JP2012527407A - ダイナミン環安定剤の使用 - Google Patents
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Abstract
Description
a)その「基礎」状態では、ダイナミンは、単量体、二量体およびホモ四量体の間で平衡状態にあり(Muhlbergら、1997)、また約1/分という「基礎」GTPアーゼ速度を有する。
b)ダイナミン二量体または四量体は、約50nmの外径および約30nmの内側開口を有する「環」に似た高次構造へと、さらに自己集合できる(Hinshaw and Schmid,1995)。これは一般に、インビトロで、500nMを超えるダイナミンに生じる。この環は常に閉じているとは限らず、直径は系の間で異なる。環形成は、低塩濃度緩衝液中へのダイナミンの透析によって促進され、約0.5〜1μMという高濃度ダイナミンで起こる。環形成物は、ダイナミンのGTPアーゼ活性を約10倍刺激する(Warnockら、1996)。GTP加水分解の速度上昇は、ダイナミン四量体が集合するときに限って活性になる、ダイナミン内の分子内GTPアーゼ活性化ドメインの活性化に起因する(Severら、1999)。ダイナミン変異体は、環形で長寿命であると予想されると報告されており−dynR725Aは、刺激されたGTP加水分解速度が低下した変異体である(Severら、2000a)。
c)集合鋳型の存在下で、ダイナミンはインビトロで、さらに、「螺旋」へと集合することができる。螺旋集合鋳型としては、リン脂質リポソーム、脂質ナノチューブまたは微小管などがある。その螺旋は、個々の環構造が、バネによく似た非常に細長い螺旋構造へと伸長したと考えられる。螺旋形成物は、ダイナミンのGTPアーゼ活性を100〜1000倍刺激する(Warnockら、1996)。インビトロで、刺激されたGTP加水分解速度は次にはダイナミン解体を推進し、GTP−結合に関して正の協同性を喪失することになる(Severら、2006)。
被検物質を提供すること;
ダイナミン環の形成に好適な条件で、被検物質をダイナミン蛋白質と共にインキュベートすること;および
被検物質が、ダイナミン環の蓄積を増進しかつ/またはダイナミン環の解体を抑制するかどうか、基礎的ダイナミンGTPアーゼ活性を増強するダイナミン環の蓄積および/またはダイナミン環の解体の抑制を評価すること;
を含む、ダイナミン環安定剤として使用するための被検物質をスクリーニングする方法が提供される。
1.ダイナミン自己集合体測定法−低ダイナミン濃度
前述(Warnockら、1996)の通り、同一のヘペスカラム緩衝液(HCB−20mM Hepes,2mM EGTA,1mM MgCl2,1mM PMSF,1mM DTT,20μg/mlロイペプチン,pH7.4)を使用して、天然のダイナミン(40nM)でダイナミン自己集合体測定法を実施した。しかし、全ての緩衝液が、試験ダイナミンインヒビター用に使用された媒体である、1% DMSOも含んでいた。NaCl濃度は、200mM NaClの原液から様々であった。ダイナミンを100,000gで20分間遠心分離し、上澄(S)およびペレット(P)を集め、トリクロロ酢酸で沈殿させ、SDS試料緩衝液中に可溶化し、SDSゲルで分離し、イン・ハウス・ヒツジ・ポリクローナルα−ダイナミンI抗体を使用して、ウェスタンブロッティングでダイナミンIを検出した。
このダイナミン自己集合体測定法を、実施例1.1に上述したヘペスカラム緩衝液を使用し、(上述の通り、1% DMSOを加えて)、天然のダイナミン(5.2μM)で実施した。Bis−T効果は、表示のBis−T濃度を有するダイナミンを室温(22℃)で10分間プレインキュベートすることにより測定した。NaCl濃度は、200mMNaClの原液から様々であった。インキュベーション後、試験管をTLA120.2ローター(Beckman)に移し、100,000gで20分間、卓上用超遠心機(Optima TLX,Beckman)で遠心分離し、上澄(S)およびペレット(P)を集め、トリクロロ酢酸で沈殿させ、SDS試料緩衝液中に可溶化し、SDSゲルで分離した。
