JP2013534430A - 植物においてタンパク質を産生する方法 - Google Patents
植物においてタンパク質を産生する方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2013534430A JP2013534430A JP2013520087A JP2013520087A JP2013534430A JP 2013534430 A JP2013534430 A JP 2013534430A JP 2013520087 A JP2013520087 A JP 2013520087A JP 2013520087 A JP2013520087 A JP 2013520087A JP 2013534430 A JP2013534430 A JP 2013534430A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- plant
- pressure
- chamber
- cycles
- plants
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8243—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits involving biosynthetic or metabolic pathways, i.e. metabolic engineering, e.g. nicotine, caffeine
- C12N15/8251—Amino acid content, e.g. synthetic storage proteins, altering amino acid biosynthesis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
- C12N15/8202—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation by biological means, e.g. cell mediated or natural vector
- C12N15/8205—Agrobacterium mediated transformation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G7/00—Botany in general
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Ecology (AREA)
- Forests & Forestry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
【選択図】 図6
Description
(i)丸のままの植物(特に丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分または複数の丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分)を、流体中に懸濁したアグロバクテリウム細胞と接触させ、アグロバクテリウム細胞が対象となる異種ペプチドまたはタンパク質をコードする発現可能な(特に植物で発現可能な)コンストラクトを含む工程と;
(ii)該植物もしくは植物部分または複数の植物もしくは植物部分およびアグロバクテリウム細胞を1つまたは複数の圧力サイクルにより処理し、それによってアグロバクテリウム細胞が丸のままの植物または植物部分にインフィルトレーションされる工程と
を含み、
発現可能なコンストラクトが対象となる異種ペプチドまたはタンパク質の一過性の発現を提供するように選択され、圧力サイクルの少なくとも1つが大気圧と比較して増加した圧力を含む、
対象となる異種ペプチドまたはタンパク質を産生する方法を一実施形態において提供する。本発明の特定の実施形態において、植物は1つまたは複数の圧力サイクルにより処理され、それらはすべて大気圧と比較して増加した圧力を含む。特定の実施形態において、1つのサイクルあたりの圧力は0.5秒〜60秒の期間の間維持される。
(i)丸のままの植物(特に丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分または複数の丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分)を、流体中に懸濁したアグロバクテリウム細胞と接触させる工程と;
(ii)該植物もしくは植物部分または複数の植物もしくは植物部分およびアグロバクテリウム細胞を1つまたは複数の圧力サイクルにより処理する工程と
を含み、
発現可能なコンストラクトが対象となる異種ペプチドまたはタンパク質の一過性の発現を提供するように選択され、圧力サイクルの少なくとも1つが大気圧と比較して増加した圧力を含む、
植物もしくは植物部分または複数の植物もしくは植物部分の中へアグロバクテリアをインフィルトレーションする方法を提供する。本発明の特定の実施形態において、植物は1つまたは複数の圧力サイクルにより処理され、それらはすべて大気圧と比較して増加した圧力を含む。特定の実施形態において、1つのサイクルあたりの圧力は0.5秒〜60秒の期間の間維持される。
〔表2〕 アグロバクテリウム接種物の調製内に使用される、組成物A91(蛍光タンパク質TurboGFPの遺伝子を保有するAGL1株)およびA17(p19サイレンシング抑制因子の遺伝子を保有するAGL1株)に関する実験的な情報を示した表である。
〔表3〕 インフィルトレーション実験内で使用されるパラメータによる6つの異なる条件を示した表である。
〔表4〕 さらなるインフィルトレーション実験内で使用されるパラメータによる9つの異なる条件を示した表である。
