JP2015506962A - がんを治療又は予防するためのタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを含有する薬剤及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

【課題】がんを治療又は予防するためのタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを含有する薬剤及びその製造方法の提供。【解決手段】本発明は、がんを治療又は予防するためのタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを含有する薬剤の改良された製造方法に関する。一態様によれば、該方法は、タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根を凍結して凍結根ストックを得る工程であって、１以上の根細胞が少なくとも部分的に破壊されるよう選択される工程；上記凍結根ストックを乾式粉砕して根粉末を得る工程であって、上記凍結根ストックが約４０℃未満の粉砕温度で保持される工程；溶媒に上記根粉末を浸漬して、流エキス部分と固体粒子部分を含む懸濁液を得る工程；及び、上記流エキス部分を上記固体粒子部分から分離して、上記薬剤で使用される流エキスを得る工程を有する。【選択図】図１

Description

（関連出願）
本出願は、２０１２年２月１０日に出願された米国仮特許出願番号６１／５９７，４５３について、米国法典第３５編第１１９条（ｅ）の利益を主張する。

（技術分野）
本発明は、タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）に属する植物の根エキスを含有し、がんを治療、改善又は予防するために使用される薬剤の改良された製造方法に関する。具体的には、本発明は、がん、好ましくは、結腸がん、膵がん、皮膚がん（黒色腫等）及び血液がん（慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、ホジキンリンパ腫等）を治療及び／又は予防するのに使用されるタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを含有する医薬組成物の製造に関する。

タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物は一般的にタンポポとして知られており、キク科に属している。これらの植物は通常北半球の温帯に見られ、タンポポの種類としては、Ｔ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ、Ｔ．ｅｒｙｔｈｒｏｓｐｅｒｍｕｍ、Ｔ．ａｌｂｉｄｕｍ、Ｔ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｔ．ｌａｅｖｉｇａｔｕｍ、Ｔ．ｅｒｙｔｈｒｏｓｐｅｒｍｕｍ、及び、Ｔ．ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｍ等が挙げられる。

タンポポは直根性の二年生又は多年生草本植物であり、平均長は１５〜３０ｃｍである。葉は大きく、薄緑〜深緑色であり、根元でロゼット状に広がる。花茎は直立しており、単頂花序である。花の直径は７〜１５ｍｍであり、１４０〜４００枚の黄色い舌状花で構成されている。果実は褐色の円錐状の痩果であり、白い冠毛を有しており、それにより種子が風に乗って遠くまで散らばる。

タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根は、多くの場合、セスキテルペン類、カロテノイド類、クマリン類、フラボノイド類、フェノール酸類、多糖類、オイデスマノリド類、トリテルペン類、ステロール類、ステロイド類等の種々の化合物を含有している。そのような化合物の具体例としては、ゲルマクラノリド、オイデスマノリド、グアイアノリド、タラキサシン、フェニルプロパノイド配糖体、タラキサコシド、ラクツピルシン（ｌａｃｔｕｐｉｒｃｉｎ）、ルテイン、ビオラキサンチン、エスクリン、スコポレチン、ケルセチン、ルテオリン、ルチン、クリソエリオール、コーヒー酸、バニリン酸、シリング酸、フェルラ酸、クロロゲン酸、チコリ酸、ρ−ヒドロキシフェニル酢酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、イヌリン、グルカン類、マンナン類、プルナシン、１１β，１３−ジヒドロラクチュシン、イキセリンＤ、アインスリオシド（ａｉｎｓｌｉｏｓｉｄｅ）タラキシン酸、β−グルコピラノシル、タラキシン酸、グルコシルエステル、１１，１３−ジヒドロタラキシン酸、ｌ’−グルコシド、ラクチュコピクリン、ラクチュシン、シコリン、テトラヒドロリデンチンＢ、タラキサコリド（ｔａｒａｘａｃｏｌｉｄｅ）−Ｏ−β−グルコピラノシド、プルナシン、ジヒドロコニフェリン、シリンギン、ジヒドロシリンギン、タラキサステロール、ψ−タラキサステロール、ホモ−タラキサステロール、スチグマステロール、シクロアルテノール、ウンベリフェロン、タラキサリシン（ｔａｒａｘａｌｉｓｉｎ）、α−アミリン、β−アミリン、アルニジオール、ファラジオール、ルペオール、タラキソール（ｔａｒａｘｏｌ）、タラキサセロール（ｔａｒａｘａｓｅｒｏｌ）、３β−ヒドロキシルパ−１８−エン−２１−オン、β−シトステロール、カンペステロール、レタスニンＡ、コリン、ムシラーゲ、ペクチン及びタラキセロール等が挙げられる。

従来、タンポポエキスは酸化防止剤、利尿剤、鎮痛剤、抗凝固剤及び抗がん剤等に使用されてきた。非特許文献１には、タンポポの一種であるＴａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅの葉から得た粗エキス（ＤＬＥ）、花から得た粗エキス（ＤＦＥ）又は根から得た粗エキス（ＤＲＥ）が有する抗がん活性について報告されている。非特許文献１に記載のタンポポ粗エキスは、（１）乾燥させた植物の各部位７５ｇを室温で２４時間水に浸漬し、（２）得られた混合物をろ過して粒子状物質を除去し、（３）混合物を凍結乾燥して粉末化することで得られたものである。非特許文献１によれば、ＤＬＥにより乳がん細胞ＭＣＦ−７／ＡＺの成長が抑制されたが、前立腺がん細胞ＬＮＣａＰ Ｃ４−２Ｂの成長は抑制されず、また、ＤＦＥ及びＤＲＥはどちらもがん細胞の増殖に効果を示さなかった。

非特許文献２には、Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｊａｐｏｎｉｃｕｍから得られたタンポポ根エキスが記載されている。非特許文献２によれば、Ｔ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍの乾燥根（６００ｇ）をメタノール（３Ｌ）で５時間ずつ３回抽出した後、メタノール溶液を蒸発させることで、メタノール抽出物１０９ｇが得られる。また、非特許文献２によれば、Ｔ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍの根（６０ｇ）を水（０．３８Ｌ）で１時間抽出した後、得られた溶液を凍結乾燥することで、水抽出物が調製される。非特許文献２によれば、上記メタノール抽出物及び水抽出物を用いることで、２段階からなる化学発がんのイニシエーション及びプロモーションが抑制された。

非特許文献３によれば、乾燥根（６．７ｋｇ）をｎ−ヘキサン（４０Ｌ）で８時間ずつ３回抽出してエキス１２０．５ｇを調製することで、Ｔ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍのタンポポ根の別の製剤が得られる。

タンポポの各部位を使用して、カプセル剤及びチンキ剤等の各種剤形でエキスが製造されてきた。特にタンポポの根は、乾燥した植物の根の粉砕物を熱湯に浸漬して得られる「タンポポコーヒー」を製造するのに採取されてきた。通常、このような従来の剤形のタンポポエキスを用いた場合、がん又は腫瘍組織に導入しても、細胞死が１０％と低いなど、抗がん活性が低くなることが認められていた。

Ｓｉｇｓｔｅｄｔ，"Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ａｑｕｅｏｕｓ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｏｆ Ｔａｒａｘａｃｕｍ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ａｎｄ ｐｒｏｓｔａｔｅ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ"，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，３２（２００８），１０８５−１０９０ Ｔａｋａｓａｋｉ，"Ａｎｔｉ−ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｔａｒａｘａｃｕｍ Ｐｌａｎｔ．Ｉ"，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２２．６（１９９９），６０２−６０５ Ｔａｋａｓａｋｉ，"Ａｎｔｉ−ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｔａｒａｘａｃｕｍ Ｐｌａｎｔ．ＩＩ"，Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，２２．６（１９９９），６０６−６１０

本発明は、がんを治療、改善及び／又は予防するための薬剤又は医薬組成物であって、タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを、好ましくは医薬的に許容される基剤、希釈剤、結合剤、佐剤及び／又は他の抗がん剤と組み合わせて、含有する薬剤又は医薬組成物を提供することを目的とする。

本発明はまた、薬剤又はヒトの食用として使用するのに好適及び／又は有益なタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを提供することを目的とする。

本発明は更に、がんを治療、改善及び／又は予防するのに有用な化合物を１以上含有するタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを含有する薬剤又は医薬組成物を製造する方法を提供することを目的とする。

タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスは、がんを治療及び／又は予防するのに有用であり得ることが認められた。ここでいうがんは特に限定されず、例えば、膵がん、結腸がん、血液がん及び皮膚がん等が挙げられる。上記皮膚がんは黒色腫であってもよく、上記血液がんは、特に限定されないが、ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病及び慢性骨髄単球性白血病等の白血病であってもよい。

考えられる一方法によれば、がんを治療又は予防するための薬剤は以下の工程により製造できる：タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根を凍結して凍結根ストックを得る工程であって、１以上の根細胞が少なくとも部分的に破壊されるよう選択される工程；上記凍結根ストックを乾式粉砕して根粉末を得る工程であって、上記凍結根ストックが約４０℃未満の粉砕温度で保持される工程；溶媒に上記根粉末を浸漬して、流エキス部分と固体粒子部分を含む懸濁液を得る工程；及び、上記流エキス部分を上記固体粒子部分から分離して、上記薬剤で使用される流エキスを得る工程。

