JP2012508764A - Bmp−6の調節によって鉄の恒常性を制御するための方法および組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2008年11月13日に出願された米国仮特許出願第61/114,290号;および2008年12月29日に出願された米国仮特許出願第61/141,155号に対する優先権を主張するものであって、該出願は全体において参照することによって本明細書に援用される。
本発明は、概して、鉄の恒常性疾患の治療、予防および改善に関する。本発明は、より具体的には、BMP−6およびBMP−6タンパク質特異的試薬、例えばヒトの血清鉄、血清ヘモグロビンおよび/またはヘマトクリットレベルを変化させるための抗体を用いる方法に関する。該抗体は、炎症のヘモクロマトーシスおよび貧血の予防および治療のための医薬組成物において有用である。
鉄は、ほとんど全ての生物の増殖および生存に必要な必須元素である。赤血球(RBC)は、赤色で鉄に富むタンパク質であるヘモグロビン(Hb)を含有するが、それは肺から全ての体の筋肉および臓器へ酸素を輸送し、そこで酸素が反応して正常な活動のために体が必要とするエネルギーを供給する。赤血球の数または赤血球が含有するヘモグロビンの量が正常以下に下がると、体は、適切に機能するために必要な量よりも少ない酸素しか受け取ることができず、必要な量よりも少ないエネルギーしか産生することができなくなる。この状態は一般的に、貧血と呼ばれる。幼児および小児の中での貧血の一般的な原因は、鉄欠乏である。米国における20%もの小児および開発途上国における80%もの小児が、年齢18歳までのある時期に貧血になるようである。Martin, P. L., et al. The Anemias, Principles and Practices of Pediatrics, 1657 (2d ed., Lippincott 1994)。
本発明は、ヘプシジン欠乏による鉄過剰疾患またはヘプシジン過剰による炎症の貧血を治療するためにBMP−6を調節する新規な方法を提供する。
驚いたことに、本発明者はBMP−6がヘプシジン発現および鉄代謝の重要な制御因子であることを発見した。可溶性ヘモジュベリン(HJV.Fc)と比較して、相同のDRAGON.Fc融合タンパク質は、インビトロでBMP−2およびBMP−4によるヘプシジンプロモーター活性化のより強力な阻害剤であるが、BMP−6の弱い阻害剤である。インビボでは、DRAGON.Fcはヘプシジン発現および鉄代謝に対する効果はないが、一方、HJV.Fcまたは特異的中和BMP−6抗体はヘプシジン発現を阻害し、血清鉄を上昇させる。さらに、Bmp6欠損マウスは遺伝性ヘモクロマトーシスと類似した表現型を有し、ヘプシジン発現の減少、フェロポーチン発現の上昇、血清鉄およびトランスフェリン飽和度の上昇、脾臓鉄貯蔵の減少、ならびに組織鉄過剰を有する。本発明者は、マウスにおけるBMP−6投与がヘプシジン発現を上昇させ、血清鉄を減少させることを示す。まとめると、これらのデータは、BMP−6がインビボでのヘプシジン発現および鉄代謝の内在性制御因子として重要な役割を有することを支持している。
コドンを最適化したDRAGON.FcをコードするcDNAは、予測される(predicted)GPIアンカーの上流のヒトDRAGONタンパク質配列(UniProtKB/Swiss-Prot accession Q6NW40、アミノ酸1〜409)ならびにヒトIgGl Fc配列(Signal pIg plusベクター(R&Dシステムズ社)およびGenBank AF150959由来)に基づいて、ゲンスクリプト社(ピスカタウェイ、ニュージャージー州08854)によって製造されたものである。