〔表5〕 植物抽出物(TurboGFPを発現しないA17のみによりインフィルトレーションしたN.b.葉サンプルからのモック抽出物)におけるTurboGFP対照タンパク質(rTurbo GFP、Evrogen #FP552)の標準的な希釈を示した表である。
〔表6〕 g凍結重量あたりのμg GFPで表現されたGFP濃度に基づいた条件間の差異の95%の信頼区間による分析を示した表である。
〔表7〕 %TSP(「可溶性タンパク質の合計」)で表現されたGFP濃度に基づいた条件間の差異の95%の信頼区間による分析を示した表である。
〔表8〕 インフィルトレーションした葉のμg GFP/g凍結重量に基づいた条件間の差異の95%の信頼区間による分析を示した表である。
〔表9〕 1植物あたりのmg GFPに基づいた条件間の差異の95%の信頼区間による分析を示す。
〔表10〕 TSPのパーセントにおけるGFP濃度(「可溶性タンパク質の合計」)濃度に基づいた条件間の差異の95%の信頼区間による分析を示した表である。
〔表11〕 最適条件および参照における過剰圧力を比較するANOVAを示した表である。
〔表12〕 最適条件および参照についての個々の95%の信頼区間による平均値を示した表である。
植物を、A91(蛍光タンパク質TurboGFPの遺伝子を保有するAGL1アグロバクテリウム株)、およびA17(p19サイレンシング抑制因子の遺伝子を保有するAGL1アグロバクテリウム株)の混合物からなる細菌懸濁液によりインフィルトレーションした。
1)インフィルトレーションの2日後から収穫の日の間に青色光下で、丸のままの植物または分離したインフィルトレーションした葉のイメージングによって定期的にモニタリングし、
2)抽出後にマイクロプレート蛍光リーダーで定量化した。
−大気圧から50mbar絶対圧への3分間の圧力低下、
−50mbarでの1分間の保持時間、
−約3秒の急速な逃がし。
この実験のために、細菌懸濁液により充填された1Lまたは2Lのビーカー中での地上部の浸漬によって、植物をひとつずつインフィルトレーションした。
1.手動式ボールバルブV2およびV3の調整バルブを閉鎖して、V1を所望される圧縮空気圧力に設定した。
2.V2を10秒間開け、タンクの内部で達成された圧力を水銀圧力計M1によってモニタリングした。
3.V2を閉鎖し、V3を開けてサイレンサーS1を通してシステムを通気することによってタンクを大気圧に戻した。
4.蓋を開け、植物をホルダーから除去した。
A91(蛍光タンパク質TurboGFPの遺伝子を保有するAGL1株)およびA17(p19サイレンシング抑制因子の遺伝子を保有するAGL1株)の混合物からなる6×濃縮接種物を調製し(表1および2)、インフィルトレーションの日まで4℃で保存した。
表1
表2
ニコチアナ・ベンサミアナ、アクセッションMIMの植物を、20時間の光、26℃/20℃の昼/夜の温度および70%/50%の昼/夜の相対湿度により温室中で成長させた。自然光が200W/m2未満である場合(20時間の光)、約100μmol/m2/sのPARを与える15000または20000のルクス照明装置により2時00分〜22時00の間に、人工照明を自動的に作動させる。植物をロックウールブロック(Grodan Delta Grow Blocksサイズ6.5)において成長させた。地下灌水による灌水同時施肥を、30分間25mmの水で2日ごとに適用した。施肥は、2.5 mS/cmのECおよび5.8のpHに調節された。
インフィルトレーション後に、植物を収穫までS2コンパートメント中の温室ベンチに置いた。必要な場合にドリップ灌水システムを使用して水および肥料を植物に与えた。環境条件(回収およびインキュベーション相の間に使用される施肥、光サイクルおよび温度等)は、植物の成長のために使用されるものと同じであった(上記参照)。turboGFP発現に影響を与えないことが以前に示されているので、植物の暗所インキュベーションはなかった。
turboGFPの一過性の発現は、インフィルトレーションの5日または6日後に青色光下での植物の撮影によってモニタリングした。turboGFP(482nmで最大励起)の励起の範囲内の光を放射するダークリーダーランプ(HL32T Hand Lamp、Clare Chemical Research、USA)を使用した。ランプ製造者によって提供されたアンバーフィルターを装備したデジタルカメラにより暗所環境において写真を撮影した。
次いで植物を青色光下に置き、すべては伸長し、蛍光を示すインフィルトレーションした葉を回収した。先端でのみ蛍光を示す主枝および腋枝の頂点の葉は収穫しなかった。収穫した葉を蛍光イメージングのためのプラスチックシートの下に最初に置いた。次いでそれらをジップバッグ中に置き、収穫が完了するまで4℃に移した。次いでバッグをすべて研究室に戻し、葉を分析のために加工するまで、マイナス80℃に移した。
1つのサンプルが、完全にホモジナイズした単一の植物から収穫されたすべてのインフィルトレーションした葉に対応するように、各々のバッグの内容物をコーヒーグラインダー/ドライアイス方法を使用して細粉に破砕した。1.00g±0.05g凍結重量の粉末のサブサンプルを抽出のためにドライアイス上で調製した。抽出は、3mLの抽出緩衝液(50mMトリスベース;100mM NaCl;EDTA 1mM;0.2%トリトンX−100;pH7.5)に対して1gの凍結重量の比で、2工程の20秒間のボルテックス続いて20000gで15分間の遠心分離によって実行された。可溶性抽出物を分析のために冷凍した。
表5
抽出物中の全可溶性タンパク質を、マイクロプレートリーダーで595nmの吸光度測定によってPierce(#24236)からのクマシー−プラスアッセイ試薬を使用して決定した。抽出物を超純水中で1:10または1:20に希釈し、10μLを平底マイクロプレートに三重でロードした。100〜400μg/mLの濃度範囲でウシ血清アルブミン(BSA)の連続的な希釈からスタンダードカーブを作製した。結果は三重間の変動係数(CV)が8%未満の場合に有効であると判断された。