様々なクラスのダイナミンインヒビターの中に、ダイナミン環安定剤のサブセットはある。Bis−T二量体ベンジリデンマロニトリルチルホスチン類は、螺旋状ダイナミンGTPアーゼ活性を強く阻害し、ダイナミン螺旋集合のための鋳型の非存在下、環形成の増進により基礎的活性を刺激することができる。図1は、環集合に必要なものより低い、漸増するダイナミン濃度における、精製したヒツジ脳ダイナミン(たいていこれは、ダイナミンIである)のインビトロGTPアーゼ活性を示す。黒い符号(実線)は、試験した全てのダイナミン濃度で、ダイナミンがリポソームにより刺激される(螺旋を形成する)ことを示す。5μMの2−シアノ−N−{3−[2−シアノ−3−(3,4,5−トリヒドロキシフェニル)−アクリロイルアミノ]−プロピル}−3−(3,4,5−トリヒドロキシフェニル)−アクリルアミド(Bis−T−23)は、全ての点で、ダイナミンを強く阻害する(しかし、非常に高いダイナミン(400nM)では、もしかすると高ダイナミン濃度のため、Bis−T−23は阻害できない)。
螺旋状ダイナミンの特徴は螺旋が非常に柔軟な構造であることである。GTP加水分解に際して、その直径を急速に減少(狭窄)できる一方で、長さを拡大することもできる(螺旋の拡大)(Stowellら、1999;Chenら、2004;Rouxら、2006)。これは、細胞内で、新たに出芽した細胞内小胞の頚部の分裂に使用される潜在的機序であると考えられる(Rouxら、2006)。螺旋状ダイナミンの高度な柔軟性は、GTPまたはGDPの非存在下でホスファチジルセリンリポソームに結合したダイナミンのEM解析により確認された(図8)。PSリポソームと混合されたダイナミンは、特有の性質を持つ螺旋を形成した(図8AおよびC):螺旋の個々のループは、直径が極めて多様であり、基礎をなす脂質に対して異なる角度で形成され、ループ間の間隙は極めて多様である。対照的に、5μMBis−T−23は、螺旋の形状を大きく変えた(図8BおよびD)。特に、螺旋の個々のループは、直径が極めて一様であり、基礎をなす脂質に対して一定の角度で形成され、ループ間の間隙は極めて一定である。Bis−T−23結合ダイナミンは、既報の脂質ナノチューブ上のGTPγS−結合ダイナミンに類似しているようであった(Stowellら、1999)。このことは、Bis−T−23が、環解体を防止することにより、ダイナミンループを、GTP−結合状態と類似した、柔軟性がなくかつ一様な直径に固定できることを示す。その作用は、各螺旋管の末端で特に顕著であり、これはBis−T−23の非存在下で「漸減」するが、その存在下では「鈍く」(図8C〜D)、Bis−T−23の作用を受けたループの非柔軟性を示す。
この実施例は、ダイナミン環安定剤が、細胞内でダイナミン環形成を増進することができ、またそれらの解体を防止または遅延できることを示す。小胞がクラスリン−依存性経路により飲食されるとき、部分的に狭窄した短い頚部を有するオメガ型形状として、細胞膜近くに内部移行することは周知である。これらは、低周波の透過電子顕微鏡法(EM)により検出することができる。ダイナソア等の古典的ダイナミンインヒビターで細胞を10〜30分間処理するとき、ダイナミン環は増進せずに、細胞の細胞膜にクラスリン被覆ピットの強大な蓄積を引き起こす(Maciaら、2006)。MiTMAB(Quanら、2007)またはダイノール34−2のような他のダイナミンインヒビターは、恐らく少なくとも部分的に、脂質表面でそれらの初期形成を防止するように作用し、また環安定剤性を持たないインヒビターであるため、被覆ピットの蓄積を誘導しない。これらの観察結果とは対照的に、ダイナミン環安定剤は、クラスリン被覆ピットの蓄積を細胞で引き起こし、2つの独特の特徴を有する:小胞頚部は、極めて細長く、また高電子密度環で取り囲まれている。ヒトリンパ芽細胞(ダイナミンIIを発現する)を、ダイナソア、MiTMAB(表示せず)またはBis−T−22で30分間処理し、EM解析用に調製した。ダイナソアおよびMiTMABは、以前に報告した予期された結果をもたらしたが、Bis−T−22は、非常に細長い頚部を有し、かつ環またはスパイラルで囲まれた、強大な蓄積を、クラスリン被覆ピットの全細胞で誘発した(図10A)。同様に、ラット脳シナプトソーム(単離神経終末、主としてダイナミンIを発現する)をBis−T−22で30分間処理し、KClで脱分極させてエンドサイトーシスを誘発するとき、1つの高電子密度環で取り囲まれた、捕獲エンドサイトーシスピットが検出された(図10B下方3パネル)。シナプトソームが刺激されなかったとき、環または捕獲小胞は何も検出されなかった(図10B最上)。このことは、以前に記述した、単環を形成する精製ダイナミンIに関するインビトロ観察結果によく似ている(図9)。
