JP2013215190A5 - - Google Patents

Claims (9)

1. 核酸を流体試料から単離するための方法であって、以下の工程：
   ａ．固体支持体および流体試料を反応容器中で、核酸が該固体支持体上で固定されることを可能にするのに十分な時間および条件の下で組み合わせて一緒にすること、
   ｂ．該固体支持体物質を分離ステーション中で該流体試料中に存在する他の物質から単離すること、
   ｃ．該核酸を、該流体試料を該固体支持体物質から分離することにより精製すること、
   ｄ．該固体支持体物質を陽イオン性アミンを含む洗浄緩衝液で１回以上洗浄すること；
   を含み、
   前記の陽イオン性アミンが一般式Ｉの第１級、第２級、第３級または第４級アミンであり：
   

   

   式中、Ｒ _１ およびＲ _２ は互いに独立して水素、アルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール残基であることができ、
   Ｒ _３ は水素、アルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール残基であることができ、
   ｘは１から１２までの整数であり、
   Ｒ _４ は一般式ＩＩに従う残基であり：
   

   

   式中、Ｒ _５ は水素、アルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール残基であることができ、
   Ｒ _６ は水素、アルキル、シクロアルキル、アリールもしくはヘテロアリール残基、または−（ＣＨ _２ ） _３ −ＮＨ _２ 、もしくは−（ＣＨ _２ ） _４ −ＮＨ−（ＣＨ _２ ） _３ −ＮＨ _２ であることができ、そして
   Ｒ _７ は水素、アルキル、シクロアルキル、アリールもしくはヘテロアリール残基、または自由電子対であることができ、その場合は隣接する窒素は電荷を有さない；
   前記方法。
2. 前記の陽イオン性アミンがアルキレンジアミンである、請求項１に記載の方法。
3. 前記のアルキレンジアミンが未置換である、請求項２に記載の方法。
4. 前記の陽イオン性アミンがエチレンジアミン、プトレッシンおよびカダベリンの群から選択される、請求項３に記載の方法。
5. さらに以下の工程：
   ｅ．単離された核酸を分析すること；
   を含む、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
6. 核酸の分析の阻害物質を該核酸が結合している固体支持体から選択的に除去するための、陽イオン性アミンを含む洗浄緩衝液の使用であって、
   下流の分析は、核酸増幅を含むまたは核酸増幅からなり、そして、前記の陽イオン性アミンが一般式Ｉの第１級、第２級、第３級または第４級アミンであり：
   

   

   式中、Ｒ _１ およびＲ _２ は互いに独立して水素またはアルキル残基であることができ、
   Ｒ _３ は水素、アルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール残基であることができ、ｘは１から１２までの整数であり、
   Ｒ _４ は一般式ＩＩに従う残基であり：
   

   

   式中、Ｒ _５ は水素、アルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール残基であることができ、
   Ｒ _６ は水素、アルキル、シクロアルキル、アリールもしくはヘテロアリール残基、または−（ＣＨ _２ ） _３ −ＮＨ _２ 、もしくは−（ＣＨ _２ ） _４ −ＮＨ−（ＣＨ _２ ） _３ −ＮＨ _２ であることができ、そして
   Ｒ _７ は水素、アルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール残基であることができる；
   前記使用。
7. 核酸を流体試料から単離するためのキットであって、以下の構成要素：
   ・結合緩衝液
   ・固体支持体
   ・陽イオン性アミンを含む洗浄緩衝液
   ・あってもよい溶離緩衝液、
   を含み、該結合緩衝液および該洗浄緩衝液が異なる容器中に収容された異なる緩衝液であり、そして
   前記の陽イオン性アミンが一般式Ｉの第１級、第２級、第３級または第４級アミンであり：
   

   

   式中、Ｒ _１ およびＲ _２ は互いに独立して水素、アルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール残基であることができ、
   Ｒ _３ は水素、アルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール残基であることができ、ｘは１から１２までの整数であり、
   Ｒ _４ は一般式ＩＩに従う残基であり：
   

   

   式中、Ｒ _５ は水素、アルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール残基であることができ、
   Ｒ _６ は水素、アルキル、シクロアルキル、アリールもしくはヘテロアリール残基、または−（ＣＨ _２ ） _３ −ＮＨ _２ 、もしくは−（ＣＨ _２ ） _４ −ＮＨ−（ＣＨ _２ ） _３ −ＮＨ _２ であることができ、そして
   Ｒ _７ は水素、アルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール残基であることができる；
   前記キット。
8. 請求項７に記載のキットであって、
   ・前記の結合緩衝液がカオトロピック剤を含み、
   および／または
   ・前記の固体支持体がシリカおよび／または磁性物質を含み、
   および／または
   ・請求項７で定義される陽イオン性アミンを含む洗浄緩衝液が７未満のｐＨ値を有し、
   および／または
   ・前記の溶離緩衝液が水性であり、および／または保存剤を含む、
   前記キット。
9. その流体試料が全血または血漿である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法、使用またはキット。