JP2015528311A - 単クローン性細胞のコロニーを選択する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
Claims (15)
- 目的の生成物を分泌する単クローン性細胞のコロニーを選択する方法であって、該方法は、
複数の細胞培養空間を提供する工程であって、各細胞培養空間は、それぞれの評価表面を有する、工程;
各々の該評価表面に、該評価表面上に固定されている第1の結合剤を提供する工程;
該細胞培養空間のうちの少なくともいくらかに、単一の生存細胞がプレーティングされるように、該複数の細胞培養空間に細胞の懸濁物をプレーティングする工程;
該細胞培養空間において増殖培地中で該細胞をインキュベートして、該細胞の複製を引き起こす工程であって、ここで該細胞のうちの少なくともいくつかは、目的の生成物を分泌する、工程;
該細胞培養空間に第2の結合剤を提供する工程であって、該第2の結合剤は、固定されていない、工程;
ここで該第1の結合剤および第2の結合剤の各々は、該目的の生成物に結合し、その結果、該細胞培養空間のうちのいずれか1つにおいて細胞による該目的の生成物の分泌は、該1つの細胞培養空間の対応する評価表面に形成される、該第1の結合剤、該目的の生成物および該第2の結合剤を含む複合体をもたらし;
該細胞培養空間の評価表面での該第2の結合剤の存在に関して、該細胞培養空間のうちの少なくともいくつかの各々を評価する工程;
該細胞培養空間のうちの少なくともいくつかの各々について、該細胞培養空間が、単一の細胞に由来する単一細胞コロニーを含むか否かを決定する工程;ならびに
該評価および該決定を使用して細胞培養空間を選択する工程であって、該選択された細胞培養空間は、該目的の生成物を分泌する単一の単クローン性細胞のコロニーを含む、工程
を包含する、方法。 - 前記評価される少なくともいくつかの細胞培養空間の各々に関して、前記第2の結合剤の存在に関する評価は、光学焦点調節デバイスおよび光検出デバイスを使用し、該光学焦点調節デバイスは、該光検出デバイスによる光の検出のために、該細胞培養空間の該評価表面から該光検出デバイスに光を集め、該集められた光は、該細胞培養空間の該表面に存在する第2の結合剤の量を示す、請求項1に記載の方法。
- 前記評価表面から距離が離れた前記細胞培養空間中の位置からの光は、前記光検出デバイスにおいて前記光学焦点調節デバイスによって焦点へともたらされない、請求項2に記載の方法。
- 発光標識は、前記第2の結合剤と関連づけられており、該発光標識は、前記光学焦点調節デバイスによって集められた該光を放出する、請求項2または請求項3に記載の方法。
- 発光標識は、前記第2の結合剤と関連づけられており、該第2の結合剤の存在に関する前記評価表面の前記評価は、該評価表面において結合した該標識によって放出された光を検出する工程を包含し、ここで該標識の一部分は、該評価表面に結合しておらず、該評価表面から離れた該細胞培養空間に位置しており、そして該評価は、該標識の該一部分によって放出される光に対して感受性が低いか、もしくは完全に感受性がない、請求項1に記載の方法。
- 前記発光標識は蛍光を放出し、前記方法は、該発光標識を励起光で励起する工程を包含する。請求項4または請求項5に記載の方法。
- 前記決定が行われる前記少なくともいくつかの細胞培養空間の各々に関して、該決定は、該細胞培養空間に1つの細胞がプレーティングされたか、および1つの細胞のみがプレーティングされたかを決定する工程を包含し、そしてここで該選択された細胞培養空間に、1つの細胞が、および1つの細胞のみがプレーティングされている、いずれかの先行する請求項に記載の方法。
- 前記決定が行われる前記少なくともいくつかの細胞培養空間の各々に関して、該決定は、前記インキュベーションの間の複数の時点での該細胞培養空間中の細胞の顕微鏡による可視化を含む、いずれかの先行する請求項に記載の方法。
- 前記細胞培養空間は、それぞれ、マルチウェル培養プレート、好ましくは、96ウェルプレートもしくは384ウェルプレートのウェルである、いずれかの先行する請求項に記載の方法。
- 前記細胞培養空間の部分集合を、前記第2の結合剤の存在に関する前記表面の前記評価に基づいて同定する工程を包含し、該部分集合の該細胞培養空間は、該部分集合の一部ではない細胞培養空間よりも大きなレベルの、該評価表面に存在する第2の結合剤を有し、該細胞培養空間が単一細胞に由来する単一細胞コロニーを含むか否かの前記決定が、該部分集合の該細胞培養空間でのみ行われる、いずれかの先行する請求項に記載の方法。
- 各細胞培養空間に関して、経時的にそれぞれの一連の画像を得る工程、および該一連の画像を保存する工程を包含し、該細胞培養空間が単一細胞に由来する単一細胞コロニーを含むか否かの前記決定は、前記部分集団の各細胞培養空間からの該一連の画像を分析する工程を包含する、請求項10に記載の方法。
- 前記細胞培養空間のうちの少なくともいくつかの各々に関して、該細胞培養空間における細胞の増殖速度の指標を得る工程を包含し、該指標は、該細胞培養空間の前記選択に使用される、いずれかの先行する請求項に記載の方法。
- いずれかの先行する請求項に記載の方法を行うための自動化装置であって、該装置は、
光学焦点調節デバイス;
光検出デバイス;
マルチウェルプレートを保持するためのホルダー;
該ホルダーと該光学焦点調節デバイスと該光検出デバイスとの間の相対的移動のための並進機構;
いずれかの先行する請求項に記載の方法を行うために構成されたコントローラー、
を備える、自動化装置。 - マルチウェルプレートが前記ホルダーの中で適所にある場合、前記光学焦点調節デバイスは、前記光検出デバイスにおいて該マルチウェルプレートのウェルの底面からの光を集めることができるとともに、該光検出デバイスにおいて該ウェルにおける他の位置からの光を集めない、請求項13に記載の自動化装置。
- 前記光検出デバイスは、蛍光発光を検出し、前記装置は、蛍光励起光を発生させるための光源および前記ホルダーにおいて適所にあるマルチウェルプレートのウェルへと該励起光を伝えるための手段を含む、請求項14に記載の自動化装置。
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