JP2015524464A - 神経変性障害の治療で使用するための血漿中の成長因子を含む組成物 - Google Patents

Abstract

本発明の目的は、少なくとも１種の血中化合物から得られ、及び成長因子を有する組成物の鼻腔内適用を用いる、又は前記組成物から得られる治療用物質及び該組成物自体を用いる、神経変性疾患又はその他の適用可能な病状の治療である。組成物が、治療の観点から効果的な方式で、及び同時に患者に対して安全な形態で中枢神経系に到達することが保証される。

Description

本発明は、神経変性疾患又はその他の適用可能な疾患を鼻腔内経路経由で治療するのに使用できる、成長因子を含む少なくとも１種の血中化合物から得られる組成物に関する。本発明は、また、前記組成物又は前記組成物から得られる治療用物質の製造方法、並びに鼻腔内経路経由で適用される該組成物又は治療用物質を用いる前記神経変性疾患又はその他の適用可能な疾患の治療方法に関する。

患者の血液から得られ成長因子を含有する血中化合物から組成物を調製することは、従来技術において極めて広範に知られている。前記組成物は、組織の再生、特定の種類の病気及び疾患における疼痛の軽減、並びにその他の多くの効用をトリガーすること及び促進することに特に関与する、極めて重要な生物学的特性を提供することが示されている。例えば、成長因子に富む血中化合物から得られる組成物の多くの広範な効用の中には、インプラント及びその他の処置における口腔中の歯槽骨の再生、並びに運動器系（筋肉、関節、腱など）における組織の再生がある。

成長因子に富む既知組成物の種類については、例として、その双方とも本発明の出願人に属する、特許出願ＷＯ００４４３１４Ａ１及び特許出願ＷＯ２０１０１３０８５１Ａ２が知られている。これらの特許は、患者自身の血液からの、成長因子に富む自己血血漿ゲルの調製手順について言及している。双方の手順は、若干の共通のステップ、例えば、患者の血液を遠心分離すること、血小板に富む血漿を分離すること、並びに血小板に富む血漿に、血漿の活性化（血漿中に含まれる血小板による成長因子の放出）をもたらすため、及び血漿にそれがゲルに類似した粘稠性を獲得するほどの凝固をもたらすために、塩化カルシウムを添加することを共有する。別の例で、特許ＥＳ２２２１７７０Ｂ２には、成長因子に富む血中化合物から得られる別の組成物の調製手順が記載されており、前記組成物は、高度に有益な生物学的特性、及びこの場合には液体形態を有する。具体的には、該組成物は、成長因子に富む前記血漿の凝固、それに続く収縮を引き起こした後に現れる上清の液相から得られる、成長因子に富む血漿の上清である。この特許には、上清の種々の使用、例えば、眼の疾患及び病気を治療するための点眼薬としてのその使用（その液体の粘稠性により促進される）も記載されている。

本発明の目的は、成長因子を含有する血中化合物から得られる、成長因子に富む血漿ゲル、成長因子に富む血漿上清、又は一般には任意の組成物の適用可能な治療限界を広げることである。

本発明の目的は、少なくとも１種の成長因子を含有する血中化合物から得られる組成物を用いる、又は前記組成物から得られる治療用物質を用いる、神経変性疾患又はその他の適用可能な疾患の治療を提供することである。本発明による組成物又は治療用物質を投与する手段は、それらが治療に関して効果的な方式及び患者に対して安全な方式で中枢神経系に到達するように、鼻腔内経路である。鼻腔内経路は、侵襲性の経路と対照的に、継続的注入又は患者に外傷をもたらすか、患者に副次効果をもたらすその他の投与手段を必要としない、中枢神経系への非侵襲性の接近経路であり；したがって、鼻腔内経路は、組成物又は治療用物質を極めて容易に投与することを、結果として、治療を困難なしに実施することを可能にする。また、いくつかの生理学的障壁、中でも血液脳関門の存在のため、他の非侵襲性経路を通る前記接近は可能でないので、鼻腔内経路は、中枢神経系に接近しなければならない観点から見て、極めて実際に意味のある非侵襲性経路であることに留意されたい。

