JP2015504887A - 抗スクレロスチン抗体の使用による歯槽骨消失の治療方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本願は、2011年12月28日に提出された米国特許仮出願第61/580,964号の優先権の利益を主張する。その優先出願の開示はその全体の参照により組み込まれる。
本発明は概して歯槽骨の消失を治療するためにスクレロスチン阻害剤を使用する方法に関する。
本願と同時に提出され、次のように特定化されるコンピューター読み込み可能なヌクレオチド/アミノ酸配列表がその全体の参照により組み込まれる:2012年12月7日に作成された805,989バイトの「46570_SeqListing.txt」という名称のASCII(テキスト)ファイル。
次の出願はそれらの全体の参照によりここに組み込まれる:2006年4月17日に提出された米国特許仮出願第60/792,645号、2006年3月13日に提出された米国特許仮出願第60/782,244号、2006年2月24日に提出された米国特許仮出願第60/776,847号、および2005年5月3日に提出された米国特許仮出願第60/677,583号に対する優先権を主張する2006年4月25日に提出された米国特許出願第11/410,540号、ならびに2006年4月17日に提出された米国特許仮出願第60/792,645号、2006年3月13日に提出された米国特許仮出願第60/782,244号、2006年2月24日に提出された米国特許仮出願第60/776,847号、および2005年5月3日に提出された米国特許仮出願第60/677,583号に対する優先権を主張する2006年4月25日に提出された米国特許出願第11/411,003号(米国特許第7,592,429号として登録)。次の出願も参照によりここに組み込まれる:2007年9月17日に提出された米国特許仮出願第60/973,024号に対する優先権を主張する2008年9月17日に提出された米国特許出願第12/212,327号、および2007年12月14日に提出された米国特許仮出願第61/013,917号に対する優先権を主張する2008年12月15日に提出された国際特許出願第PCT/US08/86864号の米国特許法第371条に従う米国国内段階出願である2010年6月29日に提出された米国特許出願第12/811,171号。
(i)配列番号1のアミノ酸51〜64、73〜90、101〜117、および138〜149を含むヒトスクレロスチンの部分であって:
(a)アミノ酸57と111の間のジスルフィド結合、
(b)アミノ酸82と142の間のジスルフィド結合、および
(c)アミノ酸86と144の間のジスルフィド結合、
のうちの少なくとも1つ、少なくとも2つ、または3つ全てを有する前記部分、または
(ii)配列番号1のアミノ酸57〜64、73〜86、111〜117、および138〜144を含むヒトスクレロスチンの部分であって:
(a)アミノ酸57と111の間のジスルフィド結合、
(b)アミノ酸82と142の間のジスルフィド結合、および
(c)アミノ酸86と144の間のジスルフィド結合
のうちの少なくとも1つ、少なくとも2つ、または3つ全てを有する前記部分に結合する。
スクレロスチン阻害剤は、生理的に許容可能な(例えば、医薬)組成物であって、担体、賦形剤、または希釈剤を含み得る組成物の形状で対象に投与されることが好ましい。本明細書に記載されるスクレロスチン阻害剤(例えば、抗スクレロスチン抗体または抗体断片)は、本明細書において開示される投薬量およびタイミング計画のいずれかを用いる投与のための医薬の調製において使用され得ることが理解される。医薬組成物および治療の方法が米国特許出願公開第20050106683号および第2007/110747号に開示されており、それらの特許出願公開は本明細書において参照により組み込まれる。「生理的に許容可能な」は、ヒトに投与されるとアレルギー反応または類似の不都合な反応を生じることがない分子および組成物を指す。加えて、対象に投与される組成物は1つより多くのスクレロスチン阻害剤(例えば、2つの抗スクレロスチン抗体、または1つのスクレロスチン結合剤と1つの合成化学スクレロスチン阻害剤)または異なる作用機序を有する1つ以上の治療薬と組み合わせたスクレロスチン阻害剤を含有し得る。
同じ病原体または生化学的経路を標的とする2つ以上の薬剤を組み合わせることによる病変の治療は、時に各薬剤単独の治療上適切な容量を使用することと比べてより高い効力と副作用の減少を引き起こすことがある。いくつかの場合ではその薬品の組合せの効力は相加的であるが(その組合せの効力が各薬品単独の効果の合計とおよそ等しい)、他の場合ではその効果は相乗的であり得る(その組合せの効力が投与される各薬品単独の効果の合計よりも高い)。本明細書において使用される場合、「併用療法」という用語は、2つの化合物が同時、例えば、一斉に送達され得ること、またはそれらの化合物のうちの1つが最初に投与され、続いて2つ目の薬剤が、例えば、順次投与されることを意味する。その所望の結果は対象の1つ以上の症状の軽減か、またはその投与量の受容者における客観的に確認できる改善であり得る。
歯槽骨の次のパラメータのうちの1つ以上の喪失を防ぐ、または遅らせるために、維持治療計画における第2骨強化薬剤および/またはスクレロスチン阻害剤の使用も企図されている:骨ミネラル密度、歯槽骨の高さ、歯槽骨量、歯槽骨の体積および歯槽骨のミネラル含有量。この点で、本明細書に記載される方法または使用法は、所望により、スクレロスチン抗体を用いる治療期間が終了した後の約1週間から約5年の維持期間に骨ミネラル密度、歯槽骨の高さ、歯槽骨量、歯槽骨の体積および歯槽骨のミネラル含有量を維持するのに有効な1つ以上の量の第2骨強化薬剤を投与することを含む。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される方法または使用法は少なくとも約1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、9週間、10週間、11週間、12週間、3か月、13週間、14週間、15週間、16週間、4か月、17週間、18週間、19週間、20週間、5か月、21週間、22週間、23週間、24週間、6か月、25週間、26週間、27週間28週間、7か月、29週間、30週間、31週間またはそれ以上(例えば、8か月、9か月、10か月、11か月、1年、15か月、18か月、2年、3年、4年、5年またはそれ以上の(例えば、対象の生存時間にわたる)維持期間に対象へ第2骨強化薬剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、その維持期間は約6〜12週間である。いくつかの実施形態では、その維持期間は約4〜12週間、または約1〜3か月である。いくつかの実施形態では、その維持期間は約12〜20週間、または約3〜5か月である。いくつかの実施形態では、その維持期間は約20〜32週間、または約5〜8か月である。いくつかの実施形態では、その維持期間は約24〜36週間、または約6〜9か月である。いくつかの実施形態では、その維持期間は約1年、約2年、約3年、約4年、約5年またはそれ以上である。歯槽骨の「維持」にはスクレロスチン阻害剤治療を受けた対象において経験された類似レベルの歯槽骨パラメータの維持が含まれる。
スクレロスチン阻害剤(例えば、抗スクレロスチン抗体または抗体断片)を含む医薬組成物はそのような医薬組成物の使用法に関する指示書を提供する包装材料と共に容器(例えば、バイアルまたは注射筒)の中に配置され得る。一般に、そのような指示書はスクレロスチン阻害剤の濃度、ならびにある特定の実施形態の範囲では賦形剤成分または医薬組成物の再構成に必要であり得る希釈剤(例えば、水、生理食塩水またはPBS)の相対量を記載する具体的な表現を含む。
実施例
アスコルビン酸とB‐グリセロリン酸が、ミネラル沈着を生じるMC3T3‐E1‐BF細胞の分化を誘導するために使用される。96ウェル形式における例となるスクリーニングプロトコルには第1日での細胞播種とそれに続く12日の期間にわたる7回の培地交換が含まれ、ミネラル沈着の大半が最後の18時間に起こる。ミネラル沈着の特定のタイミングと程度は使用される特定のロット番号の血清に部分的に応じて変化し得る。全般的に細胞培養の技術分野においてよく知られるように、対照実験によりそのような変化を説明することが可能になる。統計分析(MS ExcelとJMPを使用する)について、一元配置ANOVAとそれに続くダネット比較を用いて群間の差異を決定することができる。各データセットについての群の平均はP値が0.05未満(P<0.05)であるとき有意差があるとみなされる。
例となる骨特異的アルカリホスファターゼアッセイ法が国際特許公開第2008/115732号および米国特許第7,744,874号に記載されている(その細胞系中和アッセイ法の記載について参照によりここに組み込まれる)。例となるプロトコルは次の通りである。C2C12細胞(ATCC、CRL1772)を96ウェル組織培養プレート内の5%胎児ウシ血清を添加したMEM培地中に3000〜5000細胞/ウェルの割合で蒔く。そのプレートを5%CO2中において37℃で一晩保温する。抗体を(国際公開第2008/115732号に記載されるように調製した)0.5×Wnt3a条件培地中に様々な終濃度まで希釈する。培地をプレートに蒔いた細胞から取り除き、事前混合した抗体‐BMP4‐スクレロスチン溶液(ヒトまたはカニクイザル)を添加し(150μl)、30μg/mlから0.5μg/mlの終濃度の抗体、25ng/mlの終濃度のBMP‐4、1.0μg/mlの終濃度のスクレロスチンタンパク質を提供し、そして、条件培地の濃度は0.5×である。次に、そのプレートを5%CO2中において37℃で72時間保温する。培地をそれらの細胞から取り除き、それらの細胞をPBSで1回洗浄し、そして、−80℃と37℃の間を繰り返して3回凍結融解する。アルカリホスファターゼ活性はアルカリホスファターゼ基質(1ステップPNPP、Pierce社番号37621)(150μl/ウェル)を添加することにより測定される。細胞を有するプレートを室温で60分間保温し、その時点で光学密度(OD)を405nmで測定してアルカリホスファターゼ活性を決定する。IC50の計算は、例えば、SigmaPlot回帰ウィザードをSigmoid4パラメータフィット方程式と共に用いて実施され得る。
MC3T3細胞における例となるBMP2誘導性ミネラル化アッセイが国際特許公開第2009/047356号に記載されている(その細胞系中和アッセイ法の記載について参照によりここに組み込まれる)。簡単に説明すると、MC3T31b細胞を96ウェルプレート(例えば、6×103細胞/ウェルまたは2×103細胞/ウェル)内の100μlのアッセイ用培養培地(G418を含まない維持培養培地)に蒔き、集密に達するまで3日間培養する。そのアッセイ用培養培地を交換し、そして、試験化合物を10mMのb‐グリセロリン酸および50μMのアスコルビン酸と共に添加する。細胞への添加の前にスクレロスチンと候補抗体を別々のプレート上において室温で2時間前保温する。アッセイ用96ウェルプレートに2.1または2.8nMのBMP‐2(R&Dシステムズ社、カタログ番号355‐BM‐010)を適用した後にスクレロスチン‐抗体混合物を適用する。細胞を14日間培養する。その培養の最後に細胞をウェル当たり200μlのPBSで2回洗浄し、50μlの0.5M塩酸を各ウェルに添加し、そして、プレートを−20℃で最低でも24時間凍結する。プレートを試験のために室温で2時間融解する。各ウェルの10μlを新しいプレートに移し、カルシウム作業溶液(1:5)(200μl)に曝露する。595nmの光学密度を5〜30分の保温期間の後にマイクロプレートリーダーで測定する。吸光度を検量線に従ってカルシウムのマイクログラム量に変換し、BMP‐2誘導性ミネラル化の程度を決定させる。
スーパー・トップ・フラッシュ(STF)レポータータンパク質を使用する例となる細胞系シグナル伝達アッセイ法が国際特許公開第2009/047356号に記載されている。HEK293細胞を対照ウェルについてpcDNA3+(480ng)、スーパー・トップ・フラッシュ(STF)(20ng)、およびphRL‐CMV(0.5ng)で形質移入し、Wnt1処置ウェルについてpcDNA‐wnt1(20ng)、pcDNA3+(460ng)、スーパー・トップ・フラッシュ(STF)(20ng)、およびphRL‐CMV(0.5ng)で形質移入する。それらのプラスミドを50μlのOptiMEM(登録商標)に希釈した1.6μlのリポフェクタミン2000と混合し、細胞への適用の前に室温で30分間保温する。適用された後、それらの細胞を5%CO2中において37℃で5時間培養する。
上顎歯槽骨:支持歯槽骨の体積と密度のマイクロCT測定値が図2および3に示されている。試験を通じて(2週間と4週間)結紮が配置された試験形式において、正常無損傷動物群における全身性Scl‐Ab投与は、治療開始後2週間と4週間の時点でベヒクル注射を受容した正常無損傷動物と比べると、骨体積率(BVF)と骨ミネラル密度(BMD)の両方に統計学的に有意な上昇を引き起こした。さらに、全身性Scl‐Ab注射を受けた結紮誘導性歯周病群は、第2週と第4週の時点でベヒクル注射を受けた疾患群よりも(統計学的には有意ではなかったが)上昇したBVFとBMDを示した(図2Aおよび2B)。
Claims (32)
- 対象における歯槽骨の消失を治療するための方法であって、セメントエナメル境と歯槽骨頂の間の距離を減少させるのに有効な量の抗スクレロスチン抗体を週に約5mgから約1,000mgまでの用量で前記対象に投与することを含む、前記方法。
- セメントエナメル境と歯槽骨頂の間の距離が治療開始後6週間までに治療前の距離と比べて少なくとも10%減少する、請求項1に記載の方法。
- 歯槽骨の高さが治療開始後6週間までに治療前の歯槽骨の高さと比べて少なくとも10%増加する、請求項1に記載の方法。
- 前記対象の歯槽骨の高さが治療開始後6週間までに治療前の歯槽骨の高さと比べて少なくとも1mm増加する、請求項1に記載の方法。
- 前記対象の歯槽骨の密度が治療開始後6週間までに治療前の歯槽骨の密度と比べて少なくとも10%増加する、請求項1に記載の方法。
- 歯槽骨の体積率が治療開始後6週間までに治療前の骨体積率と比べて少なくとも10%上昇する、請求項1に記載の方法。
- 前記抗体が約120から270mgまでの量で投与される、請求項1に記載の方法。
- 前記抗スクレロスチン抗体が週に2回投与される、請求項1に記載の方法。
- 前記抗スクレロスチン抗体が前記対象の病変歯肉部または病変歯周ポケットへ局所的に投与される、請求項1に記載の方法。
- 前記方法が、前記抗スクレロスチン抗体の投与前にペリオスタット(Periostat)(登録商標)または化学修飾テトラサイクリン‐3(CMT‐3)からなる群より選択される標準ケア治療薬を投与することを含む、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 副甲状腺ホルモン、テリパラチド、ビスホスホネート、RANKL抗体およびDKK‐1抗体からなる群より選択される第2骨強化治療薬を投与することをさらに含む、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗スクレロスチン抗体を用いる治療期間が終了した後に前記第2骨強化治療薬が投与される、請求項10に記載の方法。
- 第2期間に歯槽骨の維持に充分な量の前記抗スクレロスチン抗体を投与することを所望により含む、請求項1に記載の方法。
- 前記抗スクレロスチン抗体が重鎖と軽鎖を含む免疫グロブリンである、請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗スクレロスチン抗体が配列番号1のスクレロスチンに対する1×10−9M以下の結合親和性を示す抗体またはその断片である、請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
- MC3T3細胞ベースのミネラル化アッセイにおいて、ウェル当たりのスクレロスチンのモル数と比べてウェル当たり6倍過剰よりも少ないモル数のスクレロスチン結合部位が存在するとき、前記抗スクレロスチン抗体がヒトスクレロスチンを中和する、請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗スクレロスチン抗体が抗体Ab‐A、Ab‐B、Ab‐C、Ab‐D、Ab‐1、Ab‐2、Ab‐3、Ab‐4、Ab‐5、Ab‐6、Ab‐7、Ab‐8、Ab‐9、Ab‐10、Ab‐11、Ab‐12、Ab‐13、Ab‐14、Ab‐15、Ab‐16、Ab‐17、Ab‐18、Ab‐19、Ab‐20、Ab‐21、Ab‐22、Ab‐23、およびAb‐24のうちの少なくとも1つのスクレロスチンへの結合を交差妨害する、および/または抗体Ab‐A、Ab‐B、Ab‐C、Ab‐D、Ab‐1、Ab‐2、Ab‐3、Ab‐4、Ab‐5、Ab‐6、Ab‐7、Ab‐8、Ab‐9、Ab‐10、Ab‐11、Ab‐12、Ab‐13、Ab‐14、Ab‐15、Ab‐16、Ab‐17、Ab‐18、Ab‐19、Ab‐20、Ab‐21、Ab‐22、Ab‐23、およびAb‐24のうちの少なくとも1つによって前記抗スクレロスチン抗体のスクレロスチンへの結合が交差妨害される、請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗スクレロスチン抗体が配列番号245のCDR‐H1、配列番号246のCDR‐H2、配列番号247のCDR‐H3、配列番号78のCDR‐L1、配列番号79のCDR‐L2、および配列番号80のCDR‐L3を含む、請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 抗スクレロスチン抗体が、配列番号378を含む重鎖および配列番号376を含む軽鎖を含む、請求項18に記載の方法。