DRAGON.FcをコードするcDNAは、メーカーの使用説明書に従って293フェクチン(インビトロジェン社)を用いて、フリースタイル293−F細胞(インビトロジェン社)にトランスフェクトした。トランスフェクトした細胞をGIBCOフリースタイル293発現培地(インビトロジェン社)中、加湿した8%CO2インキュベーター内にて37℃で、110RPMで振盪しながら培養した。トランスフェクションから7日後、遠心分離によって細胞をペレット状にし、Babbitt, J.L., et al. 2005. J. Biol. Chem.280:29820-29827に記載されているように、Hi−Trap rProtein A FFカラム(アマシャム・バイオサイエンシズ社)を用いるワンステップタンパク質Aアフィニティークロマトグラフィーによって培地からDRAGON.Fcを精製した。HJV.FcはBabitt, J.L., et al. 2007. J Clin Invest. 117:1933-9に記載されているようにして産生した。純度を決定し、タンパク質濃度を定量化するために、DRAGON.FcおよびHJV.Fcを還元SDS−PAGEで分析し、続いてバイオ−セーフ・クマシーブルー染色(バイオ・ラッド社)、ならびに抗HJV抗体(Babitt, J.L., et al. 2006. Nat. Genet. 38:531-539)、抗DRAGON抗体(Samad, T.A., et al. 2004. J. Neurosci. 24:2027-2036)、およびヤギ抗ヒトFc抗体(ジャクソン・イムノリサーチ・ラボラトリーズ)によるウェスタンブロットを行った(Babitt, J.L., et al. 2006. Nat. Genet. 38:531-539; Samad, T.A., et al. 2004. J. Neurosci. 24:2027-2036に記載されている)。ウシ血清アルブミンタンパク質アッセイ(ピアース社)によってタンパク質濃度も定量化した。
精製された組換えヒトBMP−6を以前に記載されたようにして調製した(Simic, P., et al.2006. J Biol Chem. 281:25509-21)。凍結乾燥したBMP−6を動物注射用の20mM酢酸ナトリウム、5%マンニトール溶液、pH4.0に溶解した。
肝細胞癌由来Hep3B細胞中でのヘプシジンプロモータールシフェラーゼレポーターアッセイは、以前に記載されたデュアルルシフェラーゼレポーターアッセイシステム(プロメガ社)を用いて(Babitt, J.L., et al. 2006. Nat. Genet. 38:531-539; Babitt, J.L., et al. 2007. J Clin Invest. 117:1933-9)、下記の修飾を施して行った。ヘプシジンプロモータールシフェラーゼレポーター(Babitt, J.L., et al. 2006. Nat. Genet. 38:531-539)およびコントロールのウミシイタケルシフェラーゼベクター(pRL−TK)をトランスフェクトしたHep3B細胞を、1%FBSを6時間補充したL−グルタミン(インビトロジェン社)入りのa−MEM中で血清不足にし、続いて25ng/mLのBMP−2(Vicki Rosen氏(Harvard School of Dental Medicine)のご厚意によって提供された)、BMP−4、BMP−6、もしくはBMP−7、50ng/mLのBMP−5または5ng/mLのBMP−9(R&Dシステムズ社)で、単独または0.2〜25μg/mLのDRAGON.Fc、HJV.Fcもしくは抗BMP−6抗体と共に16時間刺激した。BMPリガンドの相対的濃度は、以前に記載されたように、同程度のヘプシジンプロモータールシフェラーゼ活性を誘発するように選択した(Babitt, J.L., et al. 2007. J Clin Invest. 117:1933-9)。
全ての動物プロトコールは、マサチューセッツ・ジェネラル・ホスピタルの動物管理使用委員会(Institutional Animal Care and Use Committee)ならびにザグレブ大学医学部(University of Zagreb School of Medicine)の動物管理委員会(Institutional Animal Care Committee)および科学技術部(Ministry of Science and Technology)によって承認された。8週齢の129S6/SvEvTacマウス(タコニック社)をマサチューセッツ・ジェネラル・ホスピタルのげっ歯類施設で飼育し、380ppmの鉄を含むプロラボ5P75イソプロRMH3000ダイエットで飼育した。混合129Sv/C57バックグラウンドのBmp6欠損マウス(Solloway MJ, et al. 1998. Dev Genet. 22:321-39)は、Elizabeth J. Robertson氏のご厚意によって提供され、ザグレブ大学医学部(University of Zagreb School of Medicine)で飼育し、標準的な180mg/kgの鉄を含むGLPダイエット(4RF21、ムセドラ、イタリア)で維持した。
