JP2012530085A

JP2012530085A - トリペプチドボロン酸又はトリペプチドボロン酸エステル、その調製方法及び使用

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Publication number: JP2012530085A
Application number: JP2012515329A
Authority: JP
Inventors: リー、ルンタオ; ツゥイ、ジーンローン; ジュウ、ヨーンチアーン; ヤオ、シュウヤーン; ゴァ、ゾァメイ; チュヨン、ティエミーン
Original assignee: Peking University
Current assignee: Peking University
Priority date: 2009-06-19
Filing date: 2010-05-17
Publication date: 2012-11-29
Anticipated expiration: 2030-05-17
Also published as: EP2444411A4; CN101928329B; EP2444411B1; JP5860397B2; EP2444411A1; US9421237B2; CN101928329A; US20120135921A1; WO2010145376A1

Abstract

本発明は、式（Ｉ）により表されるトリペプチドボロン酸又はトリペプチドボロン酸エステルのプロテアソーム阻害剤、その調製方法及び使用を開示する。プロテアソーム阻害剤は、悪性腫瘍、多数種の神経系変性疾患、筋悪液質、又は糖尿病を治療するための治療剤であり、ここで悪性腫瘍は白血病、胃がん、肝臓がん又は上咽頭癌である。
【化１】

Description

本発明は薬剤製造の分野に関し、具体的には本発明は、新たな種類のトリペプチドボロン酸化合物又はトリペプチドボロン酸エステル化合物、その調製方法及び使用に関する。上記トリペプチドボロン酸化合物又はトリペプチドボロン酸エステル化合物は優れたプロテアソーム阻害活性を有し、これを様々な遺伝性疾患、例えば悪性腫瘍、様々な神経系変性疾患、筋悪液質、糖尿病等を治療するのに使用することができる。

２００４年１０月６日、スウェーデン王立科学アカデミーは、その年のノーベル化学賞が、イスラエルの科学者Aaron Ciechanover、Avram Hershko、及びアメリカの科学者Irwin Roseに、ユビキチン−プロテアソーム経路（以下では「ＵＰＰ」と称される）により調節されるタンパク質分解プロセスの発見に対して授与されることを公表した。ユビキチン−プロテアソームにより調節されるタンパク質分解の経路は生命の領域において多大なる重要性を有することが示されている。

ユビキチン（略してＵｂ）は、７６個のアミノ酸からなる分子量８．５ｋＤの高度に保存されたポリペプチド鎖である。多数の分子生化学的研究、細胞研究、遺伝学的研究及び臨床研究により、ユビキチン−プロテアソームにより分解されるタンパク質のプロセスが、多くの生理学的プロセスの調節、及び様々な重要なヒトの疾患の発症にとって重要であることが示された。この分解プロセスが、神経変性疾患、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、ハンチントン病（ＨＤ）、クロイツフェルト・ヤコブ病（ＣＪＤ）及び糖尿病の発病にも大きな影響を有することが、最近発見されている。

プロテアソームが、細胞周期制御に関与するタンパク質、例えばＧ１期及び有糸分裂期に作用するサイクリン、ｃｄｋ阻害剤、腫瘍抑制タンパク質、及び他の調節タンパク質のレベルを変調させることができることはよく知られている。ＵＰＰ依存性タンパク質分解経路は、細胞再生及び細胞死の制御において重要な役割を果たすことが確認されており、この経路は、神経系変性疾患、例えばＰＤ、ＡＤ等にも大きな影響を有する。新たな阻害剤の使用により、ユビキチン−プロテアソームの更に新しく未知の機能が明らかとなるであろう。

今日まで、見出されたプロテアソーム阻害剤は、２種類、すなわちペプチド系阻害剤及び非ペプチド系阻害剤に分類することができる。ペプチド系阻害剤は通常、短鎖ペプチド、及びそのＣ末端と結合した様々なファーマコフォアにより構成されており、ファーマコフォアはプロテアソームの触媒性アミノ酸残基（主に、Ｎ末端のスレオニンのヒドロキシ）と反応して可逆的又は不可逆的な共有結合複合体を形成し、該ペプチド鎖の残りはサブユニット活性部位中の他の残基と選択的に結合する。現在のところ、主要なファーマコフォアとしては、アルデヒド基（ペプチドアルデヒド）、ビニルスルホン、ボロン酸（ペプチドボロン酸）及びα’，β’−エポキシケトン等が挙げられる。

ペプチドアルデヒド阻害剤と比較して、ペプチドボロン酸阻害剤は、これらの化合物のファーマコフォアであるボロン酸基又はボロン酸エステル基の安定性及び選択性がアルデヒド基の安定性及び選択性より良好であること、並びにホウ素物質の毒性が非常に低く、これらは最終的に環境に優しいボロン酸へと分解することができることを理由として、より良好な薬剤適合性を有する。例えば、ジペプチドボロン酸阻害剤であるＰＳ３４１（英語名はボルテゾミブ又はＶＥＬＣＡＤＥであり、中国語名は硼替佐米であり、万珂とも称される）は、America Millennium Pharmaceuticalsにより開発され、アメリカ合衆国、欧州連合及び中華人民共和国において既に上市されている新規な抗腫瘍薬である。この薬剤は主に、多発性骨髄腫（ＭＭ）に罹患しており少なくとも２つ以上の治療を受けた患者に対して投与されており、この薬剤は、世界中で臨床治療において現在使用されている唯一の承認済プロテアソーム阻害剤である。この薬剤は、伝統的な抗腫瘍薬に関する薬剤耐性を克服することができるため、多発性骨髄腫の治療に希望をもたらしている。

特許文献１は、トリペプチドボロン酸エステル化合物を含む、新たな種類のボロン酸エステル化合物Ｐ−ＡＡ¹−ＡＡ¹−ＡＡ³−Ｂ（Ｚ¹）（Ｚ²）を開示している。しかしながら、ほんの数種類のトリペプチド化合物しか開示されておらず、上記トリペプチド化合物の構造は、Ｌ−Ｌｅｕ−Ｌ−Ｌｅｕ−Ｌ−Ｌｅｕ又はＬ−Ｌｅｕ−Ｌ−Ｎａｌ−Ｌ−Ｌｅｕという２種類の構造のみである。この特許において提示されているデータは、ジペプチド化合物の活性がトリペプチド化合物の活性より良好であることを示している。

特許文献２は、トリペプチドアルデヒド化合物が高い活性を有するプロテアソーム阻害剤の一種であることを報告している。しかし、これらの阻害剤のファーマコフォアがアルデヒド基であるため、これらの阻害剤の選択性及び安定性は両方とも非常に乏しい。

これに基づき、本発明者らは研究を行い、より望ましいプロテアソーム阻害活性を有する新たな種類のトリペプチドボロン酸化合物又はトリペプチドボロン酸エステル化合物を発見した。

米国特許第５，７８０，４５４号明細書米国特許第５，６９３，６１７号明細書

本発明の目的は、一般式（Ｉ）：

（式中、Ｒ₁、Ｒ₂及びＲ₃は各々独立してＬ−アミノ酸の側鎖であり、ＥはＨ又は２，３−ピナンジオールエステル基であり、アミノ酸はα−アミノ酸であり、好ましくはアミノ酸は天然アミノ酸である）
により表される新たな種類のトリペプチドボロン酸化合物又はトリペプチドボロン酸エステル化合物を提供することである。

好ましくはＲ₁、Ｒ₂及びＲ₃は各々独立してＣ_1~6の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル、アリールメチル、又は芳香族ヘテロシクリルメチルであり、アリールメチルの芳香族環又は芳香族ヘテロシクリルメチルの芳香族環は、Ｃ_1~4の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル、ヒドロキシル基、アミノ基、又はハロゲンから選択される基により任意に置換することができる。

本発明の化合物の定義では、「Ｃ_1~6の直鎖又は分岐鎖のアルキル」という用語は、１個〜６個の炭素原子を含有する直鎖又は分岐鎖の飽和ヒドロカルビル、好ましくは３個〜４個の炭素原子を含有する直鎖又は分岐鎖のアルキル、例えばプロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル又はｔ−ブチル等、より好ましくはイソプロピル、イソブチル又はｔ−ブチル、最も好ましくはイソブチルを表す。同様に、本明細書で使用される場合の「Ｃ_1~4の直鎖又は分岐鎖のアルキル」という用語は、１個〜４個の炭素原子を含有する直鎖又は分岐鎖の飽和ヒドロカルビル、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル又はｔ−ブチル等、好ましくはメチルを表す。

本明細書で使用される場合の「アリール」という用語は、６個〜１０個の炭素原子を含有する芳香族基、好ましくはフェニル又はナフチルを表す。

本明細書で使用される場合の「芳香族ヘテロシクリル」という用語は、Ｎ、Ｏ及び／又はＳから選択される１つ又は複数のヘテロ原子を含有する５員又は６員のヘテロ芳香族環を表し、５員環又は６員環はベンゼン環と融合していてもよく、融合する基は例えばピロリル、ピリジル、フリル、チエニル、インジル（indyl）、ベンゾチエニル、キノリル又はイソキノリル等の基であり、より好ましくは芳香族ヘテロシクリルはインジルである。

上の定義では、アリールメチル又は芳香族ヘテロシクリルメチルの芳香族環は、Ｃ_1~4の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル、ヒドロキシル基、アミノ基、又はハロゲンから選択される基により任意に置換されていてもよく、ここで「ハロゲン」という用語は、フッ素原子、塩素原子、臭素原子及びヨウ素原子、好ましくはフッ素原子、塩素原子又はヨウ素原子を表し、芳香族環上の置換基は、好ましくはメチル基、ヒドロキシル基、フッ素原子又は塩素原子である。

好ましくは、上記Ｒ₁、上記Ｒ₂及び上記Ｒ₃は各々独立してＬ−アミノ酸の側鎖、例えばベンジル、ｐ−ヒドロキシベンジル、β−インジルメチル、イソブチル又は２−ナフチルメチル等であり、より好ましくは上記Ｒ₃基はイソブチルである。

上の定義によれば、本発明の化合物中のトリペプチド部分の３つのアミノ酸は好ましくは、以下のＬ−アミノ酸：ロイシン、トリプトファン、フェニルアラニン、チロシン及び２−ナフチルアラニンの任意の組合せであり、より好ましくはＲ₃基はイソブチルであり、すなわちボロン酸又はボロン酸エステルの末端に最も近いアミノ酸はロイシンである。

好ましくは、本発明は以下の化合物を提供する：
１．ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート（５ａ）、
２．ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｂ）、
３．ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−チロシル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｃ）、
４．ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−チロシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｄ）、
５．ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｅ）、
６．ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｆ）、
７．ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｇ）、
８．ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｈ）、
９．ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｉ）、
１０．ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｊ）、
１１．ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｋ）、
１２．ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｌ）、
１３．ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｍ）、
１４．Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ａ）、
１５．Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｂ）、
１６．Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−チロシル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｃ）、
１７．Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−チロシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｄ）、
１８．Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｅ）、
１９．Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｆ）、
２０．Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｇ）、
２１．Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｈ）、
２２．Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｉ）、
２３．Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｊ）、
２４．Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｋ）、
２５．Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｌ）、及び
２６．Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｍ）。

ここで、括弧内の通し番号は、本発明の化合物の説明に使用される通し番号である。

本発明の別の目的は、上で言及した上記の一般式により表される化合物の調製方法を提供することであり、この方法は、出発原材料としてピラジンカルボン酸を使用する工程、所要の２つのアミノ酸を１つずつ導入する工程、及びその後、所要の第３のアミノ酸のボロン酸エステルを導入して、本発明の上記の一般式（Ｉ）のボロン酸エステルを得る工程を含み、対応するボロン酸を調製することが必要とされる場合、上で言及した上記の一般式（Ｉ）のボロン酸エステルを加水分解することにより調製を実施することができる。

ここで、Ｒ₃基がイソブチルである、すなわちボロン酸又はボロン酸エステルの末端に最も近いアミノ酸がロイシンである一般式の化合物を、出発原材料としてピラジンカルボン酸を使用することにより以下の合成経路に従って調製することができる：

上記の方法はアミノ酸を１つずつ導入する工程を主に含み、アミノ酸を導入する各工程が、最初にピラジンカルボン酸をアミノ酸のメチルエステルと反応させること、その後、得られる化合物を加水分解して、対応するアミノ酸を得ることを含み、アミノ酸を導入するプロセスは、ペプチド合成において使用される通例の方法に従って実施することができる。

ここで、原材料として使用されるロイシンボレート（本発明との関連では略してＬｅｕＢｄｉｏｌ−ＮＨ₂）は、文献（Hall, D. G., Structure, properties, and preparation of boronic acid derivatives, WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KgaA, Weinheim. 2005, p8）中で開示される方法に従って調製することができ、又は以下の合成経路に従って調製することができる：

ここで、原材料として本明細書で使用されるｃｉｓ−キラルピナンジオール（（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｓ）−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−２，３−ジオール）は、より高い立体障害を有する非常に効率的なキラル試薬である。上記試薬は、市販されており、又は既知のアプローチを使用して合成することができる。

本発明の更なる目的は、プロテアソームにより媒介される疾患を治療するために、例えば悪性腫瘍、様々な神経系変性疾患、筋悪液質、又は糖尿病等の治療に使用されるプロテアソーム阻害剤である、医薬組成物を提供することである。該組成物は、活性成分として本発明の一般式（Ｉ）のトリペプチドボロン酸化合物又はトリペプチドボロン酸エステル化合物、及び任意に薬学的担体（複数も可）を含有する。

