JP2013531503A - 細胞培養におけるウイルス生産中に外来性媒介体を取り除くための方法 - Google Patents
細胞培養におけるウイルス生産中に外来性媒介体を取り除くための方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2013531503A JP2013531503A JP2013517381A JP2013517381A JP2013531503A JP 2013531503 A JP2013531503 A JP 2013531503A JP 2013517381 A JP2013517381 A JP 2013517381A JP 2013517381 A JP2013517381 A JP 2013517381A JP 2013531503 A JP2013531503 A JP 2013531503A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- virus
- cells
- interest
- minutes
- population
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
- C12N7/02—Recovery or purification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/13—Tumour cells, irrespective of tissue of origin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2720/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsRNA viruses
- C12N2720/00011—Details
- C12N2720/12011—Reoviridae
- C12N2720/12311—Rotavirus, e.g. rotavirus A
- C12N2720/12351—Methods of production or purification of viral material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2796/00—Viruses not covered by groups C12N2710/00 - C12N2795/00
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
【選択図】なし
Description
a)約120分未満である又は約120分に等しい期間、対象のウイルスを含む溶液に細胞の集団を接触させるステップであって、前記細胞が対象のウイルスの感染に感受性であるステップ、
b)対象のウイルスを含む溶液を前記細胞から取り除くステップ、及び
c)前記細胞を培養培地中でインキュベートして、複製された対象のウイルスの集団を生産するステップ
を含む、対象のウイルスを生産するための方法を提供する。
a)約120分未満である又は約120分に等しい期間、対象のウイルスを含む溶液に細胞の集団を接触させるステップであって、前記細胞が対象のウイルスの感染に感受性であるステップ、
b)対象のウイルスを含む溶液を前記細胞から取り除くステップ、
c)前記細胞を培養培地中でインキュベートして、複製された対象のウイルスの集団を生産するステップ、及び任意選択で
d)前記生産されたウイルスを適切な医薬担体と一緒に製剤化するステップ
を含む、医療において使用するための対象のウイルスを生産するための方法を提供する。
a)対象のウイルス及び少なくとも一つの外来性媒介体を含む最初の溶液に細胞の集団を接触させるステップであって、前記細胞が対象のウイルスの感染に感受性であり、接触期間が、細胞の集団の少なくとも部分集団に、対象のウイルスを感染させるのに十分であるステップ、
b)対象のウイルス及び前記少なくとも一つの外来性媒介体を含む溶液を前記細胞から取り除くステップ、
c)前記細胞を培養培地中でインキュベートして、複製された対象のウイルスの集団を生産するステップ
を含み、前記少なくとも一つの外来性媒介体のDNA含有量レベルが、対象のウイルス及び前記少なくとも一つの外来性媒介体を含む最初の溶液に存在するレベルに比べて、複製された対象のウイルスの集団において少なくとも90%減少している、対象のウイルスを生産するための方法を提供する。
i)対象のウイルス及び一つ又は複数の外来性媒介体を含むウイルス接種材料を感受性細胞に接種するステップ、
ii)前記接種された細胞をインキュベートするステップ、並びに
iii)接種後120分未満の後に前記接種された細胞培養物を洗浄するステップ、
を含む、対象のウイルスの複製中に外来性媒介体の発生を取り除く及び/又は減少させるための方法を提供する。
a)約120分未満である又は約120分に等しい期間、対象のウイルス及び少なくとも一つの外来性媒介体を含む溶液に細胞の集団を接触させるステップであって、前記細胞が対象のウイルスによる感染に感受性であるステップ、
b)対象のウイルス及び前記少なくとも一つの外来性媒介体を含む溶液を前記細胞から取り除くステップ、
c)前記細胞を培養培地中でインキュベートして、複製された対象のウイルスの集団を生産するステップ、
を含む、対象のウイルスを細胞培養で生産する間に外来性媒介体を取り除くための方法を提供する。
a)対象のウイルス及び少なくとも一つの外来性媒介体を含む最初の溶液に細胞の集団を接触させるステップであって、前記細胞が対象のウイルスの感染に感受性であり、接触期間が、細胞の集団の少なくとも部分集団に、対象のウイルスを感染させるのに十分であるステップ、
b)対象のウイルス及び前記少なくとも一つの外来性媒介体を含む溶液を前記細胞の集団から取り除くステップ、
c)前記細胞を培養培地中でインキュベートして、複製された対象のウイルスの集団を生産するステップ、
を含み、前記少なくとも一つの外来性媒介体が、対象のウイルス及び前記少なくとも一つの外来性媒介体を含む最初の溶液に比べて、複製された対象のウイルスの集団から取り除かれる又は実質的に取り除かれる、対象のウイルスを細胞培養で生産する間に外来性媒介体を取り除くための方法を提供する。
i)ウイルスを含むウイルス接種材料を感受性細胞に接種し、前記接種された細胞をインキュベートするステップ、
