CN104519961A - 用于神经退行性疾病或中枢神经系统的其他疾病的鼻内治疗的含有生长因子的组合物,及其制造方法 - Google Patents

Abstract

本发明的目的是通过鼻内给药获自至少一种含有生长因子的血液组分的组合物，或除了组合物自身以外，通过获自所述组合物的治疗性物质，来治疗神经退行性疾病或其他适用的疾病。确保了组合物以治疗有效的方式以及病人安全的方式到达中枢神经系统。

Description

用于神经退行性疾病或中枢神经系统的其他疾病的鼻内治疗的含有生长因子的组合物,及其制造方法

技术领域

本发明涉及用于通过鼻内途径治疗神经退行性疾病或其他适用疾病的获自至少一种含有生长因子的血液组分(compound)的组合物。本发明还涉及所述组合物或获自所述组合物的治疗性物质的制造方法以及通过鼻内途径施用组合物或治疗性物质来治疗所述神经退行性疾病或其他适用疾病的方法。

现有技术

从获自病人血液的含有生长因子的血液组分制备组合物是现有技术中公知的。所述组合物已经显示出提供非常重要的生物学特性，尤其是引发和促进组织再生，特定类型的微恙和疾病中的疼痛减轻和许多其他用途。例如，在获自血液富含生长因子化合物的组合物的许多广泛用途中，是移植学和其他程序中的口腔牙槽骨的再生，以及运动系统中组织(肌肉、关节、腱等)的再生。

关于已知的富含生长因子的组合物的类型，举例来说，专利申请WO0044314A1和专利申请WO2010130851A2是已知的，这两篇都属于本发明的申请人。这些专利涉及从病人自身的血液制备富含生长因子的自体血浆凝胶的程序。两篇中的程序享有一些共同的步骤，如病人血液的离心、分离富含血小板的血浆以及将氯化钙加入富含血小板的血浆中，以引起血浆的激活(通过血浆中所含的血小板释放生长因子)和引起血浆凝固，直至其获得与凝胶相似的稠度。在另一个实例中，专利ES2221770B2描述了获自富含生长因子的血液组分的另一种组合物的制备程序，所述组合物具有非常有益的生物学特性，并且在这种情况中，是液体形式的。具体地，组合物是富含生长因子的血浆的上清液，获自引起凝固并随后回收所述富含生长因子的血浆后出现的上清液液相。该专利还描述了上清液的各种用途，如作为用于治疗眼病和微恙的滴眼液的用途(通过其液体稠度来促使)。

本发明的目的是拓宽富含生长因子的血浆凝胶、富含生长因子的血浆上清液或概括而言获自含有生长因子的血液组分的任何组合物的可能的应用的治疗边界。

发明简述

本发明的目的是通过获自至少一种含有生长因子的血液组分的组合物或通过获自所述组合物的治疗性物质提供神经退行性疾病或其他适用疾病的治疗。为了以治疗有效的方式以及病人安全的方式到达中枢神经系统，根据本发明的组合物或治疗性物质的给药方式是鼻内途径。鼻内途径是与入侵性途径相反的到达中枢神经系统的非入侵性进入途径，不需要连续注射或引起病人创伤或对病人引起次生效应的其他给药方式；因此，鼻内途径允许非常轻松地给药组合物或治疗性物质，并且作为结果，没有困难地进行所述治疗。还应当注意到从必须进入中枢神经系统的观点看，鼻内途径是非常相关的非入侵性途径，因为由于各种生理屏障的存在，尤其是血脑屏障，所述进入不可能通过其他非入侵性途径。