本発明の詳細は、添付の図面でわかるが、該図面は、本発明の範囲を限定することを意図しない。

鼻腔内経路で投与された成長因子に富む血漿を用いて治療されたＡＰＰ／ＰＳ１遺伝子導入マウスにおける、３ヶ月及び６ヶ月後のβ−アミロイド斑の形成を測定する研究の結果を示す図である。 鼻腔内経路で投与された成長因子に富む血漿を用いて治療されたＡＰＰ／ＰＳ１遺伝子導入マウスにおける、３ヶ月及び６ヶ月後の、Ａβ４０及びＡβ４２のβ−アミロイド量を測定する研究の結果を示す図である。 鼻腔内経路で投与された成長因子に富む血漿を用いて治療されたＡＰＰ／ＰＳ１遺伝子導入マウスにおける、６ヶ月後のアストログリオーシスを測定する研究の結果を示す図である。 鼻腔内経路で投与された成長因子に富む血漿を用いて治療されたＡＰＰ／ＰＳ１遺伝子導入マウスにおける、６ヶ月後の神経新生を測定する研究の結果を示す図である。 鼻腔内経路で投与された成長因子に富む血漿を用いて治療されたＡＰＰ／ＰＳ１遺伝子導入マウスの２種の行動試験の結果を示す図である。

成長因子を含む血中化合物から得られる組成物の使用に由来する有益な治療効果をおそらくは検出できる１つの解剖学的部分が存在し、前記部分は、身体中に見出すことのできるすべての系の中で最も重要なものの１つ：感覚器によって記録された感覚を受容し処理すること及び応答命令を種々の効果器に正確に伝達することを担当している中枢神経系である。具体的には、中枢神経系を構成する細胞は、それらの細胞が２種の高度に特徴的な形態：神経細胞体から成る灰白質、及び情報を運搬することがその機能である神経延長部（樹状突起及び軸索）により主として構成される白質を生じさせるような方式で配置される。

今日見出される最も一般的な疾患のいくつかは、中枢神経系において、特に高齢者において発生する。これらの一般的疾患の中に、神経変性疾患がある。神経変性疾患は、認知障害を伴う種類の疾患、少し例を挙げれば、例えば、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、クロイツフェルト−ヤコブ病、及び多発性硬化症である。これらの認知障害は、ニューロン数の大きな減少、行動変化、及び患者の死につながる一般には緩慢な変性をもたらす、細胞死の進行の増大によって引き起こされる。さらに、これらの疾患の多くで、冒された区域の位置及び大きさ、並びに患者が適正な治療なしで過ごした期間に応じて重要度を異にする病変を引き起こす脳中血流の変化が起こる。

現在、一部のこれらの疾患のための有望な治療は、栄養剤（軸索の成長及びシナプスの形成に影響を与え、中枢神経系の細胞の生き残りを高める物質）、抗アポトーシス剤（細胞死を低下させる物質）、及び／又は血管新生誘発剤（血管の形成を促進する物質）の投与であると考えられている。これらの物質は、これらの疾患を治すことはできないが、疾患の発症、したがってそれらの疾患が引き起こす多くの認知変化を遅延させる治療ツールとして役立つ。

しかし、中枢神経系への物質の投与は、この区域の解剖学的特徴及び物質をそこに送達する上での困難性のため、投与に伴って、かなりのガレノス的及び技術的問題をもたらす。脳及び脊髄から成る中枢神経系は、まとめて髄膜として知られる３種の膜：硬膜（外膜）、クモ膜（中間膜）及び軟膜（内膜）によって、身体の残りの部分及び外部から極度に入念に保護されていることを考慮すべきである。脳及び脊髄は、また、骨、すなわちそれぞれ頭蓋及び脊椎に包まれている。これらの器官の空洞（脳の場合は脳室、脊髄の場合は上衣管）は、脳脊髄液と呼ばれる無色透明の体液で満たされている。脳脊髄液は、広範な種類の機能を遂行し、それは、特定の物質を交換するための手段として、残留生成物を排出するため及び適正なイオン平衡を維持するためのシステムとして、並びに機械的緩衝システムとして作用する。

本発明は、中枢神経系の疾患を現実的に治療するための継続的必要性に応じることを求めて、少なくとも１種の血中成長因子を含有する血中化合物から得られる組成物（後記の治療用薬剤を含む）を用いる、又は少なくとも１種の成長因子を含有する血中化合物から結果として得られる組成物から得られる治療用物質を用いる、前記疾患（又はさらにはその他の適用可能な疾患）の治療を提案する。本発明による組成物又は治療用物質を投与する手段は、それらが治療に関して効果的な方式及び患者に対して安全な方式で中枢神経系に到達するように、鼻腔内経路による投与である。鼻腔内経路は、侵襲性の経路と対照的に、継続的注入又は患者に外傷をもたらすその他の投与手段を必要とせず、及び患者に副次的効果をもたらさないので、中枢神経系への接近を可能にする非侵襲性の経路であり、組成物又は治療用物質を極めて容易に適用すること、及び治療を困難なしに実施することを可能にする。また、いくつかの生理学的障壁の存在のため、他の非侵襲性経路を通る前記接近は可能でないので、鼻腔内経路は、中枢神経系に接近することに関して、極めて重要な非侵襲性経路であることに留意されたい。鼻腔内投与は、また、使用するのに簡単、安全、及び容易であり、患者が、他人の援助を必要としないで薬剤を自己投与することを可能にする。

