JP2015519891A - Ｍｉｒ−２１活性を調節するためのマイクロｒｎａ化合物及び方法 - Google Patents

Ｍｉｒ−２１活性を調節するためのマイクロｒｎａ化合物及び方法 Download PDF

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Abstract

本明細書に記載されるのは、ｍｉＲ−２１活性を阻害するための組成物及び方法である。本組成物は、強力なｍｉＲ−２１の阻害剤活性を発揮するいくつかのヌクレオシド修飾パターンを有する。本組成物は、ｍｉＲ−２１の阻害に、更に線維症及び癌などｍｉＲ−２１の異常な発現に関連する疾患の処置にも使用することができる。

Description

本明細書で提供されるのは、ｍｉＲ−２１活性を調節するための方法及び組成物である。
「成熟型マイクロＲＮＡ」とも呼ばれるマイクロＲＮＡ（マイクロＲＮＡ）は、植物及び動物のゲノムにコードされた小さな（約１８〜２４ヌクレオチド長）非コードＲＮＡ分子である。高度に保存された、内因性に発現するマイクロＲＮＡは、場合により、特異的ｍＲＮＡの３’−非翻訳領域（３’−ＵＴＲ）に結合することによって遺伝子の発現を制御する。植物及び動物では、１０００種を超えるマイクロＲＮＡが同定されている。ある種の成熟型マイクロＲＮＡは、数百ヌクレオチド長になることが多い長い内因性のＲＮＡ一次転写物（プリ−マイクロＲＮＡ、ｐｒｉ−ｍｉｒｓ、ｐｒｉ−ｍｉＲまたはプリ−プレ−マイクロＲＮＡとも呼ばれる）から生じると考えられる（Ｌｅｅ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，２００２，２１（１７），４６６３−４６７０）。
マイクロＲＮＡの機能解析から、こうした小分子非コードＲＮＡ（ｓｍａｌｌ ｎｏｎ−ｃｏｄｉｎｇ ＲＮＡ）が、発生タイミング、器官形成、分化、パターニング、胚形成、増殖制御及びプログラムされた細胞死など動物の様々な生理的学プロセスに寄与していることが明らかになった。マイクロＲＮＡが関与する特定のプロセスの例として、幹細胞分化、神経発生、血管新生、造血及びエキソサイトーシスが挙げられる（Ａｌｖａｒｅｚ−Ｇａｒｃｉａ ａｎｄ Ｍｉｓｋａ，Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００５，１３２，４６５３−４６６２により概説される）。
本明細書で提供されるのは、修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がｍｉＲ−２１と相補的であり、かつ修飾オリゴヌクレオチドが本明細書に記載のヌクレオシドパターンを有する、化合物である。
本明細書で提供されるのは、ｍｉＲ−２１の活性を阻害する方法であって、本明細書に記載の化合物と細胞を接触させることを含む、方法である。ある種の実施形態では、細胞はインビボにある。ある種の実施形態では、細胞はインビトロにある。
本明細書で提供されるのは、ｍｉＲ−２１に関連する疾患を処置する方法であって、ｍｉＲ−２１に関連する疾患を有する被検体に本明細書に記載の化合物を投与することを含む、方法である。ある種の実施形態では、被検体はヒトである。ある種の実施形態では、被検体はイヌである。
本明細書に記載の化合物は、治療用に提供される。
本明細書で提供されるのは、８〜２２個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がｍｉＲ−２１（配列番号１）と相補的であり、かつ修飾オリゴヌクレオチドが５’から３’方向に以下のヌクレオシドパターンＩＩＩで少なくとも８個連続するヌクレオシドであり：
（Ｒ）Ｘ−ＮＢ−ＮＱ−ＮＱ−ＮＢ−（ＮＱ−ＮＱ−ＮＱ−ＮＢ）３−ＮＹ−ＮＺ
式中、Ｒは各々、非二環式ヌクレオシドであり；Ｘは１〜４であり；ＮＢは各々、二環式ヌクレオシドであり；ＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドであり；ＮＹは各々、修飾ヌクレオシドまたは非修飾ヌクレオシドであり；かつＮＺは各々、修飾ヌクレオシドである
ヌクレオシドを含む、化合物である。
本明細書で提供されるのは、８〜１９個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がｍｉＲ−２１（配列番号１）と相補的であり、かつ修飾オリゴヌクレオチドが５’から３’方向に以下のヌクレオシドパターンＩＶで少なくとも８個連続するヌクレオシドであり：
ＮＭ−ＮＢ−ＮＱ−ＮＱ−ＮＢ−（ＮＱ−ＮＱ−ＮＱ−ＮＢ）３−ＮＹ−ＮＺ
式中、ＮＭは二環式ヌクレオシドではない修飾ヌクレオシドであり；ＮＢは各々、二環式ヌクレオシドであり；ＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドであり；ＮＹは修飾ヌクレオシドまたは非修飾ヌクレオシドであり；かつＮＺは修飾ヌクレオシドである
ヌクレオシドを含む、化合物である。
本明細書で提供されるのは、８〜１９個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がｍｉＲ−２１（配列番号１）と相補的であり、かつ修飾オリゴヌクレオチドが５’から３’方向に以下のヌクレオシドパターンＶで少なくとも８個連続するヌクレオシドであり：
ＮＭ−ＮＢ−（ＮＱ−ＮＱ−ＮＢ−ＮＢ）４−ＮＺ
式中、ＮＭは二環式ヌクレオシドではない修飾ヌクレオシドであり；ＮＢは各々、二環式ヌクレオシドであり；ＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドであり；かつＮＺは修飾ヌクレオシドである
ヌクレオシドを含む、化合物である。
本明細書で提供されるのは、８〜１５個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がｍｉＲ−２１（配列番号１）と相補的であり、かつ修飾オリゴヌクレオチドが５’から３’方向に以下のヌクレオシドパターンＶＩで少なくとも８個連続するヌクレオシドであり：
ＮＱ−ＮＢ−ＮＢ−ＮＱ−（ＮＢ−ＮＢ−ＮＱ−ＮＱ）２−ＮＢ−ＮＱ−ＮＢ
式中、ＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドであり；かつＮＢは各々、二環式ヌクレオシドである
ヌクレオシドを含む、化合物である。
本明細書で提供されるのは、８〜１９個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がｍｉＲ−２１（配列番号１）と相補的であり、かつ修飾オリゴヌクレオチドが５’から３’方向に以下のヌクレオシドパターンＶＩＩで少なくとも８個連続するヌクレオシドであり：
ＮＭ−（ＮＢ−ＮＭ−ＮＭ）２−ＮＭ−（ＮＢ−ＮＱ−ＮＱ−ＮＱ）２−ＮＢ−ＮＢ−ＮＺ
式中、ＮＭは各々、二環式ヌクレオシドでない修飾ヌクレオシドであり；ＮＢは各々、二環式ヌクレオシドであり；ＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドであり；かつＮＺは修飾ヌクレオシドである
ヌクレオシドを含む、化合物である。
本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはヌクレオシドパターンＩＩＩで少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個または２２個連続するヌクレオシドを含む。本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはヌクレオシドパターンＩＶ、ＶまたはＶＩＩで少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個または１９個連続するヌクレオシドを含む。本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはヌクレオシドパターンＶＩで少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個または１５個連続するヌクレオシドを含む。本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはヌクレオシドパターンＩＩＩで８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個または２２個連結したヌクレオシドからなる。本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはヌクレオシドパターンＩＶ、ＶまたはＶＩＩで８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個または１９個連結したヌクレオシドからなる。本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはヌクレオシドパターンＶＩで８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個または１５個連結したヌクレオシドからなる。
本明細書に提供する化合物の何れかのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ｍｉＲ−２１（配列番号１）の核酸塩基配列と少なくとも９０％相補的、少なくとも９５％相補的、または１００％相補的である。
本明細書に提供する化合物の何れかのある種の実施形態では、ｍｉＲ−２１の１番目の核酸塩基は、修飾オリゴヌクレオチドの３’末端の１番目の核酸塩基と対を形成する。
本明細書に提供する化合物の何れかのある種の実施形態では、二環式ヌクレオシドは各々、ＬＮＡヌクレオシド、ｃＥｔヌクレオシド及びＥＮＡヌクレオシドから独立に選択される。
本明細書に提供する化合物の何れかのある種の実施形態では、二環式ヌクレオシドは各々ｃＥｔヌクレオシドである。ある種の実施形態では、ｃＥｔヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである。ある種の実施形態では、ｃＥｔヌクレオシドはＲ−ｃＥｔヌクレオシドである。本明細書に提供する化合物の何れかのある種の実施形態では、二環式ヌクレオシドは各々ＬＮＡヌクレオシドである。
本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、二環式ヌクレオシドは各々、非メチル化核酸塩基を含む。
本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドは各々独立にβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、β−Ｄ−リボヌクレオシド、２’−Ｏ−メチルヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド及び２’−フルオロヌクレオシドから選択される。本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドは各々独立にβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド及び２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから選択される。本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。
本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、少なくとも２個の非二環式ヌクレオシドは、互いに異なる糖部分を含む。本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドは各々、同じタイプの糖部分を有する。
本明細書に提供する化合物の何れかのある種の実施形態では、２個以下の非二環式ヌクレオシドは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。そうしたある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドは互いにβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。
本明細書に提供する化合物の何れかのある種の実施形態では、最も５’側及び最も３’側の非二環式ヌクレオシドは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、非二環式ヌクレオシドは互いにβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。本明細書に提供する化合物の何れかのある種の実施形態では、２個の非二環式ヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、非二環式ヌクレオシドは互いにβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。
ヌクレオシドパターンＩＩＩのある種の実施形態では、Ｒのヌクレオシドは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＩＩＩのある種の実施形態では、Ｒの３個のヌクレオシドは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、Ｒの１個のヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。
ヌクレオシドパターンＩＩＩのある種の実施形態では、Ｒは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；Ｘは１であり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；ＮＹはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；かつＮＺは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＩＩＩのある種の実施形態では、Ｒは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；Ｘは１であり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；ＮＹはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；かつＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＩＩＩのある種の実施形態では、Ｒは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；Ｘは１であり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；ＮＹはＳ−ｃＥｔヌクレオシドであり；かつＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである。
ヌクレオシドパターンＩＶのある種の実施形態では、ＮＭは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；ＮＹはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；ＮＺは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＩＶのある種の実施形態では、ＮＭは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；ＮＹはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；かつＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＩＶのある種の実施形態では、ＮＭは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；ＮＹはＳ−ｃＥｔヌクレオシドであり；かつＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＩＶのある種の実施形態では、ＮＭは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々独立にβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド及び２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから選択され；ＮＹはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；かつＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＩＶのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは下記構造を有する：
ＡＥＣＳＡＥＴＥＣＳＡＥＧＥＴＥＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＴＡＳ（配列番号３）；または
ＡＥＣＳＡＥＴＥＣＳＡＥＧＥＴＥＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＵＳＡＳ（配列番号３）。
式中、後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドであり；かつ後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである。
ヌクレオシドパターンＶのある種の実施形態では、ＮＭは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；かつＮＺは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＶのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは下記構造であり：
ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＳＧＴＣＳＵＳＧＡＵＳＡＳＡＧＣＳＵｓＡＥ（配列番号３）；
式中、後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドであり；かつ後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである構造、を有する。
ヌクレオシドパターンＶＩのある種の実施形態では、ＮＱは各々、二環式ヌクレオシドでない修飾ヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＶＩのある種の実施形態では、ＮＱは各々独立に２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド及びβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドから選択される。ヌクレオシドパターンＶＩのある種の実施形態では、ＮＱは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＶＩのある種の実施形態では、ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＶＩのある種の実施形態では、ＮＱは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；かつＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＶＩのある種の実施形態では、ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドヌクレオシドであり；かつＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＶＩの実施形態の何れかでは、修飾オリゴヌクレオチドはｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して０、１つまたは２つのミスマッチを有してもよい。そうしたある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して０のミスマッチを有する。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して１つのミスマッチを有する。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して２つのミスマッチを有する。ヌクレオシドパターンＶＩのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは下記構造であり：
ＭｅＣＥＡＳＡＳＴＥＣＳＵＳＡＥＡＥＵＳＡＳＡＥＧＥＣＳＴＥＡＳ（配列番号７）；
式中、後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドであり；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドであり；かつＭｅＣは５−メチルシトシンである構造、を有する。
ヌクレオシドパターンＶＩＩのある種の実施形態では、ＮＭは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々独立に２’−Ｏ−メチルヌクレオシド及びβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドから選択され；かつＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシド及び２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから独立に選択される。ヌクレオシドパターンＶＩＩのある種の実施形態では、ＮＭは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；かつＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＶＩＩのある種の実施形態では、ＮＭは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々独立に２’−Ｏ−メチルヌクレオシド及びβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドから選択され；かつＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＶＩＩのある種の実施形態では、ＮＭは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々独立に２’−Ｏ−メチルヌクレオシド及びβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドから選択され；かつＮＺは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＶＩＩのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは下記構造を有する：
ＡＥＣＳＡＥＴＥＣＳＡＥＧＥＴＥＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＵＳＡＳ（配列番号３）。
ある種の実施形態では、化合物は８〜２２個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、修飾オリゴヌクレオチドは表１の諸構造から選択される構造の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個または少なくとも１９個連続するヌクレオシドを含む。ある種の実施形態では、化合物は、表１の諸構造から選択される構造を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む。
本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、少なくとも１つのヌクレオシド間結合は修飾ヌクレオシド間結合である。本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、ヌクレオシド間結合は各々、修飾ヌクレオシド間結合である。ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、少なくとも１個のヌクレオシドは修飾核酸塩基を含む。本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、少なくとも１つのシトシンは５−メチルシトシンである。本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、シトシンは各々５−メチルシトシンである。本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの２番目のシトシンは５−メチルシトシンである。
本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは配列番号３〜１０から選択される配列の核酸塩基配列を有し、配列中のＴは各々独立にＴ及びＵから選択される。
本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して０、１つ、２つまたは３つのミスマッチを有する。本明細書で提供される化合物の何れかのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して０、１つまたは２つのミスマッチを有する。そうしたある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して０のミスマッチを有する。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して１つのミスマッチを有する。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して２つのミスマッチを有する。
本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される化合物と細胞を接触させることを含む、ｍｉＲ−２１の活性を阻害するための方法である。ある種の実施形態では、細胞はインビボにある。ある種の実施形態では、細胞はインビトロにある。ある種の実施形態では、細胞は線維芽細胞、上皮細胞、星細胞、ケラチノサイトまたは線維細胞である。ある種の実施形態では、細胞は過剰増殖細胞または低酸素細胞である。ある種の実施形態では、線維芽細胞は過剰増殖線維芽細胞である。
本明細書で提供されるのは、本明細書に記載の化合物の何れかと細胞を接触させることを含む、ｍｉＲ−２１の活性を阻害する方法である。ある種の実施形態では、細胞はインビボにある。ある種の実施形態では、細胞はインビトロである。ある種の実施形態では、細胞は線維芽細胞、過剰増殖細胞、ケラチノサイト、または低酸素細胞である。
本明細書で提供されるのは、本明細書で提供される化合物と細胞を接触させることを含む、細胞におけるコラーゲンの発現を低下させる方法である。
本明細書で提供されるのは、ｍｉＲ−２１に関連する疾患の発症を処置、予防または遅延させる方法であって、そうした疾患を有する被検体に、本明細書で提供される化合物の何れかを投与することを含む、方法である。
ある種の実施形態では、疾患は線維症である。ある種の実施形態では 線維症は腎線維症、肺線維症、肝線維症、心線維症、皮膚線維症、加齢に伴う線維症、脾線維症、強皮症及び／または移植後の線維症である。
ある種の実施形態では、線維症は腎線維症であり、糸球体硬化症、尿細管間質線維症、ＩｇＡ腎症、間質線維症／尿細管萎縮；慢性腎障害、慢性腎疾患、、糸球体疾患、糸球体腎炎、糖尿病、特発性巣状分節性糸球体硬化症、膜性腎症、虚脱性糸球体症、慢性再発性腎感染症、急性腎傷害後の慢性腎疾患（ＡＫＩ）、環境毒素及び／または天然物への曝露後の腎障害、並びに末期腎臓病から選択される疾患または状態を有する被検体に存在する。ある種の実施形態では、腎線維症は腎臓の急性または反復性外傷に起因する。
ある種の実施形態では、線維症は肝線維症であり、慢性肝傷害、肝炎感染症（例えばＢ型肝炎感染症及び／またはＣ型肝炎感染症）、非アルコール性脂肪性肝炎、アルコール性肝疾患、環境毒素及び／または天然物への曝露後の肝障害、並びに硬変から選択される疾患を有する被検体に存在する。
ある種の実施形態では、肺線維症は特発性肺線維症であるか、或いは、被検体は慢性閉塞性肺疾患を有する。
ある種の実施形態では、疾患は炎症性疾患である。
本明細書で提供されるのは、被検体の創傷治癒を促進する方法であって、本明細書に提供する化合物の何れかを、急性または慢性創傷を有する被検体に投与することを含む、方法である。ある種の実施形態では、慢性創傷は急性または慢性手術創、穿通創、引き抜き損傷、圧挫損傷、剪断損傷、熱傷、裂傷、咬創、動脈性潰瘍、静脈性潰瘍、圧迫性潰瘍または糖尿病性潰瘍である。ある種の実施形態では、本化合物を創傷に局所投与する。
本明細書で提供されるのは、被検体の線維増殖性障害を処置する方法であって、本明細書に提供する化合物の何れかを被検体に投与することを含む、方法である。
本明細書に提供する方法の何れかは、１つまたは複数の組織においてｍｉＲ−２１の発現が増加した被検体を選択することを含んでもよい。
ある種の実施形態では、本明細書に提供する化合物の何れかを被検体に投与することがコラーゲンの発現を低下させる。
ある種の実施形態では、被検体は臓器機能の改善を必要としており、臓器機能は心機能、肺機能、肝機能及び腎機能から選択される。ある種の実施形態では、本明細書に提供する化合物の何れかの投与が被検体の臓器機能を改善し、臓器機能は心機能、肺機能、肝機能及び腎機能から選択される。
本明細書で提供される方法の何れかは、被検体の腎機能を評価することを含み、被検体の血液中の血中尿素窒素の測定；被検体の血液中のクレアチニンの測定；被検体のクレアチニンクリアランスの測定；被検体のタンパク尿の測定；被検体のアルブミン：クレアチニン比の測定；被検体の尿量の測定；被検体の尿中のイヌリンクリアランスの測定；被検体の尿モル浸透圧濃度の測定；被検体の尿重量オスモル濃度の測定；被検体の血尿の測定；被検体の血液及び／もしくは尿中のシスタチンＣの測定；並びに／または被検体の血液もしくは尿中の好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）の測定を含んでもよい。
本明細書で提供される方法の何れかは、被検体の肝機能を評価することを含んでもよく、被検体の血液中のアラニンアミノトランスフェラーゼレベルの測定；被検体の血液中のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼレベルの測定；被検体の血液中のビリルビンレベルの測定；被検体の血液中のアルブミンレベルの測定；被検体のプロトロンビン時間の測定；被検体の腹水の測定；被検体の脳症の測定；及び／または、例えば、トランジェントエラストグラフィー（ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｅｌａｓｔｏｇｒａｐｈｙ）を用いた肝硬度の測定を含んでもよい。
本明細書に提供する方法の何れかは、被検体の肺の機能を評価することを含んでもよく、被検体の肺活量の測定；被検体の努力肺活量の測定；被検体の努力呼気肺活量１秒量の測定；被検体の最大呼気流量の測定；被検体の努力呼気流量の測定；被検体の最大換気量の測定；被検体の努力呼気肺活量１秒量と努力肺活量との比の判定；被検体の換気血流比の測定；被検体の窒素洗い出しの測定；及び／または被検体の１つまたは複数の肺の絶対空気量の測定を含んでもよい。
本明細書に提供する方法の何れかは、被検体の心機能を評価することを含んでもよく、被検体の心拍出量の測定；被検体の一回拍出量の測定；被検体の収縮期平均駆出速度の測定；被検体の収縮期血圧の測定；被検体の左心室駆出率の測定；被検体の一回拍出係数の判定；被検体の心係数の判定；被検体の左室内径短縮率の測定；被検体の円周方向心筋線維平均短縮速度の測定；被検体の左室流入血流速度波形の測定；被検体の肺静脈血流速波形の測定；及び／または被検体の拡張早期僧帽弁輪運動最大速度の測定を含んでもよい。
本明細書に提供する方法の何れかは、抗炎症薬、免疫抑制薬、抗糖尿病薬、ジゴキシン、血管拡張薬、アンジオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、カルシウムチャネル遮断薬、二硝酸イソソルビド、ヒドララジン、ニトレート、ヒドララジン、β遮断薬、ナトリウム利尿ペプチド、ヘパリノイド、結合組織増殖因子阻害剤、及び変異増殖因子阻害剤から選択される少なくとも１つの治療薬を被検体に投与することを含んでもよい。ある種の実施形態では、抗炎症薬は非ステロイド系抗炎症薬であり、非ステロイド系抗炎症薬は、イブプロフェン、ＣＯＸ−１阻害剤及びＣＯＸ−２阻害剤から任意に選択される。ある種の実施形態では、免疫抑制薬は、コルチコステロイド、シクロホスファミド及びミコフェノール酸モフェチルから選択される。ある種の実施形態では、抗炎症薬はコルチコステロイドであり、コルチコステロイドは任意にプレドニゾンである。ある種の実施形態では、アンジオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤は、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、キナプリル、ホシノプリル及びラミプリルから選択される。ある種の実施形態では、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）は、カンデサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタン及びエプロサルタンから選択される。
ある種の実施形態では、疾患は癌である。ある種の実施形態では、癌は肝癌、乳癌、膀胱癌、前立腺癌、結腸癌、肺癌、脳癌、血液癌、膵癌、頭頸部癌、舌癌、胃癌、皮膚癌、甲状腺癌、神経芽細胞腫、食道癌、中皮腫、神経芽細胞腫、骨癌、腎臓癌、精巣癌、直腸癌、子宮頸癌または卵巣癌である。ある種の実施形態では、肝癌は肝細胞癌である。ある種の実施形態では、脳癌は多形神経膠芽腫、乏突起星細胞腫または乏突起膠腫である。ある種の実施形態では、多形神経膠芽腫は前神経（ｐｒｏｎｅｕｒａｌ）多形神経膠芽腫、神経（ｎｅｕｒａｌ）多形神経膠芽腫、古典的（ｃｌａｓｓｉｃａｌ）多形神経膠芽腫、または中葉系（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ）多形神経膠芽腫である。ある種の実施形態では、血液癌は急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、急性単球性白血病、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫である。ある種の実施形態では、皮膚癌はメラノーマである。ある種の実施形態では、腎臓癌は腎細胞癌である。ある種の実施形態では、乳癌は乳管上皮内癌、浸潤性管癌、トリプルネガティブ乳癌、髄様癌、管状癌及び粘液癌である。
