JP2013011479A - 免疫アッセイに用いるための物質固定化用担体 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明は、免疫アッセイに用いるための物質固定化用担体であって、支持体と、前記支持体の表面に配置された親水性ポリマー層とを少なくとも含み、前記親水性ポリマー層が、ポリエチレングリコール鎖と、標的物質と結合する抗原又は抗体である被固定化物質或いは標的物質である被固定化物質と共有結合を形成可能な、前記ポリエチレングリコール鎖に連結された官能基とを含む、物質固定化用担体、該担体への被固定化物質の固定化方法、並びに、該担体を使用した免疫アッセイによる測定法及びそのためのキットに関する。
【選択図】図1
Description
(1)免疫アッセイに用いるための物質固定化用担体であって、
支持体と、
前記支持体の表面に配置された親水性ポリマー層と
を少なくとも含み、
前記親水性ポリマー層が、
数平均分子量が176以上であるポリエチレングリコール鎖と、
標的物質と結合する抗原又は抗体である被固定化物質或いは標的物質である被固定化物質と共有結合を形成可能な、前記ポリエチレングリコール鎖に連結された官能基と
を含む、物質固定化用担体。
(2)前記官能基が、n個の窒素原子を含有する官能基を含み、
前記親水性ポリマー層中の窒素濃度が、前記親水性ポリマー層中のC−O結合に由来する炭素濃度を1としたとき、0.010以上、0.050×n以下である、
(1)の物質固定化用担体。
(3)前記窒素を含有する官能基が、(1H−イミダゾール−1−イル)カルボニル基又はスクシンイミジルオキシカルボニル基である、(2)の物質固定化用担体。
(4)免疫アッセイに用いるための物質固定化担体であって、
支持体と、
前記支持体の表面に配置された親水性ポリマー層と、
標的物質と結合する抗原又は抗体である被固定化物質或いは標的物質である被固定化物質と
を少なくとも含み、
前記親水性ポリマー層が、数平均分子量が176以上であるポリエチレングリコール鎖を含み、
前記ポリエチレングリコール鎖と、前記被固定化物質とが共有結合を介して連結されている、物質固定化担体。
(5)(1)〜(3)のいずれかの物質固定化用担体と、前記被固定化物質とから、前記官能基と前記被固定化物質とを反応させて共有結合を形成することにより製造されたものである、(4)の物質固定化担体。
(6)(4)又は(5)の物質固定化担体の製造方法であって、
(1)〜(3)のいずれかの物質固定化用担体と、前記被固定化物質を溶解した溶液とを接触させる、被固定化物質接触工程と、
前記物質固定化用担体に接触させた前記溶液を乾燥濃縮させる、乾燥濃縮工程と、
を含む方法。
(7)前記溶液が糖類を含む、(6)の方法。
(8)前記糖類がトレハロースである、(7)の方法。
(9)前記溶液が非イオン性界面活性剤を含む、(6)〜(8)のいずれかの方法。
(10)前記乾燥濃縮工程の後に、前記物質固定化担体とアミノ基を有する低分子化合物とを接触させる工程を更に含む、(6)〜(9)のいずれかの方法。
(11)(4)又は(5)の物質固定化担体を用いて標的物質を測定する工程を含む、免疫アッセイにより標的物質を測定する方法。
(12)(1)〜(3)のいずれかの物質固定化用担体を含む、免疫アッセイにより標的物質を測定するためのキット。
(13)(4)又は(5)の物質固定化担体を含む、免疫アッセイにより標的物質を測定するためのキット。
(14)サンドイッチ方式の免疫アッセイに用いるための、(13)のキットであって、
被固定化物質が標的物質と結合する抗原又は抗体である、(4)又は(5)の物質固定化担体と、
被固定化物質と非競合的に標的物質と結合する、直接的又は間接的に検出可能な抗原又は抗体である、検出可能抗原又は検出可能抗体と、
を少なくとも含むキット。
(15)直接競合方式の免疫アッセイに用いるための、(13)のキットであって、
被固定化物質が標的物質と結合する抗原又は抗体である、(4)又は(5)の物質固定化担体と、
測定対象試料中の標的物質と競合的に前記被固定化物質と結合する、直接的又は間接的に検出可能な標的物質である、検出可能標的物質と
を少なくとも含むキット。
(16)間接競合方式の免疫アッセイに用いるための、(13)のキットであって、
被固定化物質が標的物質である、(4)又は(5)の物質固定化担体と、