ii)接種後120分未満、たとえば、約90分、約60分、約45分、約30分、25分、約20分、約15分、約10分、約5分、約1分未満、又は接種後45秒未満、特に約5秒から約1時間まで、約10秒から約55分まで、約15秒から約50分まで、約20秒から約45分まで、約30秒から約40分まで、約45秒から約35分まで、又は約1分から約30分まで、たとえば、10から30秒まで、20秒から1分まで、10秒から約30分までの前記接種された細胞を洗浄するステップ
を含む、ウイルス種子を生産するための方法が提供される。
(i)ウイルスを含むウイルス接種材料を感受性細胞に接種し、前記接種された細胞をインキュベートするステップ、
(ii)接種後120分未満、たとえば、約90分、約60分、約45分、約30分、25分、約20分、約15分、約10分未満、又は約5分、約1分未満、又は接種後45秒未満、特に約5秒から約1時間まで、約10秒から約55分まで、約15秒から約50分まで、約20秒から約45分まで、約30秒から約40分まで、約45秒から約35分まで又は約1分から約30分まで、たとえば、10から30秒まで、20秒から1分まで、10秒から約30分までの前記接種された細胞を洗浄するステップ
を含む、医療(特に、ワクチン及び/又は遺伝子治療)において使用するためのウイルスを複製するための方法が提供される。
)。一実施形態では、対象のウイルスに接触させた細胞は6日間又は7日間インキュベートされ、その後ウイルスは細胞培養培地を収集することによりおそらく収穫される本発明の方法が提供される。
ロタウイルスの大量生産は、さまざまな前培養段階を通じてVero細胞バンクを増殖させることにより実施された。外来性媒介体PCV-1は、DNA、RNA、及び感染性粒子を含むウイルス粒子として、細胞に感染するのに使用されるロタウイルス種子中に存在していた。必要な細胞培養支持体の調製後、細胞をロタウイルス懸濁液に接触させることによりウイルスは増殖及び生産のために接種され、細胞は5日から7日間ウイルスと一緒にインキュベートさせておいた。生産されたウイルスは、上清を収集することにより望ましいインキュベーション時間後に収穫された。収穫されたウイルスは凍結され-70℃で保存された。
Vero細胞培養物は、増殖培地としてVP-SFM培養培地(Invitrogen、No.11681420)を使用して無血清条件下で調製された。T-175フラスコ(175cm2)又はT-25フラスコ(25cm2)に50,000から100,000細胞/cm2を播種し3日から7日間増殖させた。
必要量のロタウイルス接種材料(ヒトG1P[8]株に由来する)は、攪拌下水浴中37℃で解凍された。次に、ウイルスは、室温で30分間、ブタトリプシン(Sigma)を最終濃度7.5から20μg/mlで補充されたDMEM(ダルベッコ変法イーグル培地)の溶液中で活性化された。活性化後、ウイルス溶液は、10-1、10-3、10-4又は10-5のMOIを目標とするのに必要なウイルス濃度を得るために、最終濃度7.5μg/mlでトリプシンを補充された新鮮なDMEMを添加することにより希釈された。
増殖培地はTフラスコから廃棄され、細胞層は50mlのDMEMで洗浄された。次に、細胞に以下の通りにロタウイルスを感染させた:細胞は、洗浄培地を45mlの上記希釈され活性化されたウイルス溶液で置き換えることにより目的のMOI数のウイルスと接触させた。次に、細胞は、1分未満若しくは1分に等しい時間又は30分間37℃でウイルス溶液に接触したままにされた。
指示された接触時間後、ウイルス溶液は取り除かれた。細胞層はDMEMで二回洗浄された。次に、Tフラスコは、15μg/mlのトリプシンを補充されたDMEM中で5から7日間37℃でさらにインキュベートされた。対照として、いくつかのフラスコは、細胞をウイルス溶液に接触させた後洗浄されず(すなわち、ウイルス溶液は取り除かれずに)、5から7日間37℃でウイルス溶液と一緒にインキュベートされたままにした。ウイルス含有上清は感染後の5から7日目に収集された。前記物質は-70℃で保存された。
MA-104細胞は、10%ウシ胎児血清を補充されたDMEM中で培養された。96ウェルプレートにウェルあたり20,000細胞を播種した。細胞は37℃で4日間インキュベートされたままであった。力価測定されるウイルス含有上清の試料を細胞に添加する前に、細胞はDMEMで三回穏やかに洗浄された。次に、120μlの力価測定培地、すなわち8μg/mlのトリプシンを補充されたDMEMが細胞に添加された。ウイルス含有上清の最初の二倍希釈試料が調製され、希釈されたウイルスは室温で30分間活性化された。活性化された希釈ウイルスを使用して、上で調製されたMA-104細胞を含む96ウェルプレートに直接実施される追加の連続二倍希釈を調製した。120μlの活性化された希釈ウイルスは最初の一連のウェルに添加され、それぞれのウェルは120μlの力価測定培地を含有していた。次に、120μlのそのさらに希釈されたウイルスは次の一連のウェルに添加され、それぞれのウェルは120μlの力価測定培地を含有していた、等。プレートは、2000rpm、30℃で1時間30分間遠心分離された。次に、96ウェルプレートはウイルス含有試料の希釈物と一緒に16時間インキュベートされた。次に、細胞はDMEMで一回洗浄され、-20℃で15分から25分間冷アセトン80%(-20℃)中で前記細胞をインキュベートすることにより固定された。次に、アセトン溶液は取り除かれ、プレートは乾燥させた。次に、試料中のロタウイルスの存在を検出し定量化するために、VP6タンパク質に対するモノクローナル抗体を含む溶液が細胞に添加され、37℃で1時間インキュベートされた。前記存在は、37℃で1時間、細胞上でインキュベートされたFITCに結合された二次抗マウス抗体を使用する免疫蛍光によって明らかにされた。蛍光に陽性の一細胞(フォーカスと呼ばれる)は、前記細胞が感染されていることを示している。ウイルスの集団と一緒の細胞の16時間インキュベーションにより、細胞には一つのウイルスのみが感染することが可能であると推定される。したがって、ffu/mlで示されるウイルス溶液の力価は、希釈係数により補正されるウェル中で検出されるフォーカスの数に一致する。ffuとはフォーカス形成単位を表す。
