JP2014528714A - Ｈｌａ−ａ１−又はｈｌａ−ｃｗ７−拘束性ｍａｇｅを認識するｔ細胞受容体 - Google Patents

Abstract

本発明は、ａ）ＨＬＡ−Ａ１に関連してメラノーマ抗原ファミリーＡ（ＭＡＧＥ Ａ）−３、又はｂ）ＨＬＡ−Ｃｗ７に関連してＭＡＧＥ−Ａ１２に対する抗原特異性を有する、単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供する。本発明は、関連するポリペプチド及びタンパク質、並びに関連する核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞及び細胞集団をさらに提供する。本発明のＴＣＲに関連する抗体、又はその抗原結合部分、及び医薬組成物が、本発明によってさらに提供される。宿主における癌の存在の検出方法と、宿主における癌の治療又は予防方法とが、本発明によってさらに提供される。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１１年９月１５日出願の米国出願第６１／５３５，０８６号（参照によりその全体が本願明細書中に組み込まれる）の優先権を主張する。

電子提出された物件の参照による組み込み
本願明細書と同時提出され、かつ、以下の通り識別されるコンピューター可読のヌクレオチド／アミノ酸の配列表が、本明細書中、参照によりその全体が組み込まれる：２０１２年８月２２日付ファイル名「710922ST25.TXT」、５２,１６２バイトのＡＳＣＩＩ（テキスト）ファイル１件。

養子細胞療法（Adoptive cell therapy：ＡＣＴ）は、患者への反応性Ｔ細胞の移入（癌患者への腫瘍反応性Ｔ細胞の移入を含む）を伴う。ヒト白血球型抗原（ＨＬＡ）−Ａ２拘束性Ｔ細胞エピトープを標的とするＴ細胞を使った養子細胞療法は、いくらかの患者において腫瘍の退縮を生じるにあたって成功している。しかしながら、ＨＬＡ−Ａ２発現のない患者は、ＨＬＡ−Ａ２拘束性Ｔ細胞エピトープを標的とするＴ細胞で治療できない。そのような制約が、養子細胞療法を広く応用する上で障害となっている。従って、免疫学的組成物及び癌治療の方法を改善する必要性が存在する。

発明の要旨
本発明は、ａ）ＨＬＡ−Ａ１に関連してメラノーマ抗原ファミリーＡ（ＭＡＧＥ Ａ）−３、又は、ｂ）ＨＬＡ−Ｃｗ７に関連してＭＡＧＥ−Ａ１２に対しする抗原特異性を有する、単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供する。本発明は、関連するポリペプチド及びタンパク質並びに関連する核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞及び細胞集団をさらに提供する。本発明のＴＣＲに関連する抗体、又はその抗原結合部分、及び、医薬組成物が、本発明によってさらに提供される。

宿主における癌の存在を検出する方法、及び、宿主における癌の治療又は予防方法が、本発明によってさらに提供される。宿主における癌の存在を検出する本発明の方法は、（ｉ）癌細胞を含む試料を、本明細書に記載される本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、宿主細胞集団、又は、抗体若しくはその抗原結合部分のいずれかに接触させることによって、複合体を形成すること、および（ｉｉ）複合体を検出することを含む。かかる複合体の検出が、宿主における癌の存在を表す。

宿主における癌を治療又は予防する本発明の方法は、宿主に、本明細書に記載されるＴＣＲ、ポリペプチド若しくはタンパク質のいずれか、本明細書に記載されるＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含む、任意の核酸若しくは組換え発現ベクター、又は、本明細書に記載されるＴＣＲ、ポリペプチド若しくはタンパク質のいずれかをコードする組換えベクターを含む任意の宿主細胞又は宿主細胞集団を、宿主における癌を治療又は予防するのに有効な量で投与することを含む。

図面のいくつかの図の簡単な説明
図１Ａは、様々な腫瘍細胞株との共培養に反応した、形質導入されていない（ＵＴ）細胞（黒色の棒グラフ）、又は、抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ Ａ１０（配列番号４６）（陰影のない棒グラフ）若しくは抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ １３−１８（配列番号４８）（灰色の棒グラフ）で形質導入した細胞のインターフェロン（ＩＦＮ）−γの分泌（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。図１Ｂは、ＨＬＡ−Ａ１＋／ＭＡＧＥ−Ａ３＋新鮮腫瘍ＦｒＴｕ２７６７（黒色の棒グラフ）、ＦｒＴｕ３１７８（灰色の棒グラフ）、ＦｒＴｕ２８２３（陰影のない棒グラフ）若しくはＦｒＴｕ３０６８（斜線のついた棒グラフ）、又はＨＬＡ−Ａ^＊０２０１＋／ＭＡＲＴ−１＋新鮮腫瘍ＦｒＴｕ２８５１（水平線のついた棒グラフ）若しくはＦｒＴｕ３２４２（垂直線のついた棒グラフ）との共培養に反応した、ＵＴ細胞、又は抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ Ａ１０（配列番号４６）若しくは抗ＭＡＲＴ−１ ＴＣＲ ＤＭＦ５で形質導入した細胞のＩＦＮ−γの分泌（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。市松模様の棒グラフは、腫瘍細胞と共培養していない細胞を表す。 図２Ａ、２Ｂは、様々な腫瘍細胞株との共培養に反応した、短縮型ヒト低親和性神経成長因子受容体（ＮＧＦＲ）（黒色の棒グラフ）、抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ５０２（配列番号４７）（陰影のない棒グラフ）、又は抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ＦＭ８（配列番号４９）（灰色の棒グラフ）をコードするコントロールコントラクトで形質導入した第一（図２Ａ）及び第二（図２Ｂ）のドナー由来の細胞のＩＦＮ−γの分泌（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。 図３Ａは、ＨＬＡ−Ａ１（棒グラフの陰影のない部分）、ＨＬＡ−Ａ２（棒グラフの灰色部分）、及び／又はＨＬＡ−Ｃｗ７（棒グラフの黒色部分）を発現する正常な白色人種人口の累積率を図解する棒グラフである。図３Ｂ、３Ｃは、ＨＬＡ−Ａ２及びＮＹ−ＥＳＯ−１（棒グラフの斜線のついた部分）、ＨＬＡ−Ａ１及びＭＡＧＥ−Ａ３（棒グラフの陰影のない部分）；ＨＬＡ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３及びＭＡＧＥ−Ａ１２（棒グラフの灰色部分）；ならびに／又はＨＬＡ−Ｃｗ７及びＭＡＧＥ−Ａ１２（棒グラフの黒色部分）を発現すると予測されよう、ヒトメラノーマ（図３Ｂ）及び滑膜細胞肉腫（図３Ｃ）患者人口の累積率を図解する棒グラフである。 図４は、ＭＡＧＥ−Ａ１２（ＶＲＩＧＨＬＹＩＬ；配列番号４）、ＭＡＧＥ−Ａ２（ＶＰＩＳＨＬＹＩＬ；配列番号５０）、ＭＡＧＥ−Ａ３（ＤＰＩＧＨＬＹＩＦ；配列番号５１）、ＭＡＧＥ−Ａ６（ＤＰＩＧＨＶＹＩＦ；配列番号５２）のペプチド、又はコントロールペプチド（ＥＤＧＣＰＡＡＥＫ；配列番号５３）をパルスしたＨＬＡ−Ｃｗ^＊０７０１及びＨＬＡ−Ｃｗ^＊０７０２標的細胞との共培養に反応した、ＮＧＦＲ（黒色の棒グラフ）、抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ５０２（配列番号４７）（陰影のない棒グラフ）、又は抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ＦＭ８（配列番号４９）（灰色の棒グラフ）で形質導入した細胞のＩＦＮ−γの分泌（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。 図５Ａ−５Ｄは、表示した標的に対するエフェクターの比（Ｅ：Ｔ）での、形質導入されていないＰＢＭＣ（黒丸）、又は、抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ５０２（配列番号４７）（▼）、抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ＦＭ８（配列番号４９）（菱形）、抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ Ａ１０（配列番号４６）（四角）、抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ １３−１８（配列番号４８）（▲）若しくは抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ １１２−１２０（白丸）で形質導入したＰＢＭＣによる、３９７ ｍｅｌ（Ａ）、６２４ ｍｅｌ（Ｂ）、２９８４ ｍｅｌ（Ｃ）、及び２６６１ ＲＣＣ（Ｄ）細胞の溶解率を示す線グラフである。２回の独立した実験から１回の代表的な結果が示されている。 図６Ａは、様々な腫瘍細胞株との共培養に反応した、形質導入されていない細胞（コントロール）（縞模様の棒グラフ）、又は抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ Ａ１０（配列番号４６）（陰影のついた棒グラフ）若しくは抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ １３−１８（配列番号４８）（市松模様の棒グラフ）で形質導入した細胞のＩＦＮ−γの分泌（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。これらのＴＣＲで形質導入したＴ細胞の反応を評価する３回の独立した実験のうち２回の代表的な結果が示されている。図６Ｂは、抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ Ａ１０（配列番号４６）、抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ １３−１８（配列番号４８）、抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ５０２（配列番号４７）、又は、抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ＦＭ８（配列番号４９）で形質導入した細胞について測定された、予測されるベクターＤＮＡの相対コピー数を示す棒グラフである。図６Ｃは、様々な濃度のＭＡＧＥ−Ａ３ １６８−１７６ペプチドとインキュベートされた標的細胞との共培養に反応した、抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ Ａ１０（配列番号４６）（丸）又は抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ １３−１８（配列番号４８）（四角）で形質導入した細胞が分泌したＩＦＮガンマの量を示す線グラフである。図６Ｄは、様々な腫瘍細胞株との共培養に反応した、抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ５０２（配列番号４７）（陰影のついた棒グラフ）又は抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ＦＭ８（配列番号４９）（市松模様の棒グラフ）で形質導入した細胞のＩＦＮ−γの分泌（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。これらのＴＣＲで形質導入したＴ細胞の反応を評価する３回の独立した実験のうち２回の代表的な結果が示されている。図６Ｅは、様々な濃度のＭＡＧＥ−Ａ１２:１７０−１７８ペプチドとインキュベートされた標的細胞との共培養に反応した、抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ５０２（配列番号４７）（丸）又は抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ＦＭ８（配列番号４９）（四角）で形質導入した細胞が分泌したＩＦＮガンマ量を示す線グラフである。図６Ｆは、様々な腫瘍細胞株との共培養に反応した、形質導入されていない細胞（コントロール）（縞模様の棒グラフ）、又は抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ５０２（配列番号４７）（陰影のついた棒グラフ）若しくは抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ＦＭ８（配列番号４９）（市松模様の棒グラフ）で形質導入した細胞のＩＦＮ−γの分泌（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。これらのＴＣＲで形質導入したＴ細胞の反応を評価する３回の独立した実験のうち２回の代表的な結果が示されている。 図７Ａは、様々な新鮮な無培養の腫瘍との共培養に反応した、形質導入されていない細胞（コントロール）（縞模様の棒グラフ）、又は抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ Ａ１０（配列番号４６）（陰影のついた棒グラフ）若しくは抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ １３−１８（市松模様の棒グラフ）で形質導入した細胞のＩＦＮ−γの分泌（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。これらのＴＣＲで形質導入したＴ細胞の反応を評価する３回の独立した実験のうち１回の代表的な結果が示されている。図７Ｂは、様々な新鮮な無培養の腫瘍との共培養に反応した、形質導入されていない細胞（コントロール）（縞模様の棒グラフ）、又は抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ５０２（配列番号４７）（陰影のついた棒グラフ）若しくは抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ＦＭ８（配列番号４９）（市松模様の棒グラフ）で形質導入した細胞のＩＦＮ−γの分泌（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。これらのＴＣＲで形質導入したＴ細胞の反応を評価する３回の独立した実験のうち１回の代表的な結果が示されている。 図８Ａは、ＨＬＡ−Ａ^＊０１に加えてＭＡＧＥ−Ａ３、Ａ１、Ａ２、Ａ４、Ａ６、Ａ９、Ａ１０若しくはＡ１２のいずれかをトランスフェクトした標的細胞と一晩共培養した、形質導入されていない細胞（コントロール）（縞模様の棒グラフ）、又は、抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ Ａ１０（配列番号４６）（陰影のついた棒グラフ）若しくは抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ １３−１８（市松模様の棒グラフ）で形質導入した細胞のＩＦＮ−γの分泌（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。図８Ｂは、ＨＬＡ−Ｃ^＊０７:０２に加えてＭＡＧＥ−Ａ３、Ａ１、Ａ２、Ａ４、Ａ６、Ａ９、Ａ１０若しくはＡ１２のいずれかをトランスフェクトした標的細胞と一晩共培養した、形質導入されていない細胞（コントロール）（縞模様の棒グラフ）、又は、抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ５０２（配列番号４７）（陰影のついた棒グラフ）若しくは抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ＦＭ８（配列番号４９）（市松模様の棒グラフ）で形質導入した細胞のＩＦＮ−γの分泌（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。図８Ｃは、ＨＬＡ−Ｃ^＊０７:０１に加えてＭＡＧＥ−Ａ３、Ａ１、Ａ２、Ａ４、Ａ６、Ａ９、Ａ１０若しくはＡ１２のいずれかをトランスフェクトした標的細胞と一晩共培養した、形質導入されていない細胞（コントロール）（縞模様の棒グラフ）、又は、抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ５０２（配列番号４７）（陰影のついた棒グラフ）若しくは抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ＦＭ８（配列番号４９）（市松模様の棒グラフ）で形質導入した細胞のＩＦＮ−γの分泌（ｐｇ／ｍｌ）を示す棒グラフである。 図９Ａ、９Ｂは、様々な腫瘍標的と共培養した、形質導入されていない（コントロール）ＣＤ８＋細胞（図９Ａ）若しくはＣＤ４＋細胞（図９Ｂ）（縞模様の棒グラフ）、又は、抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ Ａ１０（配列番号４６）（陰影のついた棒グラフ）若しくは抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ １３−１８（市松模様の棒グラフ）で形質導入した細胞のＩＦＮガンマの分泌を示す棒グラフである。２回の独立した実験のうち１回の代表的な結果が示されている。図９Ｃは、様々な腫瘍標的と共培養した、形質導入されていないＣＤ８＋細胞（コントロール）（縞模様の棒グラフ）、又は、抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ５０２（配列番号４７）（陰影のついた棒グラフ）若しくは抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ＦＭ８（配列番号４９）（市松模様の棒グラフ）で形質導入した細胞のＩＦＮガンマの分泌を示す棒グラフである。２回の独立した実験のうち１回の代表的な結果が示されている。

発明の詳細な説明
本発明の実施形態は、ａ）ＨＬＡ−Ａ１に関連してメラノーマ抗原ファミリーＡ（ＭＡＧＥ Ａ）−３（ＭＡＧＥ−３としても知られている）、又は、ｂ）ＨＬＡ−Ｃｗ７に関連してＭＡＧＥ−Ａ１２（ＭＡＧＥ−１２としても知られている）に対する抗原特異性を有するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を提供する。

ＭＡＧＥ−Ａ３及びＭＡＧＥ−Ａ１２は、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０及びＭＡＧＥ−Ａ１１をも含む、１２種類の相同タンパク質のＭＡＧＥ−Ａファミリーのメンバーである。ＭＡＧＥ−Ａタンパク質は、腫瘍細胞と、精巣及び胎盤の非ＭＨＣ発現胚細胞とにおいてのみ発現する癌・精巣抗原（ＣＴＡ）である。ＭＡＧＥ−Ａ タンパク質は、メラノーマ、乳癌、白血病、甲状腺癌、胃癌、膵臓癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌）、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、卵巣癌、多発性骨髄腫、食道癌、腎臓癌、頭部癌（例えば、扁平上皮細胞癌）、頸部癌（例えば、扁平上皮細胞癌）、前立腺癌、及び尿路上皮癌を含む、様々なヒト癌において発現するが、これらに限定されない。