全RNAは、メーカーの使用説明書に従ってRNeasyキット(キアゲン社)を用いてマウス肝臓から単離した。RPLl9に対するHampl mRNA転写のリアルタイム定量化は、以前に記載されたように2ステップの定量的リアルタイムRT−PCRを用いて行った(Babitt, J.L., et al. 2006. Nat. Genet. 38:531-539; Babitt, J.L., et al. 2007. J Clin Invest. 117:1933-9; Xia, Y., et al. 2007. J Biol Chem. 282:18129-40)。野生型マウスに対するBmp6欠損マウスの肝臓由来のBmp2、Bmp4、およびBmp6 mRNAのリアルタイム定量化も、以前に記載されたプライマーを用いて行った(Kautz, L., et al. 2008. Blood. 112:1503-9)。
フェロポーチンアッセイのために、脾臓膜標本を以前に記載されたようにして調製した。タンパク質濃度はBCAアッセイ(ピアース社)によって決定した。lxラエムリ緩衝液中、室温で30分間可溶化後、プレキャストNuPAGE Novex4〜12%ビス−トリスゲル(インビトロジェン社)を用いてサンプル当たり20μgのタンパク質をSDS−PAGEによって分離し、PDVF膜上に移した(液体輸送法)。0.1%ツイーンを含有するトリス緩衝生理食塩水(TBS)(TBS−T)中の10%脱脂乳でブロットを飽和し、2.5μg/mlのフェロポーチン抗体(5%脱脂乳を含有するTBS−T中で希釈した)を用いて4℃で一晩プローブした(Knutson, M.D., et al. 2005. Proc Natl Acad Sci U S A .102:1324-8)。TBS−Tで洗浄後、ブロットを1:5000希釈のペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ウサギIgG(シグマ社)で1時間インキュベートした。検出は高感度化学発光ECLB法(パーキンエルマー社)で行った。Babitt, J.L., et al. 2006. Nat. Genet. 38:531-539に記載されているように、ブロットを剥がし、ローディングコントロールとしてのβ−アクチン発現用に再プローブした。化学発光は、IPLabスペクトルソフトウェアバージョン3.9.5 r2(スキャナリティックス社)を用いて定量化した。
以前に記載されたようにして血清を収集し、鉄濃度および不飽和鉄結合能を分析した。総鉄結合能およびトランスフェリン飽和度を、以前に記載されたようにして計算した。肝臓および脾臓組織について、非ヘム鉄の定量的測定を以前に記載されたようにして行った(Babitt, J.L., et al. 2007. J Clin Invest. 117:1933-9を参照のこと)。
Bmp6欠損マウスおよび野生型マウス由来の肝臓を2%パラホルムアルデヒドにて固定し、続いて2%エタノールで固定し、パラフィンに包埋した。5pmのセクションをキシレン中で脱パラフィンし、蒸留水に水和させた。次いでセクションを等量の2%フェロシアン化カリウム(エレクトロン・マイクロスコピー・サイエンシズ社、ハットフィールド、ペンシルベニア州)および2%塩酸を含む染色溶液中に、室温で60分間置いた。次いでセクションを蒸留水でリンスし、サフラニン0.2%(エレクトロン・マイクロスコピー・サイエンシズ社、ハットフィールド、ペンシルベニア州)中で2分間対比染色し、1%酢酸で洗浄し、その後95%アルコール、無水アルコールで脱水し、キシレンでクリアにし、DPXにマウントした。
両側スチューデントt検定でP<0.05である場合に統計的有意性があると決定した。
