JP2014055773A - 抗ｐｓｋポリクローナル抗体並びにそれを用いたｐｓｋの免疫学的分析方法およびｐｓｋの免疫学的分析用キット - Google Patents

Abstract

【課題】ＰＳＫに特異的に反応するポリクローナル抗体、及びＰＳＫを特異的に検出することのできるＰＳＫの免疫学的分析方法を提供する。
【解決手段】前記課題は、ＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片を用いることを特徴とするＰＳＫの免疫学的分析方法、並びにＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片により解決することができる。
【選択図】図２

Description

本発明は、抗ＰＳＫポリクローナル抗体及びそれを用いたＰＳＫの免疫学的分析方法に関する。

カワラタケから抽出される蛋白多糖体は、抗腫瘍活性などを示し、前記蛋白多糖体を有効成分とする抗腫瘍剤などが、例えば、特開昭６０−４５５３３号公報（特許文献１）などに記載されている。このような蛋白多糖体のなかで、カワラタケ由来の前記蛋白多糖体の一種であるＰＳＫ（登録商標）〔商品名「クレスチン」（登録商標）〕は、皮内投与や静脈内投与だけでなく、経口投与によっても抗腫瘍活性を示すことが特長であり、臨床的にも経口投与製剤として用いられている。

ＰＳＫは、約１８〜３８％の蛋白質を含む蛋白多糖体であり、５０００以上（ゲル濾過法）の分子量、例えば５０００〜３０００００（ゲル濾過法）の分子量を有するものである。主要画分の糖部分はβ−Ｄ−グルカンで、このグルカン部分の構造は、１→３、１→４及び１→６結合を含む分枝構造である。

このＰＳＫに対する抗体としては、非特許文献１に、ＰＳＫに対するウサギポリクローナル抗体が開示されており、このポリクローナル抗体を用いた蛍光抗体法により、ＰＳＫを検出できることが記載されている。しかしながら、このポリクローナル抗体は、ＰＳＫを免疫原として用いたものであるが、ＰＳＫ以外の多糖類にも結合する抗体であり、ＰＳＫに特異的な抗体ではなかった。

特開昭６０−４５５３３号公報 特開平８−２０８７０４号公報

「インターナショナル・ジャーナル・オブ・イミュノファ−マコロジー（International Journal of Immunopharmacology）」（オランダ）１９８８年、第１０巻、ｐ．１０３−１０９

従来のＰＳＫは、後述のように熱水又はアルカリ溶液（例えば、アルカリ金属の水酸化物、特には水酸化ナトリウムの水溶液）で抽出し、精製した後に乾燥して得られていた。具体的には、例えば特許文献２の実施例２に記載のように、カワラタケ菌ＣＭ１０１株を培養し、得られた乾燥菌糸体から、０．１Ｍ水酸化ナトリウムで抽出することにより得られていた。このような方法で製造されたＰＳＫは、医薬品としては十分な効果を有するものであったが、このＰＳＫを、抗体を取得するための免疫原として用いた場合、非特許文献１に記載のように、ＰＳＫ以外の多糖類に結合するポリクローナル抗体しか得られず、ＰＳＫを特異的に測定することができなかった。

従って、本発明の目的は、ＰＳＫに特異的に反応するポリクローナル抗体を提供すること、及びＰＳＫを特異的に検出することのできるＰＳＫの免疫学的分析方法を提供することである。

本発明者は、ＰＳＫに特異的に反応するポリクローナル抗体について、鋭意研究した結果、驚くべきことに、カワラタケの熱水・アルカリ抽出物を免疫することによって、セルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造、並びにラミナリンのβ１，３グルカン及びβ１，６グルカンのグルカン構造に反応せず、ＰＳＫに特異的に反応するポリクローナル抗体を得ることができることを見出した。

従って、本発明は、ＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片を用いることを特徴とするＰＳＫの免疫学的分析方法に関する。本発明のＰＳＫの免疫学的分析方法によって、ＰＳＫの特異的な検出が可能である。

本発明のＰＳＫの免疫学的分析方法の好ましい態様においては、前記抗ＰＳＫポリクローナル抗体が、ＰＳＫのタンパク部分およびＰＳＫに特異的なグルカン構造の少なくともいずれかを認識する抗ＰＳＫポリクローナル抗体である。

本発明のＰＳＫの免疫学的分析方法の好ましい態様においては、前記抗ＰＳＫポリクローナル抗体が、ＰＳＫに反応し、そしてセルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造、並びにラミナリンのβ１，３グルカン及びβ１，６グルカンのグルカン構造に反応しない抗ＰＳＫポリクローナル抗体である。特には、前記抗ＰＳＫポリクローナル抗体のＰＳＫに対する結合力を１００とした場合の、セルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造、又はラミナリンのβ１，３グルカン、及びβ１，６グルカンのグルカン構造に対する結合力が３０％以下である。

本発明のＰＳＫの免疫学的分析方法の別の好ましい態様においては、酵素免疫測定法、免疫組織染色法、表面プラズモン共鳴法、ラテックス凝集免疫測定法、化学発光免疫測定法、蛍光抗体法、放射免疫測定法、免疫沈降法、ウエスタンブロット法、イムノクロマトグラフ法、磁気ビーズ凝集法、又は磁気ビーズ酵素免疫法を用いる。これらの分析方法を用いることにより、多様なＰＳＫの測定を行うことができる。

更に、本発明のＰＳＫの免疫学的分析方法の好ましい態様においては、前記ＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片と、ＰＳＫと反応する第２の抗体又はその抗原結合性断片と、を使用する。

本発明のＰＳＫの免疫学的分析方法の更に好ましい態様においては、前記抗ＰＳＫポリクローナル抗体若しくはその抗原結合性断片、又は前記第２の抗体若しくはその抗原結合性断片のいずれか一方の抗体若しくはその抗原結合性断片を固定化した固定化抗体を有する不溶性担体、ＰＳＫを含む可能性のある被検試料、残る一方の抗体若しくはその抗原結合性断片に標識を付した標識抗体を接触させ、前記不溶性担体上に固定化抗体とＰＳＫと標識抗体との複合体を形成する複合体形成工程と、前記複合体における標識からの信号を分析する分析工程と、を含む。

更に好ましくは、前記複合体形成工程が、第２の抗体として抗ＰＳＫモノクローナル抗体若しくはその抗原結合性断片を固定化した不溶性担体と、ＰＳＫを含む可能性のある被検試料とを接触させ、そして前記抗ＰＳＫポリクローナル抗体若しくはその抗原結合性断片に標識を付した標識抗体を接触させる工程である。本態様における、具体的な態様の１つはサンドイッチ法である。本発明のＰＳＫの免疫学的分析方法として、サンドイッチ法を用いることにより、ＰＳＫのダイナミックレンジの広い測定が可能である。

また、本発明のＰＳＫの免疫学的分析方法の好ましい態様においては、前記第２の抗体が、抗ＰＳＫモノクローナル抗体である。抗ＰＳＫモノクローナル抗体を用いることにより、更に特異性の高いＰＳＫの測定を行うことができる。

加えて、本発明のＰＳＫの免疫学的分析方法の好ましい態様においては、血中濃度の測定を行うものである。血中濃度の測定を行うことにより、ＰＳＫの薬効の予測およびＰＳＫの投与至適濃度の測定を行うことができる。

また、本発明は、ＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片に関する。本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片は、前記ＰＳＫの免疫学的分析方法に用いた場合、ＰＳＫの特異的な測定をすることができる。

本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片の好ましい態様においては、前記抗ＰＳＫポリクローナル抗体が、ＰＳＫのタンパク部分およびＰＳＫに特異的なグルカン構造の少なくともいずれかを認識する。

また、本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片の別の好ましい態様においては、前記抗ＰＳＫポリクローナル抗体が、ＰＳＫに反応し、そしてセルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造、並びにラミナリンのβ１，３グルカン、及びβ１，６グルカンのグルカン構造に反応しない。

また、本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体の抗原結合性断片の好ましい態様においては、前記抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ断片、ディアボディー、単一鎖抗体分子、及びマルチ特異性抗体からなる群から選択される。このような抗原結合性断片をもちいることにより、Ｆｃ断片によって起こる非特異反応を除くことができる。

更に、本発明は、ＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片、を含むことを特徴とする、ＰＳＫの免疫学的分析用キットに関する。本発明のＰＳＫの免疫学的分析用キットによれば、ＰＳＫの特異的な測定を、より簡便に行うことが可能である。

本発明のＰＳＫの免疫学的分析用キットの好ましい態様においては、前記抗ＰＳＫポリクローナル抗体が、ＰＳＫのタンパク部分およびＰＳＫに特異的なグルカン構造の少なくともいずれかを認識する。

また、本発明のＰＳＫの免疫学的分析用キットの別の好ましい態様においては、前記抗ＰＳＫポリクローナル抗体が、ＰＳＫに反応し、そしてセルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造、並びにラミナリンのβ１，３グルカン、及びβ１，６グルカンのグルカン構造に反応しない。

