酶的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带;
图3为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.7的果胶裂解酶的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带;
图4为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.10的果胶裂解酶的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带;
图5为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.13的果胶裂解酶的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带;
图6为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.16的果胶裂解酶的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带;
图7为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.19的果胶裂解酶的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带;
图8为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.22的果胶裂解酶的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带;
图9为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.28的果胶裂解酶C的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带;
图10为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.31的果胶裂解酶C的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带;
图11为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.34的果胶裂解酶C的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带;
图12为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.37的果胶裂解酶C的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带;
图13为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.40的果胶裂解酶C的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带;
图14为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.43的果胶裂解酶C的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带;
图15为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.46的果胶酯酶的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带;
图16为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.49的果胶酯酶的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带;
图17为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.55的果胶酯酶的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带;
图18为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.58的鼠李糖半乳糖醛酸酶的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带;
图19为显示PCR扩增结果的电泳琼脂糖凝胶图像,其中道1为SEQ ID NO.61的鼠李糖半乳糖醛酸酶的多核苷酸且道M为DNA分子量梯形带。
发明详述
本文提供的定义和/或方法限定本发明并指引本领域的普通技术人员实施本发明。除非另有说明,否则术语应根据相关技术领域的普通技术人员的常规用法来理解。在某种程度上发现任何定义和/或方法与在结合在本文中的任何专利或非专利参考文献或在其它地方见到的任何参考文献中提供的任何定义和/或方法不一致,应理解,在本文中将使用在本申请中明确提供/采用的所述定义和/或方法。除非上下文明确指明,否则单数术语“一种/个”和“所述/该”包括复数个讨论对象。类似地,除非上下文明确指明,否则词语“或”旨在包括“和”。因此,“包含A或B”意指包括A或B,或者A和B。还应该理解,所有碱基大小或氨基酸大小和对于核酸或多肽给出的所有分子量或分子质量值都是近似值,并为了描述而提供。尽管在本公开的实施或试验中可使用与本文所述的那些方法和材料类似或等效的方法和材料,但是下文描述合适的方法和材料。
本发明提供在果胶降解中包括的菜豆壳球孢菌基因的核苷酸序列。所述基因编码用于包括食品、动物饲料、纸、石油开采、纺织品、废水的工业中或对工业有意义的具有果胶降解酶活性的蛋白质。下文描述编码本发明的基因、其鉴定、表征、修改和在各种工业过程中使用的方法。
菜豆壳球孢菌基因组DNA的核苷酸序列通过整体基因组无规散弹枪DNA定序尝试获得。该基因组DNA由从感染的黄麻(黄麻属(Corchorus spp.))植物分离的菜豆壳球孢菌ms6菌株的分离菌制备。通过Newbler assembler组装产生的核苷酸序列以形成重叠群和支架。核苷酸序列最初通过例如Augustus,Glimmer M(The Institute of GenomeResearch,Rockville,Md.)和Evidence Modeler(EVM)的软件程序注解,其可鉴定推定编码区、内含子和剪接位点。另外,进行核苷酸序列的自动和手动处理(curation)以精细限定并确立编码区和其它基因特征的精确表征。
编码果胶降解酶的本发明的基因组序列主要通过比较菜豆壳球孢菌基因组DNA的核苷酸序列和其它微生物的已知酶基因的核苷酸序列来鉴定。在本发明之前,这些菜豆壳球孢菌基因的核苷酸序列、阅读框、外显子和内含子的位置、酶的结构及其在各种工业上潜在有用性(例如,包括在制造食品和饲料、饮料、纺织品和洗涤剂中包括的那些)是未知的。
来自菜豆壳球孢菌的超过14000种cDNA被部分或完全地定序。其中,发现了编码在果胶降解中具有推定作用的新酶的21种cDNA。
在完全或部分地定序来源于菜豆壳球孢菌mRNA的cDNA文库的无性系之后分析开放阅读框(ORF)并且通过使用序列分析软件并通过测定与在数据库(公用/专用)中的已知序列的同源性来进一步分析。
在本公开的情况下,除非明确指明具有不同的含义,否则在本说明书中使用的许多术语具有指明的含义。
本文使用的术语“基因”定义为真菌菜豆壳球孢菌的基因组序列,特定地编码系列酶的多肽的多核苷酸序列。该术语还可包括包含上游、下游和/或内含子核苷酸序列的核酸分子。
术语“开放阅读框(ORF)”意指编码氨基酸而没有任何终止密码子的一系列核苷酸三连体,且该三连体序列可使用适合特定生物体的密码子使用信息转译成蛋白质。
“编码序列”或“编码区”是指在表达该序列时具有生成例如氨基酸或多肽的基因产物所必需的序列信息的核酸分子。编码序列可包含在转译区内的未转译序列(例如,内含子或5'或3'未转译区),或者可缺乏这类插入的未转译序列(例如,如在cDNA中)。
本文使用的“多核苷酸”为例如核酸片段的核苷酸序列。多核苷酸可为RNA或DNA的聚合物,其为单链或双链的,任选含有合成、非自然或改变的核苷酸碱基。以DNA的聚合物形式的多核苷酸可由cDNA、基因组DNA、合成DNA的一个或多个片段或其混合物构成。本发明的分离的多核苷酸也可来源于SEQ ID No.1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58、61、2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59和62或这类序列的互补序列。
“分离的”意指“经人手”从自然状态改变。如果组合物或物质在自然中存在,如果已经将其自其原始环境改变或移出或两者,则将其视为“分离的”。例如,自然地存在于活的植物或动物中的多核苷酸或多肽不是“分离的”,但从其自然状态的共存材料中分离出的相同多核苷酸或多肽为“分离的”,如该术语在本文中所用。
术语“重组”当在本文中用以提到多肽或蛋白时意指多肽或蛋白来源于重组(例如,微生物或哺乳动物)表达系统。“微生物”是指在细菌或真菌表达系统中制造的重组多肽或蛋白。在大多数细菌系统如大肠杆菌中表达的多肽或蛋白将不含糖基化修饰;在真菌中表达的多肽或蛋白将为糖基化的。
术语“载体”是指质粒、噬菌体、装配型质粒、酵母菌或病毒、人造复制序列(ARS)或用于自核苷酸序列表达多肽的人造染色体。术语“载体”还旨在指能够转运与其连接的另一核酸的核酸分子。一种类型的载体为“质粒”,其是指可连接另外的DNA片段的环状双链DNA环路。另一类型的载体为病毒载体,其中另外的DNA片段可连接到病毒基因组中。某些载体能够在引入它们的宿主细胞中自主复制(例如,具有细菌复制起点的细菌载体和附加体哺乳动物载体)。其它载体可在引入宿主细胞中后集成到宿主细胞的基因组中,并由此与宿主基因组一起复制。此外,某些载体能够引导与它们操作式连接的基因的表达。这类载体在本文中称为“重组表达载体”(或简称为“表达载体”)。通常,在重组DNA技术中有用的表达载体常以质粒的形式。在本说明书中,“质粒”和“载体”可互换使用,因为质粒是最常用形式的载体。然而,本发明旨在包括这类其它形式的表达载体,例如病毒载体(例如,复制缺陷反转录病毒、腺病毒和腺病毒相关病毒),其提供等效功能。
术语“表达载体”在本文中定义为包含编码本发明的多肽的多核苷酸的线性或环状DNA分子,其操作式连接另外的核苷酸,提供其表达。
术语“表达构建体”可包含在基因表达中具有调节作用的一种或多种遗传因子如启动子或增强子的组装,或转录到RNA、mRNA和转译到蛋白并操作式连接启动子或适当转录起始和终止序列的编码序列。
术语“操作式连接”在本文中指示其中控制序列相对于多核苷酸序列的编码序列置于适当位置使得控制序列引导多肽的编码序列的表达的构造。
本文使用的术语“宿主细胞”包括对用包含本发明的多核苷酸的核酸构建体或表达载体转化、转染、转导等敏感的任何细胞类型。
术语“重组宿主细胞”通常意指包含重组转录单元且将表达异源多肽或蛋白和由在重组转录单元中的DNA片段或合成基因编码的RNA的培养细胞。所述细胞可为原核细胞或真核细胞。本文使用的“多肽”为通过肽键键结在一起的氨基酸并具有大于100个氨基酸长度的序列的线性单链。
本文使用的术语“启动子”通常是指用以引导下游基因的转录的核酸序列。启动子通常将适合其中正表达目标基因的宿主细胞。启动子与其它转录和转译调节核酸序列(也称为“控制序列”)一起是表达给定基因所必需的。通常,转录和转译调节序列包括但不限于启动子序列、核糖体结合位点、转录起停序列、转译起停序列和增强子或活化子序列。
本文使用的术语“活体外”通常是指在活生物体外的人造环境中发生的生物反应,其通常在实验室中使用生物体的已经从它们的常用生物演化关系中分离的组分进行以容许进行更详细或更方便的分析。
术语“%同源性”在本文中与本文中的术语“%一致性”可互换地使用且通常是指当使用序列比对程序比对在编码本发明多肽或本发明多肽的氨基酸序列中的任一个的核酸序列之间的核酸或氨基酸序列一致性的水平。
例如,本文使用的80%同源性意指通过限定算法测定的80%序列一致性的情况,且因此给定序列的同源物在一段给定序列上具有大于80%的序列一致性。序列一致性的例示性水平包括但不限于与给定序列,例如如本文所述的本发明多肽中的任一种的编码序列的80%、85%、90%、95%、98%或更高的序列一致性。
可用以测定在两种序列之间的一致性的例示性计算机程序包括但不限于在www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST上公开访问的BLAST程序组,例如BLASTN、BLASTX和TBLASTX、BLASTP和TBLASTN。
在相对于在GenBank DNA序列及其它公用数据库中的核酸序列评价给定的核酸序列时,序列检索通常使用BLASTN程序进行。BLASTX程序优选用于检索在所有阅读框中已经相对于在GenBank蛋白序列及其它公用数据库中的氨基酸序列转译的核酸序列。
用以测定在两个或多个序列之间的“%一致性”的选择序列的优选比对使用例如CLUSTAL-W程序进行。
本文使用的术语“引物”为能够结合目标核酸序列并引发核酸合成的寡聚核苷酸。如本文中定义的扩增寡聚核苷酸将优选具有10-50个、最优选15-25个核苷酸的长度。本发明的扩增寡聚核苷酸可在化学上合成。
在本说明书中提到包含核苷酸序列的核酸而使用的缩写为常规单字母缩写。因此,当包含在核酸中时,自然存在的编码核苷酸如下缩写:腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)和尿嘧啶(U)。并且,除非另作指定,否则本文提供的核酸序列为5'→3'方向。
本文使用的术语“互补”及其派生词用以提到通过如下熟知规则配对的核酸:A与T或U配对且C与G配对。互补序列可为“部分的”或“完整的”。在部分互补序列中,仅一些核酸碱基根据碱基配对规则匹配;而在完全或全部互补序列中,所有碱基都根据配对规则匹配。如在本领域中熟知,在核酸链之间的互补程度可对在核酸链之间的杂交效率和强度具有明显的影响。在取决于在核酸之间的结合的检测方面可能特别如此。
本发明的DNA序列通过定序反应产生且可含有可随着错误地鉴定核苷酸、插入和/或缺失而存在的较小误差。然而,如果存在的话,这种小误差将不会干扰鉴定序列为编码具有工业意义的酶的菜豆壳球孢菌的基因,并且特别地包括在本发明的范围内。
本发明包括编码具有工业意义的菜豆壳球孢菌的酶的基因的基因组核苷酸序列和编码序列。因此,在一个实施方案中,提供SEQ IDNo.2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59和62和/或其任何混合/组合,其各自鉴定所鉴定基因的开放阅读框(ORF)的核苷酸序列。在另一实施方案中,提供由以下序列鉴定的基因的基因组序列:SEQ ID No.1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58和61和/或其任何混合/组合
本文使用的“基因”是指(i)包含在以下序列中列出的核苷酸序列和/或其片段中的至少一个或由所述核苷酸序列和/或其片段中的至少一个组成的基因:SEQ ID No.2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59、62、1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58和61;(ii)编码在以下序列中列出的氨基酸序列的任何核苷酸序列或其片段:SEQ ID No.3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60和63;(iii)在中等严格性条件下,例如在适当/有效量的6x氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中在适当/有效水平的温度如45℃(约)下与过滤结合的DNA杂交,接着在适当/有效量的SDS如0.2x SSC/0.1%SDS中在适当/有效水平的温度如50-65℃(约)下一次或多次洗涤;或在高度严格性条件下,例如在适当/有效量的SSC如6xSSC中在适当/有效水平的温度如45℃(约)下与过滤结合的核酸杂交,接着在适当/有效量的SDS如0.1x SSC/0.2%SDS中在适当/有效水平的温度如68℃(约)下一次或多次洗涤;或在本领域技术人员显而易见的其它杂交条件下,与在以下序列中列出的核苷酸序列的互补序列杂交的任何核苷酸序列:SEQ ID No.2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59、62、1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58和61(参见,例如Ausubel FM,Brent R,KingstonRE,Moore DD,Seidman JG,Smith JA,Struhl K.Current Protocols inMolecular Biology,1994;Green Publishing Associates,Inc.和JohnWiley&Sons,Inc.,New York)。优选与本文公开的DNA序列的互补序列杂交的多核苷酸编码基因产物,例如在功能上与由酶基因或其片段编码的基因产物等效的基因产物。
如上所述,基因序列不仅包括编码以下氨基酸序列的简并核苷酸序列:SEQ ID No.3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60和63,而且包括当在除菜豆壳球孢菌以外的生物体中转译时将产生包含以下氨基酸序列中的一个的多肽的简并核苷酸序列:3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60和63,或其片段。本领域的技术人员将知道在使用在菜豆壳球孢菌中或在其它生物体中的基因序列时如何选择适当的密码子或修饰以下的核苷酸序列:SEQ IDNo.2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59、62、1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58和61。例如,在白色念珠菌(Candida albicans)中,密码子CTG编码丝氨酸残基,而不是亮氨酸残基。
本发明的核苷酸序列可用作遗传标记物和/或序列标记物以帮助开发菜豆壳球孢菌基因组的遗传、物理或序列图谱。本发明的核苷酸序列和对应基因产物也可用以检测菜豆壳球孢菌的存在。在本领域中熟知的基于杂交和抗体的方法可用以测定本发明的核苷酸序列和对应基因产物的存在和浓度。
鉴于所述酶在感染期间的宿主入侵中起作用,所述核苷酸序列也可用于鉴定可具有治疗作用的酶的抑制剂。
在另一实施方案中,除了上述菜豆壳球孢菌的核苷酸序列之外,还包括可存在于菜豆壳球孢菌及其它真菌物种中的本发明基因的同源物或直系同源物。特定优选在丝状真菌中的同源物或直系同源物。这些酶基因可通过本领域熟知的分子生物技术鉴定和分离。
本文使用的术语“真菌”包括子囊菌门(phyla Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)、壶菌门(Chytridiomycota)和接合菌门(Zygomycota)(Hawksworth DL,Kirk PM,Sutton BC,Pegler DN.Ainsworth andBisby's Dictionary of the Fungi(第8版).1995;CAB International,Wallingford,United Kingdom.616页)和酵母菌。子囊菌门的代表性类群包括例如链孢霉属(Neurospora)、青霉属(Penicillium)、曲霉属(Aspergillus)。担子菌门的代表性类群包括蘑菇、锈和黑膜。壶菌门的代表性类群包括异水霉属(Allomyces)、小芽枝霉属(Blastocladiella)、雕蚀菌属(Coelomomyces)。接合菌门的代表性类群包括例如根霉属(Rhizopus)和毛霉属(Mucor)。
术语“丝状真菌”包括真菌的所有丝状体。丝状真菌以由壳多糖、纤维素、葡聚糖、壳聚糖、甘露聚糖及其它复合多糖构成的营养菌丝体为特征。营养生长通过菌丝伸长进行且碳分解代谢是专性需氧的。
因此,本发明还提供可与所述基因的多核苷酸杂交的真菌核苷酸序列。在一个实施方案中,本发明包括包含与选自包含以下序列和/或由以下序列组成的群组的核苷酸序列至少50%一致的核苷酸序列和/或由所述核苷酸序列组成的分离的核酸:SEQ ID No.2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59、62、1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58和61和/或其任何混合/组合。
在另一实施方案中,本发明包括包含在中等严格性条件下与包含选自包含以下序列和/或由以下序列组成的群组的核苷酸序列和/或由所述核苷酸序列组成的第二核酸杂交的真菌核苷酸序列的分离的核酸:SEQ ID No.2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59、62、1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58和61和/或其任何混合/组合。
在又一实施方案中,本发明包括包含编码其氨基酸序列与选自包含以下序列和/或由以下序列组成的群组的氨基酸序列至少50%一致的多肽的真菌核苷酸序列的分离的核酸:SEQ ID No.3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60和63。
本发明的核苷酸序列还包括与在以下序列中所列的核苷酸序列至少40%一致的真菌核苷酸序列:SEQ ID No.2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59、62、1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58和61。