ある種の実施形態では、本明細書に提供する方法は、少なくとも１つの追加の抗癌治療剤を被検体に投与することを含む。ある種の実施形態では、抗癌治療は、ＤＮＡ傷害剤、増殖阻害剤、葉酸代謝拮抗薬、増殖因子受容体阻害剤、血管新生阻害薬、受容体チロシンキナーゼ阻害剤、キナーゼ阻害剤、増殖因子阻害剤、細胞傷害性薬物、放射線治療または腫瘍の外科的切除である。ある種の実施形態では、ＤＮＡ傷害剤は、１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレア、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、オキサリプラチン、テモゾロミドまたはトポテカンである。ある種の実施形態では、葉酸代謝拮抗薬は、メトトレキサート、アミノプテリン、チミジル酸シンターゼ、セリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼ、ホリイルポリグルタミルシンテターゼ、ｇ−グルタミルヒドロラーゼ、グリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ、ロイコボリン、アミノ−イミダゾール−カルボキサミド−リボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ、５−フルオロウラシル、または葉酸トランスポーターである。ある種の実施形態では、増殖因子受容体阻害剤は、エルロチニブまたはゲフィチニブである。ある種の実施形態では、血管新生阻害剤は、ベバシズマブ、サリドマイド、カルボキシアミドトリアゾール、ＴＮＰ−４７０、ＣＭ１０１、ＩＦＮ−α、血小板因子−４、スラミン、ＳＵ５４１６、トロンボスポンジン、ＶＥＧＦＲアンタゴニスト、軟骨由来血管新生抑制因子、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害物質、アンジオスタチン、エンドスタチン、２−メトキシエストラジオール、テコガラン、テトラチオモリブデート、プロラクチンまたはリノミドである。ある種の実施形態では、キナーゼ阻害剤は、ベバシズマブ、ＢＩＢＷ ２９９２、セツキシマブ、イマチニブ、トラスツズマブ、ゲフィチニブ、ラニビズマブ、ペガプタニブ、ソラフェニブ、ダサチニブ、スニチニブ、エルロチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パニツムマブ、バンデタニブ、Ｅ７０８０、パゾパニブ、ムブリチニブまたはホスタマチニブである。
ある種の実施形態では、癌を有する被検体への投与が腫瘍の大きさ及び／または腫瘍数を減少させる。ある種の実施形態では、癌を有する被検体への投与が腫瘍の大きさ及び／または腫瘍数の増加を予防または遅延させる。ある種の実施形態では、癌を有する被検体への投与が転移性の進行を予防または遅らせる。ある種の実施形態では、癌を有する被検体への投与が被検体の全生存期間及び／または無増悪生存期間を延長させる。ある種の実施形態では、本明細書に提供する方法は、血清αフェトプロテインが上昇した、及び／または血清デス−γ−カルボキシプロトロンビンが上昇した被検体を選択することを含む。ある種の実施形態では、本明細書に提供する方法は、血清αフェトプロテイン及び／または血清デス−γ−カルボキシプロトロンビンを低下させることを含む。ある種の実施形態では、本明細書に提供する方法は、異常肝機能を有する動物を選択することを含む。
ある種の実施形態では、被検体はヒトである。ある種の実施形態では、被検体はイヌである。
本明細書で提供される方法の何れかでは、本化合物は医薬組成物として存在する。
本明細書に提供する化合物の何れかは、治療に使用されてもよい。本明細書に提供する化合物の何れかは、線維症の処置に使用されてもよい。本明細書に提供する化合物の何れかは、創傷治癒の促進に使用されてもよい。本明細書に提供する化合物の何れかは、癌の処置に使用されてもよい。本明細書に提供する化合物の何れかは、転移の発症を予防及び／または遅延させるのに使用されてもよい。
本明細書に提供する化合物の何れかは、心臓病の処置に使用されてもよい。
本明細書に提供する化合物の何れかは、薬物の調製に使用されてもよい。本明細書に提供する化合物の何れかは、線維症を処置する薬物の調製に使用されてもよい。本明細書に提供する化合物の何れかは、創傷治癒を促進する薬物の調製に使用されてもよい。本明細書に提供する化合物の何れかは、癌を処置する薬物の調製に使用されてもよい。本明細書に提供する化合物の何れかは、転移の発症を予防及び／または遅延させる薬物の調製に使用されてもよい。
実施例１に記載されているように、いくつかの抗ｍｉＲ−２１化合物を投与されたＵＵＯモデルマウスの腎臓における（Ａ）コラーゲン１Ａ１発現、及び（Ｂ）コラーゲン３Ａ１発現の変化を示す。 実施例１に記載されているように、いくつかの抗ｍｉＲ−２１化合物を投与されたＵＵＯモデルマウスの腎臓における（Ａ）コラーゲン１Ａ１発現、及び（Ｂ）コラーゲン３Ａ１発現の変化を示す。 実施例２に記載されているように、いくつかの抗ｍｉＲ−２１化合物を投与されたＵＵＯモデルマウスの腎臓における（Ａ）コラーゲン１Ａ１発現、及び（Ｂ）コラーゲン３Ａ１発現の変化を示す。 実施例３に記載されているように、いくつかの抗ｍｉＲ−２１化合物を投与された一側ＩＲＩモデルマウスの腎臓における（Ａ）コラーゲン１Ａ１発現の変化、（Ｂ）コラーゲン３Ａ１発現の変化、及び（Ｃ）コラーゲン領域画分を示す。 実施例４に記載されているように（Ａ）化合物３６３２８または対照化合物を投与されたＩＲ／Ｎｘモデルマウスの腎臓における尿中アルブミン／クレアチニン比、（Ｂ）化合物３６２８４を投与されたＩＲ／Ｎｘモデルマウスの腎臓における尿中アルブミン／クレアチニン比、及び（Ｃ）化合物２５２２０を投与されたＩＲ／Ｎｘモデルマウスの腎臓における尿中アルブミン／クレアチニン比を示す。 （Ａ）実施例６に記載されているようなに、抗ｍｉＲ−２１化合物のルシフェラーゼ活性及び（Ｂ）培養細胞における抗ｍｉＲ−２１化合物の抗増殖作用を示す。 実施例６に記載されているように、いくつかの抗ｍｉＲ−２１化合物を投与されたＵＵＯモデルマウスの腎臓における（Ａ）コラーゲン１Ａ１発現、及び（Ｂ）コラーゲン３Ａ１発現の変化を示す。
他に記載がない限り、本明細書で使用する技術用語及び科学用語は全て、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解しているのと同じ意味を持つ。具体的な定義がなされていない場合、本明細書に記載の分析化学、有機合成化学並びに創薬化学及び薬化学に関連して使用される用語と、本明細書に記載の分析化学、有機合成化学並びに創薬化学及び薬化学の手順及び技法とは、当該技術分野において公知であり、一般に用いられるものである。本明細書の用語に複数の定義が存在する場合、本セクションの定義が優先する。化学合成、化学分析、医薬品の調製、製剤及び送達、並びに被検体の処置には、標準的な技法を使用することができる。ある種のそうした技法及び手順は、例えば「Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ」Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｓａｎｇｖｉ ａｎｄ Ｃｏｏｋ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，１９９４；及び「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，」Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９０で確認することができ、更に、これらをいかなる目的においても本明細書に援用する。許容される場合、特許、特許出願、公開された出願及び公報、ＧＥＮＢＡＮＫ配列、ウェブサイト、及び本明細書の開示内容全体を通して参照した他の公開資料は、他に記載がない限り、その全体を援用する。ＵＲＬまたは他のそうした識別子またはアドレスに言及する場合、そうした識別子は変更されることがあり、インターネット上の特定の情報も変更される場合があるが、インターネットの検索により、対応する情報を確認することができることが理解されよう。それを参照することにより、そうした情報の利用可能性及び一般への提供が明らかにされる。
本組成物及び方法を開示し、説明するのに先立ち、本明細書に使用される用語は、特定の実施形態を説明するためのものにすぎず、限定的であることを意図するものではないことを理解されたい。本明細書及び添付の特許請求の範囲に使用する場合、単数形表現「１つの（ａ、ａｎ）」及び「前記（ｔｈｅ）」は、文脈上明らかに他の意味に解すべき場合を除き、複数の意味を含むことに留意しなければならない。
定義
「線維症」は、器官または組織に過剰な線維性結合組織が形成または発生することを意味する。ある種の実施形態では、線維症は修復または反応プロセスとして起こる。ある種の実施形態では、線維症は、損傷または傷害に反応して起こる。「線維症」という用語は、器官または組織の正常成分としての線維組織の形成と異なり、器官または組織に過剰な線維性結合組織が、修復または反応プロセスとして形成または発生するものと理解されたい。
「アルポート症候群」は、異常なレベルの糸球体基底膜（ＧＢＭ）が生成され、間質線維症、糸球体硬化をきたし、最終的には腎機能の喪失に至る遺伝性の腎疾患を意味する。本疾患は更に、難聴及び眼球異常を特徴とする場合が多い。
「〜を有する疑いがある被検体」は、疾患の１つまたは複数の臨床指標を示す被検体を意味する。
「線維症を有する疑いがある被検体」は、線維症の１つまたは複数の臨床指標を示す被検体を意味する。
「線維増殖性障害」は、線維芽細胞の過剰な増殖及び／または活性化を特徴とする障害を意味する。
「肝癌」は、肝臓の悪性腫瘍、或いは原発癌または転移癌を意味する。ある種の実施形態では、肝癌は、以下に限定されるものではないが、肝実質細胞から生じた癌、例えば、ヘパトーマ及び肝細胞癌；線維層状肝癌；並びに胆管癌（ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）（即ち胆管癌（ｂｉｌｅ ｄｕｃｔ ｃａｎｃｅｒ））を含む。
「転移」は、癌が原発腫瘍として最初に生じた場所から体内の他の部位に広がるプロセスを意味する。原発腫瘍の転移性の進行は、隣接原発腫瘍細胞からの解離、循環血液中での生存、及び第２の場所における増殖を含む複数の段階を反映する。
「全生存期間」は、疾患の診断または処置後に被検体が生存する期間を意味する。ある種の実施形態では、疾患は癌である。いくつかの実施形態では、全生存期間は診断後の生存期間である。いくつかの実施形態では、全生存期間は処置の開始後の生存期間である。
「無増悪生存期間」は、疾患を有する被検体が、疾患が悪化せずに生存する期間を意味する。ある種の実施形態では、無増悪生存期間は疾患の病期判定またはスコアリングにより評価される。ある種の実施形態では、肝癌を有する被検体の無増悪生存期間は、腫瘍の大きさ、腫瘍数及び／または転移を評価することにより評価される。
「更なる進行を阻止する」は、ある医学的状態が進行した状態に進むのを止めることを意味する。
「更なる進行を遅延させる」は、ある医学的状態が進行した状態に進む速度を低下させることを意味する。
「腎機能の障害」は、正常な腎機能と比較して腎機能が低下していることを意味する。
「透析までの時間を遅延させる」は、透析処置が必要とされるまでの時間を遅延させるように腎機能を維持することを意味する。
「腎移植までの時間を遅延させる」は、腎臓移植が必要とされるまで時間を遅延させるように腎機能を維持させることを意味する。
「腎機能を改善する」は、正常範囲の方向に腎機能を変化させることを意味する。ある種の実施形態では、腎機能の改善は、血中尿素窒素の低下、タンパク尿の減少、アルブミン尿の低下等により測定される。
「平均余命を改善する」は、被検体の疾患の１つまたは複数の症状を処置することにより被検体を延命させることを意味する。
「血尿」は尿中に赤血球が存在することを意味する。
「アルブミン尿」は、尿中に過剰なアルブミンが存在することを意味し、以下に限定されるものではないが、正常アルブミン尿、正常高値アルブミン尿、微量アルブミン尿及び顕性アルブミン尿を含む。通常、糸球体濾過障壁は有足細胞、糸球体基底膜及び内皮細胞からなり、血清タンパク質が尿に漏出するのを防止する。アルブミン尿は、糸球体の透過障壁の損傷を反映すると考えられる。アルブミン尿は、２４時間尿サンプル、夜間尿サンプルまたはスポット尿サンプルから算出することができる。
「正常高値アルブミン尿」は、（ｉ）２４時間当たりのアルブミンの尿への排泄量が１５〜＜３０ｍｇ及び／または（ｉｉ）男性のアルブミン／クレアチニン比が１．２５〜＜２．５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または１０〜＜２０ｍｇ／ｇ）または女性の場合１．７５〜＜３．５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または１５〜＜３０ｍｇ／ｇ）であることを特徴とする高アルブミン尿を意味する。
「微量アルブミン尿」は、（ｉ）２４時間当たりのアルブミンの尿への排泄量が３０〜３００ｍｇ及び／または（ｉｉ）男性のアルブミン／クレアチニン比が２．５〜＜２５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または２０〜＜２００ｍｇ／ｇ）または女性の場合３．５〜＜３５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または３０〜＜３００ｍｇ／ｇ）を特徴とする高アルブミン尿を意味する。
「顕性アルブミン尿」は、２４時間当たりのアルブミンの尿への排泄量が３００ｍｇ超及び／または（ｉｉ）男性のアルブミン／クレアチニン比が＞２５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または＞２００ｍｇ／ｇ）または女性の場合＞３５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または＞３００ｍｇ／ｇ）を特徴とする高アルブミン尿を意味する。
「アルブミン／クレアチニン比」は、尿中クレアチニン（ｇ／ｄＬ）当たりの尿中アルブミン（ｍｇ／ｄＬ）の比を意味し、ｍｇ／ｇで表される。アルブミン／クレアチニン比はスポット尿サンプルから算出することができ、２４時間にわたるアルブミン排泄量の推定値として使用され得る。
「推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）または「糸球体濾過量（ＧＦＲ）」は、腎臓がどの程度クレアチニンを濾過するかの測定値を意味し、血液が１分当たりどの程度糸球体を通過するかの推定値として使用される。通常の結果は、９０〜１２０ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２の範囲になり得る。３ヶ月以上６０ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２未満のレベルであると、慢性腎疾患の指標となり得る。１５ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２未満のレベルは、腎不全の指標となり得る。
「タンパク尿」は、過剰の血清タンパク質が存在することを意味する。タンパク尿は、２４時間当たりのタンパク質の尿への排泄量が＞２５０ｍｇ及び／または尿中タンパク質とクレアチニンとの比が≧０．２０ｍｇ／ｍｇであることを特徴してもよい。タンパク尿に関連して増加する血清タンパク質として、以下に限定されるものではないが、アルブミンが挙げられる。
「血中尿素窒素」または「ＢＵＮ」は、尿素形態の血液中の窒素量の尺度を意味する。肝臓はタンパク質の消化の老廃物として尿素回路において尿素を生成し、尿素は、腎臓により血液から除去される。正常ヒト成人血液は、１００ｍｌ（７〜２１ｍｇ／ｄＬ）の血液当たり７〜２１ｍｇの間の尿素窒素を含む。血中尿素窒素の測定は、腎臓の健康の指標として使用される。腎臓が血液から尿素を正常に除去できない場合、被検体のＢＵＮが上昇する。
「末期腎臓病（ＥＳＲＤ）」は、腎機能の完全またはほぼ完全な喪失を意味する。
「抗ｍｉＲ」は、マイクロＲＮＡと相補的な核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを意味する。ある種の実施形態では、抗ｍｉＲは修飾オリゴヌクレオチドである。
「抗ｍｉＲ−Ｘ」は、「ｍｉＲ−Ｘ」が特定のマイクロＲＮＡを示す場合、ｍｉＲ−Ｘと相補的な核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを意味する。ある種の実施形態では、抗ｍｉＲ−Ｘは、ｍｉＲ−Ｘと完全に（例：１００％）相補的である。ある種の実施形態では、抗ｍｉＲ−Ｘは、ｍｉＲ−Ｘと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％相補的である。ある種の実施形態では、抗ｍｉＲ−Ｘは修飾オリゴヌクレオチドである。
「ｍｉＲ−２１」は、核酸塩基配列ＵＡＧＣＵＵＡＵＣＡＧＡＣＵＧＡＵＧＵＵＧＡ（配列番号１）を有する成熟型ｍｉＲＮＡを意味する。
「ｍｉＲ−２１ステムループ配列」は、核酸塩基配列ＵＧＵＣＧＧＧＵＡＧＣＵＵＡＵＣＡＧＡＣＵＧＡＵＧＵＵＧＡＣＵＧＵＵＧＡＡＵＣＵＣＡＵＧＧＣＡＡＣＡＣＣＡＧＵＣＧＡＵＧＧＧＣＵＧＵＣＵＧＡＣＡ（配列番号２）を有するステムループ配列を意味する。
「標的核酸」は、オリゴマー化合物がハイブリダイズするように設計される核酸を意味する。
「標的化」は、標的核酸にハイブリダイズする核酸塩基配列の設計及び選択のプロセスを意味する。
「〜を標的とする」は、標的核酸へのハイブリダイゼーションを可能にする核酸塩基配列を有することを意味する。
「標的結合」は、マイクロＲＮＡの活性、発現またはレベルを変化させる形でオリゴヌクレオチドと、相補的なマイクロＲＮＡとが相互作用することを意味する。ある種の実施形態では、標的結合は、マイクロＲＮＡの活性が阻害されるように抗ｍｉＲと、相補的なマイクロＲＮＡとが相互作用することを意味する。
「調節」は、機能、量または活性の変質を意味する。ある種の実施形態では、調節は機能、量または活性の増加を意味する。ある種の実施形態では、調節は機能、量または活性の低下を意味する。
「発現」は、遺伝子のコードされた情報が、細胞内に存在して働く構造体に変換される任意の機能及び段階を意味する。
「５’標的部位」は、特定のオリゴヌクレオチドの最も３’側の核酸塩基と相補的な標的核酸の核酸塩基を意味する。
「３’標的部位」は、特定のオリゴヌクレオチドの最も５’側の核酸塩基と相補的な標的核酸の核酸塩基を意味する。
「領域」は、核酸においてヌクレオシドが連結した部分を意味する。ある種の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、標的核酸の領域と相補的な核酸塩基配列を有する。例えば、そうしたある種の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡステムループ配列の領域と相補的である。そうしたある種の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡステムループ配列の領域と完全に相補的である。
「セグメント」は、領域のより小さな部分または細部分を意味する。
「核酸塩基配列」は、典型的には任意の糖、結合及び／または核酸塩基の修飾と関係なく５’から３’方向に記載された、オリゴマー化合物または核酸において連続する核酸塩基の順序を意味する。
「連続する核酸塩基」は、核酸において互いに直接隣接する核酸塩基を意味する。
「核酸塩基相補性」は、２つの核酸塩基が水素結合を介して非共有結合により対を形成できることを意味する。
「相補的」は、１つの核酸がもう１つの核酸またはオリゴヌクレオチドにハイブリダイズできることを意味する。ある種の実施形態では、相補的とは、オリゴヌクレオチドが標的核酸にハイブリダイズできることをいう。
「完全に相補的」は、オリゴヌクレオチドの各核酸塩基が、対応する各々の位置で標的核酸の核酸塩基と対を形成できることを意味する。ある種の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡと完全に相補的である、即ちオリゴヌクレオチドの各核酸塩基が、対応する各々の位置でマイクロＲＮＡの核酸塩基と相補的である。ある種の実施形態では、各核酸塩基がマイクロＲＮＡステムループ配列の領域内の核酸塩基と相補性を有するオリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡステムループ配列と完全に相補的である。
「相補性パーセント」は、同じ長さの標的核酸の部分と相補的なオリゴヌクレオチドの核酸塩基の割合を意味する。相補性パーセントは、オリゴヌクレオチドのうち、対応する位置で標的核酸の核酸塩基と相補的な核酸塩基の数を、オリゴヌクレオチドの核酸塩基の総数で割ることにより計算される。
「同一性パーセント」は、第１の核酸のうち、対応する位置で第２の核酸の核酸塩基と同一である核酸塩基の数を、第１の核酸の核酸塩基の総数で割った商を意味する。ある種の実施形態では、第１の核酸はマイクロＲＮＡであり、第２の核酸はマイクロＲＮＡである。ある種の実施形態では、第１の核酸はオリゴヌクレオチドであり、第２の核酸はオリゴヌクレオチドである。
「ハイブリダイズする」は、核酸塩基の相補性により相補的核酸のアニーリングが起こることを意味する。
「ミスマッチ」は、第１の核酸の核酸塩基が、対応する位置で第２の核酸の核酸塩基とＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ対を形成できないことを意味する。
核酸塩基配列の文脈において「同一の」は、糖、結合及び／または核酸塩基の修飾に関係なく、かつ、存在する任意のピリミジンのメチル状態にも関係なく、同じ核酸塩基配列を有することを意味する。
「マイクロＲＮＡ」は、酵素ダイサーによるプレ−マイクロＲＮＡの切断産物であり、長さ１８〜２５核酸塩基の内在性非コードＲＮＡを意味する。成熟型マイクロＲＮＡの例は、ｍｉＲＢａｓｅと呼ばれるマイクロＲＮＡデータベースで確認される（ｈｔｔｐ：／／ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／）。ある種の実施形態では、マイクロＲＮＡは、「マイクロＲＮＡ」または「ｍｉＲ」と略記される。
「プレ−マイクロＲＮＡ」または「ｐｒｅ−ｍｉＲ」は、Ｄｒｏｓｈａと呼ばれる二本鎖ＲＮＡ特異的リボヌクレアーゼによるｐｒｉ−ｍｉＲの切断産物であり、ヘアピン構造を有する非コードＲＮＡを意味する。
「ステムループ配列」は、ヘアピン構造を有し、かつ成熟型マイクロＲＮＡ配列を含むＲＮＡを意味する。プレ−マイクロＲＮＡ配列及びステムループ配列は重複してもよい。ステムループ配列の例は、ｍｉＲＢａｓｅと呼ばれるマイクロＲＮＡデータベースで確認される（ｈｔｔｐ：／／ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／）。
「プリ−マイクロＲＮＡ」または「ｐｒｉ−ｍｉＲ」は、二本鎖ＲＮＡ特異的リボヌクレアーゼＤｒｏｓｈａの基質であり、ヘアピン構造を有する非コードＲＮＡを意味する。
「マイクロＲＮＡ前駆体」は、ゲノムＤＮＡに由来し、かつ、１つまたは複数のマイクロＲＮＡ配列を含む非コードｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ ＲＮＡを含む転写物を意味する。例えば、ある種の実施形態では、マイクロＲＮＡ前駆体はプレ−マイクロＲＮＡである。ある種の実施形態では、マイクロＲＮＡ前駆体はプリ−マイクロＲＮＡである。
「マイクロＲＮＡ制御転写物」は、マイクロＲＮＡにより制御される転写物を意味する。
「モノシストロニックな転写物」は、単一のマイクロＲＮＡ配列を含むマイクロＲＮＡ前駆体を意味する。
「ポリシストロニックな転写物」は、２つ以上のマイクロＲＮＡ配列を含むマイクロＲＮＡ前駆体を意味する。
「シード配列」は、成熟型マイクロＲＮＡ配列の５’末端の核酸塩基１〜９のうち連続した６〜８核酸塩基を含む核酸塩基配列を意味する。
「シードマッチ配列」は、シード配列と相補的であり、シード配列と同じ長さの核酸塩基配列を意味する。
「オリゴマー化合物」は、複数の連結したモノマーサブユニットを含む化合物を意味する。オリゴマー化合物はオリゴヌクレオチドを含んでいた。
「オリゴヌクレオチド」は、複数の連結したヌクレオシドを含む化合物を意味し、その各々は、互いに独立に修飾されていても、または非修飾であってもよい。
「天然のヌクレオシド間結合」は、ヌクレオシド間の３’から５’のホスホジエステル結合を意味する。
「天然糖」は、ＤＮＡ（２’−Ｈ）またはＲＮＡ（２’−ＯＨ）に見られる糖を意味する。
「ヌクレオシド間結合」は、隣接するヌクレオシド間の共有結合を意味する。
「連結したヌクレオシド」は、共有結合により連結されたヌクレオシドを意味する。
「核酸塩基」は、別の核酸塩基と非共有結合的に対を形成することができる複素環部分を意味する。
「ヌクレオシド」は、核酸塩基が糖部分に結合したものを意味する。
「ヌクレオチド」は、ヌクレオシドの糖部に共有結合したリン酸基を有するヌクレオシドを意味する。
いくつかの連結したヌクレオシド「からなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物」は、所定の数の連結したヌクレオシドを有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を意味する。従って、化合物は、追加の置換基またはコンジュゲートを含んでもよい。他に記載がない限り、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオシド以外に任意の追加のヌクレオシドを含まない。
「修飾オリゴヌクレオチド」は、天然の末端、糖、核酸塩基及び／またはヌクレオシド間結合に関して１つまたは複数の修飾を有するオリゴヌクレオチドを意味する。修飾オリゴヌクレオチドは、非修飾ヌクレオシドを含んでもよい。
「一本鎖修飾オリゴヌクレオチド」は、相補鎖にハイブリダイズしていない修飾オリゴヌクレオチドを意味する。
「修飾ヌクレオシド」は、天然のヌクレオシドと異なるヌクレオシドを意味する。修飾ヌクレオシドは、修飾糖及び非修飾核酸塩基を有してもよい。修飾ヌクレオシドは、修飾糖及び修飾核酸塩基を有してもよい。修飾ヌクレオシドは、天然糖及び修飾核酸塩基を有してもよい。ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシドは二環式ヌクレオシドである。ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシドは非二環式ヌクレオシドである。
「修飾ヌクレオシド間結合」は、天然のヌクレオシド間結合と何らか異なることを意味する。
「ホスホロチオエートヌクレオシド間結合」は、非架橋原子の１つが硫黄原子である、ヌクレオシド間の結合を意味する。
「修飾糖部分」は、天然糖の置換及び／または何らかの変化を意味する。
「非修飾核酸塩基」は、ＲＮＡまたはＤＮＡの天然の複素環塩基：プリン塩基アデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）と、ピリミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）（５−メチルシトシンを含む）及びウラシル（Ｕ）とを意味する。
「５−メチルシトシン」は、５位に結合したメチル基を含むシトシンを意味する。
「非メチル化シトシン」は、５位に結合したメチル基を有さないシトシンを意味する。
「修飾核酸塩基」は、非修飾核酸塩基でない任意の核酸塩基を意味する。
「フラノシル」は、４個の炭素原子及び１個の酸素原子からなる５員環を含む構造を意味する。
「天然のフラノシル」は、天然のＲＮＡに見られるようなリボフラノシル、または天然のＤＮＡに見られるようなデオキシリボフラノシルを意味する。
「糖部分」は、天然のフラノシルまたは修飾糖部分を意味する。
「修飾糖部分」は、置換糖部分または代用糖を意味する。
「置換糖部分」は、天然のフラノシルでないフラノシルを意味する。置換糖部分には、以下に限定されるものではないが、天然のフラノシルの２’位、５’位及び／または４’位に修飾を含む糖部分がある。ある種の置換糖部分は二環式糖部分である。
「代用糖」は、フラノシルを含まず、かつヌクレオシドの天然のフラノシルの代わりになることができ、その結果得られるヌクレオシドが（１）オリゴヌクレオチドへの取り込み、及び（２）相補的ヌクレオシドへのハイブリダイゼーションが可能である構造を意味する。こうした構造は、異なる数の原子を含む環（例えば、４員環、６員環または７員環）；フラノシルの酸素と非酸素原子（例えば、炭素、硫黄または窒素）との交換；または原子数の変化と酸素の交換との両方などフラノシルの比較的単純な変化を含む。こうした構造は、置換糖部分に記載した置換に対応する置換を更に含んでもよい（例えば、追加の置換基を任意に含む６員の二環式炭素環式代用糖）。代用糖は、より複雑な糖の交換を更に含んでもよい（例えば、ペプチド核酸の非環系）。代用糖は、以下に限定されるものではないが、モルホリノ、シクロヘキセニル及びシクロヘキシトールを含む。
「２’−Ｏ−メチル糖」または「２’−ＯＭｅ糖」は、２’位にＯ−メチル修飾を有する糖を意味する。
「２’−Ｏ−メトキシエチル糖」または「２’−ＭＯＥ糖」は、２’位にＯ−メトキシエチル修飾を有する糖を意味する。
「２’−Ｏ−フルオロ」または「２’−Ｆ」は、２’位にフルオロ修飾を有する糖を意味する。
「二環式糖部分」は、４〜７員環の２個の原子を連結して第２の環を形成して、二環式構造を生じさせる架橋を含む、４〜７員環（以下に限定されるものではないが、フラノシル）を含む修飾糖部分を意味する。ある種の実施形態では、４〜７員環は糖環である。ある種の実施形態では４〜７員環はフラノシルである。そうしたある種の実施形態では、架橋はフラノシルの２’−炭素及び４’−炭素を連結する。
非限定的な例示的二環式糖部分として、ＬＮＡ、ＥＮＡ、ｃＥｔ、Ｓ−ｃＥｔ及びＲ−ｃＥｔが挙げられる。
「ロックド核酸（ＬＮＡ）糖部分」は、フラノース環の２’の原子と４’の原子との間に（ＣＨ２）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
「ＥＮＡ糖部分」は、フラノース環の２’の原子と４’の原子との間に（ＣＨ２）２−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
「規制されたエチル（ｃＥｔ）糖部分」は、フラノース環の４’の原子と２’の原子との間にＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。ある種の実施形態では、ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋は、Ｓ方向に規制される。ある種の実施形態では、ＣＨ（ＣＨ３）−ＯはＲ方向に規制される。
「Ｓ−ｃＥｔ糖部分」は、フラノース環の４’の原子と２’の原子との間にＳ−規制ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
「Ｒ−ｃＥｔ糖部分」は、フラノース環の４’の原子と２’の原子との間にＲ−規制ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。
「２’−Ｏ−メチル」ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メチル糖修飾を含む２’−修飾ヌクレオシドを意味する。
「２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド」は、２’−Ｏ−メトキシエチル糖修飾を有する２’−修飾ヌクレオシドを意味する。２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドは、修飾核酸塩基を含んでも、または非修飾核酸塩基を含んでもよい。
「２’−フルオロヌクレオシド」は、２’−フルオロ糖修飾を有する２’−修飾ヌクレオシドを意味する。２’−フルオロヌクレオシドは、修飾核酸塩基を含んでも、または非修飾核酸塩基を含んでもよい。
「二環式ヌクレオシド」は、二環式糖部分を有する２’−修飾ヌクレオシドを意味する。二環式ヌクレオシドは、修飾核酸塩基を有しても、または非修飾核酸塩基を有してもよい。
「ｃＥｔヌクレオシド」は、ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。ｃＥｔヌクレオシドは、修飾核酸塩基を含んでも、または非修飾核酸塩基を含んでもよい。
「Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド」は、Ｓ−ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
「Ｒ−ｃＥｔヌクレオシド」は、Ｒ−ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
「非二環式ヌクレオシド」は、二環式糖以外の糖を有するヌクレオシドを意味する。ある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドは天然の糖を含む。ある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドは修飾糖を含む。ある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。ある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。
「β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド」は天然のＤＮＡヌクレオシドを意味する。「β−Ｄ−リボヌクレオシド」は天然のＲＮＡヌクレオシドを意味する。「ＬＮＡヌクレオシド」は、ＬＮＡ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
「ＥＮＡヌクレオシド」は、ＥＮＡ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
「モチーフ」は、オリゴヌクレオチドにおける修飾及び／若しくは非修飾の核酸塩基、糖並びに／またはヌクレオシド間結合のパターンを意味する。ある種の実施形態では、モチーフはヌクレオシドパターンである。
「ヌクレオシドパターン」は、修飾オリゴヌクレオチドにおけるヌクレオシド修飾のパターンまたはその領域を意味する。ヌクレオシドパターンは、オリゴヌクレオチドにおけるヌクレオシド修飾の構成を説明するモチーフである。
「完全修飾オリゴヌクレオチド」は、各核酸塩基、各糖及び／または各ヌクレオシド間結合が修飾されていることを意味する。
「均一修飾オリゴヌクレオチド」は、修飾オリゴヌクレオチド全体で各核酸塩基、各糖及び／または各ヌクレオシド間結合が同じ修飾を有することを意味する。
「安定化修飾」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合により結合された２’−デオキシヌクレオシドによって与えられる安定性に比べて、ヌクレアーゼの存在下で、修飾オリゴヌクレオチドに強い安定性を与えるヌクレオシドの修飾を意味する。例えば、ある種の実施形態では、安定化修飾は安定化ヌクレオシド修飾である。ある種の実施形態では、安定化修飾はヌクレオシド間結合修飾である。
「安定化ヌクレオシド」は、２’−デオキシヌクレオシドにより与えられる安定性に比べて、オリゴヌクレオチドに強いヌクレアーゼ安定性を与えるヌクレオシド修飾を意味する。一実施形態では、安定化ヌクレオシドは２’−修飾ヌクレオシドである。