成長因子を含有する血中化合物の鼻腔内経路による投与は、血中化合物及びその治療用薬剤が中枢神経系に到達し、その生物学的効果を後記で説明する方式で達成することを可能にする。鼻腔に神経を分布する嗅神経及び三叉神経は、鼻腔から中枢神経系への直接的連絡を提供する。三叉神経は、嗅覚領域への枝を備えていないが、むしろ呼吸上皮及び鼻腔前庭に神経を分布する。それは、また中枢神経系との、とりわけ脳の後頭領域、脳幹及び脊髄との連絡を確立し、感覚情報を鼻腔からこれらの区域へ伝達する。これらのコンディショニングファクターは、したがって、鼻への点滴注入に続いて中枢神経系に到達し、それによって血液脳関門を回避する能力のある治療手段を身体中へ導入することを促進する、高度に独特な解剖学的及び生理学的特質を有する鼻粘膜を備える。

細胞内、細胞外及び血管周囲の輸送機構が、嗅覚領域に存在する。中枢神経系に向かう物質によって採用される細胞内通路は、前記物質が嗅覚ニューロンの樹状突起、細胞給水、又は単純な拡散によって集められ、それに続いて嗅神経によって移動することの結果である。細胞外又は傍細胞の輸送機構は、物質が鼻上皮中の細胞間を通過すること、及び神経周囲チャネル（嗅神経の枝を包む周囲の嗅細胞によって作り出される）に急速に浸入することを可能にし、物質が脳脊髄液及び嗅球に到達することを可能にする。脳脊髄液から、物質は、脳中の間質液と混合することができ、器官の至る所へのその分布を可能にし、加えて、物質は、中枢神経系の至る所へのその急速な分布のために、鼻粘膜及び脳組織中の血管周囲空間に侵入することができる。

成長因子を含有する血中化合物とは、成長因子を含有する血漿のゲル、成長因子を含有する血漿の上清、又は一般には、任意の適用可能な調製方法により調製された任意の自己血化合物（ドナー及びレシピエントは同一人物）、若しくは異種血化合物（ドナー及びレシピエントは異なる人物）と理解される。成長因子は、放出された状態又はそうでない状態で存在できる。上清、ゲル又はその他の血中化合物は、新しい調製物でよく、又は（例えば、やはり本出願人に属する特許出願第ＥＳ２３６９９４５Ａ１号により提案されている、熱処理、凍結乾燥及びそれに続く再懸濁を含む技術を用いて）事前に調製され、貯蔵されていてもよい。

血中化合物中に見出される物質（タンパク質、ペプチド、成長因子など）を判定するために、徹底的な研究が、この２０年にわたって実施されている。血漿、とりわけ血小板が、神経成長因子（ＮＧＦ）、血管新生物質、又はＶＥＧＦ、アンジオポエチン、ＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＩＧＦ−Ｉなどのような血管形成を促進する物質などの神経栄養剤、及びＶＥＧＦなどの抗アポトーシス剤を含む、かなりの数の物質を含有することが、現在、知られている。

「組成物」は、前記のような少なくとも１種の血中化合物から得られる任意の組成物であると理解され、該組成物は、造血細胞成分（血小板、赤血球及び白血球）を含有する可能性があるか、可能性がない。

「治療用物質」は、組成物自体、又は治療の目的で前記組成物から得られる物質であると理解される。

本発明の目的は、神経変性疾患の治療において鼻腔内で投与できる薬剤として使用するための、少なくとも１種の成長因子を含有する血中化合物から得られる組成物を提供することである。

例えば、組成物は上清であること、及び成長因子を含有する血中化合物は血漿であることが、好ましくは提案される。この場合、本発明の目的は、神経変性疾患の治療において鼻腔内で投与できる治療用物質として使用するための前記上清である。上清の液体性、その流動性及び浸透圧特性が、上清を、経鼻によるその投与のための理想的な製剤にする。

別の実施形態において、組成物はゲルであり、成長因子を含有する血中化合物は、血漿である。この場合、本発明の目的は、神経変性疾患の治療において鼻腔内で投与できる治療用物質として使用するための前記ゲルである。ゲル型組成物の使用は、数週間持続する成長因子の移動を提供し、患者が組成物を自己投与しなければならない回数を低減する。

