JP2014055132A - 脱灰を検出するための組成物および方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明は、遊離イオン存在を特徴付ける光信号を生成可能な複合体を含む医薬組成物、を提供する。
【選択図】図1
Description
象牙質の神経過敏は、患者によって報告され、歯科医によって調査されるであろう。有効な診断装置は、空気銃/水銃、歯の探索器具、打診テスト、噛みつき応力テスト、および、角氷と咬合の評価のような他の冷熱試験である。しかし、患者報告書に基づいたこれらの方法は、主観的で正確さを欠いている。
組成物は、医薬的に許容される賦形剤を含んでもよく、その賦形剤は好ましくは、風味または着色添加剤である。
その組成物は、タンパク質またはタンパク質複合体を含んでもよい。そのような複合体は、生成される光信号に結びつく遊離イオンを結合したとき構造変化を受けてもよい。
その組成物は、遊離イオンを結合したとき光信号を生成するタンパク質またはタンパク質複合体、および、遊離イオンの存在を示す特有の波長で蛍光を発するタンパク質またはタンパク質複合体の両方を含んでもよい。
実験室内で活発な虫歯の生成を模倣するための産業で使用される標準的な方法は、酸の溶液またはゲルを使用して脱灰の領域を作成することである(例えば、Amaechi et al.: Arch Oral Biol 1998; 43: 619-628参照)。我々は、我々の開示した材料が、脱灰の領域を識別するのに使用可能かどうかを決定するために、同様な実験を実施した。
イオン放出を測定することにより、脱灰の領域を識別するのに使われうる多くの材料がある。例Aでは、発光タンパク質エクオリンを使った。他の材料が使用されてもよい。
歯のすべての領域がエクオリン溶液に同じように反応したかどうかを調べるために、抜かれた歯がエクオリンに浸された。歯は、カルシウムを含まない純水によって軽く磨かれ、暗い箱の中の径3 cmのペトリ皿に置かれた。昼光の画像は、CCDカメラを使って得られた。
イオン放出による脱灰を識別する開示したゲルまたは溶液は、酸蝕症(および間接的な神経過敏)に起因する脱灰の範囲および位置を検出し、評価するために使われてもよい。
抜かれた歯は、訓練された歯の臨床医により、空洞を有すると識別された。歯根は、CopyDex(登録商標)を使って覆われた。歯は、カルシウムを含まない純水によって軽く磨かれ、暗い箱の中の3 cmのペトリ皿に置かれた。昼光の画像が、CCDカメラを使って得られた。
実験室での研究が、酸の溶液を使用して人工的な虫歯を作成するために使われうる。好ましくは、口から抜かれ、虫歯を有する歯が、その研究方法をテストするために使われる。これらは、自然に生成された虫歯を有し、口の中での歯のよりよい擬態を提供するであろう。
歯科矯正または他の理由により抜かれた歯が、抜歯の直後に得られた。歯のいくつかは、年齢(それは未成年者のための診療所であった)および歯の状態により活発な虫歯を有することが歯科医によって予測されたけれども、どの患者情報も利用できなかった。抜歯のすぐ後に、いくつかの粘着した血液および生体物質を取り除くために、歯は脱イオン水ですすがれた。歯は、開示したゲルで直ぐに試験された。
他の製品、例えばねり歯みがきによる潜在的な干渉が、検査された。なぜならば、光がこれらに呼応して生成されるならば、この分析は口の中での使用に対して問題が多いからである。
結石は、歯科治療の過程において、歯からこすり落とすことによって得られ、水に浮遊した薄片として供給された。歯肉下部のものおよび歯肉上部のもの両方が評価された。標本は、使用前に、真空雰囲気で、ミリポア膜フィルターホルダーで濾過され、脱イオン水によって洗浄された。脱イオン水中の1mg/mlエクオリン5 cm3が付加され、図19aおよび図19bに示すように、標本は、2×2ビニングで1分間、映像化された。表示を改善するためにImageJを使ってコントラストが調整され、同じ調整が両方の標本に適用された。
レジン充填を有する歯が評価された。歯は、光の中で、2×2ビニングおよび10 msの画像捕捉時間を使って、ソニーHX9カメラで映像化された。1mM EDTAによって準備された1%のAkucell 3625ゲル(開示したゲル)中の1mg/cm3エクオリン0.2 cm3が、自動分注器で歯に移された。図21に示すように、2×2ビニングの1分の画像が、暗闇の中ですぐに撮影された。