第1のインフィルトレーション実験を実行して、真空(50mbar絶対圧)によるインフィルトレーションの効率を0.5barから2.5barにわたる陽圧値と比較した(表3)。
表6。95%の信頼区間による条件間の差異の分析
表7。95%の信頼区間による条件間の差異の分析
表8。95%の信頼区間による条件間の差異の分析
表9。95%の信頼区間による条件間の差異の分析
表10。95%の信頼区間による条件間の差異の分析
使用されるバイオマスがアグロ−インフィルトレーションのために現在使用した発育ステージ(ステージ10、5〜6週齢の植物、約15cmの高さ、よく伸長した葉および最大1つの開いた花)に到達した場合、丸のままN.ベンサミアナ植物のアグロ−インフィルトレーションのための2.0〜3.0barの間の過剰圧力の効率および組換えTurboGFPの一過性の発現は、バキュームインフィルトレーションの現在使用される方法のものに匹敵する。1.5bar以下の過剰圧力が使用された場合、またはインフィルトレーションのために使用された植物がより若い発育ステージ(すなわちステージ8)であった場合、過剰圧力によるインフィルトレーションの効率は、真空によるインフィルトレーションよりも低かった。
バキュームインフィルトレーションおよび陽圧を使用する本発明の方法の直接比較を3つのタバコ品種について行なった。この実験において、合計150のタバコ植物(各々のタバコ品種あたり50)を標準的温室条件(24℃および20時間の光)下で発芽および成長させた。N.タバカム植物を、タバコウイルスからのサイレンシング抑制因子(SoS)と組み合わせて緑色蛍光タンパク質TurboGFPを含むアグロバクテリウム培養(Agl1)により形質転換した。バキュームインフィルトレーションは、一般に使用される条件のセット(50mbar、60秒の保持時間)および7つの異なる陽圧条件を使用して適用された。特に、2つの因子(陽圧値[1.5〜4.5bar]および圧力サイクルの数(「パルス」)[1〜8])を検査し、その一方で圧力保持時間/パルスを1秒に維持して全プロセス時間を最小に維持する。
各々の品種について個別の2要因ANOVAを行なって、蛍光平均値の均等性を試験し、相互作用および主効果の有意な証拠があるかどうかをチェックする。0.05のαレベル(第1種の過誤についての標準的レベルのリスク)についての圧力*パルス相互作用の有意な証拠はないが、植物1および植物2については圧力およびパルスの主効果、および植物3については圧力主効果のみの有意な証拠があった。モデルから相互作用項を省いて付加モデルも計算したが、妥当な差異はなかった。植物1は、4.5barの圧力および8パルスのサイクルについての蛍光平均値の間で有意により高い差異を示した。シンプルANOVAを使用して、最適条件からの蛍光測定をバキューム法を使用して得られた参照測定と比較する(表11を参照)。p値および観察された反応値の変動量から(R2および調整されたR2、表10を参照されたい)、植物2について、参照との統計的に有意な差異があることが推論される。
表11
表12
データは、バキューム法の使用によって得られた測定と比較して、4.5barの過剰圧力および8パルスのサイクルで、植物2についての有意に高い蛍光測定を示す。圧力およびパルスを増加させた場合、3つのN.タバカム品種は蛍光測定の増加を示し、このことは、圧力および圧力サイクル数を増加させることがインフィルトレーション効率を改善するという結論を導く。
Claims (31)
- a)丸のままの手を加えていない植物または丸のままの手を加えていない植物の部分を流体中に懸濁されたアグロバクテリウム(Agrobacterium)細胞と接触させ、アグロバクテリウム細胞が対象となる異種ペプチドまたはタンパク質をコードする発現可能なコンストラクトを含む工程と;
b)丸のままの手を加えていない植物または丸のままの手を加えていない植物の部分およびアグロバクテリウム細胞を1つまたは複数の圧力サイクルにより処理し、それによってアグロバクテリウム細胞が丸のままの植物または植物部分にインフィルトレーションされる工程と
を含み、
圧力サイクル(複数可)の少なくとも1つが大気圧と比較して増加した圧力を含み、0.5秒〜60秒の期間の間維持される、
対象となる異種ペプチドまたはタンパク質を産生する方法。 - a)丸のままの手を加えていない植物または丸のままの手を加えていない植物の部分を流体中に懸濁したアグロバクテリウム細胞と接触させる工程と;
b)丸のままの植物または丸のままの手を加えていない植物の部分およびアグロバクテリウム細胞を1つまたは複数の圧力サイクルにより処理する工程と、
を含み、
圧力サイクル(複数可)の少なくとも1つが大気圧と比較して増加した圧力を含み、0.5秒〜60秒の期間の間維持される、
丸のままの手を加えていない植物または丸のままの手を加えていない植物の部分の中へアグロバクテリウム細胞をインフィルトレーションする方法。 - 前記発現可能なコンストラクトが植物で発現可能なコンストラクトであり、対象となる異種ペプチドまたはタンパク質の一過性の発現を提供するように選択される、請求項1〜2のいずれか一項に記載の方法。