为了分离同源基因,可将上述菜豆壳球孢菌基因序列标记并用以筛选由从包括但不限于菜豆壳球孢菌的目标生物体获得的mRNA构建的cDNA文库。因此,包括由以下的核苷酸序列中的任一个组成的优选可检测标记的核酸探针:SEQ ID No.2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59、62、1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58和61。当cDNA文库来源于与得到标记序列的生物体类型不同的生物体时,杂交条件可优选为低严格性的。cDNA筛选还可鉴定来源于在相同物种中的备选剪接转录体的无性系。备选地,标记的探针可用以此外使用适当严格的条件筛选来源于目标生物体的基因组文库。低严格性条件将为本领域的技术人员所熟知,且将根据得到该文库和标记序列的具体生物体而可预见地变化。(细节在以下文献中:Sambrook J,Russell DW.Molecular Cloning,A LaboratoryManual,第3版,2001,Cold Spring Harbor Press,N.Y.;和Ausubel FM,Brent R,Kingston RE,Moore DD,Seidman JG,Smith JA,Struhl K.Current Protocols in Molecular Biology,1994;Green PublishingAssociates,Inc.和John Wiley&Sons,Inc.,New York)。
此外,同源基因序列可通过使用基于在目标基因内的氨基酸序列设计的两个简并寡聚核苷酸引物池进行聚合酶链反应(PCR)分离。用于该反应的模板可为通过逆转录由目标生物体制备的mRNA获得的cDNA。可将PCR产物亚克隆并定序以保证扩增的序列代表同源酶基因序列的序列。
因此,可通过本领域的普通技术人员熟知的多种方法使用PCR片段来分离全长cDNA无性系。备选地,可使用标记的片段来筛选基因组文库。
在本发明的另一实施方案中,菜豆壳球孢菌基因序列可用以开发表现出特定合乎需要的化学和/或物理特性的修饰的或新颖的酶。由于在菜豆壳球孢菌和其它丝状真菌的酶中氨基酸序列的明显相关性/相似性,可使用另一真菌的酶的结构来预测菜豆壳球孢菌酶的结构并且帮助合理修饰菜豆壳球孢菌酶以便得到有用且优异的性质。本发明提供的序列也可用作合理修饰或设计新酶以具有使得这些酶在需求过程中有更好表现的特性的准备材料。
基因核苷酸序列可通过以下技术改变:无规和定点诱变技术或定向分子进化技术,例如但不限于在(Arnold FH.Protein engineering forunusal environments.Curr.Opinion Biotechnol.1993;4:450-455)中所述的方法;寡聚核苷酸定向诱变(Reidhaar-Olson JF,Sauer RT.Combinatorial cassette mutagenesis as a probe of the informationalcontent of protein sequences.Science,1988;241:53-57);化学物诱变(Eckert KA,Drinkwater NR.recA-dependent and recA-independentN-ethyl-N-nitrosourea mutagenesis at a plasmid-encoded herpes simplexvirus thymidine kinase gene in E.coli.Mutat Res.1987;178:1-10);定点诱变(Kunkel TA.Rapid and efficient site-specific mutagenesis withoutphenotypic selection.Proc.Natl.Acad.Sci.USA,1985;82:488-492;Oliphant A,Nussbaum AL,Struhl K.Cloning of random-sequenceoligodeoxynucleotides.Gene 1986;44177-183);易错PCR(Cadwell RC,Joyce GF.Randomization of genes by PCR mutagenesis.PCR MethodsAppl.1992;2:28-33);盒式诱变(Stauss Hj,Davies H,Sadovnikova E,Chain B,Horowitz N,Sinclair C.Induction of cytotoxic T lymphocyteswith peptides in vitro:identification of candidate T-cell epitopes inhuman papilloma virus.PNAS 1992;89(17):7871-7875);DNA改组方法,如在Stemmer WP.DNA shuffling by random fragmentation andreassembly:in vitro recombination for molecular evolution.PNAS1994;91(22):10747-10751中和在美国专利号5,605,793、6,117,679和6,132,970中所述;和如在美国专利号5,939,250、5,965,408、6,171,820中所述的方法。在核苷酸序列中的突变可通过定序在无性系中的基因来测定。
在一个实施方案中,在SEQ ID NO.2中说明的747bp长的多核苷酸为编码果胶裂解酶蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQ ID NO.3中具有约26kD的计算分子量的含248个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.2的SMART分析,揭示出在该序列中存在Pfam果胶裂解酶域。果胶裂解酶为催化果胶酯消除裂解以生成在它们的非还原端具有4-脱氧-α-D-葡萄糖-4-醛酸基的寡聚糖的细胞外酶。该酶包括在果胶的降解中。
优选在SEQ ID NO.5中说明的735bp长的多核苷酸为编码果胶裂解酶蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQ ID NO.6中具有约25kD的计算分子量的含244个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.5的SMART分析,揭示出在该序列中存在Pfam果胶裂解酶域。果胶裂解酶为催化果胶酯消除裂解以生成在它们的非还原端具有4-脱氧-α-D-葡萄糖-4-醛酸基的寡聚糖的细胞外酶。该酶包括在果胶的降解中。
类似地,另一方面,在SEQ ID NO.8中说明的756bp长长的多核苷酸为编码果胶裂解酶蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQ ID NO.9中具有约26kD的计算分子量的含251个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.8的SMART分析,揭示出在该序列中存在Pfam果胶裂解酶域。果胶裂解酶为催化果胶酯消除裂解以生成在它们的非还原端具有4-脱氧-α-D-葡萄糖-4-醛酸基的寡聚糖的细胞外酶。该酶包括在果胶的降解中。
另一方面,在SEQ ID NO.11中说明的771bp长长的多核苷酸为编码果胶裂解酶蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQ IDNO.12中具有约27kD的计算分子量的含256个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.11的SMART分析,揭示出在该序列中存在Pfam果胶裂解酶域。果胶裂解酶为催化果胶酯消除裂解以生成在它们的非还原端具有4-脱氧-α-D-葡萄糖-4-醛酸基的寡聚糖的细胞外酶。该酶包括在果胶的降解中。
另外,另一方面,在SEQ ID NO.14中说明的750bp长长的多核苷酸为编码果胶裂解酶蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQ ID NO.15中具有约26kD的计算分子量的含249个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.14的SMART分析,揭示出在该序列中存在Pfam果胶裂解酶域。果胶裂解酶为催化果胶酯消除裂解以生成在它们的非还原端具有4-脱氧-α-D-葡萄糖-4-醛酸基的寡聚糖的细胞外酶。该酶包括在果胶的降解中。
又一方面,在SEQ ID NO.17中说明的756bp长长的多核苷酸为编码果胶裂解酶蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQ IDNO.18中具有约26kD的计算分子量的含251个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.17的SMART分析,揭示出在该序列中存在Pfam果胶裂解酶域。果胶裂解酶为催化果胶酯消除裂解以生成在它们的非还原端具有4-脱氧-α-D-葡萄糖-4-醛酸基的寡聚糖的细胞外酶。该酶包括在果胶的降解中。
又一方面,在SEQ ID NO.20中说明的894bp长长的多核苷酸为编码果胶裂解酶蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQ IDNO.21中具有约30kD的计算分子量的含297个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.20的SMART分析,揭示出在该序列中存在Pfam果胶裂解酶域。果胶裂解酶为催化果胶酯消除裂解以生成在它们的非还原端具有4-脱氧-α-D-葡萄糖-4-醛酸基的寡聚糖的细胞外酶。该酶包括在果胶的降解中。
又一方面,在SEQ ID NO.23中说明的747bp长长的多核苷酸为编码果胶裂解酶蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQ IDNO.24中具有约26kD的计算分子量的含248个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.23的SMART分析,揭示出在该序列中存在Pfam果胶裂解酶域。果胶裂解酶为催化果胶酯消除裂解以生成在它们的非还原端具有4-脱氧-α-D-葡萄糖-4-醛酸基的寡聚糖的细胞外酶。该酶包括在果胶的降解中。
又一方面,在SEQ ID NO.26中说明的1707bp长长的多核苷酸为编码果胶裂解酶蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQ IDNO.27中具有约64kD的计算分子量的含568个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.26的SMART分析,揭示出在该序列中存在Pfam果胶裂解酶域。果胶裂解酶为催化果胶酯消除裂解以生成在它们的非还原端具有4-脱氧-α-D-葡萄糖-4-醛酸基的寡聚糖的细胞外酶。该酶包括在果胶的降解中。
另一方面,在SEQ ID NO.29中说明的1314bp长长的多核苷酸为编码果胶裂解酶C蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQID NO.30中具有约46kD的计算分子量的含437个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.29的序列分析,揭示出在该序列中存在果胶裂解酶C域基元。果胶裂解酶C为裂解植物细胞壁的主要组分聚半乳糖醛酸的细胞外酶。该酶包括在果胶的降解中。
另一方面,在SEQ ID NO.32中说明的972bp长长的多核苷酸为编码果胶裂解酶C蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQ IDNO.33中具有约34kD的计算分子量的含323个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.32的序列分析,揭示出在该序列中存在果胶裂解酶C域基元。果胶裂解酶C为裂解植物细胞壁的主要组分聚半乳糖醛酸的细胞外酶。该酶包括在果胶的降解中。
另一方面,在SEQ ID NO.35中说明的966bp长长的多核苷酸为编码果胶裂解酶C蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQ IDNO.36中具有约33kD的计算分子量的含321个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.35的序列分析,揭示出在该序列中存在果胶裂解酶C域基元。果胶裂解酶C为裂解植物细胞壁的主要组分聚半乳糖醛酸的细胞外酶。该酶包括在果胶的降解中。
另一方面,在SEQ ID NO.38中说明的1536bp长长的多核苷酸为编码果胶裂解酶C蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQID NO.39中具有约56kD的计算分子量的含511个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.38的序列分析,揭示出在该序列中存在果胶裂解酶C域基元。果胶裂解酶C为裂解植物细胞壁的主要组分聚半乳糖醛酸的细胞外酶。该酶包括在果胶的降解中。
另一方面,在SEQ ID NO.41中说明的1137bp长长的多核苷酸为编码果胶裂解酶C蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQID NO.42中具有约39kD的计算分子量的含378个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.41的序列分析,揭示出在该序列中存在果胶裂解酶C域基元。果胶裂解酶C为裂解植物细胞壁的主要组分聚半乳糖醛酸的细胞外酶。该酶包括在果胶的降解中。
另一方面,在SEQ ID NO.44中说明的1137bp长长的多核苷酸为编码果胶裂解酶C蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQID NO.45中具有约39kD的计算分子量的含378个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.44的序列分析,揭示出在该序列中存在果胶裂解酶C域基元。果胶裂解酶C为裂解植物细胞壁的主要组分聚半乳糖醛酸的细胞外酶。该酶包括在果胶的降解中。
另一方面,在SEQ ID NO.47中说明的1182bp长长的多核苷酸为编码果胶酯酶蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQ IDNO.48中具有约42kD的计算分子量的含393个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.47的SMART序列分析,揭示出在该序列中存在果胶酯酶域。果胶酯酶为催化果胶质的半乳糖醛酸主链的甲酯键脱酯以释放酸性果胶和甲醇的细胞外酶。所得果胶随后受聚半乳糖醛酸酶和裂解酶作用。
另一方面,在SEQ ID NO.50中说明的975bp长长的多核苷酸为编码果胶酯酶蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQ ID NO.51中具有约35kD的计算分子量的含324个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.50的SMART序列分析,揭示出在该序列中存在果胶酯酶域。果胶酯酶为催化果胶质的半乳糖醛酸主链的甲酯键脱酯以释放酸性果胶和甲醇的细胞外酶。所得果胶随后受聚半乳糖醛酸酶和裂解酶作用。
另一方面,在SEQ ID NO.53中说明的5895bp长长的多核苷酸为编码果胶酯酶蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQ IDNO.54中具有约206kD的计算分子量的含1964个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.53的SMART序列分析,揭示出在该序列中存在多重果胶酯酶域。果胶酯酶为催化果胶质的半乳糖醛酸主链的甲酯键脱酯以释放酸性果胶和甲醇的细胞外酶。所得果胶随后受聚半乳糖醛酸酶和裂解酶作用。
另一方面,在SEQ ID NO.56中说明的981bp长长的多核苷酸为编码果胶酯酶蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQ ID NO.57中具有约34kD的计算分子量的含326个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.56的SMART序列分析,揭示出在该序列中存在果胶酯酶域。果胶酯酶为催化果胶质的半乳糖醛酸主链的甲酯键脱酯以释放酸性果胶和甲醇的细胞外酶。所得果胶随后受聚半乳糖醛酸酶和裂解酶作用。
另一方面,在SEQ ID NO.59中说明的1593bp长长的多核苷酸为编码鼠李糖半乳糖醛酸酶蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQ ID NO.60中具有约57kD的计算分子量的含530个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.59的SMART序列分析,揭示出在该序列中存在鼠李糖半乳糖醛酸酶域。鼠李糖半乳糖醛酸酶裂解在作为植物细胞壁多糖的主要组分果胶的鼠李聚糖半乳糖醛酸-I的主链中的L-鼠李糖和D-半乳糖醛酸之间的α-1,4糖苷键。
再一方面,在SEQ ID NO.62中说明的1605bp长长的多核苷酸为编码鼠李糖半乳糖醛酸酶蛋白的全长cDNA无性系,表现出编码如在SEQ ID NO.63中具有约57kD的计算分子量的含534个氨基酸的多肽的开放阅读框。通过SEQ ID No.62的SMART序列分析,揭示出在该序列中存在鼠李糖半乳糖醛酸酶域。鼠李糖半乳糖醛酸酶裂解在作为植物细胞壁多糖的主要组分果胶的鼠李聚糖半乳糖醛酸-I的主链中的L-鼠李糖和D-半乳糖醛酸之间的α-1,4糖苷键。
本发明还涉及(a)核酸载体,其包含包含基因的任何上述序列和/或其互补序列的核苷酸序列和/或由所述核苷酸序列组成;(b)表达构建体,其包含由与引导编码序列的表达的调节因子操作式连接的基因的任何上述编码序列组成和/或包含所述编码序列的核苷酸序列;和(c)重组宿主细胞,其包含基因的任何上述序列和/或由基因的任何上述序列组成,包括与引导编码序列在宿主细胞中的表达的调节因子操作式连接的编码区。
利用重组DNA方法修饰多核苷酸序列的技术在本领域中熟知。各种序列可根据例如限制、接合互补限制性位点和连接、平端悬突充填和平接等的已知技术接合。在适当时可采用多连接子和接头并通过允许DNA载体和表达构建体容易地组装的已知技术引入或除去。许多载体可用于克隆和基因操作。通常,克隆可在大肠杆菌中进行。
在本发明的另一实施方案中,包含本发明的酶基因序列的载体还可包括复制功能,其能够在包括但不限于大肠杆菌细胞、丝状真菌细胞、酵母细胞和芽胞杆菌属细胞的宿主细胞的一种或多种物种中实现载体的转移、维持和增殖。该载体可含有保证自我复制的任何手段。备选地,该载体可为在引入宿主细胞中时集成到基因组中并与已经集成到其中的一个或多个染色体一起复制的载体。载体的选择通常将根据载体与向其中引入该载体的宿主细胞的相容性。
本发明的表达构建体包含启动子、编码本发明的基因序列的核苷酸序列、转录终止序列和可选择的标记物(任选的)和/或由启动子、编码本发明的基因序列的核苷酸序列、转录终止序列和可选择的标记物(任选的)组成。可使用将该表达构建体引入宿主细胞的本领域已知的任何方法。真菌细胞可通过包括原生质体形成、原生质体转化和细胞壁再生的方法以本身已知的方式转化。转化曲霉属和木霉属宿主细胞的合适程序描述在EP 238023和Yelton MM,Hames JE,TimberlakeWE.Transformation of Aspergillus nidulans by using a trpC plasmid.PNAS,1984;81(5):1470-1474中。转化镰孢属物种的合适方法由Malardier L,Daboussi MJ,Julien J,Roussel F,Scazzocchio C,Brygoo Y.Cloning of the nitrate reductase gene(niaD)of Aspergillus nidulans andits use for transformation of Fusarium oxysporum.Gene 1989;78:147-156和WO 96/00787描述。酵母菌可使用由以下文献描述的程序转化:Becker DM,Guarente L.High-efficiency transformation of yeastby electroporation.在Abelson JN和Simon MI(编),Guide to YeastGenetics and Molecular Biology,Methods inEnzymology,1991;194:182-187,Academic Press,Inc.,New York中;ItoH,Fukuda Y,Murata K,Kimura A.Transformation of intact yeast cellstreated with alkali cations.Journal of Bacteriology,1983;153:163-168;和Hinnen A,Hicks JB,Fink GR.Transformation of yeast.PNAS,1978;75(4):1929-1933。
对于工业应用,本发明的酶由真菌细胞生成。优选表达宿主细胞为丝状真菌细胞,其已经用于大规模工业发酵中。可选择适当的细胞系和宿主系统以确保表达的异种蛋白的恰当修饰和加工。优选选择能够有效分泌它们的内生蛋白的表达宿主。也可选择缺乏胞外蛋白酶活性的宿主细胞,因为所分泌的酶可在培养基中降解。
本发明还涉及制备本发明的多肽的方法,其包括以下步骤:(i)培育细胞,在以野生型形式时,其能够在有助于制备所述多肽的条件下制备所述多肽;和(ii)回收所述多肽。在一个优选的方面,所述细胞为菜豆壳球孢菌。
本发明的另一实施方案还涉及制备本发明的多肽的方法,其包括以下步骤:(i)在有助于制备所述多肽的条件下培育宿主细胞,其中所述宿主细胞包含以下的核苷酸序列:SEQ ID No.2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59、62、1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58或61,其中所述核苷酸序列编码包含以下序列的成熟多肽或由以下序列的成熟多肽组成的多肽:SEQ ID No.3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60或63,和(ii)回收所述多肽。