理論に束縛されるものではないが、タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根に含有される抗がん化合物は、高温乾燥環境に置かれると活性が低下する場合があるが、湿潤環境では該影響はそれほどはっきりとは示されないか又は見られないことが実験により示された。本出願人の認識では、エキス製造過程においてタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根を乾熱状態に置いたままにするのは好ましいことではなく、それにより抗がん活性が低下し、更には喪失する可能性もある。粉砕工程では、植物の根、根細胞及び細胞内容物が、粉砕機ブレード等の粉砕機の回転要素との接触時に熱せられるが、タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根及びその抗がん活性は、この粉砕工程中の乾熱状態による不活性化作用を最も受けやすい。多くの実験から、４０℃を超えると活性の喪失が起こり、７０℃を超える温度に置くと抗がん活性が完全に喪失することが分かった。

好ましい実施形態によれば、粉砕温度は、約０℃未満、より好ましくは約−２５℃未満、最も好ましくは約４０℃未満で保持される。

また、湿式粉砕よりもむしろ乾式粉砕で得られた植物の根の粉砕物を用いて、タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを含有する薬剤を製造した方が、その抗がん活性が向上し得ることが認められた。乾式粉砕によれば、根細胞の破壊を改善及び／又はより制御できるため、その後の抽出工程で利用できる抗がん物質又は化合物の細胞内量が増加すると考えられる。凍結根ストックは、平均粒径が約１００μｍ未満、より好ましくは約５０μｍ未満、最も好ましくは約１μｍ〜約３０μｍとなるまで乾式粉砕することが好ましい。

好ましい一態様によれば、春季の開花若しくは発芽の前、より好ましくはその前約９０日以内、最も好ましくは約３０日以内に、又は、冬季の休眠に入る前、芽の生長が休止する時に採取した休眠中のタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物から得たタンポポ根を用いて調製したタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）根エキスは、がんを治療、改善又は予防するための薬剤の含有物として特に有用である。

理論に束縛されるものではないが、タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根は、開花準備中又は休眠準備中に生理学的に変化すると考えられる。具体的には、３つの異なる時点（春季、夏季及び初秋）に得られたタンポポ根から調製したエキス（ＤＲＥ）を用いて実験した結果、早春及び初秋に採取した根から調製したエキスが、がん細胞の細胞死の誘導に最も効果的であることが分かった。詳細には、カナダのオンタリオ州で３月、９月及び１０月に採取したタンポポ根は、がん細胞のアポトーシスを誘導する効果が高いことが分かった。根エキス中の抗がん化合物は（寒い時期の）休眠に向けた準備中に合成され、冬季に向けて準備中の植物における細胞死の誘導と老齢細胞の排除に関与し得ると考えられる。

好ましい一実施形態によれば、凍結工程より前に、相対湿度が約５％〜１０％となるまでタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根を乾燥させる。上記植物の根をさいの目状に切って、根切片（平均サイズが約０．２ｃｍ〜１．０ｃｍであってもよい）とすることが好ましい。

タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根は、特に限定されないが、Ｔ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ、Ｔ．ｅｒｙｔｈｒｏｓｐｅｒｍｕｍ、Ｔ．ａｌｂｉｄｕｍ、Ｔ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｔ．ｌａｅｖｉｇａｔｕｍ、Ｔ．ｅｒｙｔｈｒｏｓｐｅｒｍｕｍ、及び、Ｔ．ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｍを含むタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）の種から得られることが好ましい。開かれた草地で採取したＴ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ又はＴ．ｌａｅｖｉｇａｔｕｍから上記植物の根を採取することが最も好ましい。

凍結工程においては、上記植物の根は、液体窒素に接触させる若しくは沈めるか、又は、０℃より低い凍結温度下、より好ましくは約−２１０℃〜約−３０℃の凍結温度下に約５分〜２４時間若しくは実質的に凍結するまで置くことが好ましい。

乾式粉砕工程は、根細胞が実質的に破壊されるように粉砕機を用いて実施できる。粉砕機としては特に限定されないが、乳鉢と乳棒、パルベライザ型粉砕機、衝突式粉砕機及び微粒粉砕機等が挙げられる。乾燥環境下で４０℃を超える高温に置かれる時間を短くするため、粉砕機は、液体窒素等で冷却して、凍結根ストック又は得られる根粉末との接触時の発熱を防止することが好ましい。粉砕機は約−２５℃未満、より好ましくは約−５０℃未満に冷却することが好ましい。

根細胞内の治療活性化合物をより効果的に放出させるため、上記粉砕工程は、細胞を破壊又は開裂してその内部含有物を放出させるよう実施することが最も好ましい。

粉砕された根粉末は、約５℃〜約１００℃、最も好ましくは約２５℃の浸漬温度で液体又は溶媒、好ましくは極性溶媒（水等）に浸漬する。他の好適な溶媒としては、ペンタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、１，４−ジオキサン、クロロホルム、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、プロピレンカーボネート、ギ酸、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、エタノール、メタノール及び酢酸等が挙げられるが、これらに限定されない。根粉末は、約５分〜約２４時間、より好ましくは約１０分〜約３０分間、攪拌下又は非攪拌下で液体に浸漬することが好ましい。水５０ｍＬにつき根粉末１０ｇの割合で根粉末を水に浸漬し、１０分〜３０分間煮沸することが最も好ましい。

懸濁液の流エキス部分は、固体粒子部分から、好ましくはろ過及び／又は遠心分離により分離できる。遠心分離を行う場合、５０００×ｇ〜８０００×ｇで実施して、あらゆる余分な繊維質を除去することが好ましい。ろ過は、ろ紙を用いて吸引ろ過することが好ましい。ろ紙の孔径は約０．４５μｍ以下が好ましく、約０．２２μｍ以下が最も好ましい。最も好ましい実施形態において、ろ過工程は、複数のろ紙を使用して孔径を小さなものとしていきながら段階的に実施する（例えば、０．４５μｍのろ紙に次いで０．２２μｍのろ紙を使用する）。ろ過工程で使用される１枚以上のフィルタ又はろ紙は、細菌を除去するよう構成されていてもよい。

懸濁液から分離した流エキスは、凍結乾燥してエキス粉末とすることが好ましい。凍結乾燥工程は、約−８０℃〜−４０℃の温度で実施することが好ましい。

上記エキス粉末は、医薬的に許容される基剤、希釈剤、結合剤、佐剤及び／又は追加の抗がん剤とともに薬剤に含有されていてもよい。上記抗がん剤としては、メトホルミン、ヒドロキシウレア、シクロホスファミド及び／又はエトポシドが挙げられる。

上記薬剤は、上記エキス粉末を約５ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約１０００ｍｇ／ｋｇ体重／日、好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約７０ｍｇ／ｋｇ体重／日含有する投与形態からなることが好ましい。あるいは、１日用量として０．２〜２００ｇ、好ましくは約０．５〜約７０ｇ、最も好ましくは約１〜４ｇのエキス粉末が薬剤中に含有されていることが好ましい。

本発明の他の態様によれば、がんを治療又は予防するためのタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを含有する薬剤を製造する方法であって、（１）タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根を凍結して凍結根ストックを得る工程であって、該凍結工程は１以上の根細胞が少なくとも部分的に破壊されるよう選択され、上記タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根は、植物の発芽若しくは開花より前、又は、芽の生長が休止した後に採取した休眠中のタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根からなる工程；（２）上記凍結根ストックを乾式粉砕して、平均粒径が約１００μｍ未満、好ましくは約５０μｍ未満の根粉末を得る工程であって、上記凍結根ストックが約４０℃未満の粉砕温度で保持される工程；（３）エタノール及び水の一方又は両方を含む溶媒に上記根粉末を浸漬して、溶液部分と固体部分を含む混合物を調製する工程；（４）上記溶液部分を上記固体部分から分離する工程；及び、（５）上記溶液部分を凍結乾燥して上記タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを乾燥エキス粉末として得、必要に応じて、その乾燥エキス部分と、医薬的に許容される基剤、希釈剤、結合剤、佐剤及び抗がん剤のうち１以上とを混合する工程を有する方法を提供する。

上記休眠中の植物の根は、最初の季節性の植物の開花又は発芽の前９０日以内、好ましくは約３０日以内に採取する。上記植物の根は、Ｔ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ、Ｔ．ｅｒｙｔｈｒｏｓｐｅｒｍｕｍ、Ｔ．ａｌｂｉｄｕｍ、Ｔ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｔ．ｌａｅｖｉｇａｔｕｍ、Ｔ．ｅｒｙｔｈｒｏｓｐｅｒｍｕｍ、及び、Ｔ．ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｍの種に属する植物から得られたものであってもよい。

上記植物の根は、相対湿度が約１０％未満となるまで乾燥させてから凍結することが好ましい。その後の凍結工程では、平均凍結温度が約−２１０℃〜約−３０℃となるまで植物の根を液体窒素に接触させる又は沈めることが好ましい。

乾式粉砕工程においては、凍結根ストックを平均粒径が好ましくは約５０μｍ未満、より好ましくは約１μｍ〜約３０μｍとなるまで粉砕する。乾式粉砕工程は、１以上の根細胞が実質的に破壊されるように粉砕機を用いて実施できる。該粉砕機としては特に限定されないが、乳鉢と乳棒、パルベライザ型粉砕機、衝突式粉砕機及び微粒粉砕機等が挙げられる。乾燥環境下で高温に置かれる時間を短くするため、上記粉砕機は、液体窒素等で約−２５℃未満、好ましくは約−５０℃未満の温度まで冷却することが好ましい。