本発明のＴＣＲは、養子細胞移入に使用するときを含め、多くの利点をもたらす。例えば、ａ）ＨＬＡ−Ａ１との関連で提示されるＭＡＧＥ−Ａ３、又は、ｂ）ＨＬＡ−Ｃｗ７との関連で提示されるＭＡＧＥ−Ａ１２を標的とすることによって、本発明のＴＣＲは、他のＨＬＡ分子（例えば、ＨＬＡ−Ａ２）との関連で提示されるＭＡＧＥ抗原を標的とするＴＣＲを使って治療することができない患者を治療することを可能にする。ＨＬＡ−Ａ１及びＨＬＡ−Ｃｗ７は、広く普及している対立遺伝子であるため、本発明のＴＣＲは、有利には、治療できる患者人口を大幅に増加させる。加えて、特定の理論に縛られることはないが、ＭＡＧＥ−Ａ３及び／又はＭＡＧＥ−Ａ１２は、複数のタイプの癌細胞で発現するため、本発明のＴＣＲは、有利には、複数のタイプの癌細胞を破壊し、従って、複数のタイプの癌を治療又は予防する能力をもたらすと考えられる。加えて、特定の理論に縛られることはないが、ＭＡＧＥ−Ａタンパク質は、腫瘍細胞と、精巣及び胎盤の非ＭＨＣ発現胚細胞とにおいてのみ発現する癌・精巣抗原であるため、本発明のＴＣＲは、有利には、癌細胞の破壊を標的とすると同時に、正常な、非癌性の細胞の破壊を最小にするか、又はなくすことによって、例えば、毒性を最小にするか、又はなくすことによってこれを減じると考えられる。

フレーズ「抗原特異性」は、本明細書において使用される場合、ＴＣＲが、ＭＡＧＥ−Ａ３又はＭＡＧＥ−Ａ１２に、高い親和性をもって、特異的に結合でき、かつこれらを免疫学的に認識できることを意味する。低濃度のＭＡＧＥ−Ａ３ペプチド又はＭＡＧＥ−Ａ１２ペプチドでそれぞれ（例えば、約０．０５ｎｇ／ｍｌ−約５ｎｇ／ｍｌ、０．０５ｎｇ／ｍｌ、０．１ｎｇ／ｍｌ、０．５ｎｇ／ｍｌ、１ｎｇ／ｍｌ、又は５ｎｇ／ｍｌ）パルスされた、抗原陰性のＨＬＡ−Ａ１＋標的細胞又はＨＬＡ−Ｃｗ７＋標的細胞とそれぞれ共培養したとき、ＴＣＲを発現するＴ細胞が、少なくとも約２００ｐｇ／ｍｌ以上（例えば、２００ｐｇ／ｍｌ以上、３００ｐｇ／ｍｌ以上、４００ｐｇ／ｍｌ以上、５００ｐｇ／ｍｌ以上、６００ｐｇ／ｍｌ以上、７００ｐｇ／ｍｌ以上、１０００ｐｇ／ｍｌ以上、５,０００ｐｇ／ｍｌ以上、７,０００ｐｇ／ｍｌ以上、１０,０００ｐｇ／ｍｌ以上）のＩＦＮ−γを分泌する場合、例えば、ＴＣＲは、ＭＡＧＥ−Ａ３又はＭＡＧＥ−Ａ１２ に対して「抗原特異性」を有するとみなされ得る。あるいは、又はこれに加えて、ＴＣＲを発現するＴ細胞が、低濃度のＭＡＧＥ−Ａ３ペプチド又はＭＡＧＥ−Ａ１２ペプチドでそれぞれパルスされた、抗原陰性のＨＬＡ−Ａ１＋標的細胞又はＨＬＡ−Ｃｗ７＋標的細胞とそれぞれ共培養したとき、ＴＣＲを発現するＴ細胞が、形質導入されていないＰＢＬのＩＦＮ−γバックグラウンドレベルの少なくとも２倍のＩＦＮ−γを分泌する場合、ＴＣＲは、ＭＡＧＥ−Ａ３又はＭＡＧＥ−Ａ１２に対して「抗原特異性」を有するとみなされ得る。本発明のＴＣＲはまた、より高濃度のＭＡＧＥ−Ａ３ペプチド又はＭＡＧＥ−Ａ１２ペプチドでそれぞれパルスされた抗原陰性のＨＬＡ−Ａ１＋標的細胞又はＨＬＡ−Ｃｗ７＋標的細胞と共培養したとき、ＩＦＮ−γを分泌し得る。

本発明の実施形態は、任意のＭＡＧＥ−Ａ３タンパク質、ポリペプチド又はペプチドに対する抗原特異性を有するＴＣＲを提供する。本発明のＴＣＲは、配列番号１を含むか、それからなるか、又は、実質的にそれからなるＭＡＧＥ−Ａ３タンパク質に対する抗原特異性を有し得る。本発明の好ましい実施形態においては、ＴＣＲは、ＥＶＤＰＩＧＨＬＹ（配列番号２）を含むか、それからなるか、又は、実質的にそれからなるＭＡＧＥ−Ａ３ １６８−１７６ペプチドに対する抗原特異性を有する。

本発明のＴＣＲは、ヒト白血球型抗原（ＨＬＡ）−Ａ１−に依存して、ＭＡＧＥ−Ａ３を認識することができる。「ＨＬＡ−Ａ１−に依存して」は、本明細書において使用される場合、ＴＣＲが、ＨＬＡ−Ａ１分子との関連の中で、ＭＡＧＥ−Ａ３癌抗原と結合したときに免疫反応を引き起こすことを意味する。本発明のＴＣＲは、ＨＬＡ−Ａ１分子によって提示されるＭＡＧＥ−Ａ３を認識することができ、ＭＡＧＥ−Ａ３に加えて、ＨＬＡ−Ａ１分子に結合し得る。例示的なＨＬＡ−Ａ１分子としては、ＨＬＡ−Ａ^＊０１０１、ＨＬＡ−Ａ^＊０１０２及び／又はＨＬＡ−Ａ^＊０１０３対立遺伝子によってコードされるものが挙げられ、この分子に関連して本発明のＴＣＲがＭＡＧＥ−Ａ３を認識する。

本発明の実施形態は、任意のＭＡＧＥ−Ａ１２タンパク質、ポリペプチド又はペプチドに対する抗原特異性を有するＴＣＲを提供する。本発明のＴＣＲは、配列番号３を含むか、それからなるか、又は実質的にそれからなるＭＡＧＥ−Ａ１２タンパク質に対する抗原特異性を有し得る。本発明の好ましい実施形態においては、ＴＣＲは、ＶＲＩＧＨＬＹＩＬ（配列番号４）を含むか、それからなるか、又は実質的にそれからなるＭＡＧＥ−Ａ１２ １７０−１７８ペプチドに対する抗原特異性を有する。

本発明のＴＣＲは、ＨＬＡ−Ｃｗ７に依存して、ＭＡＧＥ−Ａ１２を認識することができる。「ＨＬＡ−Ｃｗ７−に依存して」は、本明細書において使用される場合、ＴＣＲが、ＨＬＡ−Ｃｗ７分子との関連の中で、ＭＡＧＥ−Ａ１２癌抗原と結合したときに免疫反応を引き起こすことを意味する。本発明のＴＣＲは、ＨＬＡ−Ｃｗ７分子によって提示されるＭＡＧＥ−Ａ１２を認識することができ、ＭＡＧＥ−Ａ１２に加えて、ＨＬＡ−Ｃｗ７分子に結合し得る。例示的なＨＬＡ−Ｃｗ７分子としては、ＨＬＡ−Ｃｗ^＊０７０１及び／又はＨＬＡ−Ｃｗ^＊０７０２対立遺伝子によってコードされるものが挙げられ、この分子に関連して本発明のＴＣＲがＭＡＧＥ−Ａ１２を認識する。

本発明は、ＴＣＲのアルファ（α）鎖、ＴＣＲのベータ（β）鎖、ＴＣＲのガンマ（γ）鎖、ＴＣＲのデルタ（δ）鎖、又はそれらの組み合わせ等、２個のポリペプチド（すなわち、ポリペプチド鎖）を含むＴＣＲを提供する。そのようなＴＣＲのポリペプチド鎖は、当該技術分野において公知である。ＴＣＲが、ａ）ＨＬＡ−Ａ１との関連において、ＭＡＧＥ−Ａ３、又は、ｂ）ＨＬＡ−Ｃｗ７との関連において、ＭＡＧＥ−Ａ１２に対する抗原特異性を有するならば、本発明のＴＣＲのポリペプチドは、任意のアミノ酸配列を含み得る。

本発明の実施形態においては、ＴＣＲは、２個のポリペプチド鎖を含み、そのそれぞれは、ＴＣＲの相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３を含む可変領域を含む。本発明の実施形態においては、ＴＣＲは、ＭＡＧＥ−Ａ３ １６８−１７６に対する抗原特異性を有し、配列番号５又は１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（α鎖のＣＤＲ１）、配列番号６又は１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（α鎖のＣＤＲ２）、及び、配列番号７又は１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（α鎖のＣＤＲ３）を含む第一のポリペプチド鎖、ならびに、配列番号８又は１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（β鎖のＣＤＲ１）、配列番号９又は２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（β鎖のＣＤＲ２）、及び配列番号１０又は２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（β鎖のＣＤＲ３）を含む第二のポリペプチド鎖を含む。本発明の他の実施形態においては、ＴＣＲがＭＡＧＥ−Ａ１２ １７０−１７８に対する抗原特異性を有し、配列番号２６又は３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（α鎖のＣＤＲ１）、配列番号２７又は３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（α鎖のＣＤＲ２）、及び配列番号２８又は３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（α鎖のＣＤＲ３）を含む第一のポリペプチド鎖、ならびに、配列番号２９又は３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１（β鎖のＣＤＲ１）、配列番号３０又は４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ２（β鎖のＣＤＲ２）、及び配列番号３１又は４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ３（β鎖のＣＤＲ３）を含む第二のポリペプチド鎖を含む。これに関して、本発明のＴＣＲは、配列番号５〜７、８〜１０、１６〜１８、１９〜２１、２６〜２８、２９〜３１、３６〜３８、及び３９〜４１のうち、いずれか１つ以上からなる群から選択されるアミノ酸配列のいずれか１つ以上を含み得る。好ましくは、ＴＣＲは、配列番号５〜１０、１６〜２１、２６〜３１、又は３６〜４１のアミノ酸配列を含む。より好ましくは、ＴＣＲは、配列番号５〜１０又は２６〜３１のアミノ酸配列を含む。

あるいは、又はこれに加えて、ＴＣＲは、上述のＣＤＲを含むＴＣＲの可変領域のアミノ酸配列を含み得る。これに関して、ＭＡＧＥ−Ａ３ １６８−１７６に対する抗原特異性を有するＴＣＲは、配列番号１１若しくは２２（α鎖の可変領域）、又は１２若しくは２３（β鎖の可変領域）、配列番号１１及び１２の両方、又は配列番号２２及び２３の両方のアミノ酸配列を含み得る。本発明の他の実施形態においては、ＴＣＲは、ＭＡＧＥ−Ａ１２ １７０−１７８に対する抗原特異性を有し、配列番号３２若しくは４２（α鎖の可変領域）、又は３３若しくは４３（β鎖の可変領域）、配列番号３２及び３３の両方、又は配列番号４２及び４３の両方のアミノ酸配列を含む。好ましくは、本発明のＴＣＲは、配列番号１１及び１２の両方、又は配列番号３２及び３３の両方のアミノ酸配列を含む。

あるいは、又はこれに加えて、ＴＣＲは、ＴＣＲのα鎖及びＴＣＲのβ鎖を含み得る。本発明のＴＣＲのα鎖及びβ鎖のそれぞれは、任意のアミノ酸配列を独立して含み得る。好ましくは、α鎖は、上述のα鎖の可変領域を含む。これに関して、ＭＡＧＥ−Ａ３ １６８−１７６に対する抗原特異性を有する本発明のＴＣＲは、配列番号１３又は２４のアミノ酸配列を含み得、ＭＡＧＥ−Ａ１２ １７０−１７８に対する抗原特異性を有する本発明のＴＣＲは、配列番号３４又は４４のアミノ酸配列を含み得る。本発明のこのタイプのＴＣＲは、ＴＣＲの任意のβ鎖と対になり得る。好ましくは、本発明のＴＣＲのβ鎖は、上述のβ鎖の可変領域を含む。これに関して、ＭＡＧＥ−Ａ３ １６８−１７６に対する抗原特異性を有する本発明のＴＣＲは、配列番号１４又は２５のアミノ酸配列を含み得、ＭＡＧＥ−Ａ１２ １７０−１７８に対する抗原特異性を有する本発明のＴＣＲは、配列番号３５又は４５のアミノ酸配列を含み得る。従って、本発明のＴＣＲは、配列番号１３、１４、２４、２５、３４、３５、４４若しくは４５、配列番号１３及び１４の両方、配列番号２４及び２５の両方、配列番号３４及び３５の両方、又は配列番号４４及び４５の両方のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、本発明のＴＣＲは、配列番号１３及び１４の両方、又は配列番号３４及び３５の両方のアミノ酸配列を含む。

本明細書に記載されるいずれかのＴＣＲの機能部分を含むポリペプチドが、本発明によってさらに提供される。用語「ポリペプチド」は、本明細書において使用される場合、オリゴペプチドを含み、１つ以上のペプチド結合によって接続されるアミノ酸の一本鎖のことをいう。

本発明のポリペプチドについて、機能部分が、ＭＡＧＥ−Ａ３又はＭＡＧＥ−Ａ１２と特異的に結合するならば、機能部分は、それが一部をなすＴＣＲの連続アミノ酸を含む任意の部分であり得る。「機能部分」という用語は、ＴＣＲに関して使用する場合、本発明のＴＣＲの任意の部分又は断片のことであり、かかる部分又は断片は、それが一部をなすＴＣＲ（親ＴＣＲ）の生物活性を保持する。機能部分は、例えば、（例、ＨＬＡ−Ａ１に依存して）ＭＡＧＥ−Ａ２に、若しくは（例、ＨＬＡ−Ｃｗ７に依存して）ＭＡＧＥ−Ａ１２に特異的に結合する能力、又は、親ＴＣＲと近い程度で、同程度で、又はそれよりも高い程度で、癌を検出、治療又は予防する能力を保持するＴＣＲの部分を含有する。親ＴＣＲに関して、機能部分は、例えば、親ＴＣＲの約１０％、２５％、３０％、５０％、６８％、８０％、９０％、９５％又はそれより多くを含み得る。

機能部分は、その部分のアミノ末端若しくはカルボキシ末端において、又は両方の末端において、追加のアミノ酸を含むことができ、かかる追加のアミノ酸は、親ＴＣＲのアミノ酸配列には見受けられない。望ましくは、追加のアミノ酸は、機能部分の生物的機能（例えば、ＭＡＧＥ−Ａ３若しくはＭＡＧＥ−Ａ１２に特異的に結合すること；及び／又は癌を検出し、癌を治療又は予防する等の能力を有すること）を妨害しない。より望ましくは、追加のアミノ酸は、親ＴＣＲの生物活性と比較して、生物活性を高める。

ポリペプチドは、本発明のＴＣＲのα鎖及び／又はβ鎖の可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３のうち１つ以上を含む機能部分等、本発明のＴＣＲのα鎖及びβ鎖のいずれか又は両方の機能部分を含み得る。これに関して、ポリペプチドは、配列番号５、１６、２６若しくは３６（α鎖のＣＤＲ１ ）、６、１７、２７若しくは３７（α鎖のＣＤＲ２）、７、１８、２８若しくは３８（α鎖のＣＤＲ３）、８、１９、２９若しくは３９（β鎖のＣＤＲ１）、９、２０、３０若しくは４０（β鎖のＣＤＲ２）、１０、２１、３１若しくは４１（β鎖のＣＤＲ３）、又は、それらの組み合わせのアミノ酸配列を含む機能部分を含み得る。好ましくは、本発明のポリペプチドは、配列番号５〜７；８〜１０；１６〜１８；１９〜２１；２６〜２８；２９〜３１；３６〜３８；３９〜４１；配列番号５〜１０のすべて；配列番号１６〜２１のすべて；配列番号２６〜３１のすべて；又は配列番号３６〜４１のすべてを含む機能部分を含む。より好ましくは、ポリペプチドは、配列番号５〜１０のすべて、又は配列番号２６〜３１のすべてのアミノ酸配列を含む機能部分を含む。