また、本発明の目的は、鼻腔内経路による神経変性疾患の治療において使用できる治療用物質の製造方法を提供することであり、ここで、前記方法は、少なくとも１種の成長因子を含有する血中化合物から結果として得られる少なくとも１種の組成物の使用を含む。

好ましくは、組成物は上清であること、及び成長因子を含有する血中化合物は血漿であることが提案される。この場合、本発明の目的は、前記上清そのままである治療用物質に基づく、又は鼻腔内投与に特に適した粘稠性若しくは存在性を上清に付与するために前記上清に適用される処理に基づく、鼻腔内経路による神経変性疾患の治療において使用できる治療用物質の製造方法である。

別の実施形態において、組成物はゲルであり、成長因子を含有する血中化合物は、血漿である。この場合、本発明の目的は、前記ゲルそのままである治療用物質に基づく、又は鼻腔内投与に特に適した粘稠性若しくは存在性をゲルに付与するために前記ゲルに適用される処理に基づく、鼻腔内経路による神経変性疾患の治療において使用できる治療用物質の製造方法である。

本発明の別の目的は、神経変性疾患の治療方法を提供することであり、ここで、前記治療方法は、少なくとも１種の成長因子を含有する血中化合物から結果として得られる組成物から得られる治療用物質の鼻腔内投与を含む。

再び、組成物は上清であること、及び成長因子を含有する血中化合物は血漿であることが、好ましくは提案される。この場合、本発明の目的は、上清自体又は上清に由来する製品でよい治療用物質の鼻腔内経路での適用に基づく、神経変性疾患の治療方法である。

さらに、別の実施形態において、組成物はゲルであり、成長因子を含有する血中化合物は血漿である。この場合、本発明の目的は、ゲル自体又はゲルに由来する製品でよい治療用物質の鼻腔内経路での適用に基づく、神経変性疾患の治療方法を提供することである。

少なくとも１種の成長因子を含有する血中化合物から結果として得られる組成物から得られる治療用物質の鼻腔内経路経由での投与による神経変性疾患の治療有効性を示す実験結果を、以下で説明する。

図１は、β−アミロイド斑の形成を、ＡＰＰ／ＰＳ１遺伝子導入マウスにおいて３ヶ月及び６ヶ月の時点で測定した研究、具体的には、成長因子に富む血漿（ＰＲＧＦ）を用い鼻腔内経路で治療された動物、及び非治療の疾病動物から成る対照群の双方における斑点密度を測定した研究の結果を、図１に示す。これらの実験で使用されたＰＲＧＦは、ＵＳ６５６９２０４に記載の調製方法を用いて得られた。β−アミロイド（Ａβ）は、３６〜４３個のアミノ酸からなり、アミロイド前駆体タンパク質から合成されるペプチドである。そのアルツハイマー病との関連が広く知られているが、それが疾患の原因なのか結果なのか、未だわかっていない。β−アミロイドは、老人斑（アルツハイマー病を有する患者の脳中で見出される沈着物）の主な構成要素である。Ａβの全体的レベルの増加、又はＡβ４０及びＡβ４２の双方の濃度増加は、アルツハイマー病の病原と完全に関連付けられる。図１のデータは、皮質（Ｃｘ）及び海馬（Ｈｉｐ）の領域の双方に対応し、海馬の区域ＣＡ１及び歯状回（ＤＧ）も示す。結果は、鼻腔内経路でＰＲＧＦを受け入れている動物が、場所及び観察時期と無関係に、有意により低い斑点レベルをどの程度示すかを明瞭に示す。

図２は、Ａβ４０及びＡβ４２形態のβ−アミロイド量を、ＰＲＧＦで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１遺伝子導入マウスにおいて３ヶ月月及び６ヶ月の時点で非治療の疾病動物から成る対照群と比較して測定した研究の結果を示す。データは、皮質（Ｃｘ）及び海馬（Ｈｉｐ）の領域の双方に対応する。結果は、鼻腔内経路でＰＲＧＦを受け入れている動物が、場所及び観察時期と無関係に、部分的には神経損傷の一因である双方のタイプのβ−アミロイドの有意により低いレベルをどの程度示すかを明瞭に示す。