図1. Hep3B細胞にヘプシジンプロモータールシフェラーゼレポーターおよびコントロールのウミシイタケルシフェラーゼベクター(pRL−TK)をトランスフェクトした。示しているように、トランスフェクションから48時間後、細胞をBMP−2、BMP−4、BMP−5、BMP−6、BMP−7、またはBMP−9リガンドの非存在下または存在下、単独または0.2〜25μg/mLの精製DRAGON.Fc(Dra.Fc)もしくはHJV.Fcと組み合わせて16時間インキュベートした。細胞溶解物のルシフェラーゼ活性をアッセイし、トランスフェクション効率を求めるために、相対的ルシフェラーゼ活性をウミシイタケルシフェラーゼコントロールに対するホタルルシフェラーゼの比率として計算した。結果は、BMPリガンド単独で処理した細胞と比較したDRAGON.FcまたはHJV.Fcと組み合わせてBMPリガンドで処理した細胞についての相対的ルシフェラーゼ活性のパーセント減少の平均値+/−標準偏差として報告している(群あたりn=2〜4)。正確なP値を示している。(1A)BMP−2、BMP−4、BMP−5、BMP−6、BMP−7、およびBMP−9リガンドに対するDRAGON.Fcの効果。(1B−1D)BMP−2(1B)、BMP−4(1C)およびBMP−6(1D)の阻害についてのDRAGON.FcとHJV.Fcの直接比較を示している。
図2. 8週齢の雄性129S6/SvEvTacマウスに、精製可溶性DRAGON.Fc(Dra.Fc)を、5(n=3)もしくは10mg/kg(n=4)で、または等量の等張生理食塩水(コントロール(Con)、n=7)を毎週3回3週間腹腔内注射した。ポジティブコントロールとして別の群のマウスに、等量のHJV.Fcを、5(n=3)もしくは7mg/kg(n=4)で、または等量の等張生理食塩水(コントロール(Con)、n=7)を毎週3回3週間腹腔内注射した。DRAGON.FcおよびHJV.Fc投与の両方の結果は類似しており、それゆえ組み合わせて1つの群にした。(A)全肝臓RNAを単離し、内部コントロールとしてのRPLl9mRNAに対するヘプシジンmRNAについての定量的リアルタイムRT−PCRによって分析した。(B)ウェスタンブロットによって脾臓膜標本のフェロポーチン(FPN)発現を分析した。ブロットを剥がし、ローディングコントロールとしての抗p−アクチン抗体でプローブした。p−アクチン発現に対するフェロポーチン発現について、化学発光をIPLabスペクトルソフトウェアによって定量化した。(CおよびD)血清鉄(C)およびトランスフェリン飽和度(D)の測定。(EおよびF)肝臓(E)および脾臓(F)組織鉄含量の定量化。(G)図1と同様にHep3B細胞にヘプシジンプロモータールシフェラーゼレポーターおよびpRL−TKをトランスフェクトした。トランスフェクションから48時間後、細胞を1ng/mLのBMP−2の非存在下または存在下、単独または擬似処置コントロールマウス由来(コントロール(Con)、n=4)もしくはDRAGON.Fc処置マウス由来(Dra.Fc、n=4)の20%のプール血清と組み合わせて16時間インキュベートした。相対的ルシフェラーゼ活性は図1と同様にして計算した。結果は平均値+I−標準偏差として報告している。正確なP値を示している。
図3. (A)図1と同様にして、Hep3B細胞にヘプシジンプロモータールシフェラーゼレポーターおよびコントロールのpRL−TKをトランスフェクトした。示しているように、トランスフェクションから48時間後、細胞をBMP−2、BMP−4、BMP−5、BMP−6、BMP−7、またはBMP−9リガンドの非存在下または存在下、単独または0.2〜25μg/mLの中和BMP−6抗体と組み合わせてインキュベートした(群あたりn=2)。相対的ルシフェラーゼ活性は図1と同様にして計算した。(B−D)8週齢の雄性129S6/SvEvTacマウスに、中和BMP−6抗体を10mg/kg(a−BMP−6、n=4)で、または等量の等張生理食塩水(コントロール、n=4)を毎日3日間腹腔内注射した。(B)全肝臓RNAを単離し、内部コントロールとしてのRPLl9mRNAに対するヘプシジンmRNAについて定量的リアルタイムRT−PCRによって分析した。(CおよびD)血清鉄(C)およびトランスフェリン飽和度(D)の測定。結果は平均値+I−標準偏差として示している。正確なP値を示している。