「安定化ヌクレオシド間結合」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合により与えられる安定性に比べて、オリゴヌクレオチドに改善されたヌクレアーゼ安定性を与えるヌクレオシド間結合を意味する。一実施形態では、安定化ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
「被検体」は、処置または治療のために選択されたヒトまたは非ヒト動物を意味する。ある種の実施形態では、非ヒト動物の被検体はイヌである。
「それを必要とする被検体」は、治療または処置を必要とすると判定される被検体を意味する。
「〜を有する疑いがある被検体」は、疾患の１つまたは複数の臨床徴候を示す被検体を意味する。
「投与すること」は、被検体に医薬品または組成物を与えることを意味し、以下に限定されるものではないが、医療専門家による投与及び自己投与を含む。
「非経口投与」は、注射または注入による投与を意味する。非経口投与は、以下に限定されるものではないが、皮下投与、静脈内投与および筋肉内投与を含む。
「皮下投与」は、皮膚直下の投与を意味する。
「静脈内投与」は、静脈への投与を意味する。
「心臓内投与」は、心臓への投与を意味する。ある種の実施形態では、心臓内投与はカテーテルによって行われる。ある種の実施形態では、心臓内投与は直視下心臓手術によって行われる。
「経肺投与」は、肺への投与を意味する。
「併用投与される」は、２つの薬理効果が患者に同時に現れる任意の方法で２種以上の薬が併用投与されることをいう。併用投与は、２種の薬を単一の医薬組成物で投与したり、同じ剤形で投与したり、または同じ投与経路で投与したりする必要はない。２種の薬の作用自体は、同時に現れる必要はない。効果は一定期間重複するだけでよく、同じ長さを持つ必要はない。
「持続期間」は、活性またはイベントが継続する期間を意味する。ある種の実施形態では、処置の持続期間は、医薬品または医薬組成物の用量が投与される期間である。
「治療」は、疾患の処置方法を意味する。ある種の実施形態では、治療は、以下に限定されるものではないが、化学療法、放射線治療、または医薬品の投与を含む。
「処置」は、疾患の治癒または軽減のために使用される１つまたは複数の特定の手順を適用することを意味する。ある種の実施形態では、特定の手順は、１つまたは複数の医薬品の投与である。
「軽減」は、状態または疾患の少なくとも１つの指標の重症度を低下させることを意味する。ある種の実施形態では、軽減は、状態または疾患の１つまたは複数の指標の進行を遅延させるまたは遅らせることを含む。指標の重症度は、当業者に公知の主観的基準または客観的基準により判定することができる。
「〜を発症するリスクがある」は、被検体がある状態または疾患を発症しやすい状態にあることを意味する。ある種の実施形態では、状態または疾患を発症するリスクがある被検体は、その状態または疾患の１つまたは複数の症状を示すものの、その状態または疾患と診断されるのに十分な数の症状を示さない。ある種の実施形態では、状態または疾患を発症するリスクがある被検体は、状態または疾患の１つまたは複数の症状を示すものの、状態または疾患と診断するのに必要とされるより少ない程度で示す。
「〜の発症を予防する」は、疾患または状態を発症するリスクがある被検体の状態または疾患の発生を予防することを意味する。ある種の実施形態では、疾患または状態を発症するリスクがある被検体は、疾患または状態を既に有する被検体が受けた処置と同様の処置を受ける。
「〜の発症の遅延させる」は、疾患または状態を発症するリスクがある被検体の状態または疾患の発生を遅延させることを意味する。ある種の実施形態では、疾患または状態を発症するリスクがある被検体は、疾患または状態を既に有する被検体が受けた処置と同様の処置を受ける。
「治療薬」は、疾患の治癒、軽減または予防に使用される医薬品を意味する。
「用量」は、１回の投与で与えられる医薬品の所定量を意味する。ある種の実施形態では、用量を２以上のボーラス、錠剤または注射で投与してもよい。例えば、皮下投与が所望であるある種の実施形態では、所望の用量は、１回の注射で容易に与えられない量を必要とする。そうした実施形態では、所望の用量を達成するため２回以上の注射を使用してもよい。ある種の実施形態では、用量は、２回以上の注射で投与して個体の注射部位反応を最小限に抑えてもよい。ある種の実施形態では、用量を緩速注入として投与する。
「投薬単位」は、医薬品が与えられる形態を意味する。ある種の実施形態では、投薬単位は、凍結乾燥オリゴヌクレオチドを含むバイアルである。ある種の実施形態では、投薬単位は、再溶解したオリゴヌクレオチドを含むバイアルである。
「治療有効量」は、動物に治療上の利益を与える医薬品の量をいう。
「医薬組成物」は、医薬品など個体への投与に好適な物質の混合物を意味する。例えば、医薬組成物は無菌水溶液を含んでもよい。
「医薬品」は、被検体に投与すると治療効果を与える物質を意味する。
「医薬活性成分」は、所望の作用を与える医薬組成物中の物質を意味する。
「臓器機能の改善」は、正常範囲に向けた臓器機能の変化を意味する。ある種の実施形態では、臓器機能は、被検体の血液または尿中に見られる分子の測定により評価される。例えば、ある種の実施形態では、肝機能の改善は、肝トランスアミナーゼの血中レベルの低下により測定される。ある種の実施形態では、腎機能の改善は、血中尿素窒素の低下、タンパク尿の減少、アルブミン尿の低下等により測定される。
「許容可能な安全性プロファイル」は、臨床的に許容できる範囲内にある副作用のパターンを意味する。
「副作用」は、処置に起因する所望の作用以外の生理反応を意味する。ある種の実施形態では、副作用は、以下に限定されるものではないが、注射部位反応、肝機能検査異常、腎機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常及びミオパチーを含む。こうした副作用は直接的に検出しても、または間接的に検出してもよい。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベルの上昇から、肝毒性または肝機能異常が示唆されることがある。例えば、ビリルビンの増加から、肝毒性または肝機能異常が示唆されることがある。
「注射部位反応」は、個体の注射部位における皮膚の炎症または異常な発赤を意味する。
「被検体のコンプライアンス」は、推奨または処方された治療が被検体により遵守されることを意味する。
「遵守する」は、被検体が推奨された治療を遵守することを意味する。
「推奨された治療」は、疾患を処置、軽減、遅延または予防するために医療専門家により推奨された処置を意味する。
概要
ｍｉＲ−２１は、細胞分化、増殖、アポトーシス及びマトリックス代謝回転など種々の細胞プロセスと関連する、広範に発現するマイクロＲＮＡである。加えて、ｍｉＲ−２１は、複数の疾患と関連している。ｍｉＲ−２１は、癌において上方制御されることが多く、いくつかの癌動物モデルにおいてｍｉＲ−２１の阻害から、腫瘍増殖が抑制されることが立証された。心肥大動物モデルにおいてｍｉＲ−２１の阻害から、心疾患におけるｍｉＲ−２１の役割が立証された。心線維症、腎線維症及び肺線維症の動物モデルでは、線維症における役割も立証された。組織移植モデルにおけるｍｉＲ−２１阻害の研究からは、ｍｉＲ−２１の阻害が創傷治癒を促進することが証明された。従って、ｍｉＲ−２１の阻害剤は、種々の研究及び臨床の場で有用である。
ｍｉＲ−２１の強力な阻害剤を同定するため、多くの抗ｍｉＲ−２１化合物を設計して合成した。これらの化合物は、二環式ヌクレオシド及び非二環式ヌクレオシドの長さ、並びに数、配置及び種類が異なるものであった。最初に一連の化合物をインビトロルシフェラーゼアッセイで試験し、この試験によりインビトロ活性化合物として化合物のサブセットを同定した。次いで、これらのインビトロ活性化合物をインビボアッセイで試験して、インビボでｍｉＲ−２１の強力な阻害剤となる化合物を同定した。最初のインビトロ及びインビボスクリーニングから、新たな化合物の設計の根拠として一定の化合物を選択した。実験的に観察された構造と活性との間の相関関係（インビトロ及びインビボの両方）が、これらの新たな化合物の設計の特徴をなすように使用して、二環式及び非二環式ヌクレオシドの長さ、並びに選択及び構成を変化させた。次いで、これらの新たな化合物についてインビトロ及びインビボスクリーニングアッセイを繰り返した。また、特定の化合物については、他の特性、例えば、エキソヌクレアーゼ活性に対する感受性、溶媒中の粘度も試験した。インビトロで最も活性な化合物が必ずしもインビボで最も活性な化合物であるとは限らないこと、更にインビトロで中程度に活性な化合物の中には、インビボで高活性な化合物もあることも観察された。
本プロセスにおいてインビトロでスクリーニングした３００種近い化合物のうち、１４５種以下をインビトロルシフェラーゼアッセイで活性であることを明らかにした。これらのインビトロで活性な化合物のうち、１つのサブセットをインビボで活性あることを明らかにした。化合物を設計及びスクリーニングするこの反復プロセスを通して、二環式及び非二環式修飾の特定のパターンを有する化合物がｍｉＲ−２１の強力な阻害剤インビボであることが観察された。従って、これらの化合物は、ｍｉＲ−２１の活性により促進される細胞プロセスの調節に有用である。更に、こうした化合物は、ｍｉＲ−２１に関連する疾患の発症の処置、予防及び／または遅延にも有用である。こうした疾患は、非疾患サンプルと比較してｍｉＲ−２１の異常な高発現を特徴とすることがある。こうした疾患には、線維症、急性腎傷害、心肥大、心筋梗塞、及び癌があるが、これに限定されるものではない。加えて、本明細書に提供される組成物及び方法は、創傷治癒を促進するために使用してもよい。
ｍｉＲ−２１を標的とする特定の修飾オリゴヌクレオチド
本明細書で提供されるのは、二環式及び非二環式ヌクレオシドの特定のパターンを有する修飾オリゴヌクレオチドである。本明細書に同定されたパターンを有する修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１活性の効果的な阻害剤である。
本明細書に図示したヌクレオシドパターンは各々、５’から３’方向に示す。
ある種の実施形態では、本明細書で提供されるのは、８〜２２個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がｍｉＲ−２１（配列番号１）と相補的であり、かつ修飾オリゴヌクレオチドが５’から３’方向に以下のヌクレオシドパターンＩＩＩで少なくとも８個連続するヌクレオシドであり：
（Ｒ）Ｘ−ＮＢ−ＮＱ−ＮＱ−ＮＢ−（ＮＱ−ＮＱ−ＮＱ−ＮＢ）３−ＮＹ−ＮＺ
式中、Ｒは各々、非二環式ヌクレオシドであり；Ｘは１〜４であり；
ＮＢは各々、二環式ヌクレオシドであり；
ＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドであり；
ＮＹは各々、修飾ヌクレオシドまたは非修飾ヌクレオシドであり；かつ
ＮＺは各々、修飾ヌクレオシドである
ヌクレオシドを含む、化合物である。
ヌクレオシドパターンＩＩＩのある種の実施形態では、Ｘは１である。ヌクレオシドパターンＩＩＩのある種の実施形態では、Ｘは２である。ヌクレオシドパターンＩＩＩのある種の実施形態では、Ｘは３である。ヌクレオシドパターンＩＩＩのある種の実施形態では、Ｘは４である。
ある種の実施形態では、本明細書に提供されるのは、８〜１９個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がｍｉＲ−２１（配列番号１）と相補的であり、かつ修飾オリゴヌクレオチドが５’から３’方向に以下のヌクレオシドパターンＩＶで少なくとも８個連続するヌクレオシドであり：
ＮＭ−ＮＢ−ＮＱ−ＮＱ−ＮＢ−（ＮＱ−ＮＱ−ＮＱ−ＮＢ）３−ＮＹ−ＮＺ
式中、ＮＭは二環式ヌクレオシドではない修飾ヌクレオシドであり；
ＮＢは各々、二環式ヌクレオシドであり；
ＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドであり；
ＮＹは修飾ヌクレオシドまたは非修飾ヌクレオシドであり；かつ
ＮＺは修飾ヌクレオシドである
ヌクレオシドを含む、化合物である。
ある種の実施形態では、本明細書に提供されるのは、８〜１９個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がｍｉＲ−２１（配列番号１）と相補的であり、かつ修飾オリゴヌクレオチドが５’から３’方向に以下のヌクレオシドパターンＶで少なくとも８個連続するヌクレオシドであり：
ＮＭ−ＮＢ−（ＮＱ−ＮＱ−ＮＢ−ＮＢ）４−ＮＺ
式中、ＮＭは二環式ヌクレオシドではない修飾ヌクレオシドであり；
ＮＢは各々、二環式ヌクレオシドであり；
ＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドであり；かつ
ＮＺは修飾ヌクレオシドである
ヌクレオシドを含む、化合物である。
ある種の実施形態では、本明細書で提供されるのは、８〜１５個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がｍｉＲ−２１（配列番号１）と相補的であり、かつ修飾オリゴヌクレオチドが５’から３’方向に以下のヌクレオシドパターンＶＩで少なくとも８個連続するヌクレオシドであり：
ＮＱ−ＮＢ−ＮＢ−ＮＱ−（ＮＢ−ＮＢ−ＮＱ−ＮＱ）２−ＮＢ−ＮＱ−ＮＢ
式中、ＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドであり；かつ
ＮＢは各々、二環式ヌクレオシドである
ヌクレオチドを含む、化合物である。
ある種の実施形態では、本明細書で提供されるのは、８〜１９個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がｍｉＲ−２１（配列番号１）と相補的であり、かつ修飾オリゴヌクレオチドは５’から３’方向に以下のヌクレオシドパターンＶＩＩで少なくとも８個連続するヌクレオシドであり：
ＮＭ−（ＮＢ−ＮＭ−ＮＭ）２−ＮＭ−（ＮＢ−ＮＱ−ＮＱ−ＮＱ）２−ＮＢ−ＮＢ−ＮＺ
式中、ＮＭは各々、二環式ヌクレオシドでない修飾ヌクレオシドであり；
ＮＢは各々、二環式ヌクレオシドであり；
ＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドであり；かつ
ＮＺは修飾ヌクレオシドである
ヌクレオシドを含む、化合物である。
以下の実施形態は、ヌクレオシドパターンＩＩＩ〜ＶＩＩを含む本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかに当てはまる。
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、本明細書に記載のヌクレオシドパターンで少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個または２２個連続するヌクレオシドを含む。
本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ｍｉＲ−２１（配列番号１）と少なくとも９０％相補的である。本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ｍｉＲ−２１（配列番号１）と少なくとも９５％相補的である。本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ｍｉＲ−２１（配列番号１）と１００％相補的である。
本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、マイクロＲＮＡの１番目がオリゴヌクレオチドの３’末端核酸塩基と対形成するように、ｍｉＲ−２１と相補的である。例えば下記である。
Figure 2015519891
本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、マイクロＲＮＡの２番目がオリゴヌクレオチドの３’末端核酸塩基と対形成するように、ｍｉＲ−２１と相補的である。例えば下記である。
Figure 2015519891
本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では 修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列はｍｉＲ−２１と相補的であり、ｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して１〜３つのミスマッチを有する。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはｍｉＲ−２１と相補的であり、ｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して１つのミスマッチを有する。修飾オリゴヌクレオチドはｍｉＲ−２１と相補的であり、ｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して２つのミスマッチを有する。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは配列番号３〜６、９及び１０の何れか１つの配列を有するが、１つまたは２つの核酸塩基の変化を有する。例えば下記である。
Figure 2015519891
配列番号３〜１０において、配列中の「Ｔ」は各々独立に核酸塩基「Ｔ」でも、或いは核酸塩基「Ｕ」でもよく、かつ、何れかまたは配列番号３〜１０の配列を有する化合物は、すべてＴ、すべてＵ、或いはＵとＴとの任意の組み合わせを含んでもよいことが理解されよう。このため、本開示を通して、及び添付の配列表において配列番号３〜１０の様々な位置で「Ｔ」が存在しても、特定の核酸塩基が「Ｔ」または「Ｕ」であるかどうかについて限定するものではない。
本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、二環式ヌクレオシドは各々、ＬＮＡヌクレオシド、ｃＥｔヌクレオシド及びＥＮＡヌクレオシドから独立に選択される。ある種の実施形態では、少なくとも２個の二環式ヌクレオシドの糖部分は、互いに異なる。ある種の実施形態では、全ての二環式ヌクレオシドが互いに同じ糖部分を有する。ある種の実施形態では、二環式ヌクレオシドは各々ｃＥｔヌクレオシドである。ある種の実施形態では、二環式ヌクレオシドは各々ＬＮＡヌクレオシドである。
本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、ｃＥｔヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである。本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、ｃＥｔヌクレオシドはＲ−ｃＥｔヌクレオシドである。
本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドは各々、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、β−Ｄ−リボヌクレオシド、２’−Ｏ−メチルヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド及び２’−フルオロヌクレオシドから独立に選択される。
本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドは各々、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド及び２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから独立に選択される。
本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、少なくとも２個の非二環式ヌクレオシドは、互いに異なる糖部分を含み、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、β−Ｄ−リボヌクレオシド、２’−Ｏ−メチルヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド及び２’−フルオロヌクレオシドから独立に選択される。
本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、少なくとも２個の非二環式ヌクレオシドは、互いに異なる糖部分を含み、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド及び２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから独立に選択される。
本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドは各々独立にβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、２’−Ｏ−メチルヌクレオシド及び２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから選択される。
本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドは各々、同じ種類の糖部分を有し、β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、β−Ｄ−リボヌクレオシド、２’−Ｏ−メチルヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド及び２’−フルオロヌクレオシドから選択される。
本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。ある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドは各々２’−Ｏ−メチルヌクレオシドである。
本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドの３個以下が２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。ある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドの２個以下が２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。ある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドの１以下が２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。
本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドの１個が２’−ＭＯＥヌクレオシドであり、非二環式ヌクレオシドは互いにβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。ある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドの２個が２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、非二環式ヌクレオシドは互いにβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。ある種の実施形態では、非二環式ヌクレオシドの３個が２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、非二環式ヌクレオシドは互いにβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。
本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、最も５’側の非二環式ヌクレオシド及び最も３’側の非二環式ヌクレオシドは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり、非二環式ヌクレオシドは互いにβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。
ヌクレオシドパターンＩＩＩのある種の実施形態では、Ｒは二環式ヌクレオシドでない修飾ヌクレオシドであり；かつｘは１である。ヌクレオシドパターンＩＩＩのある種の実施形態では、Ｒは二環式ヌクレオシドでない修飾ヌクレオシドであり；ｘは１であり；かつＮＱは各々、非修飾ヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＩＩＩのある種の実施形態では、Ｒは二環式ヌクレオシドでない修飾ヌクレオシドであり；ｘは１であり；ＮＱは各々、非修飾ヌクレオシドであり；ＮＢは各々、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド及びＬＮＡヌクレオシドから独立に選択され；かつＮＹはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド及びＬＮＡヌクレオシドから選択される。ヌクレオシドパターンＩＩＩのある種の実施形態では、Ｒは二環式ヌクレオシドでない修飾ヌクレオシドであり；ｘは１であり；かつＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＩＩＩのある種の実施形態では、Ｒは二環式ヌクレオシドでない修飾ヌクレオシドであり；ｘは１であり；ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；ＮＢは各々、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド及びＬＮＡヌクレオシドから独立に選択され；かつＮＹはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド及びＬＮＡヌクレオシドから選択される。ヌクレオシドパターンＩＩＩのある種の実施形態では、Ｒは二環式ヌクレオシドでない修飾ヌクレオシドであり；ｘは１であり；ＮＱは各々、非修飾ヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；かつＮＹはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド及びＳ−ｃＥｔヌクレオシドから選択される。ヌクレオシドパターンＩＩＩのある種の実施形態では、Ｒは二環式ヌクレオシドでない修飾ヌクレオシドであり；ｘは１であり；ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；かつＮＹはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド及びＳ−ｃＥｔヌクレオシドから選択される。ある種の実施形態では、パターンＩＩＩの修飾オリゴヌクレオチドは配列番号３〜１０から選択される核酸塩基配列を有し、配列中のＴは各々Ｔ及びＵから独立に選択される。
ヌクレオシドパターンＩＶのある種の実施形態では、ＮＭは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々独立にＳ−ｃＥｔヌクレオシド及びＬＮＡヌクレオシドから選択され；ＮＱは各々独立にβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド及び２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから選択され；ＮＹは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド、ＬＮＡヌクレオシド及びβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドから選択され；かつＮＺは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、ＬＮＡヌクレオシド及びＳ−ｃＥｔヌクレオシドから選択される。ヌクレオシドパターンＩＶのある種の実施形態では、ＮＭは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々独立にβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド及び２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから選択され；ＮＹは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド及びβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドから選択され；かつＮＺは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド及びＳ−ｃＥｔヌクレオシドから選択される。ヌクレオシドパターンＩＶのある種の実施形態では、ＮＭは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；ＮＹはＳ−ｃＥｔヌクレオシドであり；かつＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである。ある種の実施形態では、パターンＩＶの修飾オリゴヌクレオチドは配列番号３〜１０から選択される核酸塩基配列を有し、配列中のＴは各々独立にＴ及びＵから選択される。
ヌクレオシドパターンＶのある種の実施形態では、ＮＭは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々独立にＳ−ｃＥｔヌクレオシド及びＬＮＡヌクレオシドから選択され；ＮＱは各々独立にβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド及び２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから選択され；かつＮＺは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、ＬＮＡヌクレオシド及びＳ−ｃＥｔヌクレオシドから選択される。ヌクレオシドパターンＶのある種の実施形態では、ＮＭは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；かつＮＺは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド及びＳ−ｃＥｔヌクレオシドから選択される。ヌクレオシドパターンＶのある種の実施形態では、ＮＭは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；かつＮＺは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。ある種の実施形態では、パターンＶの修飾オリゴヌクレオチドは配列番号３〜１０から選択される核酸塩基配列を有し、配列中のＴは各々独立にＴ及びＵから選択される。
ヌクレオシドパターンＶＩのある種の実施形態では、ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；かつＮＱは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＶＩのある種の実施形態では、ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；かつＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである。ある種の実施形態では、パターンＶＩの修飾オリゴヌクレオチドは配列番号５及び７から選択される核酸塩基配列を有し、配列中のＴは各々独立にＴ及びＵから選択される。
ヌクレオシドパターンＶＩＩのある種の実施形態では、ＮＭは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々独立に２’−Ｏ−メチルヌクレオシド及びβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドから選択され；かつＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシド及び２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから選択される。ヌクレオシドパターンＶＩＩのある種の実施形態では、ＮＭは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；かつＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＶＩＩのある種の実施形態では、ＮＭは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々独立に２’−Ｏ−メチルヌクレオシド及びβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドから選択され；かつＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである。ヌクレオシドパターンＶＩＩのある種の実施形態では、ＮＭは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；ＮＱは各々独立に２’−Ｏ−メチルヌクレオシド及びβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドから選択され；かつＮＺは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである。ある種の実施形態では、パターンＶＩＩの修飾オリゴヌクレオチドは配列番号３〜１０から選択される核酸塩基配列を有し、配列中のＴは各々独立にＴ及びＵから選択される。
ある種の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、表１に示すような核酸塩基配列及び修飾（即ち、「構造」）の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個または少なくとも１９個連続するヌクレオシドを含む。ある種の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、表１の諸構造から選択される構造を有する。ヌクレオシド修飾は以下の通り表記される。即ち、後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを表し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを表し；後に下付き文字「Ｍ」があるヌクレオシドは２’−Ｏ−メチルヌクレオシドを表し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを表す。ヌクレオシド間結合は各々ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。上付き文字「Ｍｅ」は、ヌクレオシドの塩基部の５−メチル基を表す。
Figure 2015519891
Figure 2015519891
Figure 2015519891