浸漬工程で使用される溶媒は、ペンタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、１，４−ジオキサン、クロロホルム、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、プロピレンカーボネート、ギ酸、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、メタノール及び酢酸のうち１以上を更に含んでもよい。浸漬工程は、約５℃〜約１００℃の浸漬温度で、好ましくは約５分〜約２４時間、攪拌下又は非攪拌下で実施することが最も好ましい。

上記混合物中の溶液部分を固体部分から分離するために様々な方法を使用できる。このような方法としては遠心分離及びろ過が挙げられるが、これらに限定されない。遠心分離を行う場合、５０００×ｇ〜８０００×ｇで実施することが好ましい。ろ過を用いる場合、孔径が異なる少なくとも２枚のフィルタ（例えば約０．４５μｍと約０．２２μｍ）を用いて少なくとも２回実施することが最も好ましい。ヒトの食用としての安全性を向上させるため、ろ過工程で使用する１枚以上のフィルタ又はろ紙は、細菌を除去するよう構成されていてもよい。

好ましい実施形態によれば、粉砕温度は約０℃未満、より好ましくは約−２５℃未満、最も好ましくは約−４０℃未満である。

上記薬剤は、タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを約５ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約１０００ｍｇ／ｋｇ体重／日、好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約７０ｍｇ／ｋｇ体重／日含有する投与形態からなることが好ましい。あるいは、１日投与形態として薬剤中に約０．５ｇ〜約７０ｇ、好ましくは約１〜４ｇのタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスが含有されていることが好ましい。

態様（１）によれば、本発明は、がんを治療又は予防するための薬剤を製造する方法であって、タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根を凍結して凍結根ストックを得る工程であって、１以上の根細胞が少なくとも部分的に破壊されるよう選択される工程；上記凍結根ストックを乾式粉砕して根粉末を得る工程であって、上記凍結根ストックが約４０℃未満の粉砕温度で保持される工程；溶媒に上記根粉末を浸漬して、流エキス部分と固体粒子部分を含む懸濁液を得る工程；及び、上記流エキス部分を上記固体粒子部分から分離して、上記薬剤で使用される流エキスを得る工程を有する方法を提供する。

態様（２）によれば、本発明は、上記がんが、結腸がん、膵がん、血液がん又は皮膚がんである、態様（１）に記載の方法を提供する。

態様（３）によれば、本発明は、上記がんが、上記血液がん又は上記皮膚がんからなるものであって、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、ホジキンリンパ腫及び黒色腫からなる群より選択される、態様（１）及び／又は（２）に記載の方法を提供する。

態様（４）によれば、本発明は、上記凍結工程より前に、相対湿度が約５％〜約１０％となるまで上記植物の根を乾燥させる工程を更に有する、あらゆる組合せの態様（１）〜（３）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（５）によれば、本発明は、上記タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根が、植物の開花若しくは発芽より前、又は、芽の生長が休止した後に採取した休眠中のタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根からなる、あらゆる組合せの態様（１）〜（４）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（６）によれば、本発明は、上記休眠中のタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根が、上記植物の開花又は発芽の前約９０日以内、好ましくは約３０日以内に採取される、あらゆる組合せの態様（１）〜（５）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（７）によれば、本発明は、上記タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根が、Ｔ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ、Ｔ．ｅｒｙｔｈｒｏｓｐｅｒｍｕｍ、Ｔ．ａｌｂｉｄｕｍ、Ｔ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｔ．ｌａｅｖｉｇａｔｕｍ、Ｔ．ｅｒｙｔｈｒｏｓｐｅｒｍｕｍ、及び、Ｔ．ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｍからなる群より選択される種に属する植物から得られる、あらゆる組合せの態様（１）〜（６）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（８）によれば、本発明は、上記凍結工程が、平均凍結温度が約−２１０℃〜約−３０℃となるまで、上記植物の根を液体窒素に接触させる若しくは沈める、又は、上記植物の根を凍結させることを含む、あらゆる組合せの態様（１）〜（７）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（９）によれば、本発明は、上記乾式粉砕工程が、上記凍結根ストックを平均粒径が約１００μｍ未満、好ましくは約５０μｍ未満となるまで乾式粉砕することを含む、あらゆる組合せの態様（１）〜（８）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（１０）によれば、本発明は、上記乾式粉砕工程が、パルベライザ型粉砕機、衝突式粉砕機及び微粒粉砕機からなる群より選択される粉砕機を用いて上記凍結根ストックを乾式粉砕することを含み、上記粉砕機又はその構成要素が約−２５℃未満、好ましくは約−５０℃未満に冷却されることで、上記凍結根ストック又は根粉末との接触時の発熱が防止される、あらゆる組合せの態様（１）〜（９）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（１１）によれば、本発明は、上記溶媒が、水、ペンタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、１，４−ジオキサン、クロロホルム、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、プロピレンカーボネート、ギ酸、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、エタノール、メタノール及び酢酸のうち１以上を含む、あらゆる組合せの態様（１）〜（１０）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（１２）によれば、本発明は、上記浸漬工程が、約２℃〜約１５０℃、好ましくは約５℃〜約１００℃の浸漬温度で、好ましくは約５分〜約２４時間、攪拌下又は非攪拌下で上記根粉末を水に浸漬することを含む、あらゆる組合せの態様（１）〜（１１）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（１３）によれば、本発明は、上記分離工程が、ろ過及び遠心分離の少なくとも一方を含み、上記ろ過は、１回、又は、孔径が同じ若しくは異なる複数のフィルタを用いて２回以上実施し、上記遠心分離は５０００×ｇ〜８０００×ｇで実施する、あらゆる組合せの態様（１）〜（１２）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（１４）によれば、本発明は、上記分離工程が、約０．４５μｍの第１の孔径を有する第１のフィルタと、約０．２２μｍの第２の孔径を有する第２のフィルタを用いて、上記懸濁液を少なくとも２回ろ過することを含み、上記第２のフィルタは細菌を除去するものが選択される、あらゆる組合せの態様（１）〜（１３）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（１５）によれば、本発明は、上記乾式粉砕工程より前に、上記植物の根をさいの目状に切って複数の根切片を得る工程を更に有する、あらゆる組合せの態様（１）〜（１４）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（１６）によれば、本発明は、上記粉砕温度が約０℃未満である、あらゆる組合せの態様（１）〜（１５）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（１７）によれば、本発明は、上記粉砕温度が約−２５℃未満、好ましくは約−４０℃未満である、あらゆる組合せの態様（１）〜（１６）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（１８）によれば、本発明は、分離した上記流エキスを凍結乾燥してエキス粉末を得、必要に応じて、医薬的に許容される基剤、希釈剤、結合剤、佐剤及び抗がん剤のうち１以上を上記エキス粉末と混合する工程を更に有する、あらゆる組合せの態様（１）〜（１７）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（１９）によれば、本発明は、上記抗がん剤が、メトホルミン、ヒドロキシウレア、シクロホスファミド及びエトポシドのうち１以上である、あらゆる組合せの態様（１）〜（１８）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（２０）によれば、本発明は、上記薬剤が、上記エキス粉末を約５ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約１０００ｍｇ／ｋｇ体重／日、好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約７０ｍｇ／ｋｇ体重／日含有する投与形態からなる、あらゆる組合せの態様（１）〜（１９）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（２１）によれば、本発明は、上記薬剤が、上記エキス粉末を約０．５ｇ〜約７０ｇ、好ましくは約１〜４ｇ含有する１日投与形態からなる、あらゆる組合せの態様（１）〜（２０）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（２２）によれば、本発明は、がんを治療又は予防するためのタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを含有する薬剤を製造する方法であって、（１）タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根を凍結して凍結根ストックを得る工程であって、該凍結工程は１以上の根細胞が少なくとも部分的に破壊されるよう選択され、上記タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根は、植物の発芽若しくは開花より前、又は、芽の生長が休止した後に採取した休眠中のタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根からなる工程；（２）上記凍結根ストックを乾式粉砕して、平均粒径が約１００μｍ未満、好ましくは約５０μｍ未満の根粉末を得る工程であって、上記凍結根ストックが約４０℃未満の粉砕温度で保持される工程；（３）エタノール及び水の一方又は両方を含む溶媒に上記根粉末を浸漬して、溶液部分と固体部分を含む混合物を調製する工程；（４）上記溶液部分を上記固体部分から分離する工程；及び、（５）上記溶液部分を凍結乾燥して上記タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを乾燥エキス粉末として得、必要に応じて、その乾燥エキス部分と、医薬的に許容される基剤、希釈剤、結合剤、佐剤及び抗がん剤のうち１以上とを混合する工程を有する方法を提供する。

態様（２３）によれば、本発明は、上記がんが、結腸がん、膵がん、血液がん又は皮膚がんである、態様（２２）に記載の方法を提供する。

態様（２４）によれば、本発明は、上記がんが、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、ホジキンリンパ腫又は黒色腫である、態様（２２）及び／又は（２３）に記載の方法を提供する。