あるいは、又はこれに加えて、本発明のポリペプチドは、例えば、上述のＣＤＲ領域の組み合わせを含む本発明のＴＣＲの可変領域を含み得る。これに関して、ポリペプチドは、配列番号１１、２２、３２若しくは４２（α鎖の可変領域）、配列番号１２、２３、３３若しくは４３（β鎖の可変領域）、配列番号１１及び１２の両方、配列番号２２及び２３の両方、配列番号３２及び３３の両方、又は、配列番号４２及び４３の両方のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、ポリペプチドは、配列番号１１及び１２の両方、又は配列番号３２及び３３の両方のアミノ酸配列を含む。

あるいは、又はこれに加えて、本発明のポリペプチドは、本明細書に記載されるＴＣＲのうち１つのα鎖又はβ鎖の全長を含み得る。これに関して、本発明のポリペプチドは、配列番号１３、１４、２４、２５、３４、３５、４４、又は４５のアミノ酸配列を含み得る。あるいは、本発明のポリペプチドは、本明細書に記載されるＴＣＲのα鎖及びβ鎖を含み得る。例えば、本発明のポリペプチドは、配列番号１３及び１４の両方；配列番号２４及び２５の両方；配列番号３４及び３５の両方；又は配列番号４４及び４５の両方のアミノ酸配列を含み得る。好ましくは、ポリペプチドは、配列番号１３及び１４の両方、又は配列番号３４及び３５の両方のアミノ酸配列を含む。

本発明は、本明細書に記載されるポリペプチドの少なくとも１つを含むタンパク質をさらに提供する。「タンパク質」は、１つ以上のポリペプチド鎖を含む分子を意味する。

実施形態においては、本発明のタンパク質は、配列番号５〜７；配列番号１６〜１８；配列番号２６〜２８；又は配列番号３６〜３８のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド鎖、及び配列番号８〜１０；配列番号１９〜２１；配列番号２９〜３１;又は配列番号３９〜４１のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチド鎖を含み得る。あるいは、又はこれに加えて、本発明のタンパク質は、配列番号１１、２２、３２又は４２のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド鎖、及び配列番号１２、２３、３３又は４３のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチド鎖を含み得る。本発明のタンパク質は、例えば、配列番号１３、２４、３４又は４４のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド鎖、及び配列番号１４、２５、３５又は４５のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチド鎖を含み得る。この例において、本発明のタンパク質は、ＴＣＲとすることができる。あるいは、例えば、タンパク質が、配列番号１３、２４、３４若しくは４４、及び配列番号１４、２５、３５若しくは４５を含む単一のポリペプチド鎖を含む場合、又はタンパク質の第一の及び／若しくは第二のポリペプチド鎖が、他のアミノ酸配列（例えば、免疫グロブリン又はその部分をコードするアミノ酸配列）をさらに含む場合は、本発明のタンパク質は、融合タンパク質とすることができる。これに関して、本発明はまた、少なくとも１つの他のポリペプチドとともに、本明細書に記載される本発明のポリペプチドの少なくとも１つを含む融合タンパク質を提供する。他のポリペプチドは、融合タンパク質の離れたポリペプチドとして存在し得、又は、本明細書に記載される本発明のポリペプチドの１つとインフレーム（タンデム）に発現するポリペプチドとして存在し得る。他のポリペプチドは、免疫グロブリン、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＭＨＣ分子、ＣＤ１分子（例えば、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ、等）を含む、任意のペプチド性若しくはタンパク性の分子、又はその部分をコードできるが、これらに限定されない。

融合タンパク質は、本発明のポリペプチドの１つ以上のコピー、及び／又は他のポリペプチドの１つ以上のコピーを含み得る。例えば、融合タンパク質は、本発明のポリペプチド及び／又は他のポリペプチドのコピーを１、２、３、４、５個又はより多くを含み得る。融合タンパク質をつくる好適な方法は、当該技術分野において公知であり、例えば、組換え法が挙げられる。例えば、Choi et al., Mol. Biotechnol. 31:193-202（2005）参照。

本発明のいくつかの実施形態において、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質は、α鎖とβ鎖とを連結するリンカーペプチドを含む単一タンパク質として発現し得る。これに関して、配列番号１３、２４、３４又は４４、及び配列番号１４、２５、３５又は４５を含む本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質は、配列番号１５又は５４を含むリンカーペプチドをさらに含み得る。リンカーペプチドは、有利には、宿主細胞における組換えＴＣＲ、ポリペプチド、及び／又はタンパク質の発現を促進し得る。宿主細胞が、リンカーペプチドを含むコンストラクトを発現すると、リンカーペプチドが開裂し、α鎖及びβ鎖の分離を生じ得る。

本発明のタンパク質は、本明細書に記載される本発明のポリペプチドのうち少なくとも１つを含む組換え抗体とすることができる。「組換え抗体」は、本明細書において使用される場合、本発明のポリペプチドのうち少なくとも１つ、及び抗体のポリペプチド鎖、又はその部分を含む組換え（例えば、遺伝子組換え）タンパク質のことをいう。抗体のポリペプチド、又はその部分は、重鎖、軽鎖、重鎖若しくは軽鎖の可変領域若しくは定常領域、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、又は抗体のＦｃ、Ｆａｂ若しくはＦ（ａｂ）_２’断片等であり得る。抗体のポリペプチド鎖、又はその部分は、組換え抗体の分離したポリペプチドとして存在し得る。あるいは、抗体のポリペプチド鎖、又はその部分は、本発明のポリペプチドとインフレーム（タンデム）に発現するポリペプチドとして存在し得る。抗体のポリペプチド、又はその部分は、本明細書に記載される抗体及び抗体断片のいずれかを含む、任意の抗体又は任意の抗体断片のポリペプチドとすることができる。

本発明の範囲には、本明細書に記載される本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質の機能的変異体が含まれる。用語「機能的変異体」は、本明細書において使用する場合、親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質に対して、実質的又は顕著な配列同一性又は類似性を有するＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質をいい、かかる機能的変異体は、それが変異体をなすＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質の生物活性を保持する。機能的変異体は、例えば、ＭＡＧＥ−Ａ３又はＭＡＧＥ−Ａ１２に特異的に結合する能力を保持する、本明細書に記載されるＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質（親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質）の変異体を包含する。かかるＭＡＧＥ−Ａ３若しくはＭＡＧＥ−Ａ１２に対して、親ＴＣＲが抗原特異性を有するか、又は、親ポリペプチド若しくはタンパク質が、親ＴＣＲ、ポリペプチド若しくはタンパク質と近い程度で、同程度で、又はより高い程度で、特異的に結合するものである。親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質に関しては、機能的変異体は、例えば、少なくとも約３０％、５０％、７５％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又はそれを上回って、親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質と、アミノ酸配列が同一であり得る。

機能的変異体は、例えば、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。保存的アミノ酸置換は、当該技術分野において公知であり、一定の物理的及び／又は化学的特性を有する１つのアミノ酸が、同じ化学的又は物理的特性を有する他のアミノ酸と交換されるようなアミノ酸置換を含む。例えば、保存的アミノ酸置換は、他の酸性アミノ酸（例えば、Ａｓｐ又はＧｌｕ）と置換された酸性アミノ酸、非極性側鎖を有する他のアミノ酸（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｖａｌ等）と置換された非極性側鎖を有するアミノ酸、他の塩基性アミノ酸（Ｌｙｓ、Ａｒｇ等）と置換された塩基性アミノ酸、極性側鎖を有する他のアミノ酸（Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒ等）と置換された極性側鎖を有するアミノ酸等とすることができる。

あるいは、又はこれに加えて、機能的変異体は、少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換を有する親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。この場合、非保存的アミノ酸置換が、機能的変異体の生物活性を妨害も阻害もしないことが好ましい。好ましくは、非保存的アミノ酸置換が、機能的変異体の生物活性を増強し、その結果、機能的変異体の生物活性が、親ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質に比して、増強する。

ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質は、実質的に、特定のアミノ酸配列又は本明細書に記載される配列から成り得、その結果、機能的変異体の他の構成要素（例えば、他のアミノ酸）が、機能的変異体の生物活性を実質的に変化させない。これに関して、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質は、例えば、実質的に、配列番号１３、１４、２４、２５、３４、３５、４４若しくは４５、配列番号１３及び１４の両方、配列番号２４及び２５の両方、配列番号３４及び３５の両方、又は、配列番号４４及び４５の両方のアミノ酸配列からなり得る。また、例えば、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質は、実質的に、配列番号１１、１２、２２、２３、３２、３３、４２若しくは４３、配列番号１１及び１２の両方、配列番号２２及び２３の両方、配列番号３２及び３３の両方、又は、配列番号４２及び４３の両方のアミノ酸配列からなり得る。さらに、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質は、実質的に、配列番号５、１６、２６若しくは３６（α鎖のＣＤＲ１）、配列番号６、１７、２７若しくは３７（α鎖のＣＤＲ２）、配列番号７、１８、２８若しくは３８（α鎖のＣＤＲ３）、配列番号８、１９、２９若しくは３９（β鎖のＣＤＲ１）、配列番号９、２０、３０若しくは４０（β鎖のＣＤＲ２）、配列番号１０、２１、３１若しくは４１（β鎖のＣＤＲ３）のアミノ酸配列、又は、それらの任意の組み合わせ（例えば、配列番号５〜７；８〜１０；５〜１０；１６〜１８；１９〜２１；１６〜２１；２６〜２８；２９〜３１；２６〜３１；３６〜３８；３９〜４１；又は３６〜４１）からなり得る。

ＴＣＲ、ポリペプチドあるいはタンパク質（またはその機能部分若しくは機能的変異体）が、それらの生物活性（例えば、ＭＡＧＥ−Ａ３若しくはＭＡＧＥ−Ａ１２に特異的に結合する能力；宿主中の癌を検出する能力；又は、宿主中の癌を治療若しくは予防する能力等）を保持する限り、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質（機能部分及び機能的変異体を含む）は、任意の長さとすることができ、すなわち、アミノ酸を何個でも含み得る。例えば、ポリペプチドは、約５０〜約５０００アミノ酸長（例えば、５０、７０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、１０００又はそれを上回るアミノ酸長）の範囲内であり得る。これに関して、本発明のポリペプチドはまた、オリゴペプチドを含む。

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質（機能部分及び機能的変異体を含む）は、１つ以上の天然に存在するアミノ酸の代わりに合成アミノ酸を含み得る。そのような合成アミノ酸は、当該技術分野において公知であり、例えば、アミノシクロヘキサンカルボン酸、ノルロイシン、α−アミノｎ−デカン酸、ホモセリン、Ｓ−アセチルアミノメチル−システイン、トランス−３−及びトランス−４−ヒドロキシプロリン、４−アミノフェニルアラニン、４−ニトロフェニルアラニン、４−クロロフェニルアラニン、４−カルボキシフェニルアラニン、β−フェニルセリン β−ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、α−ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルグリシン、インドリン−２−カルボン酸、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド、Ｎ’−ベンジル−Ｎ’−メチル−リジン、Ｎ’，Ｎ’−ジベンジル−リジン、６−ヒドロキシリジン、オルニチン、α−アミノシクロペンタンカルボン酸、α−アミノシクロヘキサンカルボン酸、α−アミノシクロヘプタンカルボン酸、α−（２−アミノ−２−ノルボルナン）−カルボン酸、α，γ−ジアミノ酪酸、α，γ−ジアミノプロピオン酸、ホモフェニルアラニン、及びα−ｔｅｒｔ−ブチルグリシンを含む。

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質（機能部分及び機能的変異体を含む）は、グリコシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、Ｎ−アシル化、（例えば、ジスルフィド架橋を介して）環化した、若しくは、酸付加塩に変換されていてよく、かつ／又は、任意で、二量体化若しくは重合されているか、又はコンジュゲート化していてよい。

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質（機能部分及び機能的変異体を含む）が塩の形態をとる場合、好ましくは、ポリペプチドは、医薬的に許容される塩の形態をとる。好適な医薬的に許容される酸付加塩は、鉱酸（塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸、硫酸等）、有機酸（酒石酸、酢酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、安息香酸、グリコール酸、グルコン酸、コハク酸、例えば、ｐ−トルエンスルホン酸などのアリールスルホン酸）由来のものを含む。

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及び／又はタンパク質（その機能部分及び機能的変異体を含む）は、当該技術分野において公知の方法によって得ることができる。ポリペプチド及びタンパク質をｄｅ ｎｏｖｏ合成する好適な方法は、Chan et al., Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis, Oxford University Press, Oxford, United Kingdom, 2005；Peptide and Protein Drug Analysis, ed. Reid, R., Marcel Dekker, Inc., 2000；Epitope Mapping, ed. Westwood et al., Oxford University Press, Oxford, United Kingdom, 2000；及び米国特許番号第５，４４９，７５２等の参考文献に記載されている。また、ポリペプチド及びタンパク質は、標準的な組換え方法を使って、本明細書に記載される核酸を使って組換えで産生できる。例えば、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3^rded., Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY 2001; 及びAusubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, NY, 1994参照。さらに、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質（その機能部分及び機能的変異体を含む）のいくつかは、植物、バクテリア、昆虫、哺乳類（例、ラット、ヒト等）等の供給源から、単離及び／又は精製できる。単離及び精製の方法は、当該技術分野において周知である。あるいは、本明細書に記載されるＴＣＲ、ポリペプチド及び／又はタンパク質（その機能部分及び機能的変異体を含む）は、シンペップ社（ＣＡ州、ダブリン）、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏｒｐ社（ＭＤ州、ゲイザースバーグ）及びＭｕｌｔｉｐｌｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ社（ＣＡ州、サンディエゴ）等の企業が商業的に合成できるものである。この点において、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド及びタンパク質は、合成、組換え、単離及び／又は精製されたものであり得る。

本発明の範囲には、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質（その機能部分若しくは変異体のいずれかを含む）、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、宿主細胞集団、又は抗体若しくはその抗原結合部分のいずれかを含むコンジュゲート（例えば、バイオコンジュゲート）が含まれる。コンジュゲートと、一般的にコンジュゲートを合成する方法とは、当該技術分野において公知である（例えば、Hudecz, F., Methods Mol. Biol. 298:209−223 (2005)、及び、Kirin et al., Inorg Chem. 44 (15): 5405-5415（2005）参照）。

「核酸」は、本明細書において使用される場合、「ポリヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」及び「核酸分子」を含み、概してＤＮＡ又はＲＮＡのポリマーを意味し、これは、一本鎖又は二本鎖であり得、合成されていても天然供給源から得られた（例、単離及び／又は精製された）ものであってもよく、天然、非天然若しくは改変されたヌクレオチドを含み得、未修飾のオリゴヌクレオチドのヌクレオチド間に見受けられるホスホジエステルの代わりに、天然、非天然若しくは改変されたヌクレオチド間結合（ホスホロアミド結合又はホスホロチオエート結合等）を含み得る。核酸が、挿入、欠失、逆位及び／又は置換をいずれも含まないことが、概して好ましい。しかしながら、本明細書で検討される通り、核酸が、挿入、欠失、逆位及び／又は置換を１つ以上含むことが好適である場合もあり得る。

好ましくは、本発明の核酸は、組換え体であり得る。用語「組換え体」は、本明細書で使用する場合、（ｉ）天然又は合成の核酸セグメントを、生細胞中で複製できる核酸分子に連結することによって、生細胞外で構築された分子、又は（ｉｉ）上記（ｉ）に記載した分子の複製から生じる分子をいう。本明細書における目的のために、複製は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ複製又はｉｎ ｖｉｖｏ複製であり得る。