図4. 8週齢の雄性Bmp6欠損マウス(n=5)および系統を一致させた(strain matched)野生型コントロールマウス(WT、n=5)について、図2に記載されているようにして、(A)定量的リアルタイムRT−PCRによってRPL19mRNA発現に対するヘプシジンmRNA発現を分析し、(BおよびC)ウェスタンブロット(C)および続くIPLabスペクトルソフトウェアを用いた定量化(B)によってp−アクチン発現に対するフェロポーチン発現を分析し、(D)血清鉄、(E)血清トランスフェリン飽和度、(F)肝臓鉄含量、(G)ならびに脾臓鉄含量を分析した。(H)野生型マウス(WT)およびBmp6欠損マウス肝臓の組織鉄のペルルスのプルシアンブルー染色。本来の倍率x10。結果は平均値+/−標準偏差として示している。正確なP値を示している。
図5. 8週齢の雄性129S6/SvEvTacマウスにBMP−6を250μg/kg(n=6)もしくは1000μg/kg(n=7)で、または等量のビヒクル単独(n=6)を腹腔内注射した。注射から6時間後、血液および肝臓を収集した。(A)全肝臓RNAを単離し、内部コントロールとしてのRPL19mRNAに対するヘプシジンmRNAについて定量的リアルタイムRT−PCRによって分析した。(BおよびC)血清鉄(B)およびトランスフェリン飽和度(C)の測定。結果は平均値+/−標準偏差として報告している。正確なP値を示している。
ウシ流産菌(BA)は、マウスに腹腔内(IP)注射された場合に炎症性貧血(inflammatory anemia)を誘発するために用いられる。結果として生じる貧血は、通常は7日以内に発症し、ヘモグロビンレベルの2〜3g/dLの低下によって特徴付けられる。該貧血は典型的には注射後28日間続く。28日後、マウスは回復し始め、ヘモグロビンレベルが上昇し始めるのが見られる。このプロトコールは、1)フェノールを含む(phenolized)緩衝液からBA粒子をどのようにして洗浄および分離し、2)10匹のマウスについて200μL容量の5x108粒子/マウスのIP送達用のBAをどのようにして調製するのかを記載するものである。
BA:60mLボトルに入ったウシ流産菌リング試験抗原(菌株1119−3)は、米国農務省、動植物衛生検査部、国立獣医学検査機関(エームズ、アイオワ州)から購入することができる。ブルセラ症リング試験抗原は、フェノールを含む(phenolized)緩衝液中の、死滅し、染色されたウシ流産菌1119−3細胞株の懸濁液を含有する。各60mLボトルの濃度はおよそ109粒子/mLである。抗原は4℃で保存する。
希釈剤:DPBS(ギブコ社)を洗浄剤、担体およびコントロールに用いた。
BMP−6に特異的に結合する抗体を、ウシ流産菌を腹腔内注射したマウスに投与する。ウシ流産菌の腹腔内注射によるマウスの炎症性貧血の症状を減少または消滅させる抗体は、哺乳類の貧血の治療に用いられるのに適切である。
上記実施例13にて用いられたHJVおよびBMP−6抗体が、同一部位でBMP−6に結合するかどうかを確認するためにプルダウンアッセイを行った。
1.ブループラス2プレステインドMWラダーを参照のこと
2.hBMP6+mAb混合物のプレIP分割量(Pre-IP aliquot)
3.hBMP6+mAbのIP
4.hBMP6+mAb+5xhHJV.HisのIP
5.hBMP6+mAb+25xhHJV.HisのIP
6.mAbのみのIP
7.ブランク
8.hBMP6+mAb+5xhHJV.HisのプレIP分割量
9.hBMP6+mAb+25xhHJV.HisのプレIP分割量
10.mAbのプレIP分割量
図6のレーン3に示すように、抗BMP6 mAb(R&Dシステムズ社)はhBMP6をプルダウンした。図6のレーン4および5に示すように、モル過剰hHJV.Hisの添加はプルダウンを阻害しなかった。これに基づいて、我々はhHJV.Hisおよび抗BMP6はhBMP6上の異なる部位に結合しうると認識するに至った。次に、hHJV.hisもまたプルダウンされるかどうかを調べるために、その存在についてブロットをチェックした。
hBMP6ペプチドTQSQDVARVSSASDYに対する抗体を作成した。
下記の参考文献のそれぞれは、全体において本明細書で説明しているかの如く、参照することによって本明細書に援用される:
1.Roetto, A., et al. 2003. Nat. Genet. 33:21-22.
