JP2014505725A

JP2014505725A - 前立腺がん治療薬

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Publication number: JP2014505725A
Application number: JP2013554436A
Authority: JP
Inventors: ユタカ宮内
Original assignee: ユタカ宮内
Priority date: 2011-05-10
Filing date: 2011-08-20
Publication date: 2014-03-06
Anticipated expiration: 2031-08-20
Also published as: WO2012154192A1; EP2707011A1; EP2707011A4; TW201306857A; TWI504403B; CA2812217A1; JP5760098B2; US8425952B2; CA2812217C; US20130045288A1

Abstract

ヒトを対象とする前立腺がんの治療方法を開示する。この方法は、新鮮な柑橘類の果皮を日本酒に抽出して得られる組成物を、抗前立腺がん有効量で投与する。
【選択図】なし

Description

本発明は、前立腺がんを治療するための方法に関する。

ある種の天然に産出する非栄養的な活性物質は、植物中に存在し植物体もしくは果実から抽出でき、それらは医学的な治療性能を示すことが知られている。特に、柑橘類の果汁もしくはオレンジの果皮から、残留物からの抽出物の状態で単離されるある種のフラボノイド化合物は、がんの治療および予防用の薬剤として使用されることが示されている。例えば、特許文献１を参照されたい。その全ての記載は、参照内容として本明細書の記載とする。

特許文献１は、特にオレンジ果汁工場からの冷圧搾オレンジ果皮油の固形廃棄物から得られるオレンジ果皮抽出物が、ネズミのイン・ビボモデルでの試験において、大腸がんの治療における潜在的な効力を示したことを開示している。これらの廃棄果皮油固形物は温エタノール中に溶解させ、繰り返し洗浄後、試験用の医薬成分として使用される。

米国特許第７２０１９２８号

本発明者は、いくつか異なる種類の柑橘類の果皮およびアロエの日本酒抽出物から調製される組成物が、有意な薬効を示し、ヒトの前立腺がんの治療および軽減に効果的であることを発見した。より具体的に、本発明者は、本発明の方法に用いられる特定の組成物がヒトの前立腺がんを縮小し、寛解に至ることが可能であることを発見した。

本発明の方法は、ヒトの前立腺がんの治療であって、そのような治療を必要とするヒトもしくは前立腺がんの兆候を示すヒトに、新鮮な柑橘類の果皮およびアロエから得られる抽出物を抗前立腺がん有効量で投与する。特に本発明は、新鮮な柑橘類の果実の皮（ＣＰＥ）の日本酒抽出物を抗前立腺がん有効量で投与することにより、上記の治療を必要とするヒトの前立腺がんの増殖を抑制する方法を提供する。

Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、ＰＣ−３細胞を注射した未治療のネズミの写真である。Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、２５μＬのＣＰＥの注射を開始して１８日後に撮影されたネズミの写真である。Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、５０μＬのＣＰＥの注射を開始して１８日後に撮影されたネズミの写真である。２３日間の治療後のネズミの体重の変異を示すグラフである。２３日間の治療後のネズミの腫瘍の体積の変異を示すグラフである。Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、ＰＣ−３細胞を注射した未治療のネズミの写真である。Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、１００μＬのＣＰＥの経口投与を開始して１７日後に撮影されたネズミの写真である。Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、２００μＬのＣＰＥの経口投与を開始して１７日後に撮影されたネズミの写真である。２１日間の治療後のネズミの体重の変異を示すグラフである。Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、ＰＣ−３細胞を注射した未治療のネズミの写真である。Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、５０μＬのＣＰＥの経口投与を開始して２１日後に撮影されたネズミの写真である。Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、１００μＬのＣＰＥの経口投与を開始して２１日後に撮影されたネズミの写真である。２１日間の治療後のネズミの腫瘍の体積の変異を示すグラフである。