核酸は、当該技術分野においてに公知の手順を使用して、化学合成及び／又は酵素的ライゲーション反応に基づいて構築され得る。例えば、（上記）Sambrook et al.,及び（上記）Ausubel et al.,を参照。例えば、核酸は、天然に存在するヌクレオチド、又は、分子の生物学的安定性を増加させるように、又はハイブリダイゼーションの際に形成される二重鎖の物理的安定性を増加させるように設計された多様な修飾ヌクレオチド（例えば、ホスホロチオエート誘導体及びアクリジン置換ヌクレオチド）を使用して、化学的に合成され得る。核酸を生成するために使用され得る修飾ヌクレオチドの例としては、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−クロロウラシル、５−ヨードウラシル、ヒポキサンチン、キサンチン、４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル、５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル、ジヒドロウラシル、β−Ｄ−ガラクトシルキューオシン（β−Ｄ−ｇａｌａｃｔｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、イノシン、Ｎ^６−イソペンテニルアデニン、１−メチルグアニン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアニン、２−メチルアデニン、２−メチルグアニン、３−メチルシトシン、５−メチルシトシン、Ｎ^６−置換アデニン、７−メチルグアニン、５−メチルアミノメチルウラシル、５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル、β−Ｄ−マンノシルキューオシン（β−Ｄ−ｍａｎｎｏｓｙｌｑｕｅｏｓｉｎｅ）、５’−メトキシカルボキシメチルウラシル、５−メトキシウラシル、２−メチルチオ−Ｎ^６−イソペンテニルアデニン、ウラシル−５−オキシ酢酸（ｖ）、ワイブトキソシン（ｗｙｂｕｔｏｘｏｓｉｎｅ）、シュードウラシル（ｐｓｅｕｄｏｕｒａｃｉｌ）、キューオシン（ｑｕｅｏｓｉｎｅ）、２−チオシトシン、５−メチル−２−チオウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−メチルウラシル、ウラシル−５−オキシ酢酸メチルエステル、３−（３−アミノ−３−Ｎ−２−カルボキシプロピル）ウラシル及び２，６−ジアミノプリンが挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、本発明の核酸の１つ以上が、Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ社（ＣＯ州、フォートコリンズ）及びＳｙｎｔｈｅｇｅｎ社（ＴＸ州、ヒューストン）等の企業から購入できる。

核酸は、本明細書に記載されるＴＣＲ、ポリペプチド若しくはタンパク質、又はその機能部分若しくは機能的変異体のいずれかをコードする、任意のヌクレオチド配列を含み得る。例えば、核酸は、配列番号４６〜４９のヌクレオチド配列のうちいずれか１つ以上を含み得るか、これから成り得るか、又は実質的にこれからなり得る。

本発明はまた、本明細書中に記載される核酸のいずれかのヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列、又は本明細書中に記載される核酸のいずれかのヌクレオチド配列に対し、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む、核酸を提供する。

ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列は、好ましくは、高ストリンジェンシー条件下でハイブリダイズする。「高ストリンジェンシー条件」とは、ヌクレオチド配列が、非特異的ハイブリダイゼーションよりも検出可能に強い量で標的配列（本明細書中に記載される核酸のいずれかのヌクレオチド配列）に特異的にハイブリダイズすることを意味する。高ストリンジェンシー条件には、正確に相補的な配列を有するポリヌクレオチド、又は数個の散らばったミスマッチのみを含むポリヌクレオチドを、ヌクレオチド配列にマッチした数塩基の小領域（例えば３〜１０塩基）を偶然有するランダム配列から識別する条件が含まれる。かかる相補的な小領域は、１４〜１７又はそれより多い塩基の全長相補体よりも容易に融解され、高ストリンジェンシーのハイブリダイゼーションにより、それらを容易に識別できる。比較的高ストリンジェンシーの条件には、例えば、低塩及び／又は高温条件（例えば、約０．０２〜０．１ＭのＮａＣｌ又は等価物によって、約５０〜７０℃の温度で提供される）が含まれる。かかる高ストリンジェンシー条件は、許容したとしても、ヌクレオチド配列とテンプレート鎖若しくは標的鎖との間のミスマッチをほとんど許容せず、本発明のＴＣＲのいずれかの発現を検出するのに特に好適である。条件は、漸増量のホルムアミドの添加によって、よりストリンジェントになり得ることが概して理解される。

本発明はまた、本明細書に記載される核酸のいずれかと、少なくとも約７０％以上（例えば、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％又は約９９％）同一であるヌクレオチド配列を含む核酸を提供する。

本発明の核酸は、組換え発現ベクターに組み込むことができる。これに関して、本発明は、本発明の核酸のいずれかを含む組換え発現ベクターを提供する。本明細書における目的のために、「組換え発現ベクター」という用語は、宿主細胞によるｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドの発現を可能にする遺伝子改変オリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドコンストラクトを意味し、ここで、コンストラクトは、ｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドをコードするヌクレオチド配列を含み、ベクターは、細胞内でｍＲＮＡ、タンパク質、ポリペプチド又はペプチドを発現させるのに十分な条件下で細胞と接触させられる。本発明のベクターは、全体としては天然に存在するものではない。しかし、ベクターの一部は天然に存在するものであり得る。本発明の組換え発現ベクターは、ＤＮＡ及びＲＮＡ（一本鎖又は二本鎖であり得、合成されても一部を天然供給源から得てもよく、天然、非天然若しくは改変されたヌクレオチドを含み得る）が含まれるがそれらに限定されない任意の型のヌクレオチドを含み得る。組換え発現ベクターは、天然に存在するヌクレオチド間結合若しくは天然に存在しないヌクレオチド間結合、又は両方の型の結合を含み得る。好ましくは、天然に存在しない又は改変されたヌクレオチド又はヌクレオチド間結合は、ベクターの転写や複製を妨害しない。

本発明の組換え発現ベクターは、任意の好適な組換え発現ベクターとすることができ、任意の好適な宿主を形質転換又はトランスフェクトするために使用できる。好適なベクターは、プラスミド及びウイルス等の繁殖及び増殖のため、若しくは発現のため、又は両方のために設計されたベクターを含む。ベクターは、ｐＵＣシリーズ（Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社）、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔシリーズ（ストラタジーン社、ＣＡ州、ラホヤ）、ｐＥＴシリーズ（ノバジェン社、ＷＩ州、マディソン）、ｐＧＥＸシリーズ（ファルマシア・バイオテック社、スウェーデン、ウプサラ）、及びｐＥＸシリーズ（クロンテック社、ＣＡ州、パロアルト）からなる群から選択できる。λＧＴ１０、λＧＴ１１、λＺａｐＩＩ（ストラタジーン社）、λＥＭＢＬ４及びλＮＭ１１４９等のバクテリオファージベクターを使用することもできる。植物発現ベクターの例として、ｐＢＩ０１、ｐＢＩ１０１．２、ｐＢＩ１０１．３、ｐＢＩ１２１及びｐＢＩＮ１９（クロンテック社）が挙げられる。動物発現ベクターの例として、ｐＥＵＫ−Ｃl、ｐＭＡＭ及びｐＭＡＭｎｅｏ（クロンテック社）が挙げられる。好ましくは、組換え発現ベクターは、ウイルスベクター（例えば、レトロウイルスベクター）である。

本発明の組換え発現ベクターは、例えば、（上記）Sambrook et al.,及び（上記）Ａusubel et al.,に記載されている標準的な組換えＤＮＡ技術を使って調製できる。環状又は線状の発現ベクターのコンストラクトは、原核又は真核の宿主細胞において機能する複製系を含むべく調製できる。複製系は、例えば、ＣｏｌＥｌ、２μプラスミド、λ、ＳＶ４０、ウシ乳頭腫ウイルスなどを由来とすることができる。

望ましくは、組換え発現ベクターは、適宜、ベクターがＤＮＡベースであるかＲＮＡベースであるかを考慮して、ベクターが導入される宿主のタイプ（例えば、バクテリア、真菌、植物、又は動物）に特異的な、転写、ならびに翻訳開始及び終了コドン等の調節配列を含む。

組換え発現ベクターは、形質転換又はトランスフェクトされた宿主の選択を可能にする、１以上のマーカー遺伝子を含み得る。マーカー遺伝子は、殺生物剤耐性（例えば、抗生物質、重金属などに対する耐性）、原栄養性を提供するための栄養要求性宿主における補完などを含む。本発明の発現ベクターに好適なマーカー遺伝子には、例えば、ネオマイシン／Ｇ４１８耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、ヒスチジノール耐性遺伝子、テトラサイクリン耐性遺伝子及びアンピシリン耐性遺伝子が含まれる。

組換え発現ベクターは、ＴＣＲ、ポリペプチド若しくはタンパク質（その機能部分及び機能的変異体を含む）をコードするヌクレオチド配列に、又は、ＴＣＲ、ポリペプチド、又はタンパク質をコードするヌクレオチド配列に相補的であるか、又はハイブリダイズするヌクレオチド配列に作動可能に結合したネイティブな、又は非ネイティブなプロモーターを含み得る。プロモーターの選択（例、強力なプロモーター、弱いプロモーター、誘導プロモーター、組織特異的プロモーター、発生特異的（developmental-specific）プロモーター）は、当業者の通常のスキルの範囲内である。同様に、ヌクレオチド配列をプロモーターと組み合わせることもまた、当業者の通常のスキルの範囲内である。プロモーターは、非ウイルスプロモーター、又はウイルスプロモーター（例えば、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ＳＶ４０プロモーター、ＲＳＶプロモーター、及びマウス幹細胞ウイルス末端の長い反復において見受けられるプロモーター）とすることができる。

本発明の組換え発現ベクターは、一過性の発現のため、安定した発現のため、又はその両方のために設計され得る。また、組換え発現ベクターは、構成的発現のため、又は誘導性発現のために作製され得る。さらに、組換え発現ベクターは、自殺遺伝子を含むべく作製することができる。

「自殺遺伝子」という用語は、本明細書中で使用する場合、自殺遺伝子を発現する細胞を死に至らしめる遺伝子をいう。自殺遺伝子は、その遺伝子が発現される細胞に対し物質（例えば薬物）に対する感受性を付与し、細胞がその物質と接触したとき又はその物質に曝露されたときに細胞を死に至らしめる遺伝子であり得る。自殺遺伝子は、当該技術分野において公知であり（例えば、Suicide Gene Therapy：Methods and Reviews, Springer, Caroline J. (Cancer Research UK Centre for Cancer Therapeutics at the Institute of Cancer Research, Sutton, Surrey, UK), Humana Press, 2004参照）、例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）チミジンキナーゼ（ＴＫ）遺伝子、シトシンデアミナーゼ、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ及びニトロレダクターゼを含む。

本発明の他の実施形態は、本明細書に記載される組換え発現ベクターのいずれかを含む宿主細胞をさらに提供する。「宿主細胞」という用語は、本明細書中で使用する場合、本発明の組換え発現ベクターを含み得る任意の型の細胞をいう。宿主細胞は、真核細胞（例えば、植物、動物、真菌又は藻類）であり得、又は、原核細胞（例えば、バクテリア若しくは原生動物）であり得る。宿主細胞は、培養細胞、又は、初代細胞、即ち、生物（例えば、ヒト）から直接単離された細胞であり得る。宿主細胞は、接着細胞、又は、浮遊細胞、即ち、懸濁物中で増殖する細胞であり得る。好適な宿主細胞は、当該技術分野において公知であり、例えば、ＤＨ５αＥ．ｃｏｌｉ細胞、チャイニーズハムスター卵巣細胞、サルＶＥＲＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＨＥＫ２９３細胞などが含まれる。組換え発現ベクターを増幅又は複製する目的のためには、宿主細胞は、好ましくは、原核細胞（例えば、ＤＨ５細胞）である。組換えＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質を産生する目的のためには、宿主細胞は、好ましくは、哺乳類細胞である。最も好ましくは、宿主細胞はヒト細胞である。宿主細胞は任意の型の細胞であり得、任意の型の組織由来であり得、任意の発生段階のものであり得るが、宿主細胞は、好ましくは、末梢血リンパ球（ＰＢＬ）又は末梢血単核球（ＰＢＭＣ）である。より好ましくは、宿主細胞は、Ｔ細胞である。

本明細書中の目的のために、Ｔ細胞は、任意のＴ細胞（培養Ｔ細胞（例、初代Ｔ細胞）、若しくは培養Ｔ細胞株（例、Ｊｕｒｋａｔ、ＳｕｐＴ１など）由来のＴ細胞、又は哺乳動物から得られたＴ細胞等）であり得る。哺乳動物から得られる場合、Ｔ細胞は、多数の供給源（血液、骨髄、リンパ節、胸腺又は他の組織若しくは体液が含まれるが、これらに限定されない）から得ることができる。Ｔ細胞はまた、富化又は精製され得る。好ましくは、Ｔ細胞はヒトＴ細胞である。より好ましくは、Ｔ細胞は、ヒトから単離されたＴ細胞である。Ｔ細胞は、任意の型のＴ細胞であり得、任意の発生段階のものであり得る（ＣＤ４^＋／ＣＤ８^＋二重ポジティブＴ細胞、ＣＤ４^＋ヘルパーＴ細胞（例えば、Ｔｈ_１及びＴｈ_２細胞）、ＣＤ８^＋Ｔ細胞（例えば、細胞傷害性Ｔ細胞）、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、メモリーＴ細胞（例えば、セントラルメモリーＴ細胞及びエフェクターメモリーＴ細胞）、ナイーブＴ細胞などが含まれるが、これらに限定されない）。好ましくは、Ｔ細胞は、ＣＤ８^＋Ｔ細胞又はＣＤ４^＋Ｔ細胞である。

本発明はまた、本明細書中に記載される少なくとも１つの宿主細胞を含む細胞集団も提供する。細胞集団は、少なくとも１つの他の細胞（例えば、組換え発現ベクターをいずれも含まない宿主細胞（例えばＴ細胞）又はＴ細胞以外の細胞（例えば、Ｂ細胞、マクロファージ、好中球、赤血球、肝細胞、内皮細胞、上皮細胞、筋細胞、脳細胞など））に加えて、記載される組換え発現ベクターのいずれかを含む宿主細胞を含む、不均質な集団であり得る。或いは、細胞集団は、実質的に均質な集団であり得、かかる集団は、組換え発現ベクターを含む宿主細胞を主に含む（例えば、組換え発現ベクターを含む宿主細胞から本質的になる）。集団は細胞のクローン集団でもあり得、かかる集団の全ての細胞は、組換え発現ベクターを含む単一の宿主細胞のクローンであり、その結果、集団の全ての細胞が組換え発現ベクターを含む。本発明の一実施形態において、細胞集団は、本明細書中に記載される組換え発現ベクターを含む宿主細胞を含むクローン集団である。

本発明は、本明細書に記載されるＴＣＲのいずれかの機能部分に特異的に結合する、抗体又はその抗原結合部分をさらに提供する。好ましくは、機能部分は、癌抗原に特異的に結合し、例えば、機能部分は、配列番号５、１６、２６若しくは３６（α鎖のＣＤＲ１）、６、１７、２７若しくは３７（α鎖のＣＤＲ２）、７、１８、２８若しくは３８（α鎖のＣＤＲ３）、８、１９、２９若しくは３９（β鎖のＣＤＲ１）、９、２０、３０若しくは４０（β鎖のＣＤＲ２）、１０、２１、３１若しくは４１（β鎖のＣＤＲ３）、配列番号１１、２２、３２若しくは４２（α鎖の可変領域）、配列番号１２、２３、３３若しくは４３（β鎖の可変領域）のアミノ酸配列、又はそれらの組み合わせ（例えば、５〜７；８〜１０；５〜１０；１６〜１８、１９〜２１；１６〜２１；２６〜２８；２９〜３１；２６〜３１；３６〜３８；３９〜４１；若しくは３６〜４１）を含む。より好ましくは、機能部分は、配列番号５〜１０又は配列番号２６〜３１のアミノ酸配列を含む。好ましい実施形態において、抗体、又はその抗原結合部分が、全部で６個のＣＤＲ（アルファ鎖のＣＤＲ１〜３、及びベータ鎖のＣＤＲ１〜３）で形成されるエピトープに結合する。抗体は、当該技術分野において公知の任意の型の免疫グロブリンであり得る。例えば、抗体は、任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭ等）であり得る。抗体は、モノクローナル又はポリクローナルであり得る。抗体は、天然に存在する抗体、例えば、哺乳類（例えば、マウス、ウサギ、ヤギ、ウマ、ニワトリ、ハムスター、ヒト等）から単離及び／又は精製された抗体であり得る。あるいは、抗体は、遺伝子組換え抗体（例えば、ヒト化抗体又はキメラ抗体）であり得る。抗体は、単量体型又は多量体型であり得る。また、抗体は、本発明のＴＣＲの機能部分について、任意のレベルの親和性又は結合力を有することができる。望ましくは、他のペプチド又はタンパク質との交差反応が最小限となるよう、抗体は、本発明のＴＣＲの機能部分に特異的である。

