JP2013199435A - 脂肪性肝障害疾患の治療又は／及び予防剤 - Google Patents

脂肪性肝障害疾患の治療又は／及び予防剤 Download PDF

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Abstract

【課題】脂肪性肝障害疾患の治療又は／及び予防剤を提供すること。
【解決手段】コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、脂肪性肝障害疾患の予防及び／又は治療剤。
【選択図】なし

Description

本発明は、脂肪性肝障害疾患の治療又は／及び予防薬に関する。
脂肪性肝障害とは、肝細胞に中性脂肪が沈着し肝障害をきたす疾患で一般に脂肪肝と呼ばれる。一方、非アルコール性脂肪肝はNAFLD(non-alcoholic fatty liver disease)とも呼ばれ、飲酒歴はないがアルコール性肝障害に類似した肝組織所見を示し、大滴性肝脂肪沈着を特徴とする肝障害を認める症例を示す。さらにNAFLDが重症化し、肝組織で壊死や炎症、線維化を伴う脂肪性肝炎を認める症例を非アルコール性脂肪肝炎（non-alcoholic steatohepatitis、NASH）と呼ぶ。
脂肪肝の原因は、アルコール多飲や蛋白質不足、飢餓に代表される栄養性のもの、グルココルチコイドやタモキシフェン、抗ウイルス薬などに代表される薬剤性のもの、肥満や高脂血症、メタボリックシンドロームなどに代表される代謝性のものがある(非特許文献１)。この非アルコール性脂肪性肝炎は1980年代に提唱されていたものの、ウイルス性肝炎や肝癌に頻度が高い日本では注目を浴びずにいた。しかし、昨今の生活様式の欧米化に伴い日本のNAFLD患者は増加し、患者数は1000万人以上と言われるようになっている。
NAFLDの治療は、疾患の背景にあるメタボリックシンドロームを是正することが目指され、運動療法や食事療法が行われ、NASHへの進展に注意が払われる。しかし、NASHは肝硬変を経て肝癌を発症する可能性があるため、積極的な治療を必要とする。現在NASHに対する確立した治療法が存在しないため、NAFLDと同様、背景に存在するメタボリックシンドロームの是正を目指し、薬物療法が行われているのが現状である(非特許文献２)。このような状況において、脂肪性肝障害の治療薬の開発が望まれている。
CD1DはCD1D抗原をコードする遺伝子である(GenBank登録番号：NM_001766)。CD1D抗原は、脂質抗原を提示し、自己免疫性糖尿病や腫瘍除去の効果を示すNK-T細胞及び微生物感染の活性化を介して自然免疫と獲得免疫を仲介することが知られている。また、NAFLD患者の生検で得られる肝浸潤細胞の機能を解析したところ、CD1Dにより提示される脂質抗原を認識後、サイトカイン産生に続くNK-T細胞の応答で、NAFLDが増悪していることが示されている(非特許文献３)。従って、この遺伝子の発現抑制により、脂肪性肝障害の予防薬としての効果が期待される。
Patatin-like phospholipase domain-containing 3(PNPLA3)はadiponutrinをコードする遺伝子である(GenBank登録番号：NM_025225)。Adiponutrinは膜蛋白質でトリアシルグリセロールリパーゼとアシルグリセロールO-アシルトランスフェラーゼを持つ(非特許文献４)。Adiponutrinは肝脂肪量の増加と正相関することが知られており(非特許文献５)、さらに、脂肪肝患者にはadiponutrinの変異体が高発現し(非特許文献６)、炎症を誘発している脂肪肝患者やNAFLD患者ではPNPLA3の変異体が高発現していることが知られている(非特許文献７、非特許文献８)。従って、この遺伝子の発現抑制により、脂肪性肝障害の治療薬としての効果が期待される。
コレステロールエステル転送タンパク（CETP）は、コレステロールエステルをHDLコレステロールからLDLコレステロールや超低比重リポタンパク質（VLDL）コレステロール等に転送する極めて疎水性の高いタンパクであり、CETPによる転送を阻害することによりHDLコレステロールを増加させることが可能である。このため、CETP阻害剤は、脂質異常症（高脂血症）、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、高LDL血症、低HDL血症、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、家族性高コレステロール血症、心臓血管障害、狭心症、虚血、心虚血、血栓症、心筋梗塞、再灌流障害、血管形成性再狭窄、又は高血圧等の疾患の治療剤として期待されている。この様なCETP活性の阻害する化合物としては、例えば、トルセトラビブ（特許文献３）、アナセトラピブ（特許文献４）、ダルセトラピブ（特許文献５）が知られている。
一方で、CETP阻害剤が、CD1D及びPNPLA3 mRNAの発現を抑制することや、脂肪性肝障害疾患の予防、治療に有用であることは知られていない。
特表2004-505637号公報 国際公開第07/037299号パンフレット 国際公開第00/017164号パンフレット 国際公開第06/014357号パンフレット 国際公開第98/035937号パンフレット
New Engl. J. Med., 346, 1221 (2002) 社団法人日本肝臓学会(2006). NASH・NAFLDの診療ガイド 文光堂出版 Eur. J. Gastroenterol. Hepatol., 21(6): 673 (2009) J. Biol. Chem., 279, 48968 (2004) Diabetologia, 52:1056-1060 (2009) Hepatology, Apr;51(4):1209-17 (2010) Nat. Genet., 40(12): 1461(2008) Nat. Genet., 42(1): 21 (2010)
本発明の課題は、脂肪性肝障害疾患の予防及び／または治療剤を提供することにある。また、本発明の課題はCD1D及び／又はPNPLA3 mRNAの発現を抑制することに起因する脂肪性肝障害疾患の予防及び／または治療剤を提供することにある。
本発明者らは、上記目的を達成するため鋭意研究を続けた結果、CETP阻害剤として知られている、以下の一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物がCD1D及び／又はPNPLA3 mRNAに対し優れた発現抑制作用を有していること、並びにこの物質が、CD1D及び／又はPNPLA3の蛋白産生抑制作用を有することを見出し、その結果としてこの物質が脂肪性肝障害疾患の予防及び治療にも有用であることを見出し、本発明を完成した。
［式（Ｉ）中、R1は、Ｃ1-6アルキルチオＣ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルキルスルフィニルＣ1-6アルキル基又はＣ1-6アルキルスルホニルＣ1-6アルキル基を示し、
R2は、水素原子、又はハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基を示し、
R3は、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基を示し、
R4及びR5は、互いに同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルコキシ基又はシアノ基を示し、
R6は、水素原子、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基又はハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルコキシ基を示し、
式（ＩＩ）中、R7、R8、R9、R10、R11、R12及びR13は、互いに同一又は異なって、水素原子、ヒドロキシ基、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基又はハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルコキシ基を示す。］
すなわち、本発明は、以下に示す発明に関する。
［１］コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、CD1D及び／又はPNPLA3 mRNAの発現抑制剤。
［２］コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、次式（Ｉ）又は（ＩＩ）：
［式（Ｉ）及び（ＩＩ）中、R1〜R13は前記と同じ。］
で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である、［１］に記載の発現抑制剤。
［３］trans−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸、(S)-(-)-trans-｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸及び(R)-(+)-trans-｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸からなる群から選択される少なくとも１つの化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、［１］に記載の発現抑制剤。
［４］（４Ｓ，５Ｒ）−５−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−３−（（４’−フルオロ−５’−イソプロピル−２’−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−２−イル）メチル）−４−メチルオキサゾリジンー２−オン若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、［１］に記載の発現抑制剤。