ウイルス不活化は、TCID50アッセイ(組織培養感染量)を通じてウイルス力価(viral titration)を測定することにより評価された。一晩のインキュベーションの終了時に、各実験内のすべてのBPL条件由来の試料が収集されて、BPL不活化の有効性を評価するために、その感染性を試験した。試験される試料の一連の連続希釈が実施される。50μlの各希釈物は、MDCK細胞を含有する96ウェルマイクロプレーに10複製物(replicates)で接種され、8希釈物が試験される試料ごとに接種される。次に、プレートは、ウイルスが感染性の場合には細胞内で複製することができるように、35℃で5〜7日間インキュベートされる。細胞中の感染性ウイルスの存在は、顕微鏡によって細胞に対する細胞変性効果(CPE)をモニターすることにより検出される。感染性ウイルスの懸濁液は、細胞感受性を実証するために陽性対照として使用され、非接種培養物は陰性対照として使用される。CPEが検出されるウェルの数は感染した細胞として希釈物ごとに点数化され、ウイルス力価はリードミュンヒ法に従って計算される(Reed, L.J. and Muench, H.、1938、The American Journal of Hygiene 27: 493〜497)。
リアルタイム増幅アッセイとしても知られている定量的PCR(Q-PCR)は、各PCRサイクル後に増幅された産物の蓄積を検出する蛍光プローブの使用に基づいている。PCR産物増幅は、増幅された産物に特異的に結合する蛍光発生プローブを介してリアルタイムでモニターされる。プローブが結合しない限り、蛍光を発することはない。Q-PCRアッセイは、以下の通りに実施された。試験試料一本鎖DNAは、市販のシステム(QIAamp Viral RNA)を製造業者の使用説明書に従って使用して抽出された。抽出されたPCV-1 DNAは、特定のプライマー及びプローブを使用するQ-PCRにより増幅された(表1参照)。Q-PCRアッセイに使用されるサイクリング条件は表2に詳述されている。前記アッセイは、Applied Biosystem社製のABI PRISM 7900 HT装置を使用して96ウェルマイクロプレートにおいて実行された。試料の汚染を回避するために、専用の部屋及び材料が各ステップ(PCR前混合調製、DNA抽出、PCRアセンブリー、PCR増幅)に割り当てられた。
・DNAが存在していないPCR反応
・PCR反応の陽性対照として使用される、及び試験される試料の定量化を可能にする標準曲線を描くために使用される既知の濃度のPCV-1 DNA(10から107コピーまで)
各試料は二通りに実行された。
細胞培養物ベースのアッセイは、ロタウイルスバルクにおけるPCV-1複製能力のある粒子、すなわち、PCV-1感染性粒子の存在を評価するために実施された。前記アッセイはPCV-1無しVero細胞上で実行された。下の実施例に記載される通りに、クリアランス試験から生じるロタウイルス含有上清試料由来のロタウイルスは、ロタウイルス特異的モノクローナル抗体を添加することにより中和された。前日にフラスコに播種されたサブコンフルエントVero細胞に上記中和された試料を接触させた。37℃で2時間の接触時間後、培養上清は取り除かれ、細胞は洗浄されて新鮮な培養培地が添加された。陰性対照として、Vero細胞にはロタウイルス含有試料を接触させず培養培地で満たされた。陽性対照は、ロタウイルス特異的モノクローナル抗体有り又は無しの培養培地中でPCV-1ウイルスストックから1×103 CCID50でVero細胞に感染させることにより作製された。フラスコは通常の細胞継代(週二回)で、37℃でインキュベートされた。ウイルス試料での接種14日後、細胞は収集され、PCV-1転写物の存在は、下に記載される通りに逆転写酵素rep'RT-Q-PCRアッセイにより試験され、この転写物は、存在すれば、PCV-1の複製能力、したがって感染性PCV-1粒子の存在を反映する。
2.1 三つの独立した実験(実行1、実行2及び実行3)は、ウイルス溶液が取り除かれずウイルス収穫時まで維持される対照に比べた、減少させた接触時間後にウイルス溶液を取り除く効果を評価するために開始された。ウイルスMOIは10-1であり、細胞培養及びウイルス感染の条件は同一であり実施例1に記載される通りであった。ウイルス含有上清は6又は7日後に収穫された。
10-1のMOIで10から30秒のウイルス接触時間が使用された実行1では、ウイルス溶液は取り除かれずロタウイルスを収穫する前に6又は7日間維持される対照に比べて、一ウイルス継代(VP1参照)後のPCV-1 DNA含有量の2から3logの減少が観察された。さらに、第一のウイルス継代後に収集されたウイルス収穫物を使用する第二のウイルス継代(VP2参照)で検出可能なPCV-1の非存在が観察された。注目に値することであるが、ウイルス溶液は取り除かれずロタウイルスを収穫する前に6又は7日間維持される対照に比べて、ロタウイルス力価はほとんど同一のままであった(最後の列-ロタウイルス力価参照)。実行1の第二のウイルス継代後に収集されたウイルス収穫物を使用する第三のウイルス継代(VP3参照)後PCV-1 DNAレベルは検出不可能なままであったが、ロタウイルス力価は、第二のウイルス継代後に得られた力価に比べてさらに増加していた。
実行4で得られるデータを検討すると、達成されたPCV-1 DNA減少は、1分、10分又は30分のウイルス接触時間を使おうとも、約5log以上であり、それらの短い接触時間のいずれでも良好なPCV-1 DNA減少を与えることを示している。実行5において得られたデータを検討すると、1分及び10分のウイルス接触時間を使用した場合は類似の5log減少が観察され、30分のウイルス接触時間ではより低い減少が得られた。なぜならば、この接触時間では4log減少が観察されたからであった(清澄化前に得られたデータ参照)。実行4でも実行5でもロタウイルス力価測定では、ウイルス接触時間を増加させるとロタウイルス力価が増加する傾向にあることが示された。
3.1 別々の実験で、PCV-1 DNA含有量に対する減少したMOI、すなわち、10-3、10-4及び10-5などの10-1未満の影響を評価した。