本発明のＴＣＲの任意の機能部分と結合する能力について、抗体を試験する方法が当該技術分野において公知であり、任意の抗原抗体結合アッセイ（例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、免疫沈降及び競合阻害アッセイ等）を含む（例えば、（下記）Janeway et al.、及び米国特許出願公開番号第２００２／０１９７２６６ Ａ１参照）。

抗体を作製する好適な方法は、当該技術分野において公知である。例えば、標準的なハイブリドーマ法は、例えば、Koehler and Milstein, Eur. J. Immunol., 5,511-519 (1976), Harlow and Lane (eds.), Antibodies: A Laboratory Manual, CSH Press (1988), 及び C.A. Janeway et al. (eds.), Immunobiology、5^thEd., Garland Publishing、New York, NY (2001)）に記載されている。あるいは、ＥＢＶ−ハイブリドーマ法（Haskard and Archer, J. Immunol. Methods、74 (2）, 361-67 (1984)、及びRoder et al., Methods Enzymol., 121、140-67 (1986)）、及びバクテリオファージベクター発現系（例えば、Huse et al., Science, 246, 1275-81（1989）参照）等、他の方法が当該技術分野において公知である。さらに、ヒト以外の動物において抗体を産生する方法が、例えば、米国特許５，５４５，８０６、５，５６９，８２５及び５，７１４，３５２、並びに米国特許出願公開番号第２００２／０１９７２６６Ａ１に記載されている。

ファージ提示法はさらに、本発明の抗体を生成するために使用できる。これに関して、抗体の抗原結合可変（Ｖ）ドメインをコードするファージライブラリーは、標準的な分子生物学及び組換えＤＮＡ技術（例えば、Sambrook et al. (eds.), Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3^rdEdition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (2001) 参照）を使って生成できる。所望の特異性をもって可変領域をコードするファージは、所望の抗体への特異的結合のために選択され、完全又は部分的抗体は、選択された可変ドメインを含むべく再構成される。再構成された抗体をコードする核酸配列は、ハイブリドーマ産生に使用される骨髄腫細胞等、好適な細胞株へと導入され、その結果、モノクローナル抗体の特性を有する抗体が細胞によって分泌される（例えば、（上記）Janeway et al., （上記）Huse et al., 及び米国特許６,２６５,１５０参照）。

抗体は、特定の重鎖及び軽鎖免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックであるトランスジェニックマウスにより産生できる。そのような方法は、当該技術分野において公知であり、例えば、米国特許５，５４５，８０６及び５，５６９，８２５、ならびに、（上記）Janeway et al.,に記載されている。

ヒト化抗体を産生する方法は、当該技術分野において周知であり、例えば、（上記）Janeway et al., 米国特許５，２２５，５３９、５，５８５，０８９及び５，６９３，７６１、欧州特許番号第０２３９４００ Ｂ１、並びに英国特許番号第２１８８６３８において、詳細に記載されている。ヒト化抗体は、例えば、米国特許 ５，６３９，６４１及びPedersen et al., J. Mol. Biol., 235, 959-973 (1994) に記載されている抗体リサーフェシング（resurfacing）技術を使っても、生成できる。

本発明はまた、本明細書に記載される抗体のいずれかの抗原結合部分を提供する。抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、ｄｓＦｖ、ｓＦｖ、ダイアボディ（diabodies）及びトリアボディ（triabodies）等、少なくとも１つの抗原結合部位を有する任意の部分であり得る。

単鎖可変領域断片（ｓＦｖ）抗体断片（これは、合成ペプチドを介して抗体軽鎖のＶドメインに連結された抗体重鎖の可変（Ｖ）ドメインを含む、切断型Ｆａｂ断片から成る）は、慣用的な組換えＤＮＡテクノロジー技術を使って生成され得る（例えば、Janeway et al., （上記）参照）。同様に、ジスルフィド安定化可変領域断片（ｄｓＦｖ）は、組換えＤＮＡ技術によって調製できる（例えば、Reiter et al., Protein Engineering, 7, 697-704（1994）参照）。しかしながら、本発明の抗体断片は、これらの例示的な抗体断片の型に限定されない。

また、抗体又はその抗原結合部分は、検出可能な標識（例えば、放射性同位体、フルオロフォア（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フィコエリトリン（ＰＥ））、酵素（例えば、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、及び元素粒子（例えば、金粒子）等）を含むように修飾され得る。

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、（それらの機能部分及び機能的変異体を含む）、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞（その集団を含む）、並びに抗体（その抗原結合部分を含む）は、単離及び／又は精製され得る。「単離されて」という用語は、本明細書において使用される場合、その自然環境から取り出されたことを意味する。「精製された」という用語は、本明細書において使用される場合、純度が増したことを意味するが、「純度」は、相対的な用語であって、必ずしも絶対的純度として解釈されるべきでない。例えば、純度は、少なくとも約５０％であり得、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％を上回り得、又は１００％であり得る。

本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質（その機能部分及び変異体を含む）、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞（その集団を含む）、及び抗体（その抗原結合部分を含む）は、これらすべてが、本文以下、「本発明のＴＣＲ材料」と総称されるものであるが、医薬組成物等、組成物へと製剤化され得る。これに関して、本発明は、ＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、機能部分、機能的変異体、核酸、発現ベクター、宿主細胞（その集団を含む）、及び抗体（その抗原結合部分を含む）、ならびに医薬的に許容される担体のいずれかを含む医薬組成物を提供する。本発明のＴＣＲ材料のいずれかを含む本発明の医薬組成物は、本発明の複数のＴＣＲ材料（例えば、ポリペプチド及び核酸）又は２種類以上の異なるＴＣＲを含み得る。あるいは、医薬組成物は、化学療法剤等、他の医薬的に活性な物質又は薬剤（例えば、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メトトレキサート、パクリタキセル、リツキシマブ、ビンブラスチン、ビンクリスチンなど）と組み合わせて、本発明のＴＣＲ材料を含み得る。

好ましくは、担体は、医薬的に許容される担体である。医薬組成物に関して、担体は、従来使用されるいずれかの担体であり得、物理化学的考察（例えば、溶解度、及び活性化合物に対する反応性の欠如等）及び投与経路のみによって限定される。本明細書に記載される医薬的に許容される担体（例えば、ベヒクル、アジュバント、賦形剤及び希釈剤）は、当業者に周知であり、公に容易に入手可能である。医薬的に許容される担体が、活性物質に対し化学的に不活性な担体、及び使用条件下で有害な副作用も毒性もない担体であることが好ましい。

担体の選択は、特定の本発明のＴＣＲ材料によって、そして本発明のＴＣＲ材料を投与するために使用される特定の方法によって一部決定されよう。従って、本発明の医薬組成物の好適な製剤は多様である。経口、エアロゾル、非経口、皮下、点滴、筋肉内、動脈内、髄腔内及び腹腔内投与のための以下のような製剤は例示的であって、何ら限定するものではない。本発明のＴＣＲ材料を投与するために複数の経路が使用され得、いくつかの例において、特定の経路が、他の経路よりも迅速かつ効果的な反応をもたらし得る。

局所用製剤は当業者に周知である。そのような製剤は、本発明の文脈においては、皮膚への塗布に特に好適である。

経口投与に好適な製剤は、（ａ）希釈剤（水、生理食塩水又はオレンジジュース等）中に溶解させた有効量の本発明のＴＣＲ材料等の液体溶液；（ｂ）カプセル、サシェ剤（ｓａｃｈｅｔ）、錠剤、ロゼンジ及びトローチ（それぞれ、固体又は顆粒として所定量の活性成分を含む）；（ｃ）粉末；（ｄ）適切な液体中の懸濁物；及び（ｅ）適切な乳濁物から成り得る。液体製剤は、医薬上許容される界面活性剤を添加しているか、又はしていない、水及びアルコール（例えば、エタノール、ベンジルアルコール及びポリエチレンアルコール）等、希釈剤を含み得る。カプセル剤形は、例えば、界面活性剤、滑沢剤及び不活性フィラー（ラクトース、スクロース、リン酸カルシウム及びコーンスターチ等）を含む、通常の硬ゼラチン型又は軟ゼラチン型のものであり得る。錠剤剤形は、ラクトース、スクロース、マンニトール、コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸、微結晶性セルロース、アラビアゴム、ゼラチン、グアーガム、コロイド状二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸、並びに他の賦形剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、崩壊剤、加湿剤、保存剤、香味料及び他の薬理学的に適合する賦形剤から、１個以上を含み得る。ロゼンジ剤形は、香料（通常、スクロース及びアラビアゴム又はトラガント）中に本発明のＴＣＲ材料を含み得、アメ（ｐａｓｔｉｌｌｅ）は、当該分野で公知のかかる賦形剤に加えて、不活性基剤（例えば、ゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアラビアゴム）、乳濁物、ゲルなどを含む中に、本発明のＴＣＲ材料を含む。

本発明のＴＣＲ材料は、単独で又は他の好適な成分と組み合わせて、吸入を介して投与されるエアロゾル製剤にされ得る。これらのエアロゾル製剤は、加圧された許容可能な噴霧剤（ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素等）中に入れられ得る。これらはまた、例えばネブライザー又はアトマイザー中の非加圧製剤のための医薬として製剤化され得る。かかるスプレー製剤は、粘膜にスプレーするためにも使用され得る。

非経口投与に好適な製剤は、水性又は非水性の等張無菌注射溶液（抗酸化剤、緩衝液、静菌剤、及び、製剤を所期の服用者の血液と等張にする溶質を含み得る）並びに水性及び非水性の無菌懸濁物（懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤及び保存剤を含み得る）を含む。本発明のＴＣＲ材料は、医薬上許容される界面活性剤（例えば、石鹸又は洗剤）、懸濁剤（例えば、ペクチン、カルボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース若しくはカルボキシメチルセルロース）若しくは乳化剤及び他の医薬的アジュバントの添加あり又はなしの、医薬的担体（水、生理食塩水、水性デキストロース及び関連する糖溶液を含む無菌の液体又は液体混合物、エタノール又はヘキサデシルアルコール等のアルコール、プロピレングリコール又はポリエチレングリコール等のグリコール、ジメチルスルホキシド、グリセロール、ケタール（２，２−ジメチル−１，３−ジオキソラン−４−メタノール等）、エーテル、ポリ（エチレングリコール等）４００、油、脂肪酸、脂肪酸エステル若しくはグリセリド、又はアセチル化脂肪酸グリセリド等）中の生理学的に許容される希釈剤中で投与され得る。

非経口製剤で使用され得る油には、石油、動物油、植物油又は合成油が含まれる。油の具体例としては、落花生油、大豆油、ゴマ油、綿実油、コーン油、オリーブ油、ペトロラタム油及び鉱油が挙げられる。非経口製剤での使用に好適な脂肪酸には、オレイン酸、ステアリン酸及びイソステアリン酸が含まれる。オレイン酸エチル及びミリスチン酸イソプロピルが、好適な脂肪酸エステルの例である。

非経口製剤での使用に好適な石鹸には、脂肪酸のアルカリ金属、アンモニウム及びトリエタノールアミン塩が含まれ、好適な洗剤には、（ａ）カチオン性洗剤（例えば、ジメチルジアルキルアンモニウムハライド及びアルキルピリジニウムハライド等）、（ｂ）アニオン性洗剤（例えば、アルキル、アリール及びオレフィンスルホン酸塩、アルキル、オレフィン、エーテル及びモノグリセリド硫酸塩、及びスルホコハク酸塩）、（ｃ）非イオン性洗剤（例えば、脂肪族アミンオキシド、脂肪酸アルカノールアミド及びポリオキシエチレンポリプロピレンコポリマー等）、（ｄ）両性洗剤（例えば、アルキル−β−アミノプロピオン酸塩及び２−アルキル−イミダゾリン第４級アンモニウム塩等）、並びに（ｅ）それらの混合物が含まれる。

非経口製剤は典型的に、溶液中に約０．５重量％〜約２５重量％、又はそれ以上の本発明のＴＣＲ材料を含むであろう。保存剤及び緩衝液が使用され得る。注射部位での刺激を最小化又は排除するために、かかる組成物は、約１２〜約１７の親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）を有する１種以上の非イオン性界面活性剤を含み得る。かかる製剤中の界面活性剤の量は、典型的には、約５重量％〜約１５重量％の範囲であろう。好適な界面活性剤には、ポリエチレングリコールソルビタン脂肪酸エステル（ソルビタンモノオレエート等）、及びプロピレンオキシドとプロピレングリコールとの縮合によって形成される、疎水性塩基とエチレンオキシドとの高分子量付加物が含まれる。非経口製剤は、単一用量又は複数用量の密封容器（アンプル及びバイアル等）中に提示され得、使用直前の無菌液体賦形剤（例えば注射用水）の添加のみを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）状態で保存され得る。即時注射溶液及び懸濁物は、以前に記載された種類の無菌の粉末、顆粒及び錠剤から調製できる。

注射可能な製剤は、本発明に従う。注射可能な組成物のための有効な医薬的担体の要件は、当業者に周知である（例えば、Pharmaceutics and Pharmacy Practice, J.B. Lippincott Company, Philadelphia, PA, Banker and Chalmers, eds., pages 238-250 (1982)、および、ASHP Handbook on Injectable Drugs, Toissel, 4th ed., pages 622-630 (1986) 参照）。好ましくは、細胞（例えば、Ｔ細胞）に投与するとき、細胞には、注射で投与される。

上述の医薬組成物に加えて、本発明のＴＣＲ材料が、シクロデキストリン包接錯体等、包接錯体又はリポソームとして製剤できることが、当業者にはわかるだろう。

本発明の目的のために、投与される本発明のＴＣＲ材料の量または用量は、例えば、対象者又は動物において、適切な期間にわたって治療的又は予防的反応をもたらすのに十分であるべきである。例えば、本発明のＴＣＲ材料の用量は、癌抗原と結合するのに、又は、投与時から約２時間以上、例えば、１２〜２４時間以上という期間で癌を検出、治療若しくは予防するのに十分でなければならない。いくつかの実施形態において、かかる時間は、もっと長くなり得る。用量は、特定の本発明のＴＣＲ材料の有効性、及び動物（例えば、ヒト）の状態と、治療する動物（例えば、ヒト）の体重とによって決定されるであろう。

投与される用量を決定するための多くのアッセイが当該技術分野において公知である。本発明の目的のために、標的細胞が溶解される程度、又は、それぞれが異なる用量のＴ細胞を与えられた哺乳類１セットのうち、１匹の哺乳類へ所与の用量のＴ細胞を投与したときの、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質を発現するＴ細胞によってＩＦＮ−γが分泌される程度を比較することを含むが、かかるアッセイを使用して、哺乳類に投与する開始用量を決定することができる。一定用量の投与の際の、標的細胞が溶解する程度、又はＩＦＮ−γが分泌される程度は、当該技術分野において公知の方法によって分析できる。