- 前記圧力が0.5秒〜60秒の期間の間維持される、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記圧力は、丸のままの手を加えていない植物または丸のままの手を加えていない植物の部分が細菌細胞懸濁物中のアグロバクテリウム細胞に接している間に、該植物または植物部分に適用される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記アグロバクテリウム細胞の懸濁物が少なくとも1.0のOD600を含む、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記丸のままの植物または植物部分およびアグロバクテリウム細胞が、閉じたシステム(特に丸のままの植物または植物部分の収容のために構成されたチャンバーおよびチャンバー中の空気および/または流体圧力を調節して増加させるための手段を含むシステム)内で、1つまたは複数の圧力サイクルにより処理される、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記チャンバーは、地上部および地中部を含む植物体全体がアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水され、1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされるように構成される、請求項7に記載の方法。
- 前記チャンバーは、植物の地上部のすべてまたは部分のみがアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水されるが、植物の地上部に加えて地中部を含む植物全体が1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされるように構成される、請求項7に記載の方法。
- 前記チャンバーは、植物の地上部のすべてまたは部分がアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水され、1つまたは複数の圧力サイクルにおいて圧力に曝露されるように構成されるが、前記植物の地中部(特に植物根)は、それらがアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水されず、1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされないようにチャンバーの外部に配置される、請求項7に記載の方法。
- 前記丸のままの植物または植物部分を処理する工程が、
a)少なくとも2サイクル;または
b)少なくとも3サイクル;または
c)少なくとも4サイクル;または
d)少なくとも8サイクル
を含む、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。 - 前記圧力サイクルの少なくとも1つが、
a)少なくとも3.5barの圧力;または
b)少なくとも4.5bar;または
c)少なくとも6.5bar;または
d)少なくとも8bar;または
e)少なくとも12bar
により丸のままの植物または植物部分を処理することを含む、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。 - 前記圧力が、
a)0.5秒/サイクル〜10秒/サイクル;または
b)1秒/サイクル〜5秒/サイクル;または
c)0.5秒/サイクル〜1秒/サイクル
の間で適用される、請求項1〜12のいずれか一項に記載の方法。 - 大気圧と比較して増加した圧力により丸のままの植物または植物部分を処理する前記工程が、
a)少なくとも0.5秒/サイクルで、少なくとも8barの圧力で、少なくとも1サイクル;または
b)少なくとも0.5秒/サイクルで、少なくとも6barの圧力で、少なくとも2サイクル;または
c)少なくとも1秒/サイクルで、少なくとも4.5barの圧力で、少なくとも8サイクル
を含む、請求項1〜13のいずれか一項の方法。 - 丸のままの植物または植物部分を大気圧と比較して増加した圧力により処理する前記工程が、少なくとも1秒/サイクルで、少なくとも4.5barの圧力の、少なくとも8サイクルを含む、請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法。
- 丸のままの植物または植物部分をアグロバクテリウム細胞と接触させる前記工程が、
a)植物またはその部分をアグロバクテリウム細胞の懸濁物に漬け、懸濁物が少なくとも2.5のOD600を含む工程と、
b)植物またはその部分を少なくとも2.5のOD600を含むアグロバクテリウム細胞の懸濁物の使用によって生成されたエアゾールへ曝露する工程と
を含む、請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法。 - 前記工程が、
a)封入されたチャンバー中のアグロバクテリウム細胞の懸濁物中に植物またはその部分を浸水する工程と、
b)浸水した植物またはその部分を含むアグロバクテリウム細胞の懸濁物へ液体の流体圧力を適用する工程と
を含む、請求項〜16のいずれか一項に記載の方法。 - 前記植物が8、9または10の発育ステージのタバコ属の種(特にニコチアナ・タバカム(Nicotiana tabacum)種)であり、該植物が約6.5cm〜約16.5cmの間の平均長を有する、請求項1〜17のいずれか一項に記載の方法。
- 前記適用される圧力サイクルのすべてが、大気圧と比較して増加した圧力を含む、請求項1〜18のいずれか一項に記載の方法。
- 1つまたは複数の圧力サイクルを含む前記加圧処理は、丸のままの手を加えていない植物または丸のままの手を加えていない植物の部分が細菌細胞懸濁物中に浸水している間に適用される、請求項1〜19のいずれか一項に記載の方法。
- 前記複数の植物または植物部分が、流体中に懸濁されて1つまたは複数の圧力サイクルにより処理されたアグロバクテリウム細胞と接触される、請求項1〜20のいずれか一項に記載の方法。
- 丸のままの植物または植物部分の収容のために構成されたチャンバーならびにチャンバー中の空気および/または流体の圧力を調節して増加させるために構成された手段を含む、丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分の中へアグロバクテリウム細菌をインフィルトレーションするためのおよび/または丸のままの手を加えていない植物もしくは丸のままの手を加えていない植物の部分において異種ペプチドまたはタンパク質を産生するためのシステム。