測定対象試料中の標的物質と被固定化物質とが競合的に結合する、直接的又は間接的に検出可能な抗原又は抗体である、検出可能抗原又は検出可能抗体と、
を少なくとも含むキット。
(17)免疫アッセイに用いるための物質固定化用担体であって、
支持体と、
前記支持体の表面に配置された親水性ポリマー層と
を少なくとも含み、
前記親水性ポリマー層が、
ポリエチレングリコール鎖と、
標的物質と結合する抗原又は抗体である被固定化物質或いは標的物質である被固定化物質と共有結合を形成可能な、前記ポリエチレングリコール鎖に連結された官能基と
を含み、
前記官能基が、n個の窒素原子を含有する官能基を含み、
前記親水性ポリマー層中の窒素濃度が、前記親水性ポリマー層中のC−O結合に由来する炭素濃度を1としたとき、0.010以上、0.050×n以下である、
物質固定化用担体。
(18)(17)の物質固定化用担体を含む、免疫アッセイにより標的物質を測定するためのキット。
本発明における支持体の材料及び形状は、免疫アッセイにおける固相の支持体として利用可能な材料及び形状であれば特に限定されない。支持体の材料としてはプラスチック、ガラス、石英、シリコン、金属等が挙げられる。プラスチックは成型が容易であること、輸送及び廃棄における問題が小さいことから免疫アッセイ用担体の支持体の材料として特に好ましい。すなわち本発明において好ましい支持体は、その全部又は少なくとも一部にプラスチックを含む。支持体の、後述する親水性ポリマー層が形成される側の表面がプラスチックを含むことが好ましく、該表面がプラスチックからなることがより好ましい。プラスチックの具体例としては、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリ塩化ビニル、ポリエチレン、環状ポリオレフィン、アクリル樹脂、ポリエチレンテレフタラートなどが挙げられる。予め支持体表面にプラズマ処理やコロナ処理などの親水化処理が施されていてもよい。支持体は、免疫アッセイにおける固相として利用可能な表面を有している支持体であればよく、全体の形状は特に限定されない。例えばマイクロウェルプレート(複数の凹部が形成された板状体)、粒子、スライド、チューブ、キャピラリー、マイクロ流路などの形態の支持体を用いることができる。特にマイクロウェルプレート、とりわけポリスチレン製のマイクロウェルプレートの形態の支持体は有用である。
支持体の表面には、親水性ポリマー層が配置される。親水性ポリマー層はポリエチレングリコール鎖(PEG鎖)を少なくとも含む。「ポリエチレングリコール鎖(又はPEG鎖)」とは次式:
−(CH2−CH2−O)m−
(mは重合度を示す整数である)
で表される構造を指す。驚くべきことに、親水性ポリマー層におけるPEG鎖の数平均分子量が免疫アッセイの感度に影響を与える。十分に高感度の免疫アッセイを行うためにはPEG鎖の数平均分子量は176以上(mが4以上)であることが好ましく、より好ましくは362以上である。PEG鎖の数平均分子量が上記の下限よりも小さい場合には実験例で確認されている通り十分な感度が達成できない場合がある。PEG鎖の数平均分子量の上限は特に限定されないが、数平均分子量が大きくなるほど粘度が増すため取扱いが難しいこと、及び、PEG鎖の高密度での配置が難しいことから、PEG鎖の数平均分子量は25000以下であることが好ましく、10000以下であることがより好ましい。
HO−(CH2−CH2−O)m−H
(mは重合度を示す整数である)
の数平均分子量からH2Oの分子量(18.015)を控除することにより求めることができる。PEG数平均分子量は蒸気圧浸透圧法または膜浸透圧法によって求められる。蒸気圧浸透圧法はPEGの数平均分子量が100,000未満のときに使用することができる。膜浸透圧法はPEGの数平均分子量が10,000〜1,000,000のときに使用することができる。
支持体の、免疫アッセイにおける固相として利用される位置の表面に親水性ポリマー層が形成される。親水性ポリマー層は、支持体表面に化学的又は物理的に固定された官能基との共有結合により支持体に固定化されることができる。
