JP2013136572A

JP2013136572A - 光学活性ジベンジルアミン誘導体及びその製造方法

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Publication number: JP2013136572A
Application number: JP2012263933A
Authority: JP
Inventors: Tadaaki Ogiya; 忠明扇谷; Takeshi Murakami; 猛村上; Katsutoshi Miyosawa; 勝利三代沢; Masayuki Shibuya; 公幸渋谷; Koichi Yamazaki; 浩市山▲崎▼; Taichi Kusakabe; 太一日下部
Original assignee: Kowa Co Ltd
Current assignee: Kowa Co Ltd
Priority date: 2011-12-02
Filing date: 2012-12-03
Publication date: 2013-07-11
Anticipated expiration: 2032-12-03
Also published as: JP5555303B2

Abstract

【課題】ＰＣＳＫ９タンパク量を低下させ、ＬＤＬ受容体量を増加させる作用を有する低分子化合物、及び当該低分子化合物を有効成分とする医薬の提供。
【解決手段】実質的に光学的に純粋な（Ｓ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする医薬。
【選択図】なし

Description

本発明は、医薬の有効成分等として有用な光学活性ジベンジルアミン誘導体及びその製造方法に関する。

近年、生活水準の向上に伴う高カロリー及び高コレステロール型食への変化、肥満、運動不足、高齢化等により脂質異常症（高脂血症）及びこれに起因する動脈硬化性疾患に罹患する者が急増している。低比重リポタンパク質（ＬＤＬ）コレステロール値が心疾患の発症率に正相関することはフラミンガム・スタディの研究を始めとする多くの疫学研究からも明らかにされており、それ故に脂質異常症及び動脈硬化症の薬物治療はＬＤＬコレステロール値を低下させることに重点が置かれている（非特許文献１）。

高ＬＤＬコレステロール血症は心血管疾患の強力な危険因子の一つであるが、その治療方法はＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害薬（スタチン）の登場とともに飛躍的に進歩した。しかし、スタチンは強力にＬＤＬコレステロールを低下させるが、心血管疾患による心事故、死亡率の低下は約３０％にとどまる。ＬＤＬコレステロールをさらに低下させることにより心血管疾患による死亡リスクをさらに低減できると考えられるが、スタチンの高用量での投与は横紋筋融解症のリスクを高めるため行なうことができないという問題がある。
そこで、スタチンとは作用機序が異なり、かつ、強力な血中ＬＤＬコレステロール低下作用を有する医薬が求められている。

プロタンパク質コンバターゼ(ＰＣｓ)は哺乳類のセリンプロテアーゼファミリーのメンバーであり、細菌におけるサブチリシンや酵母におけるケキシンと相同性が認められている。ＰＣｓの一つであるＰＣＳＫ９ (プロタンパク質コンバターゼサブチリシン／ケキシン９型：Ｐｒｏｐｒｏｔｅｉｎｃｏｎｖｅｒｔａｓｅｓｕｂｔｉｌｉｓｉｎ／ｋｅｘｉｎ９)は主に肝臓で発現して細胞外に分泌され、肝細胞膜表面上でＬＤＬ受容体と結合し、ＬＤＬ受容体の細胞内移行を促進する。細胞内に移行したＬＤＬ受容体は細胞内器官で分解を受ける。ＬＤＬ受容体はＬＤＬコレステロールを含むリポ蛋白を循環血液中から肝臓へと輸送する機能を有しているため、ＰＣＳＫ９タンパクの産生は、肝臓への血中ＬＤＬコレステロールの取り込みを阻害し、結果として、血中ＬＤＬコレステロールを上昇させる。実際に、ＰＣＳＫ９遺伝子に機能獲得型変異を有するヒトの血中ＬＤＬコレステロールレベルは高く、常染色体優性高コレステロール血症と関連していることが知られている（非特許文献２）。一方、ＰＣＳＫ９遺伝子に機能喪失変異を有するヒトの血中ＬＤＬコレステロールレベルは低く維持されている（非特許文献３）。また、動物レベルでは、肝臓のＰＣＳＫ９遺伝子を欠損させたマウスのＬＤＬコレステロールは低値であることが示されている（非特許文献４）。

以上のことより、ＰＣＳＫ９タンパクの産生抑制等によりその量を低減することやＰＣＳＫ９タンパクの機能を阻害することは、ＬＤＬ受容体量の増加につながり、ひいては強力なＬＤＬコレステロール低下作用に結びつくものと考えられる。

このような背景から、最近、ＰＣＳＫ９タンパクの機能阻害や産生抑制に関する研究が活発に行われている。例えば、抗体やアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いるものとしては、ＰＣＳＫ９のモノクローナル抗体によるＰＣＳＫ９タンパクの機能阻害やＲＮＡ干渉によるＰＣＳＫ９タンパクの産生抑制などが報告されている（非特許文献５〜７）。また、低分子化合物を用いるものとしては、ベルベリンがＨｅｐＧ２細胞におけるＰＣＳＫ９のｍＲＮＡとタンパクレベルを低下させるという報告（非特許文献８）や、アネキシンＡ２活性化剤である５−アザシチジンがＰＣＳＫ９タンパクとアネキシンＡ２の結合を促進し、ＬＤＬ受容体の分解を抑制するという報告がある（特許文献１）。しかし、低分子化合物のＰＣＳＫ９タンパク機能阻害剤又はＰＣＳＫ９タンパク産生抑制剤は前記したものの他にはほとんど報告がない。

なお、特許文献２にはコレステロールエステル転送タンパク（ＣＥＴＰ）に対して強い阻害活性を示し、強い血中ＨＤＬコレステロール増加作用を有するジベンジルアミン構造を有するピリミジン化合物が開示されており、その実施例４５化合物として、ラセミ体である下記式（Ｉ）：

で表される化合物（ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸：以下、本明細書において、「ラセミ体化合物（Ｉ）」とも称する。）が開示されているが、ラセミ体化合物（Ｉ）とＰＣＳＫ９タンパクとの関連性は一切記載も示唆もされていない。

ところで、ＰＣｓは癌細胞の増殖、運動、接着、侵襲に影響を与えることから、癌治療の標的として注目されている（非特許文献９）。その他、ＰＣｓは、肥満、糖尿病、アルツハイマー病との関連や、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）や重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）等のウイルス感染症等の疾患にも関与することが知られている（非特許文献１０及び１１）。
従って、ＰＣＳＫ９タンパク量の低下作用や機能阻害作用を有する化合物は、上記疾患に対する医薬の有効成分としての利用も期待できる。

国際公開第２００９／１４３６３３号パンフレット国際公開第２００８／１２９９５１号パンフレット

日本臨床, 59巻増刊3, 高脂血症(下), 381-386 (2001) Nat. Genet. 34, 154-156 (2003) N. Engl. J. Med. 354, 1264-1272 (2006) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 102, 5374-5379 (2005) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 106, 9820-9825 (2009) J. Lipid Res. 48, 763-767 (2007) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 105, 11915-11920 (2008) Atherosclerosis, 201(2), 266-273 (2008) Mol. Carcinogen., 44(3), 151-161 (2005) J. Mol. Med., 83, 842-843 (2005) J. Mol. Med., 83, 844-855 (2005)

本発明の課題は、ＰＣＳＫ９タンパク量を低下させ、ＬＤＬ受容体量を増加させる作用を有する低分子化合物、及び当該低分子化合物を有効成分とする医薬を提供することにある。

本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意研究を続けた結果、ラセミ体化合物（Ｉ）、及びそのエナンチオマーの一つである下記式（II）：

で表される（Ｒ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸（以下、本明細書において、「（Ｒ）体化合物（II）」とも称する。）では、ＰＣＳＫ９タンパク量の低下作用、ＬＤＬ受容体量の増加作用がほとんど認めらないが、ラセミ体化合物（Ｉ）を構成するもう一つのエナンチオマーである下記式（III）：

で表される、左旋性の（Ｓ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸（以下、本明細書において、「（Ｓ）体化合物（III）」とも称する。）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物では、強力なＰＣＳＫ９タンパク量低下作用、及びＬＤＬ受容体量の増加作用が認められることを見出した。

ラセミ体化合物（Ｉ）はおよそ５０％の（Ｓ）体化合物（III）を含むものであるにも拘わらずＰＣＳＫ９タンパク量の低下作用を殆ど示さず、また、ＬＤＬ受容体量の増加作用を全く示さなかったことから、ラセミ体化合物（Ｉ）においては、その構成成分である（Ｒ）体化合物（II）が（Ｓ）体化合物（III）の作用発現を阻害しているものと推察される。そして、（Ｒ）体化合物（II）の含有量を減少させて（Ｓ）体化合物（III）の光学純度を高くすることにより、所望のＰＣＳＫ９タンパク量低下作用、及び高いＬＤＬ受容体量増加作用を有する医薬を提供できるものと考えられる。本発明は上記の知見を基にして完成された。

すなわち、本発明は、（Ｓ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物（好適には、実質的に光学的に純粋な（Ｓ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物）を提供するものである。

また、別の観点から、本発明は、ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸の左旋性のエナンチオマー、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物（好適には、実質的に光学的に純粋なｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸の左旋性のエナンチオマー、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物）を提供するものである。

さらに、本発明は、（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする医薬を提供するものである。
また、本発明は、有効成分としての（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物、及び製薬上許容される担体を含有する医薬組成物を提供するものである。

当該医薬及び医薬組成物は、血中ＬＤＬコレステロールを低下させることにより、高血中ＬＤＬコレステロール状態に起因する疾患（例えば、高ＬＤＬ血症、脂質異常症（高脂血症）、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、高コレステロール血症、家族性高コレステロール血症、心臓血管障害、狭心症、虚血、心虚血、血栓症、心筋梗塞、再灌流障害、血管形成性再狭窄、高血圧等）の予防及び／又は治療のための医薬として用いることができる。

さらに、本発明は、高血中ＬＤＬコレステロール状態に起因する疾患の予防及び／又は治療のための医薬を製造するための（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の使用；高血中ＬＤＬコレステロール状態に起因する疾患の予防及び／又は治療に用いるための（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を提供するものである。

また、本発明は、（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＰＣＳＫ９ｍＲＮＡ発現抑制剤；（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＰＣＳＫ９タンパク量の低下剤；（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＰＣＳＫ９タンパク産生抑制剤；及び（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＬＤＬ受容体量の増加剤を提供するものである。

さらに、本発明は、ＰＣＳＫ９ｍＲＮＡ発現抑制剤、ＰＣＳＫ９タンパク量の低下剤、ＰＣＳＫ９タンパク産生抑制剤又はＬＤＬ受容体量の増加剤を製造するための（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の使用；及びＰＣＳＫ９ｍＲＮＡ発現抑制剤、ＰＣＳＫ９タンパク量の低下剤、ＰＣＳＫ９タンパク産生抑制剤又はＬＤＬ受容体量の増加剤の有効成分として使用するための（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を提供するものである。

また、本発明は、（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする、ＰＣｓの関与する疾患（癌、肥満、糖尿病、アルツハイマー病、又はウイルス感染症等）の予防及び／又は治療のための医薬を提供するものである。

さらに、本発明は、ＰＣｓの関与する疾患の予防及び／又は治療のための医薬を製造するための（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の使用；及びＰＣｓの関与する疾患の予防及び／又は治療に用いるための（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を提供するものである。

さらに別の観点から、本発明は、ラセミ体化合物（Ｉ）、特許文献２実施例４４記載の化合物（ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸）、若しくはそれらのエナンチオマー、若しくはそれらの塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素ｍＲＮＡ発現抑制剤；ラセミ体化合物（Ｉ）、特許文献２実施例４４記載の化合物、若しくはそれらのエナンチオマー、若しくはそれらの塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素産生抑制剤；及びラセミ体化合物（Ｉ）、特許文献２実施例４４記載の化合物、若しくはそれらのエナンチオマー、若しくはそれらの塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とするＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素ｍＲＮＡ発現に起因する疾患（例えば、炎症、癌、アルツハイマー病、骨粗鬆症、前立腺肥大、糸球体疾患、寄生虫感染、ウイルス感染、乾癬、黄斑変性など）の予防及び／又は治療のための医薬を提供するものである。