- コンプレッサーおよび減圧装置を含む、請求項22に記載のシステム。
- 流体の流れを調節する、チャンバーの内部と外部との間の流体経路を提供するための複数の注入口、流出口および導管を含む、請求項22に記載のシステム。
- 前記チャンバーが、内部において液体の霧化またはアエロゾル化のために形作られる複数のノズルを含む、請求項22または24のいずれか一項に記載のシステム。
- 前記チャンバーが、地上部および地中部を含む植物体全体がアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水され、1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされるように構成される、請求項22〜25のいずれか一項に記載のシステム。
- 前記チャンバーは、植物の地上部のすべてまたは部分のみがアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水されるが、植物の地上部に加えて地中部を含む植物全体が1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされるように構成される、請求項22〜25のいずれか一項に記載のシステム。
- 前記チャンバーは、植物の地上部のすべてまたは部分がアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水され、1つまたは複数の圧力サイクルにおいて圧力に曝露されるように構成されるが、前記植物の地中部(特に植物根)は、それらがアグロバクテリウム細胞を含むインフィルトレーション培地中に浸水されず、1つまたは複数の圧力サイクルの間に適用される圧力にさらされないようにチャンバーの外部に配置される、請求項22〜25のいずれか一項に記載のシステム。
- 前記チャンバーが挿入または除去の間の植物の地上部の通過を可能にする1つまたは複数の開口部を含み、その開口部が弾性シールにより裏打ちされる、請求項28に記載のシステム。
- 前記弾性シールが弾性の空気圧シールまたは水圧シールである、請求項29に記載のシステム。
- 丸のままの植物もしくは植物部分の中へアグロバクテリウム細菌をインフィルトレーションするためのおよび/または丸のままの植物もしくは植物部分において異種ペプチドまたはタンパク質を産生するための請求項22〜30のいずれか一項に記載のシステムの使用。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP10169888.4 | 2010-07-16 | ||
EP10169888 | 2010-07-16 | ||
PCT/EP2011/062180 WO2012007587A1 (en) | 2010-07-16 | 2011-07-15 | Methods for producing proteins in plants |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013534430A true JP2013534430A (ja) | 2013-09-05 |
JP5995327B2 JP5995327B2 (ja) | 2016-09-21 |
Family
ID=43033132
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013520087A Active JP5995327B2 (ja) | 2010-07-16 | 2011-07-15 | 植物においてタンパク質を産生する方法 |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9512439B2 (ja) |
EP (1) | EP2593553B1 (ja) |
JP (1) | JP5995327B2 (ja) |
KR (1) | KR20130126578A (ja) |
CN (1) | CN106520520B (ja) |
BR (1) | BR112013001189A2 (ja) |
CA (1) | CA2805620C (ja) |
RU (1) | RU2662866C2 (ja) |
SG (2) | SG10201505511WA (ja) |
WO (1) | WO2012007587A1 (ja) |
ZA (1) | ZA201300275B (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016167990A (ja) * | 2015-03-11 | 2016-09-23 | 三菱化学株式会社 | 植物栽培方法及びそれを用いる有用タンパク質の製造 |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP6037395B2 (ja) * | 2011-01-17 | 2016-12-07 | フィリップ・モーリス・プロダクツ・ソシエテ・アノニム | 植物におけるタンパク質発現 |
US10058039B2 (en) * | 2012-02-15 | 2018-08-28 | Medicago Inc. | Plant infiltration device |
FR2991996B1 (fr) * | 2012-06-13 | 2016-07-08 | Angany Genetics | Methode de production d'allergenes recombinants de haute qualite par expression transitoire chez nicotiana benthamiana |