ウイルス接触時間30分で、10-3などの10-1未満のMOIを使用すると、一ウイルス継代(VP1)後PCV-1 DNA含有量に関する限りネガティブ結果及び5.8logのロタウイルス力価が得られる。30分の又は10〜30秒のウイルス接触時間で、より低いMOI、すなわち10-4及び10-5が試験される実験では、得られたロタウイルス力価は著しく低く、10-4のMOIでは≦4log及び10-5のMOIでは≦3.3であった。その低いMOIでの第一のウイルス継代に続くQ-PCRによりPCV-1 DNAは検出されなかった(又は検出限界に極めて近い値が検出された)。PCV-1ネガティブデータは、第一ウイルス継代(10-3のMOIを有する)中に生産されたMOI 10-1のウイルス及び10から30秒の接触時間を使用する第二のウイルス継代後に確認され(VP2行参照)、ロタウイルス力価は6.7logまで増加していた(第一ウイルス継代後に得られた5.8logと比べて)。それらの結果は、10-3、10-4及び10-5などのより低いウイルスMOIを使用すれば、10-1 MOIを使用した場合に得られる結果に比べて、PCV-1 DNA含有量を大いに減少させることも可能であったことを示している。ロタウイルス力価に関する限り、それらのより低いウイルスMOIにより、10-1 MOIを使用した場合に得られる力価よりも著しく低い力価が得られた。しかし、得られたウイルスをさらに継代すれば、PCV-1 DNA含有量をネガティブに維持したままロタウイルス力価をさらに増加させることが可能であった。
ウイルス生産培地において15μg/mlのトリプシン濃度を用いる30分のウイルス接触時間を使用すれば、MOI 10-1でもMOI 0.5でもPCV-1 DNA含有量の良好な減少が得られた(行2と3を比較されたい)。しかし、MOI 10-1を使用すると、MOI 0.5(3log減少)と比べて、より良好な減少(5log減少)が得られた。ロタウイルス収率に関しては、力価測定データは、より大きなMOI(0.5対10-1)を使用するとより高いロタウイルス力価を与える傾向があることを示している(行1及び2と行3を比較されたい)。ウイルス生産培地におけるトリプシン濃度に関しては、表6に示されているデータ(行1及び2)によれば、生産中トリプシンが多いほど(15μg/ml)、力価はほぼ1log増加することが可能であることが示された。
4.1 PCV-1無しVero細胞培養物は、250,000細胞/cm2の細胞密度に到達するように細胞ファクトリーのVP-SFMにおいて増殖させた。次に、細胞はDMEMで洗浄された。ロタウイルス溶液は、トリプシンを20μg/mlの濃度で補充されたDMEMにおいて室温で30分間特異的に活性化された。次に、細胞はDMEMで洗浄した後、10-1 MOIの活性化されたロタウイルス溶液(15μg/mlのトリプシンを含有するDMEMに希釈される)に37℃で10分間接触させることにより感染させた。10分の接触時間後、ウイルス溶液は取り除かれた。細胞層はDMEMで二度洗浄された。その後、15μg/mlのトリプシンを補充されたDMEMが細胞に添加され、細胞は37℃で7日間さらにインキュベートされ、その時点でウイルス含有上清は収穫された。次に、ウイルス収穫物は、室温で1000rpmでの遠心分離により清澄化した。ウイルス上清は収集され、-70℃で保存された。
6×107 PCV-1 DNAコピー/mlで汚染されたロタウイルス種子から開始して(対照行とPCV-1列参照)、本実施例4において例示される本発明の方法、すなわち、10-1のウイルスMOIと、10分の細胞とのウイルスの減少された接触時間とを組み合わせる本発明の方法により、5logよりも大きなPCV-1 DNA含有量の減少を達成することが可能になり、ウイルス損失はわずか0.6logであるためにロタウイルス力価は著しい影響を受けない。本発明の方法に従った一ウイルス継代後、本実施例4において例示されるように、PCV-1のDNA含有量は、ロタウイルス種子に存在する最初のレベルに比べて、99.99%よりも多く減少した。
D14で得られた表8のネガティブ結果は、本実施例において例示される本発明の方法に従って得られるロタウイルスプレマスター種子がいかなる感染性PCV-1粒子も含有していなかったことを示している。
Claims (37)
- 対象のウイルスを含む溶液に細胞の集団を接触させることを含み、前記細胞が対象のウイルスの感染に感受性である、対象のウイルスを細胞培養において生産するための方法であって、対象のウイルスを含む溶液と感受性の細胞間の接触時間が120分未満である又は120分に等しいことを特徴とする方法。
- a)約120分未満である又は約120分に等しい期間、対象のウイルスを含む溶液に細胞の集団を接触させるステップであって、前記細胞が対象のウイルスの感染に感受性であるステップ、
b)対象のウイルスを含む溶液を前記細胞から取り除くステップ、及び
c)前記細胞を培養培地中でインキュベートして、複製された対象のウイルスの集団を生産するステップ
を含む、対象のウイルスを生産するための方法。 - a)約120分未満である又は約120分に等しい期間、対象のウイルスを含む溶液に細胞の集団を接触させるステップであって、前記細胞が対象のウイルスの感染に感受性であるステップ、
b)対象のウイルスを含む溶液を前記細胞から取り除くステップ、
c)前記細胞を培養培地中でインキュベートして、複製された対象のウイルスの集団を生産するステップ、及び任意選択で
d)前記生産されたウイルスを適切な医薬担体と一緒に製剤化するステップ
を含む、医療において使用するための対象のウイルスを生産するための方法。 - 対象のウイルスを含む溶液が一つ又は複数の外来性媒介体を含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞が一つ又は複数の外来性媒介体の感染に感受性である、請求項4に記載の方法。
- a)対象のウイルス及び少なくとも一つの外来性媒介体を含む最初の溶液に細胞の集団を接触させるステップであって、前記細胞が対象のウイルスの感染に感受性であり、接触期間が、細胞の集団の少なくとも部分集団に、対象のウイルスを感染させるのに十分であるステップ、
b)対象のウイルス及び前記少なくとも一つの外来性媒介体を含む溶液を前記細胞から取り除くステップ、
c)前記細胞を培養培地中でインキュベートして、複製された対象のウイルスの集団を生産するステップ
を含み、前記少なくとも一つの外来性媒介体のDNA含有量レベルが、対象のウイルス及び前記少なくとも一つの外来性媒介体を含む最初の溶液に存在するレベルに比べて、複製された対象のウイルスの集団において少なくとも90%減少している、対象のウイルスを生産するための方法。 - a)対象のウイルス及び少なくとも一つの外来性媒介体を含む最初の溶液に細胞の集団を接触させるステップであって、前記細胞が対象のウイルスの感染に感受性であり、接触期間が、細胞の集団の少なくとも部分集団に、対象のウイルスを感染させるのに十分であるステップ、