本発明の組成物は、経口投与、筋肉内投与、あるいは皮下投与のいずれも可能である。好ましい方法は経口投与である。通常は、ヒトに対する１日の総投与量は、１日当たり約５乃至１２０ｃｃ、好ましくは１日当たり１０乃至６０ｃｃ、最も好ましくは１日当たり１０乃至３０ｃｃである。この総投与量は、１日に１乃至３回の増分で与えることができ、例えば１日当たり１０ｃｃの総投与量を、３ｃｃを１日に２回および４ｃｃを１日に１回からなる３回の増分で与えることができる。１日の総投与量が３０ｃｃである場合には、３回の１０ｃｃからなる増分、もしくは１回の２０ｃｃの投与量と１回の１０ｃｃの投与量との組み合わせにより与えることができる。治療は一般に患者の前立腺がんが寛解するまで継続し、この寛解は通常、血中のタンパク質特異性抗原（ＰＳＡ）レベルの測定もしくは他の前立腺がんの存在を診断するための一般的な医学的手法を用いて測定される。当業者は、ここに記載する動物およびヒトの実験結果を用いて、前立腺がんの治療を必要とするヒトに投与すべき有効量を決定することができる。「有効量」とは、動物もしくはヒトのいずれかのイン・ビボにおいて、前立腺がんの増殖を抑制する濃度を意味する。例えば、ヒトの試験投与量は、動物の研究における有効な投与量、例えばＩＣ５０値から外挿できる。あるいは、イン・ビボにおける有効量を、体重若しくは体表面積（例、ＡＵＣ：曲線下面積）を基準として外挿することもできる。上記の外挿法は、この技術において一般的である。本発明に従い新鮮な柑橘類の果皮の抽出物を含む組成物は、１種もしくはそれ以上の添加剤を用い、栄養補助食品として投与するように処方できる。

食品薬としての組成物は、任意の経路で投与するように処方できる。その経路は、限定される訳ではないが、吸入もしくは通気（口もしくは鼻を経由）、経口、バッカル、非経口、膣内あるいは直腸内を経由する各種の投与法を含む。一つの態様として経口投与では、上記組成物を直接食物に加えて、通常の食事の一部として摂取することができる。食品薬を食物に添加もしくは混合するため、様々な方法が当業者に知られている。本発明の組成物は、機能的もしくは栄養的な補助食品中に、１乃至９９質量％の割合で使用することができる。

本発明において使用する組成物は、錠剤もしくはカプセルの形状でも投与することができ、錠剤やカプセルは薬学的に許容される賦形剤、例えば、結合剤、充填剤、潤滑剤、崩壊剤、もしくは湿潤剤と共に、通常の方法で調製される。錠剤およびカプセルの処方において使用される特定の化合物の例は、米国薬局方に詳細に記載されている。前記抽出物を含む錠剤は、薬剤の活性を増大もしくは維持するため、この技術分野でよく知られている方法により被覆することもできる。

経口投与のため、液状の調剤も用いることができる。液状の調剤は、溶液、シロップ、もしくは懸濁液のいずれの形態でもよく、あるいは使用前に水もしくは他の適切な溶剤で戻すことができる乾燥品であってもよい。上記の液状の調剤は、薬学的に許容できる添加剤と共に通常の方法で調製でき、添加剤の例は、懸濁剤、乳化剤、非水性溶剤、および保存剤である。具体的な添加剤についても、当業者によく知られており、米国薬局方のような文書に列挙されている。ある態様において、経口投与は、食品薬の活性成分が放出される時期が制御されるように処方される。バッカル投与では、抽出物を錠剤もしくは薬用ドロップとして処方することができる。

吸入投与では、本発明で使用する組成物を、気密容器内の噴霧剤スプレーの形態もしくは適切な高圧ガスを用いての噴霧器により供給できる。気密噴霧剤の場合、投与量の単位はバルブを配置することによって測定することができ、これにより計量された投与量を放出する。

非経口投与される組成物は、大量投与もしくは連続注入のいずれかの方法で注射が可能となるように処方される。注射の処方は、アンプルのような単一投与形態もしくは多数投与単位において、添加する保存剤と共に処方できる。注射のための組成物は、油性もしくは水性の溶剤中の懸濁液、溶液、もしくは乳剤のいずれの形態であってもよい。組成物は、懸濁剤、安定化剤、および／または分散剤のような調合剤を含むことができる。活性成分は、使用前に適切な溶剤で戻すための粉末状態で存在していてもよい。非経口注射のための調合剤の具体例は、米国薬局方に記載されている。直腸内投与もしくは膣内投与については、本発明で使用する組成物を座薬、クリーム、ゲル、もしくは持続性浣腸剤として処方することができる。

栄養補助食品に対しては、上記組成物を５乃至９５質量％の割合で加え、この技術分野の通常の方法に従い混合することができる。動物用の栄養補助食品は、様々な形態で調製できる。そのような形態は、限定される訳ではないが、液体、粉末、もしくは固形丸薬の形態を含む。ただし、好ましい治療方法は、本発明の組成物の経口投与である。