支持体が表面にプラスチックを含む支持体である場合、該表面にはプライマー層が形成され、該プライマー層の表面に親水性ポリマー層が形成されていることが好ましい。このとき、プライマー層のポリシロキサンの側鎖上の官能基が、PEG鎖末端と共有結合を形成される。この場合の、本発明の物質固定化用担体の実施形態の概要を図13を参照して説明する。
本発明で用いられるシラノール化合物は、シラノール基(Si−OH)に加えて、ケイ素原子に直結した炭素原子を含み且つ官能基を有する有機基を有する。この有機基はポリシロキサンの側鎖となる。シラノール化合物は典型的には式1で表される構造を有する:
(R1)p(R2)4−p−qSi(OH)q ・・・・(式1)
(pは1又は2であり、qは2又は3であり、p+qは3又は4であり、R1は、独立に、ケイ素原子に直結した炭素原子を含み且つ官能基を有する有機基であり、R2はケイ素原子に直結した炭素原子を含む有機基である)。p=1かつq=2又は3であることが好ましく、p=1かつq=3であることがより好ましい。p+q=4である場合、R2は存在しない。
前記シラノール化合物は、加水分解によりシラノール基(Si-OH)を生成可能な基を有するケイ素化合物を、加水分解することにより生成することができる。このようなケイ素化合物は式2で表される構造を有する:
(R1)p(R2)4−p−qSi(Y)q ・・・・(式2)
(Yは、独立に、加水分解によりシラノール基を生成可能な基であり、p、q、R1、R2はそれぞれシラノール化合物に関して定義したとおりである)。
ポリシロキサンを含むプライマー層は、支持体の表面上において式1のシラノール化合物を重合させる工程(プライマー層形成工程)を含む方法により形成可能である。該工程は、好ましくは、式2のケイ素化合物を以下のように加水分解し、式1のシラノール化合物を生成する工程と、生成したシラノール化合物と塩基とがアルコール中に溶解された溶液を前記支持体の表面上に接触させる工程とを含む。加水分解の条件は特に限定されないが、例えば次の方法が可能である。まず、式2のケイ素化合物に希塩酸を添加し、基Yを加水分解する。希塩酸のpHは2.0〜3.0に調整するのが望ましい。ケイ素化合物に対する水分子のモル比は2〜4とする。この操作によって基Yはシラノール基へ変換され、式1のシラノール化合物が生成する。
支持体が表面にガラス、石英またはシリコンを含む支持体である場合、該表面に、シランカップリング剤の加水分解により生成される、ケイ素原子に直結した炭素原子を含み且つ官能基を有する有機基を有するシラノール化合物を結合させることにより、或いは、更に、必要に応じて該官能基をPEGと共有結合を形成することができる他の官能基に変換する誘導体化により、支持体表面にPEGと共有結合を形成することができる官能基を導入することができる。該官能基とPEGの一端との反応によりシランカップリング剤と親水性ポリマー層のPEG鎖とを共有結合により連結することができる。
プライマー層、シランカップリング剤等により官能基が導入された支持体表面に、PEGを反応させてPEG鎖を形成する(S1102)。このとき触媒量の濃硫酸を含むPEGを接触させる。ここで、数平均分子量が1000を超えるPEGはあらかじめ加熱融解しておく。必要に応じて、PEGをtert−ブチルアルコールなどで希釈して用いてもよい。このPEG溶液をプラスチック表面に接触させ、加熱する。加熱温度は60〜100℃の範囲で設定できるが、プラスチックの耐熱性を加味すると80℃前後(75℃〜85℃)が好ましい。加熱時間は10分間〜24時間の範囲で設定できるが、加熱温度が80℃前後の場合は10〜60分間が好ましい。以上の操作によって、プライマー層にPEG鎖が共有結合する。このとき、PEG鎖の結合密度はプライマー層の被覆密度に依存する。
本発明の物質固定化用担体には、目的とする免疫アッセイの態様に応じて、標的物質と結合する抗原又は抗体や、標的物質が固定化される。本発明ではこれらの固定化の対象物質を「被固定化物質」と呼ぶ。「標的物質と結合する抗原又は抗体」が被固定化物質である実施形態(後述するサンドイッチ法又は直接競合法)において、被固定化物質と標的物質との組合せは、抗原抗体反応に基づく特異的な結合が可能な組合せであれば特に限定されない。例えば、標的物質が抗原(ハプテンを含む)である場合には、被固定化物質は抗体(抗体断片を含む)であることができ、標的物質が抗体(抗体断片を含む)である場合には、被固定化物質は抗原(ハプテンを含む)であることができる。「標的物質」が被固定化物質である実施形態(後述する間接競合法)では、標的物質は抗原(ハプテンを含む)又は抗体(抗体断片を含む)である。