歯は、脱イオン水中の1mg/cm3エクオリン2 cm3で評価される前に、脱イオン水または、ねり歯みがきおよび脱イオン水で磨かれた。ねり歯みがきが分析に干渉しないことを示す対照区より以上に、ねり歯みがきで処理された表面からは余分な光は見られなかった(データは示されていない)。
炭酸化された清涼飲料は、高レベルの酸を含んでおり、歯の酸蝕症の原因であることが知られており、象牙質の神経過敏を悪化させる。抜かれた歯の多くが、これらの飲み物の中で培養され、エクオリンがそれらの効果を評価するために使われた。これは、酸蝕症(および間接的には神経過敏)のための分析、または敏感な個人を識別する方法を開発する視点で着手された。
例えば裂け目密封剤が堅く付着されるように、歯のエッチングゲルは、歯の表面を荒くするために使用される。エッチングゲルは、局部で限定された深度でエッチングを行う酸性の調剤である。
異なる人々は、酸蝕症および神経過敏に対する異なる感受性を有している。歯の酸蝕症防止に影響する最も重要な要因がだ液(流量、組成、緩和処理および再鉱物化能力)であることは一般に考えられているけれど、これは、いくぶん歯のフッ素症と位置調整のような治療によることが知られている。
異なる食料品は、異なるレベルの酸蝕症を引き起こすことが知られている(例えば、 Hemingway et al., British Dental Journal (2006); 201 , 439)。これは、一つには食料のpHにより、また一つにはカルシウム濃度による。例えば、炭酸化された清涼飲料は、高レベルの酸を含んでいて、歯の酸蝕症の原因であることが知られており、象牙質の神経過敏を悪化させる。
Claims (38)
- 遊離イオン存在を特徴付ける光信号を生成可能な複合体を含む医薬組成物。
- 遊離イオン存在を特徴付ける光信号を生成可能な複合体を含む、活発な虫歯および/または酸蝕症による活発な歯の脱灰を見つけるために使用される組成物。
- 前記複合体は染料、EDTAレポーター複合体のような合成イオンキレート剤、または、クラウンエーテルレポーター複合体、タンパク質もしくはタンパク質レポーター複合体、分子認識ポリマーレポーター複合体もしくは分子プローブのような大員環である、請求項1または2記載の組成物。
- 検出される少なくとも一つのイオンは、カルシウムイオン、マグネシウムイオン、リン酸イオン、炭酸イオン、カリウムイオン、ストロンチウムイオン、フッ化物イオン、銅イオン、塩化物イオン、亜鉛イオン、鉛イオン、スズイオン、鉄イオン、または、エナメリンのような有機物質の群から選ばれる、請求項1または2記載の組成物。
- さらに医薬的に許容される添加剤を含む、請求項1または2記載の組成物。
- 前記添加剤は治療的に活性な薬剤である、請求項5記載の組成物。
- 前記活性な薬剤は殺菌性または静菌性の薬剤である、請求項6記載の組成物。
- さらに医薬的に許容される賦形剤を含む、請求項1乃至7のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記賦形剤は風味または着色添加剤である、請求項6記載の組成物。
- 医薬的に許容される剤形を成している、請求項1乃至9のいずれか1項に記載の組成物。
- 液体、粉末、成形物またはゲルである、請求項10記載の組成物。
- 約1ng/ml乃至約10mg/mlの複合体、または、十分に高いSN比を与える濃縮物を含む、請求項1乃至11のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記複合体はタンパク質またはタンパク質複合体である、請求項1乃至12のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記タンパク質またはタンパク質複合体は、生成される光信号に結びつく遊離イオンを結合したとき構造変化を受ける、請求項13記載の組成物。
- 前記タンパク質またはタンパク質複合体は、エクオリン、オベリン、クリチン、ミトロコミン、ハリスタウリン、ピアリディン、ムネミオプシン、シンプレクチン、ジーアール−ボリノプシン、カゼイン、カルゼクエストリン、カレックスサイチン、カルシウム結合のシステインプロテアーゼ、カルモデュリンおよび他のEFハンドタンパク質ベロビン、またはそれらの混合物を含む、請求項13記載の組成物。