b)対象のウイルス及び前記少なくとも一つの外来性媒介体を含む溶液を前記細胞の集団から取り除くステップ、
c)前記細胞を培養培地中でインキュベートして、複製された対象のウイルスの集団を生産するステップ、
を含み、前記少なくとも一つの外来性媒介体が、対象のウイルス及び前記少なくとも一つの外来性媒介体を含む最初の溶液に比べて、複製された対象のウイルスの集団から取り除かれる又は実質的に取り除かれる、対象のウイルスを細胞培養で生産する間に外来性媒介体を取り除くための方法。 - 接触期間が120分未満である又は120分に等しい、請求項6又は7に記載の方法。
- a)約120分未満である又は約120分に等しい期間、対象のウイルス及び少なくとも一つの外来性媒介体を含む溶液に細胞の集団を接触させるステップであって、前記細胞が対象のウイルスの感染に感受性であるステップ、
b)対象のウイルス及び前記少なくとも一つの外来性媒介体を含む溶液を細胞から取り除くステップ、
c)前記細胞を培養培地中でインキュベートして、複製された対象のウイルスの集団を生産するステップ、
を含む、対象のウイルスを細胞培養で生産する間に外来性媒介体を取り除くための方法。 - ステップa)における接触時間が、細胞の集団の少なくとも部分集団に、対象のウイルスを吸着させるのに十分である、請求項6〜9のいずれか一項に記載の方法。
- 少なくとも一つの外来性媒介体のDNA含有量レベルが、対象のウイルス及び前記少なくとも一つの外来性媒介体を含む溶液に存在するレベルに比べて、複製された対象のウイルスの集団において少なくとも90%減少している、請求項7又は請求項9に記載の方法。
- 細胞が一つ又は複数の外来性媒介体の感染に感受性である、請求項6〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 追加のステップa)において細胞の集団を接触させるための対象のウイルスを含む溶液としてステップc)で得られた複製された対象のウイルスの集団を使用して、a)からc)の一連のステップが少なくとも一回繰り返される、請求項2〜12のいずれか一項に記載の方法。
- 接触期間が、10秒から120分まで、1分から30分まで、5分から15分までの範囲であり、10分である、請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞が、哺乳動物、トリ又は昆虫細胞である、請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞が群:MRC-5、Vero、CHO、FRHL-2、MDCK、PER.C6、EBx(登録商標)細胞及びニワトリ胚線維芽細胞[CEF]から選択される、請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞がVero細胞である、請求項16に記載の方法。
- 対象のウイルスが、弱毒化されたウイルスである、請求項1〜17のいずれか一項に記載の方法。
- 対象のウイルスが群:麻疹、ムンプス、風疹、ヒトパピローマウイルス(HPV)、バキュロウイルス、インフルエンザ、水痘帯状疱疹ウイルス(VZV)、ポリオウイルス、エプスタイン・バーウイルス(EBV)、ヒト免疫不全ウイルス(HIV)、単純ヘルペスウイルス(HSV)、B型肝炎(HBV)、C型肝炎(HCV)、E型肝炎(HBV)、デングウイルス、サイトメガロウイルス(CMV)、呼吸器多核体ウイルス(RSV)、狂犬病ウイルス、ヒトロタウイルス(HRV)、アデノウイルス又はA型肝炎(HAV)から選択される、請求項1〜18のいずれか一項に記載の方法。
- 対象のウイルスがヒトロタウイルス(HRV)、HRVである、請求項19に記載の方法。
- 対象のウイルスに、約1、約0.5、約0.1、約0.01、約0.001、約0.0001又は約0.00001の感染多重度(MOI)で細胞を接触させる、請求項1〜20のいずれか一項に記載の方法。
- 外来性媒介体が、ウイルス、PCV、PCV-1及び/又はPCV-2である、請求項4〜21のいずれか一項に記載の方法。
- ステップc)における細胞が、約1から30日間、約2から20日間、約3から9日間、約4から8日間、約5から7日間、又は約5から6日間インキュベートされる、請求項2〜22のいずれか一項に記載の方法。
- ステップc)における細胞が、約25℃から約41℃まで、約34℃から40℃まで、35℃から39℃まで、36℃から38℃まで、たとえば、約37℃±1℃の温度でインキュベートされる、請求項2〜23のいずれか一項に記載の方法。
- 複製された対象のウイルスの集団を収集するステップをさらに含む、請求項2〜24のいずれか一項に記載の方法。
- 複製された対象のウイルスの集団を清澄化して、細胞片を取り除くステップをさらに含む、請求項2〜25のいずれか一項に記載の方法。
- 複製された対象のウイルスの集団において対象のウイルスを不活化するステップをさらに含む、請求項2〜26のいずれか一項に記載の方法。
- 複製された対象のウイルスの集団を、滅菌等級フィルター膜を通して滅菌濾過するステップをさらに含む、請求項2〜27のいずれか一項に記載の方法。
- 請求項1〜28のいずれか一項に記載の方法により入手可能なウイルス。
- 請求項29に従って得られるウイルスから生産される免疫原性組成物又はワクチン。
- 医療において使用するための、請求項30に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
- 疾患又は状態に対するヒトの予防及び/又は処置において使用するための、請求項31に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
- ワクチン組成物に外来性媒介体がない又は実質的にない、ウイルスを含む免疫原性組成物又はワクチン組成物。
- ウイルスがHRVである、請求項33に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
- PCV-1及び/又はPCV-2が実質的にない、請求項33又は34に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
- 医療において使用するための、請求項33〜35のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
- 疾患の処置又は予防において使用するための、請求項33〜36のいずれか一項に記載の免疫原性組成物又はワクチン。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB1011502.0 | 2010-07-08 | ||
GBGB1011502.0A GB201011502D0 (en) | 2010-07-08 | 2010-07-08 | Novel process |
PCT/EP2011/061446 WO2012004323A1 (en) | 2010-07-08 | 2011-07-06 | Process for removing adventitious agents during the production of a virus in cell culture |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013531503A true JP2013531503A (ja) | 2013-08-08 |
Family
ID=42712090
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013517381A Pending JP2013531503A (ja) | 2010-07-08 | 2011-07-06 | 細胞培養におけるウイルス生産中に外来性媒介体を取り除くための方法 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20130095135A1 (ja) |
EP (1) | EP2591096A1 (ja) |
JP (1) | JP2013531503A (ja) |
CN (1) | CN103080304A (ja) |
BR (1) | BR112012033767A2 (ja) |
CA (1) | CA2804570A1 (ja) |
GB (1) | GB201011502D0 (ja) |
WO (1) | WO2012004323A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018532411A (ja) * | 2015-11-01 | 2018-11-08 | グライコバック エルエルシーGlycobac, Llc | ウイルスフリーの細胞株及びそれを取得する方法 |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2010557B1 (en) | 2006-03-31 | 2014-02-26 | Wisconsin Alumni Research Foundation | High titer recombinant influenza viruses for vaccines |
US9474798B2 (en) | 2007-06-18 | 2016-10-25 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Influenza M2 protein mutant viruses as live influenza attenuated vaccines |
ES2813347T3 (es) | 2009-10-26 | 2021-03-23 | Wisconsin Alumni Res Found | Virus recombinantes de la influenza de alto título con replicación mejorada en células Vero |
US10130697B2 (en) | 2010-03-23 | 2018-11-20 | Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) | Vaccines comprising mutant attenuated influenza viruses |
JP2016524915A (ja) | 2013-07-15 | 2016-08-22 | ウィスコンシン アルムニ リサーチ ファンデイション | Mdck、ベロ細胞又は卵内で増強された複製を有する高力価の組換えインフルエンザウイルス |
US10053671B2 (en) | 2014-06-20 | 2018-08-21 | Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) | Mutations that confer genetic stability to additional genes in influenza viruses |
US10633422B2 (en) | 2015-06-01 | 2020-04-28 | Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) | Influenza virus replication by inhibiting microRNA lec7C binding to influenza viral cRNA and mRNA |
US9890363B2 (en) | 2015-07-06 | 2018-02-13 | Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) | Influenza virus replication for vaccine development |
CN105062979A (zh) * | 2015-08-21 | 2015-11-18 | 昆明理工大学 | 一种培养戊型肝炎病毒的方法 |
CN109477074B (zh) | 2016-02-19 | 2023-01-24 | 威斯康星旧生研究基金会 | 用于疫苗开发的改进的乙型流感病毒复制 |
KR101831284B1 (ko) * | 2017-06-26 | 2018-02-22 | 에스케이케미칼 주식회사 | 무혈청 배지에서 부유배양 되는 Vero 세포주 및 상기 세포를 사용하여 백신용 바이러스를 제조하는 방법 |
EP3914295A2 (en) | 2019-01-23 | 2021-12-01 | Yoshihiro Kawaoka | Mutations that confer genetic stability to additional genes in influenza viruses |