本発明のＴＣＲ材料の用量はまた、特定の本発明のＴＣＲ材料の投与に伴い得る任意の有害な副作用の存在、性質及び程度によって決定されよう。典型的には、主治医が、年齢、体重、全般的健康、食習慣、性別、投与する本発明のＴＣＲ材料、投与経路、治療する症状の重篤度等、様々な要因を考慮に入れて、個々の患者を治療するための本発明のＴＣＲ材料の用量を決定することになる。本発明のＴＣＲ材料の用量は、例として、一日当たり、治療対象者の体重１ｋｇにつき約０．００１〜約１０００ｍｇ若しくはより多く、一日当たり、体重１ｋｇにつき約０．０１〜約１０ｍｇ若しくはより多く、又は、一日当たり、体重１ｋｇにつき約０．０１ｍｇ〜約１ｍｇ若しくはより多くとなり得るが、これらは発明を限定することを意図されていない。本発明のＴＣＲ材料が細胞集団である実施形態においては、投与される細胞の数は、例えば、約１×１０^６から約１×１０^１１細胞又はより多くまで変わり得る。

本発明のＴＣＲ材料の治療効力又は予防効力を修飾によって増大させるために、本発明のＴＣＲ材料（inventive TCR materials of the invention）が、いくつもの形に修飾され得ることを、当業者は容易に理解するであろう。例えば、本発明のＴＣＲ材料は、直接的又は標的化部分への架橋によって間接的にコンジュゲート化され得る。化合物（例えば、本発明のＴＣＲ材料）を標的化部分にコンジュゲート化する実務は、当該技術分野において公知である。例えば、Wadwa et al., J. Drug Targeting ３: １１１ (１９９５) 及び米国特許５,０８７,６１６参照。「標的化部分」という用語は、本明細で使用される場合、細胞表面受容体を特異的に認識し、これに結合する任意の分子又は物質をいい、標的化部分は、かかる表面受容体が発現する細胞の集団への、本発明のＴＣＲ材料の送達を指令する。標的化部分は、細胞表面受容体（例えば、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）、Ｂ細胞受容体（ＢＣＲ）、ＣＤ２８、血小板由来成長因子受容体（ＰＤＧＦ）、ニコチン性アセチルコリン受容体（ｎＡＣｈＲ）等）に結合する抗体又はその断片、ペプチド、ホルモン、成長因子、サイトカイン、及び他のいずれの天然リガンド又は非天然リガンドを含むが、これらに限定されない。「架橋」という用語は、本明細書で使用される場合、本発明のＴＣＲ材料を標的化部分に連結させる任意の物質又は分子をいう。当業者は、本発明のＴＣＲ材料の機能には必要でない、本発明のＴＣＲ材料における部位が、架橋及び／又は標的化部分を接着するのに理想的な部位であると認識する（但し、架橋及び／又は標的化部分は、本発明のＴＣＲ材料に接着して、本発明のＴＣＲ材料の機能（すなわち、ＭＡＧＥ−Ａ３若しくはＭＡＧＥ−Ａ１２に結合する能力；または癌を検出、治療若しくは予防する能力）を妨害しないものとする）。

あるいは、本発明のＴＣＲ材料は、デポー（ｄｅｐｏｔ）形態に改変され得、その結果、本発明のＴＣＲ材料が、それが投与される体内に放出される様式が、時間と体内の位置に関して制御される（例えば、米国特許４,４５０,１５０参照）。本発明のＴＣＲ材料のデポー形態は、例えば、本発明のＴＣＲ材料及び多孔性又は非多孔性の材料（例えばポリマー）を含む移植可能な組成物であり得、本発明のＴＣＲ材料は、材料に封入されるか又は材料全体に拡散され、及び／又は非多孔性材料の分解によって拡散される。次いでデポーは、身体内の所望の位置に移植され、本発明のＴＣＲ材料 は、所定の速度で移植物から放出される。

本発明の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞又は細胞集団が、癌の治療又は予防の方法において使用され得ることが検討される。特定の理論には縛られないが、本発明のＴＣＲは、ＭＡＧＥ−Ａ３ ＭＡＧＥ−Ａ１２に特異的に結合すると考えられ、その結果、ＴＣＲ（又は関連する本発明のポリペプチド又はタンパク質）が、細胞によって発現されると、ＭＡＧＥ−Ａ３又はＭＡＧＥ−Ａ１２を発現する標的細胞に対する免疫反応を仲介することができる。これに関して、本発明は、宿主における癌の治療又は予防の方法を提供するが、該方法は、本明細書に記載される任意の医薬組成物、ＴＣＲ、ポリペプチド又はタンパク質、本明細書に記載される任意のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質をコードする核酸配列を含む、任意の核酸又は組換え発現ベクター、あるいは本明細書に記載される任意のＴＣＲ、ポリペプチドまたはタンパク質をコードする発現ベクターを含む任意の宿主細胞又は細胞集団を、宿主における癌を治療又は予防するのに有効な量で、宿主に投与することを含む。

「治療する」及び「予防する」という用語並びにそれらの派生語は、本明細書中で使用する場合、１００％の、又は完全な治療又は予防を必ずしも意味しない。むしろ、当業者が潜在的な利益又は治療効果を有すると認識する、様々な程度の治療又は予防が存在する。これに関して、本発明の方法は、宿主における癌の任意のレベルの治療又は予防の任意の量を提供し得る。さらに、本発明の方法が提供する治療又は予防は、治療又は予防される疾患（例えば癌）の１以上の状態又は症状の治療又は予防を含み得る。また、本明細書の目的のために、「予防」は、疾患又はその症状若しくは状態の発症を遅延させることを包含し得る。

宿主における癌の存在を検出する方法もまた、提供される。かかる方法は、（ｉ）癌細胞を含む試料を、本明細書に記載される本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団又は抗体若しくはその抗原結合部分のいずれかに接触させることを含み、それによって、複合体を形成し、複合体を検出する。複合体の検出は、宿主における癌の存在を表す。

宿主における癌を検出する本発明の方法に関して、癌細胞の試料は、全細胞、その溶解物又は全細胞溶解物の画分（例えば、核画分又は細胞質画分、全タンパク質画分、又は核酸画分）を含む試料であり得る。

本発明の検出方法の目的のために、宿主にｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏの接触を行うことがあり得る。好ましくは、接触はｉｎ ｖｉｔｒｏである。

また、複合体の検出は当該技術分野で公知の、任意の数の方法によって起こり得る。例えば、本明細書中に記載の、本発明のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、又は抗体若しくはその抗原結合部分は、例えば、放射性同位体、フルオロフォア（例、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フィコエリトリン（ＰＥ））、酵素（例、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ）、及び元素粒子（例、金粒子）等の検出可能な標識で標識され得る。

宿主細胞又は細胞集団が投与される本発明の方法の目的のために、細胞は、宿主に対して同種又は自己の細胞であり得る。好ましくは、細胞は宿主に対して自己の細胞である。

本発明の方法に関して、癌は、肉腫（例、滑膜肉腫、骨肉腫、子宮平滑筋肉腫及び胞巣状横紋筋肉腫）、リンパ腫（例、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫）、肝細胞癌、神経膠腫、頭部癌（例、扁平上皮細胞癌）、頸部癌（例、扁平上皮細胞癌）、急性リンパ球癌、白血病（例、急性骨髄性白血病及び慢性リンパ球性白血病）、骨肉腫、脳腫瘍、乳癌、肛門、肛門管又は肛門直腸の癌、眼の癌、肝内胆管の癌、関節の癌、頸部、胆嚢又は胸膜の癌、鼻、鼻腔または中耳の癌、口腔の癌、外陰の癌、慢性骨髄癌、大腸癌（例、結腸癌）、食道癌、子宮頸癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、下咽頭癌、喉頭癌、肝臓癌（例、肝細胞癌）、肺癌（例、非小細胞肺癌）、悪性中皮腫、メラノーマ、多発性骨髄腫、鼻咽頭癌、卵巣癌、膵臓癌、腹膜、網及び腸間膜癌、咽頭癌、前立腺癌、直腸癌、腎臓癌（例、腎細胞癌）、小腸癌、軟組織癌、胃癌、精巣癌、甲状腺癌、並びに、尿路上皮癌（例、尿管癌及び膀胱癌）のいずれをも含む、任意の癌であり得る。

本発明の方法において宿主というのは、任意の宿主であり得る。好ましくは、宿主は、哺乳類である。「哺乳類」という用語は、本明細書で使用する場合、マウス及びハムスター等、ネズミ目の哺乳類、及びウサギ等、ウサギ目の哺乳類を含む任意の哺乳類をいうが、これらに限定されない。哺乳類が、ネコ科の動物（ネコ）及びイヌ科の動物（イヌ）を含むネコ目由来であることが好ましい。哺乳類が、ウシ属の動物（ウシ）及びイノシシ属の動物（ブタ）を含むウシ目、又はウマ属の動物（ウマ）を含むウマ目（Perssodactyla）であることが、より好ましい。哺乳類が、霊長目、セボイド（Ceboids）目若しくはシモイド（Simoids）目（サル）又は、類人（Ａnthropoids）目（ヒト及び類人猿）であることが、最も好ましい。特に好ましい哺乳類は、ヒトである。

以下の実施例は、本発明をさらに説明しているが、当然ながら、その範囲を制限する形で解釈されるべきでない。

実施例１
本実施例は、Ｔ細胞クローンからのＴＣＲ遺伝子のクローニングと、ＴＣＲコンストラクトの生成を実証する。

支配的なクラスＩ対立遺伝子ＨＬＡ−Ａ^＊０１及びＣ^＊０７との関連においてＭＡＧＥ−Ａ遺伝子ファミリーのエピトープを認識する４つのＴ細胞クローンが最初に同定された。メラノーマ患者人口のおよそ３０％が、ＨＬＡ−Ａ^＊０１を発現し、ＨＬＡ−Ａ^＊０１^＋の人の９５％を上回る人が、ＨＬＡ−Ａ^＊０１０１サブタイプを発現するが、メラノーマ患者の５０％を超える患者が、２つの支配的なＨＬＡ−Ｃ^＊０７サブタイプ、Ｃ^＊０７:０１及びＣ^＊０７:０２のうち１つを発現する。

発現したＴＣＲ α鎖及びβ鎖は、ＨＬＡ−Ａ^＊０１との関連においてタンパク質ＭＡＧＥ−Ａ３の残基１６８−１７６（ＭＡＧＥ−Ａ３:１６８−１７６）を認識した２つのクローン、Ａ１０及び１３−１８から単離された。加えて、ＭＡＧＥ−Ａ１２タンパク質の残基１７０−１７８（ＭＡＧＥ−Ａ１２:１７０−１７８）に対応するペプチドを認識するＨＬＡ−Ｃ^＊０７拘束性ＴＣＲが、クローン５０２及びＦＭ８から単離された。

２つのＭＡＧＥ−Ａ１２反応性、ＨＬＡ−Ｃ^＊０７拘束性（reactive）Ｔ細胞クローン（ＰＨＩＮ ＬＢ８３１−５０１Ｄ／１９、「５０２」と呼ばれる（Heidecker et al., J. Immunol., 164: 6041-6045 (2000)）、及び、「ＦＭ８」（Panelli et al., J. Immunol., 164: 4382-4392 (2000）））と、２つのＭＡＧＥ−Ａ３反応性、ＨＬＡ−Ａ^＊０１拘束性Ｔ細胞クローン（ＬＡＵ１４７ ＣＴＬ１又は８１０／Ａ１０、「Ａ１０」と呼ばれる（Parmentier et al., Nat. Immunol., 11：449-454 (2010)）及びＮＷ１０００ ＡＶＰ−１ １３−１８、「１３−１８」と呼ばれる)とから、機能的ＴＣＲをコードするα鎖及びβ鎖を単離した。簡潔にいえば、ＳＭＡＲＴ ＲＡＣＥ ｃＤＮＡ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社、ＣＡ州、マウンテンビュー）を使ってＴ細胞クローンから単離した全ＲＮＡをｃＤＮＡへと逆転写するのに、ｏｌｉｇｏ−ｄＴを使用した。Ｔ細胞クローンによって発現されたＴＣＲ α鎖及びβ鎖を、ＴＣＲ α鎖定常領域に相補的なプライマー５’−ＣＡＣＴＧＴＴＧＣＴＣＴＴＧＡＡ ＧＴＣＣ−３’（配列番号５５）と、ＴＣＲβ鎖定常領域に相補的な５’−ＣＡＧＧＣＡＧＴＡＴ ＣＴＧＧＡＧＴＣＡＴＴＧＡＧ−３’（配列番号５６）とを、ＳＭＡＲＴ ＲＮＡ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｋｉｔからのアダプタープライマーと組み合わせて使って、５’−ＲＡＣＥ反応を実行することによって同定した。５’−ＲＡＣＥ産物のシークエンシング後、適切な完全長ＴＣＲα鎖及びβ鎖を増幅するよう設計された特異的プライマーを使って、完全長遺伝子産物を増幅した。Ａ１０ ＴＣＲはＡＶ１２−１／ＢＶ２４−１を発現し、１３−１８はＡＶ１２−３／ＢＶ１５を発現し、５０２ ＴＣＲはＡＶ１３−１／ＢＶ２５−１を発現し、ＦＭ８はＡＶ３８−２／ＢＶ４−３を発現する。

４つのＴ細胞クローンのそれぞれについて、対になったα鎖及びβ鎖をコードする転写産物を、ＭＳＧＶ１レトロウイルス発現ベクターに挿入した。

実施例２
本実施例は、ＨＬＡ−Ａ１＋／ＭＡＧＥ−Ａ３＋細胞に反応した、抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ−Ａ１０（配列番号１３及び１４）ならびに抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ １３−１８（配列番号２４及び２５）を発現する細胞の反応性を実証している。

ＴＣＲ−Ａ１０（配列番号４６）及びＴＣＲ １３−１８（配列番号４８）で形質導入した抗ＣＤ３刺激Ｔ細胞を、ＭＡＧＥ−Ａ３を発現する一団のＨＬＡ−Ａ^＊０１＋メラノーマ細胞株を認識するその能力について、評価した。形質導入されていない（ＵＴ）細胞及び形質導入した細胞を様々な腫瘍細胞株（表１Ａ、１Ｂ及び図６Ａ）と一晩共培養し、インターフェロン−ガンマ（ＩＦＮ−γ）（ｐｇ／ｍｌ）を測定した。

結果は、評価された８種類のＨＬＡ−Ａ^＊０１＋／ＭＡＧＥ−Ａ３＋メラノーマ細胞株のうち６種類が、ＴＣＲ １３−１８で形質導入したＴ細胞からよりも、ＴＣＲ Ａ１０で形質導入したＴ細胞からの、より高いレベルのＩＦＮ−γの放出を刺激したことを示している（図１Ａ）。ＴＣＲで形質導入したＴ細胞と、比較的低いレベルのＭＡＧＥ−Ａ３を発現した２種類のＨＬＡ−Ａ１＋メラノーマ細胞株Ａ３７５ ｍｅｌ及び５３７ ｍｅｌとを共培養した後には、より低いレベルのＩＦＮ−γが放出されたが、かかる標的細胞に反応して、ＴＣＲ Ａ１０で形質導入したＴ細胞は、ＴＣＲ １３−１８で形質導入したＴ細胞より高いレベルのＩＦＮ−γを放出した。かかる反応は、ＨＬＡ−Ａ１によって拘束された。なぜなら、ＨＬＡ−Ａ１の発現を欠如した１３００ ｍｅｌは、ＴＣＲ Ａ１０及びＴＣＲ １３−１８で形質導入した細胞からのＩＦＮ−γの放出を刺激しなかったが、親１３００ ｍｅｌ細胞株に、ＨＬＡ−Ａ^＊０１をトランスフェクトすることによって生成された細胞株（１３００−Ａ１とする）は、ＴＣＲ Ａ１０及びＴＣＲ １３−１８で形質導入したＴ細胞からのＩＦＮ−γの放出を刺激したからである。ＭＡＧＥ−Ａ３の発現のないＨＬＡ−Ａ^＊０１＋腎臓癌細胞株、２６６１ ＲＣＣは、ＴＣＲ Ａ１０及びＴＣＲ １３−１８で形質導入したＴ細胞からの顕著なＩＦＮ−γの放出を刺激しなかった。これらの結果は、ＭＡＧＥ−Ａ３^＋／ＨＬＡ−Ａ１^＋標的細胞と共培養したとき、ＴＣＲ Ａ１０を発現する細胞が、ＴＣＲ−１３−１８を発現する細胞より、高いレベルのＩＦＮ−γを放出することを実証している。これらの結果はまた、ＭＡＧＥ−Ａ３＋／ＨＬＡ−Ａ１＋標的細胞の存在下で、ＴＣＲ Ａ１０及びＴＣＲ−１３−１８が刺激されることを実証している。