附图简述

可以在附图中看到本发明的详细内容，所述附图没有打算用来限制本发明的范围：

-图1显示了在通过鼻内途径给药富含生长因子的血浆治疗的APP/PS1转基因小鼠中，在三个月和六个月后测量β-淀粉样斑块形成的研究结果。

-图2显示了在通过鼻内途径给药富含生长因子的血浆治疗的APP/PS1转基因小鼠中，在三个月和六个月后测量AB40和AB42形式的β-淀粉样蛋白含量的研究结果。

-图3显示了在通过鼻内途径给药富含生长因子的血浆治疗的APP/PS1转基因小鼠中，在六个月后测量星形细胞增生(astrogliosis)的研究结果。

-图4显示了在通过鼻内途径给药富含生长因子的血浆治疗的APP/PS1转基因小鼠中，在六个月后测量神经发生的研究结果。

-图5显示了在通过鼻内途径给药富含生长因子的血浆治疗的APP/PS1转基因小鼠的两种行为测试的结果。

发明详述

存在一部分解剖学，其中更可能可以检测到源自使用获自含有生长因子的血液组分的组合物的有益治疗作用，所述部分是在身体中发现的所有系统中的最重要的一种：中枢神经系统，其负责接收和处理感官提示的感觉以及准确地传递针对各种效应物的应答命令。具体地，形成中枢神经系统的细胞以产生两种高度特征性构成的方式排列，所述构成为：灰质，由神经元体组成，以及白质，主要由神经延伸部分(树突和轴突)组成，其功能是传送信息。

目前发现的一些最常见的疾病发生在中枢神经系统中，尤其是在老年人中。在这些常见的疾病中，包括神经退行性疾病。神经退行性疾病是一种涉及认知障碍的疾病，如阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病、Creutzfeldt-Jakob病和多发性硬化，等等。这些认知障碍是由细胞死亡过程增加引起的，所述细胞死亡过程导致极大的神经元数量减少、行为改变和导致病人死亡的整体渐进性恶化。此外，在这些疾病的许多中，发生了脑血流的变化，其导致重要性程度不同的损伤，这取决于受影响区域的位置和大小以及病人没有得到正确治疗的时间段。

在这个时刻，认为对于这些疾病中的一些的有前景治疗是给药营养剂(影响轴突生长和突触形成的物质，并且其增强中枢神经系统的细胞的存活)、抗凋亡剂(减少细胞死亡的物质)和/或新血管生成诱导剂(促进血管形成的物质)。这些物质不能治愈这些疾病，但它们确实起到了作为延迟疾病发展并因此延迟由其引起的许多认识改变的治疗工具的作用。

然而，将物质给药于中枢神经系统带来了显著的盖伦(galenic)和技术问题，这是因为这一区域的解剖学特征以及将物质传送至这一部位的困难。应当记住中枢神经系统，其由大脑和脊髓组成，通过三层膜受到非常充分的保护，以免受身体的剩余部分和外部侵害，所述三层膜为：硬脑膜(外膜)、蛛网膜(中间膜)和软脑膜(内膜)，总称为脑膜。大脑和脊髓也被包裹在骨骼中，分别主要是头盖骨和脊柱。这些器官的内腔(在大脑的情况中，为脑室，脊髓的情况中，为ependimary canal)充满无色和透明的称为脑脊髓液(cephalorachidian fluid)的流体。脑脊髓液执行各种功能：其作为交换特定物质的工具，作为消除残余产物和维持离子平衡的系统以及作为机械气垫系统。

本发明的方法设法应答正在产生的需求，以可行地治疗中枢神经系统的疾病，所述疾病(或甚至其他适用疾病的)治疗是通过获自至少一种含有血液生长因子的血液组分的组合物(其包含以下所述的治疗剂)或通过获自组合物的治疗性物质，所述组合物依次获自至少一种含有生长因子的血液组分。为了以治疗有效的方式以及病人安全的方式到达中枢神经系统，根据本发明的组合物或治疗性物质的给药方式是通过鼻内途径给药。鼻内途径是提供进入中枢神经系统的非入侵性途径，并且允许很轻松地施用组合物或治疗性物质并且没有困难地进行治疗，因为与入侵性途径相反，其不需要连续注射或引起病人创伤的其他给药方式，并且不会对病人引起次生效应。还应当注意到鼻内途径就进入中枢神经系统而言是非常重要的非入侵性途径，因为由于各种生理屏障的存在，所述进入不可能通过其他非入侵性途径完成。鼻内给药也是简单、安全和易于使用的，并且允许病人自己给药药物，而不需要其他人员的帮助。