ダイナソアの構造に基づく、新たな一連の強力なダイナミンGTPアーゼインヒビター(Maciaら、2006)が設計された。これらの化合物は、ディンゴと呼ばれる。最も活性なディンゴ類縁体は、ディンゴ−4aであり、PS−刺激ダイナミンに対するIC50が300nMであるのに対して、ダイナソア(ディンゴ−7a)IC50は14μMである。ディンゴの構造は、Bis−Tの単量体型に似ており、また単量体チルホスチンにも似ている。しかし、ディンゴ類、および特にダイナソアは、ダイナミンインヒビターをスクリーニングするためのアッセイの通常成分である、界面活性剤トウィン−80に強く結合することが分かった(Quan and Robinson 2005)。本研究で、トウィン−80の非存在下で基礎的GTPアーゼアッセイを実施するとき、ディンゴ類およびダイナソアは両者ともBis−T−23と同程度まで、基礎的ダイナミンGTPアーゼ活性を刺激することが分かった(図10A)。このことは、基礎的ダイナミンGTPアーゼ活性化(すなわち、ダイナミン環活性化)は、Bis−Tチルホスチンにもイミノジン類にも限定されないことを示す。
本研究で、ダイナミンによる環の形成は、有足細胞におけるアクチン細胞骨格を増加するために不可欠であることが分かり、またダイナミンと線維状アクチン(F−アクチン)との間の直接相互作用が同定された。特に、アクチン線維に沿って結合し、それらを線維束へと並べる、ダイナミンにおける未確認のアクチン結合部位が同定された。F−アクチン、および特に、ゲルソリン(Gsn)によってそれらの反矢じり端上にキャップ化された短い線維は、ダイナミン環形成を増進し、そのGTPアーゼ活性を刺激する。この相互作用は、次には、さかとげ付き線維末端からゲルソリンを分離し、また線維伸長を増進する。ダイナミンとGsn−キャップ化線維の間の相互作用はこのように、アクチンの構造および動力学に影響を及ぼす。インビトロでアクチン結合が欠損しているダイナミン変異体は、細胞での多量体化が障害され、アクチンストレスファイバー集合が減少し、また培養有足細胞における表層アクチン細胞骨格の挙動が変化している。対照的に、アクチンアフィニティが増強したダイナミン変異体は、細胞質で多量体化する傾向が増強し、細胞の核周囲領域におけるストレスファイバー集合を刺激する。これらの結果から、ダイナミンのGTPアーゼ回路と有足細胞におけるアクチン細胞骨格の包括的組織化との間の複雑な相互作用が示唆される。
ダイナミンがアクチン細胞骨格に影響を及ぼすかどうかを決定するために、ダイナミンが線維状アクチン(F−アクチン)を直接結合するかどうかという問題を試験した。特に、高速遠心分離を受けてF−アクチンが沈殿する、アクチン共沈降法を実施した。ダイナミンがF−アクチンと相互に作用するのであれば、ダイナミンは共沈殿し、したがって、ペレット画分中に存在することが予期される。F−アクチンの存在下で、ダイナミンの大部分がペレット中に発見されたが、非存在下では発見されなかった(図12、レーン2および14)。ダイナミン−アクチン相互作用は、GTPの存在を必要とせず、ダイナミン多量体化を必要としなかったことを示す。さらに、GTPγSの存在下で、F−アクチンへのダイナミン結合が確認され(図12、レーン6)、ダイナミン多量体化は、結合に対して抑制的ではなかったことが分かる。アクチンに対するダイナミンのKdはおよそ0.4μMであり、アクチンに対するα−アクチニン4等の、他のアクチン結合蛋白質のアフィニティに似ている(Weinsら、2005)。
次に、アクチン結合部位は、ダイナミンII(dyn2)のアミノ酸399と444アミノ酸との間の領域に位置づけられた(図13)。アクチン結合ドメインに関して予測される通り(Vanら、1996)、この領域は、酵母から哺乳動物までの全てのダイナミン遺伝子産物に保存された、幾つかのプラスに帯電したアミノ酸を含む。この領域はまた、異なる哺乳動物のダイナミンアイソフォーム内で選択的にスプライシングされる(ダイナミンIおよびIIにおける異型aおよびbと呼ばれる)(図13,配列番号1〜4を参照)。このアクチン結合ドメイン内の、保存された荷電残基に部位特異的突然変異誘発を実施し、推定「機能喪失」変異体、dynK/E(配列番号9)およびdynK/A(配列番号10)、ならびに推定「機能獲得」変異体、dynE/K(配列番号11)を作成した(図13)。アクチンに対するdynK/EおよびdynK/Aのアフィニティは低下していた(それぞれ、Kd=1.7および2.8μM)が、アクチンに対するdynE/Kのアフィニティは上昇していた(Kd=0.03μM)(図14)。3つの変異体蛋白質全てが、基礎的GTP加水分解速度および刺激されたGTP加水分解速度に関して野生型力学的特性を有しており、適切な折り畳みを示す。