被固定化物質の固定化は例えば、図12に概略を示すように、本発明の物質固定化用担体と、被固定化物質を溶解した溶液とを接触させる工程S1201と、該溶液を乾燥濃縮して被固定化物質を物質固定化用担体のPEG鎖末端に共有結合させる工程S1202とを少なくとも含み、必要に応じてさらに、未反応のPEG鎖末端の官能基と、アミノ基含有低分子化合物とを接触させ、PEG鎖末端の官能基を不活性化する工程S1203とを含む方法により行うことができる。
本発明はまた、本発明の物質固定化担体を用いて標的物質を測定する工程を含む免疫アッセイに関する。本発明において「標的物質を測定する」とは、測定対象試料中の標的物質の存在の有無、及び/又は、測定対象試料中の標的物質の量を測定することを指す。免疫アッセイは、具体的には、本発明の物質固定化担体と、測定対象試料とを、該担体上の被固定化物質に、該測定対象試料中の標的物質の量に相関した量の抗原又は抗体(ここで該抗原又は抗体とは、測定対象試料中の標的物質、必要に応じて抗原抗体反応系に添加された検出可能標的物質、必要に応じて抗原抗体反応系に添加された検出可能抗原又は検出可能抗体等を指す)が抗原抗体反応により結合する条件において接触させる工程と、前記工程において被固定化物質に結合した抗原又は抗体を検出する工程とを含む。
測定対象試料と、前記物質固定化担体とを接触させ、測定対象試料中の標的物質と被固定化物質との抗原抗体反応を行う、一次反応工程(図8(b))と、
一次反応工程の後に、前記物質固定化担体と、前記検出可能抗原又は検出可能抗体とを接触させ、被固定化物質に結合した標的物質と、前記検出可能抗原又は検出可能抗体との抗原抗体反応を行う、二次反応工程(図8(c))と、
二次反応工程の後に、前記物質固定化担体に結合した前記検出可能抗原又は検出可能抗体を検出する、検出工程(図8(d))と
を少なくとも含む。
測定対象試料と、検出可能標的物質と、前記物質固定化担体とを接触させ、測定対象試料中の標的物質と前記被固定化物質との間の抗原抗体反応と、検出可能標的物質と前記被固定化物質との間の抗原抗体反応とを競合的に行う、直接競合反応工程(図9(b),(c))と、
直接競合反応工程の後に、前記物質固定化担体に結合した検出可能標的物質を検出する、検出工程(図9(e))と
を少なくとも含む。
測定対象試料と、検出可能抗原又は検出可能抗体と、前記物質固定化担体とを接触させ、測定対象試料中の標的物質と前記検出可能抗原又は検出可能抗体との間の抗原抗体反応と、前記被固定化物質と前記検出可能抗原又は検出可能抗体との間の抗原抗体反応とを競合的に行う、間接競合反応工程(図10(b),(c))と、
間接競合反応工程の後に、前記物質固定化担体に結合した前記検出可能抗原又は検出可能抗体を検出する、検出工程(図10(e),(f))と
を少なくとも含む。
本発明の物質固定化用担体は、免疫アッセイにより標的物質を測定するためのキットを構成することができる。該キットは更に免疫アッセイに必要な成分を含むことができる。免疫アッセイに必要な成分としては、免疫アッセイの種類に応じて、被固定化物質に抗原抗体反応により結合した標的物質と抗原抗体反応により結合する、直接的又は間接的に検出可能な抗原又は抗体や、被固定化物質と抗原抗体反応により結合する、直接的又は間接的に検出可能な抗原又は抗体(直接的又は間接的に検出可能な標的物質を含む)が例示できる。更に、免疫アッセイに必要な成分としては、間接的な検出に用いるための、前記間接的に検出可能な抗原又は抗体と結合可能な標識物質や、検出用試薬(例えば標識物質が酵素である場合には酵素活性により化学発光する化学発光基質、酵素活性により発色する発色基質、酵素活性により化学蛍光を発する化学蛍光基質等)が挙げられる。「直接的又は間接的に検出可能な抗原又は抗体」及び「直接的又は間接的に検出可能な標的物質」は上記「免疫アッセイ」の欄にて説明したのと同様のものが使用できる。該キットは更に、被固定化物質を物質固定化用担体に固定化するために用いられる試薬(例えば糖類や非イオン性界面活性剤が溶解された、被固定化物質を溶解するための緩衝液)を含んでもよい。