通过鼻内途径给药含有生长因子的血液组分允许血液组分及其治疗剂到达中枢神经系统并且以下文中解释的方式实现其生物作用。嗅神经和三叉神经，其支配鼻腔，提供了从鼻腔到中枢神经系统的直接连接。三叉神经没有给嗅部提供分支，而是支配鼻腔的呼吸上皮和前庭。其还与中枢神经系统建立了联系，特别是与后脑区、脑干和脊髓，并且将来自鼻腔的信息传递至这些区域。这些条件因素因此给鼻粘液提供了非常独特的解剖学和生理学属性，其有助于在鼻滴注后将能够到达中枢神经系统的治疗手段引入体内并由此避开血脑屏障。

胞内、胞外和血管周围的传递机制可以发生在嗅部。物质采用的朝向中枢神经系统的胞内途径是所述物质被嗅神经元的树突收集、胞饮作用或简单扩散以及随后通过嗅神经传递的结果。胞外或细胞周围的传递机制允许物质在鼻上皮中的细胞之间通过并且快速进入周围神经通道中(由产生嗅神经分支的围绕嗅细胞形成)，允许物质到达脑脊髓液和嗅球。从脑脊髓液，物质可以与大脑中的间质液混合，允许其分布遍及器官；此外，物质可以进入鼻粘液和大脑组织中的血管周围的空间中，使其快速地分布遍及中枢神经系统。

将含有生长因子的血液组分理解为根据任何适用的制备方法制备的含有生长因子的血浆的凝胶、含有生长因子的血浆的上清液或通常任何自体的血液组分(捐献者和接受者是相同的人)或异源血液组分(捐献者和接受者是不同的人)。生长因子可以是释放状态(released state)的或者不是。上清液、凝胶或其他血液组分可以是最近的制备物或可以是预先已经制备并且储存的(例如，通过也属于申请人的专利申请no.ES2369945A1中提出的涉及热处理、冻干和随后重悬浮的技术)。

在过去20多年中已经进行了着眼于测定血液组分中发现的物质(蛋白质、肽、生长因子等)的深入研究。现在已知血浆，并且特别是血小板，含有大量物质，包括神经营养剂，如神经生长因子(NGF)、血管生成物质或促进血管形成的物质，如VEGF、血管生成素(angiopoietin)、PDGF、EGF、IGF-1等，以及抗凋亡剂，如VEGF。

“组合物”理解为获自至少一种血液组分(如以上所述的一种)的任何组合物，组合物能够含有或不含血液细胞组分(血小板、红血球和白血球)。

理解“治疗性物质”是组合物自身或获自所述组合物的用于治疗目的的物质。

本发明的目的是提供获自至少一种含有生长因子的血液组分的组合物，其作为通过鼻内给药的药物在神经退行性疾病治疗中的用途。

例如，优选提出了组合物是上清液并且含有生长因子的血液组分是血浆。在这种情况中，本发明的目的是所述上清液，为其作为通过鼻内给药的治疗性物质在神经退行性疾病治疗中的用途。上清液的液体性质、其流动性和渗透特性使其成为通过鼻途径给药的理想制备物。

在另一个实施方案中，组合物是凝胶并且含有生长因子的血液组分是血浆。在这种情况中，本发明的目的是所述凝胶，为其作为通过鼻内给药的治疗性物质在神经退行性疾病治疗中的用途。凝胶型组合物的使用提供了持续数周的生长因子转移，这减少了病人必须自己给药组合物的次数。

本发明另外的目的是提供了制备用于通过鼻内途径治疗神经退行性疾病的治疗性物质的方法，其中所述方法包括使用至少一种组合物，所述组合物又是获自至少一种含有生长因子的血液组分。

优选，提出了组合物是上清液并且含有生长因子的血液组分是血浆。在这种情况中，本发明的目的是用于通过鼻内途径治疗神经退行性疾病中的治疗性物质的制备方法，基于治疗性物质直接是所述上清液或施用的治疗是基于给其提供了尤其适于鼻内给药的稠度或表现的所述上清液。

在另一个实施方案中，组合物是凝胶并且含有生长因子的血液组分是血浆。在这种情况中，本发明的目的是用于通过鼻内途径治疗神经退行性疾病中的治疗性物质的制备方法，基于治疗性物质直接是凝胶或施用的治疗是基于给其提供了尤其适于鼻内给药的稠度或表现的所述凝胶。

本发明的另一个目的是提供治疗神经退行性疾病的方法，其中所述治疗方法包括鼻内给药获自组合物的治疗性物质，所述组合物又获自至少一种含有生长因子的血液组分。

再次，优选地提出了组合物是上清液并且含有生长因子的血液组分是血浆。在这种情况中，本发明的目的是治疗神经退行性疾病的方法，基于通过鼻内途径施用治疗性物质，所述治疗性物质可以是上清液自身或源自上清液的产物。

另外，在另一个实施方案中，组合物是凝胶并且含有生长因子的血液组分是血浆。在这种情况中，本发明的目的是治疗神经退行性疾病的方法，基于通过鼻内途径施用治疗性物质，所述治疗性物质可以是凝胶本身或源自凝胶的产物。

下文中描述了实验结果，其显示了通过鼻内途径给药获自组合物(所述组合物又获自至少一种含有生长因子的血液组分)的治疗性物质的神经退行性疾病治疗的有效性。

图1显示了研究的结果，其中在三个月和六个月时在APP/PS1转基因小鼠中测量了β-淀粉状斑块的形成；具体地，在通过鼻内途径给药富含生长因子的血浆(PRGF)治疗的动物中和包括患病的未治疗动物的对照组中，测量了斑块密度。这些实验中使用的PRGF通过US6569204中所述的制备方法获得。β-淀粉状蛋白(Aβ)是36至43个氨基酸的肽，其从淀粉状前体蛋白合成。尽管一般已知其与阿尔茨海默病的关系，但其是否是疾病的诱因或结果仍然是未知的。β-淀粉状蛋白是老年斑块(在阿尔茨海默病病人的大脑中发现的沉积物)的主要成分。Aβ整体水平的升高或Aβ40和Aβ42两者浓度的升高完全与阿尔茨海默病的病原体(pathogen)相关。图1中的数据对应于皮层(Cx)和海马(Hip)的区域，还显示了海马的区域CA1和齿状回(DG)。结果清楚地显示出通过鼻内途径接受PRGF的动物怎样呈现出显著较低水平的斑块，与位置和监控时间无关。

图2显示了研究的结果，其中在三个月和六个月时测量了用PRGF治疗的APP/PS1转基因小鼠中的Aβ40和Aβ42形式的β-淀粉状蛋白的含量，与由患病的未治疗动物组成的对照组相比。数据对应于皮层(Cx)和海马(Hip)的区域。结果清楚地显示出通过鼻内途径接受PRGF的动物怎样呈现出显著较低水平的两种类型的β-淀粉状蛋白，β-淀粉状蛋白是造成神经元损伤的一部分原因，与位置和监控时间无关。

图3显示了研究的结果，其中测量了用PRGF治疗的APP/PS1转基因小鼠中由于邻近神经元破坏引起的星形细胞增生(astrogliosis)的程度或星形细胞的异常生长，与由患病的未治疗动物组成的对照组相比。星形细胞是主要的和最大量的胶质细胞(神经系统中作为神经元支撑并且在身体中的信息的大脑加工中起着积极作用的细胞)。星形细胞增生的存在是大脑中毒性的指示剂。一般而言，β-淀粉状斑块的存在提高了星形细胞或星形细胞增生的相对水平。数据对应于皮层(Cx)、海马(hip)和齿状回(DG)的区域。结果清楚地显示出通过鼻内途径接受PRGF的动物怎样呈现出显著较低水平的反应性星形细胞，与位置和监控时间无关。

图4显示了研究的结果，其中在六个月时测量了用PRGF治疗的APP/PS1转基因小鼠的神经发生(从前体细胞分化新的神经元)，与由患病的未治疗动物组成的组相比。数据对应于海马(Hip)的区域。结果清楚地显示出通过鼻内途径接受PRGF的动物怎样呈现出显著更多的神经发生。使用不同类型的染色(对应于第一、第二和第三对比较照片)，可以看到属于用PRGF治疗的组的组织学中更多数量的新细胞的存在。具体地，为了精确地确定这些新细胞的细胞表型的目的，决定进行双重免疫组织化学染色(BrdU/NeuN)，其不仅允许将分化的细胞染色(即，新形成的细胞)，而且由于NeuN染色，不管它们明确地是神经元或不是，也能够染色。

图5显示了评价短期和中期记忆以及与阿尔茨海默病相关的其他症状(如，没有兴趣)的两个行为测试的结果。对三组APP/PS1转基因小鼠进行了测试：一组健康动物、由患病的未治疗动物(患有阿尔茨海默病)组成的对照组和一组患有相同疾病但通过鼻内途径用PRGF治疗的动物。数据显示出通过鼻内途径接受PRGF的APP/PS1转基因小鼠在行为测试中显示出恢复值，反映出与患病未治疗小鼠相比显著的改善。

具体地，在第一个测试中，将动物放入T-迷宫中，其中迷宫的一侧臂最初是关闭的，并使动物通过另一侧臂。然后将动物再次放入迷宫中，分析它们到达前一实验中它们熟知的那侧臂需要的时间。对照组中的动物没有很好地回忆起它们已经做过的，并且证明了没有兴趣并且害怕，这意味着它们需要更多时间来完成实验。相反，接受鼻内治疗的患病动物以显著短于对照组动物(患病未治疗动物)的时间完成了实验。

此外，第二个测试或物体识别测试(ORT)是基于动物明确识别出正方形空间内的中心区域的探索。通常，由于动物害怕未知情况，患病动物在探索新的区域中有困难，尤其是如果所述区域不靠近墙壁。在测试过程中，记录动物在限定中心区域中花费的时间，并且与总的识别时间相比较(图显示出了第一时间和第二时间的比例，比例越高表示认识功能越高)。测量了与前一个测试中相同的三组动物的行为。如可以看到的，相对于患病未治疗的动物(对照组)，在三个月和六个月后，用PRGF治疗的动物经历了行为的明显改善。

Claims (6)

1.获自至少一种含有生长因子的血液组分的组合物，为其作为通过鼻内给药的治疗性物质在神经退行性疾病或中枢神经系统的其他疾病治疗中的用途，其中所述含有生长因子的血液组分是富含生长因子的血浆。

2.根据权利要求1的组合物，其中所述组合物是上清液。

3.根据权利要求1的组合物，其中所述组合物是凝胶。

4.通过鼻内途径用于神经退行性疾病或中枢神经系统的其他疾病治疗中的治疗性物质的制造方法，其特征在于包括使用至少一种获自至少一种含有生长因子的血液组分的组合物，其中所述含有生长因子的血液组分是富含生长因子的血浆。

5.根据权利要求4的方法，其中所述组合物是血浆上清液。

6.根据权利要求4的方法，其中所述组合物是血浆凝胶。