［５］コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、CD1D及び／又はPNPLA3の蛋白産生抑制剤。
［６］コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、前記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である、［５］に記載の蛋白産生抑制剤。
［７］trans−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸、 (S)-(-)-trans-｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸及び(R)-(+)-trans-｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸からなる群から選択される少なくとも１つの化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、［５］に記載の蛋白産生抑制剤。
［８］（４Ｓ，５Ｒ）−５−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−３−（（４’−フルオロ−５’−イソプロピル−２’−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−２−イル）メチル）−４−メチルオキサゾリジンー２−オン若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、［５］に記載の蛋白産生抑制剤。
［９］コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、脂肪性肝障害疾患の予防及び／又は治療剤。
［１０］コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、前記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である、［９］に記載の脂肪性肝障害疾患の予防及び／又は治療剤。
［１１］trans−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸、(S)-(-)-trans-｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸及び(R)-(+)-trans-｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸からなる群から選択される少なくとも１つの化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、［９］に記載の脂肪性肝障害疾患の予防及び／又は治療剤。
［１２］（４Ｓ，５Ｒ）−５−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−３−（（４’−フルオロ−５’−イソプロピル−２’−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−２−イル）メチル）−４−メチルオキサゾリジンー２−オン若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、［９］に記載の脂肪性肝障害疾患の予防及び／又は治療剤。
［１３］脂肪性肝障害疾患が、アルコール性脂肪肝炎、肝脂肪変性、非アルコール性脂肪肝（NAFLD）、非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）及びライ症候群からなる群から選ばれる少なくとも１種である、［９］に記載の予防及び／又は治療剤。
［１４］CD1D及び／又はPNPLA3 mRNAの発現抑制のための、コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物。
［１５］コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、前記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である、［１４］に記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物。
［１６］CD1D及び／又はPNPLA3の蛋白産生抑制のための、コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物。
［１７］コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、前記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である、［１６］に記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物。
［１８］脂肪性肝障害疾患の予防及び／又は治療のための、コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物。
［１９］コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、前記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である、［１８］に記載の化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物。
［２０］CD1D及び／又はPNPLA3 mRNAの発現抑制剤製造のための、コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の使用。
［２１］コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、前記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である、［２０］に記載の使用。
［２２］CD1D及び／又はPNPLA3の蛋白産生抑制剤製造のための、コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の使用。
［２３］コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、前記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である、［２２］に記載の使用。
［２４］脂肪性肝障害疾患の予防及び／又は治療剤製造のための、コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物の使用。
［２５］コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、前記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である、［２４］に記載の使用。
［２６］コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を投与することを特徴とする、CD1D及び／又はPNPLA3 mRNAの発現抑制方法。
［２７］コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、前記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である、［２６］に記載の発現抑制方法。
［２８］コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を投与することを特徴とする、CD1D及び／又はPNPLA3の蛋白産生抑制方法。
［２９］コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、前記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である、［２８］に記載の蛋白産生抑制方法。
［３０］コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を投与することを特徴とする、脂肪性肝障害疾患の予防及び／又は治療方法。
［３１］コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、前記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である、［３０］に記載の脂肪性肝障害疾患の予防及び／又は治療方法。
一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で示される具体的な化合物として、化合物（ＩＩＩ）［trans−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸］及び（ＩＶ）［（４Ｓ，５Ｒ）−５−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−３−（（４’−フルオロ−５’−イソプロピル−２’−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−２−イル）メチル）−４−メチルオキサゾリジン−２−オン］がより好ましい。
CETP阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物は、後述する実施例に具体的に開示されているとおり、CD1D及びPNPLA3 mRNAに対して強い発現抑制作用を有している。また、これら化合物は、CD1D及びPNPLA3の蛋白産生抑制作用を有することにより、脂肪性肝障害疾患の予防及び／又は治療に有効に用いることができる。
化合物２及びアナセトラピブを添加した細胞のPNPLA3 mRNA発現量の相対値を示す図である［Mean±S.D. (ｎ＝３)、＊：Ｐ＜０．０５（vs コントロール、Dunnettの多重検定）］。