WO2015034042A1 (ja) | 2013-09-06 | 2015-03-12 | 三菱化学株式会社 | 植物を用いたタンパク質の製造方法 |
JP6391004B2 (ja) * | 2014-09-03 | 2018-09-19 | パナソニックIpマネジメント株式会社 | 水耕栽培装置 |
WO2017079676A1 (en) * | 2015-11-04 | 2017-05-11 | Massachusetts Institute Of Technology | Nanobionic light emitting plants |
CN113930445A (zh) * | 2021-09-24 | 2022-01-14 | 南京农业大学 | 一种在头状花序中实现基因瞬时转染的方法 |
WO2024014976A1 (ru) * | 2022-07-13 | 2024-01-18 | Институт Полиомиелита, Федеральный Научный Центр Исследований И Разработки Иммунобиологических Препаратов Им. М.П. Чумакова Российской Академии Наук, Фгану | Инфильтрация целевых компонентов в ткани вегетирующего растения |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5611172A (en) * | 1992-10-06 | 1997-03-18 | Agripak, Inc. | Apparatus for the treatment of live plants |
WO1999048355A1 (en) * | 1998-03-20 | 1999-09-30 | Forbio Limited | A method of transformation |
WO2001012828A1 (en) * | 1999-08-18 | 2001-02-22 | Paradigm Genetics, Inc. | Methods and apparatus for transformation of monocotyledenous plants using agrobacterium in combination with vacuum filtration |
WO2005017169A1 (ja) * | 2003-08-13 | 2005-02-24 | Japan Tobacco Inc. | 植物材料への遺伝子導入を行う方法 |
WO2009011726A1 (en) * | 2007-07-19 | 2009-01-22 | Syngenta Participations Ag | Method to increase the rate of transgenic embryo formation after inoculation of immature cotyledons with different strains of agrobacterium tumefaciens |
WO2009095183A1 (en) * | 2008-02-01 | 2009-08-06 | Bayer Innovation Gmbh | System and method for large-scale infiltration of plants |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6483013B1 (en) | 1999-05-19 | 2002-11-19 | Bayer Bioscience N.V. | Method for agrobacterium mediated transformation of cotton |
GB0120311D0 (en) * | 2001-08-21 | 2001-10-17 | Immunoporation Ltd | Treating cells |
WO2005076766A2 (en) | 2002-12-23 | 2005-08-25 | Sunol Molecular Corporation | Transient production of pharmaceutically important proteins in plants |
ES2322809T3 (es) * | 2003-01-31 | 2009-06-29 | Icon Genetics Gmbh | Metodo de transformacion de plantas con ensamblaje in vivo de un tratamiento. |
US7560611B2 (en) * | 2003-08-05 | 2009-07-14 | Monsanto Technology Llc | Method and apparatus for substantially isolating plant tissues |
EP1564295A1 (en) | 2004-01-23 | 2005-08-17 | Icon Genetics AG | RNA virus-derived plant expression system |
US8679291B2 (en) * | 2007-03-13 | 2014-03-25 | Heartland Technology Partners Llc | Compact wastewater concentrator using waste heat |