本発明の組成物は、新鮮な柑橘類の果実の皮を剥き、得られた皮を日本酒と一定時間、柑橘類の果実の日本酒に溶解可能である全ての化合物の実質的に全量を抽出するために充分な温度および圧力で混合することにより製造できる。好ましくは、抽出工程の温度が周囲の温度もしくは室温であり、圧力が大気圧である。本明細書で使用する「室温」は、温度調整された建物内の温度を意味し、「周囲温度」はその周囲の温度を意味する。抽出工程における温度と圧力は、処理方法における個々の必要性に適合するように変更することができる。従って、抽出速度を変更するため、より高温および／またはより高圧の条件を採用することができる。好ましくは、温度は約４℃乃至１２０℃の範囲であり、圧力は大気圧（１気圧、１バール）乃至１００バールの範囲である。

また、個々の果実の皮を剥き、果皮から抽出し、抽出物を混合し、さらに本明細書に記載するように処理してもよい。使用する日本酒は、好ましくは日本製であって、最も好ましくは精製された一級酒である。一般にそのような日本酒は、アルコール分が約５乃至２０％であり、好ましくは約１５％である。

一般的な原則として、抽出時間は約１乃至２５日間であり、好ましくは５乃至２０日間であり、最も好ましくは７乃至８日間である。その後、濾過により残っている果皮を液体抽出物から除き、分離した抽出物を約１乃至６０ヶ月間、好ましくは６乃至１８ヶ月間、最も好ましくは約１２ヶ月間熟成させる。熟成は、好ましくは室温または周囲の温度で実施する。ただし、この点についても変更が可能であり、例えば、処理者における特別な事情に応じて、より高い温度を採用できる。液体はそのまま使用しても、濾過によって固形分の残渣を除いてもよい。組成物中のアルコールは除去されないが、濾過工程の有無にかかわらず、本明細書に記載の方法において上記液体を使用することができる。

本発明者は、さらに本発明の製造において様々な柑橘類の種類を使用した結果、以下の柑橘類の果実の果皮を用いることが特に好ましいことを発見した：
ネーブルオレンジ、
ハッサク(C. hassaku Hort)、
レモン、
ダイダイ(C. aurantium)、
宮内伊予柑(C. miyauchi iyo Hort)、
ウンシュウミカン(C. unshiu)、
キンカン(fortunella, kumquat/cumquat)、
タンジェリン(tangerine)。

これら特定の果実の皮をそれぞれ使用しても、様々な種類を組み合わせて使用してもよい。抽出物は、添加剤としてキダチアロエ（aloe arborescens）を含むことができる。

柑橘類の果実の皮は、日本で栽培され収穫された柑橘類の果実から得られることがさらに好ましい。皮を剥く前に柑橘類の果実を水で洗浄し、手で皮を剥く。

本発明で使用する組成物に適する製造方法は、使用に適した柑橘類の果実を含め、米国特許第５１５２９９０号に記載されている。その全ての記載は、参照内容として本明細書の記載とする。

［実施例１］
患者は８０歳の男性であり、排尿障害および前立腺がんと診断された。患者は、前立腺の摘出を拒否した。患者に、本発明の柑橘類の果皮の抽出物組成物（ＣＰＥ）を、約一年間かけて経口投与して治療した。経口投与は朝、昼、および就寝前に分割して各５ｃｃ、１日の総投与量は１５ｃｃであった。患者は上記期間中である２００４年６月９日から２００５年６月６日にかけて、ＬＨ−ＲＨ（アナログ注射による黄体形成ホルモン−放出剤、ナフトピジル利尿剤およびビカルタミド）の薬物治療も受けた。患者のＰＳＡを、治療期間の一年間、おおよそ一ヶ月毎を基準に測定した。この治療およびＰＳＡ試験の結果を第１表に示す。

