JP2015029462A - 細胞シートの製造および移送のための細胞培養器具 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明は、刺激により細胞の接着性が変化する刺激応答性領域を有するシート状培養部を備える細胞培養器具であって、シート状培養部が分断部分で分断可能に構成されており、刺激応答性領域が分断部分を跨いでいる、前記細胞培養器具に関する。
【選択図】図1
Description
(1)刺激により細胞の接着性が変化する刺激応答性領域を有するシート状培養部を備える細胞培養器具であって、シート状培養部が分断部分で分断可能に構成されており、刺激応答性領域が分断部分を跨いでいる、前記細胞培養器具。
(2)シート状培養部が分断部分に切断線を有することにより分断可能に構成されており、刺激応答性領域が切断線を跨いでいる、(1)記載の細胞培養器具。
(3)刺激応答性領域が、温度変化に応答して細胞接着性が変化する温度応答性ポリマー層が形成された領域である、(1)または(2)記載の細胞培養器具。
(4)(1)〜(3)のいずれかに記載の細胞培養器具と、該細胞培養器具の培養部を底部に配置することにより収容可能な容器とを含む、細胞シートの製造および移送のためのキット。
(5)細胞シートを製造および移送するための方法であって、
(a)(1)〜(3)のいずれかに記載の細胞培養器具のシート状培養部の刺激応答性領域の表面で細胞を培養し細胞シートを製造するステップ、
(b1)刺激応答性領域に刺激を印加して、刺激応答性領域の表面から細胞シートを剥離するステップ、
(b2)細胞培養器具の培養部上の細胞シートを、細胞培養器具とともに移動させるステップ、
(c)標的部位の上部で細胞培養器具のシート状培養部を分断部分で分断して引き抜くことにより、細胞シートを標的部位上に移すステップ、
を含む、前記方法。
N−イソプロアクリルアミドを最終濃度40重量%になるようにイソプロプルアルコールに溶解させて塗工液を作製した。OPSフィルム(50μm厚、旭化成ケミカルズ)を準備した。フィルム表面に塗工液を塗布した後、40℃の熱風乾燥機内で10秒間乾燥させた。そして電子線を照射してN−イソプロアクリルアミドをグラフト重合させ、フィルム表面にポリ−N−イソプロアクリルアミドを固定化し、未固定化成分を除去するために洗浄し、OPSフィルム基材の表面に温度応答性ポリマー層を有するフィルムを作製した。
炭酸ガスレーザーカッター装置(レーザーワークス社VLS2.30)を用いて切断線を付与した。出力は10Wとした。切断線が中央部になるように四角形状に切り出し、35mmφのペトリディッシュ底面に配置した。
上述の温度応答性フィルムを用いてマウス骨格筋芽細胞を5.0×106cells/cm2播種し、一週間37℃、5%CO2で培養した。培養液は5%血清を含むDMEM(インビトロジェン)を用いた。1週間後、低温インキュベータで30分インキュベートし細胞シートを剥離した。
細胞シートが切断線上に配置されるように慎重に培養液のみを除去した。このようにして、移送フィルムの切断線上に細胞シートを配置した(図6)。
8W齢のラットに吸入麻酔処理を実施し、皮下部を露出させ、上記の方法で作製した細胞シートを載せた移送フィルムをピンセットで持ち上げ移植先まで搬送した。皮下の直上で移送フィルムの切断線から左右反対方向にピンセット越しに力をかけ切断線を分離しながら、移植先の皮下部に細胞シートを中心部から落とすように移送した。細胞シートは中央部から皮下に接触し、切断線が裂かれると同時に細胞シートが皮下にしわなく移送されていることを目視で確認した。
2:培養部
3:刺激応答性ポリマー層
4:細胞
5:細胞シート
6:標的部位
7:分断部分
8:ハンドル部
9:容器
Claims (5)
- 刺激により細胞の接着性が変化する刺激応答性領域を有するシート状培養部を備える細胞培養器具であって、シート状培養部が分断部分で分断可能に構成されており、刺激応答性領域が分断部分を跨いでいる、前記細胞培養器具。
- シート状培養部が分断部分に切断線を有することにより分断可能に構成されており、刺激応答性領域が切断線を跨いでいる、請求項1記載の細胞培養器具。
- 刺激応答性領域が、温度変化に応答して細胞接着性が変化する温度応答性ポリマー層が形成された領域である、請求項1または2記載の細胞培養器具。
- 請求項1〜3のいずれか1項記載の細胞培養器具と、該細胞培養器具の培養部を底部に配置することにより収容可能な容器とを含む、細胞シートの製造および移送のためのキット。
- 細胞シートを製造および移送するための方法であって、
(a)請求項1〜3のいずれか1項記載の細胞培養器具のシート状培養部の刺激応答性領域の表面で細胞を培養し細胞シートを製造するステップ、
(b1)刺激応答性領域に刺激を印加して、刺激応答性領域の表面から細胞シートを剥離するステップ、
(b2)細胞培養器具の培養部上の細胞シートを、細胞培養器具とともに移動させるステップ、
(c)標的部位の上部で細胞培養器具のシート状培養部を分断部分で分断して引き抜くことにより、細胞シートを標的部位上に移すステップ、
を含む、前記方法。
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