JP2015524680A - 骨を脱細胞化する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、骨、例えばヒトの骨を脱細胞化する方法に関する。
本願は、2012年6月13日に出願された米国出願第61/659,046号の出願データの利益を主張し、その開示は、参照により本明細書に組み込まれている。
灌流脱細胞化は、血管導管を維持しながら、脱細胞化溶液が臓器、臓器の部分、又は血管新生した組織を通って灌流され、脱細胞化を促進するところの哺乳類臓器、臓器の部分(一部分)、又は血管新生組織を脱細胞化するex vivo法である。得られた脱細胞化臓器、基質、組織骨格又は移植片は、1又は2つ以上の入り口を介して流体又は細胞が導入され、そして多様な経路を通って、臓器、基質、組織又は移植片から出ることができるように、動脈供給、毛細血管床が存在する間質性空間、及び静脈産出物を含んでなる血管系を保持する。
長骨、短骨、扁平骨及び他の骨は、骨が装置(例えば設定圧力、又は骨を通り抜ける脱細胞化溶液を押し進める圧力勾配を介して、骨又はその部分を通り抜ける流体の灌流を促進する取り付け具を有するもの)を接続することができる次元を有する限り、本発明の方法において使用され得る。1又は2つ以上の装置が取り付けられた1又は2つ以上の外因的に導入された開口部を伴う天然の骨又はその部分は、それを通り抜ける灌流の間の圧力を維持する「閉鎖」系と見なされてよく、例えば開口部(単数・複数)は、定義された圧力が>0mL/分の流量で維持され得るように密閉される。例えば脱細胞化のための骨又はその部分は、少なくとも12cm3以上の大きさであり得る。
本発明は、哺乳類の骨又はその部分を脱細胞するための方法及び材料を提供する。骨又はその部分を脱細胞する最初のステップは、例えば中心腔に穴をあける等の横断面を提供する骨の横切りによる他の接近手段に、開口部を導入することである。その後に開口部は、水性液体が、陽圧又は陰圧下で、少なくとも中心腔に導入され得るように、止水シール及び流体のための導管(例えばカニューレ)を提供する装置に取り付けられ得る。その後に骨又はその部分は、細胞破壊媒体により灌流される。灌流は、多方向式、交互式、逆行式、順行式、その両方又はその組み合わせであってよく、また緻密骨及び海綿骨の多様な条件下で行われ得る。1つの態様では、細胞破壊媒体を含む容器は、本明細書に発表されているもののような装置を介して、骨又はその部分に付けられる。細胞破壊媒体は、例えば灌流もしくはローラーポンプにより、又は不変の静水圧で、もしくは静水圧を変えることにより、不変に、又は流量を変えて送達され得る。両方の例では、灌流液は、少なくとも中心腔中に向き、その後にそれは、出口を提供するハバース管、フォルクマン管、ラメラ、骨単位、又は任意のその組み合わせの中に流れ出す。或いは他の態様では、細胞破壊媒体は、例えば灌流もしくはローラーポンプにより、又は不変の静水圧で、もしくは静水圧を変えることにより、不変に、又は流量を変えて送達され得る。両方の例では、灌流は、中心腔中に出口を提供するハバース管、フォルクマン管、ラメラ、骨単位、又は任意のその組み合わせを介して動脈及び静脈血管を通り抜けて骨中に向かう。
効率的に再細胞化するためには、脱細胞化工程の間、及びその後にECMの形態及び構造が維持される(すなわち実質的に完全なままである)ことが重要である。
さらに本発明は、骨又はその部分を脱細胞化及び/又は再細胞化するための系を提供する。骨、又は骨内部の海綿空間は、骨を通して細胞の脱細胞化媒体を灌流することにより脱細胞化され得る。脱細胞化剤は、海綿空間、髄質、血管、又は中心腔及び/もしくは海綿骨区画を通って灌流され得る。細胞の脱細胞化媒体は、脱細胞化をさらに促進するために高圧下で導入され得る。導管を有する装置は、細胞の脱細胞化媒体を導入するために利用され得る。導管は、細胞の脱細胞化媒体の正確且つ効率的な送達を促進するために、少なくとも一部分で密閉され得る。
本発明は:脱細胞化チャンバー;脱細胞化組成物容器;脱細胞化組成物容器に連結し、また骨又はその部分にかみ合わされ、そして骨又はその部分に脱細胞化組成物を直接的に送達するように構造化された骨又はその部分の入口導管;並びに任意に導管かみ合わせ構造を含んでなる骨又はその部分の出口導管を含んでなる、脱細胞化装置を提供する。一つの態様では、入口導管は、少なくとも中心腔をかみ合わせるために適応される導管構造を含んでなる。脱細胞化チャンバーは、さらに骨又はその部分の位置を決める構造を含んで成り得る。脱細胞化装置は、1)臓器又は組織を通って骨又はその部分に脱細胞化組成物を導入する導管と協調し、またかかる導管を利用するように;そして2)骨又はその部分の脱細胞化組成物の滞留を減らし、また最小化するように構造化される。本発明の脱細胞化装置及び系の一つの観点は、骨又はその部分の脱細胞化及び骨格の創出が、機械的破砕及び浸漬技術の両方の不存在で達成されることである。脱細胞化装置の構成要素は、脱細胞化工程を遂行し、そして完了させるために、天然の骨又はその部分の導管及び/又は血管系、例えば動脈、細動脈、静脈、管等と集合的に適応され、そして協働する。