図1は物質固定化用担体に関する本発明の一実施形態を表す。ポリスチレンからなる支持体表面にポリシロキサンを含むプライマー層が形成されている。プライマー層にはPEG鎖の片末端が共有結合している。PEG鎖の別の片末端には(1H−イミダゾール−1−イル)カルボニル基が存在する。親水性ポリマー層は、PEG鎖の数平均分子量が176〜25000であるという条件、XPSにおける元素濃度比N(1s)/C−Oが0.010〜0.100の範囲にあるという条件、のうち少なくとも1つの条件を満足する。
図2に示した方法で物質固定化用担体を製造した。具体的な手順を以下に記す。
1.65mlの3−グリシドキシプロピルトリメトキシシラン(モメンティブ・パフォーマンス・マテリアルズ)に0.35mlの希塩酸(pH2.4)を添加してシラノールを調製した。これを100mlの2−プロパノール(純正化学)に添加した。ここに、さらに4mlのトリエチルアミン(和光純薬)を添加した。このシラノール溶液を96穴マイクロプレート(BD FalconTM)の各ウェルに100μlずつ分注した。そのまま室温で75分間放置した。その後、ウェル内を純水で洗浄し、窒素ブローで乾燥させた。この操作によってマイクロプレートのウェル内にポリシロキサンとエポキシ基を含むプライマー層が形成された。次に、触媒量の濃硫酸を含んだPEG4000(数平均分子量2700〜3400、関東化学)を各ウェルに100μlずつ分注した。そのまま90℃で30分間加熱した。その後、ウェル内を純水で洗浄し、窒素ブローで乾燥させた。この操作によってプライマー層上にPEGを含む親水性ポリマー層が形成された。次に、脱水アセトニトリル(関東化学)と脱水ジメチルスルホキシド(関東化学)の等重量混合溶媒を用いて終濃度0.5MのCDI(東京化成)溶液を調製し、これを各ウェルに10μlずつ分注した。そのまま室温で20分間放置した。その後、ウェル内を純水で洗浄し、窒素ブローで乾燥させた。この操作によって親水性ポリマー層に含まれるPEGの末端に(1H−イミダゾール−1−イル)カルボニル基が導入されたPEG誘導体が形成された。
実施例2の物質固定化用担体(96穴マイクロプレート)を用いて図3に示すELISA(間接法、抗原-抗体-抗体サンドイッチ法)を実施した。具体的な手順を以下に記す。
未処理の96穴マイクロプレート(BD FalconTM)および従来品の96穴マイクロプレート(酸素プラズマ処理によって親水化されたポリスチレン製96穴マイクロプレート)を用いて図3に示すELISA(間接法)を実施した。具体的な手順を以下に記す。
実施例2で得られた96穴マイクロプレートを用いて図5に示すELISA(抗体-抗原-抗体サンドイッチ法)を実施した。具体的な手順を以下に記す。
未処理の96穴マイクロプレート(BD FalconTM)および従来品の96穴マイクロプレート(酸素プラズマ処理によって親水化されたポリスチレン製96穴マイクロプレート)を用いて図5に示すELISA(抗体-抗原-抗体サンドイッチ法)を実施した。具体的な手順を以下に記す。
シラノール処理時間およびPEG鎖の数平均分子量がELISA(間接法)の感度に及ぼす影響を調べた。具体的な手順を以下に記す。
実施例5で得られた物質固定化用担体のXPS分析を行った。XPS分析は、アルバック・ファイ社製のX線分光分析装置「ESCA5600」を用い、光電子取り込み角度を45°に設定して行った。その結果、表2に示すようにELISAの感度とN(1s)/C−Oとの間に明確な相関が認められた。すなわち、N(1s)/C−Oの値が0.010〜0.100の範囲にあるときに従来よりも顕著に高い感度が得られることがわかった。
前述のように、乾燥に伴うタンパク質の変性を防ぐ目的で、緩衝液にトレハロースを添加することが重要である。実施例4において、トレハロース濃度の異なる緩衝液を6種類用意し、ELISAにおけるトレハロース濃度依存性を検討した。その結果、図7−1〜7−6に示すように、5〜10%(w/v)のトレハロースで固相化時間(被固定化物質溶解溶液の接触から乾燥濃縮工程完了までの時間)に伴うシグナルの低下を防ぐことができることがわかった。
Claims (18)
- 免疫アッセイに用いるための物質固定化用担体であって、
支持体と、
前記支持体の表面に配置された親水性ポリマー層と
を少なくとも含み、
前記親水性ポリマー層が、
数平均分子量が176以上であるポリエチレングリコール鎖と、