図３は、ＰＲＧＦで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１遺伝子導入マウスにおける近隣ニューロンの破壊によるアストロサイトのアストログリオーシス又は異常成長の度合を、非治療の疾病動物から成る対照群と比較して測定した研究の結果を示す。アストロサイトは、重要で最も数の多いグリア細胞（ニューロンの支持体として作用し、及び身体中の情報の脳内処理において活発な役割を演じる、神経系の細胞）である。アストログリオーシスの存在は、脳における毒性の指標である。一般的に、β−アミロイド斑の存在は、アストロサイト又はアストログリオーシスの相対的レベルを高める。データは、皮質（Ｃｘ）、海馬（ｈｉｐ）、及び歯状回（ＤＧ）の領域に対応する。結果は、鼻腔内経路でＰＲＧＦを受け入れている動物が、場所及び観察時期と無関係に、有意により低いレベルの反応性アストロサイトをどの程度示すかを明瞭に示す。

図４は、神経再生（前駆体細胞からの新たなニューロンの分化）を、ＰＲＧＦで治療されたＡＰＰ／ＰＳ１遺伝子導入マウスにおいて６ヶ月の時点で、非治療の疾病動物から成る対照群と比較して測定した研究の結果を示す。データは、海馬（Ｈｉｐ）の領域に対応する。結果は、鼻腔内経路でＰＲＧＦを受け入れている動物が有意により多くの神経新生をどの程度示すかを明瞭に示す。異なる種類の染色（比較写真の第１、第２及び第３対に対応）を使用すると、ＰＲＧＦで治療された群に属する組織像中でより多くの数の新たな細胞の存在を観察できる。具体的には、これらの新たな細胞の細胞表現型を正確に判定する目的で、ＮｅｕＮ染色によって、分裂細胞（すなわち、新たに作り出された細胞）を染色するのみならず、それらが具体的にニューロンであるかどうかを染色することを可能にする、二重免疫組織化学染色（ＢｒｄＵ／ＮｅｕＮ）を実施することにした。

図５は、アルツハイマー病に付随する短期及び中期の記憶並びにその他の症状、例えば無関心を評価する２種の行動試験の結果を示す。試験は、ＡＰＰ／ＰＳ１遺伝子導入マウスの３群：健常動物から成る１つの群、病気（アルツハイマー病）の非治療動物から成る対照群、及び同じ疾病を有するが鼻腔内経路でのＰＲＧＦで治療された動物から成る群に対して実施された。データは、鼻腔内経路でＰＲＧＦを受け入れているＡＰＰ／ＰＳ１遺伝子導入マウスが、非治療疾病マウスと比較して、行動試験において有意な改善を反映する回復値を示すことを示している。

具体的には、第１の試験では、初めに迷路の側路の１つを閉鎖したＴ字迷路中に動物を入れ、残りの側路を一巡りするように動物を放置した。次いで、動物を再び迷路に入れ、動物が前の実験で熟知した側路に到達するのに要した時間を分析した。対照群の動物は、それらが行っていたことを十分には思い出さず、並びに無関心及び不安の双方を示し、これは実験を完了するのにより多くの時間を費やしたことを意味する。対照的に、鼻腔内治療を受けている疾病動物は、対照群（非治療の疾病動物）の動物に比べて有意により短時間で実験を完了した。

さらに、第２の試験又は物体認識試験（ＯＲＴ）は、動物による方形空間内部の明瞭に定めた中央区域の探索行動に基づいた。典型的には、疾病動物は、特に区域が壁で閉鎖されてない場合には、未知であることにおびえるので、新たな区域を探索するのが困難になる。試験中、動物が範囲を定めた中央区域中で費やす時間を記録し、全認識時間と比較した（グラフは、１回目の時間と２回目の時間との比率を示し、比率が大きいほど認知機能が高いことを示す）。同じ３群の動物の行動を、前の試験におけるのと同様に測定した。図からわかるように、ＰＲＧＦで治療された動物は、３ヶ月及び６ヶ月後の双方で、非治療の疾病動物（対照群）と比較して行動において有意に改善した。

Claims (6)

1. 中枢神経系の神経変性疾患又はその他の疾患の治療において鼻腔内で投与できる治療用物質として使用するための、少なくとも１種の成長因子を含有する血中化合物から得られる組成物であって、成長因子を含有する血中化合物が、成長因子に富む血漿である、上記組成物。
2. 上清である、請求項１に記載の組成物。
3. ゲルである、請求項１に記載の組成物。
4. 鼻腔内経路による中枢神経系の神経変性疾患又はその他の疾患の治療において使用するための治療物質の製造方法であって、製造方法が、少なくとも１種の成長因子を含有する血中化合物から得られる少なくとも１種の組成物の使用を含み、成長因子を含有する血中化合物が、成長因子に富む血漿である、上記方法。
5. 組成物が、血漿上清である、請求項４に記載の方法。
6. 組成物が血漿ゲルである、請求項４に記載の方法。