また、本発明のＰＳＫの免疫学的分析用キットの別の好ましい態様においては、抗ＰＳＫモノクローナル抗体又はその抗原結合性断片を更に含む。

本発明に係るＰＳＫの免疫学的分析方法では、ＰＳＫに特異的な抗ＰＳＫポリクローナル抗体を用いる。特には、ＰＳＫのタンパク部分およびＰＳＫに特異的なグルカン構造の少なくともいずれかを認識する抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片を用いる。又は、ＰＳＫに反応し、そしてセルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造、並びにラミナリンのβ１，３グルカン及びβ１，６グルカンのグルカン構造に反応しない抗ＰＳＫポリクローナル抗体を用いることもできる。また、本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体はＰＳＫに対する特異性が高いため、本発明のポリクローナル抗体を用いることによって、ＰＳＫの特異的な検出が可能である。更には、分析方法における測定感度の上昇、及び使用する抗ＰＳＫポリクローナル抗体量を減らすことも可能である。また、抗ＰＳＫポリクローナル抗体をサンドイッチ法に用いた場合には、ＰＳＫのダイナミックレンジの広い測定が可能である。

すなわち、本発明に係るＰＳＫの免疫学的分析方法は、医薬に含まれるＰＳＫの量を正確に測定し、医薬の品質管理に用いることができる効果を奏する。また、生体に投与されたＰＳＫを測定することが可能であり、ＰＳＫの体内動態を調べることができる効果を奏する。

なお、本発明に係るＰＳＫの免疫学的分析方法では、ＰＳＫの体内動態を調べることができるため、ＰＳＫの薬効の予測およびＰＳＫの投与至適濃度を把握するためのデータ測定にも利用することができる。

本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体の力価を示したグラフである。 本発明の抗ＰＳＫウサギポリクローナル抗体の特異性をＢｉａｃｏｒｅにより評価した結果を示すグラフである。 Ｂａｌｂ／ｃマウスにＰＳＫを免疫し、血清中の抗体価を測定したグラフである。 精製された抗ＰＳＫモノクローナル抗体の抗体価を示すグラフである。 抗ＰＳＫマウスモノクローナル抗体の特異性を競合ＥＬＩＳＡにより評価（したグラフである。 本発明の抗ＰＳＫモノクローナル抗体と、２Ｇ９抗体又は５Ｇ５抗体とを用いたサンドイッチＥＬＩＳＡによるＰＳＫの検出を示したグラフである。 ２Ｇ９抗体の重鎖可変領域ドメインのヌクレオチドの塩基配列及びアミノ酸配列を示す図である。 ２Ｇ９抗体の軽鎖可変領ドメインのヌクレオチドの塩基配列及びアミノ酸配列を示す図である。 ５Ｇ５抗体の重鎖可変領域ドメインのヌクレオチドの塩基配列及びアミノ酸配列を示す図である。 ５Ｇ５抗体の軽鎖可変領ドメインのヌクレオチドの塩基配列及びアミノ酸配列を示す図である。

［１］抗ＰＳＫポリクローナル抗体
本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体は、ＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体である。また、ＰＳＫのタンパク部分およびＰＳＫに特異的なグルカン構造の少なくともいずれかを認識する抗ＰＳＫポリクローナル抗体であってもよく、ＰＳＫに反応し、そしてセルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造、並びにラミナリンのβ１，３グルカン及びβ１，６グルカンのグルカン構造に反応しない抗ＰＳＫポリクローナル抗体であってもよい。

抗ＰＳＫポリクローナル抗体は、ＰＳＫを認識する。ＰＳＫは、カワラタケ菌ＣＭ１０１株〔ＦＥＲＭ−Ｐ２４１２（ＡＴＣＣ２０５４７）〕の菌糸体を水系溶媒、例えば、熱水又はアルカリ溶液（例えば、アルカリ金属の水酸化物、特には水酸化ナトリウムの水溶液）で抽出し、精製した後に乾燥して得ることができる。主要画分の糖部分はβ−Ｄ−グルカンで、このグルカン部分の構造はβ１→３、β１→４及びβ１→６結合を含む分枝構造であり、主な構成単糖はグルコースやマンノースであり、約１８〜３８％のタンパク質を含む。タンパク質の構成アミノ酸は、アスパラギン酸やグルタミン酸等の酸性アミノ酸と、バリンやロイシン等の中性アミノ酸が多く、リジンやアルギニン等の塩基性アミノ酸は少ない。水に可溶であるが、メタノール、ピリジン、クロロホルム、ベンゼン又はヘキサンには殆ど溶けない。

本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体は、ラミナリンのβ１，３グルカンを認識しない。β１，３グルカンは、グルコースがβ１−３型の結合で連なった多糖である。植物や菌類、細菌など自然界に広く分布する。例えば、β１，３グルカンは、ラミナリン又はイーストグルカンなどに存在するグルカンであるが、本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体は、ラミナリンに結合せず、従ってラミナリンのβ１，３グルカンを認識しないポリクローナル抗体である。

本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体は、セルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造を認識しない。β１，４グルカンは、セルロース、又はグリコーゲンに存在する。セルロースは、分子式（Ｃ_６Ｈ_１０Ｏ_５）_ｎで表される多糖類であり、植物細胞の細胞壁および繊維の主成分である。本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体は、セルロースに結合せず、従ってセルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造を認識しないポリクローナル抗体である。

本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体は、ラミナリンのβ１，６グルカンを認識しない。β１，６グルカンは、ラミナリン又はデキストランに存在する。デキストランは、グルコースのみからなる多糖類の一種である。本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体は、ラミナリンに結合せず、従ってラミナリンのβ１，６グルカンを認識しないポリクローナル抗体である。

本明細書において、「ＰＳＫに特異的に結合する」とは、ＰＳＫに結合し、少なくともラミナリン及びセルロースのグルカンに実質的に結合しないことを意味する。また、ラミナリン及びセルロースのグルカンに実質的に結合しないとは、ＰＳＫの分析方法に本発明の抗体を用いた場合、実用的なレベルで非特異的な反応が生じないことを意味する。具体的には、例えば、Ｂｉａｃｏｒｅを用い、固相化した抗ＰＳＫポリクローナル抗体と、ＰＳＫ又はラミナリン若しくはセルロースとの結合を調べることによって、判定することができる。より具体的には、抗ＰＳＫポリクローナル抗体のＰＳＫに対する結合力を１００とした場合の、セルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造、又はラミナリンのβ１，３グルカン、及びβ１，６グルカンのグルカン構造に対する結合力が３０％以下であることが好ましく、２０％以下であることが好ましく、１０％以下であることが最も好ましい。

（ＰＳＫのタンパク部分）
本発明の抗ポリクローナル抗体が認識してもよいＰＳＫのタンパク部分は、ＰＳＫの約１８〜３８％のタンパク質を占め、タンパク質の構成アミノ酸は、アスパラギン酸やグルタミン酸等の酸性アミノ酸と、バリンやロイシン等の中性アミノ酸が多く、リジンやアルギニン等の塩基性アミノ酸は少ない。

（ＰＳＫに特異的なグルカン構造）
本発明抗ポリクローナル抗体が認識してもよいＰＳＫに特異的なグルカン構造は、β１→３、β１→４及びβ１→６結合を含む分枝構造であり、主な構成単糖はグルコースやマンノースである。前記ＰＳＫに特異的なグルカン構造は、セルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造、又はラミナリンのβ１，３グルカン及びβ１，６グルカンのグルカン構造とは異なるものである。

（カワラタケの熱水・アルカリ抽出物）
従来の、ＰＳＫを免疫して得られる従来のポリクローナル抗体は、ラミナリンのβ１，３グルカン及びβ１，６グルカンのグルカン構造、並びにセルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造に結合する抗体を含んでいた。この理由は、従来免疫に用いられていたＰＳＫが、ラミナリンのβ１，３グルカン及びβ１，６グルカン、並びにセルロースのβ１，４グルカンと同一又は構造の類似したグルカンを含んでいたためと考えられる。このようなグルカン構造を含むことは、特異性の高い抗体を取得するための免疫原としては、好ましくない。

一方、本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体は、ラミナリンのβ１，３グルカン及びβ１，６グルカンのグルカン構造、並びにセルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造に結合する抗体を実質的に含まない。この理由は、免疫に用いたカワラタケの熱水・アルカリ抽出物が、ラミナリンのβ１，３グルカン及びβ１，６グルカン、並びにセルロースのβ１，４グルカンと同一又は構造の類似したグルカンを実質的に含まないためであると考えられる。

本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体を取得するために用いられるカワラタケの熱水・アルカリ抽出物は、例えば、以下のように製造することができる。

カワラタケ菌を常法に従って、培地に接種し、培養する。得られた菌苔をホモジェナイズし、種菌を調整する。前記種菌を常法に従って培養し、培養後に乾燥させ、乾燥菌糸体を得る。この乾燥菌糸体から、熱水及びアルカリ溶液を用いて抽出を行う。得られた熱水抽出液とアルカリ抽出液とを混合し、希塩酸で中和し、更に濃縮する。塩析を行い、沈殿を回収する。得られた沈殿から、凍結乾燥体として、熱水・アルカリ抽出物を得ることができる。

熱水及びアルカリ溶液による抽出は、まず熱水による抽出を行い、遠心して得られた残渣からアルカリ水溶液による抽出を行う。得られた熱水抽出液とアルカリ水溶液抽出液とを混合し、塩析及び沈殿等の工程を経て熱水・アルカリ抽出物とする。