態様（２５）によれば、本発明は、上記休眠中のタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根が、最初の季節性の植物の開花又は発芽の前約９０日以内、好ましくは約３０日以内に採取される、あらゆる組合せの態様（２２）〜（２４）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（２６）によれば、本発明は、上記タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根が、Ｔ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ、Ｔ．ｅｒｙｔｈｒｏｓｐｅｒｍｕｍ、Ｔ．ａｌｂｉｄｕｍ、Ｔ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｔ．ｌａｅｖｉｇａｔｕｍ、Ｔ．ｅｒｙｔｈｒｏｓｐｅｒｍｕｍ、及び、Ｔ．ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｍからなる群より選択される種に属する植物から得られる、あらゆる組合せの態様（２２）〜（２５）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（２７）によれば、本発明は、上記凍結工程より前に、相対湿度が約１０％未満となるまで上記植物の根を乾燥させる工程を更に有する、あらゆる組合せの態様（２２）〜（２６）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（２８）によれば、本発明は、上記凍結工程が、平均凍結温度が約−２１０℃〜約−３０℃となるまで上記植物の根を液体窒素に接触させる又は沈めることを含む、あらゆる組合せの態様（２２）〜（２７）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（２９）によれば、本発明は、上記乾式粉砕工程が、粉砕機を用いて上記凍結根ストックを平均粒径が約５０μｍ未満となるまで乾式粉砕して、上記１以上の根細胞を実質的に破壊することを含み、上記粉砕機は、パルベライザ型粉砕機、衝突式粉砕機及び微粒粉砕機からなる群より選択され、上記乾式粉砕工程は、上記粉砕機を約−２５℃未満の温度まで冷却することを更に含む、あらゆる組合せの態様（２２）〜（２８）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（３０）によれば、本発明は、上記溶媒が、ペンタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、１，４−ジオキサン、クロロホルム、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、プロピレンカーボネート、ギ酸、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、メタノール又は酢酸を更に含む、あらゆる組合せの態様（２２）〜（２９）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（３１）によれば、本発明は、上記浸漬工程が、約５℃〜約１００℃の浸漬温度で、好ましくは約５分〜約２４時間、攪拌下又は非攪拌下で上記根粉末を上記溶媒に浸漬することを含む、あらゆる組合せの態様（２２）〜（３０）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（３２）によれば、本発明は、上記分離工程が、ろ過及び遠心分離の少なくとも一方を含み、上記ろ過は、１回、又は、孔径が同じ若しくは異なる複数のフィルタを用いて２回以上実施し、上記遠心分離は５０００×ｇ〜８０００×ｇで実施する、あらゆる組合せの態様（２２）〜（３１）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（３３）によれば、本発明は、上記分離工程が、約０．４５μｍの第１の孔径を有する第１のフィルタと、約０．２２μｍの第２の孔径を有する第２のフィルタを用いて、上記混合物を少なくとも２回ろ過することを含み、上記フィルタの一方又は両方は細菌を除去するものが選択される、あらゆる組合せの態様（２２）〜（３２）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（３４）によれば、本発明は、上記抗がん剤が、メトホルミン、ヒドロキシウレア、シクロホスファミド及びエトポシドのうち１以上からなる、あらゆる組合せの態様（２２）〜（３３）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（３５）によれば、本発明は、上記乾式粉砕工程より前に、上記タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根をさいの目状に切って、平均サイズが約０．２ｃｍ〜１．５ｃｍの複数の根切片を得る工程を更に有する、あらゆる組合せの態様（２２）〜（３４）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（３６）によれば、本発明は、上記粉砕温度が約０℃未満である、あらゆる組合せの態様（２２）〜（３５）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（３７）によれば、本発明は、上記粉砕温度が約−２５℃未満、好ましくは約−４０℃未満である、あらゆる組合せの態様（２２）〜（３６）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（３８）によれば、本発明は、上記薬剤が、上記タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを約５ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約１０００ｍｇ／ｋｇ体重／日、好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約７０ｍｇ／ｋｇ体重／日含有する投与形態からなる、あらゆる組合せの態様（２２）〜（３７）の１つ以上に記載の方法を提供する。

態様（３９）によれば、本発明は、上記薬剤が、上記タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを約０．５ｇ〜約７０ｇ、好ましくは約１〜４ｇ含有する１日投与形態からなる、あらゆる組合せの態様（２２）〜（３８）の１つ以上に記載の方法を提供する。

各ＤＲＥ量（Ｘ軸）で処理したヒト急性Ｔ細胞白血病（Ｊｕｒｋａｔ）細胞のアポトーシス誘導率（Ｙ軸）を示す棒グラフである。 各ＤＲＥ濃度（Ｘ軸）でのＪｕｒｋａｔ細胞の生存率（Ｙ軸）を示す棒グラフである。 各ＤＲＥ濃度（Ｘ軸）で２４、４８又は７２時間処理したＡ３７５ヒト黒色腫細胞の生存率（Ｙ軸）を示す線グラフである。 濃度１ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ及び１０ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで４８時間処理した後にＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２色素で染色したＡ３７５ヒト黒色腫細胞及びコントロールの蛍光顕微鏡画像である。 濃度０．６ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ及び５．０ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで４８時間処理した後にＨｏｅｃｈｓｔ（上段）又はＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖ染色試薬（下段）で染色したＭＶ−４−１１細胞及びコントロールの４００倍拡大画像である。 濃度０．６ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ及び５．０ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで４８時間処理した後にＨｏｅｃｈｓｔ（上段）又はＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖ染色試薬（下段）で染色したＵ−９３７細胞及びコントロールの４００倍拡大画像である。 濃度０．６ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ及び５．０ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで４８時間処理した後にＨｏｅｃｈｓｔ（上段）又はＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖ染色試薬（下段）で染色したＨＬ−６０細胞及びコントロールの４００倍拡大画像である。 濃度０．６ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ及び５．０ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで４８時間処理したＭＶ−４−１１細胞及びコントロールのアポトーシス誘導率（Ｙ軸）を示す棒グラフである。 濃度０．６ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ及び５．０ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで４８時間処理したＨＬ−６０細胞及びコントロールのアポトーシス誘導率（Ｙ軸）を示す棒グラフである。 濃度０．６ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ及び５．０ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで４８時間処理したＵ−９３７細胞及びコントロールのアポトーシス誘導率（Ｙ軸）を示す棒グラフである。 ０．６ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで処理してから５分後、１５分後、３０分後及び６０分後のＭＶ−４−１１細胞及びコントロールのカスパーゼ−８活性化率又は活性（Ｙ軸）を示す棒グラフである。 ０．６ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで処理してから５分後、１５分後、３０分後及び６０分後のＭＶ−４−１１細胞及びコントロールのカスパーゼ−３活性化率又は活性（Ｙ軸）を示す棒グラフである。 ＤＲＥ濃度２．５ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ及び７．５ｍｇ／ｍＬ（行）で２４時間、４８時間、７２時間及び９６時間（列）処理し、Ｈｏｅｃｈｓｔ色素で染色したＰＡＮＣ−１細胞及びコントロールの画像である。 濃度０．５ｍｇ／ｍＬ、１ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、５ｍｇ／ｍＬ及び７．５ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで２４時間、４８時間、７２時間及び９６時間（Ｘ軸）処理したＰＡＮＣ−１細胞及びコントロールの平均アポトーシス率（Ｙ軸）を示す棒グラフである。 ろ過した淡水（左列）、又は、ＤＲＥを５．０ｍｇ／ｍＬ含有する水（右列）で１ヶ月処理した後にヘマトキシリン・エオシン染色したｂａｌｂ／ｃマウスの肝臓組織の４０倍（上段）又は６３倍（下段）拡大画像である。 濃度２．５ｍｇ／ｍＬ又は５．０ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで処理したｂａｌｂ／ｃマウス及びコントロールの体重（Ｙ軸）を日数（Ｘ軸）ごとに示す線グラフである。 濃度０．４ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ及び２．５ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで９６時間処理した後に、Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２色素で染色した場合（上段）、又は、位相差照明下で観察した場合（下段）のＤｎＦＡＤＤ細胞及びコントロールの４００倍顕微鏡画像である。 濃度０．４ｍｇ／ｍＬ、０．６ｍｇ／ｍＬ及び２．５ｍｇ／ｍＬのＤＲＥ（Ｘ軸）で処理した末梢血単核細胞及びコントロールの平均アポトーシス率（Ｙ軸）を示す棒グラフである。 濃度０．４ｍｇ／ｍＬ及び０．６ｍｇ／ｍＬのＤＲＥ（Ｘ軸）で処理した末梢血単核細胞及びコントロールの濃度（Ｙ軸）を示すグラフである。 濃度０．６ｍｇ／ｍＬ及び２．５ｍｇ／ｍＬのＤＲＥ（Ｘ軸）で処理したＤｎＦＡＤＤ細胞及びコントロールの、トリパンブルー色素排除試験により求めた濃度（Ｙ軸）を示すグラフである。 ＤＲＥで１５分間、３０分間、６０分間、１８０分間及び１４４０分間処理したＤｎＦＡＤＤ細胞及びコントロールのカスパーゼ−８平均活性化率又は活性（Ｙ軸）を示す棒グラフである。 新たに白血病と診断された患者から単離し、濃度１．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ及び５．０ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで処理した後にＨｏｅｓｃｈｔ（上段）又はＡｎｎｅｘｉｎ−Ｖ染色試薬（下段）で染色した末梢血単核細胞及びコントロールの画像である。 新たに白血病と診断された患者から単離し、濃度１．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ及び５．０ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで２４時間又は４８時間処理した末梢血単核細胞のアポトーシス誘導率（Ｙ軸）を示す棒グラフである。 濃度０．５ｍｇ／ｍＬ、１．０ｍｇ／ｍＬ、１．５ｍｇ／ｍＬ、２．０ｍｇ／ｍＬ、２．５ｍｇ／ｍＬ、３．０ｍｇ／ｍＬ、３．５ｍｇ／ｍＬ、４．０ｍｇ／ｍＬ、４．５ｍｇ／ｍＬ、５．０ｍｇ／ｍＬ、５．５ｍｇ／ｍＬ及び６．０ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで２４、４８、７２及び９６時間処理したＨＴ−２９ヒト結腸がん細胞及びコントロールの生存率（Ｙ軸）を示す棒グラフである。 ろ過した淡水（上段）又はＤＲＥ（下段）で１ヶ月処理した後にヘマトキシリン・エオシン染色したｂａｌｂ／ｃマウスの心臓、腎臓及び肝臓組織の画像である。 ＤＲＥで処理したｂａｌｂ／ｃマウス及びコントロールの体重（Ｙ軸）を日数（Ｘ軸）ごとに示す線グラフである。 ＤＲＥで処理したｂａｌｂ／ｃマウス及びコントロールから採取した尿サンプルで検出されたタンパク量（Ｙ軸）を示す棒グラフである。 ＣＤ−１ｎｕ／ｎｕマウスのコントロール群の体重（Ｙ軸）を日数（Ｘ軸）ごとに示す線グラフである。 濃度２．５ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで処理したＣＤ−１ｎｕ／ｎｕマウスの体重（Ｙ軸）を日数（Ｘ軸）ごとに示す線グラフである。 ＨＴ−２９細胞を移植後、ろ過した淡水で３週間処理したＣＤ−１ｎｕ／ｎｕマウスの写真である。 ＨＴ−２９細胞を移植後、濃度２．５ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで３週間処理したＣＤ−１ｎｕ／ｎｕマウスの写真である。 濃度２．５ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで処理したＣＤ−１ｎｕ／ｎｕマウス及びコントロールの腫瘍体積（Ｙ軸）を日数（Ｘ軸）ごとに示す棒グラフである。 ろ過した淡水で１ヶ月処理した後にヘマトキシリン・エオシン染色したＣＤ−１ｎｕ／ｎｕマウスの心臓、腎臓、肝臓及び異種移植腫瘍組織の１０倍（上段）又は６３倍（下２段）拡大画像である。 濃度２．５ｍｇ／ｍＬのＤＲＥで１ヶ月処理した後にヘマトキシリン・エオシン染色したＣＤ−１ｎｕ／ｎｕマウスの心臓、腎臓、肝臓及び異種移植腫瘍組織の１０倍（上段）又は６３倍（下２段）拡大画像である。