本発明の医薬の有効成分は、CETPを阻害する活性を有する化合物である。この様な化合物としては、前記した特許文献３〜５に記載した化合物の他、WO99/041237号パンフレット、WO00/018721号パンフレット、WO05/097805号パンフレット、WO06/073973号パンフレット、WO08/079427号パンフレット、WO08/129951号パンフレット、WO08/156718号パンフレット、WO09/007259号パンフレット、Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 6, 1951-1954 (1996)、Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 15, 3611-3614 (2005)、Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 17, 2608-2613 (2007)等に記載されている化合物を挙げることができる。好ましくは、一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表され
る化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を挙げることができる。
一般式（Ｉ）で表される化合物は、WO08/129951号パンフレット（実施例４５）に記載
されており、同文献に記載の方法により製造することができる。また、アナセトラピブは、WO06/014357号パンフレット（実施例７３）に記載されており、同文献に記載の方法により製造することができる。
本明細書において、「Ｃ1-6アルキルチオＣ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルキルスルフィニルＣ1-6アルキル基又はＣ1-6アルキルスルホニルＣ1-6アルキル基」における「Ｃ1-6アルキル」は、直鎖又は分岐鎖の炭素数１〜６のアルキルを意味し、好ましくは「Ｃ1-3アルキル」、より好ましくは「メチル又はエチル」である。「Ｃ1−Ｃ6アルキル」としては、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、２−メチルブチル、１−エチルプロピル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、３−メチルペンチル、２−メチルペンチル、１−メチルペンチル、３，３−ジメチルブチル、２，２−ジメチルブチル、１，１−ジメチルブチル、１，２−ジメチルブチル、１，３−ジメチルブチル、２，３−ジメチルブチル、１−エチルブチル、２−エチルブチル等が挙げられる。
本明細書において、「Ｃ1-6アルキルチオＣ1-6アルキル基」の「Ｃ1−Ｃ6アルキルチオ」としては、例えば、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオ、イソプロピルチオ、ｎ−ブチルチオ、イソブチルチオ、ｓｅｃ−ブチルチオ、ｔｅｒｔ−ブチルチオ、ｎ−ペンチルチオ、イソペンチルチオ、ネオペンチルチオ、２−メチルブチルチオ、１−エチルプロピルチオ、ｎ−ヘキシルチオ、イソヘキシルチオ、３−メチルペンチルチオ、２−メチルペンチルチオ、１−メチルペンチルチオ、３，３−ジメチルブチルチオ、２，２−ジメチルブチルチオ、１，１−ジメチルブチルチオ、１，２−ジメチルブチルチオ、１，３−ジメチルブチルチオ、２，３−ジメチルブチルチオ、１−エチルブチルチオ、２−エチルブチルチオ等が挙げられる。
本明細書において、「Ｃ1-6アルキルスルフィニルＣ1-6アルキル基」の「Ｃ1−Ｃ6アルキルスルフィニル」としては、例えば、メチルスルフィニル、エチルスルフィニル、ｎ−プロピルスルフィニル、イソプロピルスルフィニル、ｎ−ブチルスルフィニル、イソブチルスルフィニル、ｓｅｃ−ブチルスルフィニル、ｔｅｒｔ−ブチルスルフィニル、ｎ−ペンチルスルフィニル、イソペンチルスルフィニル、ネオペンチルスルフィニル、２−メチルブチルスルフィニル、１−エチルプロピルスルフィニル、ｎ−ヘキシルスルフィニル、イソヘキシルスルフィニル、３−メチルペンチルスルフィニル、２−メチルペンチルスルフィニル、１−メチルペンチルスルフィニル、３，３−ジメチルブチルスルフィニル、２，２−ジメチルブチルスルフィニル、１，１−ジメチルブチルスルフィニル、１，２−ジメチルブチルスルフィニル、１，３−ジメチルブチルスルフィニル、２，３−ジメチルブチルスルフィニル、１−エチルブチルスルフィニル、２−エチルブチルスルフィニル等が挙げられる。
本明細書において、「Ｃ1-6アルキルスルホニルＣ1-6アルキル基」の「Ｃ1−Ｃ6アルキルスルホニル」としては、例えば、メチルスルホニル、エチルスルホニル、ｎ−プロピルスルホニル、イソプロピルスルホニル、ｎ−ブチルスルホニル、イソブチルスルホニル、ｓｅｃ−ブチルスルホニル、ｔｅｒｔ−ブチルスルホニル、ｎ−ペンチルスルホニル、イソペンチルスルホニル、ネオペンチルスルホニル、２−メチルブチルスルホニル、１−エチルプロピルスルホニル、ｎ−ヘキシルスルホニル、イソヘキシルスルホニル、３−メチルペンチルスルホニル、２−メチルペンチルスルホニル、１−メチルペンチルスルホニル、３，３−ジメチルブチルスルホニル、２，２−ジメチルブチルスルホニル、１，１−ジメチルブチルスルホニル、１，２−ジメチルブチルスルホニル、１，３−ジメチルブチルスルホニル、２，３−ジメチルブチルスルホニル、１−エチルブチルスルホニル、２−エチルブチルスルホニル等が挙げられる。
本明細書において、「ハロゲン原子」としては、例えば、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素が挙げられる。
本明細書において、「ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基」は、ハロゲン原子で置換されていてもよい直鎖又は分岐鎖の炭素数１〜６のアルキル基を意味し、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、２−メチルブチル、１−エチルプロピル、ｎ−ヘキシル、イソヘキシル、トリフルオロメチル、トリクロロメチル、トリフルオロエチル等が挙げられる。好ましくは「ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-3アルキル基」、より好ましくは「ハロゲン原子で置換されていてもよいメチル又はエチル基」である。
本明細書において、「ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルコキシ基」は、ハロゲン原子で置換されていてもよい炭素原子数１〜６の直鎖状又は分岐鎖状のアルコキシ基を意味し、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキシルオキシ、トリフルオロメトキシ、トリフルオロエトキシ等が挙げられる。好ましくは「ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-3アルコキシ基」、より好ましくは「ハロゲン原子で置換されていてもよいメトキシ又はエトキシ基」である。
一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物として、光学的に純粋な異性体又は上記異性体の任意の混合物、ラセミ体、任意の幾何異性体又は幾何異性体の任意の混合物など、任意の立体異性体又はそれらの任意の混合物を使用することができる。
一般式（Ｉ）で表される化合物の立体異性体の例としては、次の一般式（Ｉ−１）及び（Ｉ−２）で表される化合物が挙げられる。
（式中、R1、R2、R3、R4、R5及びR6は前記と同じものを示す。）
一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物には、生体内において代謝されて一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物に変換される化合物、いわゆるプロドラッグもすべて包含される。一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物のプロドラッグを形成可能な基としては、例えば、「プログレス・イン・メディシン（Progress in Medicine）」、ライフサイエンス・メディカ社、1985年、5巻、2157-2161ページに記載されている基や、廣川書店1990年刊「医薬品の開発」第7巻 分子設計163-198ページに記載されている基が挙げられる。
本発明における好ましい化合物としては、例えば、
trans-｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸（化合物１）、
(S)-(-)-trans-｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸（化合物２）、
(R)-(+)-trans-｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸（化合物３）、及び
（４Ｓ，５Ｒ）−５−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−３−（（４’−フルオロ−５’−イソプロピル−２’−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−２−イル）メチル）−４−メチルオキサゾリジンー２−オン（化合物４）
を挙げることができるが、本発明の範囲はこれらの化合物に限定されることはない。