熱水の温度は、５０℃以上であれば、特に限定されないが、７０℃以上が好ましく、８０℃以上がより好ましく、９５〜９９℃が最も好ましい。また、熱水による抽出時間も、特に限定されるものではないが、１０分〜６時間が好ましく、１時間〜３時間がより好ましく、３０分〜９０分が最も好ましい。

アルカリ溶液は、特に限定されるものではないが、例えばアルカリ金属の水酸化物を用いることが可能であり、水酸化ナトリウム水溶液が好ましい。例えば水酸化ナトリウム水溶液を用いる場合、その濃度は、０．２Ｍ以上であれば特に限定されるものではないが、０．３Ｍ〜３Ｍが好ましく、０．５Ｍ〜１．５Ｍがより好ましく、０．７Ｍ〜１．３Ｍが最も好ましい。前記アルカリ溶液の温度は、４℃以上であれば、特に限定されないが、２５℃以上が好ましく、５０℃以上がより好ましく、９５〜９９℃が最も好ましい。また、アルカリ溶液による抽出時間も、特に限定されるものではないが、１０分〜６時間が好ましく、１時間〜３時間がより好ましく、３０分〜９０分が最も好ましい。

従来のＰＳＫの抽出方法は、例えば特許文献２の実施例に記載のように、０．１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液のみで抽出するものである。このような抽出法において得られたＰＳＫは、ラミナリンのβ１，３グルカン及びβ１，６グルカン、並びにセルロースのβ１，４グルカンと同一又は構造の類似したグルカンを含むものと考えられる。一方、本発明の抗ポリクローナル抗体を取得するために用いる熱水・アルカリ抽出物のように、水抽出及びアルカリ抽出を組み合わせることにより、ラミナリンのβ１，３グルカン及びβ１，６グルカン、並びにセルロースのβ１，４グルカンと同一又は構造の類似したグルカンを含まないものを得ることができると考えられる。

（抗原結合性断片）
本発明の抗原結合性断片は、本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体の抗原結合部位を含み、ＰＳＫへの結合性を有する限り、特に限定されるものではないが、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ断片、ディアボディー、単一鎖抗体分子、及びマルチ特異性抗体を挙げることができる。これらの抗原結合性断片は、例えば、抗体を常法によりタンパク質分解酵素（例えば、ペプシン又はパパイン等）によって消化し、続いて、常法のタンパク質の分離精製の方法により精製することにより、得ることができる。また、ディアボディー、単一鎖抗体分子、及び抗体断片から形成されたマルチ特異性抗体は、遺伝子組換えにより調製することができる。

［２］ＰＳＫの免疫学的分析方法
本発明のＰＳＫの免疫学的分析方法は、ＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片を用いることを特徴とするものである。ＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片としては、前記の「［１］抗ＰＳＫポリクローナル抗体」の項目に記載の抗体を用いることができる。例えば、ＰＳＫのタンパク部分およびＰＳＫに特異的なグルカン構造の少なくともいずれかを認識する抗ＰＳＫポリクローナル抗体を用いてもよく、ＰＳＫに反応し、そしてセルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造、並びにラミナリンのβ１，３グルカン及びβ１，６グルカンのグルカン構造に反応しない抗ＰＳＫポリクローナル抗体を用いてもよい。ＰＳＫの免疫学的分析方法を用いることにより、ＰＳＫを正確に分析することができる。

ＰＳＫを免疫学的に分析する方法としては、本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片を用いて、ＰＳＫを定量的又は半定量的に決定することができるか、あるいは、ＰＳＫの存在の有無を判定することができる限り、特に限定されるものではない。例えば、酵素免疫測定法、免疫組織染色法、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ法：Ｂｉａｃｏｒｅ法）、ラテックス凝集免疫測定法、化学発光免疫測定法、蛍光抗体法、放射免疫測定法、免疫沈降法、ウエスタンブロット法、イムノクロマトグラフ法、磁気ビーズ凝集法、又は磁気ビーズ酵素免疫法を挙げることができる。

なお、本明細書における「分析」には、分析対象物質の量を定量的又は半定量的に決定する「測定」と、分析対象物質の存在の有無を判定する「検出」との両方の意味が含まれる。

（被検試料）
ＰＳＫの免疫学的分析方法に用いることのできる被検試料としては、ＰＳＫを含有する可能性のある試料であれば特に限定されるものではないが、特には生理活性を有するＰＳＫを含有する可能性のある医薬品若しくは飲食物、又はＰＳＫが投与された患者の生体試料又は生体由来試料を挙げることができる。医薬品又は飲食物としては、具体的には、医薬組成物、若しくは医薬製剤、又はそれらの原料となる菌類由来の熱水・アルカリ抽出物、あるいは健康食品、若しくは機能性食品、又はそれらの原料となる菌類由来の熱水・アルカリ抽出物を挙げることができる。また、生体試料又は生体由来試料としては、例えば、尿、血液、血清、血漿、便、髄液、唾液、細胞、組織、若しくは器官、又はそれらの調整物（例えば、生検標本）等を挙げることができる。

ＰＳＫの免疫学的分析方法を用いることにより、医薬品や飲食物並びにＰＳＫを服用後の血液や組織などから、特定の熱水・アルカリ抽出物を定性的・定量的に検出できる。従って、生理活性を有するＰＳＫの摂取量（投与量）を把握できるために大変有用である。例えば、ＰＳＫ投与後の血中濃度や腫瘍へのＰＳＫの到達度合を簡易かつ高精度に判別できるため、体内動態や薬効を簡易かつ高精度に評価できる。

更に、本発明のＰＳＫの免疫学的分析方法により、血中濃度の測定を行うことにより、ＰＳＫの薬効の予測およびＰＳＫの投与至適濃度を把握するためのデータ測定にも利用することができる。例えば、ＰＳＫの薬効の予測を行う場合、ＰＳＫ投与の一定時間後に、ＰＳＫが投与された患者のＰＳＫの血中濃度を測定する。得られた血中濃度から、ある一定以上の血中濃度であれば、ＰＳＫの薬効が高いことを予測可能であり、一定以下の血中濃度であれば、ＰＳＫの薬効が低いことを予測可能である。また、患者によって、ＰＳＫの投与至適濃度が異なることがある。

従って、ＰＳＫの投与至適濃度を把握することは、患者の治療において重要である。ＰＳＫの投与至適濃度を把握するためには、ＰＳＫの投与の一定時間後に、ＰＳＫが投与された患者のＰＳＫの血中濃度を測定する。得られた血中濃度が低く薬効が期待できない場合は、ＰＳＫの投与量を増加させ、逆に血中濃度が高い場合は、ＰＳＫの投与量を減少させることができる。

本発明のＰＳＫの免疫学的分析方法の好ましい１つの実施態様においては、ＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片の１種類を用いて、ＰＳＫを分析することができる。例えばこのような実施態様としては、免疫組織染色法、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ法：Ｂｉａｃｏｒｅ法）、ラテックス凝集免疫測定法、蛍光抗体法、放射免疫測定法、免疫沈降法、又はウエスタンブロット法を挙げることができる。

本発明のＰＳＫの免疫学的分析方法の別の好ましい１つの実施態様においては、ＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片と、ＰＳＫと反応する第２の抗体又はその抗原結合性断片とを使用して、ＰＳＫを分析することができる。本実施態様で用いる抗ＰＳＫポリクローナル抗体は、本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体である。本実施態様としては、具体的には、例えば抗ＰＳＫポリクローナル抗体及び第２の抗体を用いたサンドイッチ法を挙げることができる。更に、抗ＰＳＫポリクローナル抗体及び第２の抗体を混合して用いる免疫組織染色法、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ法：Ｂｉａｃｏｒｅ法）、ラテックス凝集免疫測定法、蛍光抗体法、放射免疫測定法、免疫沈降法、又はウエスタンブロット法を挙げることができる。また、本実施態様においては、２種類以上の第２の抗体を用いることもできる。

第２の抗体は、ＰＳＫに結合することのできるものであれば、特に限定されないが、例えば、ＰＳＫを認識し、且つ他の多糖類のβ１，３グルカン、β１，４グルカン、及びβ１，６グルカンを認識する非特許文献１に記載のポリクローナル抗体、又はＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫ抗体を挙げることができるが、ＰＳＫ特異的抗体が好ましい。

ＰＳＫ特異的な抗体としては、例えば、本発明のＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体（例えば、ＰＳＫのタンパク部分およびＰＳＫに特異的なグルカン構造の少なくともいずれかを認識する抗ＰＳＫポリクローナル抗体、又はＰＳＫに反応し、そしてセルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造、並びにラミナリンのβ１，３グルカン及びβ１，６グルカンのグルカン構造に反応しない抗ＰＳＫポリクローナル抗体）；ＰＳＫを認識し、且つデキストラン、グリコーゲン、ラミナリン、及びセルロースのβ１，３グルカン、β１，４グルカン、及びβ１，６グルカンを認識しないモノクローナル抗体；又はＰＳＫの生理活性部位を認識するモノクローナル抗体を挙げることができるが、最も好ましくは、ＰＳＫの生理活性部位を認識するモノクローナル抗体である。活性を有するＰＳＫを正確に測定することができるからである。