標的物質と結合する抗原又は抗体である被固定化物質或いは標的物質である被固定化物質と共有結合を形成可能な、前記ポリエチレングリコール鎖に連結された官能基と
を含む、物質固定化用担体。 - 前記官能基が、n個の窒素原子を含有する官能基を含み、
前記親水性ポリマー層中の窒素濃度が、前記親水性ポリマー層中のC−O結合に由来する炭素濃度を1としたとき、0.010以上、0.050×n以下である、
請求項1の物質固定化用担体。 - 前記窒素を含有する官能基が、(1H−イミダゾール−1−イル)カルボニル基又はスクシンイミジルオキシカルボニル基である、請求項2の物質固定化用担体。
- 免疫アッセイに用いるための物質固定化担体であって、
支持体と、
前記支持体の表面に配置された親水性ポリマー層と、
標的物質と結合する抗原又は抗体である被固定化物質或いは標的物質である被固定化物質と
を少なくとも含み、
前記親水性ポリマー層が、数平均分子量が176以上であるポリエチレングリコール鎖を含み、
前記ポリエチレングリコール鎖と、前記被固定化物質とが共有結合を介して連結されている、物質固定化担体。 - 請求項1〜3のいずれか1項の物質固定化用担体と、前記被固定化物質とから、前記官能基と前記被固定化物質とを反応させて共有結合を形成することにより製造されたものである、請求項4の物質固定化担体。
- 請求項4又は5の物質固定化担体の製造方法であって、
請求項1〜3のいずれか1項の物質固定化用担体と、前記被固定化物質を溶解した溶液とを接触させる、被固定化物質接触工程と、
前記物質固定化用担体に接触させた前記溶液を乾燥濃縮させる、乾燥濃縮工程と、
を含む方法。 - 前記溶液が糖類を含む、請求項6の方法。
- 前記糖類がトレハロースである、請求項7の方法。
- 前記溶液が非イオン性界面活性剤を含む、請求項6〜8のいずれか1項の方法。
- 前記乾燥濃縮工程の後に、前記物質固定化担体とアミノ基を有する低分子化合物とを接触させる工程を更に含む、請求項6〜9のいずれか1項の方法。
- 請求項4又は5の物質固定化担体を用いて標的物質を測定する工程を含む、免疫アッセイにより標的物質を測定する方法。
- 請求項1〜3のいずれか1項の物質固定化用担体を含む、免疫アッセイにより標的物質を測定するためのキット。
- 請求項4又は5の物質固定化担体を含む、免疫アッセイにより標的物質を測定するためのキット。
- サンドイッチ方式の免疫アッセイに用いるための、請求項13のキットであって、
被固定化物質が標的物質と結合する抗原又は抗体である、請求項4又は5の物質固定化担体と、
被固定化物質と非競合的に標的物質と結合する、直接的又は間接的に検出可能な抗原又は抗体である、検出可能抗原又は検出可能抗体と、
を少なくとも含むキット。 - 直接競合方式の免疫アッセイに用いるための、請求項13のキットであって、
被固定化物質が標的物質と結合する抗原又は抗体である、請求項4又は5の物質固定化担体と、
測定対象試料中の標的物質と競合的に前記被固定化物質と結合する、直接的又は間接的に検出可能な標的物質である、検出可能標的物質と
を少なくとも含むキット。 - 間接競合方式の免疫アッセイに用いるための、請求項13のキットであって、
被固定化物質が標的物質である、請求項4又は5の物質固定化担体と、
測定対象試料中の標的物質と被固定化物質とが競合的に結合する、直接的又は間接的に検出可能な抗原又は抗体である、検出可能抗原又は検出可能抗体と、
を少なくとも含むキット。 - 免疫アッセイに用いるための物質固定化用担体であって、
支持体と、
前記支持体の表面に配置された親水性ポリマー層と
を少なくとも含み、
前記親水性ポリマー層が、
ポリエチレングリコール鎖と、
標的物質と結合する抗原又は抗体である被固定化物質或いは標的物質である被固定化物質と共有結合を形成可能な、前記ポリエチレングリコール鎖に連結された官能基と
を含み、
前記官能基が、n個の窒素原子を含有する官能基を含み、
前記親水性ポリマー層中の窒素濃度が、前記親水性ポリマー層中のC−O結合に由来する炭素濃度を1としたとき、0.010以上、0.050×n以下である、
物質固定化用担体。 - 請求項17の物質固定化用担体を含む、免疫アッセイにより標的物質を測定するためのキット。
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