JP2012527621A - 切断可能な連結剤を有するコンジュゲート - Google Patents
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Abstract
Description
1.発明の分野
本発明は、試薬、特にイムノアッセイを実施するための試薬に関する。
Thermo Fisher Scientific、Inc.、マサチューセッツ州ウォルサム、から市販されているKingFisher(商標)磁性粒子プロセッサは、様々な生化学的工程を行うため、コーティングされた磁性粒子を試薬の入ったウェルの間で移動させるよう設計されている。可動性磁性ロッドは、磁性粒子の捕捉、移動および放出に用いられる。KingFisher(商標)磁性粒子プロセッサは、例えば磁性粒子のパラメータ、磁性粒子の放出に関するパラメータ、インキュベーション時間、ウェル内の液体撹拌およびウェルの使用順序等、多くのプログラム可能なオプションを有する。
本明細書に記載されている本発明は、コンジュゲート、例えば標識と結合した特異的結合要素の固相、例えば磁性微粒子への非特異的結合に起因するシグナルの除去に用いられ得る方法およびコンジュゲートに関与する。この方法およびコンジュゲートは、標識を、分析物と特異的に結合する特異的結合要素と連結するための切断可能な連結剤の使用に関与する。切断可能な連結剤の使用は、磁性微粒子、分析物およびコンジュゲートを含む複合体由来の特異的結合要素から標識を溶液中に放出させる。標識の放出後、いかなる標識をそこに非特異的に結合させた磁性微粒子も反応混合物から取り除かれる。コンジュゲート由来の標識、例えばアクリジニウムのみが溶出ウェル内に残される。
(a)分析物を含んでいる疑いのある生物試料を提供するステップ、
(b)分析物特異的な特異的結合要素と結合した固相材料を含む第一のコンジュゲートを提供するステップ、
(c)分析物特異的な特異的結合要素、標識および切断可能な連結剤を含み、分析物特異的な特異的結合要素と標識とが切断可能な連結剤によって接続している、第二のコンジュゲートを提供するステップ、
(d)(a)生物試料、(b)第一のコンジュゲートおよび(c)第二のコンジュゲートを容器内で混合して反応混合物を生成するステップ、
(e)標識を第二のコンジュゲートから切断させるステップ、
(f)固相材料と非特異的に結合した標識を除去するステップ、
(g)標識によって発生したシグナルを測定するステップおよび
(h)試料中の分析物の濃度を決定するステップ
を含む。
(a)分析物を含んでいる疑いのある生物試料を提供するステップ、
(b)分析物特異的な特異的結合要素と結合した固相材料を含む第一のコンジュゲートを提供するステップ、
(c)分析物、標識および切断可能な連結剤を含み、分析物と標識とが切断可能な連結剤によって接続している、第二のコンジュゲートを提供するステップ、
(d)(a)生物試料、(b)第一のコンジュゲートおよび(c)第二のコンジュゲートを容器内で混合して反応混合物を生成するステップ、
(e)標識をコンジュゲートから切断させるステップ、
(f)固相材料と非特異的に結合した標識を除去するステップ、
(g)標識によって発生したシグナルを測定するステップおよび
(h)試料中の分析物の濃度を決定するステップ
を含む。
本明細書において、用語「容器」は、チューブおよびウェルの両方を含むように企図されている。用語「ウェル」は、マイクロウェルおよびマイクロウェルよりも大容量のウェルを含む。KingFisher(商標)磁性粒子プロセッサは、マイクロウェルを利用する。KingFisher(商標)mL磁性粒子プロセッサは、チューブを利用する。本明細書に記載されている方法およびコンジュゲートの原理は、本明細書に記載されているイムノアッセイの実施にマイクロウェル、ウェルまたはチューブが用いられているかに関わらず同一である。
Claims (28)
- 特異的結合要素、標識および切断可能な連結剤を含み、特異的結合要素と標識とが切断可能な連結剤によって接続している、コンジュゲート。
- 切断可能な連結剤が標識と結合することのできる、請求項1のコンジュゲート。
- 切断可能な連結剤が特異的結合要素と結合することのできる、請求項1のコンジュゲート。
- 特異的結合要素が抗体である、請求項3のコンジュゲート。
- 標識が化学発光標識である、請求項1のコンジュゲート。
- 化学発光標識がアクリジニウムである、請求項5のコンジュゲート。