第２の抗体は、本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体を除いては、常法に従って調製することができる。例えば、モノクローナル抗体は、ＫｏｅｈｌｅｒとＭｉｌｓｔｅｉｎの方法（Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７，１９７５）に従って、作製することができる。抗ＰＳＫ抗体を取得するための免疫抗原は、カワラタケ菌ＣＭ１０１株〔ＦＥＲＭ−Ｐ２４１２（ＡＴＣＣ２０５４７）〕の菌糸体を水系溶媒、例えば、熱水又はアルカリ溶液（例えば、アルカリ金属の水酸化物、特には水酸化ナトリウムの水溶液）で抽出し、精製した後に乾燥して得たものであり、抗腫瘍活性を有するものであれば、特に限定せずに用いることができる。すなわち、免疫原として、ＰＳＫを用いること以外は、通常のモノクローナル抗体調製法に従って、調製することができる。しかしながら、第２の抗体を得る場合にも、免疫原として、前記のカワラタケの熱水・アルカリ抽出物を用いることが好ましい。

ＰＳＫの生理活性部位を認識するモノクローナル抗体としては、例えば以下の抗体を挙げることができる。
（モノクローナル抗体（Ａ））
モノクローナル抗体（Ａ）は、後述の参考例に記載の２Ｇ９抗体に代表されるものである。その重鎖可変領域ドメインは、好ましくは配列番号６で表されるアミノ酸配列（ＳＹＧＭＳ）からなるＨ−ＣＤＲ１のポリペプチド、配列番号１０で表されるアミノ酸配列（ＴＩＳＳＧＧＳＹＴＹＹＰＤＳＶＫＧ）からなるＨ−ＣＤＲ２のポリペプチド、配列番号１４で表されるアミノ酸配列（ＲＩＴＴＶＶＡＲＳＦＹＦＤＹ）からなるＨ−ＣＤＲ３のポリペプチドを含む。また、この抗体の軽鎖可変領域ドメインは、好ましくは配列番号２２で表されるアミノ酸配列（ＲＡＳＫＳＶＳＴＳＧＹＳＹＭＨ）からなるＬ−ＣＤＲ１のポリペプチド、配列番号２６で表されるアミノ酸配列（ＬＶＳＮＬＥＳ）からなるＬ−ＣＤＲ２のポリペプチド、配列番号３０で表されるアミノ酸配列（ＱＨＩＲＥＬＴＲＳ）からなるＬ−ＣＤＲ３のポリペプチドを含む。

更に、モノクローナル抗体（Ａ）の重鎖可変領域ドメインは、より好ましくは、配列番号６で表されるアミノ酸配列からなるＨ−ＣＤＲ１のポリペプチド、配列番号１０で表されるアミノ酸配列からなるＨ−ＣＤＲ２のポリペプチド、配列番号１４で表されるアミノ酸配列からなるＨ−ＣＤＲ３のポリペプチド、並びに重鎖可変領域フレームワークのポリペプチドを含み、最も好ましくは、配列番号２で表されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域ドメインのポリペプチドである。また、この抗体の軽鎖可変領域ドメインは、より好ましくは配列番号２２で表されるアミノ酸配列からなるＬ−ＣＤＲ１のポリペプチド、配列番号２６で表されるアミノ酸配列からなるＬ−ＣＤＲ２のポリペプチド、配列番号３０で表されるアミノ酸配列からなるＬ−ＣＤＲ３のポリペプチド、並びに軽鎖可変領域フレームワークのポリペプチドを含み、最も好ましくは、配列番号１８で表されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域ドメインのポリペプチドである。

モノクローナル抗体（Ａ）は、例えば２Ｇ９抗体とエピトープへの結合が競合する抗体を含み、特には、２Ｇ９抗体が結合するＰＳＫのエピトープと同一のエピトープに結合する抗体を挙げることができる。

２Ｇ９抗体が結合するＰＳＫのエピトープは、ＰＳＫの細胞障害活性を示す生理活性部位に存在するエピトープであるか、あるいはその近傍のエピトープである可能性が高く、２Ｇ９抗体がそのエピトープに結合することにより、ＰＳＫの細胞障害活性を示す生理活性部位の活性を抑制させることができるエピトープである。また、２Ｇ９抗体が結合するＰＳＫのエピトープは、ＰＳＫのＴＧＦ−β１阻害活性を示す生理活性部位に存在するエピトープであるか、あるいはその近傍のエピトープである可能性が高く、２Ｇ９抗体がそのエピトープに結合することにより、ＰＳＫのＴＧＦ−β１阻害活性を示す生理活性部位の活性を抑制させることができるエピトープである。

本明細書において、「エピトープへの結合が競合する抗体」とは、２つの抗体を用いたエピトープの競合試験において、競合作用を示したすべての抗体を含む。２つの抗体を用いたエピトープの競合試験において、競合率を計算することができ、「エピトープへの結合が競合する抗体」は、１％〜１００％の競合率を示すことがあり、具体的には１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上又は９０％以上の競合率を示す抗体を含む。

また、「同一のエピトープに結合する」とは、抗体の抗原結合部位が結合するエピトープが同一であることを意味し、この抗体は２つの抗体を用いたエピトープの競合試験において、競合作用を示す。「同一のエピトープに結合する」抗体のエピトープの競合試験における競合率は特に限定されるものではない。これは、エピトープの競合試験における競合率は、２つの抗体の力価、結合定数、解離定数、及び親和定数等により決定されるためである。従って、「同一のエピトープに結合する」抗体は、１％〜１００％の競合率を示すことがあり、具体的には１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上又は９０％以上の競合率を示す抗体を含むことができる。

エピトープの競合試験は、以下の方法により行うことができる。ＰＳＫを１μｇ／ｗｅｌｌの濃度で、９６ウェルプレートに４℃で一晩コート後、１％ＢＳＡでブロッキングしてＰＳＫを固相化したプレートを作製する。例えば、０．１μｇ／ｍＬ、０．５μｇ／ｍＬ、１μｇ／ｍＬ、又は５μｇ／ｍＬの第一の抗体を添加して、２５℃で３時間インキュベートする。ＴＢＳＴで各ウェルを３回洗浄した後、０．５μｇ／ｍＬ濃度に調製したＨＲＰ標識した第二の抗体溶液を添加して、２５℃で１時間インキュベートする。ＴＢＳＴで各ウェルを３回洗浄した後、基質であるＡＢＳＴを加え、１５分間程度発色させた。Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｓｔｏｐ Ｓｏｌｕｔｉｏｎで発色反応を停止させた後、プレートリーダーを用いて、４０５ｎｍの吸光度を測定し、競合率を計算する。

（モノクローナル抗体（Ｂ））
モノクローナル抗体（Ｂ）は、後述の参考例に記載の５Ｇ５抗体に代表されるものである。その重鎖可変領域ドメインは、好ましくは配列番号３８で表されるアミノ酸配列（ＧＹＴＭＮ）からなるＨ−ＣＤＲ１のポリペプチド、配列番号４２で表されるアミノ酸配列（ＬＩＮＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧ）からなるＨ−ＣＤＲ２のポリペプチド、配列番号４６で表されるアミノ酸配列（ＧＧＫＦＡＴＧＴＳＹ）からなるＨ−ＣＤＲ３のポリペプチドを含む。また、この抗体の軽鎖可変領域ドメインは、好ましくは配列番号５４で表されるアミノ酸配列（ＲＳＳＴＧＡＶＴＴＳＮＹＡＮ）からなるＬ−ＣＤＲ１のポリペプチド、配列番号５８で表されるアミノ酸配列（ＧＴＮＮＲＡＰ）からなるＬ−ＣＤＲ２のポリペプチド、配列番号６２で表されるアミノ酸配列（ＡＬＷＹＳＮＨＷＶ）からなるＬ−ＣＤＲ３のポリペプチドを含む。

更に、モノクローナル抗体（Ｂ）の重鎖可変領域ドメインは、より好ましくは、配列番号３８で表されるアミノ酸配列からなるＨ−ＣＤＲ１のポリペプチド、配列番号４２で表されるアミノ酸配列からなるＨ−ＣＤＲ２のポリペプチド、配列番号４６で表されるアミノ酸配列からなるＨ−ＣＤＲ３のポリペプチド、並びに重鎖可変領域フレームワークのポリペプチドを含み、最も好ましくは、配列番号３４で表されるアミノ酸配列からなる重鎖可変領域ドメインのポリペプチドである。また、この抗体の軽鎖可変領域ドメインは、より好ましくは配列番号５４で表されるアミノ酸配列からなるＬ−ＣＤＲ１のポリペプチド、配列番号５８で表されるアミノ酸配列からなるＬ−ＣＤＲ２のポリペプチド、配列番号６２で表されるアミノ酸配列からなるＬ−ＣＤＲ３のポリペプチド、並びに軽鎖可変領域フレームワークのポリペプチドを含み、最も好ましくは、配列番号５０で表されるアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域ドメインのポリペプチドである。

モノクローナル抗体（Ｂ）は、例えば５Ｇ５抗体とエピトープへの結合が競合する抗体を含み、特には、５Ｇ５抗体が、結合するＰＳＫのエピトープと同一のエピトープに結合する抗体を挙げることができる。