また、本発明は、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素ｍＲＮＡ発現抑制剤、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素産生抑制剤、又はＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素ｍＲＮＡ発現に起因する疾患の予防及び／又は治療のための医薬を製造するためのラセミ体化合物（Ｉ）、特許文献２実施例４４記載の化合物、若しくはそれらのエナンチオマー、若しくはそれらの塩、又はそれらの溶媒和物の使用；及びＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素ｍＲＮＡ発現抑制剤、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素産生抑制剤、又はＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素ｍＲＮＡ発現に起因する疾患の予防及び／又は治療のための医薬の有効成分として使用するためのラセミ体化合物（Ｉ）、特許文献２実施例４４記載の化合物、若しくはそれらのエナンチオマー、若しくはそれらの塩、又はそれらの溶媒和物を提供するものである。

また、本発明は、ヒトを含む哺乳類動物の生体内においてＰＣＳＫ９ｍＲＮＡの発現を抑制する方法であって、（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を、ヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；ヒトを含む哺乳類動物の生体内においてＰＣＳＫ９タンパク量を低下させる方法であって、（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を、ヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；ヒトを含む哺乳類動物の生体内においてＰＣＳＫ９タンパクの産生を抑制する方法であって、（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；ヒトを含む哺乳類動物の生体内においてＬＤＬ受容体量を増加する方法であって、（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；及び、ヒトを含む哺乳類動物の血中ＬＤＬを低下させる方法であって、（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法を提供するものである。

また、本発明は、ヒトを含む哺乳類動物における高血中ＬＤＬコレステロール状態に起因する疾患の予防及び／又は治療方法であって、（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法を提供するものである。

さらに、本発明は、ヒトを含む哺乳類動物におけるＰＣｓの関与する疾患の予防及び／又は治療方法であって、（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法を提供するものである。

さらに、本発明は、ヒトを含む哺乳類動物の生体内においてＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素ｍＲＮＡの発現を抑制する方法であって、ラセミ体化合物（Ｉ）、特許文献２実施例４４記載の化合物、若しくはそれらのエナンチオマー、若しくはそれらの塩、又はそれらの溶媒和物の有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；ヒトを含む哺乳類動物の生体内においてＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素の産生を抑制する方法であって、ラセミ体化合物（Ｉ）、特許文献２実施例４４記載の化合物、若しくはそれらのエナンチオマー、若しくはそれらの塩、又はそれらの溶媒和物の有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；及び、ヒトを含む哺乳類動物においてＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素ｍＲＮＡ発現に起因する疾患を予防及び／又は治療する方法であって、ラセミ体化合物（Ｉ）、特許文献２実施例４４記載の化合物、若しくはそれらのエナンチオマー、若しくはそれらの塩、又はそれらの溶媒和物の有効量を、ヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法を提供するものである。

また、本発明は、（Ｓ）体化合物（III）及び／又は（Ｒ）体化合物（II）を実質的に光学的に純粋な形態として製造する方法をも提供するものである。

特許文献２にはラセミ体化合物（Ｉ）の製造方法は記載されているものの、（Ｓ）体化合物（III）又は（Ｒ）体化合物（II）を実質的に光学的に純粋な形態として製造することは、以下の通り極めて困難な状況にあった。
すなわち、一般論として、実質的に光学的に純粋な化合物は、そのラセミ体を合成した後にキラルカラムにより光学分割して製造することができる場合があることが知られている。
しかしながら、キラルカラムを用いる光学分割法は、化合物によっては分割条件の設定が非常に困難な場合があり、また、工業的な大量スケールでの製造には不向きである。加えて、キラルカラムを用いる光学分割法による、実質的に光学的に純粋な（Ｓ）体化合物（III）又は（Ｒ）体化合物（II）の製造は、その分割条件の設定が非常に困難であった。すなわち、キラルカラムの種類（例えば、ＣＨＩＲＡＬＣＥＬＯＤ−Ｈ、ＣＨＩＲＡＬＣＥＬＯＪ−Ｈなど）、移動相として用いる溶媒の種類・組成（例えば、ＭｅＯＨ／ＴＦＡ混液、ＥｔＯＨ／ＴＦＡ混液など）、移動相の流速等の条件を種々変更して、特許文献２実施例４５記載の方法に従って製造したラセミ体化合物（Ｉ）からの各エナンチオマーの分取が試みられたが、殆どの条件では分離が上手くいかなかった。そのような中、後記実施例１−１に記載した条件であれば各エナンチオマーの分離が可能であることが判明したものの、当該条件では分解物（エチルエステル体）が生じることが判明した。

また、特許文献２には、ラセミ体化合物（Ｉ）につき、下記のスキーム１に示す方法に従って、中間体化合物（ａ）とラセミ体のベンジルブロミド体（ｂ）とを塩基存在下にてカップリングさせ、得られた化合物（ｃ）のエステル基を加水分解して化合物（ｄ）とし、最後に硫黄原子を酸化する方法で製造することができる旨開示されている。

スキーム１

スキーム１を参考に、本発明者らはラセミ体のベンジルブロミド体（ｂ）の代わりに光学活性な１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−１−メタンスルホニルオキシエタンを用いて実質的に光学的に純粋な（Ｓ）体化合物（III）又は（Ｒ）体化合物（II）を得ることを試みたが、１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−１−メタンスルホニルオキシエタンの脱離反応が優先し、目的化合物を得ることができなかった。

また、メタンスルホニル基の代わりにトルエンスルホニル基、クロロメタンスルホニル基又は２，４，６−トリイソプロピルベンゼンスルホニル基等の脱離基を有する光学活性ベンジル化剤を用いて検討を行なったが、１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−１−メタンスルホニルオキシエタンの場合と同様に、実質的に光学的に純粋な（Ｓ）体化合物（III）又は（Ｒ）体化合物（II）を得ることはできなかった。

また、これまで、ベンジルフロミド体（ｂ）を用いた場合に、中間体化合物（ａ）の窒素原子への［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−１−エチル基の導入が達成されていることから、ラセミ体のベンジルブロミド体（ｂ）の代わりに光学活性なベンジルブロミド体を用いることにより実質的に光学的に純粋な（Ｓ）体化合物（III）又は（Ｒ）体化合物（II）を得ることも考えられる。

しかしながら、一般的に臭化物イオンが脱離する求核置換反応では、反応により生じた臭化物イオンが反応系中でベンジルブロミドと反応し、ラセミ化が進行することが知られている。また、一般にベンジル位での求核置換反応は、ベンジルカチオンの安定化によりＳＮ１型の置換反応も競合するため、部分的にラセミ化が起こることが知られている。

ここで、部分ラセミ化により光学純度が低下した結果得られる、中程度の光学純度を有する化合物（本明細書において、「中程度の光学純度を有する化合物」とは１０％ｅｅ程度以上９０％ｅｅ未満、好適には２０〜８０％ｅｅ程度、特に好適には４０〜７０％ｅｅ程度の光学純度を意味しており、中程度の光学純度を有する化合物を、以下、「セミキラル体」とも称する。さらに、当該セミキラル体において、下記の部分構造中、＊印で示される不斉炭素原子がＳ配置の化合物が、Ｒ配置の化合物よりも過剰量存在する場合を特に「（Ｓ）体優位のセミキラル体」と称する。一方、当該セミキラル体において、＊印で示される不斉炭素原子がＲ配置の化合物が、Ｓ配置の化合物よりも過剰量存在する場合を特に「（Ｒ）体優位のセミキラル体」と称する。

については、片方のエナンチオマーのみを優先晶析させることにより光学純度を高められることが知られている。
しかしながら、本発明者らの検討によれば、ラセミ体化合物（Ｉ）及びそのエチルエステル誘導体では結晶化が進行せず、優先晶析法によって光学純度を高めることは出来なかった。

かかる状況下において、本発明者らは、ラセミ体化合物（Ｉ）のカルボン酸をベンジルエステルに変換したところ、得られるベンジルエステル化合物がラセミ体を主成分とする結晶として単離可能であることを見出した。

そして、下記のスキーム２に示すように、アリールアルキル又はヘテロアリールアルキルエステル化合物のセミキラル体（IV）を製造し、ラセミ体が成分として優位な低光学純度の結晶（以下、本明細書において「ラセミ体優位の結晶」と称する場合がある。）を晶析させた後除去することにより、高い光学純度のアリールアルキル又はヘテロアリールアルキルエステル体（Ｖ）又は（Ｖ´）を得、これを原料とすることによって、ラセミ体化合物（Ｉ）の所望のエナンチオマー（（Ｓ）体化合物（III）及び（Ｒ）体化合物（II））を実質的に光学的に純粋な形態として製造することに成功した。

スキーム２

（スキーム図中、Ｒは置換基を有していてもよいＣ_6-10アリール基又は置換基を有していてもよい５−１０員へテロアリール基を示し、ｎは１〜６の整数を示す。）

すなわち、本発明は、実質的に光学的に純粋な（Ｓ）体化合物（III）若しくは実質的に光学的に純粋な（Ｒ）体化合物（II）、若しくはそれらの塩、又はそれらの溶媒和物の製造方法であって、下記の一般式（IV）：

（式中、Ｒは置換基を有していてもよいＣ_6-10アリール基又は置換基を有していてもよい５−１０員ヘテロアリール基を示し、ｎは１〜６の整数を示す）で表される化合物のセミキラル体から、溶媒中で、ラセミ体優位の結晶を優先晶析（ｐｒｅｆｅｒｅｎｔｉａｌｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ）で除去することにより、下記の一般式（Ｖ）又は（Ｖ´）：

（式中、Ｒ及びｎは一般式（IV）におけるものと同義である）で表される実質的に光学的に純粋な化合物を得る工程を含む方法を提供するものである。

上記方法において、一般式（IV）で表される化合物が（Ｓ）体優位のセミキラル体である場合は（Ｓ）体化合物（III）を、一般式（IV）で表される化合物が（Ｒ）体優位のセミキラル体である場合は（Ｒ）体化合物（II）をそれぞれ製造することができる。

また、本発明は、一般式（Ｖ）又は（Ｖ´）で表される化合物から、−(ＣＨ₂)ｎ−Ｒで表される基を除去する工程をさらに含む、上記の方法を提供するものである。

さらに、本発明は、
（Ａ）下記の一般式（VI）：

（式中、Ｒ及びｎは一般式（IV）におけるものと同義である）で表される化合物のセミキラル体を、溶媒中で、酸化剤と反応させて、一般式（IV）で表される化合物のセミキラル体を製造する工程をさらに含む、上記の方法；

（Ｂ）下記の式（VII）：

で表される化合物のセミキラル体と、下記の一般式（VIII）：

（式中、Ｒ及びｎは一般式（IV）におけるものと同義である）で表される化合物とを、溶媒中で、触媒の存在下に反応させて、一般式（VI）で表される化合物のセミキラル体を製造する工程をさらに含む、上記の方法（Ａ）；

（Ｃ）下記の一般式（IX）：

（式中、Ｒ¹はＣ_1-6アルキル基を示す）で表される化合物のセミキラル体を、溶媒中で、塩基の存在下に加水分解して、式（VII）で表される化合物のセミキラル体を製造する工程をさらに含む、上記の方法（Ｂ）；

（Ｄ）下記の一般式（Ｘ）又は（Ｘ´）：

（式中、Ｘはハロゲン原子を示す）で表される化合物と、下記の一般式（XI）：

（式中、Ｒ¹は一般式（IX）におけるものと同義である）で表される化合物とを、溶媒中で、塩基の存在下に反応させて、一般式（IX）で表される化合物のセミキラル体を製造する工程をさらに含む、上記の方法（Ｃ）を提供するものである。

また、本発明は、光学活性１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタノールを、ハロゲン化剤の存在下でハロゲン化して、一般式（Ｘ）又は（Ｘ´）で表される化合物を製造する工程をさらに含む、上記の方法（Ｄ）を提供するものである。

別の観点からは、本発明は、上記の一般式（IV）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を提供するものである。この発明の好ましい態様は、Ｒがフェニルであり、ｎが１である化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である。

また、本発明は、上記の一般式（Ｖ）又は（Ｖ´）で表される実質的に光学的に純粋な化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を提供するものである。この発明の好ましい態様は、Ｒがフェニルであり、ｎが１である化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である。

（Ｓ）体化合物（III）は、優れたＰＣＳＫ９タンパク量の低下作用、ＬＤＬ受容体量の増加作用を有し、また、優れた血中ＬＤＬコレステロール低下作用を示すことから、例えば血中ＬＤＬコレステロールを低下させるための医薬の有効成分等として有用である。
また、（Ｓ）体化合物（III）は、ＰＣｓの関与する疾患、より具体的には癌、肥満、糖尿病、アルツハイマー病、又はウイルス感染症に対する予防及び／又は治療のための医薬の有効成分としても有用である。

さらに、本発明の製造方法によれば、ラセミ体化合物（Ｉ）の所望のエナンチオマー（（Ｓ）体化合物（III）及び（Ｒ）体化合物（II））を実質的に光学的に純粋な形態として簡便に製造することができることから、本発明の方法は、例えば、医薬の有効成分等として有用な、実質的に光学的に純粋な（Ｓ）体化合物（III）を製造する方法として好適に利用できる。

本明細書において、「実質的に光学的に純粋な」とは、化合物の光学純度が９０％ｅｅ以上、好ましくは９５〜１００％ｅｅ、特に好ましくは９７〜１００％ｅｅであることを意味する。
従って、例えば「実質的に光学的に純粋な（Ｓ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸」、「実質的に光学的に純粋なｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸の左旋性のエナンチオマー」及び「実質的に光学的に純粋な（Ｓ）体化合物（III）」とは、光学純度が９０％ｅｅ以上、好ましくは９５〜１００％ｅｅ、特に好ましくは９７〜１００％ｅｅである（Ｓ）体化合物（III）を意味する。

本発明において、（Ｓ）体化合物（III）の光学純度としては、良好なＰＣＳＫ９タンパク量の低下作用及び／又はＬＤＬ受容体量の増加作用を得る観点から、下記実施例１−１に示すキラルＨＰＬＣ分析条件において９８％ｅｅ以上であるのが好ましく、９９％ｅｅ以上であるのが特に好ましい。係る光学純度であれば、他方のエナンチオマー（（Ｒ）体化合物（II））を実質的に含有しないこととなる。

本明細書において、「Ｃ_1-6アルキル基」とは、直鎖状又は分岐鎖状の炭素数１〜６のアルキル基を意味し、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、イソペンチル基、ネオペンチル基、ｎ−ヘキシル基、イソヘキシル基等が挙げられる。

本明細書において、「置換基を有していてもよいＣ_6-10アリール基」の「Ｃ_6-10アリール」部は、炭素数６〜１０の芳香族炭化水素基を意味し、例えば、フェニル基、ナフチル基、アズレニル基等が挙げられる。

本明細書において、「置換基を有していてもよい５−１０員へテロアリール基」の「５−１０員へテロアリール」部は、酸素原子、イオウ原子、及び窒素原子から選ばれるヘテロ原子を環構成原子として１から４個含有する５〜１０員の単環式、多環式、又は縮合環式の芳香族ヘテロ環基を意味し、例えば、フリル基、チエニル基、ピロリル基、オキサゾリル基、イソオキサゾリル基、チアゾリル基、イソチアゾリル基、イミダゾリル基、ピラゾリル基、オキサジアゾリル基、チアジアゾリル基、トリアゾリル基、テトラゾリル基、ピリジル基、ピリミジル基、ピラジニル基、ピリダジニル基、ベンゾフラニル基、イソベンゾフラニル基、ベンゾチエニル基、インドリル基、イソインドリル基、インダゾリル基、ベンゾイミダゾリル基、ベンゾオキサゾリル基、ベンゾイソオキサゾリル基、ベンゾチアゾリル基、ベンゾイソチアゾリル基、ベンゾオキサジアゾリル基、ベンゾチアジアゾリル基、ベンゾトリアゾリル基、キノリル基、イソキノリル基、シンノリニル基、キナゾリニル基、キノキサリニル基、フタラジニル基、ナフチリジニル基、プリニル基、プテリジニル基、フロピリジル基、チエノピリジル基、ピロロピリジル基、オキサゾロピリジル基、チアゾロピリジル基、イミダゾピリジル基等が挙げられる。

本明細書において、「置換基を有していてもよいＣ_6-10アリール基」、「置換基を有していてもよい５−１０員ヘテロアリール基」の置換基としては、例えば、ハロゲン原子、カルボキシル基、カルバモイル基、スルホニル基、スルファモイル基、ニトロ基等が挙げられる。また、置換基の数は、１〜置換可能な最大数であり、通常、１〜５個の置換基を有していてもよい。ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、又はヨウ素原子のいずれを用いてもよい。

一般式中、Ｒにおける置換基を有していてもよいＣ_6-10アリール基としては、フェニル基が好ましい。
また、一般式中、ｎが示す整数としては、１が好ましい。
また、一般式中、Ｒ¹におけるＣ_1-6アルキル基としては、Ｃ_1-4アルキル基が好ましく、エチル基がより好ましい。
また、一般式中、Ｘが示すハロゲン原子としては、塩素原子又は臭素原子が好ましく、臭素原子がより好ましい。

本発明において、各化合物（例えば、（Ｓ）体化合物（III）、一般式（IV）で表される化合物、一般式（Ｖ）で表される化合物、一般式（Ｖ´）で表される化合物など）の塩としては例えば、酸付加塩や塩基付加塩等が挙げられ、医薬として許容される塩であれば特に制限されない。具体的には例えば、酸付加塩であれば塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩のような無機酸との酸付加塩；安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、酢酸塩等の有機酸との酸付加塩が挙げられる。また、塩基付加塩であればナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等の金属との塩基付加塩；アンモニア、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、コリジン、ルチジン等のアミン塩；リシン、アルギニン等の有機塩基との塩基付加塩等が挙げられる。

本発明において、各化合物（例えば、（Ｓ）体化合物（III）、一般式（IV）で表される化合物、一般式（Ｖ）で表される化合物、一般式（Ｖ´）で表される化合物など）又はその塩の溶媒和物を形成する溶媒としては、水のほか、生理学的に許容される有機溶媒、例えばエタノール、ヘキサン、酢酸エチルなどを挙げることができるが、これらに限定されることはない。本発明の医薬の有効成分としては、例えば、水和物等が挙げられるが、これに限定されるものではない。

本発明の、実質的に光学的に純粋な（Ｓ）体化合物（III）の製造方法の一例を下記のスキーム３に、実質的に光学的に純粋な（Ｒ）体化合物（II）の製造方法の一例を下記のスキーム４にそれぞれ示す（下記スキーム図中、Ｒ、Ｒ¹、Ｘ及びｎは前記と同義である）。

スキーム３

スキーム４

＜工程Ａ＞
本工程はアミン（XI）を塩基存在下、光学活性なベンジルハライド（Ｘ）又は（Ｘ´）と反応させ、セミキラル体（IX）を製造する工程である。化合物（Ｘ）又は（Ｘ´）の量は、化合物（XI）に対して１．０〜３．０モル当量、好ましくは１．５〜２．５モル当量用いればよい。
なお、アミン（XI）は公知の化合物であり、その製造方法は、例えば特許文献２に記載されている。

本反応は溶媒中、塩基の存在下により行うことができる。溶媒としては、特に制限は無いが、例えば、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジメチルスルホキシド、ジオキサン、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、プロピオニトリル等を単独又は組み合わせて使用することができる。溶媒としては、好ましくはテトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド及びその混合溶媒を挙げることができる。溶媒の量は、特に限定されないが、化合物（XI）に対して２〜２０倍量（Ｖ／Ｗ）、好ましくは５〜１２倍量（Ｖ／Ｗ）、より好ましくは７〜１０倍量（Ｖ／Ｗ）を用いればよい。

塩基としては、特に制限は無いが、例えば、水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム等の水素化アルカリ金属類；金属リチウム、金属ナトリウム、金属カリウム等のアルカリ金属類；水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の水酸化アルカリ金属類；炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム等の炭酸アルカリ金属類；リチウムジイソプロピルアミド、ナトリウムジイソプロピルアミド、カリウムジイソプロピルアミド、リチウムヘキサメチルジシラジド、ナトリウムヘキサメチルジシラジド、カリウムヘキサメチルジシラジド等のアルカリ金属アミド類；ｔ−ブトキシナトリウム、ｔ−ブトキシカリウム等のアルコキシアルカリ金属類；ｎ−ブチルリチウム、ｓ−ブチルリチウム、ｔ−ブチルリチウム等の有機リチウム類を使用することができる。塩基としては、好ましくは水素化アルカリ金属類を、より好ましくは水素化ナトリウムを挙げることができる。塩基の量は、化合物（XI）に対して１．０〜５．０モル当量、好ましくは２．０〜４．０モル当量用いればよい。

反応温度は、通常−８０〜１００℃の範囲で行えばよく、好ましくは−３０〜５０℃、より好ましくは−２０〜５℃である。反応時間は、通常５分〜４８時間、好ましくは３０分〜２４時間、より好ましくは３〜８時間である。本反応では、実質的に光学的に純粋なベンジルハライド（Ｘ）又は（Ｘ´）を用いることが好ましい。当該反応により、部分的にラセミ化が進行して、セミキラル体（IX）が得られる。このセミキラル体（IX）を次工程にそのまま用いることができる。工程Ｂ〜Ｄにおいて光学純度は実質的に維持され、セミキラル体（IX）と同程度の光学純度を有する、セミキラル体（IV）が得られる。なお、本発明者らの研究によれば、本工程においてＲ¹がベンジル基であるアミン（XI）を用いて光学活性ベンジルハライド（Ｘ）又は（Ｘ´）との反応を行っても目的物であるセミキラル体（IX）を収率よく得ることはできず、Ｒ¹としてＣ_1-6アルキル基を用いることによって所望のセミキラル体（IX）を収率よく得ることができる。

＜工程Ｂ＞
本工程はセミキラル体（IX）を加水分解し、セミキラル体（VII）を製造する工程である。
本反応は溶媒中で塩基の存在下により行うことができる。溶媒としては、特に制限は無いが、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、ｔｅｒｔ−ブタノール等のアルコール類やアセトニトリル、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジオキサン及び水等を単独又は組み合わせて使用することができる。溶媒としては、好ましくはアルコール類と水の組合わせ、より好ましくはエタノールと水の組合せを挙げることができる。溶媒の量は、特に制限はないが、化合物（IX）に対して１０〜１００倍量（Ｖ／Ｗ）、好ましくは２０〜５０倍量（Ｖ／Ｗ）、より好ましくは３０〜４０倍量（Ｖ／Ｗ）を用いればよい。

塩基としては、特に制限は無いが、例えば、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の水酸化アルカリ金属類；炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム等の炭酸アルカリ金属類；水酸化テトラメチルアンモニウム、水酸化テトラエチルアンモニウム、水酸化テトラプロピルアンモニウム、水酸化テトラブチルアンモニウム、水酸化ベンジルトリメチルアンモニウム（ＴｒｉｔｏｎＢ）等の水酸化四級アンモニウム等を使用することができる。塩基としては、好ましくは水酸化アルカリ金属類、より好ましくは水酸化ナトリウムを挙げることができる。塩基の量は、化合物（IX）に対して好ましくは１．０〜５．０モル当量、より好ましくは２．０〜３．０モル当量用いればよい。

反応温度は、通常０〜１００℃の範囲で行えばよく、好ましくは３０〜８０℃、より好ましくは４０〜６０℃である。反応時間は、通常５分〜４８時間が好ましく、より好ましくは３０分〜１２時間、特に好ましくは２〜５時間である。

＜工程Ｃ＞
本工程はセミキラル体（VII）とアルコール（VIII）とを縮合し、セミキラル体（VI）を製造する工程である。アルコール（VIII）の量は、化合物（VII）に対して、０．８〜２．０モル当量、好ましくは１．０〜１．２モル当量用いればよい。

本反応は溶媒中、塩基の存在下又は非存在下、縮合剤を用いて行うことができる。縮合促進剤の存在下で反応を行ってもよい。溶媒としては特に制限はないが、例えば、１，２−ジクロロエタン、クロロホルム、ジクロロメタン等のハロゲン化炭化水素類；酢酸エチル、酢酸イソプロピル等の酢酸エステル類；トルエン、ベンゼン等の芳香族炭化水素類；テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトニトリル、プロピオニトリル等を使用することができる。溶媒としては、好ましくはハロゲン化炭化水素類、より好ましくはジクロロエタンを挙げることができる。溶媒の量は、特に制限はないが、化合物（VII）に対して、５〜１００倍量（Ｖ／Ｗ）、好ましくは１０〜２０倍量（Ｖ／Ｗ）を用いればよい。

塩基としては特に制限はないが、例えば、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、コリジン、ルチジン、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ジイソプロピルペンチルアミン、トリメチルアミン等の有機塩基類；水素化リチウム、水素化ナトリウム、水素化カリウム等の水素化アルカリ金属類；水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の水酸化アルカリ金属類；炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム等の炭酸アルカリ金属類；炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム等の重炭酸アルカリ金属等を使用することができる。

縮合促進剤としては特に制限はないが、ＤＭＡＰ、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＯＤｈｂｔ）、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミド（ＨＯＮＢ）、ペンタフルオロフェノール（ＨＯＰｆｐ）、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド（ＨＯＰｈｔ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）等を使用することができる。縮合促進剤としては、ＤＭＡＰが好ましい。縮合促進剤の量は、化合物（VII）に対して、０．００１〜１．０モル当量、好ましくは０．０５〜０．５モル当量を用いればよい。

縮合剤としては特に制限はないが、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ‘−エチル−カルボジイミド（通称：Ｗａｔｅｒｓｏｌｕｂｌｅｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ：ＷＳＣＩ）、ＷＳＣ・ＨＣｌ等を使用することができる。縮合剤としては、好ましくはＷＳＣ・ＨＣｌである。縮合剤の量は、化合物（VII）に対して、１．０〜３．０モル当量、好ましくは１．０〜１．２モル当量を用いればよい。

反応温度は、通常０〜１００℃の範囲で行えばよく、好ましくは０〜８０℃、より好ましくは１０〜３０℃である。反応時間は、通常５分〜４８時間が好ましく、より好ましくは３０分〜２４時間、特に好ましくは８〜１６時間である。

＜工程Ｄ＞
本工程はセミキラル体（VI）の硫黄原子を酸化することにより、セミキラル体（IV）を製造する工程である。
酸化方法としては硫黄原子をスルホニル基へと変換する通常の方法を適用することができる。酸化剤としては、例えば、触媒量のタングステン酸ナトリウム、二塩化二酸化モリブデンあるいは五塩化タンタルを用いた過酸化水素水による酸化反応や、過ホウ素酸ナトリウム、Ｏｘｏｎｅ（登録商標）、過ヨウ素酸ナトリウム、過ヨウ素酸カリウム、メタクロロ過安息香酸（ｍＣＰＢＡ）、ピリジニウムクロロクロメート（ＰＣＣ）、ピリジニウムジクロメート（ＰＤＣ）、Ｎ−クロロコハク酸イミド（ＮＣＳ）、Ｎ−ブロモコハク酸イミド（ＮＢＳ）、Ｎ−ヨードコハク酸イミド（ＮＩＳ）、ヨウ素、臭素等を使用することができる。酸化剤としては、好ましくは五塩化タンタルと過酸化水素水の組合わせである。五塩化タンタルの量は、化合物（VI）に対して、０．００１〜１．０モル当量、好ましくは０．０５〜０．５モル当量を用いればよい。過酸化水素水の量は、化合物（VI）に対して、１．０〜１０モル当量、好ましくは４．０〜６．０モル当量を用いればよい。

溶媒としては特に制限はないが、例えば、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｔｅｒｔ−ブタノールなどのアルコール類、アセトニトリル、アセトン、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン、四塩化炭素、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、酢酸等が挙げられる。溶媒としては、好ましくはアルコール類、より好ましくは２−プロパノールを挙げることができる。溶媒の量は、特に制限はないが、化合物（VI）に対して、５〜１００倍量（Ｖ／Ｗ）、好ましくは１０〜３０倍量（Ｖ／Ｗ）を用いればよい。

反応温度は、通常０〜１００℃の範囲で行えばよく、好ましくは１０〜６０℃、より好ましくは１０〜３０℃である。反応時間は、通常５分〜４８時間が好ましく、より好ましくは３０分〜２４時間、特に好ましくは８〜１６時間である。

＜工程Ｅ＞
本工程はセミキラル体（IV）からラセミ体優位な低光学純度の結晶を優先晶析することにより、高光学純度の光学活性体（Ｖ）又は（Ｖ´）を製造する工程である。
本工程は、セミキラル体（IV）を含有する溶媒中で、ラセミ体優位な結晶を晶出させた後、得られたラセミ体優位の結晶を除去することにより、母液中に高光学純度の化合物（Ｖ）又は（Ｖ´）を残存させる工程である。
溶媒としては、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール等のアルコール類が挙げられ、直鎖状又は分岐鎖状の炭素数１〜６のアルコールが好ましく、エタノール、イソプロパノールが特に好ましい。溶媒の量は、化合物（IV）に対して、２〜２０倍量（Ｖ／Ｗ）、好ましくは４〜１０倍量（Ｖ／Ｗ）、より好ましくは５〜８倍量（Ｖ／Ｗ）である。

結晶化は、セミキラル体（IV）を溶媒に溶解し、１０〜４０℃、好ましくは１５〜２０℃で、３０分〜２日間、好ましくは１５〜２４時間攪拌すればよく、結晶の収量を高めたければ次いで温度を−１０〜１０℃、好ましくは−５〜５℃に冷却して３０分〜２４時間、好ましくは２〜５時間攪拌してもよい。ラセミ体優位の結晶は、完全なラセミ体結晶であってもよいが、一般的にはラセミ体成分を６０〜１００％程度含む低光学純度（０〜４０％ｅｅ程度）の結晶である。

本工程は、別途調製したラセミ体の種晶の存在下で行なってもよい。ここで用いるラセミ体の種晶は、前記一般式（IV）で表される化合物のラセミ体の結晶であり、例えば、ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルのラセミ体の結晶が挙げられる。

また、本工程Ｅで得られるラセミ体優位の結晶をそのままラセミ体の種晶として使用してもよいが、前記一般式（IV）で表される化合物のラセミ体を別途製造し結晶化して得られる結晶を、ラセミ体の種晶として用いてもよい。係る一般式（IV）で表される化合物のラセミ体は、例えば、下記に示す方法で製造することができる。

本反応はラセミ体化合物（Ｉ）とアルコール（VIII）とを縮合し、ラセミ体（IV）を製造するものである。アルコール（VIII）の量は、ラセミ体化合物（Ｉ）に対して、０．８〜２．０モル当量、好ましくは１．０〜１．２モル当量用いればよい。

本反応は溶媒中、塩基の存在下又は非存在下、縮合剤を用いて行うことができる。縮合促進剤の存在下で反応を行ってもよい。溶媒としては特に制限はないが、例えば、１，２−ジクロロエタン、クロロホルム、ジクロロメタン等のハロゲン化炭化水素類；酢酸エチル、酢酸イソプロピル等の酢酸エステル類；トルエン、ベンゼン等の芳香族炭化水素類；テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトニトリル、プロピオニトリル等を使用することができる。溶媒としては、好ましくはハロゲン化炭化水素類、より好ましくはジクロロメタンを挙げることができる。溶媒の量は、特に制限はないが、ラセミ体化合物（Ｉ）に対して、５〜１００倍量（Ｖ／Ｗ）、好ましくは１０〜２０倍量（Ｖ／Ｗ）を用いればよい。

縮合促進剤としては特に制限はないが、ＤＭＡＰ、１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＯＤｈｂｔ）、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミド（ＨＯＮＢ）、ペンタフルオロフェノール（ＨＯＰｆｐ）、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド（ＨＯＰｈｔ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＨＯＳｕ）等を使用することができる。縮合促進剤としては、ＤＭＡＰが好ましい。縮合促進剤の量は、ラセミ体化合物（Ｉ）に対して、０．００１〜１．０モル当量、好ましくは０．０５〜０．５モル当量を用いればよい。

縮合剤としては特に制限はないが、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣＩ）、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ‘−エチル−カルボジイミド（通称：Ｗａｔｅｒｓｏｌｕｂｌｅｃａｒｂｏｄｉｉｍｉｄｅ：ＷＳＣＩ）、ＷＳＣ・ＨＣｌ等を使用することができる。縮合剤としては、好ましくはＷＳＣ・ＨＣｌである。縮合剤の量は、ラセミ体化合物（Ｉ）に対して、１．０〜３．０モル当量、好ましくは１．０〜１．２モル当量を用いればよい。

一般式（IV）で表される化合物のラセミ体の結晶化（ラセミ体の種晶の製造）は、セミキラル体（IV）からのラセミ体優位な結晶の優先晶析と同様の条件で行なうことができる。
すなわち、ラセミ体（IV）を溶媒に溶解し、１０〜４０℃、好ましくは１５〜２０℃で、３０分〜２日間、好ましくは１５〜２４時間攪拌すればよく、結晶の収量を高めたければさらに温度を−１０〜１０℃、好ましくは−５〜５℃に冷却して、３０分〜２４時間、好ましくは２〜５時間攪拌してもよい。また、溶媒としては、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール等のアルコール類が挙げられ、直鎖状又は分岐鎖状の炭素数１〜６のアルコールが好ましく、エタノール、イソプロパノールが特に好ましい。溶媒の量は、ラセミ体（IV）に対して、２〜２０倍量（Ｖ／Ｗ）、好ましくは４〜１０倍量（Ｖ／Ｗ）、より好ましくは５〜８倍量（Ｖ／Ｗ）である。

＜工程Ｆ＞
本工程は高光学純度の化合物（Ｖ）又は（Ｖ´）を脱保護することにより、実質的に光学的に純粋な（Ｓ）体化合物（III）又は（Ｒ）体化合物（II）を製造する工程である。
本反応は、溶媒中で金属触媒及び水素源を用いた接触還元、又は溶媒中で塩基を用いた加水分解反応により行うことができる。接触還元により脱保護を行う場合は、溶媒としては、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ｔｅｒｔ−ブタノール等のアルコール類；ジエチルエーテル、テトラヒドロフラン、ジオキサン等のエーテル類；酢酸エチル、酢酸イソプロピル等の酢酸エステル類；酢酸；水等を用いることができる。溶媒としては、好ましくはアルコール類、より好ましくはエタノールである。溶媒の量は、化合物（Ｖ）又は（Ｖ´）に対して、５〜３０倍量（Ｖ／Ｗ）、好ましくは５〜１５倍量（Ｖ／Ｗ）を用いればよい。

水素源としては、例えば、水素、シクロヘキサジエン、ギ酸、ギ酸アンモニウム等を使用することができる。水素源としては水素が好ましい。金属触媒としては例えばパラジウム炭素、パラジウム黒、ラネーニッケル、二酸化白金、白金黒等を使用することができる。金属触媒としてはパラジウム炭素が好ましい。パラジウム炭素の量は１０％Ｐｄ−Ｃ（ｗｅｔ）の量として化合物（Ｖ）又は（Ｖ´）に対して、０．００１〜０．５倍量（Ｗ／Ｗ）、好ましくは０．０５〜０．２倍量（Ｗ／Ｗ）を用いればよい。

接触還元は、通常０〜１００℃の範囲で行えばよく、好ましくは１０〜６０℃、より好ましくは１０〜３０℃である。反応時間は、通常５分〜２４時間が好ましく、より好ましくは３０分〜１６時間、特に好ましくは１〜６時間である。

加水分解反応により脱保護を行う場合は、溶媒としては特に制限は無いが、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、２−プロパノール、ｔ−ブタノール等のアルコール類やアセトニトリル、プロピオニトリル、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ジオキサン及び水等を単独又は組み合わせて使用することができる。塩基としては、特に制限は無いが、例えば、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等の水酸化アルカリ金属類；炭酸リチウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム等の炭酸アルカリ金属類；水酸化テトラメチルアンモニウム、水酸化テトラエチルアンモニウム、水酸化テトラプロピルアンモニウム、水酸化テトラブチルアンモニウム、水酸化ベンジルトリメチルアンモニウム（ＴｒｉｔｏｎＢ）等の水酸化四級アンモニウム等を使用することができる。

なお、光学活性なベンジルハライド（Ｘ）又は（Ｘ´）は、例えば下記に示す方法で合成することができる。

本反応は、光学活性な１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタノール（XII）又は（XII´）をハロゲン化剤の存在下でハロゲン化し、光学純度をほとんど低下させることなく高効率的に光学活性な１−ハロ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタン（Ｘ）又は（Ｘ´）を製造する工程である。

本反応に使用するハロゲン化剤は、塩化チオニル、三塩化リン、五塩化リン、オキシ塩化リン等の塩素化剤；三臭化リン、三臭化リンと臭化水素 (３０％酢酸溶液)、三臭化リンとピリジン、Ｎ−ブロモコハク酸イミドとメチルスルフィド、Ｎ−ブロモコハク酸イミドとトリフェニルホスフィン、１，２−ジブロモ−１，１，２，２−テトラクロロエタンとトリフェニルホスフィン、ブロモジメチルスルホニウムブロミド、ピリジニウムブロミドペルブロミドとヘキサメチルジシラン、臭素とトリフェニルホスフィン、臭素とトリブチルホスフィン、臭素とメチルスルフィド、臭化亜鉛とトリフェニルホスフィン及びアゾジカルボン酸ジメチル、臭素化リチウムとクロロトリメチルシラン、臭素化リチウムと無水トリフルオロ酢酸、ブロモトリメチルシラン、四臭化炭素とトリフェニルホスフィン、臭素化チオニル等の臭素化剤；ヨウ化水素、ヨウ化カリウムとリン酸等のヨウ素化剤が挙げられる。ハロゲン化剤が臭素化剤の場合、好ましくは三臭化リンと臭化水素 (３０％酢酸溶液)、１，２−ジブロモ−１，１，２，２−テトラクロロエタンとトリフェニルホスフィン、Ｎ−ブロモコハク酸イミドとメチルスルフィドである。

以下に、ハロゲン化剤として三臭化リンと臭化水素を用いる場合、及び１，２−ジブロモ−１，１，２，２−テトラクロロエタンとトリフェニルホスフィンを用いる場合について特に具体的に説明する。

＜ハロゲン化剤として三臭化リンと臭化水素 (３０％酢酸溶液)を用いる場合＞
ハロゲン化剤として三臭化リンと臭化水素 (３０％酢酸溶液)を用いる場合は、三臭化リンはフェニルエタノール（XII）又は（XII´）に対して０．３〜２．０モル当量使用されるが、好ましくは０．４〜０．６モル当量を用いるのがよい。臭化水素はフェニルエタノール（XII）又は（XII´）に対して０．７〜３．０モル当量使用されるが、好ましくは０．８〜１．２モル当量を用いるのがよい。

本反応は溶媒の存在下又は非存在下で行うことができる。溶媒の存在下で反応を行う場合、使用する溶媒としては、反応に関与しないものであれば特に制限はなく、例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン、メシチレン、クロロベンゼン、１，２−ジクロロベンゼン、ニトロベンゼン等の芳香族炭化水素類；ｎ−ペンタン、ｎ−ヘキサン、シクロヘキサン、ｎ−ヘプタン、ｎ−オクタン、ｎ−デカン等の脂肪族炭化水素類；塩化メチレン、１，２−ジクロロエタン、クロロホルム及び四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類等が挙げられ、その中でも、ベンゼン、トルエン、キシレン、塩化メチレン、１，２−ジクロロエタン、ｎ−ペンタン、ｎ−ヘキサン、ｎ−ヘプタンが好ましく、特にトルエン、塩化メチレン、ｎ−ヘプタンがより好ましい。また、これらの溶媒は、単独又は組み合わせて使用することもでき、溶媒の使用量は特に制限されない。

反応温度は、通常−５０〜１５０℃の範囲で行えばよく、−２０〜８０℃がより好ましく、０〜１５℃が特に好ましい。反応時間は、通常５分〜４８時間が好ましく、３０分〜３６時間がより好ましく、１２〜２４時間が特に好ましい。

＜ハロゲン化剤として１，２−ジブロモ−１，１，２，２−テトラクロロエタンとトリフェニルホスフィンを用いる場合＞
ハロゲン化剤として１，２−ジブロモ−１，１，２，２−テトラクロロエタンとトリフェニルホスフィンを用いる場合は、１，２−ジブロモ−１，１，２，２−テトラクロロエタンはフェニルエタノール（XII）又は（XII´）に対して１．０〜３．０モル当量使用されるが、好ましくは１．０〜１．２モル当量を用いるのがよい。トリフェニルホスフィンはフェニルエタノール（XII）又は（XII´）に対して１．０〜３．０モル当量使用されるが、好ましくは１．０〜１．２モル当量を用いるのがよい。

本反応は溶媒の存在下で行うことができる。使用する溶媒としては、反応に関与しないものであれば特に制限はなく、例えば、ベンゼン、トルエン、キシレン、メシチレン、クロロベンゼン、１，２−ジクロロベンゼン、ニトロベンゼン等の芳香族炭化水素類；ｎ−ペンタン、ｎ−ヘキサン、シクロヘキサン、ｎ−ヘプタン、ｎ−オクタン、ｎ−デカン等の脂肪族炭化水素類；塩化メチレン、１，２−ジクロロエタン、クロロホルム及び四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類等が挙げられる。溶媒としては、好ましくは芳香族炭化水素類又はハロゲン化炭化水素類、より好ましくはベンゼン、トルエン、キシレン、塩化メチレン、１，２−ジクロロエタン、特に好ましくはトルエン、塩化メチレン、１，２−ジクロロエタンを挙げることができる。また、これらの溶媒は、単独又は組み合わせて使用することもできる。溶媒の使用量は特に制限されないが、フェニルエタノール（XII）又は（XII´）に対して、１〜１０倍量（Ｖ／Ｗ）、好ましくは２〜４倍量（Ｖ／Ｗ）を用いればよい。

反応温度は、通常−５０〜１５０℃の範囲で行えばよく、−２０〜８０℃がより好ましく、０〜３０℃が特に好ましい。反応時間は、通常５分〜４８時間が好ましく、３０分〜３６時間がより好ましく、１〜２時間が特に好ましい。

（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物は、下記の実施例に具体的に示すように、ＰＣＳＫ９ｍＲＮＡ発現抑制作用を有し、また、ＰＣＳＫ９タンパク量の低下作用及びＬＤＬ受容体量の増加作用を有し、生体内において血中ＬＤＬコレステロールを低下させる作用を有する。

本発明は下記推察に何ら拘束されるものではないが、（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物は、ＰＣＳＫ９タンパクの産生を抑制することにより、ＬＤＬ受容体の分解を抑制し、ＬＤＬ受容体の量の増加させる結果、血中ＬＤＬコレステロールのＬＤＬ受容体への取り込みを促進する。そして、斯かる血中ＬＤＬコレステロールのＬＤＬ受容体への取り込みの促進が、血中ＬＤＬコレステロール値の低下作用を発揮させる要因の一つとなっているものと推察される。

従って、（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有する医薬や医薬組成物は、高ＬＤＬ血症のほか、脂質異常症（高脂血症）、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、高コレステロール血症、家族性高コレステロール血症、心臓血管障害、狭心症、虚血、心虚血、血栓症、心筋梗塞、再灌流障害、血管形成性再狭窄、又は高血圧等の疾患の予防及び／又は治療のための医薬として用いることができる。

また、ＰＣＳＫ９が属するプロタンパク質コンバターゼ(ＰＣｓ)は、癌、肥満、糖尿病、アルツハイマー病、又はウイルス感染症においての発症、進行、及び悪化などに関与する酵素であることが知られていることから、（Ｓ）体化合物（III）、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含有する医薬や医薬組成物は上記のＰＣｓが関与する疾患に対する予防及び／又は治療のための医薬としての利用も期待できる。

一方、ラセミ体化合物（Ｉ）、及び特許文献２実施例４４記載の化合物（ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸）は下記の実施例に具体的に示すようにＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素ｍＲＮＡ発現抑制作用を有している。従って、ラセミ体化合物（Ｉ）、特許文献２実施例４４記載の化合物若しくはそれらのエナンチオマー、若しくはそれらの塩、又はそれらの溶媒和物は、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素ｍＲＮＡ発現に起因する疾患（例えば、Ｒａｓ、Ｒｈｏ、Ｒａｃといった種々の蛋白質の翻訳後脂質修飾を行うイソプレノイド（ファルネシルピロリン酸、ゲラニルゲラニルピロリン酸等）の産生に伴う疾患。具体的には例えば、炎症、癌、アルツハイマー病、骨粗鬆症、前立腺肥大、糸球体疾患、寄生虫感染、ウイルス感染、乾癬、黄斑変性など。）に対する予防及び／又は治療のための医薬としての利用も期待できる。

本発明の医薬としては上記の有効成分自体を投与してもよいが、好ましくは、当業者に周知の方法によって製造可能な経口用あるいは非経口用の医薬組成物として投与することができる。経口投与に適する医薬用組成物としては、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、及びシロップ剤等を挙げることができ、非経口投与に適する医薬組成物としては、例えば、静脈内注射剤や筋肉内注射剤などの注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、点眼剤、点鼻剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。

上記の医薬組成物は、薬理学的、製剤学的に許容しうる添加物を加えて製造することができる。薬理学的、製剤学的に許容しうる添加物の例としては、例えば、賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、矯味剤、香料、被膜剤、希釈剤などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。

本発明の医薬の投与量は特に限定されず、疾患の種類、予防又は治療の目的、有効成分の種類などに応じて適宜選択することができ、さらに患者の体重や年齢、症状、投与経路など通常考慮すべき種々の要因に応じて、適宜増減することができる。例えば、経口投与の場合には成人一日あたり有効成分の重量として０．１〜５００ｍｇ程度の範囲で用いることができるが、投与量は当業者に適宜選択可能であり、上記の範囲に限定されることはない。

次に、実施例を挙げて本発明を更に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。なお、下記実施例中で用いられている略号は下記の意味を示す。
ｓ：シングレット（ｓｉｎｇｌｅｔ）
ｄ：ダブレット（ｄｏｕｂｌｅｔ）
ｔ：トリプレット（ｔｒｉｐｌｅｔ）
ｑ：クアルテット（ｑｕａｒｔｅｔ）
ｍ：マルチプレット（ｍｕｌｔｉｐｌｅｔ）
ｂｒ：ブロード（ｂｒｏａｄ）
Ｊ：カップリング定数（ｃｏｕｐｌｉｎｇｃｏｎｓｔａｎｔ）
Ｈｚ：ヘルツ（Ｈｅｒｔｚ）
ＣＤＣｌ₃：重クロロホルム
¹Ｈ-ＮＭＲ：プロトン核磁気共鳴
ＩＲ：赤外線吸収スペクトル

実施例１：実質的に光学的に純粋な（Ｓ）体化合物（III）の製造方法の確立
実施例１−１：キラルカラムを用いた光学分割
下記条件であれば、特許文献２（国際公開第２００８／１２９９５１号パンフレット）実施例４５に記載の方法に従って製造したラセミ体化合物（Ｉ）からの各エナンチオマーの分離が可能であり、キラルＨＰＬＣ分析法による（Ｓ）体化合物（III）及び（Ｒ）体化合物（II）の光学純度の測定に用いることができることが明らかとなった。なお、本発明は、下記キラルＨＰＬＣ分析条件（特に、下記カラムと下記移動相の組合せ）を用いる、ラセミ体化合物（Ｉ）、（Ｓ）体化合物（III）若しくは（Ｒ）体化合物（II）、若しくはそれらの塩、又はそれらの溶媒和物の光学純度測定方法を提供する。

カラム：ＣＨＩＲＡＬＣＥＬＯＤ‐Ｈ
移動相：ヘキサン／エタノール／ＴＦＡ＝９０／１０／０．１
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
検出波長：２４２ｎｍ
保持時間：第一ピーク／２１．３ｍｉｎ（（Ｒ）体）、第二ピーク／２３．７ｍｉｎ（（Ｓ）体）

しかしながら、上記条件に係る移動相の溶媒にはエタノールとトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）が含まれているため、ラセミ体化合物（Ｉ）及び／又は各エナンチオマーのカルボン酸と反応して分解物（エチルエステル体）が生じることが判明した。
従って、上記条件でのキラルカラムを用いた光学分割法は光学純度の測定（キラルＨＰＬＣ分析）には用いることができるものの、実質的に光学的に純粋な各エナンチオマーの製造方法、特に大量スケールでの製造方法としては不適切なものであった。

実施例１−２：優先晶析法による、実質的に光学的に純粋な（Ｓ）体化合物（III）の製造
本発明者らが実施した、優先晶析法による実質的に光学的に純粋な（Ｓ）体化合物（III）の製造方法の概略をスキーム５として以下に示す。
なお、各化合物の絶対配置は、工程１で確認された（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンの絶対配置から判断した。

また、工程６で得られた（Ｓ）体化合物（III）（（Ｓ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸）の光学純度は、上記１−１に記載の条件によるキラルＨＰＬＣ分析により決定した。

さらに、工程１で得られた１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタン、工程４及び５で得られたｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルの光学純度は、それぞれ下記条件によるキラルＨＰＬＣ分析により決定した。なお、本発明は、下記キラルＨＰＬＣ分析条件（特に、下記カラムと下記移動相の組合せ）を用いる、各化合物、若しくはそれらの塩、又はそれらの溶媒和物の光学純度測定方法を提供する。

１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンのキラルＨＰＬＣ分析条件
カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫＡＳ−ＲＨ
移動相：エタノール／水＝６０／４０
流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：２５℃
検出波長：２２０ｎｍ
保持時間：第一ピーク／２１．８ｍｉｎ（（Ｒ）体）、第二ピーク／２６．０ｍｉｎ（（Ｓ）体）

ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルのキラルＨＰＬＣ分析条件
カラム：ＣＨＩＲＡＬＣＥＬＯＤ−Ｈ
移動相：ヘキサン／エタノール＝８０／２０
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
検出波長：２４２ｎｍ
保持時間：第一ピーク／１１．３ｍｉｎ（（Ｒ）体）、第二ピーク／１３．０ｍｉｎ（（Ｓ）体）

スキーム５

（スキーム図中、Ｅｔはエチル基を示し、Ｂｎはベンジル基を示す。）

工程１：（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンの製造
（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンを下記１−（ａ）の方法により製造し、その絶対配置を以下の通り確認した。すなわち、得られた（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンを（Ｓ）−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチルアミンに導いたうえで、市販されている絶対配置既知の（Ｓ）−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチルアミンの標準品と比旋光度の実測値の符号を比較することで確認した。
また、（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンを別途下記１−（ｂ）の方法によっても製造した。

１−（ａ）：（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンの製造その１
アルゴン雰囲気下、１，２−ジブロモ−１，１，２，２−テトラクロロエタン（７．５７ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）をトルエン（１２．５ｍＬ）に溶解し、０℃にてトリフェニルホスフィン（６．１ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）を加え３０分間撹拌した。これに（Ｓ）−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタノール（１）（５．０ｇ、１９．４ｍｍｏｌ、＞９９．５％ｅｅ）のトルエン溶液（１２．５ｍＬ）を０℃で１０分以上かけて滴下した後、室温まで昇温し、同温にて１時間撹拌した。反応液にｎ−ヘキサン（２５ｍＬ）を加え、セライトろ過した。ろ液を水、飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧留去した。得られた残渣を減圧蒸留（５６oＣ、０．７ｍｍＨｇ）することで、５．５２ｇの（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタン（２）を無色油状物として得た（収率：８８．６％）。

キラルＨＰＬＣ分析：光学純度＞９９．５％ｅｅ（メインピーク：第一ピーク）、転化率≧９９％
［α］_D ²⁵ ＋５９．１（ｃ＝１．０３，ＣＨＣｌ₃）
¹Ｈ‐ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ: ２．０８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），５．２１（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），７．８１（１Ｈ，ｓ），７．８７（２Ｈ，ｓ）

（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンの絶対配置の確認
上記１−（ａ）で得られた（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタン（２）（１０６ｍｇ、０．３３６ｍｍｏｌ、９９％ｅｅ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（１ｍＬ）にアジ化ナトリウム（６４．４ｍｇ、０．９９０ｍｍｏｌ）を加え−１８〜−１５℃にて４時間撹拌した。反応溶液を酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（１：１）及び水より抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮することで１１１．５ｍｇの１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチルアジド（粗生成物：１１１．５ｍｇ）を得た。

¹Ｈ‐ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ：１．６１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），４．７９（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．７８（２Ｈ，ｓ），７．８４（１Ｈ，ｓ）

得られた１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチルアジド（粗生成物：１１１．５ｍｇ）をメタノール（６ｍＬ）に溶解し、パラジウム−フィブロイン（１８ｍｇ）を加え水素置換し、室温で１時間撹拌した。セライトろ過し、ろ液を減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝５０：１〜５：１）にて精製し、７７．６ｍｇの１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチルアミンを無色油状物として得た（収率：９１％、２工程）。

¹Ｈ‐ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ：１．４２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．５８（２Ｈ，ｂｒ‐ｓ），４．３０（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．７５（１Ｈ，ｓ），７．８５（２Ｈ，ｓ）

得られた１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチルアミンの比旋光度は以下の通りであった。
［α］_D ²⁵ −１５．９（ｃ＝１．３１，ＣＨＣｌ₃）

一方、市販の標準品（（Ｓ）−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチルアミン（セントラル硝子社製：Ｌｏｔ．０１０２０００：光学純度：９９％ｅｅ））の比旋光度は以下の通りであった。
［α］_D ²⁵ −１５．９（ｃ＝１．１５，ＣＨＣｌ₃）

比旋光度の実測値の符号が、市販の標準品の符号と一致したことから、得られた１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチルアミンは（Ｓ）体であることが確認された。そして、当該アミンはアジ化物イオンの求核置換反応を経て１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンから得られていることから、上記１−（ａ）で得られた１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンは（Ｒ）体であることが確認された。

１−（ｂ）：（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンの製造その２
アルゴン雰囲気下、（Ｓ）−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタノール（１）（３００ｇ、１．１６ｍｏｌ、９６％ｅｅ）に水浴下、２０℃以下で三臭化リン（１５７．３ｇ、０．５８ｍｏｌ）を滴下し、１９〜２２℃で３０分撹拌した。反応液を冷却し、０℃以下で臭化水素（３０％酢酸溶液）（２２８ｍＬ、１．１６ｍｏｌ）を滴下し、１３〜１５℃で１６時間撹拌した。反応液を氷水に注加し、ｎ−ヘキサン（３Ｌ×２）で抽出した。有機層を合わせ、飽和重曹水（３Ｌ）、飽和食塩水（３Ｌ）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下（９０〜１００ｍｍＨｇ）濃縮し、３８９．２ｇの粗体を得た。得られた粗体をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル９００ｇ、展開溶媒：ｎ−ヘキサン）で精製することにより、３４９．８ｇの（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタン（２）を無色油状物として得た（収率９３．８％）。

なお、下記の通りキラルＨＰＬＣ分析において、第一ピークがメインピークとして現れたことから、１−（ｂ）で製造した１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンも１−（ａ）と同様に、（Ｒ）体であることが確認された。

キラルＨＰＬＣ分析：光学純度＞９３．９％ｅｅ（メインピーク：第一ピーク）、転化率９７．８％
¹Ｈ‐ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ: ２．０８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），５．２１（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），７．８１（１Ｈ，ｓ），７．８７（２Ｈ，ｓ）

工程２：ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸の、（Ｓ）体優位のセミキラル体の製造
アルゴン雰囲気下、特許文献２（国際公開第２００８／１２９９５１号パンフレット）記載の方法により合成したｔｒａｎｓ−［４−（［（エチル）｛２−［（｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝アミノ］メチル）シクロヘキシル］酢酸エチル（３）（５６５．４ｇ、０．９９ｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、２．２６Ｌ）溶液に氷冷下、水素化ナトリウム（６０％ｉｎｏｉｌ、１１９ｇ、２．９８ｍｏｌ）を加え、室温にて１時間撹拌した。反応液を−３０℃に冷却し、工程１で得られた（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタン（２）（６８２ｇ、１．９９ｍｏｌ、９３．９％ｅｅ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４．５３Ｌ）溶液を反応系内が−１５℃以下となるように滴下し、−１５℃〜−１℃で５時間撹拌した。反応液を氷水（３５Ｌ）とトルエン（３０Ｌ）の混合溶液に注加し、ｐＨが６．９になるまでクエン酸を加え、有機層を分離した。

水層をトルエン（２０Ｌ）で２回抽出し、有機層を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、粗体を得た。粗体をエタノール（８Ｌ）に溶解させ、氷冷下２ＭＮａＯＨ水溶液（１．２４Ｌ、２．４８ｍｏｌ）を加え、５０℃にて３．５時間撹拌した。反応液に氷冷下、ｐＨ５．４になるまで１ＭＨＣｌ水溶液を加え、水（２５Ｌ）に注ぎ、酢酸エチル（２２Ｌ）で２回抽出した。有機層を飽和食塩水（１２Ｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２１ｇ、展開溶媒：ヘプタン／アセトン＝７／１→３／１）で精製することによりｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸のセミキラル体（４）を得た（黄色油状物、７４４．１ｇ、収率９６％）。

なお、上記工程１に記載の通り絶対配置が確認された（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタン（２）を原料として使用し、アミン（３）による求核置換反応が進行していることから、得られたセミキラル体（４）は（Ｓ）体が優位である。

¹Ｈ‐ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ: ０．８５‐０．９６（７Ｈ，ｍ），１．３５‐１．４５（４Ｈ，ｍ），１．６０‐１．７８（５Ｈ，ｍ），２．１８‐２．２１（５Ｈ，ｍ），２．６９（１Ｈ，ｍ），２．８１‐２．９１（５Ｈ，ｍ），４．１６（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），４．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ），４．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ），６．２２（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．２３（１Ｈ，ｓ），７．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．７０（１Ｈ，ｓ），７．７３（２Ｈ，ｓ），８．１４（２Ｈ，ｓ）

工程３：ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルの、（Ｓ）体優位のセミキラル体の製造
アルゴン雰囲気下、工程２で得られたｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸の、（Ｓ）体優位のセミキラル体（４）（７４４．１ｇ、０．９５ｍｏｌ）の無水ジクロロエタン（１１．６Ｌ）溶液に、氷冷下、ベンジルアルコール（１１３．１ｇ、１．０５ｍｏｌ）、ＷＳＣ・ＨＣｌ（２００．５ｇ、１．０５mol）及びＤＭＡＰ（１１．９ｇ、９８ｍｍｏｌ）を加え、室温で終夜撹拌した。反応液に水（１０Ｌ）を加え、クロロホルム（１９Ｌ、１４Ｌ）にて抽出し、有機層を飽和食塩水（１２Ｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２８ｇ、展開溶媒：ヘプタン／酢酸エチル＝６／１）で精製することにより、ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルのセミキラル体（５）を得た（黄色油状物、７４５．８ｇ、収率９０％）。
なお、得られたセミキラル体（５）は、セミキラル体（４）と同様（Ｓ）体が優位である。

¹Ｈ‐ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ: ０．８７‐０．９５（７Ｈ，ｍ），１．３７（１Ｈ．ｍ），１．４３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．６５‐１．７７（５Ｈ，ｍ），２．２０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．２２（３Ｈ，ｓ），２．６６‐２．７１（２Ｈ，ｍ），２．８２‐２．９１（４Ｈ，ｍ），４．１５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），４．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ），４．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ），５．１０（２Ｈ，ｓ），６．２１（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），７．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．２２（１Ｈ，ｓ），７．２８‐７．３８（６Ｈ，ｍ），７．７０（１Ｈ，ｓ），７．７３（２Ｈ，ｓ），８．１４（２Ｈ，ｓ）

工程４：ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルの、（Ｓ）体優位のセミキラル体の製造
アルゴン雰囲気下、工程３で得られたｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルの、（Ｓ）体優位のセミキラル体（５）（７４５．８ｇ、０．８７ｍｏｌ）の２−プロパノール（１５．２Ｌ）溶液に、五塩化タンタル（３１．３ｇ、８７．３ｍｍｏｌ）及び３０％過酸化水素水（４９６ｍＬ、４．３８ｍｏｌ）を加え、室温にて５時間撹拌した。反応液を飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液（３．１Ｌ）でクエンチし、水（１５Ｌ）を加え、クロロホルム（１４Ｌ、１２Ｌ）で抽出し、有機層を飽和食塩水（２０Ｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル２６ｋｇ、展開溶媒：ヘプタン／酢酸エチル＝３／１→２／１）で精製することにより、ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルのセミキラル体（６）を得た（黄色アモルファス、６１９．５ｇ、収率７９％）。
なお、得られたセミキラル体（６）は、セミキラル体（４）及びセミキラル体（５）と同様、（Ｓ）体が優位である。

キラルＨＰＬＣ分析：光学純度６７．７％ｅｅ（メインピーク：第二ピーク）
¹Ｈ‐ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ：０．８７‐０．９６（７Ｈ，ｍ），１．３８（１Ｈ．ｍ），１．４５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．６５‐１．８０（５Ｈ，ｍ），２．２１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），２．６９（１Ｈ，ｍ），２．８１‐２．９１（３Ｈ，ｍ），３．０８（３Ｈ，ｓ），３．４４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），４．４４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），４．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ），４．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．３Ｈｚ），５．１０（２Ｈ，ｓ），６．１９（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），７．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．１９（１Ｈ，ｓ），７．３０‐７．３９（６Ｈ，ｍ），７．７１（１Ｈ，ｓ），７．７２（２Ｈ，ｓ），８．１６（２Ｈ，ｓ）

工程５：実質的に光学的に純粋な（Ｓ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルの製造
工程４で得られたｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルの、（Ｓ）体優位のセミキラル体（６）（１１１．７ｇ、１２３．７ｍｍｏｌ、６７．７％ｅｅ）をエタノール（８２５ｍＬ）に溶解し、別途調製した種晶（下記工程７で製造したラセミ体結晶）２．０ｍｇを１５℃〜２０℃にて加え、同温にて２１時間、０℃にて３時間撹拌した。析出物をろ別し、冷エタノール（１６５ｍＬ）で洗浄した後、母液を減圧濃縮することにより、実質的に光学的に純粋なｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステル（７）を得た（黄色アモルファス、６６．３８ｇ、収率５９％）。

なお、得られたｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステル（７）は、（Ｓ）体優位のセミキラル体（６）からラセミ体優位の結晶をろ別して得られていることから、（Ｓ）体である。

キラルＨＰＬＣ分析：光学純度＞９９％ｅｅ（メインピーク：第二ピーク）
［α］_D ²⁰−４２.３６（ｃ＝１．０ｗ／ｖ％，ＣＨＣｌ₃）
なお、ろ別したラセミ体優位の結晶の光学純度は、キラルＨＰＬＣ分析の結果、２２％ｅｅであった（４３．３９ｇ、収率３９％）。

工程６：実質的に光学的に純粋な（Ｓ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸の製造
窒素雰囲気下、工程５で得られた（Ｓ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステル（７）（３４．２ｇ、３７．８８ｍｍｏｌ、＞９９％ｅｅ）のエタノール（３４０ｍＬ）溶液に、１０％Ｐｄ−Ｃ（ｗｅｔ）（３．４ｇ）を加え、水素置換後、室温にて２時間撹拌した。反応懸濁液をセライトろ過し、セライトをエタノール（５０ｍＬ）で洗浄し、洗液を減圧濃縮することにより、実質的に光学的に純粋なｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸（III）を得た（白色アモルファス、３１．７８ｇ、収率１００％）。
なお、得られた化合物は、下記比旋光度に示す通り、左旋性の化合物であった。また、得られた化合物は、（Ｓ）体であるベンジルエステル（７）よりエステルを脱保護して得られたことから、同様に（Ｓ）体である。

キラルＨＰＬＣ分析：光学純度＞９９％ｅｅ（メインピーク：第二ピーク）
［α］_D ²⁰−４６．６８ (ｃ＝１．０，ＣＨＣｌ₃)
ＩＲ（ＡＴＲ）ｃｍ^-1：２９２１,１７０６,１４７９,１２７９,１１３４
¹Ｈ‐ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ：０．８０‐０．９６（７Ｈ，ｍ），１．３８（１Ｈ．ｍ），１．４７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．６５‐１．７７（５Ｈ，ｍ），２．１９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．７２（１Ｈ，ｍ），２．８１‐２．９１（３Ｈ，ｍ），３．０８（３Ｈ，ｓ），３．４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），４．４４（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），４．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ），４．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．４Ｈｚ），６．２１（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），７．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．１９（１Ｈ，ｓ），７．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），７．７１（１Ｈ，ｓ），７．７３（２Ｈ，ｓ），８．１５（２Ｈ，ｓ）

工程７：ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルのラセミ体種晶の製造
特許文献２（国際公開第２００８／１２９９５１号パンフレット）実施例４５記載の方法により合成したｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸（ラセミ体化合物（Ｉ））（２０ｇ、２４．６１ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（２００ｍL）溶液に、氷冷下、ベンジルアルコール（２．９３ｇ、２７．０７ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（３００ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ）及びＷＳＣ・ＨＣｌ（５．１９ｇ、２７．０７ｍｍｏｌ）を加え、室温に昇温し、１６時間撹拌した。反応液に水（１００ｍＬ）を加え、クロロホルム（５００ｍＬ）で抽出し、有機層を２Ｍ塩酸水溶液（１００ｍＬ）及び飽和食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル３５０ｇ、展開溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝３／１→１／１）で精製することにより、ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステル（２１．１５ｇ、収率９５．２％）を白色アモルファスとして得た。

得られた白色アモルファスのｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステル（７．９ｇ）をエタノール（４０ｍＬ）に溶解し、室温で１５時間撹拌することにより得られた析出物をろ取し、冷エタノール（２０ｍＬ）で洗浄し、６０℃で４時間減圧乾燥することにより、ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルのラセミ体結晶（白色結晶性粉末、６．９８ｇ、回収率８８．４％）を得た。

実施例２：（Ｓ）体化合物（III）がＰＣＳＫ９タンパク量、ＬＤＬ受容体量に及ぼす影響の確認
ヒト肝癌細胞株であるＨｅｐＧ２細胞に被験化合物を添加し、４８時間培養後のＰＣＳＫ９タンパク量及びＬＤＬ受容体（ＬＤＬＲ）量をウエスタンブロット法にて測定することにより、被験化合物がＰＣＳＫ９タンパク量、ＬＤＬ受容体量に及ぼす影響を確認した。

すなわち、ＨｅｐＧ２細胞を６穴プレートに５×１０⁵ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度で播種し一晩培養した後、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した被験化合物、又はＤＭＳＯのみを培養液に対して１０００分の１倍量加えた。細胞をＣＯ₂ インキュベーターにて３７℃で４８時間培養した後、ＲＩＰＡ緩衝液（５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．８、１５０ｍＭＮａＣｌ、１％ＮＰ−４０、０．５％ｓｏｄｉｕｍｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅ、０．１％ＳＤＳ、ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）を１００μＬ加えて破砕して、タンパク質を抽出した。抽出したタンパク質を１００００×ｇで遠心後、上清を回収し、ＳＤＳサンプル緩衝液（６０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ６．８、２％ＳＤＳ、１０％Ｇｌｙｃｅｒｏｌ、３％メルカプトエタノール）を加え、８％アクリルアミドゲルを用いたＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法）で分離した。分離終了後、ｉＢｌｏｔゲルトランスファーシステム（インビトロジェン社）を用いてニトロセルロースメンブレンにタンパク質を固定し、ブロックエース（ＤＳファーマバイオメディカル社、カタログ番号ＵＫ−Ｂ８０）を用いてブロッキングを行った。

ＰＣＳＫ９タンパク、ＬＤＬＲ、β−Ａｃｔｉｎタンパクの検出及び量の測定は、それぞれ1次抗体にＡｎｔｉ−ＰＣＳＫ９（Ｃａｙｍａｎ社、カタログ番号１０００７１８）、Ａｎｔｉ−ＬＤＬＲ（ＢｉｏＶｉｓｉｏｎ社、カタログ番号３８３９−１００）又はＡｎｔｉ−β−Ａｃｔｉｎ（Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ａ５３１６）を用い、２次抗体にＡｎｔｉ−ＲａｂｂｉｔＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｓｉｇｍａ社、カタログ番号Ａ０５４５）又はＡｎｔｉ−ＭｏｕｓｅＩｇＧ−ＨＲＰ（Ｓｉｇｍａ社、カタログ番Ａ４４１６）を用いてメンブレン上のタンパク質を抗体で標識し、化学発光試薬（ＨＲＰの基質）をメンブレン上の２次抗体と反応させた後、ルミノ・イメージアナライザーＬＡＳ‐３０００（富士写真フィルム株式会社製）を用いてシグナル強度を測定することにより行なった。得られたシグナル強度は、画像解析ソフトＳｃｉｅｎｃｅＬａｂ２００２ＭｕｌｔｉＧａｕｇｅ(富士写真フィルム株式会社製)を用いて数値化した。

得られたＰＣＳＫ９タンパク量及びＬＤＬ受容体量の測定値を、各被験化合物添加サンプル及びコントロールサンプル（ＤＭＳＯのみ添加サンプル）の間でβ−Ａｃｔｉｎタンパク量を指標として補正した。補正後の各被験化合物添加サンプルのＰＣＳＫ９タンパク量及びＬＤＬ受容体量を、コントロールサンプルのＰＣＳＫ９タンパク量及びＬＤＬ受容体量をそれぞれ１とした場合の相対値として表現した。
結果を表１に示す。

なお、被験化合物としては、以下のものを使用した。
１：（Ｓ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸（（Ｓ）体化合物（III））
（Ｓ）体化合物（III）（光学純度＞９９％ｅｅ）を終濃度１０μＭとして培養液に添加した。

２：（Ｒ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸（（Ｒ）体化合物（II））
（Ｒ）体化合物（II）（光学純度≧９８％ｅｅ）を終濃度１０μＭとして培養液に添加した。

３：ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸（ラセミ体化合物（Ｉ））
ラセミ体化合物（Ｉ）を終濃度１０μＭとして培養液に添加した。

表１に記載の結果から明らかなとおり、コントロールとの比較において（Ｓ）体化合物（III）はＰＣＳＫ９タンパク量を顕著に低下させ、ＬＤＬ受容体量を顕著に増加させたにも拘わらず、（Ｒ）体化合物（II）及びラセミ体化合物（Ｉ）においては斯かる作用は殆ど見られなかった。特に、ＬＤＬ受容体量については、コントロールとの比較において（Ｓ）体化合物（III）のみが顕著に増加させた。
以上の試験結果から、（Ｓ）体化合物（III）は、ＰＣＳＫ９タンパク量の低下作用、ＬＤＬ受容体量の増加作用を有することが明らかとなった。

なお、本発明は以下の推察に何ら拘束されるものではないが、ラセミ体化合物（Ｉ）はおよそ５０％の（Ｓ）体化合物（III）を含むものであるにも拘わらずＰＣＳＫ９タンパク量の低下作用を殆ど示さず、また、ＬＤＬ受容体量の増加作用を全く示さなかったことから、ラセミ体化合物（Ｉ）においては、その構成成分である（Ｒ）体化合物（II）が（Ｓ）体化合物（III）の作用発現を阻害しているものと推察された。そして、（Ｒ）体化合物（II）の含有量を減らすことにより（Ｓ）体化合物（III）の光学純度を高くすることが、特にＬＤＬ受容体量の増加作用を高めるうえで好ましいものと推察された。

実施例３：（Ｓ）化合物（III）がＰＣＳＫ９ｍＲＮＡ発現に及ぼす影響の確認
上記実施例２で確認されたＰＣＳＫ９タンパク量の低下作用のメカニズムを確認するため、ＨｅｐＧ２細胞に被験化合物を添加し、２４時間培養した後のＰＣＳＫ９ｍＲＮＡ発現量を定量リアルタイムＰＣＲ法により確認した。