形質導入されたＰＢＭＣで実行した共培養アッセイの結果は、ＴＣＲ Ａ１０で形質導入したＴ細胞が、ＨＬＡ−Ａ^＊０１＋／ＭＡＧＥ−Ａ３＋腫瘍細胞株３９７ ｍｅｌ、２９８４ ｍｅｌ及び２５５６ ｍｅｌに反応して、高いレベルのＩＦＮガンマを生成することを実証した。サイトカインレベルは、ＴＣＲ １３−１８で形質導入したＴ細胞から生成されたレベルの５〜１０倍であった（図６Ａ）。ＭＡＧＥ−Ａ３＋、但しＨＬＡ−Ａ^＊０１陰性である細胞株５６２、６２４及び２３５９ ｍｅｌと、ＭＡＧＥ−Ａ３陰性、但しＨＬＡ−Ａ^＊０１＋である腎臓癌細胞株２６６１ ＲＣＣとは、ＴＣＲ Ａ１０又は１３−１８で形質導入したＴ細胞のいずれからも顕著なレベルのサイトカインを刺激しなかった（図６Ａ）。

ＴＣＲの形質導入レベルを、定量的ＰＣＲアッセイを使って評価した。かかるアッセイは、ゲノムＤＮＡを使って、フォワードプライマー（配列番号５８）及びリバースプライマー（配列番号５９）ならびに、ＭＳＧＶ１レトロウイルスＬＴＲを特異的に検出するが、ヒト内生レトロウイルス配列を検出しないように設計されたプローブ（配列番号６０）で実行した。増幅産物のレベルを、ＮＹ−ＥＳＯ−１:１５７−１６５エピトープに対するＴＣＲで形質導入し、ＮＹ−ＥＳＯ−１テトラマーで染色することによって、形質導入したＴ細胞をおよそ８０％含むと推測された、ＰＢＭＣの陽性コントロール試料に対して標準化した。

Ａ１０又は１３−１８ＴＣＲで形質導入したＴ細胞の活性の相違は、２つのＴＣＲの形質導入の頻度の相違によるものではないことが分かった、というのは、かかる頻度は同等であると分かったからである（図６Ｂ）。加えて、Ａ１０ ＴＣＲで形質導入したＴ細胞は、最低濃度（１３−１８ＴＣＲで形質導入した細胞による認識に必要な濃度の１０倍低い濃度）の０．５ｎＭ ＭＡＧＥ−Ａ３ １６８−１７６ペプチドでインキュベートした標的細胞を認識し（図６Ｃ）、Ａ１０ ＴＣＲが、１３−１８ ＴＣＲよりも高い機能的結合力を有することを示した。

ＴＣＲ Ａ１０（配列番号４６）又はＤＭＦ５（ＨＬＡ−Ａ^＊０２０１／ＭＡＲＴ−１:２７−３５ Ｔ細胞エピトープに対するＴＣＲ）のいずれかで形質導入したＴ細胞を刺激する、新鮮な無培養の腫瘍細胞の能力を評価した。形質導入していない（ＵＴ）細胞及び形質導入した細胞を、様々な新鮮腫瘍と共培養し、ＩＦＮ−γ（ｐｇ／ｍｌ）を測定した。

結果は、ＴＣＲ Ａ１０で形質導入したＴ細胞が、試験した４つのＨＬＡ−Ａ^＊０１＋／ＭＡＧＥ−Ａ３＋新鮮腫瘍のうち４つ（ＦｒＴｕ２７６７、ＦｒＴｕ３１７８、ＦｒＴｕ２８２３及びＦｒＴｕ３０６８）を認識すること、ＤＭＦ５で形質導入したＴ細胞が、試験した両方のＨＬＡ−Ａ^＊０２０１＋／ＭＡＲＴ−１＋新鮮腫瘍細胞（ＦｒＴｕ２８５１及びＦｒＴｕ３２４２）を認することを示した（図１Ｂ）。ＴＣＲ Ａ１０で形質導入したＴ細胞は、ＨＬＡ−Ａ^＊０２０１＋新鮮腫瘍を認識しなかった一方、ＤＭＦ５で形質導入したＴ細胞は、ＨＬＡ−Ａ^＊０１＋新鮮腫瘍を認識せず、ＴＣＲ Ａ１０によるＩＦＮ−γの分泌が、ＨＬＡ−Ａ１＋／ＭＡＧＥ−Ａ３＋特異的応答であることを示した。

ＴＣＲ Ａ１０及び１３−１８で形質導入したＴ細胞は、６つのＭＡＧＥ−Ａ３＋且つＨＬＡ−Ａ^＊０１^＋新鮮腫瘍（ＦｒＴｕ）のうち５つ、ＦｒＴｕ３１７８、２７６７、２８２３、２８３０及び３０６８を認識したが、ＭＡＧＥ−Ａ３の発現がないＨＬＡ−Ａ^＊０１^＋新鮮腫瘍ＦｒＴｕ２６８５、又は、ＨＬＡ−Ａ^＊０１の発現がない３つのＭＡＧＥ−Ａ３^＋新鮮腫瘍、ＦｒＴｕ２１８１、３２４２及び２８０３のいずれも認識しなかった（図７Ａ；表１Ｃ）。

実施例３
本実施例は、ＨＬＡ−Ｃｗ^＊０７＋／ＭＡＧＥ−Ａ１２＋細胞との共培養に反応した、抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ５０２（配列番号３４及び３５）又は抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ＦＭ８（配列番号４４及び４５）を発現する細胞の反応性を実証している。

２人の患者のＰＢＭＣ試料から単離された抗ＣＤ３刺激ＣＤ８＋Ｔ細胞に、切断型ヒト低親和性神経成長因子受容体（ＮＧＦＲ）をコードするコントロールコントラクトで形質導入して、ＴＣＲ ５０２（配列番号４７）又はＴＣＲ ＦＭ８（配列番号４９）を、ＭＡＧＥ−Ａ１２を発現する一団のＣｗ^＊０７＋メラノーマ細胞株を認識するそれらの能力について、評価した。

ＭＡＧＥ−Ａ１２遺伝子産物を特異的に増幅するが、ＭＡＧＥ−Ａ遺伝子ファミリーの他のメンバーを増幅しないよう設計された２つのプライマー（配列番号６１及び６２）と、ＭＡＧＥ−Ａ１２特異的プローブ（配列番号６３）とを使って、Ｑ−ＰＣＲによって、ＭＡＧＥ−Ａ１２遺伝子産物の発現を評価した。抗原の発現は、コピー数を推測するための基準として、プラスミドのコントロールを使って、かつ、標準化のためにグリセルアルデヒド３リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）を使って、決定された。１０６コピーのＧＡＰＤＨに対して１，０００を超えるＭＡＧＥ−Ａ１２のコピーを発現する腫瘍細胞株及び新鮮腫瘍を、ＭＡＧＥ−Ａ１２発現についてポジティブとした。

形質導入した細胞を、様々な腫瘍細胞株と一晩共培養し（表２Ａ；図６Ｄおよび６Ｆ）、ＩＦＮ−γ（ｐｇ／ｍｌ）を測定した。

結果は、ＴＣＲ ５０２で形質導入したＴ細胞が、ＨＬＡ−Ｃｗ^＊０７０１又は０７０２のいずれかを発現する、試験した８つのＭＡＧＥ−Ａ１２＋メラノーマ細胞株のうち８つを認識するが、ＴＣＲ ＦＭ８で形質導入したＴ細胞は、ＨＬＡ−Ｃｗ^＊０７０２を発現するメラノーマ細胞株を認識するだけであることを実証した（図２Ａ、２Ｂ；図６Ｆもまた参照のこと）。加えて、ＴＣＲ ５０２で形質導入したＴ細胞が、ＨＬＡ−Ｃｗ^＊０７０２＋標的ＳＫ２３ ｍｅｌ、１３００ ｍｅｌ及び６２４ ｍｅｌに反応して、ＴＣＲ ＦＭ８で形質導入したＴ細胞に比してより高いレベルのＩＦＮ−γを放出した（図６Ｄ、６Ｆ）。ＨＬＡ−Ｃｗ^＊０７０２を発現するが、ＭＡＧＥ−Ａ１２の発現を欠如した１０１１ ｍｅｌ細胞は、ＴＣＲ ５０２又はＴＣＲ ＦＭ８で形質導入した細胞からの顕著なサイトカイン放出を刺激しなかった。ＮＧＦＲをコードするコントロールコントラクトで形質導入したＴ細胞は、試験した標的のいずれにも顕著に反応しなかった。これらの結果が、ＭＡＧＥ−Ａ１２＋／ＨＬＡ−Ｃｗ７標的細胞と共培養した場合、ＴＣＲ ５０２を発現する細胞が、ＴＣＲ ＦＭ８を発現する細胞よりも高いレベルのＩＦＮ−γを放出することと、ＴＣＲ ５０２が、ＨＬＡ−Ｃｗ０７０１又はＨＬＡ−Ｃｗ０７０２のいずれかとの関連においてＭＡＧＥ−Ａ１２を認識することとを実証している。これらの結果はまた、ＴＣＲ Ａ５０２及びＴＣＲ ＦＭ８が、ＭＡＧＥ−Ａ１２＋細胞の存在下、刺激されることを実証している。

ＴＣＲ ５０２で形質導入したＴ細胞は、ＨＬＡ−Ｃ^＊０７０２＋、ＭＡＧＥ−Ａ１２＋腫瘍６２４ ｍｅｌと、２つのＨＬＡ−Ｃ^＊０７:０１＋、ＭＡＧＥ−Ａ１２＋腫瘍、３９７及び２３５９ ｍｅｌとを認識した一方で、ＦＭ８で形質導入したＴ細胞は、ＨＬＡ−Ｃ^＊０７:０２＋腫瘍細胞株６２４ ｍｅｌを認識したが、３９７及び２３５９ ｍｅｌを認識しなかった（図６Ｄ）。形質導入したＴ細胞の集団は、ＨＬＡ−Ｃ^＊０７の発現を欠如したＭＡＧＥ−Ａ３＋メラノーマ細胞株５２６、２５５６若しくは２９８４ ｍｅｌを認識せず、ＭＡＧＥ−Ａ１２の発現を欠如したＨＬＡ−Ｃ^＊０７:０１＋腫瘍細胞株２６３０ ｍｅｌを認識しなかった（図６Ｄ）。これらの相違は、２つのＴＣＲの形質導入の頻度（実施例２において記載される通りに測定した）の相違によるものではないことが分かった、というのは、かかる頻度は、いずれのＴＣＲで形質導入した細胞においても、同様であることが分かったからである（図６Ｂ）。加えて、５０２ ＴＣＲで形質導入した細胞は、最低濃度２．５ｎＭのＭＡＧＥ−Ａ１２:１７０−１７８（ＦＭ８ＴＣＲで形質導入した細胞が認識するのに必要な濃度より１００倍低い濃度）でインキュベートされた標的細胞を認識し（図６Ｅ）、これによって、５０２ ＴＣＲがＦＭ８ＴＣＲより高い機能的結合力を有することが示された。

次いで、ＭＡＧＥ−Ａ１２反応性ＴＣＲで形質導入したＴ細胞を、新鮮な無培養の腫瘍細胞の酵素消化物に対するそれらの反応について評価した。ＴＣＲ ５０２で形質導入したＴ細胞は、ＨＬＡ−Ｃ^＊０７０１を発現した４つのＭＡＧＥ−Ａ１２^＋新鮮腫瘍のうちの１つ、ＦｒＴｕ３０６８を認識し、また、ＴＣＲ ５０２及びＦＭ８で形質導入したＴ細胞が、ＨＬＡ−Ｃ^＊０７:０２を発現した２つのＭＡＧＥ−Ａ１２^＋腫瘍のうち１つ、ＦｒＴｕ２１８１を認識した（図７Ｂ；表２Ｂ）。ＴＣＲで形質導入したＴ細胞集団は、ＨＬＡ−Ｃ^＊０７:０１⁻及び０７:０２⁻新鮮腫瘍２７６７若しくは２８２３、又は、ＭＡＧＥ−Ａ１２の発現を欠如したＭＡＧＥ−Ａ１２⁻腫瘍２６８５、３２４２及び２８０３のいずれも認識しなかった。

実施例４
本実施例は、本発明のＴＣＲを使用して治療され得る人口を実証している。

患者人口のおよそ２８％がＨＬＡ−Ａ^＊０１を発現し、患者人口のおよそ５４％がＨＬＡ−Ｃｗ^＊０７を発現する。ＨＬＡ−Ｃｗ^＊０７の２つの支配的なサブタイプ、−Ｃｗ^＊０７０１及びＣｗ^＊０７０２は、患者人口のおよそ２７％、及びおよそ３１％がそれぞれ発現する。図３Ａは、ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２及び／又はＨＬＡ−Ｃｗ７によって拘束されるＴＣＲの使用によって治療可能と予測されるであろう人口の累積率を図解している（正常な白色人種人口におけるこれらの対立遺伝子の比率に基づいている）。

患者のおよそ３０％が高レベルのＭＡＧＥ−Ａ３及びＭＡＧＥ−Ａ１２を発現するため、本発明のＴＣＲの使用によって、はるかに、より高い割合の患者がＴＣＲベースの養子免疫療法を受けることが可能になる。図３Ｂ、３Ｃは、ＨＬＡ−Ａ２との関連においてＮＹ−ＥＳＯ−１；ＨＬＡ−Ａ１との関連においてＭＡＧＥ−Ａ３；ＨＬＡ−Ａ２との関連においてＭＡＧＥ−Ａ３及びＭＡＧＥ−Ａ１２；ならびに／又はＨＬＡ−Ｃｗ７との関連においてＭＡＧＥ−Ａ１２を認識するＴＣＲを使って治療できると期待されるであろうヒトメラノーマ（図３Ｂ）及び滑膜細胞肉腫（図３Ｃ）の患者人口の累積率を図解している。

実施例５
本実施例は、ＭＡＧＥファミリー由来の、様々なタンパク質のペプチドでパルスした、ＨＬＡ−Ｃｗ^＊０７０１又はＨＬＡ−Ｃｗ^＊０７０２を発現する標的細胞との共培養に反応した、ＴＣＲ５０２又はＴＣＲ ＦＭ８を発現する細胞の反応性を実証している。

ＮＧＦＲ、ＴＣＲ ５０２（配列番号４７）、又はＴＣＲ ＦＭ８（配列番号４９）で形質導入した細胞を、ＨＬＡ−Ｃｗ^＊０７０１又はＨＬＡ−Ｃｗ^＊０７０２を発現する細胞と共培養した。ＩＦＮ−γ（ｐｇ／ｍｌ）分泌を測定した。

結果は、ＭＡＧＥ−Ａ１２（ＶＲＩＧＨＬＹＩＬ；配列番号４）でパルスすると、ＴＣＲ ５０２で形質導入した細胞が、ＨＬＡ−Ｃｗ^＊０７０１又はＨＬＡ−Ｃｗ^＊０７０２を発現する細胞を認識することと、ＭＡＧＥ−Ａ１２（ＶＲＩＧＨＬＹＩＬ；配列番号４）でパルスすると、ＴＣＲ ＦＭ８で形質導入した細胞がＨＬＡ−Ｃｗ^＊０７０２を発現する細胞を認識することを実証した（図４）。ＮＧＦＲで形質導入した細胞は、何ら顕著な反応性を示さなかった。

実施例６
本実施例は、抗ＭＡＧＥ−Ａ３及び抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲの特異性を実証している。