本発明の好ましい実施形態に係る、がんの治療及び／又は予防に使用されるタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを製造した。好ましいタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを製造するため、春季開花の約３０日前及びちょうど秋季の初めに、カナダ、オンタリオ州でＴ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ種のタンポポを採取した。採取した植物を水で洗浄し、茎の根元で切断して根を採取した。採取した根を長さ方向に沿ってスライスし、長さが約１／４インチの切片を得た。

根切片を液体窒素に約５〜１０分浸漬して完全に凍結させた。凍結片は、平均粒径が約４５μｍ以下となるまで衝突式粉砕機で粉砕した。粉砕した根を沸騰した蒸留水に１時間浸漬し、活性化合物を抽出、可溶化した。

抽出／可溶化工程に続き、孔径が約０．４５μｍのろ紙を用いて、活性化合物を含有する蒸留水を真空ろ過して、他の植物成分及び余分な繊維質を除去した。その後、得られたろ液を−８０℃で凍結乾燥して根エキス粉末を得た。乾燥エキスを水にもどして、最終濃度が１００ｍｇ／ｍＬのストックサンプルを得た。孔径が約０．２２μｍの細菌用ろ紙を用いて、根エキスのストックサンプルを更に真空ろ過して殺菌し、使用するエキスを製造した。投与する際は、約１ｇの根エキス粉末を約１０ｍＬの熱湯に再可溶化した後、ろ過した。そして、がんと診断された患者にろ液を経口投与した。経口投与の場合、水に対する根エキス粉末の割合が１００ｍＬあたり約０．１ｇ〜５０ｇくらいであることが好ましい。

本発明の根エキスから複数の画分を単離し、生物活性試験に供した。ＤＲＥにより誘導されるアポトーシスのメカニズムによれば、複数の化合物がそれぞれ単独で又は一緒に組み合わされて、１以上の標的に対する活性に関与し得る。また、白血病、結腸がん、膵がん及び黒色腫等を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ試験において、本発明のＤＲＥは、ヒトがん細胞株においてはタイプＩ及びタイプＩＩのプログラム細胞死を選択的に誘導するが、非がん細胞についてはアポトーシス及び自食が誘導されにくい状態のまま保持することが示された。特に、本発明者らは、処理後のカスパーゼ−８の急速な活性化及びそれに続くカスパーゼ−３の活性化から明らかな通り、ＤＲＥが、おそらく、がん細胞上の細胞死受容体（例えば、Ｆａｓ又はＴＮＦファミリー細胞死受容体）を標的としたり、Ｄｅａｔｈ Ｉｎｄｕｃｉｎｇ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｃｏｍｐｌｅｘを活性化したりして、外因性の細胞死経路を急速に活性化させることにより、細胞死を誘導し得ることを認めた。

また、ＤＲＥ中の化合物はがん細胞のミトコンドリアを直接標的とすることが示された。このことから、ミトコンドリアと直接相互作用し、ミトコンドリアを不安定化させることにより、アポトーシス促進因子を放出させ、活性酸素種を生成させるＤＲＥ成分が存在することが示唆される。ＤＲＥは、複数の標的を標的とし得る複数の化合物を含有すると考えられるが、これらの化合物は、水溶性塩、リガンド類似体又は他の相互作用／結合タンパク質として存在し得る。

多くの細胞株を用いて、本発明の薬剤の活性及び／又は安全性を試験した。さらに、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病又は慢性骨髄単球性白血病を罹患している１０人のがん患者から単離した細胞株を用いて、ｅｘ ｖｉｖｏ試験を実施した。患者から採取した血液サンプルを、異なる用量のタンポポ根エキスで４８時間処理した。健康な献血者から単離した血液細胞株と比較することで、タンポポ根エキスは慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病及び慢性骨髄単球性白血病の細胞株においてアポトーシスを誘導することが分かった。

他の細胞株に対して実施した多くの追加試験の概要及び各試験細胞株で得られた結果を以下の表に更に示す。

本発明の薬剤の有効性をよりはっきりと示すため、実験例の詳細な記載を以下に示す。

（ｉ）ヒトＴ細胞性白血病細胞に対するタンポポ根エキスの抗がん活性
ＤＲＥのヒト急性Ｔ細胞性白血病細胞株（Ｊｕｒｋａｔ）に対する活性を、非がん性末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）に対する作用とともに評価した。図１に示す通り、Ｈｏｅｓｃｈｔ画像を手集計して求めたところ、タンポポ粗エキス（１００μＬ）は約５０％の細胞でアポトーシスを誘導した。また、図２は、ＷＳＴ−１細胞増殖アッセイで測定したＪｕｒｋａｔ細胞の生存率に対する、０．４ｍｇ／ｍＬ及び０．６ｍｇ／ｍＬでのＤＲＥの効果を表す図であるが、この図に示す通り、ＤＲＥ濃度が上昇すると細胞生存率が低下した。本発明者らは、ＤＲＥが低濃度において、ＰＢＭＣに毒性を示すことなく、がん細胞に対して特異的且つ選択的にアポトーシスを誘導できることを見出した。さらに、ＤＲＥで処理することで、カスパーゼ−８が極めて早期に活性化され、次いでカスパーゼ−３が活性化されることが分かった。

（ｉｉ）中悪性度のヒト黒色腫細胞に対するタンポポ根エキスの抗がん活性
ｉｎ ｖｉｔｒｏでのヒト黒色腫細胞株に対するＤＲＥの効果を試験した。図３及び４に示す通り、高悪性度且つ耐化学療法性の皮膚がんである黒色腫に対して、ＤＲＥはアポトーシスの誘導に非常に効果的であった。図３を得るため、Ａ３７５ヒト黒色腫細胞を９６ウェルプレートに播種し（約１０００細胞／ウェル）、異なるＤＲＥ濃度で２４、４８及び７２時間処理した。図４に示す通り、最大１０ｍｇ／ｍＬまでの各種ＤＲＥ濃度で４８時間処理したＡ３７５細胞では、典型的なアポトーシス形態が観察された。図４の画像を得るため、細胞をＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２色素で染色し、蛍光顕微鏡で画像を撮影した。明るく染色された凝縮塊はアポトーシス核を表す。

また、ＤＲＥはミトコンドリアを標的とし、活性酸素種を生成させることが分かった。さらに、代謝阻害薬であるメトホルミンによって、薬剤耐性黒色腫細胞のＤＲＥ処理に対する感度がより高くなった。

（ｉｉｉ）中悪性度のヒト慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）細胞に対するタンポポ根エキスの抗がん活性
より悪性度の高い白血病細胞株に対するＤＲＥの効力を評価して、ＣＭＭＬ細胞のアポトーシス／自食を誘導する際の選択性及び効力を測定した。図５〜１０に示す通り、ＤＲＥは、用量及び時間依存的にアポトーシス及び自食を効果的に誘導することが分かった。