一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物の塩としては、酸付加塩及び塩基付加塩等が挙げられ、医薬として許容される塩であれば特に制限されない。例えば、酸付加塩であれば塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩のような無機酸との酸付加塩；安息香酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、酢酸塩等の有機酸との酸付加塩が挙げられる。また、塩基付加塩であればナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等の金属との塩基付加塩；アンモニア、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、コリジン、ルチジン等のアミン塩；リシン、アルギニン等の有機塩基との塩基付加塩等が挙げられる。
一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物又はその塩の溶媒和物を形成する溶媒としては、水のほか、生理学的に許容される有機溶媒、例えばエタノール、ヘキサン、酢酸エチルなどを挙げることができるが、これらに限定されることはない。本発明の医薬の有効成分としては、例えば、水和物等が挙げられるが、これに限定されるものではない。
一般式（Ｉ）で表される化合物（例：化合物１）の鏡像体である一般式（Ｉ−１）（例：化合物２）又は（Ｉ−２）（例：化合物３）の化合物は、一般式（Ｉ）で表される化合物（例：化合物１）からキラルカラムを用いる方法、あるいは一般式（Ｉ）で表される化合物（例：化合物１）の誘導体より優先晶析法等を用いて分取した後に一般式（Ｉ−１）（例：化合物２）又は（Ｉ−２）（例：化合物３）の化合物に誘導する方法等により製造することができる。
本発明のＣＥＴＰを阻害する活性を有する化合物を含有する医薬は、CD1D及びPNPLA3 mRNAに対して強い発現抑制作用を有しており、脂肪性肝障害疾患の予防及び／又は治療に有効に用いることができる。ＣＥＴＰを阻害する活性を有する化合物、特に一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物を適用可能な脂肪性肝障害疾患としては、より好ましくは、アルコール性脂肪肝炎、肝脂肪変性、非アルコール性脂肪肝（NAFLD）、非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）及びライ症候群等を挙げることができ、特に好ましくは、肝脂肪変性、非アルコール性脂肪肝（NAFLD）及び非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）を挙げることができる。
本発明の医薬は、ＣＥＴＰを阻害する活性を有する化合物、特に上記の一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される化合物、若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む。本発明の医薬としては上記の有効成分自体を投与してもよいが、好ましくは、当業者に周知の方法によって製造可能な経口用あるいは非経口用の医薬組成物として投与することができる。経口投与に適する医薬用組成物としては、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、及びシロップ剤等を挙げることができ、非経口投与に適する医薬組成物としては、例えば、静脈内注射剤や筋肉内注射剤などの注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、点眼剤、点鼻剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。
上記の医薬組成物は、薬理学的、製剤学的に許容しうる添加物を加えて製造することができる。薬理学的、製剤学的に許容しうる添加物の例としては、例えば、賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、分散剤、緩衝剤、保存剤、矯味剤、香料、被膜剤、希釈剤などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。
本発明の医薬の投与量は特に限定されず、疾患の種類、予防又は治療の目的、有効成分の種類などに応じて適宜選択することができ、さらに患者の体重や年齢、症状、投与経路など通常考慮すべき種々の要因に応じて、適宜増減することができる。例えば、経口投与の場合には成人一日あたり本発明に係る化合物の重量として0.1 〜500 mg程度の範囲で用いることができるが、投与量は当業者に適宜選択可能であり、上記の範囲に限定されることはない。
次に、実施例を挙げて本発明を更に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。なお、下記実施例中で用いられている略号は下記の意味を示す。
ｓ：シングレット（ｓｉｎｇｌｅｔ）
ｄ：ダブレット（ｄｏｕｂｌｅｔ）
ｔ：トリプレット（ｔｒｉｐｌｅｔ）
ｑ：クアルテット（ｑｕａｒｔｅｔ）
ｍ：マルチプレット（ｍｕｌｔｉｐｌｅｔ）
ｂｒ：ブロード（ｂｒｏａｄ）
Ｊ：カップリング定数（ｃｏｕｐｌｉｎｇ ｃｏｎｓｔａｎｔ）
Ｈｚ：ヘルツ（Ｈｅｒｔｚ）
ＣＤＣｌ3：重クロロホルム
1Ｈ-ＮＭＲ：プロトン核磁気共鳴
製造例１
化合物１は、国際公開第2008/129951号パンフレットの実施例４５に開示されている方法に従って製造したものを使用した。また、化合物１の両鏡像体である化合物２及び化合物３は、化合物１を下記条件のキラルカラムを用いる分取により単離したものを使用した。
Column: CHIRALCEL OD-H(4.6×250mm)
Flow rate: 1.0mL/min
Detector: UV242nm
Temp.: 40℃
Mobile phase: Hexane/EtOH/TFA=90/10/0.1
Retention time: (R)-(+)-form 21.3min, (S)-(-)-form 23.7min
化合物２
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：０．８０−０．９６（７Ｈ，ｍ），１．３８（１Ｈ，ｍ），１．４７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．６５−１．７７（５Ｈ，ｍ），２．１９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．７２（１Ｈ，ｍ），２．８１−２．９１（３Ｈ，ｍ），３．０８（３Ｈ，ｓ），３．４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），４．４４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），４．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ），４．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ），６．２１（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），７．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．１９（１Ｈ，ｓ），７．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．７１（１Ｈ，ｓ），７．７３（２Ｈ，ｓ），８．１５（２Ｈ，ｓ）．
［α］D 20＝−４６．６８（ｃ＝１．０，ＣＨＣｌ3）
化合物３
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：化合物２と同じ
［α］D 20＝＋４８．９２（ｃ＝１．０，ＣＨＣｌ3）
製造例２：優先晶析法による、実質的に光学的に純粋な（Ｓ）体化合物２の製造
本発明者らが実施した、優先晶析法による実質的に光学的に純粋な（Ｓ）体化合物２の製造方法の概略をスキーム１として以下に示す。
なお、各化合物の絶対配置は、工程１で確認された（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンの絶対配置から判断した。
また、工程６で得られた（Ｓ）体化合物２（（Ｓ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸）の光学純度は、上記製造例１に記載の条件によるキラルＨＰＬＣ分析により決定した。
さらに、工程１で得られた１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタン、工程４及び５で得られたｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルの光学純度は、それぞれ下記条件によるキラルＨＰＬＣ分析により決定した。
１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンのキラルＨＰＬＣ分析条件
カラム：ＣＨＩＲＡＬＰＡＫ ＡＳ−ＲＨ
移動相：エタノール／水＝６０／４０
流速：０．５ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：２５℃
検出波長：２２０ｎｍ
保持時間：第一ピーク／２１．８ｍｉｎ（（Ｒ）体）、 第二ピーク／２６．０ｍｉｎ（（Ｓ）体）
ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルのキラルＨＰＬＣ分析条件
カラム：ＣＨＩＲＡＬＣＥＬ ＯＤ−Ｈ
移動相：ヘキサン／エタノール＝８０／２０
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
検出波長：２４２ｎｍ
保持時間：第一ピーク／１１．３ｍｉｎ（（Ｒ）体）、第二ピーク／１３．０ｍｉｎ（（Ｓ）体）


工程１：（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンの製造