第１表
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日付ＰＳＡ
──────────────────────────────────────
２００４年６月９日２７８
２００４年７月２６日１９．９
２００４年８月２３日１２．４
２００４年９月１８日１０
２００４年１０月１８日８．９５
２００４年１１月１５日７．９１
２００４年１２月１３日５．２６
２００５年１月８日３．８９
２００５年３月７日１．９
２００５年５月９日１．２６
２００５年６月６日１
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［実施例２］
患者は６７歳の男性であった。患者は１９９４年に冠動脈バイパス手術を受け、２００５年６月２日に排尿障害で診察を受けた。患者は、カルベディロール；バイアスピリン；ジルチアゼム塩酸塩；およびメキシレチン塩酸塩の薬物治療を受けていた。本発明の組成物（ＣＰＥ）の経口投与を２００５年６月７日に開始し、２００７年３月１７日まで継続した。最初の経口投与は朝５ｃｃおよび就寝時５ｃｃに分割し、１日の総量は１０ｃｃであった。患者のＰＳＡを、２００５年６月６日から２００７年３月１７日まで周期的な間隔で測定した。治療およびＰＳＡ試験の結果を第２表に示す。

第２表
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日付ＰＳＡ
──────────────────────────────────────
２００５年６月６日２４．４
２００５年６月２２日２４．４
２００５年７月１４日２４．４
２００５年７月２日より、投与量を１５ｃｃ（１日３回５ｃｃずつ）に増量した。
──────────────────────────────────────
２００５年８月２日２０．５
２００５年８月１５日１３．３
２００５年８月２２日＊１３．３
２００５年９月２１日１．１
２００５年１０月１８日０．５
２００５年１２月２０日０．５
２００６年２月１４日０．４
２００６年４月１１日０．４
２００６年８月４日０．３
２００６年１２月４日０．３
２００７年４月４日０．３
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註（＊）
患者はＴ３ａＮＯＭＯのＣ段階の浸潤がんと診断され：ビカルタミド（８０ｍｇ）；４週間に一度、酢酸ゴセレリン（３．６ｍｇ）の注射；タムスロシン塩酸塩利尿剤による治療を受けた。

以上の臨床結果では、長期間に及ぶＰＳＡの測定における有意性がある減少によって証明されるように、前立腺がんと診断されたヒトの患者に本発明の組成物を経口投与することで、がんを実質的に改善および治療する結果が示された。

［実施例３］
本発明の組成物の治療における有効性を、ヒトのがん細胞腫瘍の異種移植を受けたＳＣＩＤネズミを治療することによってイン・ビボで評価した。具体的には、５週齢の雄のヌードマウス（台湾、花蓮県、慈済大学動物センターより購入）を、制度上のガイドラインに従い無菌状態に殺菌した隔離室で保管し、食物、水、かご、および寝床の全てを使用前に殺菌した。全ての手順は、日本および台湾の国立動物管理使用委員会により承認された。０．２ｍｌのリン酸緩衝塩水（ＰＢＳ）中のがん細胞（５×１０^６）を、各ヌードマウスの肩甲骨間に皮下注射した。移植後、ノギスを用いて腫瘍の大きさを測定し、下記式に従い腫瘍の体積を概算した：
腫瘍の体積（ｍｍ^３）＝Ｌ×Ｗ^２／２
式中、Ｌは長さ、Ｗは幅である。

腫瘍が５０〜１００ｍｍ^３の平均サイズに到達後、実験動物に５０μｌのＰＢＳ（対照群）もしくはＣＰＥ（低投与量：２５μｌ、高投与量：５０μｌ）のいずれかを、２３日の間に週５回、腹膜内注射した。実験の最後に、各群について腫瘍の平均体積と腫瘍の重さ／体重の平均比を測定した。それを、平均値±ＳＤで表す。

図１のＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、ＰＣ−３細胞を注射した未治療のネズミの写真である。写真は、腫瘍の体積がおおよそ５０〜１００ｍｍ^３の大きさに達して１８日後に撮影された。図２のＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、２５μＬのＣＰＥの注射を開始して１８日後に撮影されたネズミの写真である。図３のＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、５０μＬのＣＰＥの注射を開始して１８日後に撮影されたネズミの写真である。これらの写真において、各実験動物に存在する腫瘍は容易に認識できるように丸で囲んである。

これらの図から理解できるように、２５μＬのＣＰＥで治療したネズミは、ＰＣ−３異種移植腫瘍が強力に縮小する結果を示した。５０μＬのＣＰＥで治療したネズミでは、腫瘍サイズのほぼ完全は縮小を示した。

図４は、上記のＣＰＥの注射による治療から２３日後および治療しない対照群の３群のネズミについて、体重の変異（グラム）を示すグラフである。ここに示されるように、腫瘍が増殖したにもかかわらず、平均体重の変化は比較的小さい。