図１１及び１２に示す通り、ＣＭＭＬ細胞では、アポトーシスの外因性経路が活性化することでカスパーゼ−８及びカスパーゼ−３の急速な活性化が見られ、この活性化の程度はＪｕｒｋａｔ細胞で見られたものと同等であった。図１１及び１２の棒グラフを得るため、示した時点及びＤＲＥ濃度で処理したＭＶ−４−１１細胞を採取し、洗浄し、溶解バッファとともに培養して細胞溶解物を得た。各カスパーゼに特異的なカスパーゼ基質とともに細胞溶解物を１時間培養した。蛍光分光計を用いて蛍光読み取り値を得た。

図１７及び２０に示す通り、Ｄｅａｔｈ−Ｉｎｄｕｃｉｎｇ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｃｏｍｐｌｅｘ（ＤＩＳＣ）の主要成分であるドミナントネガティブＦＡＤＤ（ＤｎＦＡＤＤ）タンパク質を発現するＪｕｒｋａｔ細胞は、ＤＲＥにより誘導されるアポトーシスに対して非感受性であった。これにより、細胞死の外因性経路の関与が更に示された。作成した図２１は、ＤＲＥ処理後の各時点のＤｎＦＡＤＤ細胞における、カスパーゼ−８の活性化率を示し、カスパーゼ−８に特異的な基質及び蛍光読み取り値を用いて得たものである。

また、全カスパーゼ阻害剤ｚ−ＶＡＤ−ｆｍｋを用いて事前処理すると、慢性骨髄単球性白血病細胞におけるアポトーシスの誘導が阻害されることが分かった。

並行して行った、非がん性末梢血単核細胞（ｎｃＰＢＭＣ）に対するタンポポ根エキスによる処理の結果、該細胞はアポトーシスを受けにくく、これにより、細胞培養においてタンポポ根エキスが選択性を有することが示された。

これらの研究結果から、本発明のタンポポ根エキスは、今日利用できる従来のがん治療に対する新規な非毒性代替薬剤として有用であることが分かる。さらに、（低濃度の毒性化合物を用いた）従来の治療と併用してがん治療の効果を向上させる上でも有用である。

（ｉｖ）中悪性度のヒト膵がん細胞に対するタンポポ根エキスの抗がん活性
本発明のタンポポ根エキスを用いて、中悪性度のヒト膵臓細胞株（ＢｘＰＣ−３及びＰＡＮＣ−１）において用量及び時間依存的にアポトーシスを誘導することもできる。図１３及び１４に示す通り、ＤＲＥ処理における用量及び処理後経過時間が増加するとともに、アポトーシスを表す明るく染色された凝縮核が観察された。ＰＡＮＣ−１細胞のＨｏｅｃｈｓｔ画像を手集計で定量化したところ、平均アポトーシス率が用量及び時間依存的に増加していた。

並行して行った、非がん性正常ヒト胎児繊維芽細胞に対する同様の実験から、ＤＲＥはヒト膵がん細胞を選択的に標的とすることが分かった。これにより、先に得た研究結果を確認できた。カスパーゼ−８の早期活性化及びそれに続くカスパーゼ−３の活性化により、ＤＲＥによるアポトーシス誘導は、アポトーシスの外因性経路の活性化に起因することが分かった。

ＤＲＥによって、ヒト膵がん細胞において細胞死促進性の自食が誘導された。このような自食の誘導は、ＤＲＥ処理後に観察されるミトコンドリア膜電位の不安定化に相当する。再生試験により、細胞がＤＲＥに曝されてしまえば、自殺をもたらす信号は維持され続けることが分かった。

（ｖ）他の中悪性度のヒトがん細胞に対するタンポポ根エキス（ＤＲＥ）の抗がん活性
本発明のＤＲＥは、中悪性度のヒト結腸がん及び神経芽腫細胞に有効なことが分かった。図２４に示す通り、ＨＴ−２９ヒト結腸細胞の生存率は、時間及び用量依存的にＤＲＥ処理の影響を受けた。ＥＣ_５０を測定したところ、９６時間で３．０ｍｇ／ｍＬであった。図２４は、ＷＳＴ−１細胞増殖アッセイを用いて収集したデータに基づいて作成した。詳細には、ＨＴ−２９ヒト結腸がん細胞を９６ウェルプレートに播種し（約５０００細胞／ウェル）、その後、異なるＤＲＥ濃度で２４、４８、７２及び９６時間処理した。

（ｖｉ）マウスモデルにおけるタンポポ根エキスの毒性評価
本発明のエキスの毒性について、雄性ｂａｌｂ／ｃマウスを使用し、がんの非存在下、ｉｎ ｖｉｖｏマウスモデルにおいて調べた。ろ過した淡水を処方するコントロール群と、２つのＤＲＥ群を用意した。該２つのＤＲＥ群は、飲料水に２．５ｍｇ／ｍｌのＤＲＥ（７０ｋｇのヒト患者に対する用量に換算すると１０５ｇ／日）を添加して与える低用量群と、飲料水に５．０ｍｇ／ｍｌのＤＲＥを添加して与える高用量群からなる。平均すると、各マウスは１日あたり約５ｍＬの飲料液を消費したが、これは、５００ｍｇ／ｋｇ／日（低用量群、乾燥根５ｇから抽出比１：１０で抽出したもの）及び１，０００ｍｇ／ｋｇ／日（高用量群、乾燥根１０ｇから同抽出比１：１０で抽出したもの）に相当する。これらの用量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験でアポトーシスを誘導するのに必要であった用量よりも多い。上記マウスに与える水に毎日ＤＲＥを添加し、１ヶ月間モニタリングし、その間、図１６及び２６に示す通り、２つの独立した試験について体重を１日おきに測定した。３４日後、Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｎｄｓｏｒに従ってマウスを屠殺し、各臓器（肝臓、腎臓及び心臓）を摘出して病理解析した。図１５及び２５に更に示す通り、測定した体重及び病理解析において上記マウスに対する毒性は見られなかった。未処理のコントロールマウス群とＤＲＥ摂取マウス群に、体重変化及び得られた臓器の病変に関して違いは見られなかった。

ＤＲＥを５００ｍｇ／ｋｇ／日で合計３５日間与えたＤＲＥ処理群のマウス４匹に対して、更なる効力試験を実施した。それらの肝臓、腎臓及び心臓から得た組織について、毒性の徴候を分析した。水摂取コントロールマウスと比較しても、上記組織には何ら変化が見られなかった。毒性の徴候を更に調べるため、各群のマウスから尿も採取し、ブラッドフォード法によるタンパク質定量アッセイを用いてタンパク含量を分析した。図２７に示す通り、コントロールマウスと比較して、ＤＲＥ摂取マウスではタンパク量が少なかった。これらの結果から、飲料水への添加物として、本発明のＤＲＥは、マウスにおいて長期にわたって毒性を示さず、忍容性が良好であることが分かる。

マウスモデルに対してｉｎ ｖｉｖｏで更に毒性試験を実施したところ、本発明のエキスは、体重の３％に当たる高い１日用量、すなわち１．０ｇ／ｋｇ／日又は１００ｇ／日でも有意な毒性が見られないことが確認された。

毒性試験によれば、ヒト患者に対する有効用量は、約０．５〜４．０ｇ／日／人（体重７０ｋｇの場合）が好ましく、２．０ｇ／日／人（マウスにおいて忍容性が良好であった用量の２％未満）がより好ましい。本発明のＤＲＥで処理したヒト患者の一人は、２３ｍｇ／ｋｇ／日に対して忍容性及び応答を示した。

（ｖｉｉ）患者由来ｅｘ−ｖｉｖｏ白血病サンプルにおけるタンポポ根エキスの抗がん活性
新たに診断された患者から採取した患者由来白血病サンプルにおけるＤＲＥの効果を調べた。９人の患者からサンプルを採取して実験した。新たに診断された患者から血液サンプルを採取し、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離し、本発明のＤＲＥで処理した。図２２及び２３に示す通り、本発明のＤＲＥは、白血病患者から得たＰＢＭＣにおいて用量及び時間依存的にアポトーシスを効果的に誘導した。図２３は、６人の異なる患者から得たＨｏｅｃｈｓｔ画像を手集計で定量化して得られた。

（ｖｉｉｉ）免疫不全マウスに異種移植したヒト結腸がんに対するタンポポ根エキスの効力
様々ながんのｉｎ ｖｉｖｏモデルにおいて本発明のＤＲＥの効力を評価するため、免疫不全ＣＤ−１ｎｕ／ｎｕマウスを使用して結腸がん異種移植モデルを作製した。詳細には、ＨＴ−２９細胞をマウスのどちらかの側に皮下注射し、処理開始前の１週間の間、腫瘍を形成させた。マウスを２つの群に分け（１グループあたり４匹）、一方はろ過した淡水を処方し、他方は、飲料水にＤＲＥを添加した２．５ｍｇ／ｍＬのＤＲＥ水溶液（乾燥根５ｇから抽出比１：１０で抽出した４００ｍｇ／ｋｇ／日）を１ヶ月間与えた。各マウスの体重を１日おきに測定し、１ヶ月間処理した後、マウスを屠殺して得た臓器を病理解析した。

図２８及び２９に示す通り、水摂取コントロールマウスとＤＲＥ摂取マウスの体重に差はなく、毒性はないことが確認された。図３０及び３１は、ろ過した淡水又はＤＲＥでそれぞれ３週間処理した後のＣＤ−１ｎｕ／ｎｕマウスの写真である。図３２に示す通り、水摂取マウスはＤＲＥ摂取マウスに比べて腫瘍体積が大きく、ｉｎ ｖｉｖｏモデルにおける結腸がんに対してＤＲＥの効力が示された。