５Ｇ５抗体が結合するＰＳＫのエピトープは、ＰＳＫの細胞障害活性を示す生理活性部位に存在するエピトープであるか、あるいはその近傍のエピトープである可能性が高く、５Ｇ５抗体がそのエピトープに結合することにより、ＰＳＫの細胞障害活性を示す生理活性部位の活性を抑制させることができるエピトープである。また、５Ｇ５抗体が結合するＰＳＫのエピトープは、ＰＳＫのＴＧＦ−β１阻害活性を示す生理活性部位に存在するエピトープであるか、あるいはその近傍のエピトープである可能性が高く、５Ｇ５抗体がそのエピトープに結合することにより、ＰＳＫのＴＧＦ−β１阻害活性を示す生理活性部位の活性を抑制させることができるエピトープである。

モノクローナル抗体（Ａ）及びモノクローナル抗体（Ｂ）の、Ｈ−ＣＤＲ１のポリペプチド、Ｈ−ＣＤＲ２のポリペプチド、Ｈ−ＣＤＲ３のポリペプチド、Ｌ−ＣＤＲ１のポリペプチド、Ｌ−ＣＤＲ２のポリペプチド、及びＬ−ＣＤＲ３のポリペプチドは、それぞれ１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されてもよい。それらの欠失、置換、挿入又は付加されたポリペプチドを含む重鎖可変領域ドメイン及び軽鎖可変領域ドメインから形成される抗原結合部位が結合するエピトープは、２Ｇ９抗体又は５Ｇ５抗体が結合するエピトープと同一であり、その結合によりＰＳＫの細胞障害活性を抑制することができる。

また、モノクローナル抗体（Ａ）及びモノクローナル抗体（Ｂ）の、重鎖可変領域ドメイン又は軽鎖可変領域ドメインのポリペプチドも、それぞれ１又は数個のアミノ酸が欠失、置換、挿入又は付加されてもよい。それらの欠失、置換、挿入又は付加されたポリペプチドを含む重鎖可変領域ドメイン及び軽鎖可変領域ドメインから形成される抗原結合部位が結合するエピトープは、２Ｇ９抗体又は５Ｇ５抗体が結合するエピトープと同一であり、その結合によりＰＳＫの細胞障害活性を抑制することができる。

より具体的には、アミノ酸の欠失、置換、挿入、又は付加は、それぞれのポリペプチドにおいて３個以下が好ましく、２個以下がより好ましく、１個が最も好ましい。またアミノ酸の置換の場合、限定されるものではないが、親水性のアミノ酸は親水性のアミノ酸と、疎水性のアミン酸は親水性のアミノ酸と、塩基性のアミノ酸は塩基性のアミノ酸と、酸性アミノ酸は酸性のアミノ酸と、置換されることが好ましい。このような性質の似たアミノ酸の置換の場合、タンパク質の立体構造が維持されることが多く、従って抗ＰＳＫ抗体の抗原結合部位の立体構造も維持され、抗ＰＳＫ抗体は、ＰＳＫと結合することができる。

本発明のＰＳＫの免疫学的分析方法の好ましい実施態様として、サンドイッチ法を利用する場合、例えば、サンドイッチ法は、抗ＰＳＫポリクローナル抗体若しくはその抗原結合性断片又は第２の抗体若しくはその抗原結合性断片のいずれか一方の抗体若しくはその抗原結合性断片を固定化した不溶性担体、ＰＳＫを含む可能性のある被検試料、残る一方の抗体若しくはその抗原結合性断片に標識を付した標識抗体を接触させ、不溶性担体上に固定化抗体とＰＳＫと標識抗体との複合体を形成する工程（以下、複合体形成工程と称する）と、複合体における標識からの信号を分析する工程と、を含む。複合体形成工程において、抗体等が固相化された不溶性担体、ＰＳＫを含む可能性のある被検試料、及び標識抗体の接触の順番は、特に限定されるものではなく、不溶性担体及び被検試料を先に接触させ、次に標識抗体を接触させてもよく、標識抗体及び被検試料を接触させ、次に不溶性担体を接触させてもよく、不溶性担体、被検試料、及び標識抗体を一緒に接触させてもよい。

本明細書等における「第２の抗体」とは、ＰＳＫに結合することのできるものであれば、特に限定されないが、例えば、ＰＳＫを認識し、且つ他の多糖類のβ１，３グルカン、β１，４グルカン、及びβ１，６グルカンを認識する非特許文献１に記載のポリクローナル抗体、又はＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫ抗体を挙げることができるが、ＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫ抗体が好ましい。

より具体的には、本発明のＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体（例えば、ＰＳＫのタンパク部分およびＰＳＫに特異的なグルカン構造の少なくともいずれかを認識する抗ＰＳＫポリクローナル抗体、又はＰＳＫに反応し、そしてセルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造、並びにラミナリンのβ１，３グルカン及びβ１，６グルカンのグルカン構造に反応しない抗ＰＳＫポリクローナル抗体）；ＰＳＫを認識し、且つデキストラン、グリコーゲン、ラミナリン、及びセルロースのβ１，３グルカン、β１，４グルカン、及びβ１，６グルカンを認識しないモノクローナル抗体；又はＰＳＫの生理活性部位を認識するモノクローナル抗体を挙げることができるが、最も好ましくは、ＰＳＫの生理活性部位を認識するモノクローナル抗体である。

サンドイッチ法を利用する本発明の免疫学的分析方法は、第２の抗体又はその抗原結合性断片を不溶性担体に固定化した後、ＰＳＫを含む可能性のある被検試料と接触させ、続いて、抗ＰＳＫポリクローナル抗体若しくはその抗原結合性断片に標識を付した標識抗体と接触させ、不溶性担体上に、固定化抗体とＰＳＫと標識抗体とからなるサンドイッチ状複合体を形成させ、抗ＰＳＫポリクローナル抗体の標識からの信号を検出することができる。

なお、抗ＰＳＫポリクローナル抗体若しくはその抗原結合性断片を不溶性担体に固定化し、この抗体固定化不溶性担体とＰＳＫを含む可能性のある被検試料とを接触させ、続いて、第２の抗体又はその抗原結合性断片に標識を付した標識抗体と接触させ、不溶性担体上に、固定化抗体とＰＳＫと標識抗体とからなるサンドイッチ状複合体を形成させ、第２の抗体の標識の信号を検出してもよい。

複合体形成工程は、抗ＰＳＫモノクローナル抗体若しくはその抗原結合性断片を固定化した不溶性担体と、ＰＳＫを含む可能性のある被検試料とを接触させ、そして抗ＰＳＫポリクローナル抗体若しくはその抗原結合性断片に標識を付した標識抗体を接触させる工程であることが好ましい。このとき、第２の抗体は抗ＰＳＫモノクローナル抗体である。

すなわち、抗ＰＳＫモノクローナル抗体とＰＳＫと標識抗体（抗ＰＳＫポリクローナル抗体）とからなるサンドイッチ状複合体を形成させ、抗ＰＳＫポリクローナル抗体の標識の信号を検出することが最も好ましい。

なお、標識した第２の抗体又は抗ＰＳＫポリクローナル抗体に代えて、未標識の第２の抗体又は抗ＰＳＫポリクローナル抗体を用いてもよい。この場合、未標識の第２の抗体又は抗ＰＳＫポリクローナル抗体に結合する標識抗体を用いて信号を検出する。また、標識した第２の抗体又は抗ＰＳＫポリクローナル抗体に代えて、ビオチン標識した第２の抗体又は抗ＰＳＫポリクローナル抗体を用い、標識アビジンを用いて信号を検出することも可能である。

本発明のサンドイッチ法による免疫学的分析方法に使用することのできる不溶性担体は特に限定されるものでなく、例えば、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリエステル、ポリアクリロニトリル、フッ素樹脂、架橋デキストラン、ポリサッカライド等の高分子、その他ニトロセルロース、紙、アガロース及びこれらの組み合わせ等を例示することができる。

標識物質としては、酵素、蛍光物質、又は発光物質を使用するのが有利である。酵素としては、例えば、アルカリホスファターゼ、ペルオキシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ等、また、蛍光物質としては、例えば、フルオレセインイソチオシアネート等、また、発光物質としては、例えば、アクリジニウムエステル、ルシフェリン等を使用することができる。

［３］ＰＳＫの免疫学的分析用キット
本発明のＰＳＫの免疫学的分析用キットは、ＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片を含む。ＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体は、ＰＳＫのタンパク部分およびＰＳＫに特異的なグルカン構造の少なくともいずれかを認識する抗ＰＳＫポリクローナル抗体であってもよく、また、ＰＳＫに反応し、そしてセルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造、並びにラミナリンのβ１，３グルカン及びβ１，６グルカンのグルカン構造に反応しない抗ＰＳＫポリクローナル抗体であってもよい。

本発明のＰＳＫの免疫学的分析用キットは、更に、ＰＳＫと反応する第２の抗体又はその抗原結合性断片を含んでもよい。

本実施形態のＰＳＫの分析キットは、本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗体の抗原結合性断片を含むＰＳＫの免疫学的分析用キットである。ＰＳＫの免疫学的分析用キットは、本発明のＰＳＫの免疫学的分析方法に用いることができる。従って、本発明のＰＳＫの免疫学的分析用キットは、酵素免疫測定法、免疫組織染色法、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ法：Ｂｉａｃｏｒｅ法）、ラテックス凝集免疫測定法、化学発光免疫測定法、蛍光抗体法、放射免疫測定法、免疫沈降法、ウエスタンブロット法、イムノクロマトグラフ法、磁気ビーズ凝集法、又は磁気ビーズ酵素免疫法等に用いるキットを含む。