本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかのある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個または２２個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはヌクレオシドパターンＩＩＩに記載されたヌクレオシドパターンで少なくとも８個連結したヌクレオシドを含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ヌクレオシドパターンＩＶに記載されたヌクレオシドパターンで少なくとも８個連結したヌクレオシドを含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ヌクレオシドパターンＶに記載されたヌクレオシドパターンで少なくとも８個連結したヌクレオシドを含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ヌクレオシドパターンＶＩに記載されたヌクレオシドパターンで少なくとも８個連結したヌクレオシドを含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ヌクレオシドパターンＶＩＩに記載されたヌクレオシドパターンで少なくとも８個連結したヌクレオシドを含む。
ある種の実施形態では、本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかを有する修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合を含む。ある種の実施形態では、ヌクレオシド間結合は各々、修飾ヌクレオシド間結合である。ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの核酸塩基がシトシンである核酸塩基配列を有する。ある種の実施形態では、少なくとも１つのシトシンは５−メチルシトシンである。ある種の実施形態では、シトシンは各々、５−メチルシトシンである。ある種の実施形態では、少なくとも１個のヌクレオシドは、修飾核酸塩基を含む。
修飾オリゴヌクレオチドは、修飾オリゴヌクレオチド全体の様々な位置でエキソヌクレアーゼ及び／またはエンドヌクレアーゼによる切断を受けてもよい。こうした酵素切断産物は、ｍｉＲ−２１阻害活性を保持し得、従って活性代謝物と見なされる。このため、本明細書に記載の方法に修飾オリゴヌクレオチドの代謝産物を使用してもよい。
ある種の実施形態では、ｍｉＲ−２１を標的とする修飾オリゴヌクレオチドは表２Ａから選択されるヌクレオシドパターンを有し、ＮＭは二環式ヌクレオシドでない修飾ヌクレオシドであり；ＮＢは各々、二環式ヌクレオシドであり；ＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドであり；ＮＹは各々、修飾ヌクレオシドまたは非修飾ヌクレオシドであり；かつＮＺは修飾ヌクレオシドである。
Figure 2015519891
ある種の実施形態では、ｍｉＲ−２１を標的とする修飾オリゴヌクレオチドは、表２Ｂから選択されるヌクレオシドパターンを有し、ＮＭは二環式ヌクレオシドでない修飾ヌクレオシドであり；ＮＢは各々、二環式ヌクレオシドであり；ＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドであり；かつＮＺは修飾ヌクレオシドである。
Figure 2015519891
ある種の実施形態では、ｍｉＲ−２１を標的とする修飾オリゴヌクレオチドは、表２Ｃから選択されるヌクレオシドパターンを有し、ＮＢは各々、二環式ヌクレオシドであり；かつＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドである。
Figure 2015519891
ある種の実施形態では、ｍｉＲ−２１を標的とする修飾オリゴヌクレオチドは、表２Ｄから選択されるヌクレオシドパターンを有し、ＮＭは二環式ヌクレオシドでない修飾ヌクレオシドであり；ＮＢは各々、二環式ヌクレオシドであり；ＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドであり；かつＮＺは修飾ヌクレオシドである。
Figure 2015519891
ある種の実施形態では、ｍｉＲ−２１を標的とする修飾オリゴヌクレオチドは、表３Ａ、表３Ｂ、表３Ｃ、表３Ｄ、表３Ｄまたは表３Ｅから選択されるヌクレオシドパターン及び核酸塩基配列を有する。後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを表す。後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを表す。後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを表す。ヌクレオシド間結合は各々ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。核酸塩基は５’位にメチル基を含んでも、或いは含まなくてもよい。
Figure 2015519891
Figure 2015519891
Figure 2015519891
Figure 2015519891
Figure 2015519891
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１９個を超える連結したヌクレオシドからなり、本明細書に記載のヌクレオシドパターンを含む。そのヌクレオシドパターンに記載されたヌクレオシドの他に存在するヌクレオシドは、修飾されているか、或いは非修飾であるかの何れかである。例えば、２１個連結したヌクレオシドからなり、かつｍｉＲ−２１と相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドは、１９個連結したヌクレオシド長であるヌクレオシドパターンＩＶ、ＶまたはＶＩＩを有しても、或いは１５ヌクレオシド長であるヌクレオシドパターンＶＩを有しても、或いは１９〜２２個のヌクレオシド長を有し得るヌクレオシドパターンＩＩＩを有してもよい。他のヌクレオシドは修飾糖部分からなっていても、または非修飾糖部分からなっていてもよい。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１９個連結したヌクレオシドからなり、かつ本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかを含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２０個連結したヌクレオシドからなり、かつ本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかを含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２１個連結したヌクレオシドからなり、かつ本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかを含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２２個連結したヌクレオシドからなり、かつ本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかを含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２３個連結したヌクレオシドからなり、かつ本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかを含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２４個連結したヌクレオシドからなり、かつ本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかを含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、２５個連結したヌクレオシドからなり、かつ本明細書に記載のヌクレオシドパターンの何れかを含む。
本発明の特定の使用
ｍｉＲ−２１活性の調節
本明細書に提供する化合物は、ｍｉＲ−２１活性の強力で特異的な阻害剤であり、従ってｍｉＲ−２１活性の調節に有用である。
マイクロＲＮＡは、メッセンジャーＲＮＡに結合してその発現を抑制する。場合によっては、マイクロＲＮＡ活性の阻害がメッセンジャーＲＮＡの抑制解除を引き起こす、即ちメッセンジャーＲＮＡの発現がＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルで増加する。本明細書で提供されるのは、ｍｉＲ−２１制御転写物の発現を調節する方法であって、本発明の化合物と細胞を接触させることを含み、化合物は、ｍｉＲ−２１と相補的な配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、方法である。
ある種の実施形態では、ｍｉＲ−２１制御転写物はＹＯＤ１であり、ｍｉＲ−２１の阻害の結果、ＹＯＤ１のｍＲＮＡのレベルが上昇する。ある種の実施形態では、ｍｉＲ−２１制御転写物ＰＰＡＲ−αであり、ｍｉＲ−２１の阻害の結果、ＰＰＡＲ−αのｍＲＮＡのレベルが上昇する。ある種の実施形態では、ｍｉＲ−２１制御転写物はＲＮＦ１６７である。
ある種の実施形態では、ｍｉＲ−２１制御転写物はＳＰＧ２０である。ある種の実施形態では、肝臓におけるｍｉＲ−２１の阻害の結果、ＳＰＧ２０のｍＲＮＡのレベルが上昇する。
ある種の実施形態では、本発明の化合物と細胞を接触させた後、ｍｉＲ−２１制御転写物のｍＲＮＡレベルが少なくとも１．５倍上昇することが観察される。ある種の実施形態では、本発明の化合物と細胞を接触させた後、ｍｉＲ−２１制御転写物のｍＲＮＡレベルが少なくとも２．０倍上昇することが観察される。ある種の実施形態では、マイクロＲＮＡ制御転写物のｍＲＮＡレベルが少なくとも２．５倍上昇する。ある種の実施形態では、マイクロＲＮＡ制御転写物のｍＲＮＡレベルが少なくとも３．０倍上昇する。ある種の実施形態では、マイクロＲＮＡ制御転写物のｍＲＮＡレベルが少なくとも３．５倍上昇する。ある種の実施形態では、マイクロＲＮＡ制御転写物のｍＲＮＡレベルが少なくとも４．０倍上昇する。ある種の実施形態では、マイクロＲＮＡ制御転写物のｍＲＮＡレベルが少なくとも４．５倍上昇する。ある種の実施形態では、マイクロＲＮＡ制御転写物のｍＲＮＡレベルが少なくとも５．０倍上昇する。
ある種のマイクロＲＮＡは、いくつかのメッセンジャーＲＮＡ、場合によっては数百のメッセンジャーＲＮＡを標的とすることが知られている。単一のマイクロＲＮＡの活性の阻害が、多くのマイクロＲＮＡ標的の発現に検出可能な変化を引き起こす場合がある。本明細書で提供されるのは、複数のｍｉＲ−２１制御転写物を調節する方法であって、ｍｉＲ−２１の活性を阻害することを含み、広範な遺伝子発現の変化が起こる、方法である。
ある種の実施形態では、本発明の化合物によるｍｉＲ−２１の阻害後、表現型の変化が観察されることがある。こうした表現型の変化は、ｍｉＲ−２１制御転写物の発現における検出可能な変化を伴って或いは伴わずに起こることがある。
疾患および障害
器官若しくは組織の損傷または傷害に対する正常な生理反応では、生存に必要な基本的な生物学的プロセスである損傷組織の修復が行われる。修復プロセスにおいて、異物、細菌及び損傷組織が排除された後、線維芽細胞が傷害部位に遊走し、新しい細胞外マトリックスに沈着し、その後細胞外マトリックスは組織リモデリング期の一環として構造的に組織化される。
線維芽細胞は、結合組織に見られる最も一般的な細胞であり、細胞外マトリックスを支持し、正常な創傷治癒において重要な役割を果たすレティキュリン及び他の弾性線維の合成に関わっている（Ｓｅｍｐｏｗｓｋｉ，Ｇ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，２００２．Ｗｏｕｎｄ Ｒｅｐａｉｒ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．３：１２０−１３１）。線維芽細胞は、傷害組織の修復並びにその構造及び機能の回復に必要なコラーゲンの沈着に関わっている。創傷治癒プロセスにおいて、活性化線維芽細胞は、コラーゲンを分泌するα−ＳＭＡ＋線維芽細胞である筋線維芽細胞に変換される。創傷治癒プロセスの初期段階において、筋線維芽細胞はマトリックスメタロプロテアーゼを産生し、このマトリックスメタロプロテアーゼが基底膜を破壊するため、炎症細胞は傷害部位に効率的にリクルートすることができる。傷害修復の後期段階において、筋線維芽細胞は、創縁が創中央に向かって遊走するプロセス、創収縮を促進する。このように、線維芽細胞活性は、正常な治癒プロセスに不可欠である。
正常な傷害修復プロセスに関与する線維芽細胞は、局所の間葉系細胞に由来するか、骨髄からリクルートされるか、または上皮間葉転換により誘導されることがある。上皮間葉転換（ＥＭＴ）とは、細胞表現型の一連の急速な変化をいい（Ｋａｌｌｕｒｉ，Ｒ．ａｎｄ Ｎｅｉｌｓｏｎ，Ｅ．Ｇ．２００３．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１２：１７７６−１７８４）、この過程で静止した上皮細胞が細胞間接触を失い、間葉系の特徴を獲得し、遊走性の表現型を発現する。常在性線維芽細胞、浸潤性の線維細胞または周皮細胞様細胞も傷害修復プロセスに関与することがある。
条件によっては、組織修復プロセスが過剰に起こり、細胞外マトリックス（ＥＣＭ）成分が蓄積しすぎてＥＣＭのリモデリングが著しくなり、これが永続的な線維性瘢痕の形成を助長する。この過剰な線維性結合組織の形成（線維症と呼ばれるプロセス）は、組織構造の異常な変化を助長し、正常な臓器機能を阻害する。
線維症は身体のどのような部位にも起こり得、種々の物理的傷害、代謝傷害、虚血傷害、感染傷害、炎症性傷害または免疫学的傷害に起因する可能性がある。線維症の解剖学的位置、起源及び臨床症状は多様であり得るが、あらゆる種類の線維症に共通の重要な病理学的特徴がある。線維症が起こる位置に関係なく、線維化過程は線維化促進サイトカインの分泌及び活性化、間葉系細胞集団の増殖及び活性化、並びに細胞外マトリックスの合成及び組織化を伴い、最終的には正常組織を破壊する。線維症は、未処置で放置すると、組織のなかでも特に心臓、肺、腎臓、肝臓、眼及び皮膚の種々の状態に至る恐れがある。
本明細書で実証されるように、線維症のモデルを用いてｍｉＲ−２１を阻害するとコラーゲン沈着が減少した。従って、本明細書で提供されるのは、線維症の発症を処置、予防及び／または遅延させる方法であって、ｍｉＲ−２１と相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を被検体に投与することを含む、方法である。本明細書で更に提供されるのは、線維症の発症を処置、予防及び／または遅延させるための組成物であって、ｍｉＲ−２１と相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を含む、組成物である。被検体は、線維症の診断を受けたことがあってもよいし、線維症を発症するリスクがであってもよいし、或いは線維症を有する疑いがあってもよい。
ある種の実施形態では、線維症の被検体は、腎線維症、肺線維症、肝線維症、心線維症、皮膚線維症、加齢に伴う線維症、脾線維症、強皮症または移植後の線維症を有する。
腎臓の多くの疾患または異常は、線維症の存在を特徴とする。従って、本明細書に提供する化合物は、線維症の存在を特徴とする任意の腎疾患の発症の処置、軽減、予防及び／または遅延に有用である。ある種の実施形態では、線維症の被検体は、腎臓の疾患または状態を有する。ある種の実施形態では、線維症を発症するリスクがある被検体は、腎臓の疾患または状態を有する。ある種の実施形態では、線維症を有する疑いがある被検体は、腎臓の疾患または状態を有する。従って、本明細書に提供されるのは、線維症を有する、それを発症するリスクがある、またはその疑いがある被検体を処置する方法であって、被検体が腎臓の疾患または状態を有する、方法である。腎臓の疾患または状態は、以下に限定されるものではないが、糸球体疾患、尿細管間質線維症、ＩｇＡ腎症、間質線維症／尿細管萎縮、糸球体硬化症、糸球体腎炎、アルポート症候群、糖尿病、特発性巣状分節性糸球体硬化症、膜性腎症、虚脱性糸球体症、慢性再発性腎感染症、糖尿病、糖尿病性ニューロパチー、慢性再発性腎感染症、高血圧、全身性高血圧、糸球体内高血圧または末期腎臓病の１つまたは複数であってもよい。
本明細書で提供されるのは、被検体の腎機能を改善するための方法である。ある種の実施形態では、本明細書で提供されるのは、末期腎臓病の発症を遅延及び／または予防するための方法である。ある種の実施形態では、本明細書で提供されるのは、被検体に透析が必要とされるまでの時間を遅延させるための方法である。ある種の実施形態では、本明細書で提供されるのは、被検体に腎移植が必要とされるまでの時間を遅延させるための方法である。ある種の実施形態では、本明細書で提供されるのは、被検体の腎機能の障害を遅延させるための方法である。
慢性腎疾患は、線維症の存在を特徴とすることがある。従って、ある種の実施形態では、腎臓の疾患または状態は慢性腎疾患である。ある種の実施形態では、被検体は慢性腎疾患を発症するリスクがある。ある種の実施形態では、急性腎傷害を有する被検体は線維症及び／または慢性腎疾患を発症するリスクがある。従って、本明細書に提供される組成物及び方法は、線維症及び／または慢性腎疾患の発症を予防または遅延させるために、急性腎傷害を有する被検体に投与してもよい。
ある種の実施形態では、線維症の被検体は、腎臓の急性または反復性外傷に起因する腎線維症を有する。外傷は、手術、化学療法、放射線処置、同種移植片拒絶、慢性移植拒絶反応及び急性移植拒絶反応に起因する場合がある。
ある種の実施形態では、腎線維症は、急性または慢性曝露後に腎毒性の恐れがある任意の薬への曝露に起因することがある。こうした薬には、以下に限定されるものではないが、鎮痛薬、非ステロイド系抗炎症剤、抗生物質、リチウム、シクロスポリン、メサラジン、造影剤、化学療法剤などの医薬品；以下に限定されるものではないが、重金属などの職業上の毒素；及び以下に限定されるものではないが、重金属（例えばカドミウム、塩化第二水銀）または工場における腎毒素（例えばアリストロキア酸）などの環境毒素がある。
本明細書で提供されるのは、アルポート症候群を処置するための方法であって、アルポート症候群を有するまたは有する疑いがある被検体にｍｉＲ−２１と相補的な修飾オリゴヌクレオチドを投与することを含む、方法である。ある種の実施形態では、被検体は、修飾オリゴヌクレオチドの投与前にアルポート症候群を有すると診断されたことがある。アルポート症候群の診断は、以下に限定されるものではないが、被検体の家族歴、臨床的特徴（以下に限定されるものではないが、タンパク尿、アルブミン尿、血尿、ＧＦＲの異常、難聴及び／または眼球の変化）及び組織生検の結果などのパラメーターの評価により達成することができる。腎生検は、ＩＶ型コラーゲンα−３鎖、α−４鎖及びα−５鎖の有無について検査してもよい。加えて、糸球体の構造的変化は、腎生検材料の電子顕微鏡観察により検出してもよい。皮膚生検においてＩＶ型コラーゲンα−５鎖の存在を検査してもよく、α−５鎖は通常皮膚に存在するが、Ｘ連鎖型アルポート症候群の男性被検体に存在しないのが一般的である。アルポート症候群の診断は、Ｃｏｌ４ａ３遺伝子、Ｃｏｌ４ａ４遺伝子またはＣｏｌ４ａ５遺伝子の１つまたは複数の突然変異についてスクリーニングすることを更に含んでもよい。
ある種の実施形態では、アルポート症候群を有する被検体の腎臓においてｍｉＲ−２１のレベルが増加している。ある種の実施形態では、投与前に、被検体は、腎臓におけるｍｉＲ−２１のレベルが増加していると判定される。ｍｉＲ−２１レベルは、腎生検材料から測定することができる。
肝臓の多くの疾患または異常は、線維症の存在を特徴とする。従って、ある種の実施形態では、線維症の被検体は肝臓の疾患または状態を有する。ある種の実施形態では、線維症を発症するリスクがある被検体は肝臓の疾患または状態を有する。ある種の実施形態では、線維症を有する疑いがある被検体は肝臓の疾患または状態を有する。従って、本明細書に提供されるのは、線維症を有する、それを発症するリスクがある、またはその疑いがある被検体を処置する方法であって、被検体が肝臓の疾患または状態を有する、方法である。ある種の実施形態では、肝臓の疾患または状態は、以下に限定されるものではないが、慢性肝傷害、肝炎ウイルス感染（Ｃ型肝炎ウイルス感染症及びＢ型肝炎ウイルス感染症など）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、アルコール性肝疾患（ＡＬＤ）、アルコール性脂肪性肝炎、架橋性線維化または硬変の１つまたは複数であってもよい。ある種の実施形態では、肝臓の疾患または状態は有毒な化学物質への曝露と関連する。ある種の実施形態では、肝臓の疾患または状態は、医薬品、例えばアセトアミノフェンへの曝露に起因する。ある種の実施形態では、化学療法を受けている被検体は、肝線維症及び／または慢性肝傷害のリスクがある。
線維症の存在または程度は、肝針生検またはＦｉｂｒｏＳｃａｎ（登録商標）法など肝硬度の程度を評価する非侵襲的トランジェントエラストグラフィー（ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｅｌａｓｔｏｇｒａｐｈｙ）法により検出することができる。
線維症は、肺の多くの疾患または異常に存在することがある。従って、ある種の実施形態では、線維症の被検体は肺の疾患または状態を有する。ある種の実施形態では、線維症を発症するリスクがある被検体は肺の疾患または状態を有する。ある種の実施形態では、線維症を有する疑いがある被検体は肺の疾患または状態を有する。従って、本明細書に提供されるのは、線維症を有する、それを発症するリスクがある、またはその疑いがある被検体を処置する方法であって、被検体が肺の疾患または状態を有する、方法である。ある種の実施形態では、肺の疾患または状態は、以下に限定されるものではないが、肺線維症、特発性肺線維症または慢性閉塞性肺疾患の１つまたは複数であってもよい。ある種の実施形態では、肺線維症は、微粒子状物質、例えばシリカゲル、アスベスト、大気汚染物質またはタバコの煙に見られるようなものの吸入に起因することがある。
ある種の実施形態では、線維症は心線維症である。
ある種の実施形態では、線維症は皮膚線維症である。ある種の実施形態では、線維症は加齢に伴う線維症である。ある種の実施形態では、線維症は脾線維症である。
強皮症は、数ある症状の中でも特に線維症を特徴とする慢性自己免疫疾患である。ある種の実施形態では、線維症の被検体は強皮症を有する。ある種の実施形態では、強皮症の被検体は、皮膚の線維症に加えて内臓にも線維症を有する。
線維症は、多くの場合、移植臓器に起こり、臓器機能を喪失させ、最終的に移植臓器の慢性拒絶反応を引き起こす。移植臓器の線維症の予防または処置は、移植臓器の慢性拒絶反応を予防または遅延させることがある、即ち言い換えれば、移植臓器の機能を延長させ得る。従って、ある種の実施形態では、被検体は移植後の線維症を有する。ある種の実施形態では、移植後の線維症は移植後の腎線維症である。ある種の実施形態では、移植に関連する線維症は、移植後の肝線維症である。ある種の実施形態では、本明細書に記載の化合物を移植の前に投与する。ある種の実施形態では、本明細書に記載の化合物を移植と同時に投与する。ある種の実施形態では、本明細書に記載の化合物を移植の後に投与する。
本明細書で提供されるのは、線維増殖性障害を有する被検体を処置する方法である。ある種の実施形態では、こうした方法は、ｍｉＲＮＡまたはその前駆体と相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを、線維増殖性障害を有するまたは有する疑いがある被検体に投与する。ある種の実施形態では、ｍｉＲＮＡはｍｉＲ−２１である。
癌及び転移
多くの種類の癌においてｍｉＲ−２１の異常な高発現が立証されてきた。更に、インビトロモデル及びインビボモデルにおけるｍｉＲ−２１の阻害から、ｍｉＲ−２１の阻害剤が、癌細胞の増殖を支える細胞プロセスの阻害のほか、癌の処置に有用であることも立証されてきた。
従って、ある種の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、癌の発症の処置、予防、軽減及び／または遅延のために使用される。ある種の実施形態では、癌は肝癌、乳癌、膀胱癌、前立腺癌、骨癌、結腸癌、肺癌、脳癌、血液癌、膵癌、頭頸部癌、舌癌、胃癌、皮膚癌、甲状腺癌、神経芽細胞腫、食道癌、中皮腫、神経芽細胞腫、腎臓癌、精巣癌、直腸癌、子宮頸癌または卵巣癌である。ある種の実施形態では、肝癌は肝細胞癌である。ある種の実施形態では、肝癌は、身体の別の部分に由来する癌の転移によるものであり、例えば骨癌、結腸癌または乳癌の転移による癌である。ある種の実施形態では、脳癌は多形神経膠芽腫、乏突起星細胞腫または乏突起膠腫である。ある種の実施形態では、多形神経膠芽腫は前神経（ｐｒｏｎｅｕｒａｌ）多形神経膠芽腫、神経（ｎｅｕｒａｌ）多形神経膠芽腫、古典的（ｃｌａｓｓｉｃａｌ）多形神経膠芽腫、または中葉系（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ）多形神経膠芽腫である。ある種の実施形態では、ある種の実施形態では、血液癌は急性骨髄性白血病、急性リンパ性白血病、急性単球性白血病、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫である。ある種の実施形態では、皮膚癌はメラノーマである。ある種の実施形態では、腎臓癌は腎細胞癌である。ある種の実施形態では、乳癌は乳管上皮内癌、浸潤性管癌、トリプルネガティブ乳癌、髄様癌、管状癌及び粘液癌である。ある種の実施形態では、癌は化学療法鎖抵抗性を示す。
ある種の実施形態では、肝癌において、ｍｉＲ−２１が増加し、１つまたは複数のｍｉＲ−２１制御転写物のレベルが低下する。ある種の実施形態では、減少したｍｉＲ−２１制御転写物はＳＰＧ２０である。
ある種の実施形態では、肝癌は肝細胞癌（ＨＣＣ）である。肝細胞癌の診断は典型的には、肝臓の画像検査、例えば腹部超音波、ヘリカルコンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャンまたはｔｒｉｐｌｅ ｐｈａｓｅ ＣＴスキャンにより行うことができる。こうした画像検査は、αフェトプロテインの血中レベル及び／またはデス−γ−カルボキシプロトロンビンの血中レベルの測定と共に行ってもよい。一部の被検体では、ＣＴスキャンの代わりにＭＲＩを使用してもよい。肝臓の画像検査により、腫瘍の大きさ、数、位置、肝臓外の転移、腫瘍による肝臓の動脈及び静脈の開存性並びにまたは浸潤の評価が可能になる。こうした評価は、適切な治療的または緩和的介入の方法に関する判断に役立つ。最終診断は典型的には、針生検及び組織病理学的検査により確認される。
従って、ある種の実施形態では、肝癌は、腫瘍を検出するコンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャン後に検出される。ある種の実施形態では、肝癌は、磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）後に検出される。ある種の実施形態では、ＨＣＣは、単一の原発腫瘍を特徴する。ある種の実施形態では、ＨＣＣは、複数の原発腫瘍を特徴する。ある種の実施形態では、ＨＣＣは、浸潤性の増殖パターンを有する、境界が不明瞭な原発腫瘍を特徴する。ある種の実施形態では、ＨＣＣは、血管侵入を伴う単一の原発腫瘍である。ある種の実施形態では、ＨＣＣは、血管侵入を伴う複数の原発腫瘍を特徴する。ある種の実施形態では、ＨＣＣは１つまたは複数のリンパ節に転移している。そうしたある種の実施形態では、リンパ節は所属リンパ節である。ある種の実施形態では、ＨＣＣは１つまたは複数の遠位の組織に転移している。ある種の実施形態では、ＨＣＣは肝臓、門脈、リンパ節、副腎、骨または肺の他の領域に転移している。ある種の実施形態では、線維症が存在する。
ＨＣＣの予後の予測には、ＴＮＭ分類、Ｏｋｕｄａ分類、Ｂａｒｃｅｌｏｎａ Ｃｌｉｎｉｃ Ｌｉｖｅｒ Ｃａｎｃｅｒ（ＢＣＬＣ）、及びＣＬＩＰスコアなど多くのシステムが利用されてきた。これらの分類には各々、生存の重要な決定因子と認められてきた４つの特徴、即ち、基礎疾患の肝臓病の重症度、腫瘍の大きさ、腫瘍の隣接する構造物への拡張、及び転移の存在が組み込まれている。ＴＮＭ分類は、ＨＣＣをステージＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶまたはＶに分類する。ＢＣＬＣは、ＨＣＣをステージＡ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ｂ、Ｃ及びＤに分類し、更にＣｈｉｌｄ−Ｐｕｇｈスコアの考慮を含む。
ある種の実施形態では、肝癌をステージ１、ステージ２、ステージ３Ａ、ステージ３Ｂ、ステージ３Ｃまたはステージ４に分類する。ステージ１は、癌の大きさが２ｃｍ以下で、広がり始めていないことを特徴とする。ステージ２では、癌が肝臓の血管に影響を与えるまたは肝臓に２つ以上の腫瘍が存在する。ステージ３Ａでは、癌の大きさが５ｃｍを超えるまたは癌が肝臓近傍の血管に広がっている。ステージ３Ｂでは、癌が近くの腸または胃などの臓器に広がっているが、リンパ節までは広がっていない。ステージ３Ｃでは、癌はどのような大きさでもよいが、近くのリンパ節まで広がっている。ステージ４では、癌が肺など肝臓から更に離れた身体部位に広がっている。
肝癌の診断を強化する、肝癌のステージを判定する、または生命予後を明らかにするため、被検体の血液のバイオマーカーを使用してもよい。こうしたバイオマーカーには、血液腫瘍バイオマーカー、例えばαフェトプロテイン及びデス−γカルボキシプロトロンビンがある。そうしたある種の実施形態では、被検体は、血中αフェトプロテインが上昇している。そうしたある種の実施形態では、被検体は、血中デス−γカルボキシプロトロンビンが上昇している。
また、肝癌を有する被検体は、異常肝機能に悩まされているかもしれない。肝機能は、数ある中でも特に肝トランスアミナーゼの血中レベルを測定する肝機能検査により評価することができる。ある種の実施形態では、異常肝機能を有する被検体は、血中肝トランスアミナーゼが上昇している。血中肝トランスアミナーゼには、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）がある。ある種の実施形態では、異常肝機能を有する被検体は、血中ビリルビンが上昇している。ある種の実施形態では、被検体は、異常な血中アルブミンレベルを有する。
ある種の実施形態では、被検体の肝機能は、３分類の肝機能を定義するＣｈｉｌｄ−Ｐｕｇｈ分類方式により評価される。この分類方式では、５つのカテゴリー：ビリルビンレベル、アルブミンレベル、プロトロンビン時間、腹水及び脳症の各測定値にポイントが付与される。以下の特徴が存在するごとに１ポイントが割り当てられる：血中ビリルビンが２．０ｍｇ／ｄｌ未満；血中アルブミンが３．５ｍｇ／ｄｌ超；プロトロンビン時間の国際標準比（ＩＮＲ）が１．７未満；腹水なし；または脳症なし。以下の特徴が存在するごとに２ポイントが割り当てられる：血中ビリルビンが２〜３ｍｇ／ｄｌ；血中ビリルビンが３．５〜２．８ｍｇ／ｄｌ；プロトロンビン時間のＩＮＲが１．７〜２．３；腹水が少量から中等量；または脳症が軽度。以下の特徴が存在するごとに３ポイントが割り当てられる：ビリルビンが３．０ｍｇ／ｄｌ超；血中アルブミンが２．８ｍｇ／ｄｌ未満；プロトロンビン時間のＩＮＲが２．３超；腹水が大量から難治性；または脳症が重度。各スコアを加算し、５〜６ポイントのスコアにクラスＡを割り当て、７〜９ポイントのスコアにクラスＢを割り当て、１０〜１５ポイントのスコアにクラスＣを割り当てる、
肝癌を有する被検体は、Ｃ型慢性肝炎感染症、Ｂ型慢性肝炎感染症、非アルコール性脂肪性肝疾患若しくは硬変に以前罹患したことがあっても、また現在罹患していてもよい。Ｃ型肝炎感染症、Ｂ型肝炎感染症、非アルコール性脂肪性肝疾患若しくは硬変を伴う、及び／または、Ｃ型肝炎感染症、Ｂ型肝炎感染症、非アルコール性脂肪性肝疾患若しくは硬変に起因する肝癌を有する被検体は、本明細書に記載の方法により処置することができる。
処置に対する被検体の反応は、肝癌を診断するのと同様の検査、以下に限定されるものではないが、ＣＴスキャン、ＭＲＩ及び針生検により評価してもよい。また、処置に対する反応は、血液中のバイオマーカーを測定して処置前のバイオマーカーのレベルと比較することにより評価してもよい。
ｍｉＲ−２１は、転移のプロセスにも関連してきた。上皮間葉転換（ＥＭＴ）は正常な生理的学プロセスでは起こらないが、転移のプロセスに関連付けられてきた。腫瘍進行におけるＥＭＴの重要性は、いくつかの研究で調査されてきた（Ｇｒｅｅｎｂｕｒｇ，Ｇ．ａｎｄ Ｈａｙ，Ｅ．１９８６．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．１１５：３６３−３７９； Ｂｏｙｅｒ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，１９８９．Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０９：１４９５−１５０９； Ｕｅｈａｒａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，１９９２．Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１１７：８８９−８９４）。上皮細胞は、基底膜と呼ばれる下にある細胞外マトリックス（ＥＣＭ）によりインテグリンを介して支持されている。一方、間葉系細胞は、ＥＣＭの三次元構造に侵入し、その中を移動する能力を有する。従って、ＥＭＴは、少なくとも表面上は、正常な接着細胞の転移性表現型への変換に似ている。
本明細書で提供されるのは、転移の発症を処置、予防、軽減及び／または遅延させる方法である。転移は、癌の任意の原発部位から癌の任意の第２の部位への癌細胞の遊走に起因することがある。
急性腎傷害
急性腎傷害は腎機能が急速に失われるものであり、低血液量、トキシンへの曝露及び尿路閉塞などいくつかの原因により引き起こされることがある。急性腎傷害は線維症及び／または慢性腎疾患に進行する恐れがある。急性腎傷害のモデルでは、ｍｉＲ−２１の増加が観察されてきた。従って、ある種の実施形態では、本明細書で提供される化合物は、急性腎傷害が原因で起こる線維症の処置、予防、軽減及び／または遅延のために使用させる。ある種の実施形態では、急性腎傷害は、環境毒素などの有毒物質または癌治療薬への曝露の結果であり得る。急性腎傷害は、例えば糸球体腎炎、急性腎尿細管壊死及び急性間質性腎炎などの状態における腎臓自体の損傷による起こることもある。ある種の実施形態では、急性腎傷害は、尿路の閉塞、例えば良性前立腺肥大、腎結石、尿道カテーテルの閉塞、膀胱結石、膀胱、尿管または腎臓の悪性腫瘍に関連する尿路の閉塞により引き起こされる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される化合物は、急性腎傷害からの回復を促進するために被検体に投与される。
心臓病