アクチン組織化におけるダイナミン−アクチン相互作用の役割を決定するために、F−アクチンに対するアフィニティが変化したダイナミン変異体を発現する有足細胞の形態学の帰結を調べた。十分に分化したマウス有足細胞では、アクチン細胞骨格は、細胞体内で、アクチン−ミオシン収縮性ストレスファイバーの平行な束、および葉状仮足および糸状仮足の形成を推進する細胞膜の下にある短い分岐したアクチン線維の皮質ネットワークに組織化される。GTPを結合できないダイナミン変異体である、dynK44Aの発現は、細胞体内のストレスファイバーを破壊し、太い、超束化アクチンネットワークを細胞膜の近くに生成し、多角形の細胞形状をもたらす(Severら、2007)。本研究で、dynK44Aの発現は、葉状仮足および糸状仮足の形成をなくすことが分かった(図15B)。「機能喪失」変異体dynK/Eの発現は、ストレスファイバーの減少および細胞形状の劇的変化をもたらした(図15C)。対照的に、「機能獲得」dynE/Kの発現は、細胞体内でのストレスファイバーの明白な増加をもたらした(図15D)。集合したGTP結合状態で長生きする変異体である、dynR725Aを発現する細胞で、同様のストレスファイバーの増加が確認された(図15E)。
ダイナミンがアクチン線維の構造に及ぼす影響を評価するために、ネガティブ染色および電子顕微鏡法(EM)を使用してF−アクチンを調べた。ダイナミンは、GTPγS(その環形成を増進する非加水分解性GTP類縁体)を加えることによって環へと多量体化し、アクチン線維を密着束へと架橋した(図16)。これらの束における線維間の間隙は、ダイナミン環の直径(約50nm)未満の17〜20nmであった。したがって、これらの結果から、他のアクチン結合蛋白質の非存在下で、ダイナミン環は、明確に規定された間隙を有する平行な線維から成るアクチン束を形成できることが示唆される。このような平行なアクチン線維は、ストレスファイバーおよび糸状仮足に生じる。これは、環形ダイナミンに関する生物学的機能の最初の報告であると考えられる。
次に、ダイナミンが、ゲルソリン(Gsn)キャップ化F−アクチンの反矢じり端を露出できるかどうかという問題を試験した。表示された比率(1G:A200または1G:A1000)(図17)のゲルソリンの存在下で、アクチンを重合させた。こうした条件下で、ゲルソリンは反矢じり端の>99%をキャップ化する。線維長は、Gsn:アクチン比(それぞれ、約0.5μmまたは2.7μm)によって規定され、またアクチン重合の程度は、約0.6μMという矢じり線維端の臨界濃度によって調節される。次いで、ダイナミンの存在下および非存在下で、アクチン溶液を0.33μMに希釈した。こうした条件下で、反矢じり端が利用できるようになったときだけ、アクチンは再重合できる。ダイナミンを加えることによってアクチン重合が誘導されたが、GTPγSの存在下に限られる(図17,菱形および丸を四角と比較されたい)。このことは、直接的にまたは反矢じり端におけるF−アクチン構造を変更することによって、さかとげ付き線維末端からゲルソリンを退去させる能力を有するダイナミン環と一致する。全体として、データから、F−アクチン動力学とダイナミン多量体化との間の相互接続が立証される。特に、短い、ゲルソリンキャップ化アクチン線維は、ダイナミン環形成を増進し、次にはゲルソリンを反矢じり端から分離し、線維伸長を可能にする。
dynR725AおよびdynE/Kは両者とも、ダイナミン環形成において長生きすると予測される(Severら、2007)。DynR725Aは、LPSモデルで、環へと多量体化することによって、したがって、プロテアーゼカテプシンL(CatL)による開裂を回避することによって、蛋白尿を救助すると以前に報告された(Severら、2007)。dynR725Aの発現は、ネフローゼ症候群のマウスモデルで蛋白尿を減少させるのに十分である(Severら、2007)。
ダイナミン環安定剤のインビトロ作用が細胞内でも起きるかどうかを決定するために、Bis−T−23が、培養マウス有足細胞におけるアクチン細胞骨格に及ぼす影響を試験した(図19)。Bis−T−23添加の10分後に、明確に規定されたストレスファイバーが劇的に増加した(図19B〜D)。これは、接着斑数の劇的な増加と関連していた(図19Bのパキシリン染色)。Bis−T−23はエンドサイトーシスを抑制する(表示せず)が、アクチン細胞骨格は、dynK44Aを発現する細胞と比べて大いに異なる(ストレスファイバーの損失および超束化アクチン線維の増加)。このように、確認されたストレスファイバー増加は、エンドサイトーシスの抑制が原因ではなさそうである。
環安定剤の有効性をインビボで立証するために、遺伝モデルおよび急性毒性モデルという、2つの異なる腎疾患マウスモデルを使用した。α−アクチニン4をコード化するACTN4遺伝子における「機能獲得」変異を発現するマウスは、完全に特性化されている(Kaplanら、2000;Hendersonら、2008;Yaoら、2004)。これらの動物は、ストレスファイバーの凝集を誘導するα−アクチニン4変異体の「超束化」活性のため、FP消失および蛋白尿を呈する。蛋白尿は、4〜6週令で現れる。本研究で使用した動物は、Dr.Martin Pollak,Brigham and Women’s Hospital,Boston,MA,USAから入手した。蛋白尿性表現型は、製造業者のプロトコールに従い、マウスアルブミン特異的ELISAおよびクレアチニン比較アッセイキット(Creatinine Companion assay kits(Exocell and Bethyl Laboratories))を使用して、尿中アルブミンおよびクレアチニンの測定により確認した。コントロールの動物は同腹子であった。Bis−T−23を100% DMSOに溶解して、10μg/μl原液を作り、その5μlを1×PBS 200μlで希釈し、これを時刻0時間に被検動物に腹腔内(IP)注射した(166μg/100g体重)。尿中蛋白質レベルを、注射後2時間毎に測定した。結果を図20に示す。図から分かるように、Bis−T−23投与後6時間まで、野生型レベルまでの蛋白尿の減少が得られた。
Claims (28)
- 細胞を、有効量のダイナミン環安定剤、あるいはダイナミン環安定剤のプロドラッグまたは薬学的に許容できる塩で処理することを含む、細胞内で、ダイナミン環形成および/またはダイナミン環の維持を増進するための方法。
- 前記ダイナミン環安定剤が螺旋状ダイナミンGTPアーゼインヒビターである、請求項1に記載の方法。
- 前記ダイナミン環安定剤がダイナミンGTPアーゼ活性のインヒビターでない、請求項1または2に記載の方法。
- 前記ダイナミン環安定剤が、ダイナミン環の形成を増進する化合物である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ダイナミン環安定剤がダイナミン環解体を抑制する化合物である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ダイナミン環安定剤が、螺旋状ダイナミンGTPアーゼインヒビター類、二量体チルホスチン類、二量体ベンジリデンマロニトリルチルホスチン類、イミノクロメン類、単量体チルホスチン類および3−置換ナフタレン−2−カルボン酸(ベンジリデン)ヒドラジド類からなる群から選択される、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- 最少1つのダイナミン環安定剤、あるいはダイナミン環安定剤のプロドラッグまたは薬学的に許容できる塩の有効量を、それを必要としている個体に投与することを含む、腎疾患または蛋白尿を特徴とする病気を予防または治療する方法。
- 前記ダイナミン環安定剤が螺旋状ダイナミンGTPアーゼインヒビターである、請求項7に記載の方法。
- 前記ダイナミン環安定剤がダイナミンGTPアーゼ活性のインヒビターでない、請求項7または8に記載の方法。
- 前記ダイナミン環安定剤がダイナミン環の形成を増進する化合物である、請求項7〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ダイナミン環安定剤がダイナミン環解体を抑制する化合物である、請求項7〜10のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ダイナミン環安定剤が、螺旋状ダイナミンGTPアーゼインヒビター類、二量体チルホスチン類、二量体ベンジリデンマロニトリルチルホスチン類、イミノクロメン類、単量体チルホスチン類および3−置換ナフタレン−2−カルボン酸(ベンジリデン)ヒドラジド類からなる群から選択される、請求項7〜11のいずれか1項に記載の方法。