（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンを下記１−（ａ）の方法により製造し、その絶対配置を以下の通り確認した。すなわち、得られた（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンを（Ｓ）−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチルアミンに導いたうえで、市販されている絶対配置既知の（Ｓ）−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチルアミンの標準品と比旋光度の実測値の符号を比較することで確認した。
また、（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンを別途下記１−（ｂ）の方法によっても製造した。
１−（ａ）：（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンの製造 その１
アルゴン雰囲気下、１，２−ジブロモ−１，１，２，２−テトラクロロエタン（７．５７ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）をトルエン（１２．５ｍＬ）に溶解し、０℃にてトリフェニルホスフィン（６．１ｇ、２３．２ｍｍｏｌ）を加え３０分間撹拌した。これに（Ｓ）−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタノール（１）（５．０ｇ、１９．４ｍｍｏｌ、＞９９．５％ｅｅ）のトルエン溶液（１２．５ｍＬ）を０℃で１０分以上かけて滴下した後、室温まで昇温し、同温にて１時間撹拌した。反応液にｎ−ヘキサン（２５ｍＬ）を加え、セライトろ過した。ろ液を水、飽和重曹水、飽和食塩水で順次洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧留去した。得られた残渣を減圧蒸留（５６oＣ、０．７ｍｍＨｇ）することで、５．５２ｇの（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタン（２）を無色油状物として得た（収率：８８．６％）。
キラルＨＰＬＣ分析：光学純度＞９９．５％ｅｅ（メインピーク：第一ピーク）、転化率≧９９％
［α］D 25＋５９．１（ｃ＝１．０３，ＣＨＣｌ3）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ:２．０８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），５．２１（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），７．８１（１Ｈ，ｓ），７．８７（２Ｈ，ｓ）
（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンの絶対配置の確認
上記１−（ａ）で得られた（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタン（２）（１０６ｍｇ、０．３３６ｍｍｏｌ、９９％ｅｅ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（１ｍＬ）にアジ化ナトリウム（６４．４ｍｇ、０．９９０ｍｍｏｌ）を加え−１８〜−１５℃にて４時間撹拌した。反応溶液を酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（１：１）及び水より抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムにて乾燥後、減圧濃縮することで１１１．５ｍｇの１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチルアジド（粗生成物：１１１．５ｍｇ）を得た。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：１．６１（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），４．７９（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．７８（２Ｈ，ｓ），７．８４（１Ｈ，ｓ）
得られた１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチルアジド（粗生成物：１１１．５ｍｇ）をメタノール（６ｍＬ）に溶解し、パラジウム−フィブロイン（１８ｍｇ）を加え水素置換し、室温で１時間撹拌した。セライトろ過し、ろ液を減圧濃縮して得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝５０：１〜５：１）にて精製し、７７．６ｍｇの１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチルアミンを無色油状物として得た（収率：９１％、２工程）。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：１．４２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．５８（２Ｈ，ｂｒ−ｓ），４．３０（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．７５（１Ｈ，ｓ），７．８５（２Ｈ，ｓ）
得られた１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチルアミンの比旋光度は以下の通りであった。
［α］D 25−１５．９（ｃ＝１．３１，ＣＨＣｌ3）
一方、市販の標準品（（Ｓ）−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチルアミン（セントラル硝子社製：Ｌｏｔ．０１０２０００：光学純度：９９％ｅｅ））の比旋光度は以下の通りであった。
［α］D 25−−１５．９（ｃ＝１．１５，ＣＨＣｌ3）
比旋光度の実測値の符号が、市販の標準品の符号と一致したことから、得られた１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチルアミンは（Ｓ）体であることが確認された。そして、当該アミンはアジ化物イオンの求核置換反応を経て１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンから得られていることから、上記１−（ａ）で得られた１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンは（Ｒ）体であることが確認された。
１−（ｂ）：（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンの製造 その２
アルゴン雰囲気下、（Ｓ）−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタノール（１）（３００ｇ、１．１６ｍｏｌ、９６％ｅｅ）に水浴下、２０℃以下で三臭化リン（１５７．３ｇ、０．５８ｍｏｌ）を滴下し、１９〜２２℃で３０分撹拌した。反応液を冷却し、０℃以下で臭化水素（３０％酢酸溶液）（２２８ｍＬ、１．１６ｍｏｌ）を滴下し、１３〜１５℃で１６時間撹拌した。反応液を氷水に注加し、ｎ−ヘキサン（３Ｌ×２）で抽出した。有機層を合わせ、飽和重曹水（３Ｌ）、飽和食塩水（３Ｌ）で順次洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧下（９０〜１００ｍｍＨｇ）濃縮し、３８９．２ｇの粗体を得た。得られた粗体をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル９００ｇ、展開溶媒：ｎ−ヘキサン）で精製することにより、３４９．８ｇの（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタン（２）を無色油状物として得た（収率９３．８％）。
なお、下記の通りキラルＨＰＬＣ分析において、第一ピークがメインピークとして現れたことから、１−（ｂ）で製造した１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタンも１−（ａ）と同様に、（Ｒ）体であることが確認された。
キラルＨＰＬＣ分析：光学純度＞９３．９％ｅｅ（メインピーク：第一ピーク）、転化率９７．８％
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ: ２．０８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），５．２１（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），７．８１（１Ｈ，ｓ），７．８７（２Ｈ，ｓ）
工程２：ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸の、（Ｓ）体優位のセミキラル体の製造
アルゴン雰囲気下、特許文献２（国際公開第２００８／１２９９５１号パンフレット）記載の方法により合成したｔｒａｎｓ−［４−（［（エチル）｛２−［（｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝アミノ］メチル）シクロヘキシル］酢酸エチル（３）（５６５．４ｇ、０．９９ｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ、２．２６Ｌ）溶液に氷冷下、ＮａＨ（６０％ ｉｎ ｏｉｌ、１１９ｇ、２．９８ｍｏｌ）を加え、室温にて１時間撹拌した。反応液を−３０℃に冷却し、工程１で得られた（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタン（２）（６８２ｇ、１．９９ｍｏｌ、９３．９％ｅｅ）の無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４．５３Ｌ）溶液を反応系内が−１５℃以下となるように滴下し、−１５℃〜−１℃で５時間撹拌した。反応液を氷水（３５Ｌ）とトルエン（３０Ｌ）の混合溶液に注加し、ｐＨが６．９になるまでクエン酸を加え、有機層を分離した。