US8143484B2 (en) * | 2008-01-23 | 2012-03-27 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Method for regulating agrobacterium-mediated transformation |
RU91335U1 (ru) * | 2009-04-08 | 2010-02-10 | Поль Эмануилович Бланк | Устройство для обработки среды |
-
2011
- 2011-07-15 KR KR1020137001982A patent/KR20130126578A/ko not_active Application Discontinuation
- 2011-07-15 JP JP2013520087A patent/JP5995327B2/ja active Active
- 2011-07-15 EP EP11735855.6A patent/EP2593553B1/en active Active
- 2011-07-15 US US13/809,995 patent/US9512439B2/en active Active
- 2011-07-15 WO PCT/EP2011/062180 patent/WO2012007587A1/en active Application Filing
- 2011-07-15 SG SG10201505511WA patent/SG10201505511WA/en unknown
- 2011-07-15 BR BR112013001189A patent/BR112013001189A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2011-07-15 CA CA2805620A patent/CA2805620C/en active Active
- 2011-07-15 SG SG2013002068A patent/SG187020A1/en unknown
- 2011-07-15 RU RU2013106842A patent/RU2662866C2/ru active
- 2011-07-15 CN CN201611043188.3A patent/CN106520520B/zh not_active Expired - Fee Related
-
2013
- 2013-01-11 ZA ZA2013/00275A patent/ZA201300275B/en unknown
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5611172A (en) * | 1992-10-06 | 1997-03-18 | Agripak, Inc. | Apparatus for the treatment of live plants |
WO1999048355A1 (en) * | 1998-03-20 | 1999-09-30 | Forbio Limited | A method of transformation |
WO2001012828A1 (en) * | 1999-08-18 | 2001-02-22 | Paradigm Genetics, Inc. | Methods and apparatus for transformation of monocotyledenous plants using agrobacterium in combination with vacuum filtration |
WO2005017169A1 (ja) * | 2003-08-13 | 2005-02-24 | Japan Tobacco Inc. | 植物材料への遺伝子導入を行う方法 |
WO2009011726A1 (en) * | 2007-07-19 | 2009-01-22 | Syngenta Participations Ag | Method to increase the rate of transgenic embryo formation after inoculation of immature cotyledons with different strains of agrobacterium tumefaciens |
WO2009095183A1 (en) * | 2008-02-01 | 2009-08-06 | Bayer Innovation Gmbh | System and method for large-scale infiltration of plants |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JPN6015036056; Kapila et al: Plant Science Vol. 122, 1997, p. 101-108 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2016167990A (ja) * | 2015-03-11 | 2016-09-23 | 三菱化学株式会社 | 植物栽培方法及びそれを用いる有用タンパク質の製造 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN103068990A (zh) | 2013-04-24 |
SG10201505511WA (en) | 2015-08-28 |
JP5995327B2 (ja) | 2016-09-21 |
US9512439B2 (en) | 2016-12-06 |
WO2012007587A1 (en) | 2012-01-19 |
KR20130126578A (ko) | 2013-11-20 |
CN106520520B (zh) | 2019-08-02 |
ZA201300275B (en) | 2016-01-27 |