EP3921413A1 (en) | 2019-02-08 | 2021-12-15 | Wisconsin Alumni Research Foundation (WARF) | Humanized cell line |
CN109943536B (zh) * | 2019-03-26 | 2021-09-14 | 昆明理工大学 | 一种戊型肝炎病毒的培养方法及其灭活疫苗的制备方法 |
CN111763661B (zh) * | 2019-04-02 | 2022-07-29 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 一种病毒纯化的方法、制备的疫苗组合物及其应用 |
US11390649B2 (en) | 2019-05-01 | 2022-07-19 | Wisconsin Alumni Research Foundation (Warf) | Influenza virus replication for vaccine development |
WO2021041624A2 (en) | 2019-08-27 | 2021-03-04 | Yoshihiro Kawaoka | Recombinant influenza viruses with stabilized ha for replication in eggs |
CN113999825B (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-08 | 北京赛尔富森生物科技有限公司 | 一种制备腮腺炎减毒活疫苗的方法 |
CN114181914A (zh) * | 2022-02-16 | 2022-03-15 | 北京赛尔富森生物科技有限公司 | 一种基于无血清培养基的轮状病毒培养方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05503840A (ja) * | 1989-11-13 | 1993-06-24 | アンビコ、インコーポレーテッド | B型ロタウイルスの培養ならびにその利用法 |
WO1998017785A1 (fr) * | 1996-10-18 | 1998-04-30 | The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University | Antigenes de rotavirus, vaccins et medicaments servant a diagnostiquer l'infection par rotavirus et leurs procedes de preparation |
JP2001506126A (ja) * | 1996-12-13 | 2001-05-15 | シェーリング コーポレイション | ウイルスの精製方法 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5646033A (en) * | 1994-11-30 | 1997-07-08 | Dyncorp | African green monkey kidney cell lines useful for maintaining viruses and for preparation of viral vaccines |
US7527961B2 (en) * | 1999-11-26 | 2009-05-05 | Crucell Holland B.V. | Production of vaccines |
FR2836924B1 (fr) | 2002-03-08 | 2005-01-14 | Vivalis | Lignees de cellules aviaires utiles pour la production de substances d'interet |
WO2004020612A1 (en) | 2002-08-30 | 2004-03-11 | Novozymes Biotech, Inc. | Methods for producing mammalian trypsins |
US7329486B2 (en) * | 2003-03-31 | 2008-02-12 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | High-throughput assay for virus entry and drug screening |
DK2236155T3 (da) | 2004-09-09 | 2012-08-13 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Nedbringelse af potentielle iatrogene risici i forbindelse med influenzavacciner |
EP1985305A1 (en) | 2007-04-24 | 2008-10-29 | Vivalis | Duck embryonic derived stem cell lines for the production of viral vaccines |
US20130164329A1 (en) * | 2010-02-17 | 2013-06-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Cell-based methods and reagents |
-
2010
- 2010-07-08 GB GBGB1011502.0A patent/GB201011502D0/en not_active Ceased
-
2011
- 2011-07-06 WO PCT/EP2011/061446 patent/WO2012004323A1/en active Application Filing
- 2011-07-06 CA CA2804570A patent/CA2804570A1/en not_active Abandoned
- 2011-07-06 US US13/805,397 patent/US20130095135A1/en not_active Abandoned