具体的には、該組成物は、治療上の有効量の本発明の一般式（Ｉ）の化合物、及び１種又は複数種の薬学的に許容可能な担体を含有する。好ましくは、本発明の組成物中の活性成分の含有量は０．５％〜９９％であり、薬学的担体（複数も可）の含有量は１％〜９９．５％である。

本発明の組成物は、様々な従来の薬学的な剤形、例えば経口投与用の形態、非経口投与用の形態へと構築することができる。上記非経口投与用の形態は、注射投与、局所投与、吸入投与、直腸投与又は埋め込み投与に好適な様々な形態である。好ましくは該形態は注射投与に好適なもの、例えば注射剤、凍結乾燥粉末注射剤若しくは点滴溶液であり、又は該形態は経口投与に好適なもの、例えば錠剤、カプセル、顆粒、若しくは経口投与に好適な他の液体調製物、例えば溶液、乳濁液、懸濁液等である。好ましくは経口調製物は、コーティング形態又は腸溶コーティング形態へと構築することができる錠剤であり、好ましくは経口調製物は、持続放出形態又は定量放出形態へと構築することができる。

好適な剤形を調製するために、１種又は複数種の薬学的担体を、必要に応じて活性成分中に添加することができ、上記薬学的担体は、様々な通例の薬学的補助剤、例えば賦形剤、充填剤、希釈剤、崩壊剤、界面活性剤、湿潤剤、保存料、甘味料及び色素等を含む。

疾患の種類及び重症度、並びに患者の状態、例えば性別、年齢、体重（ｂｗ）等に応じて、適切な調製物及び適用される投与量が選択される。一般的には、成人に対して適用される投与量は、１ｍｇ／ｋｇ（ｂｗ）／日〜２００ｍｇ／ｋｇ（ｂｗ）／日、好ましくは１ｍｇ／ｋｇ（ｂｗ）／日〜５０ｍｇ／ｋｇ（ｂｗ）／日である。

本発明の医薬組成物及びその様々な剤形は、通例の薬学的担体を使用する薬学的領域において既知の通例のアプローチに従って調製することができる。

本発明のトリペプチドボロン酸化合物又はトリペプチドボロン酸エステル化合物は、疾患、例えば悪性腫瘍、様々な神経系変性疾患、筋悪液質、又は糖尿病等を治療するための新たなプロテアソーム阻害剤として使用することができる、プロテアソームに対する好ましい阻害活性を有する。

本発明の別の目的は、一般式（Ｉ）の化合物、及びかかる化合物を含有する医薬組成物の薬学的な使用を提供することである。すなわち、本発明は、プロテアソーム阻害剤の調製のための一般式（Ｉ）の化合物、及び前述の化合物を含有する医薬組成物の使用、特に、疾患、例えば悪性腫瘍、様々な神経系変性疾患、筋悪液質、又は糖尿病等を治療するための薬物の調製における化合物又は医薬組成物の使用を提供する。該疾患は、様々な悪性腫瘍、神経変性疾患、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、クロイツフェルト・ヤコブ病、及び糖尿病を含み、上記悪性腫瘍は白血病、胃がん、肝臓癌又は上咽頭癌である。

本発明の別の目的は、様々な悪性腫瘍、神経変性疾患、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、クロイツフェルト・ヤコブ病、又は糖尿病を治療する方法であって、治療上の有効量の一般式（Ｉ）の化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む、方法を提供することであり、ここで上記悪性腫瘍は、白血病、胃がん、肝臓癌又は上咽頭癌等である。

本発明のトリペプチドボロン酸又はトリペプチドボロン酸エステルがプロテアソームに対する好ましい阻害活性を有し、その抗腫瘍活性が既知の薬剤ボルテゾミブの抗腫瘍活性より良好であることが判明しており、したがって悪性腫瘍を治療するために、特に多発性骨髄腫を治療するためにボルテゾミブの代わりにトリペプチドボロン酸又はトリペプチドボロン酸エステルを使用することができる。ＨＬ−６０（ヒト白血病）、ＢＧＣ−８２３（ヒト胃がん）、Ｂｅｌ−７４０２（ヒト肝臓癌）及びＫＢ（ヒト上咽頭癌）という試験モデルに対する実験では、本発明の化合物が好ましい活性を示す。

以下の具体的な実施形態は、本発明の技術的解決策の更なる例示のために使用するものであり、列挙される例は、本発明を例示することのみを意図しており、本発明の保護範囲を限定することは決して意図していない。

調製例１Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩
２５ｍｌの無水メタノールを１００ｍｌ容の反応フラスコに添加し、それから氷塩浴を使用して−１０℃以下まで冷却し、ＳＯＣｌ₂（７ｍｌ、９６ｍｍｏｌ）を撹拌しながらゆっくりと液滴で添加し、それから−１０℃以下の温度で１０分間反応させ、その後Ｌ−フェニルアラニン（１．６５ｇ、１０ｍｍｏｌ）を添加し、低温で４０分間反応させ、氷塩浴を除去し、得られた溶液を室温で４８時間反応させ、減圧下で濃縮し、１５ｍｌのメタノールを添加し、得られた溶液を減圧下で２回濃縮した。５０ｍｌのジエチルエーテルを添加し、放置して（standing）、針状結晶を沈殿させ、濾過し、乾燥させ、得られた粗生成物をメタノール−ジエチルエーテルから再結晶化させ、Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩の２．０ｇの白色結晶を９５％の収率で得た。［α］_D ²⁵＝＋３７．２°（ｃ＝１、ＣＨ₃ＣＨ₂ＯＨ）、ｍ．ｐ．：１５５℃〜１５８℃。

調製例２Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル
調製例１の生成物Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（１．１２ｇ、５．２ｍｍｏｌ）を、２０ｍｌのＴＨＦに溶解し、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）（０．７ｍｌ、６．２ｍｍｏｌ）で中和し、それから後で使用するために氷浴で冷却した。ピラジンカルボン酸（０．６５ｇ、５．２ｍｍｏｌ）を別の反応フラスコに添加し、２０ｍｌのＴＨＦで溶解し、氷水浴で冷却し、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（１．０７ｇ、５．２ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ（０．８４ｇ、６．２ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、０℃で４０分間反応させ、それに上記に従って調製、冷却及び中和したＬ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩のＴＨＦ溶液を添加し、反応をＴＬＣによりモニタリングし、２時間後に完了させ、不溶性のＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシル尿素（ＤＣＵ）を濾過により除去し、１５０ｍｌの酢酸エチルを濾液に添加し、５％炭酸水素ナトリウム溶液、１０％クエン酸溶液、５％炭酸水素ナトリウム溶液、飽和塩溶液（２×２０ｍｌ）で順次洗浄した。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させ、１．３７ｇの白色固体を９８％の収率で得た。ｍ．ｐ．：１５２℃〜１５５℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ３．２６（−ＣＨ₂、ｍ、２Ｈ）、３．７５（−ＣＨ₃、ｓ、３Ｈ）、５．０９（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、７．１５〜７．３２（−Ｐｈ、ｍ、５Ｈ）、８．２３（−ＣＯＮＨ、ｄ、１Ｈ）、８．５２（−Ｐｙｚ、ｄ、１Ｈ）、８．７４（−Ｐｙｚ、ｄ、１Ｈ）、９．３７（−Ｐｙｚ、ｓ、１Ｈ）。

調製例３Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニン
調製例２の生成物Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル（１．０ｇ、３．５１ｍｍｏｌ）を、１０ｍｌのアセトンで溶解し、ｐＨ値が１２〜１３となるまで２ＮＮａＯＨをゆっくりと液滴で添加し、溶液を氷水浴の条件下で反応させ続け、反応をＴＬＣによりモニタリングし、２時間後に完了させた。ｐＨ値が２〜３となるまで塩酸を氷水浴の条件下で液滴で添加し、大量の白色固体を生成させ、生じた沈殿を濾過し、水及びジエチルエーテルで洗浄し、その後風乾し、０．８９ｇの白色生成物を９３．６％の収率で得た。ｍ．ｐ．：１６６℃〜１６９℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆、３００ＭＨｚ）：δ３．２３（−ＣＨ₂、ｍ、２Ｈ）、４．７４（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、７．１６〜７．２５（−Ｐｈ、ｍ、５Ｈ）、８．７４（−ＣＯＮＨ、ｔ、１Ｈ）、８．８６〜８．８９（−Ｐｙｚ、ｔ、２Ｈ）、９．１４（−Ｐｙｚ、ｄ、１Ｈ）、１３．０６（−ＣＯＯＨ、ｓ、１Ｈ）。

調製例４Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル
Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（０．８ｇ、３．６９ｍｍｏｌ）を２０ｍｌのＴＨＦで溶解し、それから塩酸をＮＭＭ（０．４９ｍｌ、４．４３ｍｍｏｌ）で中和し、後で使用するために氷浴で冷却した。調製例３のＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニン（１．０ｇ、３．６９ｍｍｏｌ）を別の反応フラスコに添加し、２０ｍｌのＴＨＦで溶解し、氷水浴で冷却し、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（０．７６ｇ、３．６９ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．６０ｇ、４．４２ｍｍｏｌ）を０℃で添加し、０℃で４０分間反応させ、それから上記に従って調製、冷却及び中和したＬ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩のＴＨＦ溶液を添加し、反応をＴＬＣによりモニタリングし、２時間後に完了させ、不溶性のＤＣＵを濾過により除去し、８０ｍｌの酢酸エチルを濾液に添加し、５％炭酸水素ナトリウム溶液、１０％クエン酸溶液、５％炭酸水素ナトリウム溶液、飽和塩溶液（２×２０ｍｌ）で順次洗浄した。酢酸エチル層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させ、１．５２ｇの白色固体を９５．６％の収率で得た。ｍ．ｐ．：１１１℃〜１１３℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ３．０４（−ＣＨ₂、ｍ、２Ｈ）、３．１８（−ＣＨ₂、ｄ、２Ｈ）、３．６９（−ＣＨ₃、ｓ、３Ｈ）、４．８２（−ＣＨ、ｍ、２Ｈ）、６．３６（−ＣＯＮＨ、ｄ、１Ｈ）、６．９２〜７．３０（−Ｐｈ、ｍ、１０Ｈ）、８．２６（−ＣＯＮＨ、ｄ、１Ｈ）、８．５４（−Ｐｙｚ、ｄ、１Ｈ）、８．７６（−Ｐｙｚ、ｄ、１Ｈ）、９．３３（−Ｐｙｚ、ｓ、１Ｈ）。

調製例５Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニン
調製例４の生成物Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル（１．５２ｇ、３．５２ｍｍｏｌ）を１０ｍｌのアセトンで溶解し、ｐＨ値が１２〜１３となるまで２ＮＮａＯＨを氷水浴の条件下でゆっくりと液滴で添加し、溶液を氷水浴の条件下で反応させ続け、反応をＴＬＣによりモニタリングし、２時間後に完了させた。ｐＨ値が２〜３となるまで塩酸を氷水浴の条件下で液滴で添加し、大量の白色固体を生成させ、生じた沈殿を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、その後風乾し、１．３３ｇの白色生成物を９０．５％の収率で得た。白色固体の融点：１９４℃〜１９６℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆、３００ＭＨｚ）：δ１２．８８（ｓ、１Ｈ）、９．１０（ｓ、１Ｈ）、８．９０〜８．８７（ｍ、１Ｈ）、８．７７〜８．７３（ｍ、１Ｈ）、８．７５〜８．６５（ｍ、２Ｈ）、７．２４〜７．１４（ｍ、１０Ｈ）、４．８４〜４．８０（ｍ、１Ｈ）、４．５３〜４．５０（ｍ、１Ｈ）、３．１４〜２．８９（ｍ、４Ｈ）。

調製例６Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニン
原材料としてナフチルアラニンメチルエステル塩酸塩を使用して、合成及び処理（work-up）の手順は調製例３に記載のものと同様とした。２．９６ｇの赤褐色の粘着性固体を９７．４％の収率で得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆、３００ＭＨｚ）：δ４．７８（−ＣＨ、ｓ、１Ｈ）、６．９２〜７．５４（＝ＣＨ、ｍ、５Ｈ）、８．７４（−ＣＯＮＨ、−Ｐｙｚ、ｄ、２Ｈ）、８．８７（−Ｐｙｚ、ｓ、１Ｈ）、９．１５（−Ｐｙｚ、ｓ、１Ｈ）、１０．８６（−ＮＨ、ｓ、１Ｈ）、１３．０４（−ＣＯＯＨ、ｓ、１Ｈ）。

調製例７Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル
原材料として調製例６の生成物Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニンを使用して、合成アプローチ及び処理は調製例４に記載のものと同様とした。１．８９ｇの黄色の粘着性物質を９４．２％の収率で得た。生成物を次のけん化の工程に直接使用した。

調製例８Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−フェニルアラニン
原材料として調製例７の生成物２ｂを使用して、合成アプローチ及び処理は調製例５に記載のものと同様とした。収率は７７％であった。白色固体、ｍ．ｐ．：１９６℃〜１９７℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆、３００ＭＨｚ）：δ９．０７（ｓ、１Ｈ）、８．８６（ｄ、Ｊ＝２．７Ｈｚ、１Ｈ）、８．７０（ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．６８〜８．６２（ｍ、２Ｈ）、７．８３〜７．７２（ｍ、４Ｈ）、７．４５〜７．３７（ｍ、３Ｈ）、７．２４〜７．１７（ｍ、５Ｈ）、４．９３〜４．９１（ｍ、１Ｈ）、４．５３〜４．５０（ｍ、１Ｈ）、３．２４〜２．９８（ｍ、４Ｈ）。

調製例９Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−チロシンメチルエステル
原材料として調製例３の生成物及びチロシンメチルエステル塩酸塩を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例４に記載のものと同様とした。黄色の粘着性物質を９２％の収率で得た。生成物を次のけん化の工程に直接使用した。

調製例１０Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−チロシン
原材料として調製例９の生成物２ｃを使用して、合成アプローチ及び処理は調製例５に記載のものと同様とした。泡沫性固体を８３％の収率で得て、生成物を次の反応に直接使用した。

調製例１１Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−チロシン
原材料としてＮ−ピラジンカルボン酸及びチロシンメチルエステル塩酸塩を使用して、合成アプローチは調製例３に記載のものと同様とした。乳白色の粘着性固体を８９％の収率で得て、生成物を次の反応に直接使用した。

調製例１２Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−チロシル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル
原材料として調製例１１の生成物を使用して、合成方法及び処理は調製例４に記載のものと同様とした。２．２６ｇの黄色の粘稠性物質を９５．５％の収率で得て、生成物を次のけん化の工程に直接使用した。

調製例１３Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−チロシル−Ｌ−フェニルアラニン
原材料として調製例１２の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例５に記載のものと同様とした。泡沫性固体を８６％の収率で得て、生成物を次の反応に直接使用した。

調製例１４Ｌ−ロイシンメチルエステル塩酸塩
原材料としてＬ−ロイシンを使用して、合成アプローチ及び処理は調製例１に記載のものと同様とした。１．７ｇの白色結晶を９４％の収率で得た。［α］Ｄ²⁵＝＋２０．２°（ｃ＝１、ＣＨ₃ＯＨ）、ｍ．ｐ．：１４９℃〜１５０℃。

調製例１５Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシンメチルエステル
原材料として調製例１４の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例２に記載のものと同様とした。２．４７ｇの赤色の粘着性液体を９８％の収率で得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ０．９７〜０．９９（−ＣＨ₃、ｍ、６Ｈ）、１．６９〜１．８３（−ＣＨ₂、−ＣＨ、ｍ、３Ｈ）、３．７８（−ＣＨ₃、ｓ、３Ｈ）、４．８２〜４．９０（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、８．１５（−ＣＯＮＨ、ｄ、１Ｈ）、８．５７（−Ｐｙｚ、ｑ、１Ｈ）、８．７８（−Ｐｙｚ、ｄ、１Ｈ）、９．４０（−Ｐｙｚ、ｓ、１Ｈ）。

調製例１６Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシン
原材料として調製例１５の生成物Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシンメチルエステルを使用して、合成アプローチ及び処理は調製例３に記載のものと同様とした。２．２２ｇの白色固体を９５％の収率で得た。ｍ．ｐ．：３６℃〜３８℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆、３００ＭＨｚ）：δ０．８８〜０．９１（−ＣＨ₃、ｔ、６Ｈ）、１．５７〜１．６４（−ＣＨ₂、ｍ、２Ｈ）、１．８１〜１．９１（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、４．４８〜４．５５（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、８．７７（−ＣＯＮＨ、ｑ、１Ｈ）、８．９０〜８．９５（−Ｐｙｚ、ｄｄ、２Ｈ）、９．１９（−Ｐｙｚ、ｄ、１Ｈ）、１２．８１（−ＣＯＯＨ、ｓ、１Ｈ）。

調製例１７Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル
原材料として調製例１６の生成物Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシンを使用して、合成アプローチ及び処理は調製例４に記載のものと同様とした。生成物は黄色の粘着性物質であり、収率は９３％であった。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ０．９２〜０．９６（−ＣＨ₃、ｄｄ、６Ｈ）、１．６４〜１．７９（−ＣＨ₂、−ＣＨ、ｍ、３Ｈ）、３．０２〜３．２０（−ＣＨ₂、ｍ、２Ｈ）、３．７４（−ＣＨ₃、ｓ、３Ｈ）、４．６４（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、４．８８（−ＣＨ、ｄｄ、１Ｈ）、６．６４（−ＣＯＮＨ、ｄ、１Ｈ）、７．０３〜７．１０（−Ｐｈ、ｍ、５Ｈ）、８．０３（−ＣＯＮＨ、ｄ、１Ｈ）、８．５５（−Ｐｙｚ、ｑ、１Ｈ）、８．７９（−Ｐｙｚ、ｄ、１Ｈ）、９．３６（−Ｐｙｚ、ｄ、１Ｈ）。

調製例１８Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニン
原材料として調製例１７の生成物２ｅを使用して、合成アプローチ及び処理は調製例１８に記載のものと同様とした。粘着性固体を９５．６％の収率で得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆、３００ＭＨｚ）：δ１２．６１（ｓ、１Ｈ）、９．２０（ｓ、１Ｈ）、８．９８〜８．９１（ｍ、１Ｈ）、８．７７（ｓ、１Ｈ）、８．６６〜８．６２（ｍ、１Ｈ）、８．４６〜８．４４（ｍ、１Ｈ）、７．２２〜７．１５（ｍ、５Ｈ）、４．６１（ｓ、１Ｈ）、４．４８〜４．４６（ｍ、１Ｈ）、３．１０〜２．８７（ｍ、２Ｈ）、１．９８〜１．９２（ｍ、１Ｈ）、１．６２〜１．５９（ｍ、２Ｈ）、０．９２〜０．８８（ｍ、６Ｈ）。

調製例１９Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ナフチルアラニンメチルエステル
原材料として調製例１６の生成物Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシンを使用して、合成アプローチ及び処理は調製例４に記載のものと同様とした。２．１ｇの黄色の粘着性物質を９３％の収率で得た。生成物を次のけん化の工程に直接使用した。

調製例２０Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ナフチルアラニン
原材料として調製例１９の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例５に記載のものと同様とした。白色固体を８３％の収率で得た。ｍ．ｐ．：９９℃〜１００℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆、３００ＭＨｚ）：δ９．１６（ｓ、１Ｈ）、８．８９（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．７０（ｄ、Ｊ＝１．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．５８（ｄ、Ｊ＝９．０Ｈｚ、１Ｈ）、８．４６（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．７９〜７．７３（ｍ、４Ｈ）、４．６０〜４．５７（ｍ、１Ｈ）、４．５５〜４．５３（ｍ、１Ｈ）、１．５４〜１．４５（ｍ、３Ｈ）、０．８３〜０．７９（ｍ、６Ｈ）。

調製例２１Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ナフチルアラニンメチルエステル
原材料として調製例３の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例４に記載のものと同様とした。２．３ｇの黄色の粘着性物質を９３．５％の収率で得た。生成物を次の反応に直接使用した。

調製例２２Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ナフチルアラニン
原材料として調製例２１の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例５に記載のものと同様とした。白色固体を７９％の収率で得た。ｍ．ｐ．：１９１℃〜１９３℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆、３００ＭＨｚ）：δ９．０７（ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．８６（ｄ、Ｊ＝２．７Ｈｚ、１Ｈ）、８．６８（ｄ、Ｊ＝１．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．６４〜８．５６（ｍ、２Ｈ）、７．８１〜７．７２（ｍ、４Ｈ）、７．４２〜７．４０（ｍ、３Ｈ）、７．１７〜７．１１（ｍ、５Ｈ）、４．８３〜４．７９（ｍ、１Ｈ）、４．５９〜４．５５（ｍ、１Ｈ）、３．２６〜３．０２（ｍ、４Ｈ）。

調製例２３Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ナフチルアラニンメチルエステル
原材料として調製例６の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例４に記載のものと同様とした。１．８９ｇの黄色の粘着性物質を９４．２％の収率で得た。生成物を次のけん化の工程に直接使用した。

調製例２４Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ナフチルアラニン
原材料として調製例２３の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例５に記載のものと同様とした。淡黄色固体を７２％の収率で得た。ｍ．ｐ．：２０８℃〜２０９℃；¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆、３００ＭＨｚ）：δ９．０４（ｓ、１Ｈ）、８．８４（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．７３〜８．６９（ｍ、１Ｈ）、８．６７〜８．６６（ｍ、２Ｈ）、７．８２〜７．６９（ｍ、８Ｈ）、７．７４〜７．６９（ｍ、６Ｈ）、７．４４〜７．３５（ｍ、６Ｈ）、４．９５〜４．９１（ｍ、１Ｈ）、４．６４〜４．６０（ｍ、１Ｈ）、３．２８〜３．０８（ｍ、Ｈ）。

調製例２５Ｌ−トリプトファンメチルエステル塩酸塩
原材料としてＬ−トリプトファンを使用して、合成アプローチ及び処理は調製例１に記載のものと同様とした。３．０２ｇの白色結晶を９３％の収率で得た。［α］Ｄ²⁵＝＋１６．５°（ｃ＝１、ＣＨ₃ＯＨ）、ｍ．ｐ．：２０６℃〜２０８℃。

調製例２６Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−トリプトファンメチルエステル
原材料としてＮ−ピラジンカルボン酸及び調製例２５の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例２に記載のものと同様とした。３．１８ｇの赤褐色の粘着性物質を９６％の収率で得て、生成物を次の反応に直接使用した。

調製例２７Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−トリプトファン
原材料として調製例２６の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例３に記載のものと同様とした。２．９６ｇの赤褐色の粘着性固体を９７．４％の収率で得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆、３００ＭＨｚ）：δ４．７８（−ＣＨ、ｓ、１Ｈ）、６．９２〜７．５４（＝ＣＨ、ｍ、５Ｈ）、８．７４（−ＣＯＮＨ、−Ｐｙｚ、ｄ、２Ｈ）、８．８７（−Ｐｙｚ、ｓ、１Ｈ）、９．１５（−Ｐｙｚ、ｓ、１Ｈ）、１０．８６（−ＮＨ、ｓ、１Ｈ）、１３．０４（−ＣＯＯＨ、ｓ、１Ｈ）。

調製例２８Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル
原材料として調製例２７の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例４に記載のものと同様とした。２．１３ｇの黄色の粘着性物質を９６．８％の収率で得て、生成物を分離することなくけん化に直接使用した。

調製例２９Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−フェニルアラニン
原材料として調製例２８の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例３に記載のものと同様とした。収率は９６．４％であった。白色固体、ｍ．ｐ．：７４℃〜７６℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆、３００ＭＨｚ）：δ１０．７９（ｓ、１Ｈ）、９．１３（ｓ、１Ｈ）、８．８６（ｓ、１Ｈ）、８．６８（ｓ、１Ｈ）、８．６２〜８．５９（ｍ、２Ｈ）、７．５４〜６．８４（ｍ、１０Ｈ）、４．８４（ｓ、１Ｈ）、４．５８〜４．５０（ｍ、２Ｈ）、３．２０〜３．０９（ｍ、４Ｈ）。

調製例３０Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−トリプトファンメチルエステル
原材料として調製例３の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例４に記載のものと同様とした。１．６５ｇの淡黄色の油性液体を９４．８％の収率で得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ３．１３〜３．２４（−ＣＨ₂、ｍ、４Ｈ）、３．６８（−ＣＨ₃、ｓ、３Ｈ）、４．９０（−ＣＨ、ｑ、１Ｈ）、５．０６（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、６．７９（−ＮＨ、ｓ、１Ｈ）、６．９１〜７．３４（−Ｐｈ、＝ＣＨ、ｍ、１０Ｈ）、８．２６〜８．３３（−ＣＯＮＨ、ｔ、２Ｈ）、８．４３（−Ｐｙｚ、ｄ、１Ｈ）、８．６３（−Ｐｙｚ、ｄ、１Ｈ）、９．１４（−Ｐｙｚ、ｓ、１Ｈ）。

調製例３１Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−トリプトファン
原材料として調製例３０の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例５に記載のものと同様とした。淡黄色の固体を９３．７％の収率で得た。ｍ．ｐ．：１０６℃〜１０８℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆、３００ＭＨｚ）：δ１２．５９（ｓ、１Ｈ）、１０．８７（ｓ、１Ｈ）、９．１６〜９．１２（ｍ、１Ｈ）、８．８９〜８．８７（ｍ、１Ｈ）、８．７５〜８．７２（ｍ、１Ｈ）、８．６６〜８．５９（ｍ、２Ｈ）、７．５６〜６．９６（ｍ、１０Ｈ）、４．８８〜４．８５（ｍ、１Ｈ）、４．５９〜４．５６（ｍ、１Ｈ）、３．２２〜３．０５（ｍ、４Ｈ）。

調製例３２Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンメチルエステル
原材料として調製例３の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例４に記載のものと同様とした。１．２０ｇの白色の粘着性固体を９４．５％の収率で得て、生成物を次のけん化の工程に直接使用した。

調製例３３Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシン
原材料として調製例３２の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例５に記載のものと同様とした。収率は９３．９％であった。淡黄色の固体、ｍ．ｐ．：１４２℃〜１４４℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆、３００ＭＨｚ）：δ１２．７０（ｓ、１Ｈ）、９．１５〜９．１２（ｍ、１Ｈ）、８．９０〜８．８８（ｍ、１Ｈ）、８．７９〜８．７４（ｍ、１Ｈ）、８．６８〜８．６５（ｍ、１Ｈ）、８．５７〜８．５３（ｍ、１Ｈ）、７．２７〜７．１５（ｍ、５Ｈ）、４．９０〜４．８２（ｍ、１Ｈ）、４．３２〜４．２５（ｍ、１Ｈ）、３．２１〜３．０４（ｍ、２Ｈ）、１．６８〜１．５４（ｍ、３Ｈ）、０．９４〜０．９１（ｍ、３Ｈ）、０．８７〜０．８５（ｍ、３Ｈ）。

調製例３４Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンメチルエステル
原材料として調製例１６の生成物Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシンを使用して、合成アプローチ及び処理は調製例４に記載のものと同様とした。１．６９ｇの黄色の粘着性物質を９１．８％の収率で得た。生成物を次のけん化の工程に直接使用した。

調製例３５Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシン
原材料として調製例３４の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例５に記載のものと同様とした。粘着性固体を８３％の収率で得て、生成物を次の反応に直接使用した。

調製例３６Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンメチルエステル
原材料として調製例６の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例４に記載のものと同様とした。１．８ｇの黄色の粘着性物質を９２．５％の収率で得た。生成物を次のけん化の工程に直接使用した。

調製例３７Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシン
原材料として調製例３６の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は調製例５に記載のものと同様とした。白色固体を７８％の収率で得た。ｍ．ｐ．：９８℃〜１００℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆、３００ＭＨｚ）：δ９．０９（ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．８６（ｄ、Ｊ＝２．７Ｈｚ、１Ｈ）、８．７１〜８．７０（ｍ、２Ｈ）、８．５７（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．８４〜７．４５（ｍ、４Ｈ）、７．４３〜７．４２（ｍ、３Ｈ）、５．０２〜４．９６（ｍ、１Ｈ）、４．３２〜４．２８（ｍ、１Ｈ）、１．６６〜１．５８（ｍ、３Ｈ）、０．８９（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、３Ｈ）、０．８３（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、３Ｈ）。

調製例３８（１Ｓ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｓ）−２，６，６−トリメチルビシクロ［３．１．１］ヘプタン−２，３−ジオール
Ｍｅ₃ＮＯ・２Ｈ₂Ｏ（１１．３ｇ、１０２ｍｍｏｌ）を１６ｍｌの水で溶解し、α−ピネン（１３．２ｇ、９６．９ｍｍｏｌ）、７４ｍｌのｔｅｒｔ−ブチルアルコール、７．４ｍｌのピリジン、及び四酸化オスミウム（６０ｍｇ、０．２３６ｍｍｏｌ）を撹拌しながら添加した。それから窒素ガスをパージし、１０分後、反応混合物を加熱還流した。反応をＴＬＣによりモニタリングし、１５時間後に完了させた。室温まで自然冷却し、ＮａＨＳＯ₃（１．２ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）、及び適当量の飽和ＮａＣｌ水溶液を添加した。有機相を分離し、水層をジエチルエーテル（３×２０ｍｌ）で抽出し、有機相を組み合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。生成物を濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィ（酢酸エチル：石油エーテル＝１：３０）により精製し、１５．３３ｇの白色固体を得た。収率は９２．９％であった。［α］Ｄ²⁰＝−１０．７９°（ｃ＝５．５、トルエン）、ｍ．ｐ．：５２℃〜５４℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ０．９４（−ＣＨ₃、ｓ、３Ｈ）、１．２８（−ＣＨ₃、ｓ、３Ｈ）、１．３２（−ＣＨ₃、ｓ、３Ｈ）、１．３４〜１．３８（−ＣＨ₂、ｄ、１Ｈ）、１．６６（−ＣＨ₂、ｍ、１Ｈ）、１．９３（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、２．０１（−ＣＨ₂、ｔ、１Ｈ）、２．２０（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、２．３３（Ｈ₂Ｏ、ｓ、２Ｈ）、２．４９（−ＣＨ₂、ｍ、１Ｈ）、４．００（−ＣＨ、ｑ、１Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ２４．１１、２７．８０、２８．００、２９．５４、３８．２１、３８．９９、４０．５１、５３．９８、６９．２６、７３．８８；元素分析：Ｃ₁₀Ｈ₁₈Ｏ₂、算出値Ｃ、７０．５５；Ｈ、１０．６６；測定値Ｃ、７０．５５；Ｈ、１０．６７。

調製例３９ジクロロメチルボロン酸ジメチルエステル
無水ジクロロメタン（４．２６ｍｌ、６６ｍｍｏｌ）及び１２０ｍｌの無水テトラヒドロフランを２５０ｍｌ容のフラスコに添加し、窒素ガスをパージし、−１１０℃まで冷却し、それからｎ−ブチルリチウムのシクロヘキサン溶液（２５．２ｍｌ、６０ｍｍｏｌ）をゆっくりと液滴で添加し、添加が完了した後撹拌を低温で１時間継続し、それからトリメチルボレート（７．５ｍｌ、６６ｍｍｏｌ）を添加し、低温で更に１時間撹拌した後１２ｍｌの５ＮＨＣｌ溶液を添加し、得られた混合物を室温まで自然加温した。反応溶液を分液漏斗中に移し、有機相を分離し、水層をジエチルエーテル（２×１０ｍｌ）で抽出し、有機相を組み合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を蒸発させて、９．３ｇの白色の粘着性固体を９９．４％の収率で得た。生成物を、精製を行わずに次の反応に直接使用した。

調製例４０ジクロロメチルボロン酸−α−ピナンジオールエステル
調製例３８の生成物α−ピナンジオール（３．２３ｇ、０．０１９ｍｍｏｌ）、及び調製例３９の生成物ジクロロメチルボロン酸ジメチルエステル（５．３８ｇ、０．０３５ｍｍｏｌ）を２５ｍｌ容のフラスコに添加し、それから５ｍｌのＴＨＦで溶解し、室温で撹拌した。反応をＴＬＣによりモニタリングし、１８時間後完了させた。カラムクロマトグラフィ（酢酸エチル：石油エーテル＝１：２０）により分離して、４．９２ｇの無色の液体を９８．５％の収率で得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ０．８５（−ＣＨ₃、ｓ、３Ｈ）、１．２１（−ＣＨ₂、ｔ、１Ｈ）、１．３１（−ＣＨ₃、ｓ、３Ｈ）、１．４７（−ＣＨ₃、ｓ、３Ｈ）、１．９２〜１．９７（−ＣＨ₂、−ＣＨ、ｍ、２Ｈ）、２．１５（−ＣＨ、ｔ、１Ｈ）、２．２５〜２．４３（−ＣＨ₂、ｍ、２Ｈ）、４．４７（−ＣＨ、ｑ、１Ｈ）、５．４０（−ＣＨ、ｓ、１Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、７５ＭＨｚ）：δ２３．９２、２６．１８、２６．９３、２８．１８、３４．９８、３８．３１、３９．１６、５１．０９、７９．４１、８８．０８。ＭＳ（ＥＩ）：ｍ／ｚ２６２．０（Ｍ⁺）、算出値ｍ／ｚ２６２．０。

調製例４１２−メチル−４−クロロ−ブチルボロン酸−α−ピナンジオールエステル
調製例４０の生成物ジクロロメチルボロン酸−α−ピナンジオールエステル（１．１８ｇ、４．４９ｍｍｏｌ）を１２ｍｌのジメチルエーテルで溶解し、室温で撹拌した。窒素ガスをパージし、−７８℃まで冷却し、それから新たに調製したｔ−ブチルグリニャール試薬のジエチルエーテル溶液（６ｍｌ、４．５０ｍｍｏｌ）をゆっくりと液滴で添加した。添加が完了した後、乾燥したＺｎＣｌ₂粉末（０．４４ｇ、３．２５ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物を室温まで自然加温し、撹拌を室温で継続した。反応をＴＬＣによりモニタリングし、１８時間後完了させた。反応により生成されたＭｇＢｒ₂、及びＺｎＣｌ₂を濾過により除去し、濃縮した後カラムクロマトグラフィ（酢酸エチル：石油エーテル＝１：２００）により分離して、１．１３ｇの無色の液体を８８．５％の収率で得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ０．８５〜０．９４（−ＣＨ₃、ｍ、９Ｈ）、１．１９（−ＣＨ、ｑ、１Ｈ）、１．３０（−ＣＨ₃、ｓ、３Ｈ）、１．４２（−ＣＨ₃、ｓ、３Ｈ）、１．６２（ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、１．７５〜１．９５（−ＣＨ₂、ｍ、４Ｈ）、２．１０（−ＣＨ、ｔ、１Ｈ）、２．２１〜２．４０（−ＣＨ₂、ｍ、２Ｈ）、３．５４（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、４．３７（−ＣＨ、ｑ、１Ｈ）。¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、７５ＭＨｚ）：δ２１．１８、２２．８４、２３．９３、２５．５４、２６．２７、２６．９７、２８．３７、３５．２４、３８．１８、３９．２７、４２．７２、５１．１１、８６．６３；ＭＳ（ＥＩ）：ｍ／ｚ２８４．２（Ｍ⁺）、算出値ｍ／ｚ２８４．６。

調製例４２２−メチル−４−アミノ−ブチルボロン酸−α−ピナンジオールエステル塩酸塩（ＬｅｕＢｄｉｏｌ−ＮＨ₂）
ＬｉＮ（ＳｉＭｅ₃）₂（９．５ｍｌ、１７．９８ｍｍｏｌ）を１５０ｍｌ容のナス型フラスコに添加し、窒素ガスをパージし、−７８℃まで冷却し、それから調製例４１の生成物２−メチル−４−クロロ−ブチルボロン酸−α−ピナンジオールエステル（４．７ｇ、１６．５４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液を、シリンジを使用してゆっくりと添加し、添加が完了した後得られた混合物を室温まで自然加温し、撹拌を室温で継続した。反応をＴＬＣによりモニタリングし、２０時間後完了させた。溶媒を減圧下で蒸発させ、ジエチルエーテルで２回洗浄し、残留物を５０ｍｌの石油エーテルで溶解し、不溶性の物質を濾過により除去した。濾液を−７８℃まで冷却し、ジエチルエーテル中の６５ｍｌの塩化水素を添加し、それから温度を自然にゆっくりと室温まで上昇させると、大量の乳白色固体が出現した。結晶を冷蔵により完全に沈殿させ、濾過し、生成物をジエチルエーテルで洗浄して、２．８ｇの乳白色固体を５６．２％の収率で得た。生成物を、精製を行わずに次の反応に直接使用した。

実施例１ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート（５ａ）

調製例５のＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニン（０．４２ｇ、１ｍｍｏｌ）を７ｍｌのＴＨＦに溶解し、ＨＯＢｔ（０．１６ｇ、１．２ｍｍｏｌ）及び１−エチル−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（０．２９ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を−２０℃で添加し、それから３０分間反応させ、その後調製例４２で得られたＬｅｕＢｄｉｏｌ−ＮＨ₂（０．３ｇ、１ｍｍｏｌ）、及びＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（０．２６ｇ、２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を−２０℃で終夜撹拌した。反応をＴＬＣによりモニタリングし、反応を完了させた後、不溶性の物質を濾過により除去し、溶媒を減圧下で蒸発させ、残留物を２０ｍｌの酢酸エチルで溶解し、１０％クエン酸溶液、５％炭酸水素ナトリウム溶液、飽和食卓塩溶液（３×１５ｍｌ）で順次洗浄した。酢酸エチル層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮し、残留物をカラムクロマトグラフィにより分離して、０．５４ｇの化合物４ａを白色固体として８２％の収率で得た。ｍ．ｐ．：７８℃〜８０℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、５００ＭＨｚ）：δ９．３１〜９．２６（ｍ、１Ｈ）、８．８２〜８．７７（ｍ、１Ｈ）、８．５８〜８．５４（ｍ、１Ｈ）、８．２３〜８．１９（ｍ、１Ｈ）、７．３２〜６．９９（ｍ、１０Ｈ）、６．４８〜６．４２（ｍ、１Ｈ）、５．７２〜５．６７（ｍ、１Ｈ）、４．８０〜４．７７（ｍ、１Ｈ）、４．５９〜４．５５（ｍ、１Ｈ）、４．３６〜４．３３（ｍ、１Ｈ）、３．１９〜３．０９（ｍ、４Ｈ）、２．９０〜２．８８（ｍ、１Ｈ）、２．３６〜２．２２（ｍ、２Ｈ）、２．０８〜２．０３（ｍ、１Ｈ）、１．９４〜１．８６（ｍ、２Ｈ）、１．４７〜１．３９（ｍ、３Ｈ）、１．３０〜１．２８（ｍ、３Ｈ）、１．２９〜１．２１（ｍ、３Ｈ）、０．９０〜０．８３（ｍ、９Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、１２５ＭＨｚ）：１６９．８６、１６９．７７、１６３．２１、１４７．６３、１４４．３３、１４３．５２、１４２．６９、１３６．２５、１３５．９４、１２９．２２、１２９．１３、１２８．８１、１２８．４５、１２７．２８、１２６．７２、８４．７２、５４．７３、５４．２７、５１．５０、３９．４１、３９．３７、３８．３７、３８．０３、３７．８４、３７．６４、３５．６８、２８．５３、２８．４４、２７．０５、２６．３６、２６．３２、２５．５８、２３．９６、２２．３６；ＭＳ（ＥＩ）：ｍ／ｚ６６５．６（Ｍ）⁺。

実施例２Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ａ）

実施例１の生成物５ａ（０．３３ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を１２ｍｌのアセトンで溶解し、それにＮＨ₄ＯＡＣ溶液（０．１Ｎ、１１．６ｍｌ）、その後ＮａＩＯ₄（０．３２ｇ、１．５ｍｍｏｌ）を添加し、それから室温で撹拌しながら反応させた。ＴＬＣにより、１０時間後に反応が完了したことが示された。反応溶液に、水酸化ナトリウム溶液（２Ｎ、０．５ｍｌ）を添加し、得られた溶液をジクロロメタンで抽出した。溶液のｐＨ値を、濃塩酸を使用して約３に調整した。それからジクロロメタン（３×１５ｍｌ）で抽出し、有機相を組み合わせ、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、その後濾過し、それから溶媒を蒸発させて、０．１９ｇの淡黄色固体５ａを７２．１％の収率で得た。ｍ．ｐ．：１１２℃〜１１４℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ０．８８（−ＣＨ₃、ｄ、３Ｈ）、０．９０（−ＣＨ₃、ｄ、３Ｈ）、１．２５〜２．１７（−ＣＨ₂、−ＣＨ、−Ｂ（ＯＨ）₂、ｍ、５Ｈ）、２．９６〜３．１７（−ＣＨ、ｍ、５Ｈ）、４．６５〜４．７７（−ＣＨ、ｍ、２Ｈ）、６．３８〜６．４２（−ＣＯＮＨ、ｍ、１Ｈ）、６．８４〜７．０７（−Ｐｈ、−ＣＯＮＨ、ｍ、６Ｈ）、７．２４〜７．２９（−Ｐｈ、ｍ、５Ｈ）、８．１８（−ＣＯＮＨ、ｓ、１Ｈ）、８．５３（−Ｐｙｚ、ｓ、１Ｈ）、８．７７（−Ｐｙｚ、ｓ、１Ｈ）、９．１５〜９．２６（−Ｐｙｚ、ｍ、１Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、７５ＭＨｚ）：δ２２．５１、２３．１７、２５．６６、３７．３０、３７．５４、５１．７０、５３．６４、５４．９６、１２６．７５、１２７．４１、１２８．４１、１２８．５４、１２８．８８、１２９．２０、１３５．６６、１３５．８９、１４２．７２、１４３．３２、１４４．２８、１４７．７５、１６３．３２、１６３．５８、１６９．７４、１７０．０１；ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ５３０．４９０７（Ｍ−Ｈ）；ＦＴ−ＭＳ：ｍ／ｚ５３２．２７１７９（Ｍ＋Ｈ）、算出値５３２．２７２５８。

実施例３ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｂ）

原材料として調製例８の生成物を使用して、合成及び処理は実施例１に記載のものと同様とし、白色固体を８７％の収率で得た。ｍ．ｐ．：９８℃〜１００℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ９．１３（ｓ、１Ｈ）、８．７４（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．４８（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、８．２３〜８．２０（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．８０〜７．６９（ｍ、４Ｈ）、７．４６〜７．４３（ｍ、２Ｈ）、７．３５（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．０２〜６．９５（ｍ、５Ｈ）、６．５３〜６．４５（ｍ、１Ｈ）、４．６５〜４．５７（ｍ、１Ｈ）、４．２９〜４．２７（ｍ、１Ｈ）、３．４０〜３．２６（ｍ、２Ｈ）、３．１３〜３．０２（ｍ、１Ｈ）、２．９５〜２．８４（ｍ、１Ｈ）、２．３５〜２．２７（ｍ、１Ｈ）、２．２０〜２．１５（ｍ、１Ｈ）、２．０４〜１．９９（ｍ、１Ｈ）、１．８９〜１．８０（ｍ、１Ｈ）、１．３９〜１．２３（ｍ、１２Ｈ）、０．８７〜０．８３（ｍ、９Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、７５ＭＨｚ）：１７０．３９、１６９．８５、１６３．１９、１４７．５７、１４４．３２、１４３．５９、１４２．７１、１３６．１３、１３３．５１、１３３．４６、１３２．４７、１２９．２２、１２８．５６、１２８．３５、１２８．０１、１２７．６６、１２７．５７、１２７．５１、１２６．６５、１２６．２４、１２５．８４、５４．５５、５４．４２、５３．６４、５１．３５、３９．７０、３９．５５、３８．１９、３７．８５、３７．７４、３５．５０、２８．６１、２７．０８、２６．２４、２５．３６、２５．２１、２４．０３、２２．９７、２２．０１；ＨＲＭＳ算出値Ｃ₄₂Ｈ₅₁ＢＮ₅Ｏ₅（Ｍ＋１）⁺ ７１６．３９７８、測定値７１６．３９８６。

実施例４Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｂ）

１００ｍｌ容の丸底フラスコ中で、実施例３の生成物ボロン酸エステル５ｂ（０．３５７ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタンに溶解し、三臭化ホウ素のジクロロメタン溶液（１Ｎ、２．５ｍｌ）を液滴で添加し、氷浴の条件下で２時間撹拌し、それから反応をＴＬＣによりモニタリングした。反応を完了させた後、５０ｍｌの水を液滴で添加して反応を停止させ、ジクロロメタン（１５ｍｌ×４）で抽出し、有機相を組み合わせ、飽和食卓塩溶液（１５ｍｌ×４）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、それから濾過し、濃縮し、０．１８ｇの乳白色固体をエーテル／ジクロロメタンからの再結晶化により得た。収率は６３．５％であった。ｍ．ｐ．：１３４℃〜１３５℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ９．１５（ｓ、１Ｈ）、８．７３（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．４６（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、８．２４〜８．１７（ｍ、１Ｈ）、７．７６〜７．６６（ｍ、４Ｈ）、７．４４〜７．４０（ｍ、３Ｈ）、７．３２〜７．２５（ｍ、１Ｈ）、６．９０〜６．８６（ｍ、５Ｈ）、６．５２〜６．４６（ｍ、２Ｈ）、４．８１〜４．６７（ｍ、２Ｈ）、３．３１〜３．２６（ｍ、１Ｈ）、３．１１（ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、２Ｈ）、２．９３〜２．８９（ｍ、１Ｈ）、１．９２（ｓ、ｂｒ、２Ｈ）、１．５５〜１．２１（ｍ、３Ｈ）、０．８５〜０．８２（ｍ、６Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、７５ＭＨｚ）：１７２．９６、１６９．９９、１６３．６１、１４７．７０、１４４．２４、１４３．３０、１４２．７０、１３７．２８、１３５．６１、１３３．４７、１３３．１９、１３２．４９、１２９．１３、１２８．６４、１２８．３５、１２８．０７、１２７．６４、１２７．５５、１２７．１１、１２６．７１、１２６．３９、１２５．９２、５４．８８、５１．８６、３９．８５、３９．３４、３７．４３、３７．２３、３６．８８、２５．６８、２３．１２、２２．４６。ＨＲＭＳ算出値Ｃ₃₂Ｈ₃₆ＢＮ₅Ｏ₅（Ｍ−１）^- ５８０．２７２７、測定値５８０．２７３６。

実施例５ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−チロシル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｃ）

原材料として調製例１０の生成物を使用して、合成及び処理は実施例１に記載のものと同様とし、淡黄色固体を８１％の収率で得た。ｍ．ｐ．：１１９℃〜１２０℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ、３００ＭＨｚ）：δ９．１８（ｓ、１Ｈ）、８．６８（ｄ、Ｊ＝１０．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．４８（ｓ、１Ｈ）、８．２６（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．８２〜７．７４（ｍ、１Ｈ）、７．２７〜７．１８（ｍ、５Ｈ）、６．８０〜６．７６（ｍ、３Ｈ）、６．４９〜６．４０（ｍ、２Ｈ）、４．８２〜４．６１（ｍ、２Ｈ）、４．２９〜４．２７（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、３．１３〜３．０６（ｍ、２Ｈ）、２．９５〜２．８４（ｍ、３Ｈ）、２．３５〜２．２７（ｍ、２Ｈ）、２．０４〜２．０２（ｍ、１Ｈ）、１．８５〜１．８０（ｍ、２Ｈ）、１．４３〜１．２６（ｍ、９Ｈ）、０．８８〜０．８３（ｍ、９Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ、７５ＭＨｚ）：１７０．１７、１６３．３６、１５５．６２、１４７．６１、１４３．９６、１４３．４４、１４２．８３、１３５．９５、１３０．３７、１２９．２１、１２８．７８、１２７．４７、１２７．２３、１２６．６１、１２６．４４、１１５．３４、８５．３０、５４．８６、５４．７４、５２．９１、５１．５４、４０．１６、３９．８２、３９．６４、３８．１０、３７．５７、３６．９７、３５．８０、３５．６９、２８．７３、２７．１０、２６．２８、２５．４１、２４．０４、２３．０６、２２．９７、２２．０３、２１．９５；ＨＲＭＳ算出値Ｃ₃₈Ｈ₄₉ＢＮ₅Ｏ₆（Ｍ＋１）⁺ ６８２．３７７０、測定値６８２．３７６７。

実施例６Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−チロシル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｃ）

原材料として実施例５の生成物５ｃを使用して、合成及び処理は実施例４に記載のものと同様とし、黄色固体を５６．３％の収率で得た。ｍ．ｐ．：２９８℃〜３００℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ、３００ＭＨｚ）：δ９．１３（ｓ、１Ｈ）、８．７８（ｔ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．６７〜８．６６（ｄｄ、Ｊ＝１．２、２．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．２３〜７．１６（ｍ、５Ｈ）、７．１６〜７．０１（ｍ、２Ｈ）、６．６６〜６．１８（ｍ、２Ｈ）、４．８０〜４．７３（ｍ、２Ｈ）、３．２０〜３．１８（ｍ、１Ｈ）、３．０８〜３．０２（ｍ、３Ｈ）、２．６８〜２．５６（ｍ、１Ｈ）、１．６２〜１．５４（ｍ、２Ｈ）、１．３３〜１．２６（ｍ、２Ｈ）、１．１４〜１．０４（ｍ、２Ｈ）、０．８９〜０．８３（ｍ、６Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ、３００ＭＨｚ）：１７７．６９、１７３．０５、１６５．１３、１６４．９５、１５７．７７、１５７．６８、１４８．７９、１４５．５９、１４４．９６、１４４．７９、１４４．４９、１３７．８２、１３１．４７、１３１．３５、１３０．３４、１２９．５６、１２７．９７、１２７．４０、１２７．１６、１１６．４１、５６．１１、５５．９０、５２．８７、５２．６７、４０．７０、３８．８２、３８．４９、３７．６５、３７．３０、２６．８３、２６．６１、２３．８９、２３．６９、２２．３１、２１．８３。ＨＲＭＳ算出値Ｃ₂₈Ｈ₃₄ＢＮ₅Ｏ₆（Ｍ−１）^- ５４６．２５２９、測定値５４６．２５２７。

実施例７ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−チロシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｄ）

原材料として調製例１３の生成物を使用して、実施例１の合成アプローチに従って調製を実施し、淡黄色固体を８０％の収率で得た。ｍ．ｐ．：９０℃〜９２℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ、３００ＭＨｚ）：δ９．２９（ｓ、１Ｈ）、８．７４（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．５０（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、８．２６（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、７．１１〜６．９９（ｍ、８Ｈ）、６．７４（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、６．７４〜６．７１（ｍ、１Ｈ）、６．５０〜６．４２（ｍ、１Ｈ）、４．７０〜４．２６（ｍ、１Ｈ）、４．５１〜４．２７（ｍ、１Ｈ）、４．２９〜４．１７（ｍ、２Ｈ）、３．０７〜２．９３（ｍ、５Ｈ）、２．３７〜２．３１（ｍ、１Ｈ）、２．２１〜２．１６（ｍ、１Ｈ）、２．０６〜２．０３（ｍ、１Ｈ）、１．９０〜１．８０（ｍ、２Ｈ）、１．４０〜１．２６（ｍ、６Ｈ）、０．９０〜０．７９（ｍ、１２Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ、７５ＭＨｚ）：１７１．３６、１７０．１８、１６３．０３、１５５．４７、１４７．５０、１４４．２９、１４３．７４、１４２．７３、１３５．９５、１３０．２９、１３０．１５、１２９．３１、１２８．５０、１２７．５１、１２６．８３、１１６．４７、１１６．６４、８５．３３、５５．０８、５３．１９、５１．５５、３９．７３、３９．６４、３９．４０、３８．２３、３８．１６、３７．４４、３７．１４、３５．６７、２８．７３、２８．５４、２７．１４、２６．３０、２５．４４、２４．０７、２２．９８、２２．０２；ＨＲＭＳ算出値Ｃ₃₈Ｈ₄₉ＢＮ₅Ｏ₆（Ｍ＋１）⁺ ６８２．３７７０、測定値６８２．３７９５。

実施例８Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−チロシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｄ）

原材料として実施例７の生成物５ｄを使用して、合成及び処理の方法は実施例４に記載のものと同様とし、黄色固体を７１．５％の収率で得た。ｍ．ｐ．：２１９℃〜２２１℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ、３００ＭＨｚ）：δ９．１５（ｓ、１Ｈ）、８．７８（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．６６（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．２４〜７．１９（ｍ、５Ｈ）、７．１３〜７．００（ｍ、２Ｈ）、６．９７〜６．６２（ｍ、２Ｈ）、４．８０〜４．７１（ｍ、２Ｈ）、３．１１〜３．０６（ｍ、３Ｈ）、２．９３〜２．８７（ｍ、１Ｈ）、２．６４〜２．５４（ｍ、１Ｈ）、１．６２〜１．５４（ｍ、２Ｈ）、１．４０〜１．２９（ｍ、２Ｈ）、１．１６〜１．１１（ｍ、２Ｈ）、０．９２〜０．８１（ｍ、６Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ、７５ＭＨｚ）：１７７．２０、１７３．１８、１６４．９２、１５７．５１、１４８．６８、１４５．６２、１４４．９３、１４４．７３、１３７．１７、１３６．９６、１３１．３６、１３０．４６、１３０．３３、１２９．６９、１２９．６２、１２８．２５、１２８．１９、１１６．３２、５６．３４、５６．１７、５２．６１、４０．７７、３８．４６、３８．１１、３７．８２、２６．６２、２３．８６、２１．９１。ＥＳＩ：ＭＳ（ＥＳＩ）測定値：（Ｍ＋Ｎａ／ｚ）⁺ ５７０．２１６８、算出値５７０．２５００（Ｍ＋Ｎａ）。

実施例９ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｅ）

原材料として調製例１８の生成物を使用して、実施例１の合成アプローチに従って調製を実施し、収率８７％を得た。白色固体を得た。ｍ．ｐ．：６３℃〜６５℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、５００ＭＨｚ）：δ９．３２（ｓ、１Ｈ）、８．７８〜８．６７（ｍ、１Ｈ）、８．５５〜８．２１（ｍ、１Ｈ）、８．１０〜７．９５（ｍ、１Ｈ）、７．１５〜６．９９（ｍ、６Ｈ）、６．０４〜５．９６（ｍ、１Ｈ）、４．６５〜４．３４（ｍ、２Ｈ）、４．３０〜４．１５（ｍ、１Ｈ）、３．２２〜３．０１（ｍ、２Ｈ）、２．３７〜２．２２（ｍ、２Ｈ）、２．１２〜２．０４（ｍ、１Ｈ）、１．９３〜１．９０（ｍ、２Ｈ）、１．７６〜１．６３（ｍ、３Ｈ）、１．４８〜１．３９（ｍ、１Ｈ）、１．２８（ｓ、３Ｈ）、１．２９〜１．２２（ｍ、３Ｈ）、０．９４〜０．９０（ｍ、６Ｈ）、０．８６〜０．８３（ｍ、９Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、１２５ＭＨｚ）：１７１．３５、１７０．３０、１６３．１５、１４７．４７、１４４．３８、１４３．７２、１４２．６３、１３６．４５１、１２９．１０、１２８．３７、１２６．６６、８４．５５、５４．５０、５２．０２、５１．４５、４０．７３、３８．３１、３８．０３、３７．９５、３７．７７、３５．６３、２８．４８、２７．００、２６．２６、２５．５２、２４．７８、２３．９１、２２．８９、２２．２９、２１．７８；ＭＳ（ＥＩ）：ｍ／ｚ６３１．６（Ｍ⁺）。

実施例１０Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｅ）

原材料として実施例９の生成物５ｅを使用して、合成アプローチ及び処理は実施例２に記載のものと同様とした。溶媒を蒸発させて、１９．７ｍｇの黄色固体を６８．４％の収率で得た。ｍ．ｐ．：１１３℃〜１１６℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ０．７８〜０．８２（−ＣＨ₃、ｍ、１３Ｈ）、１．１９〜１．５７（−ＣＨ₂、−ＣＨ、−Ｂ（ＯＨ）₂、ｍ、７Ｈ）、１．９５（−ＣＨ、ｄ、１Ｈ）、２．８９〜３．０９（−ＣＨ、−ＣＨ₂、ｍ、３Ｈ）、４．２８〜４．４１（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、４．６１〜４．７６（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、６．９２〜７．０２（−Ｐｈ、−ＣＯＮＨ、ｍ、６Ｈ）、７．１９〜７．２５（−ＣＯＮＨ、ｍ、１Ｈ）、７．９６〜８．０２（−ＣＯＮＨ、ｍ、１Ｈ）、８．４７（−Ｐｙｚ、ｓ、１Ｈ）、８．７２（−Ｐｙｚ、ｓ、１Ｈ）、９．１６〜９．２５（−Ｐｙｚ、ｍ、１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）測定値ｍ／ｚ４９６．３７１０（Ｍ−Ｈ）、算出値４９７．２８０９。

実施例１１ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｆ）

原材料として調製例２０の生成物を使用して、合成及び処理の方法は実施例１に記載のものと同様とし、白色固体を８５％の収率で得た。ｍ．ｐ．：１４０℃〜１４２℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ９．１９５（ｄ、Ｊ＝１．５Ｈｚ、１Ｈ）、８．７１（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．４０（ｔ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、１Ｈ）、７．９３（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．６６〜７．６１（ｍ、４Ｈ）、７．３６〜７．３２（ｍ、３Ｈ）、６．７５（ｄ、Ｊ＝７．８Ｈｚ、１Ｈ）、６．００（ｄ、Ｊ＝４．８Ｈｚ、１Ｈ）、４．７８〜４．７１（ｍ、１Ｈ）、４．５９〜４．５３（ｍ、１Ｈ）、４．２７（ｄｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．２３（ｄ、Ｊ＝６．６Ｈｚ、２Ｈ）、３．１４〜３．１０（ｍ、１Ｈ）、２．２８〜２．２０（ｍ、１Ｈ）、２．１７〜２．０８（ｍ、１Ｈ）、２．００〜２．０５（ｍ、１Ｈ）、１．８７〜１．５７（ｍ、６Ｈ）、１．４１〜１．２７（ｍ、９Ｈ）、０．９２〜０．９０（ｍ、６Ｈ）、０．８３〜０．７７（ｍ、９Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、７５ＭＨｚ）：１７１．０５、１７０．６１、１６３．１３、１４７．５２、１４４．２４、１４３．４５、１４２．５９、１４２．４７、１３３．９３３、１３３．２５、１３２．２２、１２８．１３、１２７．９９、１２７．４８、１２７．２６、１２５．９５、１２５．５２、８５．８３、５３．０６、５１．９８、５１．８８、５１．３２、４０．６３、３９．６８、３９．５６、３８．１９、３５．４８、２８．５６、２７．１０、２６．２３、２５．３３、２５．２２、２４．７８、２４．０４、２２．８９、２１．８０；ＨＲＭＳ算出値Ｃ₃₉Ｈ₅₃ＢＮ₅Ｏ₅（Ｍ＋１）⁺ ６８２．４１３４、測定値６８２．４１５５。

実施例１２Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｆ）

原材料として実施例１１の生成物５ｆを使用して、合成及び処理の方法は実施例４に記載のものと同様とし、乳白色固体を５６．３％の収率で得た。ｍ．ｐ．：１５７℃〜１５９℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ９．１３〜９．１０（ｍ、１Ｈ）、８．６７（ｓ、１Ｈ）、８．３６（ｓ、１Ｈ）、７．９８〜７．９４（ｍ、２Ｈ）、７．５９〜７．２９（ｍ、７Ｈ）、７．２２〜７．１９（ｍ、２Ｈ）、４．９８〜４．８４（ｍ、１Ｈ）、４．４１〜４．３７（ｍ、１Ｈ）、３．４６〜３．３５（ｍ、２Ｈ）、３．２４〜３．１０（ｍ、１Ｈ）、１．７１〜１．２５（ｍ、８Ｈ）、０．８８〜０．７８（ｍ、１２Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、７５ＭＨｚ）：１７１．４８、１６３．９２、１４７．６５、１４４．１５、１４３．３１、１４３．０７、１４２．５６、１３３．５６、１３３．２２、１３２．２５、１２９．１６、１２８．６９、１２８．２４、１２７．５１、１２７．１０、１２５．９８、１２５．５８、５２．９５、５２．７７、５１．９１、４１．１２、４０．２３、３６．７６、２５．６８、２４．７２、２３．１２、２２．８３、２２．４４、２１．６９。ＨＲＭＳ算出値Ｃ₂₉Ｈ₃₇ＢＮ₅Ｏ₅（Ｍ−１）^- ５４６．２８９３、測定値５４６．２９０６。

実施例１３ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｇ）

原材料として調製例２２の生成物を使用して、合成及び処理の方法は実施例１に記載のものと同様とし、白色固体を得て、収率は８６％であった。ｍ．ｐ．：９７℃〜９８℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ９．１３〜９．０９（ｍ、１Ｈ）、８．６６（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．３４（ｄ、Ｊ＝１．２Ｈｚ、１Ｈ）、８．１０（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．６２〜７．４６（ｍ、３Ｈ）、７．４１〜７．２１（ｍ、９Ｈ）、６．５３〜６．４５（ｍ、１Ｈ）、５．９９〜５．７８（ｍ、１Ｈ）、４．７６〜４．７２（ｍ、１Ｈ）、４．２５（ｄｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．２９〜３．２２（ｍ、１Ｈ）、３．１６〜３．１４（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、２Ｈ）、３．１１〜３．０４（ｍ、１Ｈ）、２．２９〜２．２６（ｍ、１Ｈ）、２．１７〜２．１２（ｍ、１Ｈ）、２．０２〜１．９８（ｍ、１Ｈ）、１．８６〜１．６７（ｍ、２Ｈ）、１．３８〜１．２５（ｍ、１２Ｈ）、０．８７〜０．８１（ｍ、９Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、７５ＭＨｚ）：１７０．５３、１６９．８５、１６３．１９、１４７．５０、１４４．０４、１４３．２８、１４３．１５、１４２．６３、１３５．９６、１３５．８９、１３３．６６、１３３．５４、１３３．２０、１３２．１９、１２９．２０、１２８．７８、１２８．１４、１２７．９６、１２７．４８、１２７．２８、１２７．２１、１２５．９２、１２５．５３、５４．５６、５３．３６、５３．０１、５１．３４、３９．８８、３９．７０、３９．５７、３８．０５、３７．６０、３５．５７、２８．５７、２７．０９、２６．２２、２５．３２、２５．１６、２４．０３、２２．９１、２２．０１、２１．９２；ＨＲＭＳ算出値Ｃ₄₂Ｈ₅₁ＢＮ₅Ｏ₅（Ｍ＋１）⁺ ７１６．３９７８、測定値７１６．３９９６。

実施例１４Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｇ）

原材料として実施例１３の生成物５ｇを使用して、合成アプローチ及び処理は実施例４に記載のものと同様とし、乳白色固体を５３％の収率で得た。ｍ．ｐ．：１３７℃〜１３８℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ９．９０（ｓ、１Ｈ）、８．６１（ｓ、１Ｈ）、８．２６（ｓ、１Ｈ）、８．０９〜７．９８（ｍ、１Ｈ）、７．５０〜７．２３（ｍ、１２Ｈ）、７．１９〜７．０７（ｍ、１Ｈ）、６．７３〜６．５６（ｍ、２Ｈ）、４．８８〜４．７６（ｍ、１Ｈ）、４．７２〜４．６７（ｍ、１Ｈ）、３．３３〜３．２８（ｍ、１Ｈ）、３．１４〜３．１２（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、２Ｈ）、３．０２〜２．９７（ｍ、１Ｈ）、２．０４（ｓ、ｂｒ、２Ｈ）、１．５１〜１．４２（ｍ、３Ｈ）、０．８７〜０．８０（ｍ、６Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、７５ＭＨｚ）：１７３．１０、１７０．０６、１６３．５１、１４７．５９、１４３．９０、１４２．９５、１４２．８６、１４２．６４、１４２．５２、１３５．９０、１３５．７０、１３３．４５、１３３．２３、１３３．０７、１３２．１４、１２９．２９、１２８．８８、１２８．２４、１２７．９４、１２７．４６、１２７．１４、１２５．９０、１２５．５３、５４．９４、５１．９６、４２．９２、３９．９８、３７．２６、３６．９２、２５．６９、２３．１４、２２．５６；ＨＲＭＳ算出値Ｃ₃₂Ｈ₃₅ＢＮ₅Ｏ₅（Ｍ−１）^- ５８０．２７３６、測定値５８０．２７２９。

実施例１５ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｈ）

原材料として調製例２４の生成物を使用して、合成及び処理は実施例１に記載のものと同様とし、白色固体を８２％の収率で得た。ｍ．ｐ．：１３６℃〜１３７℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ、３００ＭＨｚ）：δ９．１０（ｓ、１Ｈ）、８．６３（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．２６（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．１２〜８．０２（ｍ、１Ｈ）、７．８１〜７．５７（ｍ、６Ｈ）、７．５３〜７．３２（ｍ、８Ｈ）、７．２０〜７．１７（ｄｄ、Ｊ＝１．８、８．４Ｈｚ、２Ｈ）、６．５１〜６．４９（ｍ、１Ｈ）、６．００（ｄ、Ｊ＝５．１Ｈｚ、１Ｈ）、４．８７〜４．７２（ｍ、２Ｈ）、４．２８〜４．２４（ｄｄ、Ｊ＝１．５、８．７Ｈｚ、１Ｈ）、３．３３〜３．３１（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、２Ｈ）、３．２４〜３．２２（ｍ、１Ｈ）、３．０７〜３．００（ｍ、１Ｈ）、２．３３〜２．２５（ｍ、１Ｈ）、２．１８〜２．１３（ｍ、１Ｈ）、２．０４〜２．００（ｍ、１Ｈ）、１．８７〜１．６７（ｍ、２Ｈ）、１．３６〜１．２５（ｍ、８Ｈ）、０．８７〜０．７４（ｍ、１２Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ、７５ＭＨｚ）：１７０．４６、１６９．８５、１６３．２２、１４７．４６、１４４．００、１４３．１６、１４２．６１、１４２．４９、１３３．５８、１３３．４５、１３３．３４、１３２．５０、１３２．１３、１２８．５８、１２７．９７、１２７．７１、１２７．５７、１２７．４４、１２６．３１、１２５．９０、１２５．５２、８５．７６、５４．４１、５３．３０、５１．３５、３９．５８、３８．１９、３７．９８、３７．５９、３５．５０、２８．５９、２７．１０、２６．２４、２５．３３、２５．１８、２４．０４、２１．９６；ＨＲＭＳ算出値Ｃ₄₆Ｈ₅₃ＢＮ₅Ｏ₅（Ｍ＋１）⁺ ７６６．４１３４、測定値７６６．４１４８。