在本发明的另一实施方案中,所述表达宿主细胞或转化体在适合蛋白生长和表达的营养培养基中使用本领域熟知的方法培育。例如,细胞可通过在合适培养基中且在允许多肽表达和/或分离的条件下进行的摇瓶培育和在实验室或工业发酵罐中的小型或大型发酵(包括连续、分批、分批进料或固态发酵)培育。培育在包含碳和氮源和无机盐的合适营养培养基中使用本领域已知的程序发生(参见:More GeneManipulations in Fungi.Bennett J W,Lasure L.(编).1991;AcademicPress,San Diego,CA)。如果多肽分泌到营养培养基中,则该多肽可从该培养基中直接回收。如果多肽没有分泌到培养基中,则其可从细胞溶胞产物中回收。
所述多肽可使用本领域已知的对所述多肽具有特异性的方法检测。这些检测方法可包括使用特异性抗体、形成酶产物或酶底物消失。可使用酶测定来测定多肽的活性。
生成的多肽可使用本领域已知的方法回收。所述多肽可以各种方法通过包括但不限于过滤、离心、提取、喷雾-干燥、蒸发和沉淀或其组合的常规程序从营养培养基中回收。
本发明的多肽可通过本领域中熟知的包括但不限于以下程序的多种程序纯化以获得基本上纯的多肽:色谱方法(例如,离子交换、亲和力、疏水、色谱聚焦和尺寸排除)、电泳程序(例如,等电聚焦)、差示溶解度(例如,硫酸铵沉淀)、SDS-PAGE或提取(参见在以下文献中的详述:Protein Purification,Principles,High Resolution Methods andApplications.Janson JC,Rydén L.(编).1989;VCH Publishers Inc.,NewYork)。
本发明还涉及由在以下序列中列出的基因序列编码的那些基因产物(例如,RNA或蛋白):SEQ ID No.2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59和62。本发明的酶基因产物还包括由如在以下序列中列出的基因的基因组序列编码的那些RNA或蛋白:SEQ ID No.1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58和61。本发明的酶包含选自包含以下序列和/或由以下序列组成的群组的氨基酸序列:SEQ ID No.3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60和63。
本发明的酶显示出选自包含以下酶和/或由以下酶组成的群组的酶的活性中的至少一种:果胶裂解酶、果胶裂解酶C、果胶酯酶和鼠李糖半乳糖醛酸酶。本发明的酶基因产物可例如通过合成技术或通过使用本领域熟知的技术的重组DNA技术方法容易地生成(参见,Creighton TE.Proteins:Structures and Molecular Principles,1983;W.H.Freeman and Co.,N.Y.)。
在另一实施方案中,本发明的方法和组合物还包含代表功能等效的基因产物的蛋白和多肽。所述功能等效的基因产物包括但不限于具有在以下序列中列出的氨基酸序列的多肽的自然变体:SEQ ID No.3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60和63。
所述等效基因产物可含有例如在由上述酶基因序列编码的氨基酸序列内的氨基酸残基的缺失、加成和替代,但其产生沉默改变,因此生成功能等效的产物。氨基酸取代可基于所包括的残基的极性、电荷、溶解性、疏水性、亲水性和/或两亲性质的相似性进行。
可进行编码上述序列的基因产物的其它修饰以产生非常适合在所选择的宿主细胞中表达、递增等的多肽。例如,半胱氨酸残基可缺失或用另一氨基酸取代以消除二硫键。
本发明的另一实施方案还包括以固体形式的本发明的酶。以固体形式的酶或酶颗粒可例如用于固体洗涤剂和动物饲料中。制造固体形式的酶的方法在本领域中熟知,例如但不限于颗粒化(在蜡质材料中喷雾-冷却)、挤出、团聚或粒化(用惰性材料和粘合剂稀释)。以混合粉末、片剂等形式的包含本发明的固体形式的酶的固体酶组合物也在考虑中。
本公开包括如在随附权利要求书所包含的以及上文描述的那些。尽管已经在特定程度上以其优选形式描述了本发明,但应理解,该优选形式的公开仅通过举例而产生,而且可在不脱离本发明和权利要求书的范围和精神的情况下在构造的细节和各部分的组合和配置方面采取许多改变。
本文中引用了多个参考文献,它们的公开内容通过引用全文结合到本文中。
实施例
以下实施例旨在进一步说明本发明,而绝不是想要将本发明限于本文描述的具体实施方案。
实施例1从菜豆壳球孢菌中分离基因组DNA
基因组DNA使用由Kieser T,Bibb MJ,Buttner MJ,Chater KF,Hopwood DA.Practical Streptomyces Genetics,2000;John InnesFoundation,Norwich,UK,第162-208页描述的程序从菜豆壳球孢菌菌株ms6分离。简要地讲,菌丝体使用接种环从储备皮氏平皿刮落并接种到在锥形烧瓶中的液体马铃薯-右旋糖培养基中。在不振荡的情况下在30℃下培育该锥形烧瓶约72小时。菌丝体在表面上在空气-培养基界面上生长。菌丝体使用无菌牙签收获并放置在无菌纸巾之间并用生理溶液(磷酸钠缓冲液pH 7.0)多次洗涤。将菌丝体挤压以除去过量的液体并让收获的菌丝体风干30分钟。将半干的菌丝体置于液氮中并研磨以产生细粉且最后按照在Kieser T,Bibb MJ,Buttner MJ,Chater KF,Hopwood DA.Practical Streptomyces Genetics,2000;JohnInnes Foundation,Norwich,UK,第162-208页中描述的方案分离DNA。
实施例2引物的设计和合成
在该研究中使用的引物通过用完整ORF手动选择序列或使用其中类似的基因已经从其它植物中成功地分离的数据库由手动辅助转录组和由菜豆壳球孢菌ms6的基因组序列预测的“基因模型”设计。由转录组获得的核苷酸序列的比较生物信息分析使用NCBI BLAST、BLASTP、RPS-BLAST、BLASTX和PSI-BLAST进行以鉴定相关基因的同源物并恰当地鉴定基因。每当从“基因池”中寻找多个序列时,核苷酸序列比对都使用1.82版clustalW进行。随后编辑该比对。基因特异性引物(正向和反向)手动地或经由Primer 3+工具选择且这些引物常规地合成。
在本研究中使用的所有寡聚核苷酸都是合成的且由供应商HPLC纯化并自Integrated DNA Technologies(IDT)获得。在高压处理的ddH2O中制备100pmol的储备溶液并将其以等分试样储存在-20℃下以便使用。
用作PCR的引物的寡聚核苷酸序列
实施例3来自菜豆壳球孢菌ms6的果胶裂解酶、果胶裂解酶C、果胶酯酶和鼠李糖半乳糖醛酸酶的扩增、克隆和定序
总RNA从在液体培养基中生长三天的菌丝体中分离,如先前由Chomczynski P和Sacchi N,Single-step method of RNA isolation byacid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction.(AnalBiochem 1987,162:156-159)所述。RNA的品质或完整性通过琼脂糖凝胶电泳检查并使用Thermo Scientific Nano Drop 2000按照标准程序量化。cDNA第一链使用SuperScript III逆转录酶(Invitrogen)按照生产商说明书合成。基因通过PCR使用基因特异性引物从cDNA扩增。PCR反应(50μL)含有1μL cDNA、20pmole的每种引物、5μL的10XPCR缓冲剂、5μL的2.5mM dNTP混合物和1.0单位的PfuTaq DNA聚合酶。PCR在Thermal Cycler(Applied Biosystems)中使用以下条件进行:在95℃下初始变性5分钟(“min”),接着在95℃下变性30秒(“sec”)循环35次,在59-61℃下退火30秒和根据目标基因的长度,在72℃下伸长1-2.0分钟,在72℃下最后伸长7分钟。PCR产物通过1%琼脂糖凝胶使用1X TAE缓冲剂分析且扩增子按照生产商说明书使用QIAGEN凝胶提取试剂盒从凝胶中洗脱。将纯化的PCR产物连接到TA克隆试剂盒(Invitrogen)并转化成胜任大肠杆菌细胞(Invitrogen)。质粒按照生产商说明书使用QIAprip SpinMiniprep试剂盒(QIAGEN)从推定菌落分离。插入子的存在通过使用基因特异性引物检查且对阳性质粒进行定序。
实施例4序列的分析
核苷酸序列和氨基酸序列分别通过BLASTN和BLASTP程序分析。将自其它植物报道的序列与ClustalW比对。种系发生分析使用Neighbour Joining(NJ)进行。
SEQ ID NO:1
长度:1047(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
GAAGAGTATATAGAGGTGGCCACGACTGCACTGTTGAACTCATCACCGACCCACAATCGCTTTCTTTCTGCCCACTCTCGTTCACAACACAGATCTCTGATCTACCACATTCGTTCTTACCGAGGATCAAAAATTCCTCCCATCTCCACAATGCAGTACAAGTACACCGTCCTTGCCGCCACTATGGCCGCCGTTGCCTTCGCCCAGCAGAACTTGATTGGCATTCCTACCGGTACTAAAGCTAAGCCTTTCACCCAGCCCGAGACCATTACCTTCTTCGACGGTAAAATGATGGAATACGGCCGCGGCAAGCCCTGTGGCACCGACGATGACAAGGGTGACCTTGAGGCCGTCTTCATCATCAAGCCCGGCGGCACGCTGCAGAACGCCATCATCGGCGCCGACTCCCTTGAGGGCGTGCACTGCGAGGGCGCCTGCACCATCAAGAACGTCTGGTTCAAGGACGTGTGCGAAGACGCCATCACCCTCAAGGGCAACGGCCCGTACCTGATCACCGGTGGCGGTGCGCAGCACGCCAAGGACAAGGTCGTCCAGCACAACGGCAAGGGCACCGTGACCATCTCCGATTACAAGATCGGCGCCGTCGGTAAGCTGTACCGCAGCTGTGGCAACTGCAGCAACAACGGCGGCCCCCGCAACGTCGTCCTCGACCGCATCTCTTCCTTCGGCCCCGGCACCACGTCCGACCTTGTCGGCATCAACTCCAACTACAACGACGTCGCCACCATCAGTGGCGTCTGCGGCCCTGTCAAGAACATGTGTCAGGAGTTCACCGGCATCGAGAAGGACGGCAACAAGGAGAGCCCCCACAGGGAGCCCCCGATTGGTGCTTGCAAGGGCCCCCAGGGCCAGCTCAAGACGGCTCCCGCTTGCTAAGCGCCTCACGGAATTATCATGGGTGTGCAGTTACGGGAAAGGAAATCGATATCGACCTCCCTATTGGTAACATCAATCTGGCTCCAAATTGCATCATCCGCCACTGGTCGGCCATGACAGGACAGAGCGAAGTCAAAAGTTTCGGTGTAC
SEQ ID NO:2
长度:747
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(747)
SEQ ID NO:3
长度:248
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MQYKYTVLAATMAAVAFAQQNLIGIPTGTKAKPFTQPETITFFDGKMMEYGRGKPCGTDDDKGDLEAVFIIKPGGTLQNAIIGADSLEGVHCEGACTIKNVWFKDVCEDAITLKGNGPYLITGGGAQHAKDKVVQHNGKGTVTISDYKIGAVGKLYRSCGNCSNNGGPRNVVLDRISSFGPGTTSDLVGINSNYNDVATISGVCGPVKNMCQEFTGIEKDGNKESPHREPPIGACKGPQGQLKTAPAC*
SEQ ID NO:4
长度:1167(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
CTACCACGAATCGGAATTAAACGACGAATCTCCTGGTGAAGACTATAAAAGGCAGACAACGGCGTCGACAGTAAAGACCATCGCAATCCAACAGTCCAGTTCCTCCTCAAGTCTCTCACTCCCATCCTCCACTTTCCAATCACTTCCAACATGAAGTTCATCTACGCCGCTATCACCGCCACCGTGGCTGGCCTTGCCTCTGCGCAGTCCCTGACCATCCCCACCCGCTCCGGCAGCAAGGTCGTCCTCTCCGCGCCCAGTACCATCTCCGGCTCGCAAGACTTTGGTAACAAGGAGTTCGACCGCGGAATCCCCTGCGACTCGGACGATGACACTGGCAGCTCCAGCGCCGTCTTCATCCTCAAGAACGGCGCCAGCATCTCCAACGTCATCATTGGTACCGACGCGCTCGAGGGCGTCCACTGCGAGGGTGCCTGCACCCTGACCAACGTCTGGTTCCGTGACGTCTGCGAGGGTGAGCTAAATCCACAACATACCATCAAACACTCAAGTAGTGCACACGAATGCTAATGGGAAAATCCAGACGCCATCTCCGCGCTCGGCACCGGCAATGTCCTCATCCAGGGCGGCGGTGCGCAGAACGCCAAGGACAAGGTCGTCCAGCACAACGGCCGCGGCACCGTCACCATCAAGAACTACACCGTCGTCAACGCCGGCAAGCTGTACCGCAGCTGCGGCGACTGCACCAACAACGGCGGCCCCCGCAACGTCGTCGTGGACAACGTCCGCGTCAACGGCATGACCTCTGACCTCGTCGGCATCAACTCCAACTACGGTGACAGTAAGTCGGCAAAAGATACTTCAAATCGTTGGAGGAACACTCAATACTGACTGTCGATTCCAGCTGCTACCATCAGCAACTCTTGCGGCGTCTCCAAGAAGGTCTGCCAGGAGTACAAGGGCGTCACCAAGGGCAACGGCGACAGCGAGAAGGTCTCCACCACTGCCAACTGCAAGGGTGCTCAGGGTACTCTGTCTAAGCTTCCCACTTGCTAGACAACCTAAAAGCAAAACCAAACTAGAGCTTGGGCACGGATCACTCGCGTTGGATGTGGTCCGTGGAATCCTTGGTCAGTGCTCAATCGCCTGCTTCGAGTGGGAAACGGCCGTCTCAATTGATACCGGGCGAGTGTCTGCGCATGGATG
SEQ I D NO:5
长度:735
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(735)
SEQ ID NO:6
长度:244
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MKFIYAAITATVAGLASAQSLTIPTRSGSKVVLSAPSTISGSQDFGNKEFDRGIPCDSDDDTGSSSAVFILKNGASISNVIIGTDALEGVHCEGACTLTNVWFRDVCEDAISALGTGNVLIQGGGAQNAKDKVVQHNGRGTVTIKNYTVVNAGKLYRSCGDCTNNGGPRNVVVDNVRVNGMTSDLVGINSNYGDTATISNSCGVSKKVCQEYKGVTKGNGDSEKVSTTANCKGAQGTLSKLPTC*
SEQ ID NO:7
长度:1110(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
CAGCGGTATATAAATGCCCTGGTACCCTGCCCCAAAATGCCTTCTTCACCACCACAGTCCTTCGTTTCAATCGTTCAGCACATTCACTCTTTCATTCACACTCACTAACCGATCTGCGATCGTGTTCTTTGCCTTCCACTACCAGACACAATGTTCTCCAAGCTTTTCCTGCTTCCCCTCCTGGCGGCTTCCGCCCTGGCTGCTCCTGCCGACGACACTTTCGGCTACGAGCTCGTTCGCCGCGCGAACTTCCCCATTCCTGCCTCCAAGGGCAACGTCAAGCTCAGCGCTGCCAAGTCCGTGTCCGGCACCTTCGATGGTGGCATGAAGACCTACGGCCGTGGTGTCAAGTGCACCGGTCAGGCCGAGGGTGGTGACAAGGACGCCGTCTTCATCCTCGAGAACGGTGCTACCCTCAAGAACGCCATCATTGGTACCGACCAGATCGAGGGCGTCCACTGCAAGGGCTCCTGCACCATCGAAAACGTCTGGTGGGCCGGTGTCTGCGAGGACGCGCTCTCCCTGAAGGGTGACGGTTCCGCCAAGGTCATCGGCGGCGGCGCTACTGGCGCTGAAGACAAGGTACGTACGCCTCTGATACGCCTTCGCTCAGATTGCTGACCAGATCTGGTACAGGTCATCCAGCACAACGGCGTTGGCTCCGTCTCGATTGATGGCTTCACTGTTGCCGACTTCGGCAAGCTCTACCGCTCGTGCGGAAACTGCAAGAAGATGGGCAAGAGAACCGTCACCATCAAGAACGTGAAGGCTAGCAACGGAAAGCTTTTGGCTGGCATCAACTCCAACTACGGCGACACTGCTACCATCACCGGCACCTGCGCTACCTCCGTCAAGAAGGTCTGCACCGAGTTCAAGGGCAACAACAGCGGCAAGGAGCCCACCGAGATCAGCTCCGGCCCCAGCAACGCCTGCAAGTACTCCTCCCTCAAGGCCTGCTAGGGCCTGCTAGACGGTTGCTCAACAAACAAACATGGCATTTGCCGCGTGAGCCCGGGACCTTTCCGGGCTCGGGAGAAGAAAGTGGATGGCATTCTATTCTTGTATCGACTTCTAGTACTAGAGCATCTTCTATACCTCTAATTTACTGTG
SEQ ID NO:8
长度:756
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(756)
SEQ ID NO:9
长度:251
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MFSKLFLLPLLAASALAAPADDTFGYELVRRANFPIPASKGNVKLSAAKSVSGTFDGGMKTYGRGVKCTGQAEGGDKDAVFILENGATLKNAIIGTDQIEGVHCKGSCTIENVWWAGVCEDALSLKGDGSAKVIGGGATGAEDKVIQHNGVGSVSIDGFTVADFGKLYRSCGNCKKMGKRTVTIKNVKASNGKLLAGINSNYGDTATITGTCATSVKKVCTEFKGNNSGKEPTEISSGPSNACKYSSLKAC*
SEQ ID NO:10
长度:1127(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
CCGCTCCTCTGTGCGTTGTTGAACCTTGCTGTTTGTAGGTATAAAGCCCCCCCGTCATTGCTGAGGACGTGTATGGACAGGATCCCTCAAACAGATTGTCTTCTACATCTCAGCGCATTAAGAACCCCATAAATACCAAGAGTTACAAACATGCGTTCTACAAATCTGCTCGTCCTCCTCGCAACCTCCCTCAGCCTGGTCGCAGCGAGCCCGTTGGATGCGCCGACCAAAGTGATGGGCAAGCGGTTCGCCACCAATGTTCTACCCGCATCATCTGGACATGTTGTCCTCCCCTCAGCAACCACTGTGAGCACTTTTGACGGCGGAATGAAGAAGTACGACCGTGGTACCTCTTGCACTGGTCAGTCCGAAGGGGGGGATGCGGACGCTGTCTTCCTCGTTCAGTCCGGAGGCACCCTCAAGAATGTCATCATTGGTGCGGACCAATCTGAAGGTGTCCACTGTCTCGGCCCGTGCACGATCCAGAACGTGTGGTGGGAGGCCGTCTGCGAGGGTGAGAGCCAGACGCTTCGCGTTGTAAAGGGGCGAAATGCTGACCTCAAGACCCAGACGCCTTGACCATCAAACAAACTTCTGGGACCTCCTACGTCGTTGGCGGCGGTGCTTTTGGCGCGTCAGACAAAATTATCCAGCACAACGGAGGCGGTACCGTCTCGATCAAGGACTTCTACGCCCAAGATTTCGGCAAAGTTTACCGCAGCTGCGGCAATTGCGGCACTCAGTACAAACGCACCGTCACCATGTCTGGGATTTGGGCCGTTAATGGTGATCTCCTTGCCGGCGTTAACTCCAATTACGGTGATACCGCGACCATTTCCGGCACTTGTGCAGACAACGTGGACAACATCTGCGCCTGGTACGAAGGAAACGATGATGGCGATGAGCCCACCAAGTTGGGCACTGGCATCAGCTCTTACTGTGTCTATACCGCCAATGGTGTCGATGACTGCCCTTGAGTTGAACATTGGCTTCTATTTGCCACGACACTATGATCGTGTTGCGGCTCTATCGCTGTTGTGTCCGGTTGGTGAGGGCACCCGTACATATGTGGAATGGAGGTCACGTGGTGGATAGCATGTACATATTCTTGCCTGTTATGCCTACAC
SEQ I D NO:11
长度:771
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(771)
SEQ I D NO:12
长度:256
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MRSTNLLVLLATSLSLVAASPLDAPTKVMGKRFATNVLPASSGHVVLPSATTVSTFDGGMKKYDRGTSCTGQSEGGDADAVFLVQSGGTLKNVIIGADQSEGVHCLGPCTIQNVWWEAVCEDALTIKQTSGTSYVVGGGAFGASDKIIQHNGGGTVSIKDFYAQDFGKVYRSCGNCGTQYKRTVTMSGIWAVNGDLLAGVNSNYGDTATI SGTCADNVDNICAWYEGNDDGDEPTKLGTGISSYCVYTANGVDDCP*
SEQ ID NO:13
长度:1164(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
AGTGACATATAAGTCCTCTGTTCTGCCATCGGAAAATGCTTCTCATCACCAACATTCTCTTCCTTCTTTCCTCACCACCACTTCCCCTCTTTCAAACAATTACCGGATAGATCTGTGATCATCCCCTACTTTCGTTTAACAACATACAAAATGCAGTCCAAGATCGTTCTCGGCCTTTCTCTCCTCGCCGCCACCGGCATGGCGGCTCCCTCCGAGCCCCTCCGCGTCCGCGCCACCCTCCCCATCCCCTCCTCCAAGGGCTCTGTCACCTACGATGAGGTCAAGTCCATCACCGGCACTTTCGACGGTGGCATGAAGACCTACGGCCGTGGTGTTTCCTGCACTGGCCAGAAGGAGGGTGGCAACAAGGACGCCGTCTTCCAGCTTGAGGACGGTGCTACCCTCAAGAACGTCATCATTGGCGAGGACCAGATCGAGGGTATCCACTGCATGGGCAGCTGCACCCTGGAGAACGTCTGGTGGAGCGCCGTCTGCGAGGGTTTGTCTTCTTCCATCCACTGAAGCACTTCACAGCTAACGTCATCTCAGACGCTCTTACCTTCAAGGGTGACGGTGACGCCAAGGTCATCGGCGGCGGTGCCCAGGGCGCCGACGACAAGGTCCTCCAGCACAACGGTGTCGGCGATGTGACCATCGACGGCTTCACCGTTGTCGATTTCGGCAAGCTGTATCGCTCTTGCGGCAGTAAGTTCCCCCCGGCTTCTGCCCACCTCCATCCCTCATTCACCTGCTCACACACGTGTTCCAGACTGCAAGCAGAACGGCGGCACCCGCAACGTCAACATCTCCAACGTCAAGGCCTACAACGGCAAGGTCCTCACCGGCATCAACTCCAACTACGGCGACGTCGCCACCTTCAAGGACACCTGCGCCTCTTCCGTCAAGGACATCTGCGTCGAGTACAAGGGTACCAACAACAACGACGAGGAGCCCTCCAAGATCGGCTCCGGTCCTTCCGACAACTGCGTCTACTCCGACATCCCCTCTTGCTAGACGGCTCGCCAACGGTCGCTTGGGCTGGCTTTCGCGGATGCCCATTGTGAATAATCCGCTTGTTTCTTGTATGTAATTATTTTAAAGGCAAGAAGACCATTTAAATCAATAAATAGAGACGGGGCTAGACCTCGCTTGTACTACGCACAC
SEQ ID NO:14
长度:750
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(750)
SEQ ID NO:15
长度:249
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MQSKIVLGLSLLAATGMAAPSEPLRVRATLPIPSSKGSVTYDEVKSITGTFDGGMKTYGRGVSCTGQKEGGNKDAVFQLEDGATLKNVIIGEDQIEGIHCMGSCTLENVWWSAVCEDALTFKGDGDAKVIGGGAQGADDKVLQHNGVGDVTIDGFTVVDFGKLYRSCGNCKQNGGTRNVNISNVKAYNGKVLTGINSNYGDVATFKDTCASSVKDICVEYKGTNNNDEEPSKIGSGPSDNCVYSDIPSC*
SEQ ID NO:16
长度:1238(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
CTATAAAGATGGAGACCAGCCAGCTTCTAGAGGCTTTTCCCTCCAGGCAAGCATCCTCTCTCCGGCCATCACTTTCATTCTTTCGCATTCTTCCACTCTTTTGTCCAACTCCGACCCGAACAGATCTGTGATCGTTCACTACACTACACAATGTTGACCAAGACTCTTCTTCCCCTCCTCGCCATCTCTGGCGCCGTCTCTGCCGTCAAGACCAAGACCTTCGGCAAGAACCTCGTCCGCCGTGCGGACTTCCCTATCCCTGAATCCCAGGGTTCCGTCACCTTTGACGCCGCCGAGGAGGTCGATGGCGAGTACGACGGTGGCTACAAGACGTACGGCCGTGGTGTTTCTTGCACTGGCCAGGAGGAGGGTGGCGACTCTGACGCCGTCTTCATCCTGAAGGACGGTGCTTCCCTCAAGAACGCCATCATCGGCTCTGACCAGATTGAGGGTGTCCACTGCGAGGGCTCCTGCACTCTTGAGAACGTTTGGTGGGAGGCCGTCTGCGAGGACGCTCTGTCCTTCAAGGGTGACGGTGATGCCACCGTCACTGGCGGTGGTGCAACTGGTGCTGAGGACAAAGTCCTCCAGCAAAACGGTATTGGCTCCATCACCGTCGATGGCTTCACCGTTGTGGACTTCGGCAAGCTGTACCGCTCTTGCGGTAACTGCGACGAGATGGGCCAGCGCACTGTACGTCAATGCTATCGCTCATTCTGTAGGGCAGAGAGTGCTGACATGGCTGTGCGACTTAGATCACCCTCAAGAACGTCAAGGCCTACTCCGGCAAGAAGCTTGTCGGCATCAACTCCAACTACGGTGACAGTGCGTCATGTTCCTTTAGGCTTTCAACCCTTGAGCCATGTGCTAATAGCATCCTCAGCTGCCACCATCACCGACACTTGCGCGACCGACGTCTCTGACATTTGCACGGAGTACGTAGTCACTCGGACGATGGGCCTCAGGAACGAAGACACTAACATAATTATCTTTACAGGTACGAAGGAAACGATACCGGAGACGAACCTGAAGAGATCAGCTCCGGCCCCTCTGATGCCTGCATTTACAGCGACGTTCCGGAGTGCTAGACGCACAGCTCGAACATGCCGCCTCAAAGCAAGCATTCTGATGGAGGGCCAGGGGGTGGGAAGGGATTTAGAGCCTCCGAAAAGGTGGAAGTGGGTTTAGGACTTCGTTGTATAATATAAACTTGTTTCCGAAAATAAGAACCATCCTGC
SEQ ID NO:17
长度:756
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(756)
SEQ ID NO:18
长度:251
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MLTKTLLPLLAISGAVSAVKTKTFGKNLVRRADFPIPESQGSVTFDAAEEVDGEYDGGYKTYGRGVSCTGQEEGGDSDAVFILKDGASLKNAIIGSDQIEGVHCEGSCTLENVWWEAVCEDALSFKGDGDATVTGGGATGAEDKVLQQNGIGSITVDGFTVVDFGKLYRSCGNCDEMGQRTITLKNVKAYSGKKLVGINSNYGDTATITDTCATDVSDICTEYEGNDTGDEPEEISSGPSDACIYSDVPEC*
SEQ ID NO:19
长度:1245(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
GGTTCACCTCATCAACTCGCTTCTTCATTCGTTCCTTGCTGTGCAAGACACCATCCAGACGGACATTCCATTACAACGGTCTTTGATAGCCAATCCAACTTTGTCTACTCCCTGCCTCTCCATCCTACCCTACCAATAAGCCCATCCAAAATGCAGTACAGCATCCGCTCGCTCGCCTTCGGCCTCGCCGCCCTGGCCGTCTCCACCGACGCTTTCATGGTTCCCCGTGACCCTAGCAAGGGCTGGGGCTTCCCCAACGCCAACAACGCTCGCGTTGCTGCTGCCGCCGCCTCCACTCCTGTCCAGACCCCCGGCAACACCCCTACCACTCCCGTGGCCACCCCTGGTGTCACTGGCGGCGCCACTGCCGCCGCTGGCTTCCCCGCCTCGTCCGGCACCAGCCAGCTCAGCGCCCCCATGACCGTCACCGGCAGCTTCGACGGTGGCATGAAGGCCTTCGGCCGCGGTGTCTCCTGCACTGGCCAGGCTGAGGGTGGCGACAGCGACGCTGTCTTCATGATCGAGGAGGGCGGTACTCTCTCCAACGTCATCATCGCCGCCGATCAGATCGAGGGTGTCCACTGCTTCGGTTCCTGCACTCTCAAGAACGTCTGGTGGGTCGCCGTCTGCGAGGACGCTTTCACCATCAAGGAGCAGGGCGCCTCTGGCACTACCCACATCATCGGCGGTGGTGCTCAGGGCGCCGAAGACAAGGTTCTCCAGCACAACGGCGGCGGCACTCTCGCTGTCTCTGGCTTCCTCGCCAAGGACTTCGGTAAGCTCTACCGCAGCTGCGGCAACTGCGACGAGATGCCCGAGCGCCACGTTACCATCGACGGCGTTACCGCTGAGTCTGGTGACATCCTGGTCGGCATCAACTCCAACATGGGCGACAGTAAGTAACTCCTGATTTTGCAAGCGATGAGGCAATGCTAACAATGCGCAGCTGCTACCATCACCAACACCTGCGCCACCGGCGTCGAGACCATCTGCCAGGAGTTCAACGGTGTCACGGACGGCAGCGAGCCCGAGGCTGCCGGCAGCGGCCCTAGCACTGCTTGCAAGTACACTGCCGCTGACGCCCAGGCCTGCTAAGCACATCCCTTTCTTGATTGACCAGTAAAAGTTCGACGGCCACACGGTTGGGTAATGCAGGGATTGGCAAAATGTCCGTCCGGCATAATTAGCACTTCTTTGATGTAGATATTGGGCCGGGTGTCCACAATGTATAACTCTGACATGTCA
SEQ ID NO:20
长度:894
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(894)
SEQ ID NO:21
长度:297
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MQYSIRSLAFGLAALAVSTDAFMVPRDPSKGWGFPNANNARVAAAAASTPVQTPGNTPTTPVATPGVTGGATAAAGFPASSGTSQLSAPMTVTGSFDGGMKAFGRGVSCTGQAEGGDSDAVFMIEEGGTLSNVIIAADQIEGVHCFGSCTLKNVWWVAVCEDAFTIKEQGASGTTHIIGGGAQGAEDKVLQHNGGGTLAVSGFLAKDFGKLYRSCGNCDEMPERHVTIDGVTAESGDILVGINSNMGDTATITNTCATGVETICQEFNGVTDGSEPEAAGSGPSTACKYTAADAQAC*
SEQ ID NO:22
长度:1047(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
GAATGGTATAAAGAGCGGTGGGATATCCATCATTGAGCTCATCACCAACCCACAATTACTTTCGTTCTACACTCCTCTCGTTTACACAACGGATCACTGATCTACCACATTCGCTCTTACCAAAGATCCTGTCTACCAACCATCTACAACATGCAGTTCAAGTACGCCGCTCTCGCTGCCGCCCTGGCCGCCGTCGGCTCCACGCAGAGCCTCCCCATCCCCGCCTCCCGCGGAGTTGATCCCAACAAGGGCCAAAGGATCGTCAAGCCCGGCAATCCTTTCGACGGCGGGATGAAGGAGTTTGGCCGTGGTGTCGTCTGCAACGACAAGGCCGACACTGGCGTCAGGAACGCCGTCTTCGTCATCGAGGACGGCGGTGTTCTGCGCAACGCCATCATCGGCGCCGACGCCGTCGAGGGCATCCACTGCGAGGGCAAGTGCACCATCGAGAACGTCTGGTTCCGCGACGTGTGCGAGGACGCCATCACGCTGAAGGGCAACGGCCCTTACACCATCACTGGCGGCGGCGCCCAGAACGCCGGCGACAAGGTCATCCAGCACAACGGCAAGGGCGAGCTGCGCATCTCAAACTACCAGGTCAACAACGTCGGCAAGCTGTTCCGCACCTGCGGCAACTGCAGCAACAACGGCGGCCCGCGCAGCATCGTCGCCACCGGCATCAGGGCCTTCGGCGTCACCAGCGACCTCATCGGCATCAACTCCAACTACGGCGACAAGGCCTCCATCACCGGCTCCTGCGGCAACACCAAGACGGTCTGCCAGGAATATGTCGGCATCGAGAAGGGCGCCAACGGCGGGAAGGACAGCGAGAAGAGGGTCCCGCCGGTCGGCGCTTGCACCGGCCAGGGCGGTCTCGCCAGGCTCCCTTCCTGCTAGACGCCTCGCGGAATCTTGCGCTGAGTATGGGATGGGAGGAATGGATTGACCGCCTCAGTTTGGGATCCGTGCGAACAGTCGGGAACTTCGCAACTGCCTCATCCGTCAAGAGGTGTGGGCCCCTGCCGGACAGGATGAAACGCGTTTATG
SEQ ID NO:23
长度:747
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(747)
SEQ ID NO:24
长度:248
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MQFKYAALAAALAAVGSTQSLPIPASRGVDPNKGQRIVKPGNPFDGGMKEFGRGVVCNDKADTGVRNAVFVIEDGGVLRNAIIGADAVEGIHCEGKCTIENVWFRDVCEDAITLKGNGPYTITGGGAQNAGDKVIQHNGKGELRI SNYQVNNVGKLFRTCGNCSNNGGPRSIVATGIRAFGVTSDLIGINSNYGDKASITGSCGNTKTVCQEYVGIEKGANGGKDSEKRVPPVGACTGQGGLARLPSC*
SEQ ID NO:25
长度:2495(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
GTTTGGTGCGTGGGAACGCATTTAACGGTGGATGAATCGATCCAAGGCTTCCAAGGCAGAGCCTCCGAAACAGTCAATATTCCATCCAAACCAACGCCTATTGGATTCAAGATTTGGGCACTTTGTAACGAGGCTTTTTTGGTTGATTGGATGTTCCATTCAAATGGCGAAGGACCGTGGGATCTTGACGAGTATTACACCGACGAACAGTACGAAATTAACCTCACACAGACGGCTGCAGTGGTGCCCGATTTGGTGGCTCAGTTATGCCCACATGAGCTGCCATTTGACAGCCCAAAATACATCGTTTGGATAGACAATCTGCTTACTTCTGCGCGGCTTATGACAACGCTCCGGAACGAGAATATTGGCGCTGCAGGGACTGTTCGAATGGGCAAGACACAGCGTGAGAAGAATGAAGAGAAGGCAGCTAGCAAAAAGAAGCAAGCCACCAAAGAAGATAACCGTGGTTTACACCAAAGGCTTCGAGATTTGAGGTCAAAAAATGAAGGACAGATCGAATGGGGCACGCAGTATTGCTGTCTATCACAGGACGAGCAGTCAATGCAATTTGGCTGGCAGGATGCAAGAATTGTGCTATTCATGAGCACTGTTCATGACGGTAAACAATGGGTGATTCGACGACGACGGCGGCCCACAAAGACCTCCACCAATTCGAAGATCACTCAGAAGCCATTTGGTGATAACGTGGAACAAGATATGGAGATTCCGAGGTGGGCAGACGAGTACAATCACAACAAGAATGCGGTTGACCGTTTTGACCAATTCAAAGCCGAACGCCAAATCAATCGACTTTGTTATCGAACATGGAAGCCTCTTTGGAACTTCCTCTTCCAATCATCGATCATCAGTGCATATCTGCTCACTTGTAGAGGCTTGGATGACGATGAGAAACCTCCATTCGCGTCCCTGAACGCATTCCGCCAGAGGCTTTGGGAGCAGCTCTTTGAACGCTCAGAACGCGTTGACGGACGCCGTGGACGAGCAGAGCCTCGTTATCGTGAGATTCCACGCGAAGAACATCAATATGAGAGGCTTAAGGTCCAAGGGAACTGCAGTGAATGTATGGCTAACATGCGCAAATCAACGCGTATTCGAAGGCCACTTGCAGAGCGTTCCACCAACATTCGGCCACCAAGGCCAAGGTGGGGCTGTGGGCTATGTAATCTGAATCTTTGTGAAGGCATTTGCTTCAAAAATCACTTGAATCGGGTGATAGGAAGCAGTTGAATTTGATGTGGAAGTTGGGCTCGATTTGGTCGCGAATTCGTCGCGATTTAGATCTAAAACACCAAGATTTGGGCCGTAAATCGAATATATATAAATGCAAATAGACTCATTTGAATTTGACAGCTTATGCGACCTCAAAACACTACGTTTTAGTTGAATTATTGCGATTATTGGGCTGCGAAAAGCCCCTGATGACTTTGGTGTTCTGACCCCTGTCACCACCCCTGTCGCTCTCAAGCTCTCCATAGATTGAGAGCATATCCAGCCTACGAAGGGATACCACTGCCCCCTCCTGGCGGCTTCCGCCCTGGCTGCTCCTGCCGACGACACTTTCGGCTACGAGCTCGTTCGCCGTGCGAACTTCCCTATTCCTGCCTCCAAGGGCACCGTCAAGTACAGCGCTGCCAAGTCCATCTCCGGCACTTTCGATGGTGGCCTGAAGACCCTACAGCCGTGGTGTCAAGTGCATCGGTCAGGCTGAGGGCGGTGACAAAAAAGCCGTCTTCATCCCTGAGGACGGTGCTAGCCTCAAGAGCGCCATCACTGGCACCGAGCAGATCGAGGGCGTCCACTGCAAGGGGCTCCTGCACTATCGAGAACGTCTGGTGGGCTGGTGTCTGCGAGGATGCTCTCTCCCTCAAGGGCAACGGCAACGCCAAGATCATTGGTGGCGGTGCCACTGGTGCCGAAGACAAGGGTAAGCTCTCTTCTGCAAGAGCGTTGCGATCGGATTTCTAACACTCTCTGGTGCAGGTCATCCAGCACCGGTTTTGGATCCGTCTCTATTGACGGCTTCACTGTTGCCGATTTCGGCAAGCTCTACCGCTCTTGCGGAAACTGCAAGAAGCAGGGCAAGAGAACTGTCACCATCAAGAATGTCAAGGCATCATCCGGCAAGCTGCTCGCTGGTATCAACTCCAACTACGGCGACACTGCTACCATCACCGGCACCTGCGCTGCCTCCGTCAAGAAGATCTGCACCGAGTTCATGGGCAACAACAGCGGCAAGGAGCCCAGTGTGGTTTTCAATCTCGATCTTATCAATCTTATCAATCGATCCCTATCAATCGATATCAAGTCCATCATGGAATTGAATTGACGATTGATAAGGATCGACAGCCTCCTGGTTGCCCTGCCAAACGCCACCAAACAAACGCCATAAAACACGCCCGCAGGGAGCCGCAGGACCCGAAATGCATCAAACAGTCCTCTTCTATTGCATTATCAATTATCGGGCATGGATG
SEQ ID NO:26
长度:1707
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(1707)
SEQ ID NO:27
长度:568