- 2011-07-06 BR BR112012033767A patent/BR112012033767A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2011-07-06 EP EP11738415.6A patent/EP2591096A1/en not_active Withdrawn
- 2011-07-06 JP JP2013517381A patent/JP2013531503A/ja active Pending
- 2011-07-06 CN CN2011800433962A patent/CN103080304A/zh active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH05503840A (ja) * | 1989-11-13 | 1993-06-24 | アンビコ、インコーポレーテッド | B型ロタウイルスの培養ならびにその利用法 |
WO1998017785A1 (fr) * | 1996-10-18 | 1998-04-30 | The Research Foundation For Microbial Diseases Of Osaka University | Antigenes de rotavirus, vaccins et medicaments servant a diagnostiquer l'infection par rotavirus et leurs procedes de preparation |
JP2001506126A (ja) * | 1996-12-13 | 2001-05-15 | シェーリング コーポレイション | ウイルスの精製方法 |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2018532411A (ja) * | 2015-11-01 | 2018-11-08 | グライコバック エルエルシーGlycobac, Llc | ウイルスフリーの細胞株及びそれを取得する方法 |
US11473055B2 (en) | 2015-11-01 | 2022-10-18 | Glycobac, Llc | Virus-free cell lines and methods for obtaining same |
JP7272792B2 (ja) | 2015-11-01 | 2023-05-12 | グライコバック エルエルシー | ウイルスフリーの細胞株及びそれを取得する方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20130095135A1 (en) | 2013-04-18 |
CA2804570A1 (en) | 2012-01-12 |
GB201011502D0 (en) | 2010-08-25 |
BR112012033767A2 (pt) | 2015-10-06 |
WO2012004323A1 (en) | 2012-01-12 |
CN103080304A (zh) | 2013-05-01 |
EP2591096A1 (en) | 2013-05-15 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2013531503A (ja) | 細胞培養におけるウイルス生産中に外来性媒介体を取り除くための方法 | |
US11466257B2 (en) | Cell-derived viral vaccines with low levels of residual cell DNA | |
JP4331432B2 (ja) | ワクチンの生成方法 | |
JP2005502357A (ja) | 細胞培養物中のウイルス増殖 | |
JP4693839B2 (ja) | 動物由来の成分なしで培養可能である細胞株及びその作出方法、これを用いたウイルスの生産方法、及びワクチンの生産方法 | |
JP2004331673A (ja) | インフルエンザウイルスの複製のための動物細胞および方法 | |
JP2009513694A5 (ja) | ||
JP2000507825A (ja) | 細胞培養におけるインフルエンザウイルスの複製の方法、および本方法によって入手可能なインフルエンザウイルス | |
WO2000023104A1 (fr) | Vaccin lyophilise a virus vivant modifie d'hepatite a et son stabilisant | |
US10954492B2 (en) | Processes for production and purification of nucleic acid-containing compositions | |
US20140315277A1 (en) | Novel method | |
JP6117379B2 (ja) | エンテロウイルス71の低温適応温度感受性株および低温適応温度感受性ウイルス株を発展させるプロセス | |
JP5978172B2 (ja) | ウイルスの増殖のための二段階温度プロフィール | |
RU2423520C1 (ru) | Штамм вируса - возбудителя геморрагической лихорадки с почечным синдромом для изготовления вакцинных препаратов (варианты) | |
RU2683508C1 (ru) | Штамм вируса для изготовления вакцинных препаратов против геморрагической лихорадки с почечным синдромом (варианты) | |
JP2016028581A (ja) | 外来物質試験 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20140603 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150804 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20151029 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160201 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20160607 |