ｍｉＲ−２１発現の増加はヒト心臓病で認められており、関連する動物モデルでｍｉＲ−２１を阻害すると、心線維症及び心機能が改善することが立証されてきた。従って、ある種の実施形態では、本明細書に提供する化合物を使用してもう１つの心臓病の発症を処置、予防、軽減及び／または遅延させる。ある種の実施形態では、心臓病は、心線維症、心拡大、心肥大、心拡張、肥大型心筋症、心不全、心筋梗塞後リモデリング、心筋梗塞、心筋症（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ）（例えば、肥大型心筋症、拘束型心筋症（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ）、拡張型心筋症（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ）（ＤＣＭ）、特発性拡張型心筋症（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ）、または不整脈を伴う拡張型心筋症（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ））、拡張期心不全、慢性心房細動、原発性肺高血圧症、急性呼吸窮迫症候群、ブルガダ症候群、進行性心臓伝導疾患、尿毒症性心膜炎、アントラサイクリン心筋症（ｃａｒｄｉｏｍｙｏｐａｔｈｙ）、動脈線維化、放射線治療後のリンパ管線維化、サルコイドーシス、強皮症、心内膜線維弾性症、セロトニンの過剰、心弁膜症、心房線維化、心房細動、僧帽弁疾患、高血圧、慢性心室機能不全、圧過負荷及び容量過負荷、または心筋線維症である。
細胞プロセス
本明細書で提供されるのは、線維芽細胞の増殖または活性化を低下または予防するための組成物及び方法である。また、本明細書に提供されるのは、以下に限定されるものではないが、コラーゲン、フィブロネクチン、コラゲナーゼまたは組織メタロプロテアーゼ阻害物質の合成を含む、細胞外マトリックスの合成を阻害するための組成物及び方法である。
本明細書で提供されるのは、上皮間葉転換（ＥＭＴ）に関連する細胞プロセスを調節する方法である。こうした方法は、ｍｉＲ−２１と相補的な修飾オリゴヌクレオチドからなる化合物と上皮細胞を接触させることを含む。ある種の実施形態では、本接触により、上皮細胞の線維芽細胞への転化が遅延する。ある種の実施形態では、本接触により、上皮細胞の線維芽細胞への転化が予防される。
ある種の実施形態では、本明細書に提供される化合物は、癌細胞の増殖を停止させる、遅らせるまたは低下させることができる。ある種の実施形態では、本明細書に提供される化合物は、癌細胞のアポトーシスを誘導することができる。ある種の実施形態では、本明細書に提供される化合物は、癌細胞の生存を低下させることができる。
ある種の実施形態では、上皮細胞は癌細胞である。ある種の実施形態では、本接触により、癌細胞の転移が遅延する。ある種の実施形態では、本接触により、癌細胞の転移が予防される。
ある種の臨床転帰
ある種の実施形態では、本明細書に提供される化合物または方法を投与すると、被検体において１つまたは複数の臨床的に望ましい転帰が得られる。こうした改善を使用すれば、被検体が処置に反応するのがどの程度であるかを判定することができる。
ある種の実施形態では、臨床的に望ましい転帰は線維症の軽減である。ある種の実施形態では、臨床的に望ましい転帰は、線維症が更に進行するのを遅らせることである。ある種の実施形態では、臨床的に望ましい転帰は、線維症が更に進行するのを食い止めることである。ある種の実施形態では、臨床的に望ましい転帰は線維症の減少である。ある種の実施形態では、臨床的に望ましい転帰は、線維症を有する臓器におけるコラーゲン量の減少である。
ある種の実施形態では、臨床的に望ましい転帰は、任意の器官または組織における線維症の軽減である。ある種の実施形態では、臨床的に望ましい転帰は、線維症が更に進行するのを遅らせることである。ある種の実施形態では、臨床的に望ましい転帰は、線維症が更に進行するのを食い止めることである。ある種の実施形態では、臨床的に望ましい転帰は線維症の減少である。ある種の実施形態では、臨床的に望ましい転帰は、患部臓器におけるコラーゲン量の減少である。
ある種の実施形態では、臨床的に望ましい結果は腎機能の改善である。腎機能は、以下に限定されるものではないが、被検体の血液中の血中尿素窒素の測定；被検体の血液中のクレアチニンの測定；被検体のクレアチニンクリアランスの測定；被検体のタンパク尿の測定；被検体のアルブミン：クレアチニン比の測定；被検体の糸球体濾過量の測定；被検体の尿量の測定；被検体の尿中のイヌリンクリアランスの測定；被検体の尿モル浸透圧濃度の測定；被検体の尿重量オスモル濃度の測定；被検体の血尿の測定；被検体の血液及び／もしくは尿中のシスタチンＣの測定；被検体の血液または尿中の好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）の測定；尿中の腎傷害分子−１（ｋｉｄｎｅｙ ｉｎｊｕｒｙ ｍｏｌｅｃｕｌｅ−１：ＫＩＭ−１）のｍＲＮＡレベルの測定；及び／または尿中のクラステリンレベルの測定など臨床現場で一般に行われる１つまたは複数の既知の方法により評価することができる。
ある種の実施形態では、投与により被検体の腎機能が改善される。ある種の実施形態では、投与により透析までの時間を遅延させる。ある種の実施形態では、投与により腎移植までの時間を遅延させる。ある種の実施形態では、投与により被検体の平均余命が改善される。ある種の実施形態では、投与により血尿が減少する。ある種の実施形態では、投与により血尿の発症を遅延させる。ある種の実施形態では、投与によりタンパク尿が減少する。ある種の実施形態では、投与によりタンパク尿の発症を遅延させる。
本明細書に提供される実施形態の何れかでは、ｍｉＲ−２１を標的とする修飾オリゴヌクレオチドを投与すると、被検体の１つまたは複数の腎機能のマーカーが改善される。腎機能のマーカーの改善には、以下に限定されるものではないが、被検体の血中尿素窒素の低下；被検体の血液中のクレアチニンの減少；被検体のクレアチニンクリアランスの改善；被検体のタンパク尿の減少；被検体のアルブミン：クレアチニン比の低下；被検体の糸球体濾過量の改善；被検体のイヌリンクリアランスの改善；被検体の血液中の好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）の低下；被検体の血液中のシスタチンＣの低下；及び被検体の尿量の増加がある。ある種の実施形態では、タンパク尿は微量アルブミン尿である。ある種の実施形態では、タンパク尿は顕性アルブミン尿である。
ある種の実施形態では、臨床的に望ましい転帰は肝機能の改善である。肝機能は、以下に限定されるものではないが、被検体の血液中のアラニンアミノトランスフェラーゼレベルの測定；被検体の血液中のアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼレベルの測定；被検体の血液中のビリルビンレベルの測定；被検体の血液中のアルブミンレベルの測定；被検体のプロトロンビン時間の測定；被検体の腹水の測定；及び／または被検体の脳症の測定など臨床現場で一般に行われる１つまたは複数の公知の方法により評価することができる。
ある種の実施形態では、臨床的に望ましい転帰は、肺線維症を有する被検体における肺の機能の改善である。ある種の実施形態では、被検体は特発性肺線維症を有する。肺の機能は、以下に限定されるものではないが、被検体の肺活量の測定；被検体の努力肺活量の測定；被検体の努力呼気肺活量１秒量の測定；被検体の最大呼気流量の測定；被検体の努力呼気流量の測定；被検体の最大換気量の測定；被検体の努力呼気肺活量１秒量と努力肺活量との比の判定；被検体の換気血流比の測定；被検体の窒素洗い出しの測定；被検体の１つまたは複数の肺の絶対空気量の測定；及び６分間歩行テストの実施など臨床現場で一般に行われる１つまたは複数の公知の方法により評価することができる。
ある種の実施形態では、臨床的に望ましい転帰は、心線維症を有する被検体の心機能の改善である。心機能は、以下に限定されるものではないが、被検体の心拍出量の測定；被検体の一回拍出量の測定；被検体の収縮期平均駆出速度の測定；被検体の収縮期血圧の測定；被検体の左心室駆出率の測定；被検体の一回拍出係数の判定；被検体の心係数の判定；被検体の左室内径短縮率の測定；被検体の円周方向心筋線維平均短縮速度の測定；被検体の左室流入血流速度波形の測定；被検体の肺静脈血流速波形の測定；被検体の拡張早期僧帽弁輪運動最大速度の測定など臨床現場で一般に行われる１つまたは複数の公知の方法により評価することができる。
ある種の実施形態では、臨床的に望ましい転帰は、癌を有する被検体における腫瘍数の減少及び／または腫瘍の大きさの縮小である。ある種の実施形態では、臨床的に望ましい転帰は、癌を有する被検体における癌細胞数の減少である。他の臨床的に望ましい転帰には、被検体の全生存期間の延長、及び／または被検体の無増悪生存期間の延長がある。ある種の実施形態では、本明細書に提供される化合物を投与すると、腫瘍の大きさ及び／または腫瘍数の増加が予防される。ある種の実施形態では、本明細書に提供される化合物を投与すると、転移性の進行が予防される。ある種の実施形態では、本明細書に提供される化合物を投与すると、転移性の進行が遅れるまたは停止する。ある種の実施形態では、本明細書に提供される化合物を投与すると、腫瘍の再発が予防される。ある種の実施形態では、本明細書に提供される化合物を投与すると、腫瘍転移の再発が予防される。
ある種の望ましい臨床転帰は、血中バイオマーカーの測定により評価することができる。ある種の実施形態では、本明細書に提供される化合物を投与すると、血中αフェトプロテイン及び／または血中デス−γカルボキシプロトロンビンを低下させることができる。更に、本明細書に提供される化合物を投与すると、血中ＡＬＴレベル及び／またはＡＳＴレベルの低下により証明されるような肝機能の改善をもたらすこともできる。
ある種の追加の治療剤
線維症または本明細書に記載した状態の何れかの処置は、２つ以上の治療剤を含んでもよい。従って、ある種の実施形態では、本明細書に提供されるのは、線維症を有するまたは有する疑いがある被検体を処置する方法であって、ｍｉＲ−２１と相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドの投与に加えて、少なくとも１つの治療剤を投与することを含む。
ある種の実施形態では、少なくとも１つ追加の治療剤は医薬品を含む。
ある種の実施形態では、医薬品には抗炎症薬がある。ある種の実施形態では、抗炎症薬はステロイド系抗炎症薬である。ある種の実施形態では、ステロイド抗炎症薬はコルチコステロイドである。ある種の実施形態では、コルチコステロイドはプレドニゾンである。ある種の実施形態では、抗炎症薬は非ステロイド系抗炎症剤である。ある種の実施形態では、非ステロイド系抗炎症薬はイブプロフェン、ＣＯＸ−Ｉ阻害剤またはＣＯＸ−２阻害剤である。
ある種の実施形態では、医薬品は免疫抑制薬を含む。ある種の実施形態では、免疫抑制薬はコルチコステロイド、シクロホスファミドまたはミコフェノール酸モフェチルである。
ある種の実施形態では、医薬品は抗糖尿病薬を含む。抗糖尿病薬には、ビグアナイド、グルコシダーゼ阻害剤、インスリン、スルホニル尿素、チアゾリデンジオン、ＧＬＰ−１アナログ及びＤＰＰ−ＩＶ阻害剤があるが、これに限定されるものではない。
ある種の実施形態では、医薬品はアンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）を含む。ある種の実施形態では、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬はカンデサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタンまたはエプロサルタンである。
ある種の実施形態では、医薬品はアンジオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤を含む。ある種の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤はカプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ブナゼプリル、キナプリル、ホシノプリルまたはラミプリルである。
ある種の実施形態では、別の治療として透析がある。ある種の実施形態では、別の治療は腎移植である。
ある種の実施形態では、医薬品として、利尿薬（例えばスプリオノラクトン、エプレレノン、フロセミド）、変力作用薬（例えばドブタミン、ミルリノン）、ジゴキシン、血管拡張薬、、カルシウムチャネル遮断薬、二硝酸イソソルビド、ヒドララジン、ニトレート（例えば一硝酸イソソルビド、二硝酸イソソルビド）、ヒドララジン、β遮断薬（例えばカルベジロール、メトプロロール）及びナトリウム利尿ペプチド（例えばネシリチド）があるが、これに限定されるものではない。
ある種の実施形態では、医薬品はヘパリノイドを含む。ある種の実施形態では、ヘパリノイドはペントサンポリ硫酸である。
ある種の実施形態では、医薬品は線維化シグナルに対する応答を遮断する医薬品である。
ある種の実施形態では、医薬品は抗結合組織増殖因子治療剤である。ある種の実施形態では、抗ＣＴＧＦ治療剤はＣＴＧＦに対するモノクローナル抗体である。ある種の実施形態では、医薬品は抗トランスフォーミング増殖因子β治療剤である。ある種の実施形態では、抗ＴＧＦ−β治療はＴＧＦ−βに対するモノクローナル抗体である。
ある種の実施形態では、追加の治療剤は、身体の免疫系を強化する医薬品、例えば低用量シクロホスファミド、チモスチムリン、ビタミン及び栄養補助剤（例えば、酸化防止剤、例えばビタミンＡ、Ｃ、Ｅ、βカロテン、亜鉛、セレン、グルタチオン、コエンザイムＱ−１０及びエキネシア）、並びにワクチン、例えば、多量体抗原の提示とアジュバントとを組み合わせたワクチン製剤を含む免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）であってもよい。
ある種の実施形態では、追加の治療剤は、本発明の１つまたは複数の医薬組成物の副作用を処置または軽減させるように選択される。こうした副作用には、以下に限定されるものではないが、注射部位反応、肝機能検査異常、腎機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常及びミオパチーがある。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベルの上昇から、肝毒性または肝機能異常が示唆されることがある。例えば、ビリルビンの増加から、肝毒性または肝機能異常が示唆されることがある。
追加の医薬品の別の例には、免疫グロブリン、以下に限定されるものではないが、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩｇ）；鎮痛薬（例えば、アセトアミノフェン）；サリチレート；抗生物質；抗ウイルス薬；抗真菌薬；アドレナリン作用修飾薬；ホルモン（例えば、アナボリックステロイド、アンドロゲン、エストロゲン、カルシトニン、プロゲスチン、ソマトスタチン及び甲状腺ホルモン）；免疫調節剤；筋弛緩薬；抗ヒスタミン剤；骨粗鬆症薬（例えば、ビホスホネート、カルシトニン及びエストロゲン）；プロスタグランジン、抗腫瘍薬；精神治療薬；鎮静剤；毒オークまたは毒ウルシの生成物；抗体；並びにワクチンがあるが、これに限定されるものではない。
癌の処置は、２つ以上の治療剤を含むことが多い。従って、ある種の実施形態では、本発明は、ｍｉＲ−２１と相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を被検体に投与すること、及び抗癌治療剤である少なくとも１つの追加の治療剤を投与することを含む、転移を減少または予防する方法を提供する。
ある種の実施形態では、抗癌治療は化学療法である。好適な化学療法剤には、ドセタキセル、シクロホスファミド、イホスファミド、メトトレキサート、ビンブラスチン、シスプラチン、５−フルオロウラシル、ゲムシタビン、ドキソルビシン、マイトマイシンＣ、ソラフェニブ、エトポシド、カルボプラチン、エピルビシン、イリノテカン及びオキサリプラチンがある。追加の好適な化学療法剤には、本明細書に提供されるｍｉＲ−２１を標的とする組成物以外の、癌の処置に使用されるオリゴマー化合物がある。
ある種の実施形態では、抗癌治療は放射線治療である。ある種の実施形態では、抗癌治療は腫瘍の外科的切除である。ある種の実施形態では、抗癌治療剤は、ＤＮＡ傷害剤、増殖阻害剤、葉酸代謝拮抗薬、増殖因子受容体阻害剤、血管新生阻害薬、受容体チロシンキナーゼ阻害剤、キナーゼ阻害剤、増殖因子阻害剤または細胞傷害性薬物である。
ある種の実施形態では、ＤＮＡ傷害剤は、１，３−ビス（２−クロロエチル）−１−ニトロソウレア、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、エトポシド、イダルビシン、イホスファミド、イリノテカン、ロムスチン、メクロレタミン、メルファラン、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、オキサリプラチン、テモゾロミドまたはトポテカンである。
ある種の実施形態では、葉酸代謝拮抗薬は、メトトレキサート、アミノプテリン、チミジル酸シンターゼ、セリンヒドロキシメチルトランスフェラーゼ、ホリイルポリグルタミルシンテターゼ、ｇ−グルタミルヒドロラーゼ、グリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ、ロイコボリン、アミノ−イミダゾール−カルボキサミド−リボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ、５−フルオロウラシル、または葉酸トランスポーターである。
ある種の実施形態では、増殖因子受容体は、エルロチニブまたはゲフィチニブである。
ある種の実施形態では、血管新生阻害剤は、ベバシズマブ、サリドマイド、カルボキシアミドトリアゾール、ＴＮＰ−４７０、ＣＭ１０１、ＩＦＮ−α、血小板因子−４、スラミン、ＳＵ５４１６、トロンボスポンジン、ＶＥＧＦＲアンタゴニスト、軟骨由来血管新生抑制因子、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害物質、アンジオスタチン、エンドスタチン、２−メトキシエストラジオール、テコガラン、テトラチオモリブデート、プロラクチンまたはリノミドである。
ある種の実施形態では、キナーゼ阻害剤は、ベバシズマブ、ＢＩＢＷ ２９９２、セツキシマブ、イマチニブ、トラスツズマブ、ゲフィチニブ、ラニビズマブ、ペガプタニブ、ソラフェニブ、ダサチニブ、スニチニブ、エルロチニブ、ニロチニブ、ラパチニブ、パニツムマブ、バンデタニブ、Ｅ７０８０、パゾパニブ、ムブリチニブまたはホスタマチニブである。
ある種のマイクロＲＮＡの核酸塩基配列
本明細書に記載のヌクレオシドパターンを有する修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１（配列番号１）またはその前駆体（配列番号２）と相補的な核酸塩基配列を有する。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各核酸塩基はそれぞれ対応する位置で、ｍｉＲ−２１の核酸塩基配列の核酸塩基と塩基対の形成を行うことができる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ｍｉＲ−２１配列または前駆体配列の核酸塩基配列に対して１つまたは複数のミスマッチ塩基対を有していてもよく、依然としてその標的配列にハイブリダイズすることができる。
ｍｉＲ−２１配列はｍｉＲ−２１前駆体配列内に含まれており、ｍｉＲ−２１と相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１前駆体の領域とも相補的である。
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１の長さと等しいいくつかの連結したヌクレオシドからなる。
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの連結したヌクレオシドの数は、ｍｉＲ−２１の長さより短い。いくつかの連結したヌクレオシドを有する、ｍｉＲ−２１の長さより短い修飾オリゴヌクレオチドであって、その各核酸塩基が対応する位置でｍｉＲ−２１の各核酸塩基と相補的な修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１配列の領域と完全に相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドと見なされる。例えば、１９個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、各核酸塩基が長さ２２核酸塩基のｍｉＲ−２１の対応する位置と相補的な修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１の１９個の核酸塩基領域と完全に相補的である。こうした修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１の１９個の核酸塩基部分に対して１００％の相補性を有し、ｍｉＲ−２１に対して１００％相補性を有すると考えられる。
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはシード配列と相補的な核酸塩基配列を含む、即ち修飾オリゴヌクレオチドはシード−マッチ配列を含む。ある種の実施形態では、シード配列は６量体シード配列である。そうしたある種の実施形態では、シード配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基１〜６である。そうしたある種の実施形態では、シード配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基２〜７である。そうしたある種の実施形態では、シード配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基３〜８である。ある種の実施形態では、シード配列は７量体シード配列である。そうしたある種の実施形態では、７量体シード配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基１〜７である。そうしたある種の実施形態では、７量体シード配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基２〜８である。ある種の実施形態では、シード配列は８量体シード配列である。そうしたある種の実施形態では、８量体シード配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基１〜８である。ある種の実施形態では、８量体シード配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基２〜９である。
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１またはその前駆体の核酸塩基配列に対して１つのミスマッチがある核酸塩基配列を有する。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１またはその前駆体の核酸塩基配列に対して２つのミスマッチがある核酸塩基配列を有する。そうしたある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１またはその前駆体の核酸塩基配列に対して２つ以下のミスマッチがある核酸塩基配列を有する。そうしたある種の実施形態では、ミスマッチ核酸塩基は隣接している。そうしたある種の実施形態では、ミスマッチ核酸塩基は隣接していない。
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの連結したヌクレオシドの数は、ｍｉＲ−２１の長さを超える。そうしたある種の実施形態では、追加のヌクレオシドの核酸塩基は、ｍｉＲ−２１のステムループ配列の核酸塩基と相補的である。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの連結したヌクレオシドの数は、ｍｉＲ−２１の長さより１個多い。そうしたある種の実施形態では、追加のヌクレオシドはオリゴヌクレオチドの５’末端にある。そうしたある種の実施形態では、追加のヌクレオシドはオリゴヌクレオチドの３’末端にある。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの連結したヌクレオシドの数は、ｍｉＲ−２１の長さより２個多い。そうしたある種の実施形態では、２個の追加のヌクレオシドはオリゴヌクレオチドの５’末端にある。そうしたある種の実施形態では、２個の追加のヌクレオシドはオリゴヌクレオチドの３’末端にある。そうしたある種の実施形態では、１個の追加のヌクレオシドが５’末端に位置し、１個の追加のヌクレオシドがオリゴヌクレオチドの３’末端に位置する。ある種の実施形態では、オリゴヌクレオチドの領域はｍｉＲ−２１の核酸塩基配列と完全に相補的である場合があるが、修飾オリゴヌクレオチド全体がｍｉＲ−２１と完全に相補的であるとは限らない。例えば、２４個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、ヌクレオシド１〜２２の各核酸塩基が、長さ２２核酸塩基のｍｉＲ−２１の対応する位置と相補的な修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１の核酸塩基配列と完全に相補的である２２個のヌクレオシド部分を有し、ｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して全体として約９２％相補性を有する。
ある種の修飾オリゴヌクレオチド
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは８〜３０個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１２〜３０個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１５〜３０個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１２〜２５個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１５〜２５個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１２〜１９個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１５〜１９個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１２〜１６個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１５〜１６個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１９〜２４個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２１〜２４個連結したヌクレオシドからなる。
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは８個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは９個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１０個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１１個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１２個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１３個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１４個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１５個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１６個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１７個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１８個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１９個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２０個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２１個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２２個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２３個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２４個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２５個連結したヌクレオシドからなる。
本明細書に記載した核酸塩基配列、以下に限定されるものではないが、実施例及び配列表に見られる核酸塩基配列は、核酸に対するどのような修飾とも無関係である。従って、配列番号で表される核酸は独立に、１つまたは複数の糖部分、１つまたは複数のヌクレオシド間結合、及び／または１つ若しくは複数の核酸塩基に対して１つまたは複数の修飾を含んでもよい。
本出願に添付の配列表には、各核酸塩基配列が必要に応じて「ＲＮＡ」或いは「ＤＮＡ」として示してあるが、実際には、それらの配列は任意の化学修飾の組み合わせで修飾されていてもよい。当業者であれば、修飾オリゴヌクレオチドを記載するための「ＲＮＡ」または「ＤＮＡ」のような表記は、やや恣意的なものであることを容易に理解するであろう。例えば、２’−ＯＨ糖部分及びチミン塩基を含むヌクレオシドを含む修飾オリゴヌクレオチドは、修飾糖（ＤＮＡの天然２’−Ｈに対する２’−ＯＨ）を有するＤＮＡ、または修飾塩基（ＲＮＡの天然ウラシルに対するチミン（メチル化ウラシル））を有するＲＮＡと記載することができる。
従って、本明細書に提供される核酸配列、以下に限定されるものではないが、配列表の核酸配列は、天然または修飾ＲＮＡ及び／またはＤＮＡの任意の組み合わせを含む核酸、以下に限定されるものではないが、修飾核酸塩基を有するそうした核酸を包含することを意図するものである。以下に限定されるものではないが、更に例を挙げると、核酸塩基配列「ＡＴＣＧＡＴＣＧ」を有するオリゴヌクレオチドは、修飾または非修飾に関わらず、こうした核酸塩基配列を有する任意のオリゴヌクレオチドを包含するものであり、以下に限定されるものではないが、こうした化合物は、ＲＮＡ塩基、例えば配列「ＡＵＣＧＡＵＣＧ」を有する化合物、及び「ＡＵＣＧＡＴＣＧ」などいくつかのＤＮＡ塩基といくつかのＲＮＡ塩基とを有する化合物、並びに「ＡＴｍｅＣＧＡＵＣＧ」（ｍｅＣは５−メチルシトシンを示す）など他の修飾塩基を有するオリゴヌクレオチドを含む。同様に、核酸塩基配列「ＡＵＣＧＡＵＣＧ」を有するオリゴヌクレオチドは、修飾または非修飾に関わらず、こうした核酸塩基配列を有する任意のオリゴヌクレオチドを包含するものであり、以下に限定されるものではないが、こうした化合物は、ＤＮＡ塩基、例えば配列「ＡＴＣＧＡＴＣＧ」を有する化合物、及び「ＡＵＣＧＡＴＣＧ」などいくつかのＤＮＡ塩基といくつかのＲＮＡ塩基とを有する化合物、並びに「ＡＴｍｅＣＧＡＵＣＧ」（ｍｅＣは５−メチルシトシンを示す）など他の修飾塩基を有するオリゴヌクレオチドを含む。
ある種の修飾
ある種の実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、核酸塩基、糖及び／またはヌクレオシド間結合に対して１つまたは複数の修飾を含んでもよく、従って修飾オリゴヌクレオチドである。修飾された核酸塩基、糖及び／またはヌクレオシド間結合は、望ましい特性、例えば、細胞取り込みの増大、他のオリゴヌクレオチドまたは核酸標的に対する親和性の強化、及びヌクレアーゼの存在下での安定性の増強を理由に非修飾形態と比較して選択すればよい。
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１つまたは複数の修飾ヌクレオシドを含む。そうしたある種の実施形態では、修飾ヌクレオシドは安定化ヌクレオシドである。安定化ヌクレオシドの例として糖修飾ヌクレオシドがある。
ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシドは糖修飾ヌクレオシドである。そうしたある種の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは、天然若しくは修飾複素環塩基部分及び／または天然若しくは修飾ヌクレオシド間結合を更に含んでもよく、糖修飾とは無関係な修飾を更に含んでもよい。ある種の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは、天然リボースまたは２’−デオキシ−リボースの２’炭素で糖環が修飾されている２’−修飾ヌクレオシドである。
ある種の実施形態では、２’−修飾ヌクレオシドは二環式糖部分を有する。そうしたある種の実施形態では、二環式糖部分はα配置のＤ糖である。そうしたある種の実施形態では、二環式糖部分はβ配置のＤ糖である。そうしたある種の実施形態では、二環式糖部分はα配置のＬ糖である。そうしたある種の実施形態では、二環式糖部分はβ配置のＬ糖である。
ある種の実施形態では、二環式糖部分は２’−炭素原子と４’−炭素原子との間に架橋基を含む。そうしたある種の実施形態では、架橋基は１〜８個連結したビラジカル基を含む。ある種の実施形態では、二環式糖部分は１〜４個連結したビラジカル基を含む。ある種の実施形態では、二環式糖部分は２または３個連結したビラジカル基を含む。ある種の実施形態では、二環式糖部分は、２個連結したビラジカル基を含む。こうした４’から２’の糖置換基の例には、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−Ｏ−、−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−または−Ｃ（ＲａＲｂ）−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−；４’−ＣＨ２−２’、４’−（ＣＨ２）２−２’、４’−（ＣＨ２）３−２’； ４’−（ＣＨ２）−Ｏ−２’（ＬＮＡ）；４’−（ＣＨ２）−Ｓ−２’；４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’（ＥＮＡ）；４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’（ｃＥｔ）及び４’−ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）−Ｏ−２’、並びにこれらのアナログ（例えば、２００８年７月１５日に発行された米国特許第７，３９９，８４５号明細書を参照されたい）；４’−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ３）−Ｏ−２’及びこれらのアナログ、（例えば、２００９年１月８日に公開された国際公開第２００９／００６４７８号パンフレットを参照されたい）；４’−ＣＨ２−Ｎ（ＯＣＨ３）−２’及びこれらのアナログ（例えば、２００８年１２月１１日に公開された国際公開第２００８／１５０７２９号パンフレットを参照されたい）；４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）−２’（例えば、２００４年９月２日に公開された米国特許出願公開第２００４／０１７１５７０号明細書を参照されたい）；Ｒが各々独立にＨ、保護基またはＣ１〜Ｃ１２アルキルである４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’及び４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’−；ＲがＨ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキルまたは保護基である４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’（２００８年９月２３日に発行された米国特許第７，４２７，６７２号明細書を参照されたい）；４’−ＣＨ２−Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）−２’（例えば、Ｃｈａｔｔｏｐａｄｈｙａｙａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００９，７４，１１８−１３４を参照されたい）；並びに４’−ＣＨ２−Ｃ（＝ＣＨ２）−２’及びこれらのアナログ（２００８年１２月８日に公開された国際公開第２００８／１５４４０１号パンフレットを参照されたい）があるが、これに限定されるものではない。
ある種の実施形態では、こうした４’から２’の架橋は独立に、−［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）−、−Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ−、−Ｃ（＝ＮＲａ）−、−Ｃ（＝Ｏ）−、−Ｃ（＝Ｓ）−、−Ｏ−、−Ｓｉ（Ｒａ）２−、−Ｓ（＝Ｏ）ｘ−及び−Ｎ（Ｒａ）−から独立に選択される１個または２〜４個連結した基を含み；
式中、
ｘは０、１または２であり；
ｎは１、２、３または４であり；
Ｒａ及びＲｂは各々独立に、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ５〜Ｃ２０アリール、置換Ｃ５〜Ｃ２０アリール、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ５〜Ｃ７脂環式ラジカル、置換Ｃ５〜Ｃ７脂環式ラジカル、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２−Ｊ１）またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）−Ｊ１）であり；かつ
Ｊ１及びＪ２は各々独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルケニル、Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２〜Ｃ１２アルキニル、Ｃ５〜Ｃ２０アリール、置換Ｃ５〜Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）、置換アシル、複素環ラジカル、置換複素環ラジカル、Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１〜Ｃ１２アミノアルキルまたは保護基である。
こうした二環式糖部分を含むヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドまたはＢＮＡという。ある種の実施形態では、二環式ヌクレオシドとして、下記に図示するように、（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ２）２−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ；（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ３）−Ｏ−２’）ＢＮＡ（規制されたエチルまたはｃＥｔとも呼ばれる）；（Ｇ）メチレン−チオ（４’−ＣＨ２−Ｓ−２’）ＢＮＡ；（Ｈ）メチレン−アミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ；（Ｉ）メチル炭素環式（４’−ＣＨ２−ＣＨ（ＣＨ３）−２’）ＢＮＡ；（Ｊ）ｃ−ＭＯＥ（４’−ＣＨ２−ＯＭｅ−２’）ＢＮＡ、及び（Ｋ）プロピレン炭素環式（４’−（ＣＨ２）３−２’）ＢＮＡがあるが、これに限定されるものではない。
Figure 2015519891
式中、Ｂｘは核酸塩基部分であり、Ｒは独立にＨ、保護基またはＣ１〜Ｃ１２アルキルである。
ある種の実施形態では、２’−修飾ヌクレオシドはハロ、アリル、アミノ、アジド、ＳＨ、ＣＮ、ＯＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、Ｏ−、Ｓ−、またはＮ（Ｒｍ）−アルキル；Ｏ−、Ｓ−、またはＮ（Ｒｍ）−アルケニル；Ｏ−、Ｓ−、またはＮ（Ｒｍ）−アルキニル；Ｏ−アルキレニル−Ｏ−アルキル、アルキニル、アルカリル、アラルキル、Ｏ−アルカリル、Ｏ−アラルキル、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）またはＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択される２’−置換基を含み、式中、Ｒｍ及びＲｎは各々独立に、Ｈ、アミノ保護基または置換若しくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルである。これらの２’−置換基は更に、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェニル、ニトロ（ＮＯ２）、チオール、チオアルコキシ（Ｓ−アルキル）、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニル及びアルキニルから独立に選択される１つまたは複数の置換基で置換されていてもよい。
ある種の実施形態では、２’−修飾ヌクレオシドは、Ｆ、ＮＨ２、Ｎ３、ＯＣＦ３、Ｏ−ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）３ＮＨ２、ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ＝ＣＨ２、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２及びＮ−置換アセトアミド（Ｏ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）から選択される２’−置換基を含み、Ｒｍ及びＲｎは各々独立に、Ｈ、アミノ保護基または置換若しくは非置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキルである。
ある種の実施形態では、２’−修飾ヌクレオシドは、Ｆ、ＯＣＦ３、Ｏ−ＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３、２’−Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ−（ＣＨ２）２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｏ（ＣＨ２）２Ｏ（ＣＨ２）２Ｎ（ＣＨ３）２、及びＯ−ＣＨ２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）ＣＨ３から選択される２’−置換基を含む。
ある種の実施形態では、２’−修飾ヌクレオシドは、Ｆ、Ｏ−ＣＨ３、及びＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３から選択される２’−置換基を含む。
ある種の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは４’−チオ修飾ヌクレオシドである。ある種の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは４’−チオ−２’−修飾ヌクレオシドである。４’−チオ修飾ヌクレオシドは、４’−Ｏが４’−Ｓで置換されたβ−Ｄ−リボヌクレオシドを有する。４’−チオ−２’−修飾ヌクレオシドは、２’−ＯＨが２’−置換基で置換された４’−チオ修飾ヌクレオシドである。好適な２’−置換基は、２’−ＯＣＨ３、２’−Ｏ−（ＣＨ２）２−ＯＣＨ３、及び２’−Ｆを含む。
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１つまたは複数のヌクレオシド間修飾を含む。そうしたある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は修飾ヌクレオシド間結合である。ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシド間結合はリン原子を含む。
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシド間結合はリン原子を含まない。そうしたある種の実施形態では、ヌクレオシド間結合は、短鎖アルキルのヌクレオシド間結合により形成される。そうしたある種の実施形態では、ヌクレオシド間結合は、シクロアルキルのヌクレオシド間結合により形成される。そうしたある種の実施形態では、ヌクレオシド間結合は、ヘテロ原子とアルキルとが混合したヌクレオシド間結合により形成される。そうしたある種の実施形態では、ヌクレオシド間結合は、ヘテロ原子とシクロアルキルとが混合したヌクレオシド間結合により形成される。そうしたある種の実施形態では、ヌクレオシド間結合は、１つまたは複数の短鎖ヘテロ原子のヌクレオシド間結合により形成される。そうしたある種の実施形態では、ヌクレオシド間結合は、１つまたは複数の複素環のヌクレオシド間結合により形成される。そうしたある種の実施形態では、ヌクレオシド間結合はアミド骨格を有する。そうしたある種の実施形態では、ヌクレオシド間結合はＮ、Ｏ、Ｓ及びＣＨ２の各構成部分が混合している。
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１つまたは複数の修飾核酸塩基を含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１つまたは複数の５−メチルシトシンを含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドのシトシンは各々５−メチルシトシンを含む。
ある種の実施形態では、修飾核酸塩基は、５−ヒドロキシメチルシトシン、７−デアザグアニン及び７−デアザアデニンから選択される。ある種の実施形態では、修飾核酸塩基は、７−デアザ−アデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン及び２−ピリドンから選択される。ある種の実施形態では、修飾核酸塩基は、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、並びにＮ−２、Ｎ−６及びＯ−６置換プリン、例えば２アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル及び５−プロピニルシトシンから選択される。
ある種の実施形態では、修飾核酸塩基は多環式複素環を含む。ある種の実施形態では、修飾核酸塩基は三環式複素環を含む。ある種の実施形態では、修飾核酸塩基はフェノキサジン誘導体を含む。ある種の実施形態では、フェノキサジンは更に修飾されて、当該技術分野においてＧクランプ（Ｇ−ｃｌａｍｐ）として知られる核酸塩基を形成していてもよい。
ある種の医薬組成物
本明細書で提供されるのは、オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物である。ある種の実施形態では、こうした医薬組成物は線維症、腎疾患及び癌の処置に使用される。ある種の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は本明細書に記載の化合物を含む。
好適な投与経路には、経口、直腸、経粘膜、腸、経腸、局所、坐剤、吸入、髄膜内、心臓内、脳室内、腹腔内、鼻腔内、眼内、腫瘍内及び非経口（例えば、静脈内、筋肉内、骨髄内及び皮下）があるが、これに限定されるものではない。ある種の実施形態では、全身曝露ではなく局所曝露を達成するため、医薬品のくも膜下腔内注射を投与する。例えば、医薬組成物は、所望の作用部位に（例えば、肝臓または腎臓に）直接注射してもよい。
ある種の実施形態では、医薬組成物は、投薬単位の形態（例えば、錠剤、カプセル剤、ボーラス等）で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、２５ｍｇ〜８００ｍｇ、２５ｍｇ〜７００ｍｇ、２５ｍｇ〜６００ｍｇ、２５ｍｇ〜５００ｍｇ、２５ｍｇ〜４００ｍｇ、２５ｍｇ〜３００ｍｇ、２５ｍｇ〜２００ｍｇ、２５ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜８００ｍｇ、２００ｍｇ〜８００ｍｇ、３００ｍｇ〜８００ｍｇ、４００ｍｇ〜８００ｍｇ、５００ｍｇ〜８００ｍｇ、６００ｍｇ〜８００ｍｇ、１００ｍｇ〜７００ｍｇ、１５０ｍｇ〜６５０ｍｇ、２００ｍｇ〜６００ｍｇ、２５０ｍｇ〜５５０ｍｇ、３００ｍｇ〜５００ｍｇ、３００ｍｇ〜４００ｍｇ及び４００ｍｇ〜６００ｍｇから選択される範囲内の用量で修飾オリゴヌクレオチドを含む。ある種の実施形態では、こうした医薬組成物は、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、１００ｍｇ、１０５ｍｇ、１１０ｍｇ、１１５ｍｇ、１２０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１３５ｍｇ、１４０ｍｇ、１４５ｍｇ、１５０ｍｇ、１５５ｍｇ、１６０ｍｇ、１６５ｍｇ、１７０ｍｇ、１７５ｍｇ、１８０ｍｇ、１８５ｍｇ、１９０ｍｇ、１９５ｍｇ、２００ｍｇ、２０５ｍｇ、２１０ｍｇ、２１５ｍｇ、２２０ｍｇ、２２５ｍｇ、２３０ｍｇ、２３５ｍｇ、２４０ｍｇ、２４５ｍｇ、２５０ｍｇ、２５５ｍｇ、２６０ｍｇ、２６５ｍｇ、２７０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２８５ｍｇ、２９０ｍｇ、２９５ｍｇ、３００ｍｇ、３０５ｍｇ、３１０ｍｇ、３１５ｍｇ、３２０ｍｇ、３２５ｍｇ、３３０ｍｇ、３３５ｍｇ、３４０ｍｇ、３４５ｍｇ、３５０ｍｇ、３５５ｍｇ、３６０ｍｇ、３６５ｍｇ、３７０ｍｇ、３７５ｍｇ、３８０ｍｇ、３８５ｍｇ、３９０ｍｇ、３９５ｍｇ、４００ｍｇ、４０５ｍｇ、４１０ｍｇ、４１５ｍｇ、４２０ｍｇ、４２５ｍｇ、４３０ｍｇ、４３５ｍｇ、４４０ｍｇ、４４５ｍｇ、４５０ｍｇ、４５５ｍｇ、４６０ｍｇ、４６５ｍｇ、４７０ｍｇ、４７５ｍｇ、４８０ｍｇ、４８５ｍｇ、４９０ｍｇ、４９５ｍｇ、５００ｍｇ、５０５ｍｇ、５１０ｍｇ、５１５ｍｇ、５２０ｍｇ、５２５ｍｇ、５３０ｍｇ、５３５ｍｇ、５４０ｍｇ、５４５ｍｇ、５５０ｍｇ、５５５ｍｇ、５６０ｍｇ、５６５ｍｇ、５７０ｍｇ、５７５ｍｇ、５８０ｍｇ、５８５ｍｇ、５９０ｍｇ、５９５ｍｇ、６００ｍｇ、６０５ｍｇ、６１０ｍｇ、６１５ｍｇ、６２０ｍｇ、６２５ｍｇ、６３０ｍｇ、６３５ｍｇ、６４０ｍｇ、６４５ｍｇ、６５０ｍｇ、６５５ｍｇ、６６０ｍｇ、６６５ｍｇ、６７０ｍｇ、６７５ｍｇ、６８０ｍｇ、６８５ｍｇ、６９０ｍｇ、６９５ｍｇ、７００ｍｇ、７０５ｍｇ、７１０ｍｇ、７１５ｍｇ、７２０ｍｇ、７２５ｍｇ、７３０ｍｇ、７３５ｍｇ、７４０ｍｇ、７４５ｍｇ、７５０ｍｇ、７５５ｍｇ、７６０ｍｇ、７６５ｍｇ、７７０ｍｇ、７７５ｍｇ、７８０ｍｇ、７８５ｍｇ、７９０ｍｇ、７９５ｍｇ及び８００ｍｇから選択される用量で修飾オリゴヌクレオチドを含む。そうしたある種の実施形態では、医薬組成物は、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ及び８００ｍｇから選択される用量の修飾オリゴヌクレオチドを含む。
ある種の実施形態では、医薬品は、好適な希釈液、例えば、無菌注射用水または無菌注射用生理食塩水で再溶解される無菌凍結乾燥修飾オリゴヌクレオチドである。再溶解される製品は、食塩水に希釈してから皮下注射または点滴静注として投与される。凍結乾燥製剤は、注射用水または注射用食塩水で調製され、調製中に酸または塩基でｐＨ７．０〜９．０に調整し、その後凍結乾燥された修飾オリゴヌクレオチドからなる。凍結乾燥修飾オリゴヌクレオチドは、２５〜８００ｍｇのオリゴヌクレオチドであってもよい。これは、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、４２５ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇ、５００ｍｇ、５２５ｍｇ、５５０ｍｇ、５７５ｍｇ、６００ｍｇ、６２５ｍｇ、６５０ｍｇ、６７５ｍｇ、７００ｍｇ、７２５ｍｇ、７５０ｍｇ、７７５ｍｇ及び８００ｍｇの凍結乾燥修飾オリゴヌクレオチドを包含することが理解されよう。更に、いくつかの実施形態では、凍結乾燥修飾オリゴヌクレオチドは、２５ｍｇ〜８００ｍｇ、２５ｍｇ〜７００ｍｇ、２５ｍｇ〜６００ｍｇ、２５ｍｇ〜５００ｍｇ、２５ｍｇ〜４００ｍｇ、２５ｍｇ〜３００ｍｇ、２５ｍｇ〜２００ｍｇ、２５ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜８００ｍｇ、２００ｍｇ〜８００ｍｇ、３００ｍｇ〜８００ｍｇ、４００ｍｇ〜８００ｍｇ、５００ｍｇ〜８００ｍｇ、６００ｍｇ〜８００ｍｇ、１００ｍｇ〜７００ｍｇ、１５０ｍｇ〜６５０ｍｇ、２００ｍｇ〜６００ｍｇ、２５０ｍｇ〜５５０ｍｇ、３００ｍｇ〜５００ｍｇ、３００ｍｇ〜４００ｍｇ及び４００ｍｇ〜６００ｍｇから選択される範囲内の量のオリゴヌクレオチドである。凍結乾燥製剤は、２ｍＬのＴｙｐｅ Ｉ透明ガラスバイアル（硫酸アンモニウム処理）に入れ、ブロモブチルゴム栓で栓をしてアルミニウム製ＦＬＩＰ−ＯＦＦ（登録商標）オーバーシールで密封してもよい。
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、医薬組成物に通常見られる他の補助成分を当該技術分野で確立された使用レベルで更に含んでもよい。このため、例えば、組成物は、適合性がある追加の医薬活性物質、例えば、鎮痒薬、収斂薬、局所麻酔薬または抗炎症薬を含んでもよいし、また、様々な剤形の本発明の組成物を物理的に配合するのに有用な追加物質、例えば色素、着香剤、防腐剤、酸化防止剤、乳白剤、粘度付与剤及び安定剤を含んでもよい。しかしながら、こうした物質は、加える際に、本発明の組成物の成分の生物活性を必要以上に阻害するものであってはならない。こうした製剤は滅菌し、必要に応じて、助剤、例えば、製剤のオリゴヌクレオチド（単数または複数）と有害な相互作用を起こさない滑沢剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧を調節するための塩、緩衝液、着色料、矯味矯臭剤及び／または芳香物質及び同種のものを含んでもよい。
核酸治療剤には脂質部分が種々の方法で使用されてきた。１つの方法では、カチオン性脂質と中性脂質との混合物で作られた、予め形成されたリポソームまたはリポプレックスに核酸を導入する。別の方法では、中性脂質の存在なしにＤＮＡとモノ−またはポリ−カチオン性脂質との複合体を形成する。ある種の実施形態では、脂質部分は、特定の細胞または組織への医薬品の分布が増加するように選択する。ある種の実施形態では、脂質部分は、脂肪組織への医薬品の分布が増加するように選択する。ある種の実施形態では、脂質部分は、筋肉組織への医薬品の分布が増加するように選択する。
ある種の実施形態では、イントラリピッドを使用してオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を調製する。イントラリピッドは、静脈内投与用に調製された脂肪乳剤である。イントラリピッドは、１０％大豆油、１．２％卵黄リン脂質、２．２５％グリセリン及び注射用水からなる。更に、ｐＨを調整するため水酸化ナトリウムが加えられているため、最終製品のｐＨ範囲は６〜８．９になっている。
ある種の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、ポリアミン化合物または脂質部分と核酸との複合体を含む。ある種の実施形態では、こうした調製物は、各々独立に式（Ｚ）により定義される構造を有する１つまたは複数の化合物であって、
Figure 2015519891
式中、Ｘａ及びＸｂは、各々存在する場合、各々独立にＣ１〜６アルキレンであり；ｎは０、１、２、３、４または５であり；Ｒは各々独立にＨであり、調製物中の式（Ｚ）の化合物の分子の少なくとも約８０％においてＲ部分の少なくともｎ＋２はＨでなく；ｍは１、２、３または４であり；ＹはＯ、ＮＲ２またはＳであり；Ｒ１はアルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；その各々は任意選択的に１つまたは複数の置換基で置換されており；かつＲ２はＨ、アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；その各々は任意選択的に１つまたは複数の置換基で置換されており；但し、ｎ＝０である場合、Ｒ部分の少なくともｎ＋３はＨでない化合物、またはその薬学的に許容される塩を含む。こうした調製物は、脂質調製物の開示内容についてその全体を本明細書に援用する国際公開第２００８／０４２９７３号パンフレットに記載されている。いくつかの別の調製物については、脂質調製物の開示内容についてその全体を本明細書に援用するＡｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２６，５６１−５６９（０１ Ｍａｙ ２００８）に記載されている。
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、１つまたは複数の修飾オリゴヌクレオチド、及び１種または複数種の賦形剤を含む。そうしたある種の実施形態では、賦形剤は、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミラーゼ、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース及びポリビニルピロリドンから選択される。
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、以下に限定されるものではないが、混合工程、溶解工程、造粒工程、糖衣錠製造工程、水簸工程、乳化工程、カプセル充填工程、封入工程または錠剤化工程を含む既知の技術を用いて調製される。
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は液体（例えば、懸濁剤、エリキシル剤及び／または溶液剤）である。こうした実施形態の一部では、液体医薬組成物は、当該技術分野において公知の成分、以下に限定されるものではないが、水、グリコール、油、アルコール、着香剤、防腐剤及び着色剤を用いて調製される。
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は固体（例えば、散剤、錠剤及び／またはカプセル剤）である。こうした実施形態の一部では、１つまたは複数のオリゴヌクレオチドを含む固体医薬組成物は、当該技術分野において公知の成分、以下に限定されるものではないが、デンプン、糖、希釈液、造粒剤、滑沢剤、バインダー及び崩壊剤を用いて調製される。
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物はデポ調製物として製剤化される。ある種のこうしたデポ調製物は典型的には非デポ調製物より長く作用する。ある種の実施形態では、こうした調製物は、埋入（例えば皮下または筋肉内）または筋肉内注射により投与される。ある種の実施形態では、デポ調製物は、好適なポリマー材料若しくは疎水性材料（例えば許容可能な油に溶かしたエマルジョン）またはイオン交換樹脂を用いて、或いは、やや溶けにくい誘導体、例えば、やや溶けにくい塩として調製される。
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、送達系を含む。送達系の例には、リポソーム及びエマルジョンがあるが、これに限定されるものではない。ある種の送達系は、疎水性化合物を含む医薬組成物などある種の医薬組成物の調製に有用である。ある種の実施形態では、ある種の有機溶媒、例えばジメチルスルホキシドが使用される。
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、本発明の１つまたは複数の医薬品を特異的な組織または細胞型に送達するように設計された１つまたは複数の組織特異的送達分子を含む。例えば、ある種の実施形態では、医薬組成物は、組織特異的抗体でコーティングされたリポソームを含む。
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、共溶媒系を含む。こうした共溶媒系の一部は、例えば、ベンジルアルコール、非極性界面活性剤、水混和性有機ポリマー及び水相を含む。ある種の実施形態では、こうした共溶媒系は、疎水化合物に使用される。こうした共溶媒系の非限定的な例として、３％ｗ／ｖベンジルアルコール、８％ｗ／ｖの非界面活性剤Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０（商標）及び６５％ｗ／ｖポリエチレングリコール３００を含む無水エタノールの溶液であるＶＰＤ共溶媒系がある。こうした共溶媒系の比率は、溶解性及び毒性の特性を大きく変えなければ、かなり多岐にわたってもよい。更に、共溶媒の成分の種類も多岐にわたってもよい。例えば、Ｐｏｌｙｓｏｒｂａｔｅ ８０（商標）の代わりに他の界面活性剤を使用してもよく、ポリエチレングリコールの分子量も多岐にわたってもよい。ポリエチレングリコールの代わりに他の生体適合性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドンを使用してもよい。更にデキストロースの代わりに他の糖または多糖類を使用してもよい。
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は徐放系を含む。こうした徐放系の非限定的な例として、固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスがある。ある種の実施形態では、徐放系は、その化学的性質に応じて数時間、数日、数週または数ヶ月の期間にわたり医薬品を放出することができる。
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は経口投与用に調製される。こうした実施形態の一部では、医薬組成物は、修飾オリゴヌクレオチドを含む１種または複数種の化合物を１種または複数種の薬学的に許容されるキャリアと組み合わせることにより製剤化される。こうしたキャリアの一部を用いると、被検体の経口摂取を目的として医薬組成物を錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液体剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤及び同種のものとして製剤化することができる。ある種の実施形態では、経口使用のための医薬組成物は、オリゴヌクレオチドと１種または複数種の固体賦形剤とを混合することによる得られる。好適な賦形剤には、充填剤、例えば糖、例えばラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトール；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ポテトスターチ、ゼラチン、トラガントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル−セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、及び／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）があるが、これに限定されるものではない。ある種の実施形態では、こうした混合物を任意に粉砕し、助剤を任意に加える。ある種の実施形態では、医薬組成物は、錠剤または糖衣錠の素錠が得られるように形成する。ある種の実施形態では、崩壊剤（例えば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天またはアルギン酸またはその塩、例えばアルギン酸ナトリウム）を加える。
ある種の実施形態では、糖衣錠の素錠にコーティングを施す。そうしたある種の実施形態では、任意にアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール及び／または二酸化チタン、ラッカー溶液、並びに好適な有機溶媒または溶媒混合物を含んでもよい濃縮糖液を使用してもよい。錠剤または糖衣錠コーティングには色材または色素を加えてもよい。
ある種の実施形態では、経口投与用の医薬組成物は、ゼラチンで作られたプッシュフィット（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ）カプセル剤である。こうしたプッシュフィット（ｐｕｓｈ−ｆｉｔ）カプセル剤の一部は、１種または複数種の充填剤、例えばラクトース、バインダー、例えばデンプン、及び／または滑沢剤、例えばタルクまたはステアリン酸マグネシウム、並びに任意に安定剤と混合された本発明の１つまたは複数の医薬品を含む。ある種の実施形態では、経口投与用の医薬組成物は、ゼラチン及び可塑剤、例えばグリセロールまたはソルビトールで作られた密封された軟カプセル剤である。ある種の軟カプセル剤では、本発明の１つまたは複数の医薬品は、好適な液体、例えば脂肪油、流動パラフィンまたは液体ポリエチレングリコールに溶解または懸濁される。更に、安定剤を加えてもよい。
ある種の実施形態では、医薬組成物は口腔内投与用に調製される。こうした医薬組成物の一部は、従来の方法で製剤化された錠剤またはロゼンジである。
ある種の実施形態では、医薬組成物は、注射による投与（例えば、静脈内、皮下、筋肉内等）用に調製される。こうした実施形態の一部では、医薬組成物は、キャリアを含み、水溶液、例えば水または生理学的に適合性の緩衝液、例えばハンクス液、リンゲル液または生理食塩水緩衝液中で製剤化される。ある種の実施形態では、他の成分（例えば、溶解を助けるまたは防腐剤として働く成分）も含まれる。ある種の実施形態では、適切な液体キャリア、懸濁化剤及び同種のものを用いて注射用懸濁液を調製する。ある種の注射用医薬組成物は、単位剤形、例えば、アンプルまたは複数用量容器で提供される。ある種の注射用医薬組成物は、油性若しくは水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンであり、製剤添加剤、例えば懸濁剤、安定化剤及び／または分散剤を含んでもよい。注射用医薬組成物に使用するのに好適なある種の溶媒には、親油性溶媒及び脂肪油、例えばゴマ油、合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチルまたはトリグリセリド、並びにリポソームがあるが、これに限定されるものではない。水性注射懸濁液は、懸濁液の粘度を高める物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストランを含んでもよい。任意に、こうした懸濁液は、好適な安定剤、または医薬品の溶解性を高めて高濃縮溶液の調製を可能にする作用物質を更に含んでもよい。
ある種の実施形態では、医薬組成物は経粘膜投与用に調製される。こうした実施形態の一部では、製剤中にバリアを透過するのに適切な浸透剤を使用する。こうした浸透剤は一般に当該技術分野において公知である。
ある種の実施形態では、医薬組成物は、吸入による投与用に調製される。こうした吸入用の医薬組成物は、加圧パックまたはネブライザーのエアロゾルスプレー形態で調製される。こうした医薬組成物の一部は、噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の好適なガスを含む。加圧エアロゾルを用いるある種の実施形態では、投薬単位は、計量分が送達される弁により決定してもよい。ある種の実施形態では、吸入器またはインサフレーターに使用するカプセル剤及びカートリッジ剤を製剤化してもよい。こうした製剤の一部は、本発明の医薬品と好適な粉末基剤、例えばラクトースまたはデンプンとの粉末混合物を含む。
ある種の実施形態では、医薬組成物は、坐剤または停留浣腸剤など直腸投与用に調製される。こうした医薬組成物の一部は、既知の成分、例えばカカオバター及び／または他のグリセリドを含む。
ある種の実施形態では、医薬組成物は、局所投与用に調製される。こうした医薬組成物の一部は、刺激のない保湿基剤、例えば軟膏またはクリームを含む。好適な例示的軟膏基剤には、ペトロラタム、ペトロラタムと揮発性シリコーンとを混合したもの、ラノリン、及び油中水型エマルジョンがあるが、これに限定されるものではない。好適な例示的クリーム基剤には、コールドクリーム及び親水軟膏があるが、これに限定されるものではない。
ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、治療有効量で修飾オリゴヌクレオチドを含む。ある種の実施形態では、治療有効量は、疾患の症状を予防、緩和または軽減させる、或いは、処置された被検体の生存を延長させるのに十分な量である。治療有効量の判定は、十分に当業者の能力の範囲内である。
ある種の実施形態では、本明細書に提供される１つまたは複数の修飾オリゴヌクレオチドはプロドラッグとして製剤化される。ある種の実施形態では、プロドラッグは、インビボ投与すると、生物学的に、薬学的にまたは治療的により活性な形態のオリゴヌクレオチドに化学的に変換される。ある種の実施形態では、プロドラッグは、その活性形態より投与しやすいため、有用である。例えば、場合によっては、プロドラッグは、その活性形態より（例えば、経口投与により）体内吸収される可能性がある。場合によっては、プロドラッグは、その活性形態と比較して溶解性を改善できたかもしれない。ある種の実施形態では、プロドラッグは、その活性形態より水溶性に乏しい。場合によっては、こうしたプロドラッグは、細胞膜（通り抜けるには水溶性が妨げになる）を通過する優れた送達性を有する。ある種の実施形態では、プロドラッグはエステルである。そうしたある種の実施形態では、エステルは、投与すると代謝によりカルボン酸に加水分解される。場合によっては、カルボン酸を含む化合物はその活性形態である。ある種の実施形態では、プロドラッグは、酸性基に結合した短いペプチド（ポリアミノ酸）を含む。こうした実施形態の一部では、ペプチドは、投与されると切断されてその活性形態となる。
ある種の実施形態では、プロドラッグは、インビボ投与すると医薬活性化合物が再生するように医薬活性化合物を修飾することにより製造する。プロドラッグは、薬剤の代謝安定性または輸送性を変化させる、副作用または毒性をマスクする、薬剤の風味を改善する、或いは、薬剤の他の特徴または特性を変化させるように設計してもよい。当業者は、医薬活性化合物が分かれば、インビボでの薬力学的プロセス及び薬物代謝の知識に基づき、その化合物のプロドラッグを設計することができる（例えば、Ｎｏｇｒａｄｙ（１９８５） Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐａｇｅｓ ３８８−３９２を参照されたい）。
ある種の投与経路
ある種の実施形態では、被検体への投与は非経口投与を含む。ある種の実施形態では、被検体への投与は静脈内投与を含む。ある種の実施形態では、被検体への投与は皮下投与を含む。
ある種の実施形態では、被検体への投与は動脈内投与を含む。ある種の実施形態では、被検体への投与は心臓内投与を含む。心臓内投与の好適な手段は、カテーテルの使用または直視下心臓手術における投与を含む。ある種の実施形態では、投与はステントの使用を含む。
ある種の実施形態では、投与は経肺投与を含む。ある種の実施形態では、経肺投与は、エアロゾル化したオリゴヌクレオチドを被検体の肺に吸入により送達することを含む。エアロゾル化したオリゴヌクレオチドを被検体が吸入した後、オリゴヌクレオチドは、肺胞マクロファージ、好酸球、上皮、血管内皮、及び細気管支上皮など正常肺組織及び炎症肺組織の両方の細胞に供給される。修飾オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を送達するのに好適な装置には、以下に限定されるものではないが、標準的なネブライザー装置がある。気道及び肺の特定の部分を標的とするように、ネブライザー装置を用いて液滴の大きさを調節するための製剤及び方法は、当業者によく知られている。他の好適な装置として、乾燥粉末吸入器または定量吸入器がある。
ある種の実施形態では、医薬組成物は、全身曝露ではなく局所曝露を達成するために投与する。例えば、経肺投与により医薬組成物は全身曝露を最低限にして肺に送達される。
他の好適な投与経路には、経口、直腸、経粘膜、腸、経腸、局所、経皮、坐剤、髄膜内、脳室内、腹腔内、鼻腔内、眼内、筋肉内、骨髄内及び腫瘍内があるが、これに限定されるものではない。
ある種の化合物
本明細書で提供されるのは、ある種のヌクレオシドパターンを有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物と、標的核酸の活性、レベルまたは発現を調節するための、それらの化合物の使用とである。ある種の実施形態では、化合物はオリゴヌクレオチドを含む。そうしたある種の実施形態では、化合物はオリゴヌクレオチドからなる。ある種の実施形態では、オリゴヌクレオチドは修飾オリゴヌクレオチドである。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは小分子非コードＲＮＡ（ｓｍａｌｌ ｎｏｎ−ｃｏｄｉｎｇ ＲＮＡ）と相補的である。ある種の実施形態では、小分子非コードＲＮＡ（ｓｍａｌｌ ｎｏｎ−ｃｏｄｉｎｇ ＲＮＡ）はｍｉＲ−２１である。
そうしたある種の実施形態では、本化合物は相補鎖にハイブリダイズする修飾オリゴヌクレオチドを含む、即ち本化合物は二本鎖オリゴマー化合物を含む。ある種の実施形態では、相補鎖への修飾オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションにより、少なくとも１つの平滑末端が形成される。そうしたある種の実施形態では、相補鎖への修飾オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションにより二本鎖オリゴマー化合物の各末端に平滑末端が形成される。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの末端は、相補鎖に連結したヌクレオシドの数に対して１つまたは複数の追加の連結したヌクレオシドを含む。ある種の実施形態では、１つまたは複数の追加のヌクレオシドはオリゴヌクレオチドの５’末端にある。ある種の実施形態では、１つまたは複数の追加のヌクレオシドはオリゴヌクレオチドの３’末端にある。ある種の実施形態では、１つまたは複数の追加のヌクレオシドのヌクレオシドの少なくとも１つの核酸塩基は、標的ＲＮＡと相補的である。ある種の実施形態では、１つまたは複数の追加の各ヌクレオシドの核酸塩基は各々、標的ＲＮＡと相補的である。ある種の実施形態では、相補鎖の末端は、オリゴヌクレオチドの連結したヌクレオシドの数に対して１つまたは複数の追加の連結したヌクレオシドを含む。ある種の実施形態では、１つまたは複数の追加の連結したヌクレオシドは、相補鎖の３’末端にある。ある種の実施形態では、１つまたは複数の追加の連結したヌクレオシドは、相補鎖の５’末端にある。ある種の実施形態では、追加の２個連結したヌクレオシドが末端に連結している。ある種の実施形態では、１個の追加のヌクレオシドが末端に連結している。
ある種の実施形態では、本化合物は、１つまたは複数の部分とコンジュゲートした修飾オリゴヌクレオチドを含み、その１つまたは複数の部分は、その結果得られるアンチセンスオリゴヌクレオチドの活性、細胞分布または細胞取り込みを増強するものである。そうしたある種の実施形態では、その部分はコレステロール部分である。ある種の実施形態では、その部分は脂質部分である。コンジュゲートする追加部分には、糖質、リン脂質、ビオチン、フェナジン、葉酸塩、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン及び色素がある。ある種の実施形態では、コンジュゲート基はオリゴヌクレオチドに直接結合している。ある種の実施形態では、コンジュゲート基は、アミノ、ヒドロキシル、カルボン酸、チオール、不飽和部分（例えば、二重または三重結合）、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシニミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、６−アミノヘキサン酸（ＡＨＥＸまたはＡＨＡ）、置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、置換若しくは非置換Ｃ２〜Ｃ１０アルケニル、及び置換若しくは非置換Ｃ２〜Ｃ１０アルキニルから選択される連結部分により修飾オリゴヌクレオチドに結合している。そうしたある種の実施形態では、置換基は、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェニル、ニトロ、チオール、チオアルコキシ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニル及びアルキニルから選択される。
そうしたある種の実施形態では、本化合物は、例えば、ヌクレアーゼ安定性などの特性を増強するため、修飾オリゴヌクレオチドの一方または両方の末端に結合した１つまたは複数の安定化基を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む。安定化基にはキャップ構造が含まれる。これらの末端修飾は、エキソヌクレアーゼによる分解から修飾オリゴヌクレオチドを保護し、細胞内の送達及び／または局在化に役立ち得る。キャップは５’末端（５’−キャップ）にあっても、また３’末端（３’−キャップ）にあってもよいし、或いは両末端にあってもよい。キャップ構造は、例えば、逆位デオキシ脱塩基キャップを含む。
好適なキャップ構造には、４’，５’−メチレンヌクレオチド、１−（β−Ｄ−エリトロフラノシル）ヌクレオチド、４’−チオヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド、１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド、Ｌ−ヌクレオチド、α−ヌクレオチド、修飾塩基ヌクレオチド、ホスホロジチオアート結合、スレオ−ペントフラノシルヌクレオチド、非環式３’，４’−セコヌクレオチド、非環式３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド、非環式３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、３’−３’−逆位ヌクレオチド部分、３’−３’−逆位脱塩基部分、３’−２’−逆位ヌクレオチド部分、３’−２’−逆位脱塩基部分、１，４−ブタンジオールホスフェート、３’−ホスホルアミデート、ヘキシルホスフェート、アミノヘキシルホスフェート、３’−ホスフェート、３’−ホスホロチオエート、ホスホロジチオアート、架橋メチルホスホネート部分及び非架橋メチルホスホネート部分 ５’−アミノ−アルキルホスフェート、１，３−ジアミノ−２−プロピルホスフェート、３−アミノプロピルホスフェート、６−アミノヘキシルホスフェート、１，２−アミノドデシルホスフェート、ヒドロキシプロピルホスフェート、５’−５’−逆位ヌクレオチド部分、５’−５’−逆位脱塩基部分、５’−ホスホルアミデート、５’−ホスホロチオエート、５’−アミノ、架橋及び／または非架橋５’−ホスホルアミデート、ホスホロチオエート、並びに５’−メルカプト部分がある。
ある種のキット
本発明はまたキットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、核酸塩基配列がｍｉＲ−２１の核酸塩基配列と相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む、本発明の１種または複数種の化合物を含む。ｍｉＲ−２１と相補的な化合物は、本明細書に記載のヌクレオシドパターンのいずれを有してもよい。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ−２１と相補的な化合物はバイアル内に存在してもよい。例えば、調剤容器には、１０個などの複数のバイアルが存在してもよい。いくつかの実施形態では、バイアルは、シリンジが利用しやすいように製造する。キットは、ｍｉＲ−２１と相補的な化合物の使用説明書を更に含んでもよい。
いくつかの実施形態では、キットを使用してｍｉＲ−２１と相補的な化合物を被検体に投与することができる。こうした例では、キットは、ｍｉＲ−２１と相補的な化合物に加えて、以下の１つまたは複数を更に含んでもよい：シリンジ、アルコール綿棒、コットンボール及び／またはガーゼ。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ−２１と相補的な化合物は、バイアル中でなくプレフィルドシリンジ（例えば２７ゲージ、１／２インチ針の針ガード付き単回投与シリンジ）中に存在してもよい。１０本など複数のプレフィルドシリンジが、例えば、調剤容器中に存在してもよい。キットは、ｍｉＲ−２１と相補的な化合物の投与説明書を更に含んでもよい。
ある種の実験モデル
ある種の実施形態では、本発明は、実験モデルを用いて本発明の修飾オリゴヌクレオチドを使用及び／または試験する方法を提供する。当業者であれば、そうした実験モデルのプロトコルを選択及び変更して本発明の医薬品を評価することができる。
一般に、修飾オリゴヌクレオチドは最初に培養細胞で試験する。好適な細胞型には、インビボでの修飾オリゴヌクレオチドの送達が望ましい細胞型に関連する細胞型がある。例えば、本明細書に記載の方法の研究に好適な細胞型には、初代細胞または培養細胞がある。
ある種の実施形態では、培養細胞を用いて、修飾オリゴヌクレオチドがｍｉＲ−２１の活性を阻害する程度を評価する。ある種の実施形態では、マイクロＲＮＡ活性の阻害は、マイクロＲＮＡのレベルを測定することにより評価することができる。或いは、予想されるまたは検証されたマイクロＲＮＡ制御転写物のレベルを測定してもよい。マイクロＲＮＡ活性が阻害されると、ｍｉＲ−２１制御転写物、及び／またはｍｉＲ−２１制御転写物によりコードされたタンパク質が増加する場合がある。更に、ある種の実施形態では、ある種の表現型の結果を測定してもよい。
ヒト疾患モデルを用いたｍｉＲ−２１の研究では、いくつかの動物モデルが、当業者に入手可能である。例えば、ｍｉＲ−２１の阻害剤は、癌のモデル、例えば同所性異種移植モデル、毒素誘発癌モデル、または遺伝子誘発癌モデルで研究することができる。こうした癌モデルでは、ｍｉＲ−２１の阻害剤が腫瘍の大きさ、腫瘍数、全生存率及び／または無増悪生存期間に与える作用を評価する研究を行うことができる。
心機能及び線維症に対するｍｉＲ−２１の阻害剤の作用は、それぞれ異常な心機能及び線維症を誘導する動脈結紮モデルまたは心筋梗塞モデルを用いて研究することができる。腎線維症のモデルは、一側尿管結紮及び虚血／再灌流傷害を含む。腎臓虚血再灌流障害モデルについては、初期の時点では急性腎傷害のモデルとして使用できる一方、後期の時点では腎線維症のモデルとして役立つ。腎線維症の別のモデルとしてアリストロキア酸誘導性線維症モデルがある。肝線維症モデルは、例えば四塩化炭素中毒または胆管結紮により誘導する。肝線維症はまた、メチオニン・コリン欠乏食により線維症に関連した脂肪肝を起こすことにより誘導することもできる。ｍｉＲ−２１の肺線維症に対する作用は、例えば、ブレオマイシン誘導性肺線維症のモデルまたは肺にＴＧＦ−βを過剰発現するマウスを用いて研究することができる。創傷治癒モデルも当業者に入手可能であり、例えばＣ５７Ｂｌ／ＫｓＪ−ｄｂ／ｄｂマウスは、創傷閉鎖の顕著な遅延など成人発症型糖尿病のいくつかの特徴を示す。
別の動物モデルとして、マウスまたはイヌのアルポート症候群モデルがある。アルポート症候群のマウスモデル例には、Ｃｏｌ４ａ３ノックアウトマウスがある。
ある種の定量化アッセイ
修飾オリゴヌクレオチドの投与後のｍｉＲ−２１のアンチセンス阻害の作用は、当該技術分野において公知の種々の方法により評価することができる。ある種の実施形態では、これらの方法を用いて、細胞または組織のマイクロＲＮＡレベルをインビトロまたはインビボで定量する。ある種の実施形態では、マイクロアレイ解析によりマイクロＲＮＡレベルの変化を測定する。ある種の実施形態では、市販されているいくつかのＰＣＲアッセイの１つ、例えばＴａｑＭａｎ（登録商標）ＭｉｃｒｏＲＮＡ Ａｓｓａｙ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によりマイクロＲＮＡレベルの変化を測定する。ある種の実施形態では、ｍｉＲ−２１の標的のｍＲＮＡ及び／またはタンパク質レベルを測定することにより、ｍｉＲ−２１のアンチセンス阻害を評価する。ｍｉＲ−２１のアンチセンス阻害を行うと、一般にマイクロＲＮＡの標的のｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルが上昇する。
標的結合アッセイ
抗ｍｉＲまたはマイクロＲＮＡ模倣物によるマイクロＲＮＡ活性の調節は、標的結合を測定することにより評価することができる。ある種の実施形態では、標的結合は、ｍＲＮＡのマイクロアレイプロファイリングにより測定する。抗ｍｉＲまたはマイクロＲＮＡ模倣物により調節される（増加或いは減少する）ｍＲＮＡの配列についてマイクロＲＮＡシード配列を検索し、マイクロＲＮＡの標的であるｍＲＮＡの調節を、マイクロＲＮＡの標的でないｍＲＮＡの調節と比較する。この方法では、抗ｍｉＲとｍｉＲ−２１と、またはｍｉＲ−２１模倣物とその標的との相互作用を評価することができる。抗ｍｉＲの場合には、発現レベルが上昇するｍＲＮＡについて、抗ｍｉＲと相補的なマイクロＲＮＡのシードマッチを含むｍＲＮＡ配列をスクリーニングする。
本発明のいくつかの実施形態をより詳細に説明するため、以下に実施例を示す。但し、実施例は、本発明の広範な範囲を限定するものとして解釈してはならない。当業者であれば、本発見の根底にある原理を採用し、本発明の精神を逸脱しない範囲で様々な化合物を容易に設計するであろう。
実施例１：抗ｍｉＲ−２１化合物
ｍｉＲ−２１を標的とし、ｃＥｔヌクレオシドを含む様々な抗ｍｉＲを、長さ及びｍｉＲ−２１に対する相補性のほか、修飾糖部分の数、種類及び配置を変化させて設計した。インビトロルシフェラーゼアッセイを用いて、これらの化合物についてｍｉＲ−２１活性に対するその阻害作用を評価した。
ルシフェラーゼアッセイ
化合物は、ルシフェラーゼアッセイでｍｉＲ−２１阻害活性を評価した。ｐＧＬ３−ＭＣＳ２（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてマイクロＲＮＡルシフェラーゼセンサーコンストラクトを設計した。コンストラクトをＨｅｌａ細胞に導入して、抗ｍｉＲ化合物がｍｉＲ−２１の活性を阻害できるかどうかを試験した。このアッセイでは、Ｈｅｌａ細胞に存在するｍｉＲ−２１がルシフェラーゼセンサーコンストラクトのコグネイト部位（単数または複数）に結合し、ルシフェラーゼ発現を抑制する。適切な抗ｍｉＲを細胞に導入すると、抗ｍｉＲはｍｉＲ−２１に結合し、ルシフェラーゼ発現の抑制を緩和する。このため、本アッセイでは、抗ｍｉＲがｍｉＲ−２１発現の効果的な阻害剤であれば、ルシフェラーゼ発現が増加する。
１日目：ｍｉＲ−２１の相補的な配列を含むように設計されたルシフェラーゼコンストラクトを安定にトランスフェクトしたＨｅｌａ細胞（ＡＴＣＣ）をＴ−１７０フラスコ（ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ）に３．５＊１０６細胞／フラスコで播種した。Ｈｅｌａ細胞を高グルコースダルベッコ変法イーグル培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で増殖させた。
２日目：各フラスコのＨｅｌａ細胞に、ウミシイタケを発現する０．５ｕｇのｐｈＲＬセンサープラスミド（Ｐｒｏｍｅｇａ）をトランスフェクトして補正に使用した。Ｈｅｌａ細胞は、２０ｕｌのリポフェクタミン２０００／フラスコ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してトランスフェクトした。トランスフェクションの４時間後、細胞をＰＢＳで洗浄し、トリプシン処理した。Ｈｅｌａ細胞を２４ウェルプレート（ＢＤ Ｆａｌｃｏｎ）に４０ｋ／ウェルで蒔き、一晩放置した。
３日目：２．５ｕｌ リポフェクチン／１００ｎＭ ＡＳＯ／ｍｌ Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ Ｉ Ｒｅｄｕｃｅｄ Ｓｅｒｕｍ Ｍｅｄｉｕｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）でリポフェクチン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いてＨｅｌａ細胞に抗ｍｉＲを４時間トランスフェクトした。ＡＳＯのトランスフェクション後、Ｈｅｌａ細胞に高グルコースダルベッコ変法イーグル培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を更に加えた。
４日目：Ｈｅｌａ細胞を受動的に溶解し、Ｄｕａｌ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ａｓｓａｙ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いてルシフェラーゼ活性を測定する。
抗ｍｉＲ−２１処理細胞のルシフェラーゼ活性を、細胞に抗ｍｉＲ処理を施していない「偽」処理と比較した。
活性化合物の一部を表Ａに示す。ヌクレオシド修飾は、以下の通り表記される。即ち、後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを表し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを表し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを表す。ヌクレオシド間結合は各々ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。上付き文字「Ｍｅ」は、ヌクレオシドの塩基部の５−メチル基を表す。
Figure 2015519891
Figure 2015519891
表Ｂに示すように、ルシフェラーゼアッセイにおいて表Ａの抗ｍｉＲ−２１化合物は、インビトロでｍｉＲ−２１活性を阻害した。腎線維症のインビボモデルを用いて更に試験するため、これらの活性化合物を選択した。
線維症のＵＵＯモデル
一側尿管結紮（ＵＵＯ）は、間質線維症を引き起こす腎傷害の十分に確立された実験モデルであり、従ってヒト腎疾患を反映する実験モデルとして使用されている。ＵＵＯは、一側の尿管を外科的に結紮することにより誘発される。線維症はコラーゲンの増加を特徴とするので、腎線維症の存在及び程度は、コラーゲン量を測定することにより判定することができる。コラーゲン量を評価するには、コラーゲン１Ａ１（Ｃｏｌ １Ａ１）及びコラーゲン３Ａ１（Ｃｏｌ ３Ａ１）の両方を測定する。線維症のもう１つの指標は、ＵＵＯ手技後にコラーゲンの発現を示す腎組織の割合である。この「コラーゲン領域画分」は、ピクロシリウスレッド染色により赤色に染色される腎組織領域の定量的イメージ処理によって組織学的に測定される。赤色として検出された割合は、腎切片の領域で正規化する。腎線維症は、コラーゲンの主要成分である、サンプル中のヒドロキシプロリン量の測定によっても観察することができる。
腎線維症のＵＵＯモデルを用いて、ｃＥｔを含む抗ｍｉＲ−２１化合物３６２３２、３６２３４、３６２３５、３６２３７及び３６３２８を試験した。動物群は以下の通り試験した：ＵＵＯのみ（ｎ＝４）、ＰＢＳを用いたＵＵＯ（ｎ＝８）または抗ｍｉＲ−２１化合物を用いたＵＵＯ（ｎ＝７〜８）。ＵＵＯ手技当日の４日前、２日前、当日及び３日後に、ＰＢＳまたは抗ｍｉＲ−２１化合物を投与した。抗ｍｉＲ−２１化合物は２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。抗ｍｉＲ化合物をＵＵＯ手技の前に投与したため、この投与レジメンは予防処置と考えられる。１１日目に、動物を屠殺し、コラーゲン発現の測定のため腎臓を単離した。コラーゲンの発現はリアルタイムＰＣＲにより測定し、最初にＧＡＰＤＨに対して、次いでシャム対照動物に対して補正した。統計学的有意性は一元ＡＮＯＶＡ検定により判定した。図１に示すように、３６２３２及び３６３２８による処置は、シャム処置動物と比較してコラーゲン１Ａ１（図１Ａ）及びコラーゲン３Ａ１（図１Ｂ）の発現を統計学的に有意に低下させた。化合物３６２３４、３６２３５及び３６２３７については、インビトロではｍｉＲ−２１の有効な阻害剤であるものの、インビボではコラーゲンの発現を統計学的に有意に低下させなかった。
これらの結果から、３６３２８及び３６２３２は腎線維症を含む線維症の処置または予防の候補薬であることが立証される。
化合物３６３２８及び３６２３２は、同一のＳ−ｃＥｔヌクレオシド配置を有し、インビトロ及びインビボでｍｉＲ−２１を阻害するものの、溶液中で著しく異なる粘度を示す。３６３２８は食塩水溶液中で高い粘性を示す一方、３６２３２は示さない。高粘性溶液は、抗ｍｉＲの要求量に対応するため、より大量の投与が必要とされることがあるうえ、量が増えると皮下投与は一層困難になるので、例えば皮下注射による投与に好適でない場合がある。低粘度溶液は、作用物質を投与しやすくするため望ましい場合がある。３６３２８の粘度を変化させるため、表Ｃに示すような変更例を設計した。各化合物について、ルシフェラーゼアッセイにおける活性、水中の粘度及びＵＵＯモデルにおける活性を試験した。
Figure 2015519891
ルシフェラーゼアッセイの結果を、ｍｏｃｋトランスフェクションに対するルシフェラーゼ活性の倍数として表Ｄに示す。表Ｄに示すように、３６２８３、３６２８４及び３６３２８は、ｍｉＲ−２１活性を阻害した。３６２８２及び３６２８５は、インビトロで効果的なｍｉＲ−２１の阻害剤でなかった。比較のため別の実験（上記）による３６３２８の阻害活性を示す。
Figure 2015519891
化合物は水に溶解させた。オリゴヌクレオチド濃度はルーティング方法を用いて重量測定法で計算し（ｍｇ／ｇ）、粘度（ｃＰ）は粘度計を用いて測定した。結果を表Ｅに示す。
Figure 2015519891
化合物番号３６３８２に単一のミスマッチを導入すると、粘度がごくわずか低下し、ルシフェラーゼアッセイにおいてｍｉＲ−２１阻害活性は著しく低下した。化合物番号３６２８５に３つのミスマッチを導入すると、粘度は著しく低下したが、ルシフェラーゼアッセイにおいてｍｉＲ−２１阻害活性が非常に乏しくなった。化合物３６２８３及び３６２８４は各々、ルシフェラーゼアッセイにおいてｍｉＲ−２１を阻害したが、非常に異なる粘度を示した。化合物３６２８４は３番目の核酸塩基に１つのミスマッチ、及び７番目の核酸塩基に１つのミスマッチを有し、非常に低い粘度を示した。化合物３６２８３は３番目の核酸塩基に１つのミスマッチ、及び５番目の核酸塩基に１つのミスマッチを有し、高粘度を有することが分かった。
インビボ活性を評価するため、化合物をそれぞれＵＵＯモデルを用いて試験した。動物群は以下の通り試験した：シャム手術（ｎ＝４）、ＰＢＳを用いたＵＵＯ（ｎ＝８）、または抗ｍｉＲ−２１化合物を用いたＵＵＯ（ｎ＝７〜８）。ＵＵＯ手技当日の３日前、１日前及び５日後、ＰＢＳまたは抗ｍｉＲ−２１化合物を投与した。抗ｍｉＲ−２１化合物は２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。抗ｍｉＲ化合物をＵＵＯ手技の前に投与したため、この投与レジメンは予防処置と考えられる。１１日目に、動物を屠殺し、コラーゲン発現の測定のため腎臓を単離した。コラーゲンの発現はリアルタイムＰＣＲにより測定し、最初にＧＡＰＤＨに対して、次いでシャム対照動物に対して補正した。統計学的有意性は一元ＡＮＯＶＡ検定により判定した。図２に示すように、３６２８３及び３６２８４による処置は、シャム処置動物と比較してコラーゲン１Ａ１（図２Ａ）及びコラーゲン３Ａ１（図２Ｂ）の発現を統計学的に有意に低下させた。化合物３６２８２及び３６２８５は、インビボではコラーゲンの発現を統計学的に有意に低下させなかった。
これらの結果から、３６２８４は、Ｃｏｌ１Ａ１及びＣｏｌ１Ａ３の両方の発現を有意に低下させ、溶液中で低粘度を示したことが立証される。
実施例２：抗ｍｉＲ−２１化合物の代謝安定性
いくつかの抗ｍｉＲ−２１化合物は、エンドヌクレアーゼ活性及び／またはエキソヌクレアーゼ活性による代謝を特に受けやすいことが明らかになっている。抗ｍｉＲの分布を促進し、半減期を延長するため、インビボでのヌクレアーゼの存在下で安定性が増加することは、抗ｍｉＲ−２１化合物の望ましい特性となり得、従って様々な構造の化合物について代謝安定性を試験した。試験した化合物は、ヌクレアーゼ活性の影響を受けやすいことが分かった２５９２３、及び構造変異体２５２２０及び２５２２１を含んでいた。各化合物の構造を表Ｆに示す。ヌクレオシド修飾は以下の通り表記される。即ち、後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを表し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを表し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを表す。ヌクレオシド間結合は各々ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
Figure 2015519891
エキソビボアッセイでは、肝臓ホモジネート（１ｍｌ当たり組織５０ｍｇ）中、５μＭのオリゴヌクレオチドを３７℃で２４時間インキュベートした。このインキュベーション後、オリゴヌクレオチドを液−液抽出（ＬＬＥ）により抽出し、続いて固相抽出（ＳＰＥ）を行った。オリゴヌクレオチドの長さ及び量は、高速液体クロマトグラフィー飛行時間型質量分析法（ＨＰＬＣ−ＴＯＦ ＭＳ）により測定した。肝組織ホモジネート中のヌクレアーゼ活性は、ヌクレアーゼ活性に対して耐性を示すことが分かっている化合物、３’−エキソヌクレアーゼ活性の影響を受けやすい化合物、及びエンドヌクレアーゼ活性の影響を受けやすい化合物を含む標準オリゴヌクレオチドを使用して確認した。内部標準化合物を抽出効率の対照として使用した。インビボでの代謝安定性の試験のため、化合物をマウスに投与し、腎組織を単離し、エキソビボアッセイと同様に化合物の抽出及び検出を行った。表Ｇは、化合物２５９２３、２５２２０及び２５２２１の構造と、安定性測定の結果とを示す。
Figure 2015519891
表Ｇに示すように、化合物２５２２０及び２５２２１は、エキソビボアッセイ及びインビボアッセイの両方でヌクレアーゼ活性に対する耐性の増加を示した。
線維症に対する化合物の作用を評価するため、ＵＵＯモデルを用いて化合物２５２２０及び２５２２１並びに２５９２３を試験した。動物８匹の群を各々、以下の通り試験した：シャム手術、ＰＢＳを用いたＵＵＯ、２５２２０を用いたＵＵＯ、２５２２１を用いたＵＵＯまたは２５９２３を用いたＵＵＯ。ＵＵＯ手技当日の５日前、３日前及び３日後に、ＰＢＳまたは抗ｍｉＲ−２１化合物を投与した。抗ｍｉＲ−２１化合物は２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。抗ｍｉＲ化合物をＵＵＯ手技の前に投与したため、この投与レジメンは予防処置と考えられる。１０日目に、動物を屠殺し、コラーゲン発現の測定のため腎臓を単離した。コラーゲンの発現はリアルタイムＰＣＲにより測定し、ＧＡＰＤＨに対して補正した。
この実験の結果を図３に示す。コラーゲン１Ａ１及びコラーゲン３Ａ１の発現をそれぞれ図３Ａ及び３Ｂに示す。化合物２５２２０または２５２２１の投与により、コラーゲン１Ａ１及びコラーゲン３Ａ１の発現は化合物２５９２３の投与と同様、統計学的に有意な量で低下した（＊＝ｐ＜０．０５；＊＊＝ｐ＜０．０１；＊＊＊＝ｐ＜０．００１）。
これらの結果から、２５２２０及び２５２２１がＣｏｌ１Ａ１発現及びＣｏｌ３Ａ１発現の両方を有意に低下させ、ヌクレアーゼによる代謝に対する抵抗性を示すことが立証される。
更に２５２８４の代謝安定性も試験した。エキソビボアッセイでは、全長化合物のみが検出された。インビボでは、検出された化合物の９６％が全長化合物であった。これらの結果から、２５２８４がヌクレアーゼ活性に対して高度の抵抗性を示すことが立証される。
実施例３：虚血／再灌流傷害モデルにおけるｍｉＲ−２１の阻害
一側虚血再灌流障害（ＩＲＩ）モデルは、進行性間質線維症を引き起こす、特性が十分に解明された腎傷害モデルである。短時間腎動脈をクランプしてから血流を回復させることにより、マウスに障害を起こさせる。再灌流の結果、腎臓に重篤な傷害が引き起こされ、その後線維症を伴う慢性傷害になる。慢性傷害に至るＩＲＩは頻繁にヒトで観察され、従って腎傷害と関連した線維症を処置及び／または予防するための候補薬を試験するのに、マウスＩＲＩモデルを使用することができる。
一側ＩＲＩモデルを用いて抗ｍｉＲ−２１化合物を試験した。一側ＩＲＩを３０分の期間誘発した（０日目）。処置群は以下の通りであった：シャムＩＲＩ手技；ＰＢＳの皮下投与を用いたＩＲＩ；２０ｍｇ／ｋｇの用量で抗ｍｉＲ−２１化合物の腹腔内投与を用いたＩＲＩ。ＩＲＩから５日後、６日後及び７日後にＰＢＳまたは抗ｍｉＲ化合物を投与し、１３日目に動物を屠殺した。線維症が既にある程度発症している、腎臓の傷害から５日後以降に抗ｍｉＲ化合物を投与するため、この処置レジメンは予防レジメンではなく治療レジメンと考えられる。
コラーゲン１Ａ１及びコラーゲン３Ａ１の発現と、コラーゲン領域画分（前の例に記載される）との解析のため、腎組織を採取した。統計学的有意性は一元ＡＮＯＶＡ検定により判定した。結果を図４に示す。この研究では、３６３２８または３６２３２を用いた抗ｍｉＲ−２１処置により、Ｃｏｌ１ａ１発現（図４Ａ；＊＝ｐ＜０．０５）及びコラーゲン領域画分（図４Ｃ；＊＊＊＝ｐ＜０．０００１）が統計学的に有意に低下した。化合物３６２３２は、Ｃｏｌ３ａ１発現を統計学的に有意に低下させた（図４Ｂ）。化合物３６３２８はＣｏｌ３ａ１発現を低下させたが、しかしながらその低下は統計学的に有意ではなかった（図４Ｂ）。
これらの研究から、急性腎傷害モデルにおいてｍｉＲ−２１の阻害後にコラーゲン量が減少することが立証される。従って、抗ｍｉＲ−２１化合物３６２３２及び３６３２８は、急性腎傷害と関連した線維症の処置の治療薬である。例えば、急性腎傷害後の線維症の発症を予防または遅延させると、線維症及び慢性腎疾患の発症を予防または遅延させ得る。
実施例４：虚血再灌流障害／腎摘出モデルにおけるｍｉＲ−２１の阻害
尿細管の損傷、炎症及び線維症を引き起こす、一方の腎臓の動脈の一側クランプを一時的に行うことにより、マウスを用いて虚血再灌流障害／腎摘出（ＩＲ／Ｎｘ）モデルを作製し、続いて、その後の時点にもう一方の腎臓を摘出する。このモデルでは、急性腎機能障害期（即ち最初の約５日間）が急性腎傷害処置の候補薬の試験に有用であり、腎機能障害の後期（即ち最初の約５日間より後）は慢性線維症モデルの作製に有用である。
ＩＲ／Ｎｘモデルで抗ｍｉＲ−２１化合物を試験した。ｍｉＲ−２１に対して６塩基ミスマッチがある２５１０９を対照化合物として使用した（ＡＥＡＳＡＴＣＳＴＧＴＣＳＴＣＡＵＳＡＡＴＡＳＡＡＥ；配列番号１４；式中、後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−デオキシヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを示し；ヌクレオシド間結合は全てホスホロチオエートヌクレオシド間結合である）。
一側ＩＲは３０分の期間誘発した。処置群は以下の通りであった：シャムＩＲ手技（ｎ＝８）；ＰＢＳの皮下投与を用いたＩＲ（ｎ＝１６）；２０ｍｇ／ｋｇの用量でミスマッチ対照２５１０９の皮下投与を用いたＩＲ（ｎ＝１６）；及び２０ｍｇ／ｋｇの用量で抗ｍｉＲ−２１化合物３６３２８の皮下投与を用いたＩＲ（ｎ＝１６）。ＩＲから２日後、３日後、４日後及び８日後にＰＢＳまたは抗ｍｉＲを投与した。８日目に、各動物から健康な腎臓を腎摘出により摘出し、９日目に動物を屠殺した。屠殺の直前に、直接膀胱穿刺により尿を採取した。
アルブミン尿を評価するため、各マウス由来の尿における尿中アルブミン／クレアチニン比を測定した。この実験の結果を図５Ａに示す。この研究では、３６３２８が尿中アルブミン／クレアチニン比を統計学的に有意に低下させた（図５Ａ）。各マウス群のアルブミン／クレアチニン比の幾何平均は、１６μｇＡｌｂ／ｍｇＣｒ（腎摘出のみの対照）、１２７μｇＡｌｂ／ｍｇＣｒ（ＩＲ／Ｎｘ、ＰＢＳの対照）、１４０μｇＡｌｂ／ｍｇＣｒ（ＩＲ／Ｎｘ、２５１０９の対照）及び３０μｇＡｌｂ／ｍｇＣｒ（ＩＲ／Ｎｘ、３６３２８）であった。ＩＲ／Ｎｘマウス全体を通して血中尿素窒素及び血清クレアチニンのレベルは類似しており、腎摘出のみの対照マウスに比較して高かった（データ示さず）。
同様に設計した実験において、ＩＲ／Ｎｘモデルを用いて化合物３６２８４を更に試験した。一側ＩＲを３０分の期間誘発した。処置群は以下の通りであった：シャムＩＲ手技（ｎ＝７）；ＰＢＳの皮下投与を用いたＩＲ（ｎ＝１３）；及び２０ｍｇ／ｋｇの用量で抗ｍｉＲ−２１化合物３６２８４の皮下投与を用いたＩＲ（ｎ＝１９）。ＩＲから２日後、３日後、４日後及び８日後にＰＢＳまたは抗ｍｉＲを投与した。８日目に、各動物から腎摘出により健康な腎臓を摘出し、９日目に動物を屠殺した。屠殺の直前に、直接膀胱穿刺により尿を採取した。アルブミン尿を評価するため、各マウス由来の尿における尿中アルブミン／クレアチニン比を測定した。この実験の結果を図５Ｂに示す。この研究では、３６２８４は尿中アルブミン／クレアチニン比を統計学的に有意に低下させた。