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MFHSNGEGPWDLDEYYTDEQYEINLTQTAAVVPDLVAQLCPHELPFDSPKYIVWIDNLLTSARLMTTLRNENIGAAGTVRMGKTQREKNEEKAASKKKQATKEDNRGLHQRLRDLRSKNEGQIEWGTQYCCLSQDEQSMQFGWQDARIVLFMSTVHDGKQWVIRRRRRPTKTSTNSKITQKPFGDNVEQDMEIPRWADEYNHNKNAVDRFDQFKAERQINRLCYRTWKPLWNFLFQSSIISAYLLTCRGLDDDEKPPFASLNAFRQRLWEQLFERSERVDGRRGRAEPRYREIPREEHQYERLKVQGNCSESYEGIPLPPPGGFRPGCSCRRHFRLRARSPCELPYSCLQGHRQVQRCQVHLRHFRWWPEDPTAVVSSASVRLRAVTKKPSSSLRTVLASRAPSLAPSRSRASTARGSCTIENVWWAGVCEDALSLKGNGNAKIIGGGATGAEDKGHPAPVLDPSLLTASLLPISASSTALAETARSRARELSPSRMSRHHPASCSLVSTPTTATLLPSPAPALPPSRRSAPSSWATTAARSPVWFSISILSILSIDPYQSI SSPSWN*
SEQ ID NO:28
长度:1922(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
CAAGATGTGCTTTTGCTCTCCAGGACATTCCTCTCCATCCCTCGTTTCCAATCACTTTCAGTCTTTGCCACTCCTTCGCTGTCCACTGTAGTCCGGAACTACATCAGTAAACCACCTTCTTTTCCAACAGACCCCATCACATCCGCCAAAATGGTCAACATTGCTGCCGTCTGCCGCGCTGCGGCTTTCTTTCTTCCTGTCCTCGCCGCCGCCCAGAGCGGTGTCGTTGGTACCCCTTCCGGTTTCGCCGCCGGCACCACTGGTGGTGGTGACGCTGCCGCCGCCGCTCCCTCCGACGTTGCTGAGCTCATCTCTTGGCTTGAGGATGAGACTCCCCGTGTCATCCTCATCGACAAGGAGTTCAACTTCCTCGGCACGGAGGGCACCAAGAGCGATCAGGGCTGCCGTCCCGACAGCAACAAGTGCCCTGGCAAGGGTGGCCAGGATGCCATCAACCAGGCCAACTGGTGCGACAACGGCAACGCTGGCGAGGGTGTCTCGGCCGTCACCGTCAAGTACGACCAGGCTGCGCTCAAGGGCATCGCTGTCAAGAGCAACAAGTCCATCGTCGGTGTTGGCGACAAGGGTGTCCTCAAGGGCAAGGGCCTCAGCCTGACTGGTGGCGTTGAGAACGTTATCATCCAGAACATCCACATCACCGACCTGAACCCCGAGTACATCTGGGGTGGTGATGCCATCACGCTCGCTGGTTCCGACAAGGTCTGGAGTAAGTACTTCCGAACTGTTTCGATCCCATACGGTTGGCCTTGAAACCCAAATCGGGAAACGCACTATACCCAATATGGCAATTTTCTACGAACATCGAGACACCGCAGCAGAACACGAGTTTCACGCCATTGCTTGTTTCTGTGGCTGTCAATGCTGTCTCGAAGTCCCTGTATGCTGTTTGGCTTGATGCGCTAGTGCGTTTCCTGAGAGAGGTGCCCACCACACCATCATGCCCCAAGCTCCCTTACCCCTTTCCCAGCATCCCACATCATGCTATATCCTTTACTATGCTTTCAACAGTAAAACTAACGCCCGAAACGTCGATCATGTCAAAATTTCTCTCGTCGGTCGCCAGATGATCGTTACCGGCTACGACAAGGCCGGTAGGGTCACGATCTCCAACTCCGAGTTCGACGGCCAGACCGACTGGTCCGCCTCCTGCAACGGCGAACACTACTGGACCGTCCTCGTGTACGGTGCCGACGACCAGATCACCTTCGCAAACAACTACATGCACGACACCTCGGGCCGTTCGCCCAAGATCGGTGGTGCCGACGGCGCTGGCATCACCTTCCACGCGGTCAACAACGTCTTCCAGACCAACAAGGGCCATAACTTCGACATCGGCTCCGGTGCCGAGGTTTTGCTCGAGGGTAACACCTTCAACGAGTGCAACCAGCCCATCACCTCCAAGTCGGCCAACGAGGGCGGCGCCATCTTCAACACCCCCTCCGGCTCCGAGAGCTCCTGCTCCAGCTACCTCAAGCGCGCCTGCCAGGCCAACACTCTCACCAGCTCCGGTGACTTCGGCACTTACAAGGACACCTCGGTTCTCGAGGGCTTCAACGGCGCCACCTCCATCTGGGAGGCCGTCAGCGCTGAGGAGGCTGCTGCGTCCGTCATCGCCAACGCCGGTATTGGCAAGCTCCAGGGCGGTGCTAGCAACTCCACTGCCAAGTTCAGTATGTCTTCTCCCTTCAACCCTGTATCACAGGAGACATGTACTAATAATTCTCTCCTCTGCAGGGCGCTTCCAATCCTAGATTAATAAGCACGATCGACCGAATACTAGCATCAGTACGGTTTTTAGATAAAAAGGGATCTGTCTGGTTTACTGTAGATATTTAGCCTTCCTTTCTTTGGCTTCACATATTTTTAACTTTACAGCCCAAGAGGGCTCAATGCAAATACTT
SEQ ID NO:29
长度:1314
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(1314)
SEQ ID NO:30
长度:437
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MVNIAAVCRAAAFFLPVLAAAQSGVVGTPSGFAAGTTGGGDAAAAAPSDVAELISWLEDETPRVILIDKEFNFLGTEGTKSDQGCRPDSNKCPGKGGQDAINQANWCDNGNAGEGVSAVTVKYDQAALKGIAVKSNKSIVGVGDKGVLKGKGLSLTGGVENVIIQNIHITDLNPEYIWGGDAITLAGSDKVWMRFLREHPTSCYILYYAFNSKTNARNVDHVKISLVGRQMIVTGYDKAGRVTISNSEFDGQTDWSASCNGEHYWTVLVYGADDQITFANNYMHDTSGRSPKIGGADGAGITFHAVNNVFQTNKGHNFDIGSGAEVLLEGNTFNECNQPITSKSANEGGAI FNTPSGSESSCSSYLKRACQANTLTSSGDFGTYKDTSVLEGFNGATSIWEAVSAEEAAASVIANAGIGKLQGGASNSTAKFRRFQS*
SEQ ID NO:31
长度:1326(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
ACCAATCGTCACAGATCCGCTGGACACGATGCAGCGTGCACATATAGATCGGCTCCGCAGCGTTAATGCTGTCCTCCAGCAGCAGCCTCAACTTTCTCTTCACCTTTCTCTTCACCTTTCTCTTCACCACCAGCCCAGCCCACCCTCACCATGAAGTTTCTTTCCACTTTGGCCCTGGCGGCCCTCGCGCACCTGGCGTGCGCCGTCCCCATGGCCGAGAAGCGTGCCCCCGCGGCCACGCCCGTCGGCTACGCCTCGCAGAACGGCGGCGTGACCGGCGGTCAGGGCGGCACCACCACCACCGTCTCCTCGCTGCCCGAGATGACGGCTGCCCTTAAGAAGGGGGACACGGAGAAGAAGGTCGTCTACGTCAAGGGCAAGATCTCCGGCAAGGCGAAGATCTACGTTGGCTCGAACAAGGTGCGGCCTCACCCCTTCACTCCATGACATCCGGGTAGCTAACGCAGCCTGCAGTCCATCCTCGGCGTTGACTCCAGCTCCGGCCTCGAGGGCATCGGACTCCTCGTCCGTGACGCCAAGAACGTCATCATCCGCAACCTGGCCATCTCCAAGGTCGAGGCCGACACGGGCGGCGACGCCATCGCCATCGACGGCTCCACCAACGTCTGGGTCGACCACTGCGACCTGTCCAGCGACCTGGCCGCCGACAAGGACTTCTACGACGGCCTGCTCGACATCTCCCACGGCGCCGACTACGTCACCGTCTCGAACGTCTACTTCCACGACCACCACAAGAACTCGCTCGTCGGCCACTCCGACTCCAACGCCGGCGAGGACACGGGCAAGCTGCACGTCACCTACGCCAACAACTACTGGAGCAACGTCGGCTCGCGCTGCCCGCTCGTGCGCTTCGGCACCGTCCACATCGTCAACAACTACTTCGAGGACGTCTCCGTCTCCGGCATCAACACCCGCATGGGCGCCCAGGTCCTCGTCGAGAACAACGTCTTCAACAACGTCGTGCAGGCCCTCGTCTCGATCGACTCCAAGGAGCTCGGCTACGCCGTCGCGCGAGGCAACGACTGGGGCACCTCCAAGAACGAGGCCCCCGAGGGTACCCTTACCAAGGTGCCTTACACCTACACCGCTGTTGAAGCGAGCGCGGTCAAGGCTGCTGTTGTTGGCAGCGCGGGCAACACCCTCTCTGGCTTGTAAACATTTGACCTCGACGGGTTGCTCGAGAGAAGCCTATCTACATAGCCTGTGTTTACAAGCAATTCTCTGTAGATATTTTTATACAATCTCTAATTGTAAATACGAAATCAAATCCGAATTAGTGGAATGCTTGCCTTAAGCTCTTCGGAG
SEQ ID NO:32
长度:972
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(972)
SEQ ID NO:33
长度:323
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MKFLSTLALAALAHLACAVPMAEKRAPAATPVGYASQNGGVTGGQGGTTTTVSSLPEMTAALKKGDTEKKVVYVKGKISGKAKIYVGSNKSILGVDSSSGLEGIGLLVRDAKNVIIRNLAISKVEADTGGDAIAIDGSTNVWVDHCDLSSDLAADKDFYDGLLDISHGADYVTVSNVYFHDHHKNSLVGHSDSNAGEDTGKLHVTYANNYWSNVGSRCPLVRFGTVHIVNNYFEDVSVSGINTRMGAQVLVENNVFNNVVQALVSIDSKELGYAVARGNDWGTSKNEAPEGTLTKVPYTYTAVEASAVKAAVVGSAGNTLSGL*
SEQ ID NO:34
长度:1320(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
TCTCCAAGTTCATCTTCATCTTCAGTCTTTCTCTATTAAACGCGTTGACTCGCGCCATTCTTTGACAGCCATCAGCCTGCTGAGCACGCTTGACCACATATTCCTTCCCTTGAAAGTTCCCGTTTGCTCAACAACACTTCCACCGCAACCATGAAGGCCACCACCCTCGCTACTTTTGCTCTTTCCGCCGTGAGCGCTCTGGCAGCGCCCACCAAGACCTTCGCCAAGCGTGCCGCCATCACTGACGGCCCCGACGTCGGCTATGCCACCCTGAACGGTGGCACCACTGGCGGTGCTGGCGGTTCCACCACCACCGTCTCCAGCCTGGCCCAGTTCACCGCTGCCGCCGAGGCTGATGGCGCCGCCGTCATTGTCGTCTCCGGCAACATCTCTGGCGCCGCCAAGGTCCGCGTCGGCAGCGACAAGACCATCATCGGCAAGGACTCCAGCGCCGTGCTCGAGGGCGTCGGTCTCTACATCAACAAGCAGAAGAACGTCATCGTCCGCAACCTGTCCATCAAGAATGTGCTTGCGGAGAATGGTGACGCCATCGGCATCCAGGCTTCCCAGAACGTCTGGATCGACCACTGCGACCTGTCCTCGGACCGTGACCACGACAAGGACTACTACGACGGTCTCCTCGACGTGACCCACGCCTCTGACTACATCACCCTGTCCAACAACTACCTCCATGACCACTGGAAGGCCTCGCTCGTCGGCCACTCCGACTCCAACGGCTCTGAGGACAAGGGCCACTTGACCGTCACCTACTACCAGAACCACTTCGAGAACCTGAACTCGCGTGGTCCTTCTTTCCGCTTCGGCACCGGTCACATTGTATGTTGCCCACCAACCTGACACCACAGTAATGATTCTAACGGCAAATGCTAGGTCAACAACCTCTACACCAGCGTCAGCGACGGTATCAACGCTCGCCAGGGCGCCCAGCTCCTTGTTGAGGGCAACGTCTTCACTGGCAGCAAGAAGCCGCTGTACAGCACCGATGCCGGCTACGCCGCCGTCAACGACAACGACTTCGGCGGCGCTGAGAACACTGCTGAGGCTGGCACCCTCACTGCCTCTGACCTCGGCTACAAGTATACCGCTCTGAAGTCTTCCGAGGTCTCTGCCGCCGTCTCCAAGTCGGCTGGCGCCACGCTCACTTTCTAAACGAAGTCGCGACGCTCTCTCGTTTTGGAACTCGCCGCAATGCCCGAGCCAGGGTTCGGATGCATGGAAGGAATGCATTGTGATGGATGAAGAGCAACATACTTTTTTGGGGGGGAAAAAGCACAGGGCGTGCTACTTTTTCATGTACAT
SEQ I D NO:35
长度:966
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(966)
SEQ I D NO:36
长度:321
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MKATTLATFALSAVSALAAPTKTFAKRAAITDGPDVGYATLNGGTTGGAGGSTTTVSSLAQFTAAAEADGAAVIVVSGNISGAAKVRVGSDKTIIGKDSSAVLEGVGLYINKQKNVIVRNLSIKNVLAENGDAIGIQASQNVWIDHCDLSSDRDHDKDYYDGLLDVTHASDYITLSNNYLHDHWKASLVGHSDSNGSEDKGHLTVTYYQNHFENLNSRGPSFRFGTGHIVNNLYTSVSDGINARQGAQLLVEGNVFTGSKKPLYSTDAGYAAVNDNDFGGAENTAEAGTLTASDLGYKYTALKSSEVSAAVSKSAGATLTF*
SEQ ID NO:37
长度:1896(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
CAGCCAATACGGTGGCCTGAAACATACTCATATTCCTATATCCAATTCCACCCAGAAACATATTTACACGGCCCGTCCCTTAGCCCAATTGACCCCGGAAGCGTCTCTCTTTTTCCCTTACGCTCGTTTCTTTTTCTCCCTGTCATGCTGATGGCGTCCTGTCTTCCCCTGGCCCTAGTGGCCTTTTCTTCACTTTCCTATGCTCTTCAGCCCTACAGTGGCCCGGCGCCAGACCTTCCTGATCGTAAGCCATTCGGCTTCGGTGCCGCCGCCACAGGTGGCGGTACCCCCACGCCGAACAATACCTACCTGGTCGACAACATGCCTGATCTGCGGACCGTTCTAAAGATGGAGACTCCCCGCACAGTTTACGTGAAGGGCGAGATCAAAGGCAACGAAATCAACGAGACCACGACCGGCAATTGCCAATTCTACATTGACAGCAGCAACAACTCCAAGTTCAACTTTACCCTCTACATCCAGAGCTACAACGAGACCTACATGGGCCAGGTTAAGGCTGCCTCCGAAGCGGGCCAGCTATTCGACGGACAGAACGCCACCGAGCTCCTCAATCTACTCGGCCGCCAGAACGTGAGCTTCCATGTGCCCGGAAAGGTTTCAAAATAACAGCAACGCTAACCCACCTCGCAGGGCTGGCGCGGCCAAGTGCAAAACGTGCAAAAGTCCTACGAAGCCATTGACGTGGCCAGCAACCTTACGCTTATCGGCTGGGACTCGTCCGCGTACCTGAATGGCGTCAATCTCGGGTTCAACTCGCGCTCCAACATCATCATGCGCAACCTGCGCATTTCGTCGCCGCGTGACTGCTTCCCGTCGCCGGAAACCTACCCCAGCAGCTGGAACGCGCGTTACGACGCCGTGTCCATGGTGTCGACGACGACCGCGTGGCTCGACGGCAACATCTTCGAGGACGGCCCCGTCGCCGTCGCGCCCGACGACTTCGCGGGCGGGTGGAAGGTCGACCGGTACGACGGCTTGTTTGACGCCGAGGACGGCAGCGACGACATCACCTTCTCGCACAACATCGTCACCAACCACCACAAGAGCCTGCTGTGGGGCGGCGGCAACAAGGAGGCGGACCGCGACATCGGCAAGATGAAGTTCACCGTCTTCGGCAACCGCTTCGTCGACAGCTTGTCGCGCAACCCGCTGATGCGCTTCGGCACCTTCTACATCGTCGCCAACGTCTTCGAGAACTACGCCGAGCGCGCGCCGCTGTTCGAGGACGACAGCGTCGCCGCGAGCGCGGCCGCCTCGCGGCTCGTTCGACGCGCGGACAATGCCACCACCTACAGGCCGGACTTCCAGTACAACATGGGCATCTACAACGCCAGCACCGTGTACGTCGCGGCGAATGCGTTTGTCCAGACGGGCACCTATGCGGACGATTCGTCGCGCGTCTTCTCCTTCTCGGACCTTGCGACGCCGGGCCTGCCCGCGACGCTGTGCTCGCCGGCTGATGGCGCGAACGGGACGGCGTCGGCGTCGTCCCTGCCGAAGAGCGTTTTCAATGGCAGGCCTATCGACCTTGCGAAGAATGCCAAGAACACGTGGGCGTATTTCCTGGAGAGCAAGAATGAGGACGGCGAGTTCGCCGAGGGTGGGTTCGTGATTGGATGTGACGGGCTGGAGGAGCAGGAGACGCCGGTTGCGTTTAAGGATGGTAACGAGGTCGATGCATATGTGCGGAAGAATGCAGGGCAGGTAGGGAGGGCGACGCCGTAGGGGTGCAAGTGGATGCCAGGCTGATGGTTGGTGGTGGAATGTTTGTGGAACCGCGAGCGGATAGACTTGGCGGGAAGTGCCTCCTCTTGGCGGAAGGTATGCATGTACAATGGGTCAACGGTAGAGATCTGCGGCTTTTCCGGCGGCGGG
SEQ ID NO:38
长度:1536
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(1536)
SEQ ID NO:39
长度:511
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MASCLPLALVAFSSLSYALQPYSGPAPDLPDRKPFGFGAAATGGGTPTPNNTYLVDNMPDLRTVLKMETPRTVYVKGEIKGNEINETTTGNCQFYIDSSNNSKFNFTLYIQSYNETYMGQVKAASEAGQLFDGQNATELLNLLGRQNGWRGQVQNVQKSYEAIDVASNLTLIGWDSSAYLNGVNLGFNSRSNIIMRNLRISSPRDCFPSPETYPSSWNARYDAVSMVSTTTAWLDGNIFEDGPVAVAPDDFAGGWKVDRYDGLFDAEDGSDDITFSHNIVTNHHKSLLWGGGNKEADRDIGKMKFTVFGNRFVDSLSRNPLMRFGTFYIVANVFENYAERAPLFEDDSVAASAAASRLVRRADNATTYRPDFQYNMGIYNASTVYVAANAFVQTGTYADDSSRVFSFSDLATPGLPATLCSPADGANGTASASSLPKSVFNGRPIDLAKNAKNTWAYFLESKNEDGEFAEGGFVIGCDGLEEQETPVAFKDGNEVDAYVRKNAGQVGRATP*
SEQ ID NO:40
长度:1798(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