- 前記腎疾患または病気が、ネフローゼ症候群、慢性腎疾患、糸球体疾患、糸球体機能障害、感染後糸球体腎炎およびメサンギウム増殖性糸球体腎炎を含む糸球体腎炎、糖尿病性腎症を含む腎症、有足細胞損傷および有足細胞傷害を含む有足細胞機能障害、ポドサイトパシー、有足細胞足突起消失、びまん性メサンギウム硬化症、先天性ネフローゼ症候群(たとえば、フィンランド型の(CNSF))、アルポート症候群および異型(Alport+)、微小変化型疾患、巣状分節性糸球体硬化症(FSGS)、崩壊性糸球体腎症、免疫および炎症性糸球体腎症、高血圧性腎症、および加齢性糸球体腎症からなる群から選択される、請求項7〜12のいずれか1項に記載の方法。
- 前記疾患または病気が、ネフローゼ症候群、慢性腎疾患、糸球体疾患、有足細胞機能障害、および有足細胞足突起消失から選択される、請求項13に記載の方法。
- 有足細胞を、有効量の少なくとも1つのダイナミン環安定剤、あるいはダイナミン環安定剤のプロドラッグまたは薬学的に許容できる塩で処理することを含む、有足細胞機能障害の予防方法または治療方法。
- 前記有足細胞機能障害が、前記有足細胞の足突起消失を特徴とする、請求項15に記載の方法。
- 有足細胞足突起の形成を維持および/または誘導するために、前記有足細胞が、前記ダイナミン環安定剤で処理される、請求項15または16に記載の方法。
- 細胞を、有効量の少なくとも1つのダイナミン環安定剤、あるいは前記ダイナミン環安定剤のプロドラッグまたは薬学的に許容できる塩で処理することを含む、細胞内で、接着斑および/またはアクチン細胞骨格を誘導する方法。
- アクチンストレスファイバーの形成を誘導するために、前記細胞が、前記ダイナミン環安定剤で処理される、請求項18に記載の方法。
- 被検物質を提供すること;
ダイナミン環の形成を増進するのに好適な条件下で、前記被検物質をダイナミン蛋白質とインキュベートすること;および
前記被検物質が、ダイナミン環の蓄積を増進しかつ/またはダイナミン環の解体を抑制するかどうか、ダイナミン環の蓄積および/または基礎的なダイナミンGTPアーゼ活性を増強するダイナミン環の解体の抑制を評価すること;
を含む、ダイナミン環安定剤として使用するための被検物質をスクリーニングするための方法。 - 前記ダイナミンインヒビターが、ダイナミン環の蓄積を増進するか、あるいはダイナミン環の解体を抑制するかどうかの前記評価が、基礎的なダイナミンGTPアーゼ活性の増強についてアッセイすることを含む、請求項20に記載の方法。
- ダイナミン環が維持されかつ/または有足細胞中に蓄積するかどうかを評価するために、有足細胞をダイナミンインヒビターで処理することを含む、請求項20に記載の方法。
- ダイナミン環が有足細胞に蓄積するかどうかの前記評価が、ダイナミンインヒビターが有足細胞足突起の形成を誘導するか否かを決定することによって査定される、請求項22に記載の方法。
- 細胞でのダイナミン環形成の増進および/またはダイナミン環の維持に使用するためのダイナミン環安定剤、あるいはダイナミン環安定剤のプロドラッグまたは薬学的に許容できる塩。
- 蛋白尿を特徴とする腎疾患または病気の予防または治療に使用するためのダイナミン環安定剤、あるいは前記ダイナミン環安定剤のプロドラッグまたは薬学的に許容できる塩。
- ダイナミン環形成および/またはダイナミン環の維持を、それを必要としている個体の細胞で増進するための薬剤の製造における少なくとも1つのダイナミン環安定剤、あるいはダイナミン環安定剤のプロドラッグまたは薬学的に許容できる塩の使用。
- 蛋白尿を特徴とする腎疾患または病気を予防または治療するための、少なくとも1つのダイナミン環安定剤、あるいはダイナミン環安定剤のプロドラッグまたは薬学的に許容できる塩の使用。
- 蛋白尿を特徴とする腎疾患または病気を予防または治療するための薬剤の製造における、少なくとも1つのダイナミン環安定剤、あるいはダイナミン環安定剤のプロドラッグまたは薬学的に許容できる塩の使用。
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