すなわち、ＨｅｐＧ２細胞を２４穴プレートに２×１０⁵ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度で播種して一晩培養した後、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解した被験化合物、又はＤＭＳＯのみを培養液に対して１０００分の１倍量加えた。細胞をＣＯ₂インキュベーターにて３７℃で２４時間培養した後、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社、カタログ番号３１‐０２５０１）を５００μＬ加えてｔｏｔａｌＲＮＡを抽出した。抽出したｔｏｔａｌＲＮＡからＨｉｇｈＣａｐａｃｉｔｙｃＤＮＡＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｋｉｔ（アプライドバイオシステムズ社、カタログ番号４３６８８１３）を用いてｃＤＮＡを合成した。ヒトＰＣＳＫ９ｍＲＮＡ発現量は、ヒトＰＣＳＫ９に特異的なプライマー（Kourimate S. et.al., J Biol Chem. Vol.283, p9666）及びＦａｓｔＳＹＢＲＧｒｅｅｎｍａｓｔｅｒｍｉｘ（アプライドバイオシステムズ社、カタログ番号４３８５６１４）を用いた定量リアルタイムＰＣＲ法により測定した。測定機器としては７９００ＨＴＦａｓｔＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲｓｙｓｔｅｍを用いた。

得られたＰＣＳＫ９ｍＲＮＡ発現量の測定値を、被験化合物添加サンプル（３サンプル）及びコントロールサンプル（ＤＭＳＯのみ添加サンプル：３サンプル）の間でβ-ＡｃｔｉｎｍＲＮＡの発現量を指標に補正した。補正後の被験化合物添加サンプルのＰＣＳＫ９ｍＲＮＡ発現量を、コントロールサンプルのＰＣＳＫ９ｍＲＮＡ発現量の平均値を１とした場合の相対値（平均値±標準誤差）として表現した。結果を表２に示す。

表２に記載の結果から、コントロールとの比較において、（Ｓ）体化合物（III）がＰＣＳＫ９ｍＲＮＡの発現量を顕著に低下させることが明らかとなった。
従って、実施例２で確認された、（Ｓ）体化合物（III）の有するＰＣＳＫ９タンパク量の低下作用の少なくとも一部はＰＣＳＫ９遺伝子発現抑制作用に基づくものであり、（Ｓ）体化合物（III）はＰＣＳＫ９タンパクの産生抑制作用を有するものと考えられた。

実施例４：（Ｓ）体化合物（III）の血中ＬＤＬコレステロール低下作用の検討
（Ｓ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸（（Ｓ）体化合物（III）：光学純度＞９９％ｅｅ）を０．５％メチルセルロース溶液に懸濁させた後、正常ハムスター（雄性ＳｙｒｉａｎＨａｍｓｔｅｒ）に金属ゾンデを用いて１日１回、１４日間反復経口投与した。最終投与の４時間後に血液を採取し、血漿を得た。血漿中のリポタンパク質の分析は、J. Lipid. Res., 43, p805- 814に記載の方法に準じ、ポストラベル法を用いたＨＰＬＣシステムにより自動測定することで行なった。すなわち、血漿サンプル１５μＬを１ｍＭＥＤＴＡを含むＰＢＳで１０倍希釈後、ＨＰＬＣシステム（送液ユニット：ＳｈｉｍａｄｚｕＬＣ‐２０Ａｓｙｓｔｅｍ、島津製作所）に接続したゲルろ過カラム（Ｓｕｐｅｒｏｓｅ６カラム（カラムサイズ：１０×３００ｍｍ）、ＧＥヘルスケアバイオサイエンス製）に８０μＬ注入した。ランニングバッファとして１ｍＭＥＤＴＡを含むＰＢＳを用い、流速０．５ｍＬ／ｍｉｎ、カラム温度４０℃にて分離を行なった。カラムからの溶出液に対しコレステロール測定試薬（コレステロールＥテストワコー、和光純薬工業社製）を流速０．２５ｍＬ／ｍｉｎで混合し、反応コイル（０．５ｍｍ×１５ｍ）中にて送液下４０℃にて反応させた。反応コイルからの溶出液中のコレステロールを、波長６００ｎｍで検出した。得られたコレステロールのピーク総面積に占めるＬＤＬ画分の面積割合を求め、あらかじめコレステロールＥテストワコーを用いて測定した総コレステロール量に、ＬＤＬ画分の面積割合を乗じてＬＤＬコレステロール量を算出した。

なお、コントロール群（０．５％メチルセルロース溶液投与群）、被験化合物投与群（（Ｓ）体化合物（III）１０ｍｇ／ｋｇ体重、３０ｍｇ／ｋｇ体重投与群）それぞれにつき、あらかじめ血漿総コレステロール値を指標に群分けした正常ハムスター６匹を用いた。

各群の血漿中のＬＤＬコレステロール量（ＬＤＬ−Ｃ、ｍｇ／ｄｌ）を表３に示す。なお、表３中の＊印及び＊＊＊印は、それぞれコントロール群と被験化合物投与群の間で行なった多群比較検定（Ｄｕｎｎｅｔｔの多重比較検定）の結果、危険率５％以下（ｐ＜０．０５）、及び危険率０．１％以下（ｐ＜０．００１）で優位差があることを示す。また、被験化合物投与群における、コントロール群に対するＬＤＬコレステロール量の低下率を、ＬＤＬコレステロール低下率として下記計算式１により算出し、％で示した。
ＬＤＬコレステロール低下率（％）＝［（コントロール群の平均ＬＤＬコレステロール量−各化合物投与群の平均ＬＤＬコレステロール量）／コントロール群の平均ＬＤＬコレステロール量］×１００（計算式１）

表３に記載の結果から、（Ｓ）体化合物（III）は、優れた血中ＬＤＬコレステロール低下作用を有することが明らかとなった。
以上の試験結果から、（Ｓ）体化合物（III）は、血中ＬＤＬ低下作用を有する医薬の有効成分等として有用であることが明らかとなった。

実施例５：ラセミ体化合物（Ｉ）等がＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素ｍＲＮＡ発現に及ぼす影響の確認
ＨｅｐＧ２細胞に被験化合物を添加し、８時間培養した後のＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素ｍＲＮＡ発現量を定量リアルタイムＰＣＲ法により測定した。
すなわち、ＨｅｐＧ２細胞を２４穴プレートに２×１０⁵ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度で播種し一晩培養した後、ジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)に溶解した被験化合物、又はＤＭＳＯのみを培養液に対して１０００分の１倍量加えた。細胞をＣＯ₂ インキュベーターにて３７℃で８時間培養後、ＩＳＯＧＥＮ（ニッポンジーン社、カタログ番号３１−０２５０１）を５００μＬ加えてｔｏｔａｌＲＮＡを抽出した。抽出したｔｏｔａｌＲＮＡからＨｉｇｈＣａｐａｃｉｔｙｃＤＮＡＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｋｉｔ（アプライドバイオシステムズ社、カタログ番号４３６８８１３）を用いてｃＤＮＡを合成した。ヒトＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素ｍＲＮＡ発現量は、ヒトＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素に特異的な以下のプライマーセット：５'‐ＧＧＴＧＴＴＣＡＡＧＧＡＧＣＡＴＧＣＡＡＡＧ‐３'及び５'‐ＴＧＡＣＡＡＧＡＴＧＴＣＣＴＧＣＴＧＣＣＡ‐３'、並びにＦａｓｔＳＹＢＲＧｒｅｅｎｍａｓｔｅｒｍｉｘ（アプライドバイオシステムズ社、カタログ番号４３８５６１４）を用いた定量リアルタイムＰＣＲ法により測定した。測定機器としては７９００ＨＴＦａｓｔＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲｓｙｓｔｅｍを用いた。

得られたＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素ｍＲＮＡ発現量の測定値を、被験化合物添加サンプル（各化合物につき、それぞれ３サンプル）及びコントロールサンプル（ＤＭＳＯ添加サンプル：３サンプル）の間でβ−ＡｃｔｉｎｍＲＮＡの発現量を指標に補正した。補正後の被験化合物添加サンプルのＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素ｍＲＮＡ発現量を、コントロールのＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素ｍＲＮＡ発現量の平均値を1とした場合の相対値（平均値±標準誤差）として表現した。
結果を表４に示す。

なお、被験化合物としては、以下のものを使用した。
１：ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸（ラセミ体化合物（Ｉ））
ラセミ体化合物（Ｉ）を終濃度１０μＭとして培養液に添加した。

２：ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸（特許文献２実施例４４記載の化合物）
特許文献２実施例４４記載の化合物を終濃度１０μＭとして培養液に添加した。

表４に記載の結果から、コントロールとの比較において、ラセミ体化合物（Ｉ）、及び特許文献２実施例４４記載の化合物がともにＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素ｍＲＮＡの発現量を顕著に低下させることが明らかとなった。

（Ｓ）体化合物（III）は、ＰＣＳＫ９タンパク量の低下作用、ＬＤＬ受容体量の増加作用を有し、また、優れた血中ＬＤＬコレステロール低下作用を示すことから、例えば血中ＬＤＬコレステロールを低下させるための医薬の有効成分等として利用でき、医薬品産業において利用できる。

Claims

実質的に光学的に純粋な（Ｓ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする医薬。
実質的に光学的に純粋なｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸の左旋性のエナンチオマー、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする医薬。
ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸の光学純度が９９％ｅｅ以上である、請求項１又は２記載の医薬。
高ＬＤＬ血症、脂質異常症、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、高コレステロール血症、家族性高コレステロール血症、心臓血管障害、狭心症、虚血、心虚血、血栓症、心筋梗塞、再灌流障害、血管形成性再狭窄及び高血圧から選ばれる疾患の予防及び／又は治療に用いられるものである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬。
実質的に光学的に純粋な（Ｓ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分とする医薬の製造方法であって、下記の一般式（IV）：

（式中、Ｒは置換基を有していてもよいＣ_6-10アリール基又は置換基を有していてもよい５−１０員ヘテロアリール基を示し、ｎは１〜６の整数を示す）で表される化合物の（Ｓ）体優位のセミキラル体から、溶媒中で、ラセミ体優位の結晶を優先晶析で除去することにより、下記の一般式（Ｖ）：

（式中、Ｒ及びｎは前記と同義である）で表される実質的に光学的に純粋な化合物を製造する工程を含む方法。
一般式（Ｖ）で表される化合物から、−(ＣＨ₂)ｎ−Ｒで表される基を除去する工程をさらに含む、請求項５に記載の方法。
下記の一般式（VI）：

（式中、Ｒ及びｎは前記と同義である）で表される化合物の（Ｓ）体優位のセミキラル体を、溶媒中で、酸化剤と反応させて、一般式（IV）で表される化合物の（Ｓ）体優位のセミキラル体を製造する工程をさらに含む、請求項５又は６に記載の方法。
下記の式（VII）：

で表される化合物の（Ｓ）体優位のセミキラル体と、下記の一般式（VIII）：

（式中、Ｒ及びｎは前記と同義である）で表される化合物とを、溶媒中で、触媒の存在下に反応させて、一般式（VI）で表される化合物の（Ｓ）体優位のセミキラル体を製造する工程をさらに含む、請求項７に記載の方法。
下記の一般式（IX）：

（式中、Ｒ¹はＣ_1-6アルキル基を示す）で表される化合物の（Ｓ）体優位のセミキラル体を、溶媒中で、塩基の存在下に加水分解して、式（VII）で表される化合物の（Ｓ）体優位のセミキラル体を製造する工程をさらに含む、請求項８に記載の方法。
下記の一般式（Ｘ）：

（式中、Ｘはハロゲン原子を示す）で表される化合物と、下記の一般式（XI）：

（式中、Ｒ¹は前記と同義である）で表される化合物とを、溶媒中で、塩基の存在下に反応させて、一般式（IX）で表される化合物の（Ｓ）体優位のセミキラル体を製造する工程をさらに含む、請求項９に記載の方法。
（Ｓ）−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタノールを、ハロゲン化剤の存在下でハロゲン化して、一般式（Ｘ）で表される化合物を製造する工程をさらに含む、請求項１０に記載の方法。
医薬が、高ＬＤＬ血症、脂質異常症、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、高コレステロール血症、家族性高コレステロール血症、心臓血管障害、狭心症、虚血、心虚血、血栓症、心筋梗塞、再灌流障害、血管形成性再狭窄及び高血圧から選ばれる疾患の予防及び／又は治療に用いられるものである、請求項５〜１１のいずれか１項に記載の方法。