図３３及び３４に更に示す通り、心臓、腎臓及び肝臓の組織化学的状態についてコントロール群とＤＲＥ処理群に何ら違いは見られず、これらの組織に対して毒性はないことが示された。一方、コントロール群と処理群には腫瘍組織化学的に明確な差が見られ、処理群では腫瘍細胞核数が有意に減少していた。

ＨＴ−２９細胞の代わりにＨＣＴ１１６細胞を用いて同様の試験を実施した結果、効力及び毒性に関して同様の結果が得られた。

上述の結果から、水摂取群と比較して、ＤＲＥ処理群においては、ＤＲＥが結腸腫瘍の増殖を停止させたことが分かった。ＤＲＥ処理群では毒性は見られず、毒性評価結果を確認できた。これらの結果から、結腸がんのｉｎ ｖｉｖｏモデルにおいてＤＲＥが効力を示し得ることが示される。

（ｉｘ）臨床データ
難治性Ｍ５急性骨髄性白血病を患う７０歳の老人男性について、ＤＲＥ単独で１８ヶ月にわたって寛解が維持されたことが報告された。上記男性は急性単球性白血病については完全寛解したものの、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）については徴候が継続していた。上記男性がＤＲＥ消費頻度を減らすと、末梢血単球数の増加が見られ、同様に、ＤＲＥ消費量を増やすと末梢血単球数が制御された。慢性骨髄単球性白血病を患う２人の女性についても、ＤＲＥ単独使用で一時的な応答が見られた。

上記物質を消費した患者において一過性の応答が報告されている。難治性急性骨髄性白血病を患う一人の患者がＤＲＥ治療とヒドロキシウレア治療とを同時に開始したところ、この併用に対して即座に劇的な応答を示した。患者には大きな皮膚結節が複数個できたが、２４時間以内に寛解した。わずか２４時間後にヒドロキシウレア治療を止めたにも関わらず、患者はこの応答を１ヶ月間維持した。患者は薬剤に対して極めて良好な忍容性を示し、毒性も報告されていない。

別の患者では、難治性ホジキンリンパ腫に対してＤＲＥを投与した。患者は４０歳の女性で、複数の化学療法及び自家幹細胞移植に失敗していた。患者は、シクロホスファミド及びエトポシドの併用化学療法を受けたことがあった。患者はこの併用下では血球減少症を発症したが、ＤＲＥを追加する際、患者はこれらの投薬による血球減少症を患っていた。ＤＲＥが追加されると、患者はＣＴスキャンにおいて一過性ではあるが劇的な応答を示した。該物質の投与から３ヶ月後には患者に悪化が見られ、この悪化後に膵炎を発症した。

結腸直腸がんを含む様々な悪性腫瘍に対してＤＲＥを使用した多くの患者において、優れた忍容性が報告され、応答が自己申告された。ホジキンリンパ腫を患う別の患者は、ＤＲＥ処理に対して顕著な応答をはっきり示したと報告されている。

本発明の薬剤には、根エキスの機能を損なわない限り、他の抗がん成分又は抗がん剤を追加してもよい。そのような抗がん成分としては、特に限定されないが、抗葉酸剤、５−フルオロピリミジン（５−フルオロウラシル等）、β−Ｌ−１，３−ジオキソラニルシチジン又はβ−Ｌ−１，３−ジオキソラニル５−フルオロシチジン等のシチジン類似体、代謝拮抗剤（プリン代謝拮抗剤、シタラビン、フダラビン、フロクスウリジン、６−メルカプトプリン、メトトレキサート及び６−チオグアニン等）、ヒドロキシウレア、分裂抑制剤（ＣＰＴ−１１、エトポシド（ＶＰ−２１）、タキソール、並びに、ビンクリスチン及びビンブラスチン等のビンカアルカロイド等）、アルキル化剤（特に限定されないが、ブスルファン、クロラムブシル、シクロホスファミド、イホファミド、メクロレタミン、メルファラン及びチオテパ等）、非古典的なアルキル化剤、白金含有化合物、ブレオマイシン、抗腫瘍性抗生物質、ドキソルビシン及びダンノマイシン等のアントラサイクリン、アントラセンジオン、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、ホルモン剤（特に限定されないが、コルチコステロイド（デキサメタゾン、プレドニゾン及びメチルプレドニゾン等）、アンドロゲン（フルオキシメステロン及びメチルテストステロン等）、エストロゲン（ジエチルスチルベステロール等）、抗エストロゲン薬（タモキシフェン等）、ＬＨＲＨ類似体（ロイプロリド等）、抗アンドロゲン薬（フルタミド、アミノグルテチミド、酢酸メゲストロール、メドロキシプロゲステロン等））、アスパラギナーゼ、カルムスチン、ロムスチン、ヘキサメチル−メラミン、ダカルバジン、ミトタン、ストレプトゾシン、シスプラチン、カルボプラチン、レバマゾール及びロイコボリン等が挙げられる。抗がん剤は、メトホルミン、ヒドロキシウレア、シクロホスファミド又はエトポシドであることが好ましい。また、本発明の化合物は、インターフェロン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、マクロファージ・コロニー刺激因子及びコロニー刺激因子等の酵素治療薬及び免疫系調節剤と併用してもよい。根エキスは、例えば、経口、非経口、静脈内、皮内、経皮、粘膜、皮下及び局所等の適切な経路で患者に投与できる。

根エキスは、経口投与することが好ましい。多くの投与／投薬試験により、本発明の薬剤は、経口的に摂取され、場合によっては投与対象の消化器系に曝されると、抗がん活性が大きくなり得ることが分かった。根エキスは、粉末又は流エキスの形態で、さらに改変することなく経口投与してもよい。あるいは、液体、最も好ましくは水に根エキスを可溶化してもよく、このエキスを含有する液体を経口投与する。不注意による細菌の混入又は細菌感染を防止するため、本発明のエキスを煮沸して茶とし、このエキスを含有する茶を経口投与してもよい。あるいは、根エキスをカプセル剤に封入してもよく、圧縮して錠剤としてもよい。そのようなカプセル剤又は錠剤は、精製して不純物及び／又は細菌を除去してもよいし、不活性希釈剤、可食性基剤、結合剤及び／又は佐剤材料等を更に含有させてもよい。

錠剤及びカプセル剤等は下記成分又は類似の性質を示す化合物のいずれかを含有してもよい：微結晶セルロース、トラガカントゴム若しくはゼラチン等のバインダ；デンプン若しくはラクトース等の賦形剤；アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ若しくはコーンスターチ等の崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム若しくはステロテス（ｓｔｅｒｏｔｅｓ）等の滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素等の滑剤；スクロース若しくはサッカリン等の甘味剤；又は、ペパーミント、サリチル酸メチル若しくはオレンジフレーバー等のフレーバー剤。投与単位形態がカプセル剤の場合、上記材料に加えて、脂肪油等の液状基剤を含有してもよい。また、投与単位形態は、投与単位の物理的形態を改変する他の種々の材料を含有してもよく、そのような材料としては、糖衣、セラック等の腸溶性剤等が挙げられる。

投与量は、健康状態、年齢、体重、及び、治療対象であるがんの重篤度によって変化することに留意されたい。当業者には明らかな通り、各患者の具体的な投与計画は、個々の患者の必要性に応じて経時的に調節される。根エキスは、一度に投与してもよいし、複数回に分けて少量ずつ異なる間隔で投与してもよい。

本発明の薬剤は、皮膚組織、臓器、骨、軟骨、血液及び脈管等におけるがんの治療及び／又は予防に好適である。根エキスは、特に限定されないが、頭部、頸部、眼、口、咽喉、食道、胸部、骨、肺、結腸、直腸、胃、前立腺、乳房、卵巣、腎臓、肝臓、膵臓及び脳等における各種がんを治療するのに使用できる。上記がんには、原発がん及び転移性がんが包含される。

本発明の最も好ましい実施形態を本明細書中に記載したが、これらの最も好ましい実施形態は単なる例示として示したものに過ぎず、本発明の範囲を限定するものでは全くない。当業者には明らかな通り、これらの最も好ましい実施形態に対して本発明の範囲内で改変及び変更を行ってもよい。

Claims (39)