- 前記タンパク質またはタンパク質複合体は、蛍光性のタンパク質、カルモデュリンおよびカルモデュリン結合ペプチド(M13)が縦に連結した融合体を含む、請求項13記載の組成物。
- 前記複合体はイオンの存在を示す特有の波長で蛍光を発する、請求項1乃至16のいずれか1項に記載の組成物。
- 遊離イオンを結合したとき光信号を生成する複合体、および遊離イオンの存在を示す特有の波長で蛍光を発する複合体の両方を含む、請求項1乃至17のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記タンパク質またはタンパク質複合体は、前記信号を強めるために、またはその放射スペクトルを変更するために修飾されている、請求項13記載の組成物。
- 前記タンパク質またはタンパク質複合体の前記修飾は、遺伝子のDNA配列の変更を通じて、または、アセチル化、エトキシカルボニル化、フルオレスカミン修飾もしくはフルオレセイン標識により、または、キメラタンパク質の創作により成される、請求項19記載の組成物。
- 前記タンパク質またはタンパク質複合体は、組換えタンパク質を含む、請求項13記載の組成物。
- 光学的に透明である、請求項1乃至21のいずれか1項に記載の組成物。
- 前記光信号は、分光光度計、電荷結合素子(CCD)、相補型金属酸化膜半導体 CMOS、デジタルカメラ、インテンシファイドカメラ、口腔内カメラ、ビデオスコープ、写真用フィルム、光ファイバー装置、光度検出器、光電子増倍管、微小電気機械システム(MEMS)、または目視により検出される、請求項1乃至22のいずれか1項に記載の組成物。
- 虫歯の検出に使用する調薬を製造するための、請求項1乃至23のいずれか1項に記載の組成物の使用方法。
- 活発な虫歯と不活発な虫歯との識別に使用する調薬の製造における、請求項24記載の組成物の使用方法。
- 酸蝕症による歯の脱灰の検出に使用する調薬を製造するための、請求項1乃至23のいずれか1項に記載の組成物の使用方法。
- 象牙質の神経過敏に関連する象牙質の脱灰の場所を検出する調薬を製造するための、
請求項1乃至23のいずれか1項に記載の組成物の使用方法。 - 歯を請求項1乃至23のいずれか1項に記載の組成物に触れさせる工程と、その結果として生じる信号を検出する工程とを含む、歯の脱灰の検出方法。
- 詳細な部位の同定を可能にするために、前記歯または歯の模型の部位に印を付ける工程をさらに含む、請求項28記載の方法。
- 前記組成物に触れさせる前に、前記歯を感光性の溶液に触れさせる工程をさらに含む、請求項28記載の方法。
- 前記感光性の溶液は酸性の溶液を含む、請求項30記載の方法。
- 前記感光性の溶液は糖を含有する溶液を含む、請求項30記載の方法。
- 前記感光性の溶液の適用と請求項1乃至23のいずれか1項に記載の前記検出組成物の適用との間に、所定の時間が経過してもよい、請求項30記載の方法。
- 前記所定の時間は、1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27,28,29または30秒である請求項33記載の方法。
- 検出は、分光光度計、電荷結合素子(CCD)、相補型金属酸化膜半導体 CMOS、デジタルカメラ、インテンシファイドカメラ、口腔内カメラ、ビデオスコープ、写真用フィルム、光ファイバー装置、光度検出器、光電子増倍管、アバランシェフォトダイオード、感光アレイ、微小電気機械システム(MEMS)、または目視によって実施される、請求項24乃至34のいずれか1項に記載の方法。
- a)イオン感受性の複合体を含有する請求項1乃至23のいずれか1項に記載の組成物、
b)前記組成物を適用する手段、および
c)検出装置
を含む、脱灰を検出するのに使用されるキット。 - 酸性の溶液、または糖を含有する感光性の溶液をさらに含む、請求項36記載のキット。
- 歯または歯の模型の関心のある領域に印を付けるための格子のような目印をさらに含んでいる、請求項36記載のキット。
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