ＰＳＫの免疫学的分析用キットが、酵素免疫測定法、例えばサンドイッチ法のキットの場合、抗ＰＳＫポリクローナル抗体若しくは第２の抗体、又はそれらの抗原結合性断片が表面に固相化された担体（ポリエチレン、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリエステル、ポリアクリロニトリル、フッ素樹脂、架橋デキストラン、ポリサッカライド等の高分子、その他ニトロセルロース、紙、アガロース及びこれらの組み合わせ等）、標識された第１抗ＰＳＫポリクローナル抗体若しくは第２の抗体、又はそれらの抗原結合性断片、酵素、その発色基質、及びその他のＥＬＩＳＡ試薬（例えば、洗浄液）などを適宜組み合わせた構成にすることができる。

ＰＳＫの分析キットが、免疫組織染色法のキットの場合、例えばビオチン化標識した本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体、（ＨＲＰ）標識したストレプトアビジン、ＤＡＢ基質、あるいは、未標識の抗ＰＳＫポリクローナル抗体、ＨＲＰ標識した抗マウスＩｇＧ抗体、基質などを含むことができる。

ＰＳＫの分析キットが、ＳＰＲ分析法のキットの場合、本発明の抗ＰＳＫポリクローナル抗体が固定化されたセンサーチップなどを含む。

従って、ＰＳＫの分析キットは、用いる免疫学的手法に応じて、所望の形態で抗ＰＳＫポリクローナル抗体、あるいはその抗原結合性断片を含む。例えば、標識物質の具体例としては、酵素としてペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、又はグルコースオキシダーゼ等を、蛍光物質としてフルオレセインイソチアネート又は希土類金属キレート等を、放射性同位体として^３Ｈ、^１４Ｃ、又は^１２５Ｉ等を、その他、ビオチン、アビジン、又は化学発光物質等を挙げることができる。酵素又は化学発光物質等の場合には、それ自体単独では測定可能なシグナルをもたらすことはできないことから、それぞれ対応する適当な基質等を選択して含むことが好ましい。

ＰＳＫの免疫学的分析用キットは、ＰＳＫを特異的に分析することができるものであり、そのことが記載された使用説明書などを含む。また、キットの包装などにＰＳＫを特異的に分析することができることが記載されていてもよい。

本発明は上述した実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能である。すなわち、請求項に示した範囲で適宜変更した技術的手段を組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。

以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。

《製造例１：カワラタケの熱水・アルカリ抽出物の製造》
カワラタケ菌ＣＭ１０１株〔ＦＥＲＭ−Ｐ２４１２（ＡＴＣＣ２０５４７）〕を、グルコース５％、ペプトン０．２％、酵母エキス０．３％、ＫＨ_２ＰＯ_４ ０．１％及びＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏの０．１％（いずれも重量％）からなる培地に接種し、１０日間培養し、培地表面に発育した菌苔を生理食塩水とともにホモジェナイズしたものを種菌とした。この種菌を上記と同一組成の培地２００ｍＬの入った１リットル容の培養用フラスコ１００本にそれぞれ接種し、２５〜２７℃で２５日間培養した後、乾燥器中で乾燥し、乾燥菌糸体を得た。乾燥菌糸体収量は培養器一本当たり２．０〜４．５ｇであった。この菌糸体１００ｇに蒸留水１リットルを加え、９７℃で１時間、撹拌しながら抽出した。次に、遠心残渣に対して、１規定の水酸化ナトリウム水溶液１リットルを加え、９７℃で１時間、撹拌しながら抽出した。塩酸で中和後、両抽出液を混合した。混合液を室温にまで冷却し、濾紙濾過により、抽出液を回収した。次いで、希塩酸で中和し、エバポレーターで液を濃縮した。濃縮液１リットルに対し飽和溶液となるように硫酸アンモニウムを加え、塩析を行い、生じた沈殿を遠心分離により分取した。分取した沈殿は蒸留水に再溶解し、透析及び限外濾過処理し、分子量５０００以下の低分子物質を除去した。次いで、凍結乾燥して、カワラタケの熱水・アルカリ抽出物粉末１５ｇを得た。

《実施例１：抗ＰＳＫウサギポリクローナル抗体の作製》
製造例１で得られたカワラタケの熱水・アルカリ抽出物粉末のＰＢＳ溶解液とＦｒｅｕｎｄ’ｓ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ａｄｊｕｖａｎｔ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｔｏｋｙｏ）とを等量混合し、超音波発生器を用いて高粘性のエマルジョン液を作成した。前記エマルジョン液を雌性ニュージーランドホワイト・ウサギの後背部にＰＳＫの量として、０．５ｍｇ／羽になるように皮下注射した。２週後に、ＰＳＫ溶液とＦｒｅｕｎｄ’ｓ Ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ Ａｄｊｕｖａｎｔ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）とのエマルジョン液を、ＰＳＫの量として、０．５ｍｇ／羽になるように、ウサギ後背部に皮下注射した。この注射を２週間隔で８回繰り返した。最終免疫後１週間経過した時点で、ケタミン・キシラジン麻酔下、頚動脈より全採血を行った。採取した血液は室温にて１時間静置後、４℃で一昼夜保存し、３０００ｒｐｍ、１０分間遠心分離し血清を得た。

免疫血清の抗体価測定はＥＬＩＳＡ法によって測定した。すなわち、ＰＳＫを５０ｎｇ／ウェルの濃度でコートさせた９６ウェルのプレートに、得られた血清の１０００〜２１８７０００倍希釈液を１００μｇ／Ｌ分注し、室温で３時間反応させた後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ ８０添加ＴＢＳ（以下、「ＴＢＳ−Ｔ」とする）で３回洗浄した。次に、プレートの各ウェルにＨＲＰ標識抗ウサギＩｇＧ抗体溶液を加え、室温で１時間反応させた後、ＴＢＳ−Ｔで３回洗浄した。ＡＢＴＳ基質溶液を加えて５−１５分間発色させた後、プレートリーダーを用いて４０５−６３０ｎｍの吸光度を測定した。抗体価測定結果を図１に示す。以降の実験には、３個体中で最も力価が高かった個体Ｎｏ．２の抗血清を用いた。

次に、ＰＳＫ固相化カラムを用いたアフィニティークロマトにより、抗ＰＳＫポリクローナル抗体を精製した。定法に従い、ペプシン処理および還元処理を行い、その後にホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識を行った。得られたＦａｂ’−ＨＲＰが抗原認識能を維持していることは、前記のＥＬＩＳＡ法で確認した（表１）。

《比較製造例１：従来のＰＳＫの製造》
従来のＰＳＫの製造は、特許文献２の実施例２の方法に準じて行った。
カワラタケ菌ＣＭ１０１株〔ＦＥＲＭ−Ｐ２４１２（ＡＴＣＣ２０５４７）〕を、グルコース５％、ペプトン０．２％、酵母エキス０．３％、ＫＨ_２ＰＯ_４ ０．１％及びＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏの０．１％（いずれも重量％）からなる培地に接種し、１０日間培養し、培地表面に発育した菌苔を生理食塩水とともにホモジェナイズしたものを種菌とした。この種菌を上記と同一組成の培地２００ｍＬの入った１リットル容の培養用フラスコ１００本にそれぞれ接種し、２５〜２７℃で２５日間培養した後、乾燥器中で乾燥し、乾燥菌糸体を得た。乾燥菌糸体収量は培養器一本当たり２．０〜４．５ｇであった。この菌糸体１００ｇに０．１規定の水酸化ナトリウム水溶液３リットルを加え、９７℃で１時間、撹拌しながら抽出した。抽出終了後、室温にまで冷却し、濾紙濾過により、抽出液を回収した。次いで、希塩酸で中和し、エバポレーターで液を濃縮した。濃縮液１リットルに対し飽和溶液となるように硫酸アンモニウムを加え、塩析を行い、生じた沈殿を遠心分離により分取した。分取した沈殿は蒸留水に再溶解し、透析及び限外濾過処理し、分子量５０００以下の低分子物質を除去した。次いで、凍結乾燥して、タンパク多糖体粉末１５ｇを得た。

《比較例１：従来の抗ＰＳＫウサギポリクローナル抗体の作製》
製造例１で得られたカワラタケの熱水・アルカリ抽出物粉末に代えて、比較製造例１で得られたタンパク多糖体を用いたことを除いては、実施例１の操作を繰り返し、従来の抗ＰＳＫウサギポリクローナル抗体を得た。

《実施例２：抗ＰＳＫウサギポリクローナル抗体の特異性評価》
抗ＰＳＫウサギポリクローナル抗体のＰＳＫに対する特異性評価は、Ｂｉａｃｏｒｅを用いて行った。まず、Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ ＣＭ５センサー表面に抗ウサギＩｇＧ抗体をアミノカップリング法で固相化した。次に、センサーチップに対して、比較例１で作成した従来の抗ＰＳＫウサギポリクローナル抗体（ｏｌｄ ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ−ＰＳＫ ｐＡｂ）又は実施例１で作製した抗ＰＳＫウサギポリクローナル抗体（ｎｅｗ ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ−ＰＳＫ ｐＡｂ）を一定量補足させた。これらのセンサーチップに対して１μｇ／ｍＬに調整したＰＳＫ、β１−４ｇｌｕｃａｎ、又はβ１−３，１−６ｇｌｕｃａｎをアナライトに用いて結合解析を行った。なお、β１−４ｇｌｕｃａｎとしてはセルロースを用い、β１−３，１−６ｇｌｕｃａｎとしては、ラミナリンを用いた。