抗ＣＤ３抗体で刺激した後、単一のドナー由来のＰＭＢＣを、形質導入しないか、又は、抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ５０２（配列番号４７）、抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ＦＭ８（配列番号４９）、抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ Ａ１０（配列番号４６）、抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ １３−１８（配列番号４８）若しくは抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ １１２−１２０で形質導入した（were transduced with PMBC that were untransdiced or transduced with）。刺激後１３日間、形質導入したＴ細胞を、標準的な４時間の^５１Ｃｒ遊離試験で、表３に記載した腫瘍標的とインキュベートした。

図５（Ａ）−５（Ｄ）に示されるように、抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲ ５０２は、ＭＡＧＥ−Ａ１２及びＨＬＡ−Ｃｗ７を発現した腫瘍細胞を特異的に溶解し、ＭＡＧＥ−Ａ１２又はＨＬＡ−Ｃｗ７の発現を欠如した腫瘍細胞を溶解しなかった。抗ＭＡＧＥ−Ａ３ ＴＣＲ Ａ１０は、ＭＡＧＥ−Ａ３及びＨＬＡ−Ａ１を発現した腫瘍細胞を特異的に溶解したが、ＭＡＧＥ−Ａ３又はＨＬＡ−Ａ１の発現を欠如した腫瘍細胞を溶解しなかった。

実施例７
本実施例は、抗ＭＡＧＥ−Ａ３及び抗ＭＡＧＥ−Ａ１２ ＴＣＲの特異性を実証している。

サルの腎臓細胞株ＣＯＳ−７に、ＨＬＡ−Ａ^＊０１、Ｃ^＊０７:０１又はＣ^＊０７:０２のいずれか、加えて、ＭＡＧＥ−Ａ３、Ａ１、Ａ２、Ａ４、Ａ６、Ａ９、Ａ１０又はＡ１２のいずれかを、一晩、一過的にトランスフェクトした。次の日、ＴＣＲ Ａ１０、１３−１８で形質導入したＴ細胞若しくは形質導入されていないコントロール細胞、又は、ＴＣＲ ５０２、ＦＭ８で形質導入したＴ細胞若しくは形質導入されていないコントロール細胞のいずれかを加え、一晩共培養した後、ＥＬＩＳＡによって可溶性ＩＦＮガンマの放出を評価した。

ＭＡＧＥ−Ａ３反応性ＴＣＲ Ａ１０で形質導入したＴ細胞は、ＭＡＧＥ−Ａ３をトランスフェクトしたＨＬＡ−Ａ１^＋標的細胞を認識したが、ＭＡＧＥ−Ａ３:１７０−１７８エピトープの１〜３位間で異なるペプチドをコードしたＭＡＧＥ−Ａ１、Ａ２、Ａ４、Ａ６、Ａ９、Ａ１０又はＡ１２コンストラクトをトランスフェクトした標的を認識しなかった（図８Ａ）。ＴＣＲ ５０２又はＦＭ８のいずれかで形質導入したＴ細胞は、ＭＡＧＥ−Ａ１２をトランスフェクトしたＨＬＡ−Ｃ^＊０７:０２^＋標的を認識したが、ＭＡＧＥ−Ａ３、Ａ１、Ａ２、Ａ４、Ａ６、Ａ９、Ａ１０については認識しなかった（図８Ｂ）。一方、ＴＣＲ５０２で形質導入したＴ細胞は、ＭＡＧＥ−Ａ１２でトランスフェクトしたＨＬＡ−Ｃ^＊０７:０１^＋標的を認識し、ＦＭ８で形質導入したＴ細胞はそれを認識しなかった。試験した他のＭＡＧＥ−Ａファミリーメンバーは認識しなかった（図８Ｃ）。

実施例８
本実施例は、形質導入したＴ細胞の反応性を実証している。

ＣＤ８ ａｎｄ ＣＤ４Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ ｋｉｔｓ（ベクトン・ディッキンソン社、ＮＪ州、フランクリンレイクス）を使ったネガティブセレクションを行い、その後、ＣＤ８ ａｎｄ ＣＤ４ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｂｅａｄｓ（ベクトン・ディッキンソン社）を使ったポジティブセレクションにより、精製されたＣＤ８＋及びＣＤ４＋Ｔ細胞を単離した。単離されたＣＤ８＋及びＣＤ４＋細胞を、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）分析によって評価すると、含まれるコンタミネーションしたＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞はそれぞれ１％未満であった。

次いで、腫瘍細胞標的に対する、ＴＣＲで形質導入し、分離したＣＤ８＋及びＣＤ４＋のＴ細胞集団の反応を評価した。コンタミネーションしたＣＤ８＋Ｔ細胞を１％未満含む、ＴＣＲ Ａ１０で形質導入し、高度に精製されたＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＭＡＧＥ−Ａ３＋腫瘍細胞株３９７ ｍｅｌと、ＨＬＡ−Ａ^＊０１を安定にトランスフェクトしたＭＡＧＥ−Ａ３＋腫瘍細胞株１３００Ａ１ ｍｅｌとに対して、低レベルの、ただし顕著なレベルのＩＦＮガンマを放出した（表４Ａ；図９Ｂ）。ＴＣＲ Ａ１０で形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞は、３９７ ｍｅｌ 又は１３００−Ａ１ ｍｅｌに反応して、インターフェロン−ガンマを放出した（表４Ａ；図９Ａ）。ＴＣＲ ５０２又はＴＣＲ ＦＭ８で形質導入したＣＤ８＋Ｔ細胞は、６２４ ｍｅｌに反応して、インターフェロン−ガンマを放出し、ＴＣＲ ５０２は、３９７ ｍｅｌに反応して、インターフェロン−ガンマを放出した（図９Ｃ及び表４Ｂ）。

刊行物、特許出願及び特許を含む、本明細書中に引用した全ての参考文献は、それぞれの参考文献が参照によって組み込まれることが個々に且つ具体的に示されているのと同程度又はその全体が本明細書中に記載されているのと同程度まで、参照によって本明細書中に組み込まれる。

本発明の説明に関して（特に、以下の特許請求の範囲に関して）、用語「ａ」及び「ａｎ」及び「ｔｈｅ」及び「少なくとも１つの」並びに同様の指示対象の使用は、本明細書中に特記しないか文脈と明らかに矛盾しない限り、単数形及び複数形の両方をカバーすると解釈すべきである。１つ以上の事項の列挙の後で「少なくとも１つの」という用語の使用（例えば、「Ａ及びＢのうち少なくとも１つの」）は、本明細書中に特記しない又は文脈と明らかに矛盾しない限り、列挙した事項（Ａ若しくはＢ）から選択された１つの事項又は列挙した事項（Ａ及びＢ）のうち２つ以上の任意の組み合わせを意味すると解釈されるべきである。用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」及び「含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」は、特記しない限り、オープンエンドの用語（即ち、「〜を含むがそれらに限定されない」を意味する）と解釈すべきである。本明細書中の値の範囲の記述は、本明細書中に特記しない限り、その範囲内に入る各個別の値に個々に言及する省略方法として働くことのみを意図しており、各個別の値は、それが本明細書中に個々に記述されているかのように本明細書中に組み込まれる。本明細書中に記載される全ての方法は、本明細書中に特記しない又は文脈と明らかに矛盾しない限り、任意の適切な順序で実施できる。本明細書中に提供される任意の及び全ての例又は例示的語句（例えば、「等（ｓｕｃｈ ａｓ）」）の使用は、本発明をより明瞭にすることのみを意図しており、特段特許請求されない限り、本発明の範囲に限定を課すものではない。本明細書中のどの語句も、特許請求されていない任意の要素を本発明の実施に必須のものとして示していると解釈すべきではない。

発明者が知る、発明を実施するための最良の形態を含む、本発明の好ましい実施形態が本明細書中に記載されている。これらの好ましい実施形態のバリエーションは、上述の説明を読めば当業者に明らかとなり得る。本発明者らは、当業者がかかるバリエーションを適宜使用することを予期しており、本発明者らは、本明細書中に具体的に記載されたのとは異なる方法で本発明が実施されることを意図している。従って、本発明は、適用法によって許容されるとおり、本明細書に添付した特許請求の範囲に記載される主題の全ての変更形態及び同等物を含む。さらに、その全ての可能なバリエーションでの上記要素の任意の組み合わせが、本明細書中に特記しない又は文脈と明らかに矛盾しない限り、本発明によって包含される。

Claims (35)

1. ａ）ＨＬＡ−Ａ１に関連してメラノーマ抗原ファミリーＡ（ＭＡＧＥ Ａ）−３、又は、ｂ）ＨＬＡ−Ｃｗ７に関連してＭＡＧＥ−Ａ１２に対する抗原特異性を有する、単離又は精製されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）。
2. ａ）ＥＶＤＰＩＧＨＬＹ（配列番号２）を含むＭＡＧＥ−Ａ３エピトープ、又は、ｂ）ＶＲＩＧＨＬＹＩＬ（配列番号４）を含むＭＡＧＥ−Ａ１２エピトープに対する抗原特異性を有する、請求項１の単離又は精製されたＴＣＲ。
3. 配列番号５〜１０、１６〜２１、２６〜３１、又は３６〜４１のアミノ酸配列を含む、請求項２の単離又は精製されたＴＣＲ。
4. 配列番号１１〜１２、２２〜２３、３２〜３３、又は４２〜４３のアミノ酸配列を含む、請求項３の単離又は精製されたＴＣＲ。
5. 配列番号１３〜１４、２４〜２５、３４〜３５、又は４４〜４５のアミノ酸配列を含む、請求項４の単離又は精製されたＴＣＲ。
6. 請求項１〜５のいずれかのＴＣＲの機能部分を含む単離又は精製されたポリペプチドであって、機能部分が、配列番号５〜１０、１６〜２１、２６〜３１、又は３６〜４１のアミノ酸配列を含む、ポリペプチド。
7. 部分が、配列番号１１〜１２、２２〜２３、３２〜３３、又は４２〜４３のアミノ酸配列を含む、請求項６の単離又は精製されたポリペプチド。
8. 部分が、配列番号１３〜１４、２４〜２５、３４〜３５、又は４４〜４５のアミノ酸配列を含む、請求項７の単離又は精製されたポリペプチド。
9. 請求項６〜８のいずれかのポリペプチドのうち少なくとも１つを含む、単離又は精製されたタンパク質。
10. 配列番号５〜７、１６〜１８、２６〜２８、又は３６〜３８のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド鎖；および
    配列番号８〜１０、１９〜２１、２９〜３１、又は３９〜４１のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチド鎖を含む、請求項９の単離又は精製されたタンパク質。
11. 配列番号１１、２２、３２、又は４２のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド鎖；および
    配列番号１２、２３、３３、又は４３のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチド鎖を含む、請求項１０の単離又は精製されたタンパク質。
12. 配列番号１３、２４、３４、又は４４のアミノ酸配列を含む第一のポリペプチド鎖；および
    配列番号１４、２５、３５、又は４５のアミノ酸配列を含む第二のポリペプチド鎖を含む、請求項１１の単離又は精製されたタンパク質。
13. タンパク質が融合タンパク質である、請求項９〜１２のいずれか１項のタンパク質。
14. タンパク質が組換え抗体である、請求項９〜１３のいずれか１項のタンパク質。
15. 請求項１〜５のいずれか１項のＴＣＲ、請求項６〜８のいずれか１項のポリペプチド、又は請求項９〜１４のいずれか１項のタンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む、単離又は精製された核酸。
16. 配列番号４６〜４９のいずれかを含むヌクレオチド配列を含む、請求項１５の核酸。
17. 請求項１６の核酸のヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含む、単離又は精製された核酸。
18. 請求項１５〜１７のいずれか１項の核酸のヌクレオチド配列に対し、ストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチド配列を含む、単離又は精製された核酸
19. 請求項１５〜１８のいずれか１項の核酸を含む、組換え発現ベクター。
20. 請求項１９の組換え発現ベクターを含む、単離された宿主細胞。
21. 細胞が末梢血リンパ球（ＰＢＬ）である、請求項２０の単離された宿主細胞。
22. ＰＢＬがＴ細胞である、請求項２１の単離された宿主細胞。
23. 細胞が、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である、請求項２０の単離された宿主細胞。
24. 請求項２０〜２３のいずれか１項の少なくとも１つの宿主細胞を含む、細胞集団。
25. 請求項１〜５のいずれか１項のＴＣＲの機能部分に特異的に結合する抗体、又はその抗原結合部分であって、機能部分が、配列番号５〜１０、１６〜２１、２６〜３１、又は３６〜４１のアミノ酸配列を含む、抗体、又はその抗原結合部分。
26. 請求項１〜５のいずれかのＴＣＲ、請求項６〜８のいずれかのポリペプチド、請求項９〜１４のいずれかのタンパク質、請求項１５〜１８のいずれかの核酸、請求項１９の組換え発現ベクター、請求項２０〜２３のいずれかの宿主細胞、請求項２４の細胞集団、請求項２５の抗体又はその抗原結合部分、および医薬的に許容される担体を含む、医薬組成物。
27. 宿主における癌の存在を検出する方法であって：
    （ｉ） 癌細胞を含む試料を、請求項１〜５のいずれか１項のＴＣＲ、請求項６〜８のいずれか１項のポリペプチド、請求項９〜１４のいずれか１項のタンパク質、請求項１５〜１８のいずれか１項の核酸、請求項１９の組換え発現ベクター、請求項２０〜２３のいずれか１項の宿主細胞、請求項２４の細胞集団、請求項２５の抗体又はその抗原結合部分を接触させることによって、複合体を形成すること、および
    （ｉｉ） 複合体を検出すること
    を含み、
    複合体の検出が、宿主における癌の存在を表す、方法。
28. 宿主における癌の治療又は予防の方法であって、宿主に、請求項１〜５のいずれか１項のＴＣＲ、請求項６〜８のいずれか１項のポリペプチド、請求項９〜１４のいずれか１項のタンパク質、請求項１５〜１８のいずれか１項の核酸、請求項１９の組換え発現ベクター、請求項２０〜２３のいずれか１項の宿主細胞、請求項２４の細胞集団、請求項２５の抗体若しくはその抗原結合部分、又は請求項２６の医薬組成物を、宿主における癌を治療又は予防するのに有効な量で投与することを含む、方法。
29. 癌が、メラノーマ、乳癌、白血病、甲状腺癌、胃癌、膵臓癌、肝臓癌、肺癌、卵巣癌、多発性骨髄腫、食道癌、腎臓癌、頭部癌、頸部癌、前立腺癌、又は尿路上皮癌である、請求項２７又は２８の方法。
30. 宿主細胞が、宿主に対して自己の細胞である、請求項２７〜２９のいずれか１項の方法。
31. 集団の細胞が、宿主に対して自己の細胞である、請求項２７〜２９のいずれか１項の方法。
32. 癌の治療又は予防において使用するための、請求項１〜５のいずれか１項のＴＣＲ、請求項６〜８のいずれか１項のポリペプチド、請求項９〜１４のいずれか１項のタンパク質、請求項１５〜１８のいずれか１項の核酸、請求項１９の組換え発現ベクター、請求項２０〜２３のいずれか１項の宿主細胞、請求項２４の細胞集団、請求項２５の抗体若しくはその抗原結合部分、又は請求項２６の医薬組成物。
33. 癌が、メラノーマ、乳癌、白血病、甲状腺癌、胃癌、膵臓癌、肝臓癌、肺癌、卵巣癌、多発性骨髄腫、食道癌、腎臓癌、頭部癌、頸部癌、前立腺癌、又は尿路上皮癌である、請求項３２のＴＣＲ、ポリペプチド、タンパク質、核酸、組換え発現ベクター、宿主細胞、細胞集団、抗体若しくはその抗原結合部分、又は医薬組成物。
34. 宿主細胞が、宿主に対して自己の細胞である、請求項３２又は３３の宿主細胞。
35. 集団の細胞が、宿主に対して自己の細胞である、請求項３２〜３４のいずれか１項の細胞集団。

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