- 切断可能な連結剤が、3,3’−ジチオビス[プロピオン酸スクシンイミジル]、3−[(2−アミノエチル)ジチオ]プロピオン酸・HCl、1,4ビス−マレイミジル−2,3−ジヒドロキシブタン、酒石酸ジスクシンイミジルおよびエチレングリコールビス[スルホスクシンイミジルスクシネート]からなる群から選択される、請求項1のコンジュゲート。
- イムノアッセイであって、
(a)分析物を含んでいる疑いのある生物試料を提供するステップ、
(b)分析物特異的な特異的結合要素と結合した固相材料を含む第一のコンジュゲートを提供するステップ、
(c)分析物特異的な特異的結合要素、標識および切断可能な連結剤を含み、分析物特異的な特異的結合要素と標識とが切断可能な連結剤によって接続している、第二のコンジュゲートを提供するステップ、
(d)(a)生物試料、(b)第一のコンジュゲートおよび(c)第二のコンジュゲートを容器内で混合して反応混合物を生成するステップ、
(e)標識を第二のコンジュゲートから切断するステップ、
(f)固相材料と非特異的に結合した標識を除去するステップ、
(g)標識によって発生したシグナルを測定するステップおよび
(h)試料中の分析物の濃度を決定するステップ
を含むイムノアッセイ。 - 切断可能な連結剤が標識と結合することのできる、請求項8の方法。
- 切断可能な連結剤が特異的結合要素と結合することのできる、請求項8の方法。
- 第一のコンジュゲートの特異的結合要素が抗体であり、ならびに第二のコンジュゲートの特異的結合要素が抗体である、請求項10の方法。
- 標識が化学発光標識である、請求項8の方法。
- 化学発光標識がアクリジニウムである、請求項12の方法。
- 切断可能な連結剤が、3,3’−ジチオビス[プロピオン酸スクシンイミジル]、3−[(2−アミノエチル)ジチオ]プロピオン酸・HCl、1,4ビス−マレイミジル−2,3−ジヒドロキシブタン、酒石酸ジスクシンイミジルおよびエチレングリコールビス[スルホスクシンイミジルスクシネート]からなる群から選択される、請求項8の方法。
- イムノアッセイであって、
(a)分析物を含んでいる疑いのある生物試料を提供するステップ、
(b)分析物特異的な特異的結合要素と結合した固相材料を含む第一のコンジュゲートを提供するステップ、
(c)分析物、標識および切断可能な連結剤を含む特異的結合要素を含み、分析物と標識とが切断可能な連結剤によって接続している、第二のコンジュゲートを提供するステップ、
(d)(a)生物試料、(b)第一のコンジュゲートおよび(c)第二のコンジュゲートを容器内で混合して反応混合物を生成するステップ、
(e)標識を第二のコンジュゲートから切断するステップ、
(f)固相材料と非特異的に結合した標識を除去するステップ、
(g)標識によって発生したシグナルを測定するステップおよび
(h)試料中の分析物の濃度を決定するステップ
を含むイムノアッセイ。 - 切断可能な連結剤が標識と結合することのできる、請求項15の方法。
- 切断可能な連結剤が特異的結合要素と結合することのできる、請求項15の方法。
- 特異的結合要素が抗体である、請求項17の方法。
- 標識が化学発光標識である、請求項15の方法。
- 化学発光標識がアクリジニウムである、請求項19の方法。
- 切断可能な連結剤が、3,3’−ジチオビス[プロピオン酸スクシンイミジル]、3−[(2−アミノエチル)ジチオ]プロピオン酸・HCl、1,4ビス−マレイミジル−2,3−ジヒドロキシブタン、酒石酸ジスクシンイミジルおよびエチレングリコールビス[スルホスクシンイミジルスクシネート]からなる群から選択される、請求項15の方法。
- 特異的結合要素、標識および切断可能な連結剤を含み、特異的結合要素と標識とが切断可能な連結剤によって接続している、コンジュゲートを含むキット。
- 切断可能な連結剤が標識と結合することのできる、請求項22のキット。
- 切断可能な連結剤が特異的結合要素と結合することのできる、請求項22のキット。
- 特異的結合要素が抗体である、請求項24のコンジュゲート。
- 標識が化学発光標識である、請求項22のキット。
- 化学発光標識がアクリジニウムである、請求項26のキット。
- 切断可能な連結剤が、3,3’−ジチオビス[プロピオン酸スクシンイミジル]、3−[(2−アミノエチル)ジチオ]プロピオン酸・HCl、1,4ビス−マレイミジル−2,3−ジヒドロキシブタン、酒石酸ジスクシンイミジルおよびエチレングリコールビス[スルホスクシンイミジルスクシネート]からなる群から選択される、請求項1のキット。
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