実施例１６Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｈ）

原材料として実施例１５の生成物５ｈを使用して、合成アプローチ及び処理は実施例４に記載のものと同様とし、乳白色固体を７２．１％の収率で得た。ｍ．ｐ．：１４５℃〜１４６℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ８．９５（ｓ、１Ｈ）、８．５４（ｓ、１Ｈ）、８．１６（ｓ、１Ｈ）、８．１７〜８．１１（ｍ、１Ｈ）、７．７４〜７．１６（ｍ、１４Ｈ）、７．０８〜６．９５（ｍ、２Ｈ）、６．８７〜６．５０（ｍ、２Ｈ）、４．９５〜４．８７（ｍ、１Ｈ）、４．７９〜４．６８（ｍ、１Ｈ）、３．２８〜３．２６（ｍ、２Ｈ）、３．００〜２．８６（ｍ、１Ｈ）、２．３３（ｓ、ｂｒ、２Ｈ）、１．３８〜１．３５（ｍ、３Ｈ）、０．８１〜０．７９（ｍ、６Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、７５ＭＨｚ）：１７０．１８、１６９．６１、１６３．５６、１４７．５１、１４３．７９、１４１．９０、１４２．５５、１３３．４２、１３３．１２６、１３３．０１、１３２．４６、１３２．０７、１２８．５８、１２８．０９、１２７．３９、１２７．１４、１２７．０１、１２６．３２、１２５．９４、１２５．８３、１２５．４９、５４．７９、５１．５２、３９．７８、３７．４９、３７．３０、３６．９５、２５．６４、２３．０９、２２．３９、２２．１９；ＨＲＭＳ算出値Ｃ₃₆Ｈ₃₇ＢＮ₅Ｏ₅（Ｍ−１）^- ６３０．２８９３、測定値６３０．２８９５。

実施例１７ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｉ）

原材料として調製例２６の生成物を使用して、合成及び処理は実施例１に記載のものと同様とし、白色固体を７８％の収率で得た。ｍ．ｐ．：１２７℃〜１２９℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ９．２４（ｓ、１Ｈ）、８．７６（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．５１（ｄ、Ｊ＝２．４Ｈｚ、１Ｈ）、８．５０〜８．４６（ｍ、１Ｈ）、８．２２〜８．１４（ｍ、１Ｈ）、７．４０〜７．３８（ｍ、５Ｈ）、７．０１〜６．８８（ｍ、４Ｈ）、６．７８〜６．５８（ｍ、１Ｈ）、６．０９〜５．９７（ｍ、１Ｈ）、５．７５〜５．７１（ｍ、２Ｈ）、４．８２〜４．７５（ｍ、２Ｈ）、３．５１〜３．４５（ｍ、１Ｈ）、３．３１〜３．０１（ｍ、４Ｈ）、１．２５〜１．２３（ｍ、１０Ｈ）、０．９９〜０．８９（ｍ、８Ｈ）、０．８８〜０．８５（ｍ、６Ｈ）；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ７０３．６（Ｍ−１）^-。

実施例１８Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｉ）

原材料として実施例１７の生成物５ｉを使用して、合成及び処理は実施例２に記載のものと同様とし、溶媒を蒸発させて、１１．４ｍｇの黄色の粘着性固体を４９．２％の収率で得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ０．７９（−ＣＨ₃、ｄ、６Ｈ）、１．４０〜１．６０（−ＣＨ₂、−ＣＨ、ｍ、３Ｈ）、１．９７〜２．１３（−ＣＨ₂、−Ｂ（ＯＨ）₂、ｍ、１０Ｈ）、３．１５〜３．１９（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、３．５３〜３．５８（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、３．７５〜３．９８（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、４．８７〜４．９８（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、５．０５（−ＣＨ、ｓ、１Ｈ）、６．８９（−ＣＯＮＨ、ｍ、１Ｈ）、７．１６〜７．１９（−Ｐｈ、インドール、ｍ、９Ｈ）、８．０６（−ＣＯＮＨ、ｄ、１Ｈ）、８．６４（−Ｐｙｚ、ｄ、１Ｈ）、９．１７（−Ｐｙｚ、ｓ、１Ｈ）、９．２８（−Ｐｙｚ、ｄ、１Ｈ）、９．７２（−ＮＨ、ｓ、１Ｈ）。

実施例１９ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−チロシル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｊ）

原材料として調製例３０の生成物を使用して、合成及び処理は実施例１に記載のものと同様とし、淡黄色固体を７９％の収率で得た。ｍ．ｐ．：１５３℃〜１５５℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ９．０８（ｓ、１Ｈ）、８．７３〜８．６９（ｍ、１Ｈ）、８．４８（ｓ、１Ｈ）、８．３４（ｓ、１Ｈ）、８．１１〜７．９４（ｍ、１Ｈ）、７．３２〜７．２１（ｍ、５Ｈ）、７．０８〜６．８８（ｍ、４Ｈ）、６．６２〜６．４２（ｍ、１Ｈ）、６．０１（ｓ、１Ｈ）、５．６５〜５．５８（ｍ、２Ｈ）、４．３８〜４．２９（ｍ、２Ｈ）、３．２０〜３．０１（ｍ、４Ｈ）、１．４０〜１．２４（ｍ、１０Ｈ）、０．９９〜０．８９（ｍ、８Ｈ）、０．８３〜０．８０（ｍ、６Ｈ）；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ７０４．７（Ｍ⁺）。

実施例２０Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｊ）

原材料として実施例１９の生成物５ｊを使用して、合成アプローチ及び処理は実施例２に記載のものと同様とし、溶媒を蒸発させて、４９．３ｍｇの黄色の粘着性固体を４２．４％の収率で得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ０．８１（−ＣＨ₃、ｍ、６Ｈ）、１．２３〜１．４５（−ＣＨ₂、−ＣＨ、ｍ、３Ｈ）、１．８９〜２．０７（−ＣＨ₂、−Ｂ（ＯＨ）₂、ｍ、１０Ｈ）、３．０５〜３．１１（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、３．３３〜３．４８（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、３．４５〜３．７８（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、４．６４〜４．８１（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、５．２５（−ＣＨ、ｄ、１Ｈ）、６．７６（−ＣＯＮＨ、ｍ、１Ｈ）、７．０８〜７．１６（−Ｐｈ、インドール、ｍ、９Ｈ）、８．１２（−ＣＯＮＨ、ｄ、１Ｈ）、８．５７（−Ｐｙｚ、ｄ、１Ｈ）、９．０７（−Ｐｙｚ、ｄ、１Ｈ）、９．２１（−Ｐｙｚ、ｄ、１Ｈ）、９．２８（−ＮＨ、ｄ、１Ｈ）。

実施例２１ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｋ）

原材料として調製例３２の生成物を使用して、合成及び処理は実施例１に記載のものと同様とし、白色固体を８１％の収率で得た。ｍ．ｐ．：６８℃〜７０℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ９．３３（ｓ、１Ｈ）、８．７６〜８．７３（ｄ、１Ｈ）、８．５４（ｓ、１Ｈ）、８．２９〜８．１０（ｍ、１Ｈ）、７．２９〜７．２５（ｍ、５Ｈ）、６．３９〜６．３１（ｍ、２Ｈ）、４．８２〜４．７９（ｍ、１Ｈ）、４．４４〜４．４１（ｍ、１Ｈ）、４．３０〜４．２７（ｍ、１Ｈ）、３．２２〜３．１９（ｍ、３Ｈ）、２．３２〜２．１７（ｍ、３Ｈ）、２．０５〜２．０２（ｍ、１Ｈ）、１．８９〜１．２７（ｍ、１４Ｈ）、０．９６〜０．８３（ｍ、１５Ｈ）；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ６３１．６（Ｍ⁺）。

実施例２２Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｋ）

原材料として実施例２１の生成物５ｋを使用して、合成アプローチ及び処理は実施例２に記載のものと同様とし、溶媒を蒸発させて、１６．７ｍｇの黄色固体を７３．２％の収率で得た。ｍ．ｐ．：１１６℃〜１１８℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ９．３０〜９．２１（ｍ、１Ｈ）、８．７４（ｓ、１Ｈ）、８．４７（ｓ、１Ｈ）、８．３３〜８．２９（ｍ、１Ｈ）、７．３２〜７．２２（ｍ、６Ｈ）、６．９９〜６．９１（ｍ、１Ｈ）、４．９３〜４．５７（ｍ、２Ｈ）、３．２１（ｓ、２Ｈ）、２．８５〜２．５８（ｍ、１Ｈ）、２．１８〜１．２５（ｍ、８Ｈ）、０．９６〜０．８２（ｍ、１２Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）測定値：ｍ／ｚ４９６．３９７７（Ｍ−Ｈ）、算出値：４９７．２８０９。

実施例２３ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｌ）

原材料として調製例３４の生成物を使用して、合成アプローチ及び処理は実施例１に記載のものと同様とし、粘着性固体を８７％の収率で得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ９．４１（ｓ、１Ｈ）、８．７６〜８．６５（ｍ、１Ｈ）、８．５６〜８．４５（ｍ、１Ｈ）、８．１８〜８．１０（ｍ、１Ｈ）、５．４３〜５．３８（ｍ、１Ｈ）、４．７１〜４．５０（ｍ、１Ｈ）、４．３８〜４．３２（ｍ、１Ｈ）、４．０７〜３．９７（ｍ、２Ｈ）、３．８６〜３．８４（ｍ、Ｈ）、２．５２〜２．０８（ｍ、３Ｈ）、２．０４〜１．９０（ｍ、６Ｈ）、１．６７〜１．６０（ｍ、２Ｈ）、１．４１〜１．２５（ｍ、１０Ｈ）、０．９９〜０．８３（ｍ、２１Ｈ）；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ５９７．５（Ｍ）⁺。

実施例２４Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｌ）

原材料として実施例２３の生成物５ｌを使用して、合成アプローチ及び処理は実施例２に記載のものと同様とし、１４．４ｍｇの黄色の粘着性固体を６２．８％の収率で得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ０．８１〜０．９７（−ＣＨ₃、ｍ、１８Ｈ）、１．１９〜２．８２（−ＣＨ₂、−ＣＨ、−Ｂ（ＯＨ）₂、ｍ、１１Ｈ）、２．８５〜２．９１（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、４．５３（−ＣＨ、ｓ、１Ｈ）、４．６９〜４．８６（−ＣＨ、ｍ、１Ｈ）、６．９９（−ＣＯＮＨ、ｄ、１Ｈ）、７．１６（−ＣＯＮＨ、ｄ、１Ｈ）、８．０６〜８．２８（−ＣＯＮＨ、ｍ、１Ｈ）、８．５０（−Ｐｙｚ、ｓ、１Ｈ）、８．７１（−Ｐｙｚ、ｓ、１Ｈ）、９．３０（−Ｐｙｚ、ｓ、１Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）測定値ｍ／ｚ４６２．３８２５（Ｍ−Ｈ）、計算値４６３．２９６６。

実施例２５ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンボレート（５ｍ）

原材料として調製例３６の生成物を使用して、合成及び処理の方法は実施例１に記載のものと同様とし、白色固体を８１％の収率で得た。ｍ．ｐ．：９９℃〜１００℃。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００ＭＨｚ）：δ９．３１（ｓ、１Ｈ）、８．７３（ｓ、１Ｈ）、８．４９（ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ、１Ｈ）、８．３３（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．６６〜７．５８（ｍ、４Ｈ）、７．４４〜７．３８（ｍ、３Ｈ）、６．４８〜６．３６（ｍ、２Ｈ）、４．９４〜４．８５（ｍ、１Ｈ）、４．４２〜４．３０（ｍ、１Ｈ）、４．２５〜４．１６（ｍ、１Ｈ）、３．３９〜３．３７（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、２Ｈ）、３．１９〜３．１１（ｍ、１Ｈ）、２．３５〜２．２７（ｍ、１Ｈ）、２．２０〜２．１５（ｍ、１Ｈ）、１．８９〜１．８４（ｍ、２Ｈ）、１．６８〜１．６１（ｍ、２Ｈ）、１．３７〜１．３６（ｍ、３Ｈ）、１．５３〜１．４３（ｍ、４Ｈ）、１．２８〜１．２１（ｍ、３Ｈ）、０．９４〜０．８９（ｍ、６Ｈ）、０．８３〜０．７９（ｍ、９Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、７５ＭＨｚ）：１７１．８１、１７０．１０、１６３．２９８、１４７．５９、１４４．３４、１４３．７２、１４２．７７、１３３．４６、１３２．４７、１２８．５６、１２８．１２、１２７．６２、１２７．１６、１２６．１８、１２５．８０、８５．６０、５４．７０、５４．５３、５１．４０、５１．２０、５０．９６、４０．８９、４０．０８、３９．８５、３９．５６、３８．１８、３８．０９、３５．５８、２８．５９、２７．０８、２６．２５、２５．２６、２５．４６、２４．５１、２４．０３、２３．００、２２．７１、２２．１５、２１．９４；ＨＲＭＳ算出値 ₃₉Ｈ₅₃ＢＮ₅Ｏ₅（Ｍ＋１）⁺ ６８２．４１３４、測定値６８２．４１５２。