EP2593553B1 (en) | 2018-03-14 |
CA2805620C (en) | 2019-09-03 |
RU2013106842A (ru) | 2014-08-27 |
EP2593553A1 (en) | 2013-05-22 |
SG187020A1 (en) | 2013-02-28 |
RU2662866C2 (ru) | 2018-07-31 |
US20130205448A1 (en) | 2013-08-08 |
BR112013001189A2 (pt) | 2016-05-31 |
CA2805620A1 (en) | 2012-01-19 |
CN106520520A (zh) | 2017-03-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5995327B2 (ja) | 植物においてタンパク質を産生する方法 | |
Pogue et al. | Making an ally from an enemy: plant virology and the new agriculture | |
WO2017195906A1 (ja) | 植物のゲノム編集方法 | |
ES2940673T3 (es) | Promotores específicos de tricomas para la manipulación de cannabinoides y otros compuestos en tricomas glandulares | |
WO2017195905A1 (ja) | 形質転換植物の作製方法 | |
JP2005500827A5 (ja) | ||
MXPA06009225A (es) | Plantas modificadas con mini-cromosomas. | |
KR20080113372A (ko) | 식물 시스템 내에서 외래 핵산과 폴리펩티드의 생산 | |
ES2461941T3 (es) | Método para la producción de proteínas recombinantes a partir de raíces pilosas de plantas | |
JP2009514547A (ja) | 組み換え植物懸濁培養物を使用するワクチンマスター細胞系統の調製 | |
MXPA01006457A (es) | Plantas transgenicas que comprenden un gen condicionalmente letal. . | |
JP2005534299A (ja) | 減圧処理/加圧処理の使用を含むエレクトロポーレーション方法 | |
BRPI0809359A2 (pt) | Desumidificador | |
JP2006518994A (ja) | 植物体における製薬に重要な蛋白質の一過性産生 | |
JP2005510207A (ja) | 人及び動物の治療用又は診断用タンパク質を製造するための、アラビドプシスの工業的利用 | |
WO2015156340A1 (ja) | 植物による有用タンパク質の製造方法 | |
KR101922429B1 (ko) | 국화 유래 전신 발현 프로모터 및 이의 용도 | |
CN103068990B (zh) | 用于在植物中生产蛋白质的方法 | |
Siegert et al. | Expression of the major mugwort pollen allergen Art v 1 in tobacco plants and cell cultures: problems and perspectives for allergen production in plants | |
US20140205625A1 (en) | Methods to increase antigenicity of membrane-bound polypeptides produced in plants | |
US8148603B2 (en) | Transgenic ficus, method for producing same and use thereof | |
JPWO2006038571A1 (ja) | 減圧処理/加圧処理の使用を含む、アグロバクテリウムを用いる細胞への核酸導入方法 | |
WO2001023595A2 (en) | Reduced gravity transformation process and product | |
KR102081963B1 (ko) | 식물 성숙 종자에서 특이적 유전자 발현을 유도하는 프로모터 및 이의 용도 | |
CN118005801A (zh) | 抗虫融合蛋白质及制备抗虫融合蛋白质的方法与应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20140715 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150907 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20151126 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160307 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160801 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160819 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5995327 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |