JP2015500860A - タンパク質溶液からウイルスを除去する方法 - Google Patents
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Abstract
Description
a)ウイルスおよび/またはウイルスDNAを選択的に沈殿させる濃度でアセトンをその溶液に添加することと、
b)沈殿した物質を標的タンパク質を含む溶液から分離する分離工程を行うことと、
c)標的タンパク質を沈殿させる最終濃度に達するように追加量のアセトンをその溶液に添加することと、
d)沈殿した標的タンパク質をその溶液から回収することと
を含む方法を提供する。
a)ウイルスおよび/またはウイルスDNAを選択的に沈殿させる濃度でアセトンをその溶液に添加することと、
b)沈殿した物質を標的タンパク質を含む溶液から分離する分離工程を行うことと、
c)標的タンパク質を沈殿させる最終濃度に達するように追加量のアセトンをその溶液に添加することと、
d)沈殿した標的タンパク質をその溶液から回収することと
を含む方法を提供する。
a)トリプシンを含む水溶液に12〜30%(v/v)のアセトン濃度に達するようにアセトンを添加することと、
b)沈殿した物質をトリプシンを含む溶液から分離する分離工程を行うことと、
c)45〜95%(v/v)、好ましくは60〜70%(v/v)の最終濃度に達するように追加量のアセトンをその溶液に添加することと、
d)沈殿したトリプシンをその溶液から回収することと
を含む方法に関する。
供給源:ブタ膵臓腺の水抽出によって得られたPCV2陽性トリプシンバッチ。
供給源:ブタ膵臓腺の水抽出によって得られたPCV2陽性液体トリプシンバッチ。濾過助剤(Kieselguhr Hyflo Super Cel(登録商標))が添加され、Seitz HS9000濾過パッドを備えたフィルタープレスで濾過が行われた。その濾液が、導電率が1mS未満になるまで(10,000Daのカットオフを有する膜を用いて)ダイアフィルトレーションされた。濃度は10%乾燥物質になるように調整され、pHは塩酸で3.5に調整された。このバッチを2つの等量部分に分けた。
供給源:ブタ膵臓腺の水抽出によって得られたPCV2陽性液体トリプシンバッチ。濾過助剤(Kieselguhr Hyflo Super Cel(登録商標))が添加され、Seitz HS9000濾過パッドを備えたフィルタープレスで濾過が行われた。その濾液が、導電率が1mS未満になるまで(10,000Daのカットオフを有する膜を用いて)ダイアフィルトレーションされた。濃度は10%乾燥物質になるように調整され、pHは塩酸で3.5に調整された。このバッチを2つの等量部分に分けた。
Claims (15)
- 標的タンパク質を含む水溶液からウイルスおよび/またはウイルスDNAを選択的に除去するための方法であって、前記方法は、
a)前記ウイルスおよび/またはウイルスDNAを選択的に沈殿させる濃度でアセトンを前記溶液に添加することと、
b)沈殿した物質を前記標的タンパク質を含む前記溶液から分離する分離工程を行うことと、
c)前記標的タンパク質を沈殿させる最終濃度に達するように追加量のアセトンを前記溶液に添加することと、
d)沈殿した前記標的タンパク質を前記溶液から回収することと
を含む、方法。 - 工程a)におけるアセトンの前記濃度が、約12〜40%(v/v)、好ましくは約12〜30%(v/v)、より好ましくは約14〜30%(v/v)、さらにより好ましくは約15〜20%(v/v)である、請求項1に記載の方法。
- 工程a)におけるアセトンの前記濃度が、約15%(v/v)である、請求項1に記載の方法。
- 工程c)におけるアセトンの前記最終濃度が、45〜95%、好ましくは60〜70%(v/v)、より好ましくは約66%(v/v)である、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記標的タンパク質が、哺乳動物供給源から得られたものである、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記標的タンパク質が、トリプシンである、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 工程a)における前記選択的沈殿が、15℃未満の温度で行われる、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 工程b)における前記分離が、濾過および/または遠心分離を含む、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- 工程b)における前記分離が、深層濾過を含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 工程d)が、濾過および/または遠心分離を含む、請求項1〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ウイルスが、無エンベロープウイルスである、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ウイルスが、PCV2である、請求項11に記載の方法。
- 前記標的タンパク質の25%未満が、工程b)で分離される、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ウイルスDNAの少なくとも50%、好ましくは少なくとも90%が、工程b)で分離される、請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 標的タンパク質を含む水溶液からウイルスDNAを選択的に除去するための方法である、請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法。
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