2.Papanikolaou, G., et al.2004. Nat. Genet. 36:77-82.
3.Babitt, J.L., et al. 2006. Nat. Genet. 38:531-539.
4.Babitt, J.L., et al. 2007. J Clin Invest. 117:1933-1939.
5.Shi, Y., and Massague, J. 2003. Cell .113,685-700.
6.Wang, R.H., et al. 2005. Cell Metab.2:399-409.
7.Pigeon, C., et al.2001. J. Biol. Chem. 276:7811-7819.
8.Nemeth, E., et al. 2004. Science. 306:2090-2093.
9.Nicolas, G., et al. 2002. J. Clin. Invest.110:1037-1044
10.Nemeth, E., et al. 2004. J. Clin. Invest. 113: 1271-1276.
11.Pietrangelo, A. 2006. 1763:700-710.
12.Nemeth, E., et al. 2003. Blood. 101 :246 1-2463.
13.Weiss, G. and Goodnough, L.T. 2005. N.Engl. J. Med. 352:1011-1023.
14.Andrews NC. 2008. Blood. 1122 19-30.
15.Huang, F.W., et al. J. Clin. Invest. 115:2187-2191.
16.Niederkofler, V., Salie, R., Arber, S. 2005. J Clin Invest. 115:2180-6.
17.Truksa, J., et al. 2006. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 103:10289-10293.
18.Verga Falzacappa, M.V., et al. 2008. J Mol Med. 86:531-40.
19.Yu, P.B., et al. 2008. Nat Chem Biol. 4:33-41.
20.Samad, T.A., et al. 2004. J. Neurosci. 24:2027-2036.
21.Babitt, J.L., et al. 2005. J. Biol. Chem.280:29820-29827.
22.Samad, T.A., et al. 2005. J. Biol. Chem. 280:14122- 14129.
23.Balemans, W., Van Hul, W. 2002. Dev Biol. 250:23 1-50.
24.Solloway MJ, et al. 1998. Dev Genet. 22:321-39.
25.Xia Y, et al. 2008. Blood. 1115 195-204.
26.Kautz, L., et al. 2008. Blood. 112:1503-9.
27.Simic, P., et al.2006. J Biol Chem. 281:25509-21.
28.Xia, Y., et al. 2007. J Biol Chem. 282:18129-40.
29.Knutson, M.D., et al. 2005. Proc Natl Acad Sci U S A .102:1324-8.
30.Andriopoulos, B. et al 2009. Nat Genet. 41(4):482-7.