- 配列番号1に示されるアミノ酸配列を含むスクレロスチンポリペプチドに結合する抗スクレロスチン抗体であって、配列番号1のスクレロスチンに対する1×10−9M以下の結合親和性を示す前記抗スクレロスチン抗体を含む歯科インプラント。
- 配列番号1に示されるアミノ酸配列を含むスクレロスチンポリペプチドに結合する抗スクレロスチン抗体であって、配列番号1のスクレロスチンに対する1×10−9M以下の結合親和性を示す前記抗スクレロスチン抗体を含むゲルまたはマトリックス。
- 対象における歯槽骨の消失を治療する方法であって、セメントエナメル境と歯槽骨頂の間の距離を減少させるのに有効な量の抗スクレロスチン抗体を所望により週に約5mgから約1,000mgまでの用量で投与することを含む前記方法において使用される抗スクレロスチン抗体。
- 前記の歯槽骨の消失を治療する方法が、副甲状腺ホルモン、テリパラチド、ビスホスホネート、RANKL抗体およびDKK‐1抗体からなる群より選択される第2骨強化治療薬を投与することをさらに含む、請求項22に記載の抗スクレロスチン抗体。
- 前記抗スクレロスチン抗体を用いる治療期間が終了した後に前記第2骨強化治療薬が投与される、請求項23に記載の抗スクレロスチン抗体。
- 前記の歯槽骨の消失を治療する方法が第2期間に歯槽骨の維持に充分な量の前記抗スクレロスチン抗体を投与することを所望によりさらに含む、請求項22に記載の抗スクレロスチン抗体。
- 前記抗スクレロスチン抗体が重鎖と軽鎖を含む免疫グロブリンである、請求項22〜25のいずれか一項に記載の抗スクレロスチン抗体。
- 前記抗スクレロスチン抗体が配列番号1のスクレロスチンに対する1×10−9M以下の結合親和性を示す抗体またはその断片である、請求項22〜26のいずれか一項に記載の抗スクレロスチン抗体。
- MC3T3細胞ベースのミネラル化アッセイにおいて、ウェル当たりのスクレロスチンのモル数と比べてウェル当たり6倍過剰よりも少ないモル数のスクレロスチン結合部位が存在するとき、前記抗スクレロスチン抗体がヒトスクレロスチンを中和する、請求項22〜27のいずれか一項に記載の抗スクレロスチン抗体。
- 前記抗スクレロスチン抗体が抗体Ab‐A、Ab‐B、Ab‐C、Ab‐D、Ab‐1、Ab‐2、Ab‐3、Ab‐4、Ab‐5、Ab‐6、Ab‐7、Ab‐8、Ab‐9、Ab‐10、Ab‐11、Ab‐12、Ab‐13、Ab‐14、Ab‐15、Ab‐16、Ab‐17、Ab‐18、Ab‐19、Ab‐20、Ab‐21、Ab‐22、Ab‐23、およびAb‐24のうちの少なくとも1つのスクレロスチンへの結合を交差妨害する、および/または抗体Ab‐A、Ab‐B、Ab‐C、Ab‐D、Ab‐1、Ab‐2、Ab‐3、Ab‐4、Ab‐5、Ab‐6、Ab‐7、Ab‐8、Ab‐9、Ab‐10、Ab‐11、Ab‐12、Ab‐13、Ab‐14、Ab‐15、Ab‐16、Ab‐17、Ab‐18、Ab‐19、Ab‐20、Ab‐21、Ab‐22、Ab‐23、およびAb‐24のうちの少なくとも1つによって前記抗スクレロスチン抗体のスクレロスチンへの結合が交差妨害される、請求項22〜28のいずれか一項に記載の抗スクレロスチン抗体。
- 前記抗スクレロスチン抗体が配列番号245のCDR‐H1、配列番号246のCDR‐H2、配列番号247のCDR‐H3、配列番号78のCDR‐L1、配列番号79のCDR‐L2、および配列番号80のCDR‐L3を含む、請求項22〜29のいずれか一項に記載の抗スクレロスチン抗体。
- 抗スクレロスチン抗体が、配列番号378を含む重鎖および配列番号376を含む軽鎖を含む、請求項30に記載の抗スクレロスチン抗体。
- セメントエナメル境と歯槽骨頂の間の距離を減少させるのに有効な量の抗スクレロスチン抗体であって、所望により週に約5mgから約1,000mgまでの用量である前記抗スクレロスチン抗体の対象における歯槽骨の消失を治療するための医薬の調製における使用。
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