CGGGTTTTGGGAATATCTCCGGGCTTCGGTGGACCGTCCTATCCGTCTGAGCATGCCAATATGTTTTCTTGCCTTTCTGTCCGTATATAAAATGCCAGTCAAGAAGAATTCTCGTGTTTCACACCTTTCTTCATCCGATCTCGCCTCAGTATGCGTGCATCAGTCTCAATTACGGTCTCGCTACTGGCATTTGCCCTGAGGGCGTGCGCTGTTGGTGTGGTTGGGAGTCCGGAGGGATTTGGCTCCGGGACAACAGGTGGAGGTAGTGCCACGCCGGTTTATCCTTCGACCACGAGCGAATTGCAGTCCTACTTGGAAGACGATGTTGCCCGAGTTATCGTCCTGAACAAGGAGTATGCAACCAAACAATTGTTTAATAAGCCTAAAACTGACCATGTCCAGGTTCAACTTCAAGGGCACCACCACCACTGCGACGGGCTGCAGACCCACATCCAACACTTGCCCCGGTAATGGTGGCCAAGATGCAATTAATGCCAACGGTTGGTTAGTATCTGCTGGTTGCTCTCATCTGGTTCTTTGTGACTAATGTTCAACGCAGGTGCGGAAGTGCTCCGGCGGTCTCCGTGAAGTACGACACGGCCGCTATTACGCCCATAAATCTCGGCTCTAACAAGTCTCTTATCGGCATTGGCACATCTGGTGTCATCCGCGGAAAGGGTCTCCGTATCGTCAGTAAAACTAATTCTTGCTATCAGTTGACGAAGAAACTTACAGTTGATGAAATCTCTTCAGGCCAACGGAGCTAAAAATGTCATCATCCAAAATATTCATATTACCGATCTCAACCCGCAGTACATCTGGGGTGGAGATGCCATTACCCTGGATGGTGCTGATCTGGTTTGGGTGGACCACGTTAAGGGACGTATACTCCCGAACCCTCGCTCGAGCATTATTCTGACCTTGCCAACTACAGATCTCTCTCATCGGCCGCCAGATGTTTGTCGCGGGCTACGGGGCATCTAACAGAGTAACTATCAGCAACACGGAGTTCGACGGCTCAACCTCCTGGAGCGCAACTTGCGACGGGCATGTACGTGCCGCCTCCCAGCCCACCACCACCTCCTTTCTTTCACTGGAGTAGCTTAGATGCTAATATGCCTTATCTTTCCTTCTAGCACTACTGGACTATTTTGCTTTTGGGCTCAAACGACTTGATCACAATGAAAGGCAACTATATCCACCACACCAGCGGCCGTGGACCCAAGATCGGAGGCAACACCCTGCTCCACGCCGTAAGTTCCGCCCCACAAACACCCTTGCCTCACCAATCGCCTGCTGAAACATGCTATTTCCACAGGTCAATAATGAGTGGTACGCCGTTTCGGGCCACGCCTTCGACCTGGGCGAGTCGGGCGCCATGGCCGTTGCCGAGGGCAACGTTTTCCAGAACGTCGTCACGCCGCTGCTTTCGCCCGTCGAGGGCCGCATCTTCACGGCGCCCAGCACTAGCGCCAACACCGCCTGCGCGACCTACCTTGGCCGCAACTGCGTCGTCAACGCCTTCGGCAGCAGCGGCACCTTCTCCGGAACCGACACCAGCTTCTTCTCCAACTTCAACGGCAAGACGATCGCGAGTGCAGCCGCCGCCGCATACAAGGATTCGACAGCGGGTGTGGGGAAGATTTAAGGGCGGAGCGGGTGGTTTTGCATTTAGGGGCTGTGATATTGCGTTGGATGTTGGAATGAGGTCAGCAAAAGAAAATCTAAAATCAACGATCATGAATGCTGGCTGGAAGGAAATTGTTTGAGAACTACTTGTGCTTTTTTTTtATTACTG
SEQ I D NO:41
长度:1137
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(1137)
SEQ ID NO:42
长度:378
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MRASVSITVSLLAFALRACAVGVVGSPEGFGSGTTGGGSATPVYPSTTSELQSYLEDDVARVIVLNKEFNFKGTTTTATGCRPTSNTCPGNGGQDAINANGWCGSAPAVSVKYDTAAITPINLGSNKSLIGIGTSGVIRGKGLRILMKSLQANGAKNVIIQNIHITDLNPQYIWGGDAITLDGADLVWVDHISLIGRQMFVAGYGASNRVTI SNTEFDGSTSWSATCDGHHYWTILLLGSNDLITMKGNYIHHTSGRGPKIGGNTLLHAVNNEWYAVSGHAFDLGESGAMAVAEGNVFQNVVTPLLSPVEGRIFTAPSTSANTACATYLGRNCVVNAFGSSGTFSGTDTSFFSNFNGKTIASAAAAAYKDSTAGVGKI*
SEQ ID NO:43
长度:1631(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
GGTGGTGGTCTTGCACCTCTTCCGGTCCACTACTCACATTAACCCGTTCAATCGTTCCCACACATTCACTTATATTCCAACTCTCACACATTCGTTCTGTATCACGCAATCAATCTTTTTGTTTTTGTTTTTTGATCTATTTTAGCAAACATGAAGCTCACTCTCTTGTCTATTGTTCTCGCTCTTGCCCACCAGACTCGGGCCACCAGGGTTACGGGCGCTGCCGAAGGCTTCGCCAAAGGCGTCACAGGGGGTGGCTCTGCTGCCCCTGTCACCCCCAAAAATATTGTTGAGCTGACCAAATACCTTGCCGACGCTCAGCCCCGTGTCATCATCTTGGACAAGGAGTAAGTCCGCTATCACGGGAGGGCTTCAACCGCTCTATCTGGGGGATTTTCTCCAGCCGAACGAACGCTGACATCTATCTTCCTCAGATTCAACTTCAAGGGCTCAGAGGGAACCGTCAAGGAGATGGGCTGCCGTCCTCGTACCAAATGCTCCGAGACTGGCGGTGGCCAAGATGCCATCAACCACGCTAGCTGGTGCACAAACGGCAACGCTGGTGCCGGCTCCAAAGCCGTTTCTGTCACCTATGATAGAGCGGGAACCCTCGCCTTAAAGGTAAACTCCAACAAATCCATTGTCGGTGTCGGCAACAAGGGTGTCATCCGCGGCAAGGGTCTCCGTCTCGCCGGCGCTAAGAACGTCATCATCCAAAACATCCACATTACCGAGCTTAACCCTCAGTACATCTGGGGCGGTGACGGCATTCAGATCGACGGCGCCGACATGGTCTGGATCGACAGGTCCAAGATCTCTCTCGTGGGCCGGCAGATGCTTGTCCTTGGCAACGGCGCGTCCGGCAGGGTCTCGGTCACCAACAACGAATTCGACGGCTCTACTAGTATGCTGATCTCCATAGCCCCCTTGATCACCAAACGGCTAATCGCTCTTTCCAGGCTGGTCGGCTACCTGTGACGGTCACCACTACTGGGCCCTCTACTTCACCGGTTCCAACGACATGGTCACGTTCAAGGGTAACTACATCCACCACACTTCTGGCCGGAGCCCCAAGATCGGCGGTACCACGCTCCTCCACGCTGTAAGATCCCCAATGATCCGTGTCTCGTGACTCGCGCTGATTCCACGCCCAGGTCAACAACGTCTGGTATGCCAACTCCGGCCACGCTTTCGAGATCCTCGCGCCCAAGTCGAACGCCCTCATCGAGGGCAACATCTTCCAGAACGTCGTCCGACCCATGAAGGCCAGCACGGGCAAGGTCTTTGCTCCCTCTTCGGTCCAGGCCGTCTGCAATCGCGCTCTTGGCCGCGCTTGCCAGGCCAACTCTTTCGGCTCCTCTGGCCCCTTGACCGGCACCGACAGCAGCTTCCTCGGTCTGTTCAAGGGCAAGAACCCCGCTACTGCTTCCGCCGCCAGCCCCGCCATTTCTGGCCGCGCTGGTGTCGGGAAGATTGCCTAAATGCTGGCTATGTTCTGGGTTGGACGCTTGCTGAGCAAGCTGTCTTGGCTGGTTGGGTGCATGCACTCAGTTGATAGGCACAACCAACAATCTCTGGACGTGTTATCTCACTTGTCTGGCACTGAGTGGGAATGATTTATGACAGTTTTT
SEQ ID NO:44
长度:1137
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(1137)
SEQ ID NO:45
长度:378
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MKLTLLSIVLALAHQTRATRVTGAAEGFAKGVTGGGSAAPVTPKNIVELTKYLADAQPRVIILDKEFNFKGSEGTVKEMGCRPRTKCSETGGGQDAINHASWCTNGNAGAGSKAVSVTYDRAGTLALKVNSNKSIVGVGNKGVIRGKGLRLAGAKNVIIQNIHITELNPQYIWGGDGIQIDGADMVWIDRSKISLVGRQMLVLGNGASGRVSVTNNEFDGSTSWSATCDGHHYWALYFTGSNDMVTFKGNYIHHTSGRSPKIGGTTLLHAVNNVWYANSGHAFEILAPKSNALIEGNIFQNVVRPMKASTGKVFAPSSVQAVCNRALGRACQANSFGSSGPLTGTDSSFLGLFKGKNPATASAASPAISGRAGVGKIA*
SEQ ID NO:46
长度:1573(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
CGGATGCCGTGCAGCTGTCAAAGTCATGATAAAAGTCCCCACTCCCAGGTACATAATGTGATCGGTAGTTCTGCGCTCTCCTTTCCAACGGTTGTCCCTTGAGCTTCCCGTGCCATGGTAGCCTTTTCTTCCCTTACGTCTGGCAATGCCATGGCGTCCCTCCTGTCTCTATCCGTCCTTTCAGCTTTTCTTGCTTCACCGACACTTGCATACAGTCGTGCTGAATGCCAGGCTCCATCTGCCGACCCCCTGGCGGGCTGCGTACCCGGAACGCTGCTCGTCAGTCCAAACAGCACCGTGACGGCTAACAACAGCACCTCCTTTACCTCTGTCCAATCAGCTATCCTTTCCCTCGGCAACACCACCACACCCGCCACCATCCTCATTCTTCCCGGCACCTATGTTGAGCAAGTCAATATCACCCGCCCGGGACCAGTGACGCTCCTCGGGCAGACTTCATCCCCGAACAATTCCTCCACCAACGGCGTTAAGATCCTCTGGCGTCAGGCCACTGGCAACTCGGTCAACACCTTCGACAACGCCTATACCTCTGTCCTCACTGTCGCGCCGACCCTCGAGAGCAGCCTAACAGGCAGCGGGCCCACCGGATACGCCGTCCCCGCCGGCACGCCCTTCGGCAACGAGGACTTCCGCGCATACAACGTCGACTTCGTCAACGACTACGCGCCCTACTCGGCCGGCCCGGCACTCGCCATTAGCATCAGCTACGCCAACGCGGGCTTCTACTTCTGCGGCTTCTACAGCTATCAGGACACCGTAAGTGTCATCTCCACTCGTCCACTACACGCAACAAACAAACATGCATCCGAGAATCCCTTTTCCCCACCAACTAACGCCAAACCGCAAGGTCTACATCGGCAAGCTCGGCAACGCCTACTTCTACGACTCCATCATCGCCGGCCAAACCGACTTCCTCTACGGCTTCGGCACCGCCTGGATCCAGTCATCGCAGCTCTCTCTCCGCTCCTGCGGCGGCGGCATCACCGCCTGGAAGGGCACCAATACGTCCTTCCCCAACGCCTACGGCGTCTACATCCACGACAGCGTCGTCGAGAAGGCCAACGCCTCGCTCTCCATCGCCGGGCTCTGCGCCCTCGGCAGGCCCTGGAATGCGCAGCATCGCTCCATCTTCGCGAACACGTGGCTCGATGACAGCATCAAGCCGAGCGGGTACATCATCTGGGGGAGCACGGATCCGAGGACCAACAATTACACGTTTATGGCGGAGTATGAGGACTTTGGGCCGGGTTGGAATGAGACCGGGAGGAGGGCGGCGAATATTACGAAGGTGTTGACGGAGGCCGAGTATGAGCCGTATGACAGTCTGGAGAAGGTGTTCCAGTATCCGTTCAGTGGCGAGTTCGGGAACGTGGGGTGGATCGATGAGAGTCCGGAGGCTTGAGCCGGTGGGGATAGTGTGGATTGTGGTGGCCAGCGGCGTAGACGAGGCGGATCTGGTAAGAACTGCGTAGCATGAATGAAATTCGTTTGTACATACGTCTTTATATCGAGCAGCGCTTATGCAAGTTAAATGACGCCGTATTTGCATGCG
SEQ I D NO:47
长度:1182
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(1182)
SEQ ID NO:48
长度:393
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MASLLSLSVLSAFLASPTLAYSRAECQAPSADPLAGCVPGTLLVSPNSTVTANNSTSFTSVQSAILSLGNTTTPATILILPGTYVEQVNITRPGPVTLLGQTSSPNNSSTNGVKILWRQATGNSVNTFDNAYTSVLTVAPTLESSLTGSGPTGYAVPAGTPFGNEDFRAYNVDFVNDYAPYSAGPALAISISYANAGFYFCGFYSYQDTVYIGKLGNAYFYDSIIAGQTDFLYGFGTAWIQSSQLSLRSCGGGITAWKGTNTSFPNAYGVYIHDSVVEKANASLSIAGLCALGRPWNAQHRSIFANTWLDDSIKPSGYIIWGSTDPRTNNYTFMAEYEDFGPGWNETGRRAANITKVLTEAEYEPYDSLEKVFQYPFSGEFGNVGWIDESPEA*
SEQ ID NO:49
长度:1330(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
TCAGGCTCGTATGCCTTGTCCTTCATTTGCTTGCACTCTAGGGCTGGCTAAGACCTCCTTACTTGAATAATGTATCTCTCTACGTCCGCCTTTATAGTCTGCCTGGCGGCTCCAAAACCCCTGAGCCTCACAACATTCATTCGCTTAACCATGCATAGTTCTTCCATCCTTTTCAGCCTTTTCGGCTCCGCACTCGCTCTGACATCTCCACCGCCAGGAGCGCTGACTGTTGGAGGCTCTGAGGGAAAATTCTCCACCGTTCAAGCTGCGGTTGACGCTCTCCAGAACACCACTGCTCGGCAATCCATATTCATCTACTCCGGCACTTACGAGGAGCAGGTGTATATCGCCAAACACAATGGCCCCATTTCCATTTATGGACAAGCCTCGGATGACAGCTCATACCACACCAATACTGTCACTCTCTCTTTCGGCCTCAGCCAGGCCTTCAACCTTAGCAACGACCTCACGGCCACCCTCCGCGCTCACTCTCCCGATTTCAACTTGTACAACGTGAATGTGGAGAACACCTACGGCAAAGGGAGCCAGGCCGTCGCTGTCTCGGCCTACGGTACCGAGCAGGCATACTACGGCTGCAAGCTCACGGGCTTCCAAGACACCCTCCTCACCCAGAGAGGCAGGCACTACTTCGTAAACACCTACATTGAAGGTAAGGAGGTCTTTCTCAAGCTGCGGAAAGCGCGGTCTCTGACGGACATGCACAGGCGCCACCGACTTCATTTTCGGCCAGTATTCCGCGGCCTGGTTTGAGAACTGCGACCTGCGCGTCCCCGCGGCCAAGCAGGGATGGGTCACCGCGAGCGGCCGCAACACGACCAACGACGGCTGGTATGTCATCAACGGAGGCAGCGTGCAAGCGGCACCCGGCCAGAACGTAACTGCCGGCGCGTACTTCCTGGGCCGGCCGTGGCGCAGCTTCGCGCGCGCCGTCTTCCAGAACGTCTACTTGAGCGAGGTCATCAACCCTGCGGGCTGGGCCATCTGGTCCACGAGCACGCCCAACACGGGCAACGTCACGTTCGCGGAGTACAACAACACCGGACCTGGTGCTTCCAACGGGACGCGGGCCAGCTTTTCGCAGCAGCTGGCGGAGCCGGTGGACATCACGGAGGTGCTAGGATCGAACTACACACTCTGGATTGATCCCAAGTTCTTGTGAATAGCAAGCGGGTAGAAAGCCGCGGTACGAACGCCTTTGCCGTAATTAGATAATCCCAGGAAGACGGAGAGAATGATTATCTTCTCCTCTAATGCGCCGTGGGACGACGGATCCGTGACTGAATAGTGAGAGCAAAAGTGCGCCTGCATG
SEQ ID NO:50
长度:975
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(975)
SEQ ID NO:51
长度:324
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MHSSSILFSLFGSALALTSPPPGALTVGGSEGKFSTVQAAVDALQNTTARQSIFIYSGTYEEQVYIAKHNGPISIYGQASDDSSYHTNTVTLSFGLSQAFNLSNDLTATLRAHSPDFNLYNVNVENTYGKGSQAVAVSAYGTEQAYYGCKLTGFQDTLLTQRGRHYFVNTYIEGATDFIFGQYSAAWFENCDLRVPAAKQGWVTASGRNTTNDGWYVINGGSVQAAPGQNVTAGAYFLGRPWRSFARAVFQNVYLSEVINPAGWAIWSTSTPNTGNVTFAEYNNTGPGASNGTRASFSQQLAEPVDITEVLGSNYTLWIDPKFL*
SEQ ID NO:52
长度:7706(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
GCTGCTTCTCTGAGCGGCTCCAAGAACGCCTTTTACAACTGCCAATTCATCTCCGCCGGCGATTTAGGAATATCCTCGTCCACCGGTACCACGTTCGTCTACAATTCGTACATCGAAGCGCGTTCTAAGCTCATCTACAATACGCCTAACATGTACATTTACGGCTCAACTCTCACGCCTACGGCGAGCAACGCACTCTTGGTTTATAACAAGGGCGTGTCTTCTGGCACGGTGGTGACCACCAACTCCACCGTTGTCTTCGACTCCTGCACCGTCACTCCGAAGCCGGGCACCACTGTGACCGGTATTTCCCTTGCCGCAGCGAACGGTGTTGGGTCAATTGTGGTCTATAGAAACTCCGTCCTGCCAGGCTTCATTCTCAGCACCGGTATTCACGTTGACGCCAAGACCCAGGCAGCACAGAACTTCTACGGCGAGTTCGGTAACACAGGTGCCGGATCCTACTCTTCCAACTCCGCCGCGAGGGCCTCCTACGTGAAGAGCCTGAGCGTCGATCAGCTTTCTCAATTCTCCGTTGATCAAGTGTTCGGCACCGCAAACACTAACTGGATCGACTCTTCAGTCATCTCCCTCGTCCAGGATTCGGATGCATCTCAAGCGGCAAAGGCGACCACGGCAGGTGTGGTGTCATACACTACTACGTCTTCCTCTTCAAGTACTACAAGCTCTGTACTGTCGAGCAGCTTGGTCACCGCATCGGGCAGCTCCGTGTCCACATCATCAAGCTCGGTGTCGTCTACGTCTTCAACCTCCGCCTCTGCCAGTGACGCGCCTTCGCTTTCCAGCAGTGCTGCTCTCGCTTCATCAGTACCTGGATCTTCCTCCAACACTACAGTGACCACCAGCGGCACAGCAAGCTCAAGCTCTGTCACTGGTTCCTCGTTCGCACTGTCCACTAGCTCGATCTCCTCCAGCGTGAGCACTCCGGGGGACACAGCGAGCTCCACCGCCGCTGCGTCTAATTCGACTTCGAGTTGCGCTCTTCCTTCCTCAGTGCCCACCACTGCTCGCGTCGTGGGTCCGGCTGGGTCCTGCGCCAACTACACCAGCATCGCCGATGCCGTCAAAGACCTTTCTACGGATCAATCTAAGACGGAATATGTGTACATTCTCGCTGGCACCTATACCGAGCAGATCATTTTCAGCCGTGTAGGTCCCACCGTCTTCCGCGGCGAGACATCAAGCGAGCTCGATCAGTCCAGCAACAAAGTGACTATCAAGTCTTCTACTGGTGTGCCCTCCAGTAGCGGGGGATCTTCCAGTACCGCCCCGTTCCAGGCGACTCAGTACTACAGCAAGAGTATCAGTTTCTATAACATCAATTTCGAGAACACCTACGCTGCAGCTACGGGTTACAATGCGGTTGCATTGTCCAGCAAAGCTTTGAAGGCCTATTATTACAACTGCGGGATCACTTCCTCTCAAGGAGCTCTGCTGCTCAACTTCGGCGCCCACTTCTTCTCGGGCTGCAAGATTACCGGTACCACCGACATCGTCTGGGGCCAAGGTGGCGCTTACATCTACAATTCGAAGATCGTTAGCACCGGAACCACGACTGGTCAGTCTCTCTCCGCACAGTCGTACCAGTCACAATACAATCCTTCGCAGTTTGTCTTCGACACTTGCGCTTTCGTGCCGAACGACAGCACCGTGCCGAAGGCGAGCACGTACTTGGGCCGCGACTATACAGCTTCGGCACGTGTTGCGGTGATCAACTCTTACCTGGACGCTCATATTACTCCTGTTGGATGGTTGATTGCGTCCAAGACTACGAACGTGACGTTTGTTGAGGCCAGCAACTCCGGGCCTGGAGCGTCGACCGCATCTAGAGTTTCCCAGATTGTGACCGATACGTCTGCCTACGCCGCCAACAACGTGCTCGGTTCTCTTTCGATCGACACCGCCGCTGTTGCTCCTGTTGCTGCCTTCCCCGACAGCGTCTACGGTAGTCCTCTTTCCCCCAGCTCTTCTACTGTCTTGGCCAACTCAACGACAGCGACTTCCGTGTCTGCTTCGACATCCAGCACTTCTGCTGCTGCAACTGCGGCCAACACCCTCATTGTCTCAACCACGCCTGCCTCTGGCGAATACGGCAACGTCACAGCAGCCATCGCCGCCCTTCCCAACGATAGCAAGGAGTACACCATCTACATCCGCGCCGGCACCTACCAGGAGCAGTTCACCATTGTGCGGAATGGCAAGGTCACACTGCGTGGCGAGACGGCGTTCCCCAACGACTTCTCGCAGAACCAGGTCACCATCCAGTTCTCCTATGGTGTTCTCACCAGCGCTGGCCAGAACGAGTTGACGCCCGTTATCAACGCCAAGAAGAACGATGGCTCCGGCCTCGCGTTGTACAACATCAACTTCATCAACACGTACCCGCAGACGAAGAACACGGCTGCGCTTGCGGCTGACTTCTACGGTACCAATATGGCTGCCTATGGCTGCAAGTTCGTCGGCTACCAGGACACCCTCCTCGCCAACAAGGGCACCCAAGTCTTTTCCAACAGCTACATTGAAGGCTCTATTGACTATATCTGGGGTTTCTCGACGGCCTACTTCCACCAGTGCTACATCGCATCCAACACAGCTGGTGGCTACATTTCTGCCATGAGCCGCGCTTCGGCTTCGGCTACTGGAGGTTATGTCTTTGACAGCTGCTATGTCACCTACACGAGCACCTACGGATCGACCTTTGGCACCAGCTACCTCGGTCGCCCGTACTCGAGCTACAGCATCGCCGTCTACATGAACTCGTTCATTGACAAGCACATTAGCCCCGCCGGTTGGGCTGTGTGGCAAACGAGTAACCCGCAGACGGACAACGTCCTGTTTGGAGAGTTCAACAACACCGGCCCCGGAAGCTGGTCCAGCTCTCGCGCGTCTTTCGCGACGAACTTGACCGAGTCCCAGGCGGATGCTTACAAGCTGTCTACTTGGATCGGCAGCACGTCGTGGCTTGACATGGATGCTTACAACTACGTGCCTTCGTACGATATTTCCGGCGCAGCTGGTGCATCAACCACGACCCCCTCGGCGTCAGCTTCCTCTACCACTGCCACAGCCACTGCCACCTGGGCGCATCCCTCGAGTGGTGCTACCCCACCTATCGGTGCCGTCCTGGTGTCCGTTGGAGGCTCCGTCAACGGGTCATACAGCAATCTTACCGCCGCCCTCGCGTCTCTGCCATCGGATAGCTCGACACAGGTCATCTTCATGTACCCCGGAACCTACAACGAGCAGCCCCCGGCCGTAAACAGGCCCGGCCCCATCCAGATCATCGGTGCTCAAGATGGCAATCCAGGCCAGAGCTACAAGACCAATAAAGTCATTCTGACCCAGTCTCGCGGCTTGTCGGTCTCTCCGTTGCCGACCGGACACTCTGACGCTGAAACCGCAACATTCTCCACTACCAGCAACAAAATTGCCATGTACAACATCGACATCATCAACTCCGATAATCTTGACGGTTCGCTTTCCTCTTACGTGACGCTGGCCGGCTCAATTTATGGCTCGCGCATTGCGTTCTATGGGTGCAGCTTCATTGGCTGGCAGGATACGCTGTTGACTGGAAGCACCAGTGGCTACCAGTACTACGAATCCTGCTACATTGATGGCGCCATCGATTTCATCTGGGGCTACTCTAAGGCTTACTTCAAAGGCTGCACCATCGGCGCCAAAAGGCAAAAGTCGGCCATCACGGCTCACAGCCGTGCTTCCTCCAGCGCAGTCGGAGGCTACATCTTCGACCAGTGCCTGTTCACTGCTGCCTCGTCTGCGACGGTTGACCTTACGCAGTCTGTTTACCTCGGCCGCCCTTACAGCAAGTACGCCCTCGTGGTTGTCAAGAACTCGTACCTGGACAAGACGATCCAGCCTGCTGGTTGGAAGATCTGGTCTGCCACCGACCCGCGTACCGACTACGTTACCTTCGCCGAGTTCAACAACTCCGGACCTGGTAACTGGGAGAACAACGCCGCGGCGCGTACCGCTTTCGGCTACTGCACCCTGTTGACGTCGGACACGTACTCCCTATCTGCCGTCATGGACTCACCCTCTGACTGGATTGACATGACGTACTGGGACTCGATCACCACACCGACAGTGGCCGCTGTTGCTACGGGAAACACCACTACGGCGGTCAACGGTACTTCGGTCTATGATGGCACCACCCCACCTGCCGGCGCATTGATTGTCTCCAAGACGGCCATTGAGGGCGTGACGACGTACGATACCATCCAGAGCGCTCTGAATGCGCTGCCTACTTCGAGCAGCAAGACCGGCACCATCTTCATCTACCCCGGTGTGTACTCGGAGCAGCTTGTGCTGAGCAAGTCTGGTACCACCGTGTTCATCGGCTACTCAAACTCCACCGACGATTACCTGCAGAACCAGGTGACGATCGACTTCAACAAGGGAATCGATACGCAAGCAGATGCTTCCAACTCTGACAGCGCTACTGTGTATGCCACAGGCAACTACTTCCAGGCATACAACATCAACTTCAAGAACTCTTTCGGCACAACCGAGGACTACGCCTCGCTCGGCTTCGGTGTCAAGTCCAGCAAGTACGCATCGCTGTATGGCTGCCAGGTCTGGGGCAATCAGGACTCGCTACTCATCAACGGCTACTTCTTCGCCTTCAACTCGCTGATTGTCGGTAACATCGACATGATCTGGGGCTCCGGCGCGGGCTATTTCCTCAGCTCAACCATCTCACCCAACACCGACGACGTCAGCCTGACCGCCAGCAAGCGCGCGACCAACACTACAGCTGCCGGTTTTGTCTTCGACCAGTGCACCGTTAAGCCCGCCCCCGGTACCGGCCCCTTCACCGAGATCAGCCTCGGACGTCCGTGGAACAACCTTGCCCGTGTCGCGTATATCGAGACGTATCTCGATTCCAGCGTTGAGGCTGCAGGCTGGAGCCAGTGGTCCAAGTCCAATCCACAGACCGAAGGAGTGACTTTTGCCGAGTACGGGAACTATGGACCGGGTGCAAGCACTTCGGGCCGTGCGAAATTTTCCACGCAGCTCTCGGCTGCCGATGCCGCCCAGTTTCAGCTCGCCAACTTCTTCGCCGTCACCTCCTGGATCAACTTCACGCGGATCGATGTCCAACCCTTCGTGGCCAGCGAGGTTGTTGTTCCAACCTCGGCGGTCACTTCGTCTGTCCTTCTCTCTTCCACCCTTAGCACTCCGATCTCGTCTTCAACGCTTATACTGAGCACCCTCTTCCTCACTAAAGTCACTACCGACAAGGAGACTCTCTTCACAACCGTCACTGGCGCTGTTCCGACCCTCACTTCAACGCAGACTATCACGCTGGACATGGGTGCCACCGTTACCCCCGACCCAGTGTACAAGACCAGCACCGTGAAGAGTACGACAACGATCATTGAGACCGTATCGCAGCCCGATGTTACGCAGACGTCTACTGTGGTCGTCACCAGCGATATCGGAACCACAATCACACCGGAGCCGAGCACGATCACCACTGTGCTCAAGCAGACGACTACTGTTTTCGCCACCTCGACCAAGGCGCCCCAGACGATTACTGAGAAGAGTACCATTACTTCGACGAGTTTGGCTACCCGGACGCTCGATCCCATTACGTCAACACTCAGCCTCGGATCTACCGTTTATGTGACCAGCGTTTTCACCCCGAAGGCCGCGCGGGTCACCTCTAGTCTAACCATCACTACGGGCACTGGCGGCACGTCAACTAAGACGACCAAAGCAACCACGACTTACGTCACTGTCACTTCTGTGAAAATGACAACGAAGAAATCCACAACAACCCTCTCCTGTGTGCCCACCGACAGTCTCCAAAGGCGCTCGTACCCCTTAGGTCCCCGCGCCGCCGGTGACAGCGTCACCACATCCACCATTTTCTCCACCCTCCTCACCTACGTCAAGACCTCTACAGCAACCTTAGCCCCCGGCTCGACCGCCACGACCCTTGTGTCGATCACCAAGACCGTCGGCTCCACCACCACCCTCAAGCCCACCACCATCACGGTCTCCACTGTCTCCATCGCCACCAAGTCCTCCACCCTCACCCACCCGGCATCCACCTTCTTCACAACCGTAACCTCGACCAAACTCACCGGCAAAACCACCTCGCTGAAAGCCTCAACACTGACGGTGACATCCACCTCCCTTGCAGCCACCCGCACCTCCGTCACCACCCTCTCCGCTGCGGGCGCCGCTACAACGACTTCTCTCGCCACCGTGACGCGGAAATCGACGATAACGCTCCCCGCGAGCACCGTCGTCAAAACATCTTCGCGGGACGCCACGAGCAGTGTAGTCATCACGGCGGCGGCGAGCACGAGTACGGTGTGGAAGACGGCCACGATCACGCTGGCACCGAGCCAGACAGTGGTGTTGCAGAGCACAGTCGTCAAAGAAACGACGGCAAAGGTAACAAGCACGGTTCTTAGTACGATAACAAAGACGGCGAAAGGGGCGGCGGCGTGTACAGAGGTATAAGTAAAGATTGGAAGAGAAGAAGGAGGGGAATAGAGTTGAAAATAAATAAAGAGAATAAATAGTAGCGGGGGTTTTATATATTTATAATATTTTAAGTAACTAGTTACTTAATTATTAAATTTCCTAAAGGCCGAATTCTACACCTGCTCACTGCTGATGGACGATACGGGCTGTGTTCCACGATCTATAGTCACATGGAAAAGCAGAAGTTGCAAAATTATATTATACTTACACGAAATATTTCCCGGAAAATCAGACACCTTAGTGTATTACAGTTGTGCCAAGGTTCTATCTAAGTTGAAACTCCTTTATCTACTGTGAGAAAGAGACTTGCATAGACTTAGGTATATTTCACGAGAATAACAGCAATCAACATATTTGTAGCAGTAGAGCATTGCTTGCACAGGATAGGTTCAATTGCCTTTGAAGTTTCTAAGTCACTAGAGCTGCCTCGTTCAGTCAGAGTCGTTCTTTCTGGCGTTCAGCGAATGACTGCTGGCATCCAAAATCGAGAATGAAGTGATTCCATATGTGAGGATGCAATGCGACCATTCAATCGAACAGCGCCTCCGCACTCGCAGCCTGAGCGAGTTCCCCTCTCAATCGTGTGGATATAATCCCTTGTCGACTGAATCAAGTAAGGGGCATAAGCCTGAGTAGCTCTCTTGTGTCCAGCCACAACAATGTGCGGGTTCAAAGCCTCGATGCGATCAATAGCATCAAGCCGCTCCCTGCGTTTGGCCGGGGCGTTTGCCTCCCCGAAATGTGGATGACAATCGCCGTAGATGATATCGCCAGAGACAACGAGACGGACGGAAGGGACGTGGGGGAAGCTGGAAAACTCGTTGTCGGTGTGCCCAACTTCAATTCCGTGCCATTTATGGCCGTTCGACGGAGAACTCCCCCGACGCTGGAAGCGCCTTGGGCACTGGCTTGGCAGTATCGAGCTGGCCGGGGAACATGCCAGGCCAGATGTGCTCGCAACTCGTATTGCATACGGGATAATACAACGTGCACACTCTTGGCGTGCAATATAACACTTTGCACACTTGCGTAGCAAAATACACACCTGTTTTACTAAGAAATACGATCTTTTCTTAAATATCTCTACTACAACGCAGTAATATATAAATAGCTAACTTAAATATAGAAATTTAGGGTCTTCTTTAGGATTAGGAGGGTTAGGG
SEQ ID NO:53
长度:5895
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(5895)
SEQ ID NO:54
长度:1964
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MYIYGSTLTPTASNALLVYNKGVSSGTVVTTNSTVVFDSCTVTPKPGTTVTGISLAAANGVGSIVVYRNSVLPGFILSTGIHVDAKTQAAQNFYGEFGNTGAGSYSSNSAARASYVKSLSVDQLSQFSVDQVFGTANTNWIDSSVISLVQDSDASQAAKATTAGVVSYTTTSSSSSTTSSVLSSSLVTASGSSVSTSSSSVSSTSSTSASASDAPSLSSSAALASSVPGSSSNTTVTTSGTASSSSVTGSSFALSTSSISSSVSTPGDTASSTAAASNSTSSCALPSSVPTTARVVGPAGSCANYTSIADAVKDLSTDQSKTEYVYILAGTYTEQIIFSRVGPTVFRGETSSELDQSSNKVTIKSSTGVPSSSGGSSSTAPFQATQYYSKSISFYNINFENTYAAATGYNAVALSSKALKAYYYNCGITSSQGALLLNFGAHFFSGCKITGTTDIVWGQGGAYIYNSKIVSTGTTTGQSLSAQSYQSQYNPSQFVFDTCAFVPNDSTVPKASTYLGRDYTASARVAVINSYLDAHITPVGWLIASKTTNVTFVEASNSGPGASTASRVSQIVTDTSAYAANNVLGSLSIDTAAVAPVAAFPDSVYGSPLSPSSSTVLANSTTATSVSASTSSTSAAATAANTLIVSTTPASGEYGNVTAAIAALPNDSKEYTIYIRAGTYQEQFTIVRNGKVTLRGETAFPNDFSQNQVTIQFSYGVLTSAGQNELTPVINAKKNDGSGLALYNINFINTYPQTKNTAALAADFYGTNMAAYGCKFVGYQDTLLANKGTQVFSNSYIEGSIDYIWGFSTAYFHQCYIASNTAGGYISAMSRASASATGGYVFDSCYVTYTSTYGSTFGTSYLGRPYSSYSIAVYMNSFIDKHISPAGWAVWQTSNPQTDNVLFGEFNNTGPGSWSSSRASFATNLTESQADAYKLSTWIGSTSWLDMDAYNYVPSYDISGAAGASTTTPSASASSTTATATATWAHPSSGATPPIGAVLVSVGGSVNGSYSNLTAALASLPSDSSTQVIFMYPGTYNEQPPAVNRPGPIQIIGAQDGNPGQSYKTNKVILTQSRGLSVSPLPTGHSDAETATFSTTSNKIAMYNIDIINSDNLDGSLSSYVTLAGSIYGSRIAFYGCSFIGWQDTLLTGSTSGYQYYESCYIDGAIDFIWGYSKAYFKGCTIGAKRQKSAITAHSRASSSAVGGYIFDQCLFTAASSATVDLTQSVYLGRPYSKYALVVVKNSYLDKTIQPAGWKIWSATDPRTDYVTFAEFNNSGPGNWENNAAARTAFGYCTLLTSDTYSLSAVMDSPSDWIDMTYWDSITTPTVAAVATGNTTTAVNGTSVYDGTTPPAGALIVSKTAIEGVTTYDTIQSALNALPTSSSKTGTIFIYPGVYSEQLVLSKSGTTVFIGYSNSTDDYLQNQVTIDFNKGIDTQADASNSDSATVYATGNYFQAYNINFKNSFGTTEDYASLGFGVKSSKYASLYGCQVWGNQDSLLINGYFFAFNSLIVGNIDMIWGSGAGYFLSSTI SPNTDDVSLTASKRATNTTAAGFVFDQCTVKPAPGTGPFTEISLGRPWNNLARVAYIETYLDSSVEAAGWSQWSKSNPQTEGVTFAEYGNYGPGASTSGRAKFSTQLSAADAAQFQLANFFAVTSWINFTRIDVQPFVASEVVVPTSAVTSSVLLSSTLSTPISSSTLILSTLFLTKVTTDKETLFTTVTGAVPTLTSTQTITLDMGATVTPDPVYKTSTVKSTTTIIETVSQPDVTQTSTVVVTSDIGTTITPEPSTITTVLKQTTTVFATSTKAPQTITEKSTITSTSLATRTLDPITSTLSLGSTVYVTSVFTPKAARVTSSLTITTGTGGTSTKTTKATTTYVTVTSMISPETTRRTEGTWGKLENSLSVCPTSIPCHLWPFDGELPRRWKRLGHWLGSIELAGEHARPDVLATRIAYGIIQRAHSWRAI*
SEQ ID NO:55
长度:1281(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
CACCGGTTGTTGATCATTTACACCCTCAGCGAGCATTCCCGGCCAGGCGCCTCTTGTTGAACACTGTCCAGTCCTTCACTCCTCTCCTTCCACCCGCTACCCGGTCTTTTTCCTTTTGCCATTCCAATTGCGTGAACCGTCCATCACAGCATGCCTCGCCTCGCCAGCCTCCTCGCCCTTGCAAGCCCAGTGCTTGCCCTGACCTCCCCTCCGTCAGGCGCCCTCACCGTCGGCTCCAGCGGCAAGTACTCGACCATCCAGGACGCCGTCGACGCGCTCAGCACCAGCTCCTCGTCGGCCCAGACCATCTTCATCTACCAGGGCACCTACAAGGAACAAGTCGTGATCCCGAAGCTATCGGGCGCCCTCACCATCTACGGCTACTCGAAGGATGGATCATCGTACAGCGGCAACACCGTGACCATCAGCGCGGGCAAGTCGCAGGCCGACGGCCTCTCCAACGACGGCACCGCCACCCTCGCCGTCCACACGGGCAACATCAAGGTCTACAACATCAACGTCGCCAACACGTACGGCTCCGGCTCGCAGGCCGTCGCGCTGTCGGCCTACGCCAGCGGCAACCACGGCTACTACGGCGTCAAGCTCACGGGCTTCCAAGACACGCTCCTGGCGCAGGAGGGCAAACAAGTCTACGCCAACTCGTACATCGAGGGCGCGACCGATTTCATTTTCGGCCAGAAGGCCGTCGCGTGGTTTGAGAACTGCGACCTGCGCATCGCCTCGGCCTCGCTCGGCTACGTGACGGCCAACGGCCGCGACAGCAGCTCCAACCCATCCTACTACGTCATCAACAACTCGACCGTCGCCGCCGCCGACGGCGCCACCGTCAAGAGCGGCGGCATCTACCTCGGCCGCCCCTGGCGCAACTACGCCCGCGTCGTCTTCCAGGAGACCAGCCTGTCCAACATCATCAACAGCGCCGGCTGGGTCCAATGGGGCAGCAGCGACCCACGCACCGACAATGTCAACTTCGCCGAGTACAAAAACTCGGGCGCCGGCGCCTCTACCAGCGGCCGTGCTAGCTTTTCCAAGCAGTTGAGCAGCCCCGTCAGCATCTCGGAAGTCTTGGGCAGCAACTACGCCGACTGGATCGACACCAGCTACTTCTAAACGCGTGAGGCTTCGCTAATGTCGGTTGGATCGGATGGAGGCGGGATGTAGCATGCAAGGAACCGGCAGGACTGTTTTAACTTTCTAATGTGGATATTtttGTCTCTCGGACAAATATAAAAATAAGCTTTCTGGAGTGACTTTTGATGA
SEQ I D NO:56
长度:981
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(981)
SEQ I D NO:57
长度:326