図５は、上記のＣＰＥの注射による治療から２３日後および治療しない対照群の３群のネズミについて、腫瘍の体積（ｍｍ^３）の変異を示すグラフである。示されている通り、未治療群と２５μＬの注射を受けた群との比較から、腫瘍の体積に有意性がある縮小が観察された。５０μＬの治療を受けた群における腫瘍の体積の縮小は、さらに大きかった（腫瘍は、ほぼ完全に消滅した）。

［実施例４］
実施例３の記載と同じ注射、成分、および測定法を採用し、それぞれ４匹からなる３群のネズミを治療した。腫瘍が５０〜１００ｍｍ^３の平均サイズに到達後、実験動物に５０μｌのＰＢＳ（対照群）の注射または１００μＬもしくは２００μＬのＣＰＥの経口投与いずれかを、２１日の間に週５回、行った。実験の最後に、各群について腫瘍の平均体積と腫瘍の重さ／体重の平均比を測定し、平均値±ＳＤで表した。

図６のＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、ＰＣ−３細胞を注射した未治療のネズミの写真である。写真は、腫瘍の体積がおおよそ５０〜１００ｍｍ^３の大きさに達して１７日後に撮影された。図７のＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、週５回の１００μＬのＣＰＥの経口投与から１７日後に撮影されたネズミの写真である。図８のＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、週５回の２００μＬのＣＰＥの経口投与から１７日後に撮影されたネズミの写真である。これらの写真において、各実験動物に存在する腫瘍は容易に認識できるように丸で囲んである。

これらの図から理解できるように、１００μＬのＣＰＥの経口投与で治療したネズミは、ＰＣ−３異種移植腫瘍が顕著に縮小する結果を示した。２００μＬのＣＰＥで治療したネズミは、さらに大きな腫瘍サイズの縮小を示した。腫瘍のいくつかは、２００μＬの投与で消滅した。

［実施例５］
ＣＰＥの治療における有効性を、ヒトのがん細胞腫瘍の異種移植を受けたＳＣＩＤネズミを治療することによってイン・ビボで試験した。５週齢の雄のヌードマウス（台湾、花蓮県、慈済大学動物センターより購入）を、制度上のガイドラインに従い無菌状態に殺菌した隔離室で保管し、食物、水、かご、および寝床の全てを使用前に殺菌した。全ての手順は、国立動物管理使用委員会により承認された。

０．２ｍｌのＰＢＳ中のがん細胞（５×１０^６）を、各ヌードマウスの肩甲骨間に皮下注射した。移植後、ノギスを用いて腫瘍の大きさを測定し、下記式に従い腫瘍の体積を概算した：
腫瘍の体積（ｍｍ^３）＝Ｌ×Ｗ^２／２
式中、Ｌは長さ、Ｗは幅である。

腫瘍が５０〜１００ｍｍ^３の平均サイズに到達後、実験動物にＣＰＥの腹膜内（ｉ．ｐ．）処置もしくは経口投与を行った。ＣＰＥの腹膜内処置では、実験動物に５０μｌのＰＢＳ（対照群）もしくはＣＰＥ（低投与量：２５μｌ、高投与量：５０μｌ）のいずれかを、２３日の間に週５回、注射した。ＣＰＥの経口投与では、実験動物に２００μＬの滅菌水（対照群）もしくはＣＰＥ（低投与量：５０μｌ、高投与量：１００μｌ）のいずれかを経口投与した。いずれの治療も、２１日の間に週に５日実施した。実験の最後に、腫瘍を摘出して秤量し、腫瘍の一部を緩衝ホルマリン中に固定し、残りの部分をウェスタンブロット法で分析した。最後に、各群について腫瘍の平均体積と腫瘍の重さ／体重の平均比を測定した。それを、平均値±ＳＤで表す。