1. がんを治療又は予防するための薬剤を製造する方法であって、
   タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根を凍結して凍結根ストックを得る工程であって、１以上の根細胞が少なくとも部分的に破壊されるよう選択される工程；
   前記凍結根ストックを乾式粉砕して根粉末を得る工程であって、前記凍結根ストックが約４０℃未満の粉砕温度で保持される工程；
   溶媒に前記根粉末を浸漬して、流エキス部分と固体粒子部分を含む懸濁液を得る工程；及び、
   前記流エキス部分を前記固体粒子部分から分離して、前記薬剤で使用される流エキスを得る工程を有する方法。
2. 前記がんは、結腸がん、膵がん、血液がん又は皮膚がんである、請求項１に記載の方法。
3. 前記がんは、前記血液がん又は前記皮膚がんからなるものであって、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、ホジキンリンパ腫及び黒色腫からなる群より選択される、請求項２に記載の方法。
4. 前記凍結工程より前に、相対湿度が約５％〜約１０％となるまで前記植物の根を乾燥させる工程を更に有する、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
5. 前記タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根は、植物の開花若しくは発芽より前、又は、芽の生長が休止した後に採取した休眠中のタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根からなる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
6. 前記休眠中のタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根は、前記植物の開花又は発芽の前約９０日以内、好ましくは約３０日以内に採取される、請求項５に記載の方法。
7. 前記タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根は、Ｔ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ、Ｔ．ｅｒｙｔｈｒｏｓｐｅｒｍｕｍ、Ｔ．ａｌｂｉｄｕｍ、Ｔ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｔ．ｌａｅｖｉｇａｔｕｍ、Ｔ．ｅｒｙｔｈｒｏｓｐｅｒｍｕｍ、及び、Ｔ．ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｍからなる群より選択される種に属する植物から得られる、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
8. 前記凍結工程は、平均凍結温度が約−２１０℃〜約−３０℃となるまで、前記植物の根を液体窒素に接触させる若しくは沈める、又は、前記植物の根を凍結させることを含む、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
9. 前記乾式粉砕工程は、前記凍結根ストックを平均粒径が約１００μｍ未満、好ましくは約５０μｍ未満となるまで乾式粉砕することを含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
10. 前記乾式粉砕工程は、パルベライザ型粉砕機、衝突式粉砕機及び微粒粉砕機からなる群より選択される粉砕機を用いて前記凍結根ストックを乾式粉砕することを含み、
    前記粉砕機又はその構成要素が約−２５℃未満、好ましくは約−５０℃未満に冷却されることで、前記凍結根ストック又は根粉末との接触時の発熱が防止される、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
11. 前記溶媒は、水、ペンタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、１，４−ジオキサン、クロロホルム、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、プロピレンカーボネート、ギ酸、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、エタノール、メタノール及び酢酸のうち１以上を含む、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
12. 前記浸漬工程は、約５℃〜約１００℃の浸漬温度で、好ましくは約５分〜約２４時間、攪拌下又は非攪拌下で前記根粉末を水に浸漬することを含む、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
13. 前記分離工程は、ろ過及び遠心分離の少なくとも一方を含み、
    前記ろ過は、１回、又は、孔径が同じ若しくは異なる複数のフィルタを用いて２回以上実施し、
    前記遠心分離は５０００×ｇ〜８０００×ｇで実施する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
14. 前記分離工程は、約０．４５μｍの第１の孔径を有する第１のフィルタと、約０．２２μｍの第２の孔径を有する第２のフィルタを用いて、前記懸濁液を少なくとも２回ろ過することを含み、
    前記第２のフィルタは細菌を除去するものが選択される、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
15. 前記乾式粉砕工程より前に、前記植物の根をさいの目状に切って複数の根切片を得る工程を更に有する、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
16. 前記粉砕温度は約０℃未満である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
17. 前記粉砕温度は約−２５℃未満、好ましくは約−４０℃未満である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
18. 分離した前記流エキスを凍結乾燥してエキス粉末を得、必要に応じて、医薬的に許容される基剤、希釈剤、結合剤、佐剤及び抗がん剤のうち１以上を前記エキス粉末と混合する工程を更に有する、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
19. 前記抗がん剤は、メトホルミン、ヒドロキシウレア、シクロホスファミド及びエトポシドのうち１以上である、請求項１８に記載の方法。
20. 前記薬剤は、前記エキス粉末を約５ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約１０００ｍｇ／ｋｇ体重／日、好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約７０ｍｇ／ｋｇ体重／日含有する投与形態からなる、請求項１８又は請求項１９に記載の方法。
21. 前記薬剤は、前記エキス粉末を約０．５ｇ〜約７０ｇ、好ましくは約１〜４ｇ含有する１日投与形態からなる、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
22. がんを治療又は予防するためのタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを含有する薬剤を製造する方法であって、
    （１）タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根を凍結して凍結根ストックを得る工程であって、該凍結工程は１以上の根細胞が少なくとも部分的に破壊されるよう選択され、前記タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根は、植物の発芽若しくは開花より前、又は、芽の生長が休止した後に採取した休眠中のタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根からなる工程；
    （２）前記凍結根ストックを乾式粉砕して、平均粒径が約１００μｍ未満、好ましくは約５０μｍ未満の根粉末を得る工程であって、前記凍結根ストックが約４０℃未満の粉砕温度で保持される工程；
    （３）エタノール及び水の一方又は両方を含む溶媒に前記根粉末を浸漬して、溶液部分と固体部分を含む混合物を調製する工程；
    （４）前記溶液部分を前記固体部分から分離する工程；及び、
    （５）前記溶液部分を凍結乾燥して前記タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを乾燥エキス粉末として得、必要に応じて、その乾燥エキス部分と、医薬的に許容される基剤、希釈剤、結合剤、佐剤及び抗がん剤のうち１以上とを混合する工程
    を有する方法。
23. 前記がんは、結腸がん、膵がん、血液がん又は皮膚がんである、請求項２２に記載の方法。
24. 前記がんは、慢性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性骨髄単球性白血病、ホジキンリンパ腫又は黒色腫である、請求項２２に記載の方法。
25. 前記休眠中のタンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根は、最初の季節性の植物の開花又は発芽の前約９０日以内、好ましくは約３０日以内に採取される、請求項２２〜２４のいずれか１項に記載の方法。
26. 前記タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根は、Ｔ．ｏｆｆｉｃｉｎａｌｅ、Ｔ．ｅｒｙｔｈｒｏｓｐｅｒｍｕｍ、Ｔ．ａｌｂｉｄｕｍ、Ｔ．ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｔ．ｌａｅｖｉｇａｔｕｍ、Ｔ．ｅｒｙｔｈｒｏｓｐｅｒｍｕｍ、及び、Ｔ．ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃｕｍからなる群より選択される種に属する植物から得られる、請求項２２〜２５のいずれか１項に記載の方法。
27. 前記凍結工程より前に、相対湿度が約１０％未満となるまで前記植物の根を乾燥させる工程を更に有する、請求項２２〜２６のいずれか１項に記載の方法。
28. 前記凍結工程は、平均凍結温度が約−２１０℃〜約−３０℃となるまで前記植物の根を液体窒素に接触させる又は沈めることを含む、請求項２２〜２７のいずれか１項に記載の方法。
29. 前記乾式粉砕工程は、粉砕機を用いて前記凍結根ストックを平均粒径が約５０μｍ未満となるまで乾式粉砕して、前記１以上の根細胞を実質的に破壊することを含み、
    前記粉砕機は、パルベライザ型粉砕機、衝突式粉砕機及び微粒粉砕機からなる群より選択され、
    前記乾式粉砕工程は、前記粉砕機を約−２５℃未満の温度まで冷却することを更に含む、請求項２２〜２８のいずれか１項に記載の方法。
30. 前記溶媒は、ペンタン、シクロペンタン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、１，４−ジオキサン、クロロホルム、ジエチルエーテル、ジクロロメタン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、アセトン、ジメチルホルムアミド、アセトニトリル、ジメチルスルホキシド、プロピレンカーボネート、ギ酸、ｎ−ブタノール、イソプロパノール、ｎ−プロパノール、メタノール又は酢酸を更に含む、請求項２２〜２９のいずれか１項に記載の方法。
31. 前記浸漬工程は、約５℃〜約１００℃の浸漬温度で、好ましくは約５分〜約２４時間、攪拌下又は非攪拌下で前記根粉末を前記溶媒に浸漬することを含む、請求項２２〜３０のいずれか１項に記載の方法。
32. 前記分離工程は、ろ過及び遠心分離の少なくとも一方を含み、
    前記ろ過は、１回、又は、孔径が同じ若しくは異なる複数のフィルタを用いて２回以上実施し、
    前記遠心分離は５０００×ｇ〜８０００×ｇで実施する、請求項２２〜３１のいずれか１項に記載の方法。
33. 前記分離工程は、約０．４５μｍの第１の孔径を有する第１のフィルタと、約０．２２μｍの第２の孔径を有する第２のフィルタを用いて、前記混合物を少なくとも２回ろ過することを含み、
    前記フィルタの一方又は両方は細菌を除去するものが選択される、請求項２２〜３２のいずれか１項に記載の方法。
34. 前記抗がん剤は、メトホルミン、ヒドロキシウレア、シクロホスファミド及びエトポシドのうち１以上からなる、請求項２２〜３３のいずれか１項に記載の方法。
35. 前記乾式粉砕工程より前に、前記タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根をさいの目状に切って、平均サイズが約０．２ｃｍ〜１．５ｃｍの複数の根切片を得る工程を更に有する、請求項２２〜３４のいずれか１項に記載の方法。
36. 前記粉砕温度は約０℃未満である、請求項２２〜３５のいずれか１項に記載の方法。
37. 前記粉砕温度は約−２５℃未満、好ましくは約−４０℃未満である、請求項２２〜３６のいずれか１項に記載の方法。
38. 前記薬剤は、前記タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを約５ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約１０００ｍｇ／ｋｇ体重／日、好ましくは約１０ｍｇ／ｋｇ体重／日〜約７０ｍｇ／ｋｇ体重／日含有する投与形態からなる、請求項２２〜３７のいずれか１項に記載の方法。
39. 前記薬剤は、前記タンポポ属（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）植物の根エキスを約０．５ｇ〜約７０ｇ、好ましくは約１〜４ｇ含有する１日投与形態からなる、請求項２２〜３７のいずれか１項に記載の方法。