その結果、図２に示すように、従来のｏｌｄ ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ−ＰＳＫ ｐＡｂは、ＰＳＫ以外のグルカン類にも結合するのに対して、本発明のｎｅｗ ｒａｂｂｉｔ ａｎｔｉ−ＰＳＫ ｐＡｂは、ＰＳＫに含まれる以外のβ１，３グルカン、β１，４グルカン、及びβ１，６グルカン構造に結合せず、ＰＳＫに特異的に結合することが分かった。

《参考例１：抗ＰＳＫモノクローナル抗体の作製》
抗体の作製は、（１）抗原の免疫、（２）抗血清の抗体価の測定、（３）抗ＰＳＫモノクローナル抗体の作製の順に行った。以下、順に手順の概要を説明する。
（１）抗原の免疫：第１回免疫として、ＰＳＫのリン酸緩衝化生理食塩水（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ；以下、「ＰＢＳ」とする。）溶液とＦｒｅｕｎｄ’ｓ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ａｄｊｕｖａｎｔ（シグマ−アルドリッチ社製）とを等量混合し、超音波発生器を用いて高粘性のエマルジョン液を調製した。６週齢の雌性Ｂａｌｂ／ｃマウス（オリエンタル酵母株式会社）に、このエマルジョン液をＰＳＫ量が０．１ｍｇ／匹となるように、皮下注射した。１週間後に第２回目の免疫を行った。ＰＳＫのＰＢＳ溶液とＦｒｅｕｎｄ’ｓ Ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ Ａｄｊｕｖａｎｔ（シグマ−アルドリッチ社製）とを混合してエマルジョン液を調製した。ＰＳＫ量が０．１ｍｇ／匹となるように腹腔内注射した。１週間ごとに同じ手順で免疫を行い、第８回目の免疫後、尾静脈より採血して力価の測定を行った。抗体価の上昇が認められた個体について、ＰＳＫを腹腔内注射することによりブーストを行った後に、ハイブリドーマ取得のために細胞融合を行った。

（２）抗血清の抗体価の測定：前記８回目の免疫後に、Ｂａｌｂ／ｃマウスから得られたそれぞれの血清（抗血清）の抗体価測定を、ＥＬＩＳＡ法により行った。手順を以下に示す。９６ウェルプレートに、ＰＳＫ溶液を１μｇ／ウェルずつ分注し、４℃、一晩反応させてＰＳＫを固相化した。１％ＢＳＡでブロッキング後、得られた血清の１，０００倍希釈液を各ウェルに５０μＬずつ分注し、２５℃で３時間反応させた。次に、ＴＢＳ−Ｔで、各ウェルを３回洗浄した後、１μｇ／ｍＬ濃度に調製したホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識抗マウスＩｇＭ抗体溶液を５０μＬ各ウェルに分注し、２５℃で１時間反応させた。ＴＢＳ−Ｔで各ウェルを３回洗浄した後、基質であるＡＢＳＴ（ＫＰＬ社）を加え、１５分間発色させた。５０μＬのＰｅｒｏｘｉｄａｓｅ Ｓｔｏｐ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＫＰＬ社）で発色反応を停止させた後、プレートリーダーを用いて、４０５ｎｍの吸光度を測定した。図３に、ＥＬＩＳＡ法による抗体価測定の結果を示しており、グラフの横軸には血清の希釈倍率、縦軸には吸光度（力価）を表す。

（３）抗ＰＳＫモノクローナル抗体の作製：ＰＳＫの免疫により、抗体の力価の上昇が認められた個体については、定法にてモノクローナル抗体作製を進めた。すなわち、ブーストの７日後、マウスの脾臓を摘出し脾細胞をマウスミエローマ細胞株Ｐ３Ｕ１と細胞融合させた。ＨＡＴ選択培養液の中で２〜３週間培養し、ハイブリドーマコロニーを得た。これらの培養上清を回収して、前記（２）に記載のＥＬＩＳＡ法を用いて、ハイブリドーマのスクリーニングを行った。得られたＰＳＫ抗体を産生している陽性ハイブリドーマについては、同様のスクリーニングを２回繰り返し、抗体産生能や増殖性に優れたハイブリドーマを選抜した。その結果、約１００個の陽性ハイブリドーマから、２Ｇ９抗体及び５Ｇ５抗体を産生する２つのハイブリドーマを選択した。なお、２Ｇ９抗体及び５Ｇ５抗体はＩｇＭ抗体であることを確認した。

抗体の大量調製はマウス腹水で行った。具体的には５００μＬのプリスタンを雌性Ｂａｌｂ／ｃマウスの腹腔内に投与して、７〜１０日後、マウス一匹あたり約１０^７個のハイブリドーマを移植した。１〜２週間後、腹水が溜まってきたら随時回収し、精製まで−８０℃で保存した。腹水からの抗体精製は以下のように行った。回収した腹水に最終濃度が２５ｍＭになるようにリン酸バッファー（ｐＨ７．５）を加え、０．４５μｍのフィルターに通過させた。これをＰｒｏｔｅｉｎＧカラムにアプライしてフロースルーを回収した。その後、定法によりＨｉＴｒａｐ ＩｇＭカラム（アマシャム）あるいはＳｅｐｈａｒｏｓｅ ＨＰカラム（アマシャム）でＩｇＭ画分を回収した。更にそのＩｇＭ画分をＳｅｐｈａｒｏｓｅ ２００ｐｇカラムで分画し、５量体のＩｇＭを精製した。得られた２Ｇ９抗体及び５Ｇ５抗体の力価を図４に示す。

《参考例２：抗ＰＳＫマウスモノクローナル抗体の特異性評価》
抗ＰＳＫマウスモノクローナル抗体（２Ｇ９ｍＡｂ、５Ｇ５ｍＡｂ）のＰＳＫに対する特異性評価は、以下の競合ＥＬＩＳＡ法で行った。炭酸緩衝液に溶解したＰＳＫを１μｇ／ｇ／ウェルで９６ウェルプレートに固相化した。１μｇ／ｍＬの抗ＰＳＫ抗体と１０μｇ／ｍＬの各種グルカン類（ＰＳＫ、ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ、ｌａｍｉｎａｒｉｎ、ｇｌｙｃｏｇｅｎ、ｄｅｘｔｒａｎ）とを混和後、９６ウェルプレートに添加して室温で１時間インキュベートした。検出は、ＨＲＰ標識抗マウスＩｇＭで行った。
なお、ＰＳＫはβ１，３グルカン、β１，４グルカン、及びβ１，６グルカンを有しており、ｃｅｌｌｕｌｏｓｅはβ１，４グルカンを有しており、ｌａｍｉｎａｒｉｎはβ１，３グルカン及びβ１，６グルカンを有しており、ｇｌｙｃｏｇｅｎはβ１，４グルカンを有しており、ｄｅｘｔｒａｎはβ１，６グルカンを有している。

その結果、図５に示すように、２Ｇ９ｍＡｂと５Ｇ５ｍＡｂはＰＳＫを特異的に認識し、他の類似構造を持つグルカン類には結合しないことが分かった。

《参考例３：２Ｇ９抗体及び５Ｇ５抗体の可変領域の配列決定》
２Ｇ９抗体又は５Ｇ５抗体を産生するハイブリドーマから、定法によりｔｏｔａｌ ＲＮＡを抽出し、オリゴｄＴプライマーを用いて逆転写反を行い、ｃＤＮＡを作製した。得られたｃＤＮＡから、可変領域遺伝子を増幅するためにｍｏｕｓｅ Ｉｇ ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｔ（Ｎｏｖａｇｅｎ社）を用いて、添付のプロトコールに従いＰＣＲを行った。得られた抗体可変領域遺伝子はｐＣＲ２．１ベクターにＴＡクローニングしてシーケンスの決定を行った。２Ｇ９抗体の重鎖可変領域ドメイン、及び軽鎖可変領域ドメインのヌクレオチドの塩基配列、及び５Ｇ５抗体の重鎖可変領域ドメイン、及び軽鎖可変領域ドメインのヌクレオチドの塩基配列を、それぞれ図７〜図１０に示す。また、それぞれの抗体のＨ−ＦＲ１、Ｈ−ＣＤＲ１、Ｈ−ＦＲ２、Ｈ−ＣＤＲ２、Ｈ−ＦＲ３、Ｈ−ＣＤＲ３、及びＨ−ＦＲ４、並びにＬ−ＦＲ１、Ｌ−ＣＤＲ１、Ｌ−ＦＲ２、Ｌ−ＣＤＲ２、Ｌ−ＦＲ３、Ｌ−ＣＤＲ３、及びＬ−ＦＲ４のアミノ酸配列を以下に示す。