［結果］
抗がん作用（異種移植モデル）
ＣＰＡの経口投与により、イン・ビボにおいて腫瘍増殖が抑制される。
経口ＣＰＥの治療における有効性をイン・ビボで、ヒト前立腺がん細胞の系統ＰＣ−３腫瘍の異種移植を受けた免疫不全のネズミを治療することによって試験した。実験動物に、２１日の間に週５回、５０および１００μＬのＣＰＥを経口投与した。図９に示すように、各群における体重は有意な違いを示さず（陽性群：２０．４１±２．１１ｇ、ＣＰＥ５０μＬ：２１．２２±０．５３ｇ、ＣＰＥ１００μＬ：２１．３４±０．９０ｇ）、研究期間中に不健康な症候は観察されなかった。この結果は、ＣＰＥの経口投与に、著しい副作用や毒性がないことを示唆している。図１０のＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、ＰＣ−３細胞を注射した未治療のネズミの写真であり、腫瘍の体積がおおよそ５０〜１００ｍｍ^３のサイズに到達して２１日後に撮影された。図１１のＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、週５回の５０μＬのＣＰＥの経口投与を開始して２１日後に撮影されたネズミの写真である。図１２のＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、週５回の１００μＬのＣＰＥの経口投与を開始して２１日後に撮影されたネズミの写真である。各例では、腫瘍の体積がおおよそ５０〜１００ｍｍ^３のサイズに到達してから、ＣＰＥの経口投与を開始した。これらの写真は、本発明に従い治療した実験動物における腫瘍のサイズの減少を明確に示している。

図１３は、２１日間のＣＰＥの経口投与後における、ネズミの腫瘍の体積の縮小を描写するグラフである。特に本発明者は、陽性（未治療）群における平均腫瘍サイズが１０２１．９±４７６ｍｍ^３であって、ＣＰＥ５０μＬおよび１００μＬを経口投与した群においてそれぞれ５７．７±４２．０ｍｍ^３を示すまで劇的に縮小していることに着目した。ただし、ＣＰＥ５０μＬ経口投与群とＣＰＥ１００μＬ経口投与群との間には、投与量による応答の違いは観察されなかった。これらの結果は、イン・ビボにおけるＣＰＥの経口投与による抗前立腺がん作用の増加を明確に示している。

これらの図から理解できるように、２５μＬのＣＰＥで治療したネズミは、ＰＣ−３異種移植腫瘍が強力に縮小する結果を示した。５０μＬのＣＰＥで治療したネズミでは、腫瘍サイズのほぼ完全な縮小を示した。

Claims

ヒトを対象にする前立腺がんの治療方法であって、新鮮な柑橘類の果実の皮の日本酒抽出物を抗前立腺がん有効量で、上記の治療を必要とする対象に投与する方法。
抽出物を経口投与する請求項１に記載の方法。
１日に１乃至５回、５乃至１２０ｍｌの投与量で抽出物を経口投与する請求項１に記載の方法。
１日の総投与量が１０乃至６０ｍｌとなるように抽出物を経口投与する請求項１に記載の方法。
対象の前立腺がんが寛解するために充分な期間、抽出物を経口投与する請求項１に記載の方法。
上記抽出物が、新鮮な柑橘類の果実から皮を剥き、得られた皮を日本酒と混合し、柑橘類の皮に含まれる日本酒に溶解可能である実質的に全ての化合物を日本酒中に抽出するため充分な温度および圧力の条件下で混合物を一定期間、放置することにより得られる請求項１に記載の方法。
上記温度が周囲温度である請求項６に記載の方法。
上記温度が室温である請求項６に記載の方法。
上記温度が４℃乃至１２０℃であり、上記圧力が大気圧乃至１００バールである請求項６に記載の方法。
１種類以上の新鮮な柑橘類の果実を日本酒と混合する請求項６に記載の方法。
新鮮な柑橘類の果実の皮が、日本で栽培され収穫された柑橘類からなる群より選ばれる請求項１０に記載の方法。
皮を剥く前に、柑橘類の果実を水で洗浄する請求項６に記載の方法。
新鮮な柑橘類の果実の皮を手で剥く請求項１に記載の方法。
新鮮な柑橘類の果実が、ネーブルオレンジ、ハッサク、レモン、ダイダイ、宮内伊予柑、ウンシュウミカン、キンカン、タンジェリン、およびそれらの組み合わせからなる群より選ばれる請求項１１に記載の方法。
上記抽出物がさらにキダチアロエを含む請求項１１に記載の方法。
上記抽出物を周囲温度で熟成させる請求項６に記載の方法。
前立腺がんを有するヒトを治療する方法であって、ネーブルオレンジ、ハッサク、レモン、ダイダイ、宮内伊予柑、ウンシュウミカン、およびそれらの組み合わせからなる群より選ばれる新鮮な柑橘類の果実の皮の日本酒抽出物を抗前立腺がん有効量で、上記ヒトに投与する方法。
前立腺がんが寛解するために充分な期間、治療を継続する請求項１７に記載の方法。
１日に２乃至３回、１０ｍｌの投与量で日本酒抽出物を経口投与することにより治療を実施する請求項１７に記載の方法。