穿刺を促進するために、ブタ大腿骨の骨幹中、及び1/8インチのナショナルパイプねじ(NPT)の先細の取り付け具の配置に、242インチの穴をあけた。その後に1/8インチのIDチューブを取り付け具につなげ、そして骨を10リットルの0.5%のSDS溶液中に置き、そして600mmHgの一定圧力で、60時間灌流した。溶液を6〜12時間ごとに代えて、流体交換の間に再循環させた。圧力センサー及び自動電圧フィードバックループを利用する制御系を介して圧力を維持し、ポンプ速度を制御した。60時間の間に、流量を1.0〜60mL/分に変えた。脱細胞化は、天然の骨の血管を通り抜ける細胞材料の能動的な出口(抜け出る)より明白になった。
Claims (30)
- 細胞を有する天然の哺乳類の骨の脱細胞化方法であって、
a)細胞を有する天然の哺乳類の骨を供する工程であって、該骨が骨の外面から中心腔の中に伸展する少なくとも1つの外因的に導入された開口を含むように修飾されており、開口に、止水シール及び1又は2以上の導管を供する装置が取り付けられている工程、並びに
b)骨の脱細胞を提供する条件下で、上記装置の少なくとも1つの導管を介して、開口を通して骨の腔中に細胞破壊媒体を灌流する工程、
を含んでなる、方法。 - 前記骨がヒトの骨である、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞破壊媒体が界面活性剤を含んでなる、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記界面活性剤がアニオン性界面活性剤である、請求項3に記載の方法。
- 前記骨が長骨である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記導管が、チューブ、蛇腹、カニューレ又はカテーテルである、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- 前記条件が、約10 mm Hg〜約2000 mm Hgの圧力を含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
- 前記条件が、制御圧を適用することを含む、請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法。
- 細胞を有する哺乳類の骨の一部分の脱細胞化方法であって、
a)細胞を有する哺乳類の骨の一部分を供する工程であって、該部分が天然の末端並びに止水シール及び1又は2以上の導管を供する装置が取り付けられた横端を有する工程、並びに
b)骨の上記部分の脱細胞を提供する条件下で、上記装置の少なくとも1つの導管を介して、少なくとも骨の上記部分の内部中に細胞破壊媒体を灌流する工程、
を含んでなる、方法。 - 前記骨がヒトの骨である、請求項9に記載の方法。
- 前記細胞破壊媒体が界面活性剤を含んでなる、請求項9又は10に記載の方法。
- 前記界面活性剤がアニオン性界面活性剤である、請求項11に記載の方法。
- 前記骨が長骨である、請求項9〜12のいずれか1項に記載の方法。
- 前記装置が、骨の外周へ取り付けられたスリーブを含んでなる、請求項9〜13のいずれか1項に記載の方法。
- 1つの導管が、中心腔に一致するように設定された直径を有する、請求項9〜14のいずれか1項に記載の方法。
- 前記装置が、少なくとも2つの導管を含んでなる、請求項9〜15のいずれか1項に記載の方法。
- 第一の導管が、中心腔に一致するように設定された直径を有し、第二の導管が、皮質骨に流体の流れを提供する、請求項16に記載の方法。
- 前記条件が、圧力勾配を適用することを含む、請求項9〜17のいずれか1項に記載の方法。
- 前記条件が、約10 mm Hg〜約2000 mm Hgの圧力を含む、請求項9〜18のいずれか1項に記載の方法。
- 前記条件が、皮質骨を陰圧へ供することを含む、請求項9〜19のいずれか1項に記載の方法。
- 前記条件が、-10 mm Hg〜約- 2000 Hgの陰圧を含む、請求項20に記載の方法。
- 前記部分が、骨端を含む、請求項9〜21のいずれか1項に記載の方法。
- 前記部分が、骨幹を含む、請求項9〜22のいずれか1項に記載の方法。
- 細胞を有する哺乳類の骨の一部分の脱細胞化方法であって、
a)細胞を有する哺乳類の骨の一部分を供する工程であって、該部分が2つの横端を有し、一方が止水シール及び1又は2以上の導管を供する装置が取り付けられ、他方が止水シールを提供する工程、並びに
b)骨の上記部分の脱細胞を提供する条件下で、上記装置の少なくとも1つの導管を介して、少なくとも骨の上記部分の中心腔中に細胞破壊媒体を灌流する工程、
を含んでなる、方法。 - 前記骨がヒトの骨である、請求項24に記載の方法。
- 前記細胞破壊媒体が界面活性剤を含んでなる、請求項24又は25に記載の方法。
- 前記界面活性剤がアニオン性界面活性剤である、請求項26に記載の方法。
- 前記骨が長骨である、請求項24〜27のいずれか1項に記載の方法。
- 前記装置が、骨の外周へ取り付けられたスリーブを含んでなる、請求項24〜28のいずれか1項に記載の方法。
- 前記部分が、骨幹を含む、請求項24〜29のいずれか1項に記載の方法。
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