２Ｇ９抗体の重鎖可変領域ドメインのアミノ酸配列
Ｈ−ＦＲ１ ：GVQCEVQLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFS（配列番号４）
Ｈ−ＣＤＲ１：SYGMS（配列番号６）
Ｈ−ＦＲ２ ：WVRQTPDKRLEWVA（配列番号８）
Ｈ−ＣＤＲ２：TISSGGSYTYYPDSVKG（配列番号１０）
Ｈ−ＦＲ３ ：RFTISRDNAKNTLYLQMSSLKSEDTAMYYCAR（配列番号１２）
Ｈ−ＣＤＲ３：RITTVVARSFYFDY（配列番号１４）
Ｈ−ＦＲ４ ：WGQG（配列番号１６）

２Ｇ９抗体の軽鎖可変領域ドメインのアミノ酸配列
Ｌ−ＦＲ１ ：GSTGDIVLTQSPASLAVSLGQRATISY（配列番号２０）
Ｌ−ＣＤＲ１：RASKSVSTSGYSYMH（配列番号２２）
Ｌ−ＦＲ２ ：WNQQKPGQPPRLLIY（配列番号２４）
Ｌ−ＣＤＲ２：LVSNLES（配列番号２６）
Ｌ−ＦＲ３ ：GVPARFSGSGSGTDFTLNIHPVEEEDAATYYC（配列番号２８）
Ｌ−ＣＤＲ３：QHIRELTRS（配列番号３０）
Ｌ−ＦＲ４ ：EGGP（配列番号３２）

５Ｇ５抗体の重鎖可変領域ドメインのアミノ酸配列
Ｈ−ＦＲ１ ：GVHSEVQLQQSGPELVKPGASMKISCKASGYSFT（配列番号３６）
Ｈ−ＣＤＲ１：GYTMN（配列番号３８）
Ｈ−ＦＲ２ ：WVKQSHGKNLEWIG（配列番号４０）
Ｈ−ＣＤＲ２：LINPYNGGTSYNQKFKG（配列番号４２）
Ｈ−ＦＲ３ ：KATLTVDKSSSTAYMELLSLTSEDSAVYYCAR（配列番号４４）
Ｈ−ＣＤＲ３：GGKFATGTSY（配列番号４６）
Ｈ−ＦＲ４ ：WGQG（配列番号４８）

５Ｇ５抗体の軽鎖可変領域ドメインのアミノ酸配列
Ｌ−ＦＲ１ ：GAISQAVVTQESALTTSPGETVTLTC（配列番号５２）
Ｌ−ＣＤＲ１：RSSTGAVTTSNYAN（配列番号５４）
Ｌ−ＦＲ２ ：WVQEKPDHLFTGLIG（配列番号５６）
Ｌ−ＣＤＲ２：GTNNRAP（配列番号５８）
Ｌ−ＦＲ３ ：GVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFC（配列番号６０）
Ｌ−ＣＤＲ３：ALWYSNHWV（配列番号６２）
Ｌ−ＦＲ４ ：FGGG（配列番号６４）

《実施例３：サンドイッチＥＬＩＳＡ系の構築》
ＰＳＫの検出系はサンドイッチＥＬＩＳＡ法で行った。炭酸緩衝液に溶解した抗ＰＳＫモノクローナル抗体（２Ｇ９抗体及び５Ｇ５抗体）を５００ｎｇ／ウェルで９６ウェルプレートにコートした。１％ＢＳＡ含有ＰＢＳでブロッキング後、６２．５−５００ｎｇ／ｍＬのＰＳＫ溶液を添加して、１時間、室温でインキュベートした。ＴＢＳ−Ｔでプレートを洗浄後、ＨＲＰ標識抗ＰＳＫ Ｆａｂ’抗体を添加して、更に３０分間、室温でインキュベートした。ＴＢＳ−Ｔでプレートを洗浄後、ＡＢＴＳ基質溶液を加えて５−１５分間発色させた後、プレートリーダーを用いて４０５−６３０ｎｍの吸光度を測定した。その結果、図６に示すように構築したＥＬＩＳＡ系は、感度良く、更に高い特異性をもってＰＳＫを検出することができた。

《実施例４：サンドイッチＥＬＩＳＡによるＰＳＫのマウス血中濃度の測定》
Ｂａｌｂ／ｃマウス（雌、６週齢）にＰＳＫ（５０ｍｇ／ｋｇ）を単回、腹腔内投与した後、８時間後に採血を行い、上記サンドイッチＥＬＩＳＡ法で血中濃度を測定した。その結果、血中に取り込まれたＰＳＫを検出することが可能であった（表２）。

本発明のＰＳＫの免疫学的分析方法は、医薬の品質管理に用いることができる。また、本発明のＰＳＫの免疫学的分析方法は、ＰＳＫの体内動態の検査に用いることができる。

Claims (18)

1. ＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片を用いることを特徴とするＰＳＫの免疫学的分析方法。
2. 前記抗ＰＳＫポリクローナル抗体が、ＰＳＫのタンパク部分およびＰＳＫに特異的なグルカン構造の少なくともいずれかを認識する抗ＰＳＫポリクローナル抗体である、請求項１に記載のＰＳＫの免疫学的分析方法。
3. 前記抗ＰＳＫポリクローナル抗体が、ＰＳＫに反応し、そしてセルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造、並びにラミナリンのβ１，３グルカン及びβ１，６グルカンのグルカン構造に反応しない抗ＰＳＫポリクローナル抗体である、請求項１に記載のＰＳＫの免疫学的分析方法。
4. 前記抗ＰＳＫポリクローナル抗体のＰＳＫに対する結合力を１００とした場合の、セルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造、又はラミナリンのβ１，３グルカン、及びβ１，６グルカンのグルカン構造に対する結合力が３０％以下である、請求項３に記載のＰＳＫの免疫学的分析方法。
5. 酵素免疫測定法、免疫組織染色法、表面プラズモン共鳴法、ラテックス凝集免疫測定法、化学発光免疫測定法、蛍光抗体法、放射免疫測定法、免疫沈降法、ウエスタンブロット法、イムノクロマトグラフ法、磁気ビーズ凝集法、又は磁気ビーズ酵素免疫法を用いる、請求項１〜４のいずれか一項に記載のＰＳＫの免疫学的分析方法。
6. 前記ＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片と、ＰＳＫと反応する第２の抗体又はその抗原結合性断片と、を使用する、請求項１〜５のいずれか一項に記載のＰＳＫの免疫学的分析方法。
7. 前記抗ＰＳＫポリクローナル抗体若しくはその抗原結合性断片、又は前記第２の抗体若しくはその抗原結合性断片のいずれか一方の抗体若しくはその抗原結合性断片を固定化した固定化抗体を有する不溶性担体、ＰＳＫを含む可能性のある被検試料、残る一方の抗体若しくはその抗原結合性断片に標識を付した標識抗体を接触させ、前記不溶性担体上に固定化抗体とＰＳＫと標識抗体との複合体を形成する複合体形成工程と、前記複合体における標識からの信号を分析する分析工程と、
   を含む、請求項６に記載のＰＳＫの免疫学的分析方法。
8. 前記複合体形成工程が、第２の抗体として抗ＰＳＫモノクローナル抗体若しくはその抗原結合性断片を固定化した不溶性担体と、ＰＳＫを含む可能性のある被検試料とを接触させ、そして前記抗ＰＳＫポリクローナル抗体若しくはその抗原結合性断片に標識を付した標識抗体を接触させる工程である、請求項７に記載のＰＳＫの免疫学的分析方法。
9. 前記第２の抗体が、抗ＰＳＫモノクローナル抗体である、請求項６〜８のいずれか一項に記載のＰＳＫの免疫学的分析方法。
10. 血中濃度の測定を行う、請求項１〜９のいずれか一項に記載のＰＳＫの免疫学的分析方法。
11. ＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片。
12. 前記抗ＰＳＫポリクローナル抗体が、ＰＳＫのタンパク部分およびＰＳＫに特異的なグルカン構造の少なくともいずれかを認識する請求項１１に記載の抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片。
13. 前記抗ＰＳＫポリクローナル抗体が、ＰＳＫに反応し、そしてセルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造、並びにラミナリンのβ１，３グルカン、及びβ１，６グルカンのグルカン構造に反応しない、請求項１１に記載の抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片。
14. 前記抗原結合性断片が、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ断片、ディアボディー、単一鎖抗体分子、及びマルチ特異性抗体からなる群から選択される、請求項１１〜１３のいずれか一項に記載の抗原結合性断片。
15. ＰＳＫに特異的に結合する抗ＰＳＫポリクローナル抗体又はその抗原結合性断片、
    を含むことを特徴とする、ＰＳＫの免疫学的分析用キット。
16. 前記抗ＰＳＫポリクローナル抗体が、ＰＳＫのタンパク部分およびＰＳＫに特異的なグルカン構造の少なくともいずれかを認識する、請求項１５に記載のＰＳＫの免疫学的分析用キット。
17. 前記抗ＰＳＫポリクローナル抗体が、ＰＳＫに反応し、そしてセルロースのβ１，４グルカンのグルカン構造、並びにラミナリンのβ１，３グルカン、及びβ１，６グルカンのグルカン構造に反応しない、請求項１５に記載のＰＳＫの免疫学的分析用キット。
18. 抗ＰＳＫモノクローナル抗体又はその抗原結合性断片を更に含む、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載のＰＳＫの免疫学的分析用キット。

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