ＩＲ／Ｎｘモデルを用いて化合物２５２２０を更に試験した。一側ＩＲを３０分の期間誘発した。処置群は以下の通りであった：シャムＩＲ手技（ｎ＝７）；ＰＢＳの皮下投与を用いたＩＲ（ｎ＝１３）；及び２０ｍｇ／ｋｇの用量で抗ｍｉＲ−２１化合物２５２２０の皮下投与を用いたＩＲ（ｎ＝１９）。ＩＲから２日後、３日後、４日後及び８日後に、ＰＢＳまたは抗ｍｉＲを投与した。８日目に、各動物から腎摘出により健康な腎臓を摘出し、９日目に動物を屠殺した。屠殺の直前に、直接膀胱穿刺により尿を採取した。アルブミン尿を評価するため、各マウス由来の尿における尿中アルブミン／クレアチニン比を測定した。この実験の結果を図５Ｃに示す。この研究では、２５２２０は尿中アルブミン／クレアチニン比を統計学的に有意に低下させた。
実施例５：抗ｍｉＲ−２１化合物の投与後のＩＲ／Ｎｘモデルマウスの生存率
６つの異なる実験において腎摘出から２日後のＩＲ／Ｎｘモデルマウスの生存率を検討し、抗ｍｉＲ−２１化合物の投与により生存率が上昇するかどうかを判定した。最初の３実験では、抗ｍｉＲ−２１化合物を虚血再灌流障害から５日後、６日後及び７日後に投与し、１０日目または１１日目に腎摘出を行った。第２の３実験では、抗ｍｉＲ−２１化合物を２日目、３日目及び４日目に投与し、７日目に腎摘出を行った。各実験におけるＩＲ／Ｎｘマウスの生存率を表Ｈに示す。
Figure 2015519891
１０日目に腎摘出を行った最初の実験では、ＰＢＳ処置マウスの生存率は５５％であったのに対し、３６３２８処置マウスの生存率は７５％であった（フィッシャーの正確確率検定（片側）によりＰ＝０．０２）。７日目に腎摘出を行った第２の実験では、ＰＢＳ処置マウスの生存率は５２％であったのに対し、３６３２８処置マウスの生存率は６９％であった（フィッシャーの正確確率検定（片側）によりＰ＝０．１１）。
実施例６：抗ｍｉＲ−２１化合物
ｍｉＲ−２１を標的とし、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドを含む別の抗ｍｉＲを、長さのほか、修飾糖部分の数、種類及び配置を変化させて設計した。これらの抗ｍｉＲを表Ｉに示す。ヌクレオシドパターンＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ及びＶＩＩを表Ｉの最初の３行に示す。ヌクレオシド修飾は以下の通り表記される。即ち、後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを表し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを表し；後に下付き文字「Ｍ」があるヌクレオシドは２’−Ｏ−メチルヌクレオシドを表し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを表す。ヌクレオシド間結合は各々ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
Figure 2015519891
Figure 2015519891
Figure 2015519891
表Ｉから選択された化合物について、ｍｉＲ−２１活性に対するその阻害作用をインビトロルシフェラーゼアッセイで評価した。アッセイは本明細書に記載した通り行った。結果を表Ｊ及び図６Ａに示す。
Figure 2015519891
表Ｊのデータ及び繰り返し実験のデータに基づき、化合物３６７３１、３６０３９、３６８４６及び３６８４７がルシフェラーゼアッセイにおいてｍｉＲ−２１を一貫して阻害することが認められた。
更にいくつかの抗ｍｉＲ−２１化合物について、細胞増殖に対するその作用をインビトロアッセイで試験した。２つのミスマッチ対照抗ｍｉＲ（３６９６５ ＧＥＧＳＡＥＡＥＵＳ Ｍ Ｃ Ｅ ＴＥＴＥＡＳＡＣＴＡＳＧＡＣＵＳＡＳＣＳ、配列番号１５；３６９６７ ＧＥＡＳＡＥＴＥＡＳＡＥＴＥＡＥＵＳＡＡＣＣＳＣＣＴＧＳＧＳＵＳ、配列番号１６）を使用した。この実験にはヒト腺癌細胞株ＳＫ−Ｈｅｐ１を使用した。ＳＫ−Ｈｅｐ１をコラーゲンコート９６ウェルプレートに５００細胞／ウェルの密度で播種した。翌日、細胞を５０ｎＭ〜２０ｕＭの範囲の濃度の抗ｍｉＲで処置した（１処置毎にｎ＝６ウェル）。トランスフェクション試薬は使用しなかった。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙを用いて細胞生存率を測定した。結果は未処置対照と比較した生細胞の割合として計算した。表Ｋ及び図６Ｂに示すように、化合物３６７３１、３６８４６、３６８４７及び２５２２０は、濃度依存性に細胞生存率を低下させた。
Figure 2015519891
細胞生存率を低下させる化合物は、癌の処置のための候補治療薬である。
線維症モデルにおけるインビボ活性を評価するため、ＵＵＯモデルを用いていくつかの化合物を試験した。動物群は以下の通り試験した：シャム手術（ｎ＝４）、ＰＢＳを用いたＵＵＯ（ｎ＝８）または抗ｍｉＲ−２１化合物を用いたＵＵＯ（ｎ＝８）。ＵＵＯ手技当日の５日前、３日前及び３日後に、ＰＢＳまたは抗ｍｉＲ−２１化合物を投与した。抗ｍｉＲ−２１化合物は２０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。抗ｍｉＲ化合物をＵＵＯ手技の前に投与したため、この投与レジメンは予防処置と考えられる。ＵＵＯ手技から１０日後に、動物を屠殺し、コラーゲン発現の測定のため腎臓を単離した。コラーゲンの発現はリアルタイムＰＣＲにより測定し、最初にＧＡＰＤＨに対して、次いでシャム対照動物に対して補正した。統計学的有意性は一元ＡＮＯＶＡ検定により判定した。図７に示すように、３６７３１及び３６０５５による処置は、シャム処置動物と比較してコラーゲン１Ａ１（図７Ａ）及びコラーゲン３Ａ１（図７Ｂ）の発現を統計学的に有意に低下させた（＊＝ｐ＜０．０５；＊＊＝ｐ＜０．０１）。化合物３６８４７は、コラーゲン１Ａ１及びコラーゲン３Ａ１の発現を低下させたものの、この研究では統計学的に有意でなかった。
更に、いくつかの化合物の粘度も測定した。化合物は水に溶解させた。オリゴヌクレオチド濃度はルーティング方法を用いて重量測定法で計算し（ｍｇ／ｇ）、粘度（ｃＰ）は粘度計を用いて測定した。結果を表Ｌに示す。
Figure 2015519891
化合物３６７３１及び３６８４６は、３６８４７及び本明細書に記載の他の化合物と比較して比較的低い粘度を示した。
いくつかの化合物の代謝安定性を測定した。上記のように行ったエキソビボアッセイにおいて、アッセイの終了時に全長３６７３１化合物の約８９％が検出された。従って、３６７３１はヌクレアーゼの存在下で高度に安定な化合物である。
実施例７：異種移植モデル
有望な癌治療剤のインビボでの有効性を測定するには、ヒト異種移植モデルが使用されることが多い。
ヒト癌細胞を免疫不全マウスに注射して、細胞株を用いた異種移植モデルを作成する。注射された細胞は腫瘍を形成するので、有望な抗癌剤の作用を、腫瘍の大きさ、腫瘍数、腫瘍構造及び転移能などのパラメーターに対する影響について評価することができる。細胞を培養で増殖させ、次いでマウスへの注射用に回収する。細胞は癌細胞株（例えばＳＫ−Ｈｅｐ１、Ｈｕｈ７、ＨｅＬａ２９３、Ｈｅｐ３Ｂ、ＳＮＵ）由来とする。腫瘍増殖を惹起するため、免疫不全マウス（例えばＳＣＩＤマウスまたは胸腺欠損ヌードマウス）の側腹部に約５×１０６細胞を皮下注射する。細胞は、最大７５ｍｍ２の平均体積の腫瘍を形成することができる。
患者由来の腫瘍組織異種移植モデル（患者由来の異種移植モデルまたはＰＤＸモデル）を、ヒト腫瘍の外植片を免疫不全マウスに移植することにより樹立する。原腫瘍の特徴をできる限り多く保存するため、外植片をあるマウスから別のマウスで増殖させてもよいが、細胞培養で増殖させないのが一般的である。
抗ｍｉＲ−２１化合物について、ヒト異種移植モデルでその抗癌作用を試験する。腫瘍が適切な大きさである場合、マウスを以下の通り処置する：ＰＢＳ（ｎ＝５〜１０）；抗ｍｉＲ−２１（ｎ＝５〜１０）；または抗ｍｉＲ−２１のミスマッチ（任意；ｎ＝５〜１０）。処置剤を最大１２週間、最大週３回皮下投与する。
腫瘍の大きさは、例えばカリパスを用いて週１〜２回測定する。体重は、週２〜３回測定する。血液は、毎週及び研究の終了時に採取する。腫瘍及び他の組織は、研究の終了時に採取する。
ＰＢＳ処置マウスと比較して抗ｍｉＲ−２１処置マウスに腫瘍の大きさにおける腫瘍の大きさの縮小が観察されると、抗ｍｉＲ−２１が、癌の処置に使用することができる治療薬であることが示唆される。
本明細書に記載の変形例に加えて、本発明の様々な変形例が、明細書本文から当業者には明らかになるであろう。こうした変形例も、添付の特許請求の範囲の範囲に包含されることを意図している。本出願に引用した各参考文献（以下に限定されるものではないが、学術論文、米国及び非米国特許、特許出願公開、国際特許出願公開、ＧＥＮＢＡＮＫ（登録商標）受託番号及び同種のもの）は、明確にその全体を本明細書に援用する。

Claims (65)

  1. ８〜２２個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がｍｉＲ−２１（配列番号１）と相補的であり、かつ前記修飾オリゴヌクレオチドは５’から３’方向に以下のヌクレオシドパターンＩＩＩで少なくとも８個連続するヌクレオシドであり：
    （Ｒ）Ｘ−ＮＢ−ＮＱ−ＮＱ−ＮＢ−（ＮＱ−ＮＱ−ＮＱ−ＮＢ）３−ＮＹ−ＮＺ
    式中、Ｒは各々非二環式ヌクレオシドであり；Ｘは１〜４であり；
    ＮＢは各々、二環式ヌクレオシドであり；
    ＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドであり；
    ＮＹは各々、修飾ヌクレオシドまたは非修飾ヌクレオシドであり；かつ
    ＮＺは各々、修飾ヌクレオシドである
    オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
  2. ８〜１９個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列はｍｉＲ−２１（配列番号１）と相補的であり、かつ前記修飾オリゴヌクレオチドは５’から３’方向に以下のヌクレオシドパターンＩＶで少なくとも８個連続するヌクレオシドであり：
    ＮＭ−ＮＢ−ＮＱ−ＮＱ−ＮＢ−（ＮＱ−ＮＱ−ＮＱ−ＮＢ）３−ＮＹ−ＮＺ
    式中、ＮＭは二環式ヌクレオシドではない修飾ヌクレオシドであり；
    ＮＢは各々、二環式ヌクレオシドであり；
    ＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドであり；
    ＮＹは修飾ヌクレオシドまたは非修飾ヌクレオシドであり；かつ
    ＮＺは修飾ヌクレオシドである
    ヌクレオシドを含む、化合物。
  3. ８〜１９個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列はｍｉＲ−２１（配列番号１）と相補的であり、かつ前記修飾オリゴヌクレオチドは５’から３’方向に以下のヌクレオシドパターンＶで少なくとも８個連続するヌクレオシドであり：
    ＮＭ−ＮＢ−（ＮＱ−ＮＱ−ＮＢ−ＮＢ）４−ＮＺ
    式中、ＮＭは二環式ヌクレオシドではない修飾ヌクレオシドであり；
    ＮＢは各々、二環式ヌクレオシドであり；
    ＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドであり；かつ
    ＮＺは修飾ヌクレオシドである
    ヌクレオシドを含む、化合物。
  4. ８〜１５個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がｍｉＲ−２１（配列番号１）と相補的であり、かつ前記修飾オリゴヌクレオチドは、５’から３’方向に以下のヌクレオシドパターンＶＩで少なくとも８個連続するヌクレオシドであり：
    ＮＱ−ＮＢ−ＮＢ−ＮＱ−（ＮＢ−ＮＢ−ＮＱ−ＮＱ）２−ＮＢ−ＮＱ−ＮＢ
    式中、ＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドであり；かつ
    ＮＢは各々、二環式ヌクレオシドである
    オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
  5. ８〜１９個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がｍｉＲ−２１（配列番号１）と相補的であり、かつ前記修飾オリゴヌクレオチドは、５’から３’方向に以下のヌクレオシドパターンＶＩＩで少なくとも８個連続するヌクレオシドであり：
    ＮＭ−（ＮＢ−ＮＭ−ＮＭ）２−ＮＭ−（ＮＢ−ＮＱ−ＮＱ−ＮＱ）２−ＮＢ−ＮＢ−ＮＺ
    式中、ＮＭは各々、二環式ヌクレオシドでない修飾ヌクレオシドであり；
    ＮＢは各々、二環式ヌクレオシドであり；
    ＮＱは各々、非二環式ヌクレオシドであり；かつ
    ＮＺは修飾ヌクレオシドである
    オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
  6. 二環式ヌクレオシドは各々ＬＮＡヌクレオシド、ｃＥｔヌクレオシド及びＥＮＡヌクレオシドから独立に選択される、請求項１〜５の何れか１項に記載の化合物。
  7. 二環式ヌクレオシド各々はＳ−ｃＥｔヌクレオシドである、請求項１〜６の何れか１項に記載の化合物。
  8. 二環式ヌクレオシドは各々ＬＮＡヌクレオシドである、請求項１〜６の何れか１項に記載の化合物。
  9. 非二環式ヌクレオシドは各々独立にβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド、２’−Ｏ−メチル及び２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから選択される、請求項１〜８の何れか１項に記載の化合物。
  10. 非二環式ヌクレオシドは各々独立にβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド及び２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから選択される、請求項１〜９の何れか１項に記載の化合物。
  11. 非二環式ヌクレオシドは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである、請求項１〜１０の何れか１項に記載の化合物。
  12. 非二環式ヌクレオシドは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである、請求項１〜８の何れか１項に記載の化合物。
  13. ａ．Ｒは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；Ｘは１であり；
    ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
    ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
    ＮＹはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；かつ
    ＮＺは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；
    ｂ．Ｒは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；Ｘは１であり；
    ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
    ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
    ＮＹはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；かつ
    ＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシドであり；或いは
    ｃ．Ｒは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；Ｘは１であり；
    ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
    ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
    ＮＹはＳ−ｃＥｔヌクレオシドであり；かつ
    ＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである
    請求項１に記載の化合物。
  14. Ｒは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；Ｘは１であり；
    ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
    ＮＱは各々独立にβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド及び２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから選択され；
    ＮＹはＳ−ｃＥｔヌクレオシド及びβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドから選択され；かつ
    ＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである
    請求項１に記載の化合物。
  15. ａ．ＮＭは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；
    ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
    ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
    ＮＹはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
    ＮＺは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；かつ
    ｂ．ＮＭは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；
    ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
    ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
    ＮＹはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；かつ
    ＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
    ｃ．ＮＭは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；
    ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
    ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；
    ＮＹはＳ−ｃＥｔヌクレオシドであり；かつ
    ＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである
    請求項２に記載の化合物。
  16. ＮＭは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；
    ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
    ＮＱは各々独立にβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド及び２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから選択され；
    ＮＹはＳ−ｃＥｔヌクレオシド及びβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドから選択され；かつ
    ＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである
    請求項２に記載の化合物。
  17. 下記構造を有する、請求項１、２、１４及び１６の何れか１項に記載の化合物であって：
    ＡＥＣＳＡＥＴＥＣＳＡＥＧＥＴＥＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＴＡＳ（配列番号３）；または
    ＡＥＣＳＡＥＴＥＣＳＡＥＧＥＴＥＣＳＴＧＡＵＳＡＡＧＣＳＵＳＡＳ（配列番号３）
    式中、後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドであり；かつ後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである
    化合物。
  18. ＮＭは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；
    ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
    ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；かつ
    ＮＺは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである
    請求項３に記載の化合物。
  19. 下記構造を有する請求項３に記載の化合物であって：
    ＡＥＣＳＡＴＣＳＡＳＧＴＣＳＵＳＧＡＵＳＡＳＡＧＣＳＵｓＡＥ（配列番号８）；
    式中、後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドであり；かつ後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドである
    化合物。
  20. ａ．ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；かつ
    ＮＱは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；或いは
    ｂ．ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；かつ
    ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドである
    請求項４に記載の化合物。
  21. 下記構造を有する請求項４または請求項２０に記載の化合物であって：
    ＭｅＣＥＡＳＡＳＴＥＣＳＵＳＡＥＡＥＵＳＡＳＡＥＧＥＣＳＴＥＡＳ（配列番号７）；
    式中、後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドであり；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドであり；かつＭｅＣは５−メチルシトシンである
    化合物。
  22. ａ．ＮＭは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；
    ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
    ＮＱは各々独立に２’−Ｏ−メチルヌクレオシド及びβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドから選択され；かつ
    ＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシド及び２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドから選択され；
    ｂ．ＮＭは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；
    ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
    ＮＱは各々β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドであり；かつ
    ＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
    ｃ．ＮＭは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；
    ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
    ＮＱは各々独立に２’−Ｏ−メチルヌクレオシド及びβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドから選択され；かつ
    ＮＺはＳ−ｃＥｔヌクレオシドであり；或いは
    ｄ．ＮＭは各々２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドであり；
    ＮＢは各々Ｓ−ｃＥｔヌクレオシドであり；
    ＮＱは各々独立に２’−Ｏ−メチルヌクレオシド及びβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドから選択され；かつ
    ＮＺは２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドである
    請求項５に記載の化合物。
  23. 前記修飾オリゴヌクレオチドはヌクレオシドパターンＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩまたはＶＩＩで少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個、または２２個連続するヌクレオシドを含む、請求項１〜２２の何れか１項に記載の化合物。
  24. 前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基配列（配列番号１）と少なくとも９０％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％相補的である、請求項１〜２３の何れか１項に記載の化合物。
  25. 前記修飾オリゴヌクレオチドはヌクレオシドパターンＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩまたはＶＩＩで８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個または２２個連結したヌクレオシドからなる、請求項１〜２４の何れか１項に記載の化合物。
  26. 少なくとも１つのヌクレオシド間結合は修飾ヌクレオシド間結合であるか、またはヌクレオシド間結合は各々、修飾ヌクレオシド間結合であり、前記修飾ヌクレオシド間結合は任意選択的にホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項１〜２５の何れか１項に記載の化合物。
  27. 少なくとも１つのシトシンは５−メチルシトシンであるか、またはシトシンは各々５−メチルシトシンである、請求項１〜２６の何れか１項に記載の化合物。
  28. 前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は配列番号３〜１０から選択され、Ｔは各々独立にＴ及びＵから選択される、請求項１〜２７の何れか１項に記載の化合物。
  29. 前記修飾オリゴヌクレオチドはｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して０、１つ、２つまたは３つのミスマッチを有する、請求項１〜２８の何れか１項に記載の化合物。
  30. 前記修飾オリゴヌクレオチドはｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して０のミスマッチを有する、請求項２９に記載の化合物。
  31. 前記修飾オリゴヌクレオチドはｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して１つのミスマッチを有する、請求項２９に記載の化合物。
  32. 前記修飾オリゴヌクレオチドはｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して２つのミスマッチを有する、請求項２９に記載の化合物。
  33. ８〜２２個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物であって、前記修飾オリゴヌクレオチドは表１の諸構造から選択される構造の少なくとも８個、少なくとも９個、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７、少なくとも１８個または少なくとも１９個連続するヌクレオシドを含む、化合物。
  34. 表１の諸構造から選択される構造を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
  35. ｍｉＲ−２１の活性を阻害する方法であって、請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物と細胞を接触させることを含む、方法。
  36. 前記細胞はインビボにあるか、または前記細胞はインビトロにある、請求項３５に記載の方法。
  37. 前記細胞は線維芽細胞、過剰増殖細胞、ケラチノサイトまたは低酸素細胞である、請求項３５または３６に記載の方法。
  38. 細胞におけるコラーゲンの発現を低下させる方法であって、請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物と細胞を接触させることを含む、方法。
  39. ｍｉＲ−２１に関連する疾患の発症を処置、予防または遅延させる方法であって、ｍｉＲ−２１に関連する疾患を有する被検体に請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物を投与することを含む、方法。
  40. 前記疾患は線維症である、請求項３９に記載の方法。
  41. 前記線維症は腎線維症、肺線維症、肝線維症、心線維症、皮膚線維症、加齢に伴う線維症、脾線維症、強皮症及び移植後の線維症から選択される、請求項４０に記載の方法。
  42. ａ．前記腎線維症は、糸球体硬化症、尿細管間質線維症、ＩｇＡ腎症、間質線維症／尿細管萎縮；慢性腎障害、糸球体疾患、糸球体腎炎、アルポート症候群、糖尿病、特発性巣状分節性糸球体硬化症、膜性腎症、虚脱性糸球体症、慢性再発性腎感染症及び末期腎臓病から選択される疾患を有する被検体に存在し；
    ｂ．前記腎線維症は腎臓の急性または反復性外傷に起因し；
    ｃ．前記肝線維症は、慢性肝傷害、肝炎感染症、非アルコール性脂肪性肝炎及び硬変から選択される疾患を有する被検体に存在し；前記肺線維症は特発性肺線維症であり；及び／または
    ｄ．前記被検体は慢性閉塞性肺疾患を有する
    請求項４１に記載の方法。
  43. 被検体の線維増殖性障害を処置する方法であって、請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物を前記被検体に投与することを含む、方法。
  44. １つまたは複数の組織においてｍｉＲ−２１発現が増加した被検体を選択することを含む、請求項３５〜４３の何れか１項に記載の方法。
  45. 前記被検体は臓器機能の改善を必要としており、前記臓器機能は心機能、肺機能、肝機能、及び腎機能から選択される、請求項３９〜４４の何れか１項に記載の方法。
  46. 前記投与は前記被検体の臓器機能を改善し、前記臓器機能は心機能、肺機能、肝機能及び腎機能から選択される、請求項３９〜４５の何れか１項に記載の方法。
  47. 抗炎症薬、免疫抑制薬、抗糖尿病薬、ジゴキシン、血管拡張薬、アンジオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、カルシウムチャネル遮断薬、二硝酸イソソルビド、ヒドララジン、ニトレート、ヒドララジン、β遮断薬、ナトリウム利尿ペプチド、ヘパリノイド及び結合組織増殖因子阻害剤から選択される少なくとも一つの治療薬を投与することを含む、請求項３９〜４６の何れか１項に記載の方法。
  48. 前記疾患は癌である、請求項３９に記載の方法。
  49. 前記癌は肝癌、乳癌、膀胱癌、前立腺癌、結腸癌、肺癌、脳癌、血液癌、膵癌、頭頸部癌、舌癌、胃癌、皮膚癌または甲状腺癌である、請求項４８に記載の方法。
  50. 少なくとも１つの追加の抗癌治療剤を前記被検体に投与することを更に含む、請求項４８または請求項４９に記載の方法。
  51. 前記被検体はヒトである、請求項３９〜５０の何れか１項に記載の方法。
  52. 前記化合物は医薬組成物として存在する、請求項３５〜５１の何れか１項に記載の方法。
  53. 治療に使用される、請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物。
  54. 線維症の処置に使用される、請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物。
  55. 被検体の腎機能障害または末期腎臓病の処置及び／または予防に使用される、請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物。
  56. 創傷治癒の促進に使用される、請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物。
  57. 癌の処置に使用される、請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物。
  58. 転移の発症の予防及び／または遅延に使用される、請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物。
  59. 心臓病の処置に使用される、請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物。
  60. 薬物を調製するための、請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物の使用。
  61. 線維症を処置する薬物を調製するための、請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物の使用。
  62. 創傷治癒を促進する薬物を調製するための、請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物の使用。
  63. 癌を処置する薬物を調製するための、請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物の使用。
  64. 転移の発症を防止及び／または遅延させる薬物を調製するための、請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物の使用。
  65. 腎機能障害または末期腎臓病の発症を防止及び／または遅延させる薬物を調製するための、請求項１〜３４の何れか１項に記載の化合物の使用。
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