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MPRLASLLALASPVLALTSPPSGALTVGSSGKYSTIQDAVDALSTSSSSAQTIFIYQGTYKEQVVIPKLSGALTIYGYSKDGSSYSGNTVTISAGKSQADGLSNDGTATLAVHTGNIKVYNINVANTYGSGSQAVALSAYASGNHGYYGVKLTGFQDTLLAQEGKQVYANSYIEGATDFIFGQKAVAWFENCDLRIASASLGYVTANGRDSSSNPSYYVINNSTVAAADGATVKSGGIYLGRPWRNYARVVFQETSLSNIINSAGWVQWGSSDPRTDNVNFAEYKNSGAGASTSGRASFSKQLSSPVSISEVLGSNYADWIDTSYF*
SEQ ID NO:58
长度:1943(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
CTATATTTCCATTTTTGGGAACGTACGCGTACGCCTTCTGTGGGGCCCCTTACTCCCGGAGGATTGCTGCGGGACTTGGAGAATGTATAAAGTACAGCAATCGAGTTGTCTGCGAGCTAGAGCGTTCTCCAGGCAGTGTCTAAACGTTTCATGATGTTGTCTAACGTCATCGTCGGCCTTCTAGCTGCCGCCTATGGAAAGCCTGTGCTGGCAGCGTTTGGGCTCACAGACAATGGCGACAGTTACACCATTGATGCTGGCTCCACCAATCCCCTGGTAATCACTGTCGACAGTTCCAACTGCGACATCACCTCTTTCGTCTACCGGAGCCAGAAATACCAGTATGCCTCGAAAGGATCCCACATTAGCTCAGGCCTTGGCTCGGCTGATGTGACGGCAGAGACTATTGATGGTAAAGCCTGAAGACTGTGATGCAACTTCCCATCCGCTGACCACCCGCAGATGTAATCAAGGTCACTTGCACAACCGACACACTGATCCACTACTATGTCGTCAAATCCGGAGAGAGCAACGTCTACATGGCTACGTACACTTCAGCTGAGCCTTCAGTGGGAGAGCTGCGCTACATCGCACGACTTGATCCTTCGCTGCTTCCATATGAGTACCCCTTCGGCGACGTCTCCACCACCGCCGACAGCACTTCGACAGTGGAAGGTTCTGACGTCTTCATCGTCGACGGAGAGACTCGCAGCAAATTCTACTCCAGCCAGCGCTTCATCGACGACGACGTCCACTGCGTCTACAGCGACGACGTCCACGCGTGCATGCTGATGCCCCAGTACGAGACCTCGTCCGGCGGGCCGTTCCACCGAGACATCAACACCAACAACGCCGGCGACTCGACCAACCTGTACTGGTACATGAACAGCGGACACGTGCAGACCGAGGCCTTCCGGATGGGCCTCCACGGGCCCTACGCCCTCACGTGGTCGCGCTCTGGCGTGCCCAGTCTCAGCGGCCTCGACTTCTCCTTCATGGCGGACCTCGACCTGGAAGGCTACGTCGCCGACAGCGGGCGCGGCACCGTCTCGGGCACAGCATCCGGCGTCTCCAGCGACTATGAGGTCGTGGTGCACTGGTACAACGACGACGCGCAGTACTGGACGTACGCCTCTTCGTCCGGCGCCTTCACGTCGCCCGCCATGAAGCCGGGGACCTACACCATGGCCCTGTACCAGACCGAACTCAAAGTGGCCACGTCCTCGGTGACGGTCAAGGCCGGATCGGCCACCAGCGCCAACATCGCCAGCACCTGGAGCTCCAATACCACGCTCTTCCAGATCGGCGACTGGGACGGGCAGCCGACCGGCTTCCTCAACGCGGCCAGCCAGCTGCGCATGCACCCGTCCGACTCGCGCATGGCCGACTGGGGCCCCGTCACCTACACCGTCGGCTCGTCCTCCGACAGCTCCGTCCCGATGGCGCTGTTCAAGGACGTCAACGACCCGCTGACCATCAGCTTCACGCTGGCGTCTTCGCAGGCCAGCGGCGCGGCGACGCTGCGCGTCGGCACCACGCTGTCGTTCGCGGGCGGGCGGCCGAGCGTCACCGTCAACGACTACAGCGACTCCGCCGCCGCGCCGACCAAGATCGACTCCCGGGGCGTGACGCGCGGCGCGTATCGCGGGTACGGCGAGATCTACGACTTCGAGCTGCCGGACGGGACGCTGTCGACGAGCAATACGATCACCATTTCGGTGATTTCGGGGAGCAGTGGGGCGGATTTCCTGGAGCCGAATTTTGTGAGTTCTCGCATTCCTCTTGGCCACTAGCATGTTTGAGAGGAATGTGACGCTGACGGTGTGACAGATCCTTGATGCTATTGAGCTGTGGAGATAGGGTTGATAGGTCTGCGGACGTGTTGTGGATGGTTTCGCGGGTCTGGGATCTTGATTGGTTGTTGGGATGGTATGCAGCAAAGA
SEQ ID NO:59
长度:1593
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(1593)
SEQ ID NO:60
长度:530
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MMLSNVIVGLLAAAYGKPVLAAFGLTDNGDSYTIDAGSTNPLVITVDSSNCDITSFVYRSQKYQYASKGSHISSGLGSADVTAETIDDVIKVTCTTDTLIHYYVVKSGESNVYMATYTSAEPSVGELRYIARLDPSLLPYEYPFGDVSTTADSTSTVEGSDVFIVDGETRSKFYSSQRFIDDDVHCVYSDDVHACMLMPQYETSSGGPFHRDINTNNAGDSTNLYWYMNSGHVQTEAFRMGLHGPYALTWSRSGVPSLSGLDFSFMADLDLEGYVADSGRGTVSGTASGVSSDYEVVVHWYNDDAQYWTYASSSGAFTSPAMKPGTYTMALYQTELKVATSSVTVKAGSATSANIASTWSSNTTLFQIGDWDGQPTGFLNAASQLRMHPSDSRMADWGPVTYTVGSSSDSSVPMALFKDVNDPLTISFTLASSQASGAATLRVGTTLSFAGGRPSVTVNDYSDSAAAPTKIDSRGVTRGAYRGYGEIYDFELPDGTLSTSNTITISVISGSSGADFLEPNFVSSRIPLGH*
SEQ ID NO:61
长度:2009(包括150bp 5’UTR和150bp 3’UTR)
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
TCGCTGATCGTCTTGGATATGCGCCTGGCAGTGCATTCGCGCCGGGGACTACAAAAGCAGGGGACGCATGCCACAACAGAATTGGCTTTTCTTGTCACTGCACTTCCTGCCGCTCCAAGTCCCCCCCTCGCGTTTGAGGGAACCGCCACAATGGCTCTCTTTGCTCTGTTTCTGACCTTTATCTCTCTTTTCGCACCGTCGGTGCTGGCCGCCTTTGGAGTGACTACATCCTCTTCCAGCTATGTTGTCGATGCCGGCTCATCCAACCCCTTCGTTGTTACCATTTCGCGCAGCAGTTGCGACATTACCTCGATCAAGTACCGTGGAGAGGAATTCCAGTACTCCGGCAAGGGTTCGCACATCTCGTCCGGCCTTGGATCTGCGACCGTAACGTCAGAGATCGTCAGCAGTGAGCGTCTCTTGCAACCCGTCATACGCCCCTCAGGCTAACAATCGACAGGCACTTATGCCAAGATCACCTGCACGGCTGGCAGCTTGACCCATTACATTATTGTCAAGTCCGGAGAGAGCTCTTTGTACATGGGCACTTACTTCACTGAGGAGCCCTCGATTGGTGAAGCCCGTTTCATCGCTCGCTTGGACCCGGCCAAGCTCCCTCTCGAATACCCCTACGGCACTGCCTCCACTACTGCTGGGAGCAGCAGCACCGTCGAGGGATCCGACGTCTTTGTTGTGAATGGCCAGACCCGCAGCAAGTTCTACTCTAGCCAACGTTTCATCGACGACAAGGTGCAGTGCGTGTACCGCGATGATGATGCTGTCCACGCTTGCATGATCTTGCAGCCTCTCTCCTACGAGGGATCCAGCGGCGGTCCCTTCTTCAGGGACATCAACACCAACAACGCCGGTGACTCGACCAACCTGTACTTCTACATGAACTCCAACCATGCTCAGACTGAGAGTTACCGTATGGGCTTCCACGGCCCGTACCAGTTGCAGTTCAGCCGCTCTGGTATTCCCAACAGCTTTGACGCTTCGTTCTTCGCCGACCTCAAGCTCTCCGGCTACGTTGCTGAGTCTGCTCGTGGCTACGTCAAGGGTACTGCTTCTGGAGTTGGTAGCTCTTACCAGAAAGTCCTTCATTGGTACAACAGCAACGCGCAGTACTGGGTCTATGCCTCGTCTAACGGTGCCTTTACTTCTCCTGCCATGAAGCCTGGCACCTACACCCAGGTCCTCTACCAGGACGAACTCAAGGTTGCCACCGACTCGGTCACTGTCTCTGCTGGATCGACGGTCACCAAGAACATTGCATCTACCTTCTCTTTCCCTTCGACCATCTGGACAATTGGCGACTGGGACGGCCAGCCATTCGGCTTCCGCAACGCCGACAAGATCGAGCGCATGCACCCGTCCGACAGCCGCATGAGCAGCTGGGGGCCGTTGACCTACACGGTCGGCTCCAGCGCACTGACTGACGTTCCCATGGCGCTCTTCAAGGGCGTCAACACGCCTTTCACCATCAAGTTCACGCTCTCCTCGTCGCAGACAGGTGCGGCGGTCCTCCGGATCGGCACGACTCTGGCCTTCGCCAGCGGCAGGCCGCAGCCCAAGATCAACAGCTACAGCCCTTCGGCGCCGGCGGCACCGACGAAGATCGATTCGCGCGGCGTCACACGTGGCACTTACCGCGGTTTGGGTGAGATCTACACCTTCGACATTCCCGCGGGCACTCTCGTGAGTGGCTCGAACACGATCACCATCGACTGCATCTCGGGAAGCTCGGGCGACACCTACCTGTCTCCCAACTTTGTAAGTTTCGCTCTGCATACCTCCGCCATGCGCCGTGCTAACGCAAGAAACAGATCCTTGACGCCATTGACCTGTACCTCAAGTGAGCGAGGGTCAGGAGAAGGGTGCTAGCTGAGGTTCGCTTCTGTAAATAAGTTTACGTCCTACATTGAACATACATTTTGGCTTTGATTGCCGGTCTGCATTACTCGTCAATACGAAGCTTCGCGAGCGCGCAGCTCCACCGAATGCGTGGC
SEQ I D NO:62
长度:1605
类型:DNA
生物体:菜豆壳球孢菌
特征名/键:CDS
定位:(1)……(1605)
SEQ ID NO:63
长度:534
类型:PRT
生物体:菜豆壳球孢菌
MALFALFLTFISLFAPSVLAAFGVTTSSSSYVVDAGSSNPFVVTISRSSCDITSIKYRGEEFQYSGKGSHISSGLGSATVTSEIVSSTYAKITCTAGSLTHYIIVKSGESSLYMGTYFTEEPSIGEARFIARLDPAKLPLEYPYGTASTTAGSSSTVEGSDVFVVNGQTRSKFYSSQRFIDDKVQCVYRDDDAVHACMILQPLSYEGSSGGPFFRDINTNNAGDSTNLYFYMNSNHAQTESYRMGFHGPYQLQFSRSGIPNSFDASFFADLKLSGYVAESARGYVKGTASGVGSSYQKVLHWYNSNAQYWVYASSNGAFTSPAMKPGTYTQVLYQDELKVATDSVTVSAGSTVTKNIASTFSFPSTIWTIGDWDGQPFGFRNADKIERMHPSDSRMSSWGPLTYTVGSSALTDVPMALFKGVNTPFTIKFTLSSSQTGAAVLRIGTTLAFASGRPQPKINSYSPSAPAAPTKIDSRGVTRGTYRGLGEIYTFDIPAGTLVSGSNTITIDCISGSSGDTYLSPNFILDAIDLYLK*
通过引用结合
在本文中提到的所有美国专利、美国公开的专利申请和公开的PCT申请都通过引用结合到本文中。
等效物
虽然在本文中已经描述并说明了本发明的数个实施方案,但是本领域的普通技术人员将容易地想到用于起到本文所述的作用和/或获得本文所述的结果和/或一个或多个本文所述的优势的许多其它方式和/或结构,并且认为每个这样的改变和/或改进都在本发明的范围内。本领域的技术人员仅仅使用常规实验就将认识到或能够确定本文所述的本发明的具体实施方案的许多等效物。因此,应理解上述实施方案仅出于举例而提供,并且在随附权利要求书及其等效物的范围内,本发明可以不同于具体描述并要求保护的方式来实施。

Claims (30)

1.一种分离的多核苷酸序列,其来源于真菌菜豆壳球孢菌(M.phaseolina),其编码包含如在SEQ ID No.3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60和63中的每一个和/或其任何混合/组合中列出的氨基酸序列和/或由所述氨基酸序列组成的多肽。
2.一种分离的多核苷酸序列,其来源于所述真菌菜豆壳球孢菌,其如在SEQ ID No.2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59、62、1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58和61中的每一个和/或其任何混合/组合中所列出或这些序列的互补序列。
3.一种分离的多核苷酸序列,其在中等严格性条件下与由以下组成的核酸探针杂交:
i.选自包含SEQ ID No.2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59、62、1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58和61中的每一个和/或其任何混合/组合或这些序列的互补序列和/或由所述序列中的每一个和/或其任何混合/组合或这些序列的互补序列组成的群组的核苷酸序列;
ii.编码由选自包含SEQ ID No.3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60和63和/或其任何混合/组合和/或由所述序列和/或其任何混合/组合组成的群组的氨基酸序列组成的多肽的核苷酸序列;
其中所述中等严格性条件包括在6x氯化钠/柠檬酸钠(SSC)中在约45℃下与过滤结合的DNA杂交,接着在0.2x SSC/0.1%SDS中在约50-约65℃下一次或多次洗涤。
4.如权利要求1、2或3所述的分离的核酸分子,其为基因组DNA。
5.如权利要求1、2或3所述的分离的核酸分子,其为cDNA。
6.如权利要求1、2或3所述的分离的核酸分子,其为RNA。
7.如权利要求1、2或3所述的分离的核酸分子,其为单链的。
8.一种核酸分子,其包含未被在编码异源蛋白或肽的编码序列内的终止密码子间断的权利要求1、2或3的核苷酸序列和/或由所述核苷酸序列组成。
9.一种重组载体,其包含权利要求1、2或3的核酸分子和/或由所述核酸分子组成。
10.一种表达载体/构建体,其包含权利要求1、2或3的核酸分子和/或由所述核酸分子组成,其中所述核苷酸序列与含有控制所述核苷酸序列在宿主细胞中的表达的转录和/或转译调节信号的调节核苷酸序列操作式连接。
11.一种基因工程化宿主细胞,其包含权利要求1、2、3、6或7的核酸分子和/或由所述核酸分子组成。
12.一种制造多肽的方法,其包括以下步骤和/或由以下步骤组成:
i.在适当/有效条件下培养权利要求10的细胞以生成所述多肽,和
ii.分离多肽。
13.一种分离的多肽,其包含选自包含以下序列和/或由以下序列组成的群组的氨基酸序列和/或由所述氨基酸序列组成:SEQ ID No.3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60和63和/或其任何混合/组合。
14.一种分离的多肽,其包含由选自包含以下序列和/或由以下序列组成的群组的核苷酸序列编码的氨基酸序列:SEQ ID No.2、5、8、11、14、17、20、23、26、29、32、35、38、41、44、47、50、53、56、59、62、1、4、7、10、13、16、19、22、25、28、31、34、37、40、43、46、49、52、55、58和61和/或其任何混合/组合。
15.一种分离的多肽,其氨基酸序列包含选自包含以下序列和/或由以下序列组成的群组的氨基酸序列和/或由所述氨基酸序列组成:SEQ ID No.3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60和63和/或其任何混合/组合。
16.如权利要求15所述的分离的多肽,其具有选自包含以下序列和/或由以下序列组成的群组的氨基酸序列的至少6个连续残基:SEQ ID No.3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60和63和/或其任何混合/组合。
17.一种分离的多肽,其氨基酸序列选自包含以下序列和/或由以下序列组成的群组:SEQ ID No.3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60和63和/或其任何混合/组合。
18.如权利要求17所述的分离的多肽,其具有至少一处保守替代。
19.一种分离的多肽,其包含与选自包含以下序列和/或由以下序列组成的群组的氨基酸序列至少60%一致的氨基酸序列:SEQ ID No.3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60和63和/或其任何混合/组合,并且显示出选自包含以下酶和/或由以下酶组成的群组的酶的催化活性:果胶裂解酶、果胶裂解酶C、果胶酯酶和鼠李糖半乳糖醛酸酶和/或其任何混合物/组合。
20.一种嵌合蛋白,其包含经由共价键与第二多肽的氨基酸序列融合的权利要求15的多肽。
21.一种酶组合物,其包含权利要求13、14或17的多肽。
22.如权利要求19所述的酶组合物,其中所述组合物以固体形式。
23.如权利要求19所述的酶组合物,其还包含一个或多个固相,其中所述多肽存在于所述固相上。
24.一种酶组合物,其富含与所述多肽至少60%一致的多肽,所述多肽的氨基酸序列选自包含以下序列和/或由以下序列组成的群组:SEQ ID No.3、6、9、12、15、18、21、24、27、30、33、36、39、42、45、48、51、54、57、60和63和/或其任何混合/组合,并且显示出选自包含以下酶和/或由以下酶组成的群组的酶的催化活性:果胶裂解酶、果胶裂解酶C、果胶酯酶和鼠李糖半乳糖醛酸酶和/或其任何混合物/组合。
25.一种通过改变酶组合物调节果胶裂解酶的制备的方法,其中所述果胶裂解酶来源于:(a)包含SEQ ID No.3、6、9、12、15、18、21、24和27和/或其任何混合/组合的氨基酸序列的多肽,(b)通过选自包含以下序列和/或由以下序列组成的群组的核苷酸序列编码的多肽:SEQ ID No.1、2、4、5、7、8、10、11、13、14、16、17、19、20、22、23、25和26和/或其任何混合/组合,或(c)包含与上述权利要求25(a)的多肽的氨基酸序列至少60%一致的氨基酸序列的多肽,并且显示出果胶裂解酶的催化活性。
26.一种通过改变酶组合物调节果胶裂解酶C的制备的方法,其中所述果胶裂解酶C来源于:(a)包含SEQ ID No.30、33、36、39、42和45和/或其任何混合/组合的氨基酸序列的多肽,(b)通过选自包含以下序列和/或由以下序列组成的群组的核苷酸序列编码的多肽:SEQ ID No.28、29、31、32、34、35、37、38、40、41、43、44和/或其任何混合/组合,或(c)包含与上述权利要求26(a)的多肽的氨基酸序列至少60%一致的氨基酸序列的多肽,并且显示出果胶裂解酶C的催化活性。
27.一种通过改变酶组合物调节果胶酯酶的制备的方法,其中所述果胶酯酶来源于:(a)包含SEQ ID No.48、51、54、57和/或其任何混合/组合的氨基酸序列的多肽,(b)由选自包含以下序列和/或由以下序列组成的群组的核苷酸序列编码的多肽:SEQ ID No.46、47、49、50、52、53、55、56和/或其任何混合/组合,或(c)包含与上述权利要求27(a)的多肽的氨基酸序列至少60%一致的氨基酸序列的多肽,并且显示出果胶酯酶的催化活性。
28.一种通过改变酶组合物调节鼠李糖半乳糖醛酸酶的制备的方法,其中所述鼠李糖半乳糖醛酸酶来源于:(a)包含SEQ ID No.48、51、54、57和/或其任何混合/组合的氨基酸序列的多肽,(b)由选自包含以下序列和/或由以下序列组成的群组的核苷酸序列编码的多肽:SEQ ID No.46、47、49、50、52、53、55、56和/或其任何混合/组合,或(c)包含与(a)的多肽的氨基酸序列至少60%一致的氨基酸序列的多肽,并且显示出鼠李糖半乳糖醛酸酶的催化活性。
29.一种鉴定具有改进的化学和/或物理特性的酶的方法,其包括:(a)诱变处理编码所述酶的核苷酸序列;和/或(b)测定由于所述诱变处理过的核苷酸序列的表达而生成的酶的化学和/或物理特性。
30.如权利要求29所述的方法,其中所述诱变处理步骤包括使用在序列比对中与所述酶的核苷酸序列不完全匹配的另一酶的核苷酸序列的部分。
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