水層をトルエン（２０Ｌ）で２回抽出し、有機層を合わせ、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、粗体を得た。粗体をエタノール（８Ｌ）に溶解させ、氷冷下２Ｍ ＮａＯＨ水溶液（１．２４Ｌ、２．４８ｍｏｌ）を加え、５０℃にて３．５時間撹拌した。反応液に氷冷下、ｐＨ５．４になるまで１Ｍ ＨＣｌ水溶液を加え、水（２５Ｌ）に注ぎ、酢酸エチル（２２Ｌ）で２回抽出した。有機層を飽和食塩水（１２Ｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル ２１ｇ、展開溶媒：ヘプタン／アセトン＝７／１→３／１）で精製することによりｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸のセミキラル体（４）を得た（黄色油状物、７４４．１ｇ、収率９６％）。
なお、上記工程１に記載の通り絶対配置が確認された（Ｒ）−１−ブロモ−１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エタン（２）を原料として使用し、アミン（３）による求核置換反応が進行していることから、得られたセミキラル体（４）は（Ｓ）体が優位である。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ: ０．８５−０．９６（７Ｈ，ｍ），１．３５−１．４５（４Ｈ，ｍ），１．６０−１．７８（５Ｈ，ｍ），２．１８−２．２１（５Ｈ，ｍ），２．６９（１Ｈ，ｍ），２．８１−２．９１（５Ｈ，ｍ），４．１６（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），４．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ），４．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ），６．２２（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ），７．２３（１Ｈ，ｓ），７．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．７０（１Ｈ，ｓ），７．７３（２Ｈ，ｓ），８．１４（２Ｈ，ｓ）
工程３：ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルの、（Ｓ）体優位のセミキラル体の製造
アルゴン雰囲気下、工程２で得られたｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸の、（Ｓ）体優位のセミキラル体（４）（７４４．１ｇ、０．９５ｍｏｌ）の無水ジクロロエタン（１１．６Ｌ）溶液に、氷冷下、ベンジルアルコール（１１３．１ｇ、１．０５ｍｏｌ）、ＷＳＣ・ＨＣｌ（２００．５ｇ、１．０５mol）及びＤＭＡＰ（１１．９ｇ、９８ｍｍｏｌ）を加え、室温で終夜撹拌した。反応液に水（１０Ｌ）を加え、クロロホルム（１９Ｌ、１４Ｌ）にて抽出し、有機層を飽和食塩水（１２Ｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル ２８ｇ、展開溶媒：ヘプタン／酢酸エチル＝６／１）で精製することにより、ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルのセミキラル体（５）を得た（黄色油状物、７４５．８ｇ、収率９０％）。
なお、得られたセミキラル体（５）は、セミキラル体（４）と同様（Ｓ）体が優位である。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ:０．８７−０．９５（７Ｈ，ｍ），１．３７（１Ｈ．ｍ），１．４３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．６５−１．７７（５Ｈ，ｍ），２．２０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．２２（３Ｈ，ｓ），２．６６−２．７１（２Ｈ，ｍ），２．８２‐２．９１（４Ｈ，ｍ），４．１５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），４．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ），４．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ），５．１０（２Ｈ，ｓ），６．２１（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），７．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．２２（１Ｈ，ｓ），７．２８‐７．３８（６Ｈ，ｍ），７．７０（１Ｈ，ｓ），７．７３（２Ｈ，ｓ），８．１４（２Ｈ，ｓ）
工程４：ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルの、（Ｓ）体優位のセミキラル体の製造
アルゴン雰囲気下、工程３で得られたｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルの、（Ｓ）体優位のセミキラル体（５）（７４５．８ｇ、０．８７ｍｏｌ）の２−プロパノール（１５．２Ｌ）溶液に、五塩化タンタル（３１．３ｇ、８７．３ｍｍｏｌ）及び３０％過酸化水素水（４９６ｍＬ、４．３８ｍｏｌ）を加え、室温にて５時間撹拌した。反応液を飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液（３．１Ｌ）でクエンチし、水（１５Ｌ）を加え、クロロホルム（１４Ｌ、１２Ｌ）で抽出し、有機層を飽和食塩水（２０Ｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル ２６ｋｇ、展開溶媒：ヘプタン／酢酸エチル＝３／１→２／１）で精製することにより、ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルのセミキラル体（６）を得た（黄色アモルファス、６１９．５ｇ、収率７９％）。
なお、得られたセミキラル体（６）は、セミキラル体（４）及びセミキラル体（５）と同様、（Ｓ）体が優位である。
キラルＨＰＬＣ分析：光学純度６７．７％ｅｅ（メインピーク：第二ピーク）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：０．８７−０．９６（７Ｈ，ｍ），１．３８（１Ｈ．ｍ），１．４５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．６５−１．８０（５Ｈ，ｍ），２．２１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），２．６９（１Ｈ，ｍ），２．８１−２．９１（３Ｈ，ｍ），３．０８（３Ｈ，ｓ），３．４４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），４．４４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），４．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ），４．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．３Ｈｚ），５．１０（２Ｈ，ｓ），６．１９（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），７．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．１９（１Ｈ，ｓ），７．３０−７．３９（６Ｈ，ｍ），７．７１（１Ｈ，ｓ），７．７２（２Ｈ，ｓ），８．１６（２Ｈ，ｓ）
工程５：実質的に光学的に純粋な（Ｓ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルの製造
工程４で得られたｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルの、（Ｓ）体優位のセミキラル体（６）（１１１．７ｇ、１２３．７ｍｍｏｌ、６７．７％ｅｅ）をエタノール（８２５ｍＬ）に溶解し、別途調製した種晶（下記工程７で製造したラセミ体結晶）２．０ｍｇを１５℃〜２０℃にて加え、同温にて２１時間、０℃にて３時間撹拌した。析出物をろ別し、冷エタノール（１６５ｍＬ）で洗浄した後、母液を減圧濃縮することにより、実質的に光学的に純粋なｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステル（７）を得た（黄色アモルファス、６６．３８ｇ、収率５９％）。
なお、得られたｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステル（７）は、（Ｓ）体優位のセミキラル体（６）からラセミ体優位の結晶をろ別して得られていることから、（Ｓ）体である。
キラルＨＰＬＣ分析：光学純度＞９９％ｅｅ（メインピーク：第二ピーク）
［α］D 20−４２.３６（ｃ＝１．０ｗ／ｖ％，ＣＨＣｌ3）
なお、ろ別したラセミ体優位の結晶の光学純度は、キラルＨＰＬＣ分析の結果、２２％ｅｅであった（４３．３９ｇ、収率３９％）。
工程６：実質的に光学的に純粋な（Ｓ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸の製造
窒素雰囲気下、工程５で得られた（Ｓ）−ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステル（７）（３４．２ｇ、３７．８８ｍｍｏｌ、＞９９％ｅｅ）のエタノール（３４０ｍＬ）溶液に、１０％Ｐｄ−Ｃ（ｗｅｔ）（３．４ｇ）を加え、水素置換後、室温にて２時間撹拌した。反応懸濁液をセライトろ過し、エタノール（５０ｍＬ）で洗浄し、洗液を減圧濃縮することにより、実質的に光学的に純粋なｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸（化合物２）を得た（白色アモルファス、３１．７８ｇ、収率１００％）。
なお、得られた化合物は、下記比旋光度に示す通り、左旋性の化合物であった。また、得られた化合物は、（Ｓ）体であるベンジルエステル（７）よりエステルを脱保護して得られたことから、同様に（Ｓ）体である。
キラルＨＰＬＣ分析：光学純度＞９９％ｅｅ（メインピーク：第二ピーク）
［α］D 20−４６．６８ (ｃ＝１．０，ＣＨＣｌ3)
ＩＲ（ＡＴＲ）ｃｍ-1：２９２１,１７０６,１４７９,１２７９,１１３４
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）δ：０．８０−０．９６（７Ｈ，ｍ），１．３８（１Ｈ．ｍ），１．４７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），１．６５−１．７７（５Ｈ，ｍ），２．１９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．７２（１Ｈ，ｍ），２．８１−２．９１（３Ｈ，ｍ），３．０８（３Ｈ，ｓ），３．４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），４．４４（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝５．４Ｈｚ），４．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ），４．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１７．４Ｈｚ），６．２１（１Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ），７．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ），７．１９（１Ｈ，ｓ），７．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），７．７１（１Ｈ，ｓ），７．７３（２Ｈ，ｓ），８．１５（２Ｈ，ｓ）
工程７：ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルのラセミ体種晶の製造
特許文献２（国際公開第２００８／１２９９５１号パンフレット） 実施例４５記載の方法により合成したｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸（ラセミ体化合物（Ｉ））（２０ｇ、２４．６１ｍｍｏｌ）の無水ジクロロメタン（２００ｍＬ）溶液に、氷冷下、ベンジルアルコール（２．９３ｇ、２７．０７ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（３００ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ）及びＷＳＣ・ＨＣｌ（５．１９ｇ、２７．０７ｍｍｏｌ）を加え、室温に昇温し、１６時間撹拌した。反応液に水（１００ｍＬ）を加え、クロロホルム（５００ｍＬ）で抽出し、有機層を２Ｍ 塩酸水溶液（１００ｍＬ）及び飽和食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル ３５０ｇ、展開溶媒：Ｎ−ヘキサン／酢酸エチル＝３／１→１／１）で精製することにより、ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステル（２１．１５ｇ、収率９５．２％）を白色アモルファスとして得た。
得られた白色アモルファスのｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルチオ）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステル（７．９ｇ）をエタノール（４０ｍＬ）に溶解し、室温で１５時間撹拌することにより得られた析出物をろ取し、冷エタノール（２０ｍＬ）で洗浄し、６０℃で４時間減圧乾燥することにより、ｔｒａｎｓ−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸ベンジルエステルのラセミ体結晶（白色結晶性粉末、６．９８ｇ、回収率８８．４％）を得た。
本製造例２では、部分ラセミ化により光学純度が低下した結果得られる、中程度の光学純度を有する化合物（約５０〜９０％ｅｅ程度、好ましくは約７０〜９０％ｅｅの光学純度を有する化合物を「セミキラル体」と称している。さらに、当該セミキラル体において、不斉炭素原子がＳ配置の化合物がＲ配置の化合物よりも過剰量存在する場合を、「（Ｓ）体優位のセミキラル体」と称している。
試験例１
ヒト肝癌細胞株であるＨｅｐＧ２細胞に被検化合物を添加し、２４時間培養後のＰＮＰＬＡ３ ｍＲＮＡ発現量を定量リアルタイムＰＣＲ測定した。すなわち、ＨｅｐＧ２細胞を２４穴プレートに２×１０5ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度で播種し一晩培養後、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に被検化合物２を０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭになるように、アナセトラピブを１ｍＭ、１０ｍＭになるように溶解し、培養液に対して１０００分の１倍量加えた（最終濃度は被検化合物２が０．１μＭ，１μＭ，１０μＭ、アナセトラピブが，１μＭ，１０μＭ）。ＣＯ2インキュベーターにて３７℃で２４時間培養後、ISOGEN（ニッポンジーン社、カタログ番号３１−０２５０１）を５００μＬ加えてｔｏｔａｌ ＲＮＡの抽出を行った。抽出したｔｏｔａｌ ＲＮＡからHigh Capacity cDNA Reverse Transcription kit（アプライドバイオシステムズ社、カタログ番号４３６８８１３）を用いてｃＤＮＡを合成した。ヒトＰＮＰＬＡ３ ｍＲＮＡ発現量はヒトＰＮＰＬＡ３用のTaqMAn Gene Expression Assay（アプライドバイオシステムズ社、カタログ番号Hs00228747_m1）及びTaqMan Fast Universal PCR Master Mix（アプライドバイオシステムズ社、カタログ番号４３６７８４６）を用いて測定した。測定機器は７９００ＨＴ Ｆａｓｔ Ｒｅａｌｔｉｍｅ ＰＣＲ ｓｙｓｔｅｍを用いた。
測定値はβ−Ａｃｔｉｎ ｍＲＮＡの発現量で補正し、ＤＭＳＯのみ添加した細胞のＰＮＰＬＡ３ ｍＲＮＡ発現量を１とし、被検化合物２を添加した細胞のＰＮＰＬＡ３ ｍＲＮＡ発現量をその相対値で算出した。結果を図１に示した。
試験例２
ヒト肝癌細胞株であるＨｅｐＧ２細胞に被検化合物を添加し、２４時間培養後の遺伝子発現プロファイルをアジレント社のＤＮＡマイクロアレイにより測定した。すなわち、ＨｅｐＧ２細胞を２４穴プレートに２×１０5ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌの濃度で播種し一晩培養後、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に被検化合物２を０．１ｍＭ、１ｍＭ、１０ｍＭになるように、アナセトラピブを１ｍＭ、１０ｍＭになるように溶解し、培養液に対して１０００分の１倍量加えた（最終濃度は被検化合物２が０．１μＭ，１μＭ，１０μＭ、アナセトラピブが，１μＭ，１０μＭ）。ＣＯ2インキュベーターにて３７℃で２４時間培養後、ISOGEN（ニッポンジーン社、カタログ番号３１−０２５０１）を５００μＬ加えてｔｏｔａｌ ＲＮＡの抽出を行った。ＲＮＡ ２００ｎｇからLow Input Quick Amp Labeling Kit（アジレント社、カタログ番号５１９０−２３０８）によりＣｙ３標識ｃＲＮＡを合成した。合成したＣｙ３標識ｃＲＮＡをGE Hybridazation Buffer HI-RPM（アジレント社、カタログ番号５１９０−０４０３）を用いてWhole Human Genome（４ｘ４４Ｋ）（アジレント社、カタログ番号Ｇ４１１０Ｆ）にハイブリダイゼーションした。ハイブリダイゼーション後、ＤＮＡマイクロアレイをGene Expression Wash Buffer（アジレント社、カタログ番号５１８８−５３２７）で洗浄後、スキャナー（アジレント社）でデータを読んだ。
解析はGeneSpring (アジレント社)を用いて行い、各遺伝子発現量の変化率を算出した。
（変化率）＝（化合物処理細胞中の各遺伝子発現量）÷（化合物未処理細胞中の各遺伝子発現量）
以上の薬理試験結果より、一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）の化合物は、CD1D及びPNPLA3 mRNAの発現抑制作用を有することが明らかとなった。
CETP阻害剤またはそれを含有する医薬は、CD1D及びPNPLA3 mRNAに対して強い発現抑制作用を有し、脂肪性肝障害疾患の予防及び／又は治療に有用であることから、産業上の利用可能性を有している。

Claims (13)

  1. コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、CD1D及び／又はPNPLA3 mRNAの発現抑制剤。
  2. コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、次式（Ｉ）又は（ＩＩ）：
    ［式（Ｉ）中、R1は、Ｃ1-6アルキルチオＣ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルキルスルフィニルＣ1-6アルキル基又はＣ1-6アルキルスルホニルＣ1-6アルキル基を示し、