実施例２６Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンボロン酸（６ｍ）

原材料として実施例２５の生成物５ｍを使用して、合成アプローチ及び処理は実施例４に記載のものと同様とし、乳白色固体を６６％の収率で得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、３００Ｍ）：δ９．２９（ｓ、１Ｈ）、８．７０（ｄ、Ｊ＝２．１Ｈｚ、１Ｈ）、８．４５（ｄ、Ｊ＝１．８Ｈｚ、１Ｈ）、８．４０（ｄ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、１Ｈ）、７．７４〜７．６６（ｍ、４Ｈ）、７．４５〜７．４２（ｍ、３Ｈ）、７．３７（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、１Ｈ）、５．０５〜４．９３（ｍ、１Ｈ）、４．５３〜４．４５（ｍ、１Ｈ）、３．３８（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、２．９８〜２．８３（ｍ、１Ｈ）、１．９９（ｓ、ｂｒ、２Ｈ）、１．８０〜１．５１（ｍ、１Ｈ）、１．５０〜１．２９（ｍ、６Ｈ）、０．８６〜０．７４（ｍ、１２Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃、７５ＭＨｚ）：１７０．５９、１７０．４５、１６３．８３、１４７．７４、１４４．２７、１４３．６１、１４２．７７、１３３．４６、１３３．２７、１３２．４７、１２８．５９、１２８．１２、１２７．６３、１２７．０５、１２６．２４、１２５．８４、５４．７６、３９．８８、３７．７４、２５．７８、２４．６１、２４．４８、２３．０３、２２．８２、２２．６３、２１．６０、２１．４５。ＭＳ（ＥＳＩ）測定値ｍ／ｚ４６２．３８２５（Ｍ−Ｈ）、算出値４６３．２９６６。

試験例１プロテアソームに対するトリペプチドボロン酸化合物又はトリペプチドボロン酸エステル化合物の阻害効果
プロテアソームの活性を、以下の蛍光ペプチドを使用してアッセイした：キモトリプシン様（ＣＴ−Ｌ）活性を決定するためのＳｕｃ−ｌｅｕ−ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−ＡＭＣ（Ｓｕｃはスクシニルを表し、ＡＭＣは７−アミノ−４−メチルクマリンを表す。SIGMAから購入した）、トリプシン様（ＴＬ）活性を決定するためのＺ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（Ｚはベンジルオキシカルボニルを表す。Calbiochemから購入した）、及びペプチジルグルタミルペプチド加水分解（ＰＧＰＨ）酵素活性を決定するためのＺ−ｌｅｕ−ｌｅｕ−Ｇｌｕ−βＮＡ（βＮＡはβ−ナフチルアミドを表す。SIGMAから購入した）。

前述の活性アッセイの方法は以下の通りである：ラットの肝臓から抽出された２０Ｓプロテアソーム１μｇを、それぞれ、様々な濃度の化合物、５０μＭの蛍光ペプチド、及び２０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌを含有する溶液１００μＬと共に３７℃で１時間インキュベートした。ＡＭＣ試薬及びβＮＡ試薬から放出された蛍光を、蛍光光度計ＦｌｕｏｓｔａｒＯＰＴＩＭＡ（BMG Germany）により、それぞれ３８０ｎｍ／４４０ｎｍ及び３３５ｎｍ／４１０ｎｍの励起波長／発光波長で測定した。０．１％のＤＭＳＯを溶媒対照として使用した。溶媒対照の蛍光と比較して、阻害率を算出した。上記アッセイは、陽性対照用の化合物として、抗がん薬ボルテゾミブ（白血病薬）、すなわちＰＳ３４１を使用した。結果を表１に示す。

試験例２ｉｎｖｉｔｒｏでの抗腫瘍活性の予備スクリーニング試験
この試験例において使用した試験方法は、例えば以下の参考文献（J. Immunol Method, 1983, 65, 55）を参照する、薬学分野における抗腫瘍活性試験に関する通例の方法である。

試験モデル：Ａ：ＭＴＴ法（ＨＬ−６０（ヒト白血病））、Ｂ：ＳＲＢ法（ＢＧＣ−８２３（ヒト胃がん））、Ｃ：ＳＲＢ法（Ｂｅｌ−７４０２（ヒト肝臓癌））、Ｄ：ＳＲＢ法（ＫＢ（ヒト上咽頭癌））。

前述の試験を、本発明の実施例１〜実施例２６の化合物を用いて実施し、試験結果を表２〜表５に示す。表中、試験結果を以下のように示す：「＋＋＋」は、３つの用量における阻害率が５０％より大きいことを示す。「＋＋」は、２つの用量における阻害率が５０％より大きいことを示す。「＋」は、１つの用量における阻害率が５０％より大きいことを示す。

上記の試験データは、以下のことを示す：（１）本発明のトリペプチドボロン酸又はトリペプチドボロン酸エステルは、好ましいｉｎｖｉｔｒｏでの抗腫瘍活性を有する。ほとんどの化合物の阻害率が５μＭの濃度で９０％より大きく、幾つかの化合物の阻害率は０．０５μＭの濃度でさえも依然として５０．０％より大きい場合がある。（２）活性は、保護基ピナンジオールを除去してもしなくても、ほとんど影響されない。

試験例３ｉｎｖｉｔｒｏでの抗腫瘍活性（ＩＣ₅₀）
先に言及した抗腫瘍活性の予備スクリーニング試験の結果に従って、より良好な抗腫瘍活性を有する化合物を選択して、以下の４種類の腫瘍細胞株に対するそのＩＣ₅₀値を測定した：ＨＬ−６０（前骨髄球性白血病細胞株）、ＢＸＰＣ−３（ヒト膵臓がん細胞株）、Ｕ２６６（多発性骨髄腫細胞株）及びＢＧＣ−８２３（ヒト胃癌細胞株）。ＨＬ−６０、ＢＸＰＣ−３及びＵ２６６はアメリカ合衆国培養細胞系統保存機関（Manassas, VA）から入手し、ＢＧＣ−８２３（ヒト胃癌細胞株）は、中国薬科大学から入手した。

試験方法：ＨＬ−６０細胞を、２０％のウシ胎児血清を含有するＩＭＤＭ培地中で、５％ＣＯ₂下３７℃で培養した。ＢＧＣ−８２３細胞及びＢＸＰＣ−３細胞を、１０％のウシ胎児血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培地中で、５％ＣＯ₂下３７℃で培養した。Ｕ２６６細胞を、１５％のウシ胎児血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培地中で、５％ＣＯ₂下３７℃で培養した。

細胞増殖を、標準的なＭＴＴ法により測定した。分散液（１５０μＬ、３０００個の細胞を含有する）培地を９６ウェルプレートの各ウェル中に添加し、増殖させ、２４時間後、種々の濃度の薬剤を含有する１０種類の培地（５０μＬ）を対応するウェル中に添加し、インキュベーションを７２時間継続した。それから５ｍｇ／ｍｌのＭＴＴ（２０μＬ）を含有する溶液を各ウェル中に添加し、３７℃で更に４時間インキュベートした。それからプレートを１０００ｒｐｍ、４℃で５分間遠心分離し、上層の培地を慎重に廃棄した。沈殿を１００μＬのＤＭＳＯに溶解し、吸光度をＩｎｆｉｎｉｔｅＭ２００（Tecan, Austria）マイクロプレートリーダーを用いて５４０ｎｍで読み取った。

結果を、３回の独立した測定の平均値であるＩＣ₅₀値として表した。結果を表６に示した。

結果に示したように、ほとんどの化合物がＰＳ３４１の選択性より良好な選択性を示し、幾つかの腫瘍株に対するその活性は、ＰＳ３４１の活性より明らかに高かった。例えば、ＢＧＣ−８２３細胞の増殖に対する６ｃ以外の全てのこれらの化合物の阻害率は、ＰＳ３４１の阻害率より良好であった。３種類の細胞の増殖に対する６ｆの阻害率は、ＰＳ３４１の阻害率より良好であった。

試験例４ｉｎｖｉｖｏでの抗腫瘍活性
動物：北京医科大学の実験動物科学部（Laboratory Animal Science Department）により提供された、半数が雄で半数が雌であるＩＣＲマウス（１８ｇ〜２２ｇ）。

腫瘍細胞株：マウスＨ２２細胞は、天然薬・生体模倣薬国家重点実験室（State Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs）の薬理学グループの細胞バンクにより提供された。

方法：マウス腫瘍細胞を採取して処理し、処理後に５×１０⁶個／ｍｌの細胞数まで希釈した。希釈した腫瘍細胞溶液を、無菌条件下、マウス１匹当たり０．２ｍｌでマウスの左前肢の腋下（oxter）に接種した。接種の２４時間後、マウスを複数の群に分割し、各群のマウスに１日１回１０日間経口投与した。１２日目に、腫瘍を剥ぎ取り、秤量し、各群の腫瘍の平均重量、標準偏差（ＳＤ）及びｐ値を算出した。

ｉｎｖｉｖｏでの抗腫瘍活性アッセイの上記の試験結果により、本発明のトリペプチドボロン酸の活性はボルテゾミブ（ＰＳ３４１）の活性に匹敵するものであるが、本発明の化合物の毒性は明らかに低減しており、特に化合物６ｇの毒性が更に低いことが示され、したがって化合物６ｇは、活性がより良好であり、毒性及び副作用がより低いプロテアソーム阻害剤の開発対象となる可能性を有する。

本発明の実施形態を詳細に説明したが、多数の修正及び変更が、本発明の基本精神から逸脱することなく当業者によりなされ得ることは明らかである。これらの変更及び修正は全て本発明の範囲内にあるものとみなされる。

Claims

以下の一般式（Ｉ）：

（式中、Ｒ₁、Ｒ₂及びＲ₃は各々独立してＬ−アミノ酸の側鎖であり、ＥはＨ又は２，３−ピナンジオールエステル基である）
により表されるトリペプチドボロン酸化合物。
前記Ｒ₁、前記Ｒ₂及び前記Ｒ₃が各々独立してＣ_1~6の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル、アリールメチル、又は芳香族ヘテロシクリルメチルであり、該アリールメチルの芳香族環又は該芳香族ヘテロシクリルメチルの芳香族環が、Ｃ_1~4の直鎖若しくは分岐鎖のアルキル、ヒドロキシル基、アミノ基、又はハロゲンから選択される基により任意に置換される、請求項１に記載の化合物。
前記アリールがフェニル若しくはナフチルであり、前記芳香族ヘテロシクリルがインジルであり、及び／又は前記芳香族環がメチル基、ヒドロキシル基、塩素原子若しくはフッ素原子により置換される、請求項２に記載の化合物。
前記Ｒ₁、前記Ｒ₂及び前記Ｒ₃が各々独立してベンジル、ｐ−ヒドロキシベンジル、β−インジルメチル、イソブチル又は２−ナフチルメチルである、請求項３に記載の化合物。
前記Ｒ₃基がイソブチルである、請求項４に記載の化合物。
ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート、
ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート、
ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−チロシル−Ｌ−ロイシンボレート、
ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−チロシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート、
ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート、
ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート、
ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート、
ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート、
ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボレート、
ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−ロイシンボレート、
ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンボレート、
ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンボレート、
ピナンジオールＮ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンボレート、
Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸、
Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸、
Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−チロシル−Ｌ−ロイシンボロン酸、
Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−チロシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸、
Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸、
Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸、
Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸、
Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸、
Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシンボロン酸、
Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−トリプトフィル−Ｌ−ロイシンボロン酸、
Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−フェニルアラニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンボロン酸、
Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンボロン酸、及び
Ｎ−ピラジンホルミル−Ｌ−ナフチルアラニル−Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロイシンボロン酸
である、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物を調製する方法であって、出発原材料としてピラジンカルボン酸を使用する工程、所要の２つのアミノ酸を１つずつ導入する工程、及びその後、所要の第３のアミノ酸のボロン酸エステルを導入して、一般式（Ｉ）のボロン酸エステルを得る工程、対応するボロン酸を調製することが必要とされる場合、上で言及した一般式（Ｉ）のボロン酸エステルを加水分解する工程を含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物を調製する方法。
前記Ｒ₃基がイソブチルである場合、前記一般式の化合物を、以下の合成経路：

に従って調製する、請求項７に記載の方法。
活性成分として治療上の有効量の請求項１〜６のいずれか一項に記載のトリペプチドボロン酸、及び任意に１種又は複数種の薬学的担体を含有する医薬組成物。
前記医薬組成物中の前記活性成分の含有量が０．５％〜９９％であり、前記薬学的担体の含有量が１％〜９９．５％である、請求項９に記載の医薬組成物。
前記組成物が経口投与用の形態又は非経口投与用の形態へと製剤化され、該非経口投与用の形態が、注射投与用、局所投与用、吸入投与用、直腸投与用又は埋め込み投与用の形態を含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
前記経口投与用の形態が、錠剤、カプセル、顆粒、若しくは経口投与に好適な液体調製物、又は持続放出形態若しくは定量放出形態であり、前記注射投与用の形態が、注射剤、凍結乾燥粉末注射剤、又は点滴に好適な溶液である、請求項１１に記載の医薬組成物。
プロテアソーム阻害剤の調製における請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物、又は請求項９〜１２のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
前記プロテアソーム阻害剤が、悪性腫瘍、様々な神経系変性疾患、筋悪液質、又は糖尿病に対する治療剤である、請求項１３に記載の使用。
前記悪性腫瘍が、白血病、胃がん、肝臓癌又は上咽頭癌である、請求項１４に記載の使用。