    R2は、水素原子、又はハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基を示し、
    R3は、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基を示し、
    R4及びR5は、互いに同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルコキシ基又はシアノ基を示し、
    R6は、水素原子、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基又はハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルコキシ基を示し、
    式（ＩＩ）中、R7、R8、R9、R10、R11、R12及びR13は、互いに同一又は異なって、水素原子、ヒドロキシ基、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基又はハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルコキシ基を示す。］
    で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である、請求項１に記載の発現抑制剤。
  3. trans−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸、 (S)-(-)-trans-｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸及び(R)-(+)-trans-｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸からなる群から選択される少なくとも１つの化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、請求項１に記載の発現抑制剤。
  4. （４Ｓ，５Ｒ）−５−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−３−（（４’−フルオロ−５’−イソプロピル−２’−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−２−イル）メチル）−４−メチルオキサゾリジンー２−オン若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、請求項１に記載の発現抑制剤。
  5. コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、CD1D及び／又はPNPLA3の蛋白産生抑制剤。
  6. コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、次式（Ｉ）又は（ＩＩ）：
    ［式（Ｉ）中、R1は、Ｃ1-6アルキルチオＣ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルキルスルフィニルＣ1-6アルキル基又はＣ1-6アルキルスルホニルＣ1-6アルキル基を示し、
    R2は、水素原子、又はハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基を示し、
    R3は、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基を示し、
    R4及びR5は、互いに同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルコキシ基又はシアノ基を示し、
    R6は、水素原子、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基又はハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルコキシ基を示し、
    式（ＩＩ）中、R7、R8、R9、R10、R11、R12及びR13は、互いに同一又は異なって、水素原子、ヒドロキシ基、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基又はハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルコキシ基を示す。］
    で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である、請求項５に記載の蛋白産生抑制剤。
  7. trans−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸、 (S)-(-)-trans-｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸及び(R)-(+)-trans-｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸からなる群から選択される少なくとも１つの化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、請求項５に記載の蛋白産生抑制剤。
  8. （４Ｓ，５Ｒ）−５−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−３−（（４’−フルオロ−５’−イソプロピル−２’−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−２−イル）メチル）−４−メチルオキサゾリジンー２−オン若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、請求項５に記載の蛋白産生抑制剤。
  9. コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、脂肪性肝障害疾患の予防及び／又は治療剤。
  10. コレステロールエステル転送タンパク阻害活性を有する化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物が、次式（Ｉ）又は（ＩＩ）：
    ［式（Ｉ）中、R1は、Ｃ1-6アルキルチオＣ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルキルスルフィニルＣ1-6アルキル基又はＣ1-6アルキルスルホニルＣ1-6アルキル基を示し、
    R2は、水素原子、又はハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基を示し、
    R3は、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基を示し、
    R4及びR5は、互いに同一又は異なって、水素原子、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルコキシ基又はシアノ基を示し、
    R6は、水素原子、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基又はハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルコキシ基を示し、
    式（ＩＩ）中、R7、R8、R9、R10、R11、R12及びR13は、互いに同一又は異なって、水素原子、ヒドロキシ基、ハロゲン原子、ハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルキル基又はハロゲン原子で置換されていてもよいＣ1-6アルコキシ基を示す。］
    で表される化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物である、請求項９に記載の脂肪性肝障害疾患の予防及び／又は治療剤。
  11. trans−｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸、 (S)-(-)-trans-｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸及び(R)-(+)-trans-｛４−［（｛２−［（｛１−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］エチル｝｛５−［２−（メチルスルホニル）エトキシ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）メチル］−４−（トリフルオロメチル）フェニル｝（エチル）アミノ）メチル］シクロヘキシル｝酢酸からなる群から選択される少なくとも１つの化合物若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、請求項９に記載の脂肪性肝障害疾患の予防及び／又は治療剤。
  12. （４Ｓ，５Ｒ）−５−［３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニル］−３−（（４’−フルオロ−５’−イソプロピル−２’−メトキシ−４−（トリフルオロメチル）−［１，１’−ビフェニル］−２−イル）メチル）−４−メチルオキサゾリジンー２−オン若しくはその塩、又はそれらの溶媒和物を有効成分として含む、請求項９に記載の脂肪性肝障害疾患の予防及び／又は治療剤。
  13. 脂肪性肝障害疾患が、アルコール性脂肪肝炎、肝脂肪変性、非アルコール性脂肪肝（NAFLD）、非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）及びライ症候群からなる群から選ばれる少なくとも１種である、請求項９〜１２のいずれか１項に記載の予防及び／又は治療剤。
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