Claims (53)
- 対象における鉄の恒常性を制御する方法であって、該対象における鉄の恒常性を変化させるのに十分なレベルでBMP−6シグナル伝達を調節するのに十分な医薬組成物の有効量を該対象に投与する工程を含む方法。
- 組成物の投与がBMP−6シグナル伝達を減少させる、請求項1記載の方法。
- 組成物がBMP−6に結合することができる試薬を含む、請求項1記載の方法。
- 試薬が残基TQSQDVARVSSASDY(配列番号3)内でBMP−6に結合する、請求項3記載の方法。
- 試薬が抗体である、請求項3記載の方法。
- 抗体が、可溶性ヒトヘモジュベリンタンパク質によるBMP−6結合を競合的に阻害する、請求項5記載の方法。
- 可溶性ヒトヘモジュベリンタンパク質がHJV.FcまたはHJV.Hisである、請求項6記載の方法。
- 抗体が、可溶性ヒトヘモジュベリンタンパク質が結合するドメインと異なるBMP−6上のドメインに結合する、請求項5記載の方法。
- 可溶性ヒトヘモジュベリンタンパク質がHJV.FcまたはHJV.Hisである、請求項8記載の方法。
- 化合物の投与が、ヘプシジン発現のヘモジュベリン媒介誘導を減少させる、請求項2〜9のいずれか1項記載の方法。
- 試薬が、ヘモジュベリンとBMP−6の間の相互作用を阻害するのに十分な量にて投与される、請求項3〜10のいずれか1項記載の方法。
- 試薬が、BMP−2、BMP−4、BMP−5、BMP−7またはBMP−9よりもヒトBMP−6を好んで阻害する、請求項2〜11のいずれか1項記載の方法。
- 試薬が、BMP−7よりも少なくとも5倍高い親和性でBMP−6に結合する、請求項12記載の方法。
- 組成物の投与が対象の血清鉄レベルの上昇をもたらす、請求項2記載の方法。
- 組成物の投与が対象の血清トランスフェリン飽和度の上昇をもたらす、請求項2記載の方法。
- 組成物の投与がBMP−6シグナル伝達を上昇させる、請求項1記載の方法。
- 組成物が血清BMP−6レベルを上昇させることができる試薬を含む、請求項16記載の方法。
- 試薬がBMP−6発現レベルを上昇させる、請求項17記載の方法。
- 対象が、遺伝性ヘモクロマトーシスの1つ以上の症状であって、血清鉄レベルの上昇、血清トランスフェリン飽和度の上昇、ヘプシジン発現の減少、脾臓鉄貯蔵の減少、フェロポーチン発現の上昇、および組織鉄過剰からなる群から選択される1つ以上の症状を有する、請求項16記載の方法。
- 試薬が、遺伝性ヘモクロマトーシスと関連する少なくとも1つの症状を軽減するのに十分な量にて投与される、請求項19記載の方法。
- 組成物の投与がBMP−6の発現レベルを減少させる、請求項2記載の方法。
- 組成物が、BMP−6遺伝子発現を阻害することができる試薬を含む、請求項21記載の方法。
- 試薬が、siRNA、miRNA、またはアンチセンスRNAである、請求項22記載の方法。
- BMP−6の発現の減少が、対象の血清鉄レベルまたは血清トランスフェリン飽和度を上昇させるのに十分である、請求項21〜23のいずれか1項に記載の方法。
- BMP−6に特異的に結合する抗体を含む、鉄欠乏症の治療のための組成物。
- 抗体が、残基TQSQDVARVSSASDY(配列番号3)内でBMP−6に結合する、請求項25記載の方法。
- 抗体が、可溶性ヒトヘモジュベリンタンパク質によるBMP−6結合を競合的に阻害する、請求項25記載の組成物。
- 可溶性ヒトヘモジュベリンタンパク質がHJV.FcまたはHJV.Hisである、請求項27記載の方法。
- 抗体が、可溶性ヒトヘモジュベリンタンパク質が結合するドメインと異なるBMP−6上のドメインに結合する、請求項25記載の組成物。
- 可溶性ヒトヘモジュベリンタンパク質がHJV.FcまたはHJV.Hisである、請求項29記載の方法。
- 抗体が、BMP−6へのHJV.Fc結合を25%〜100%減少させるのに十分な量にて存在する、請求項25記載の組成物。
- 抗体が、R&Dシステムズ社のモノクローナル抗体mAb507、R&Dシステムズ社のポリクローナル抗体、およびサンタクルズ社のポリクローナル抗体からなる群から選択される、請求項25記載の組成物。
- 抗体がヒト抗体である、請求項25記載の組成物。
- 該抗体が、キメラ化抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、単鎖Fv断片、F(ab’)2断片、Fd、ドメイン抗体(dAb)、二重特異性抗体、マキシボディー(maxibody)、およびナノボディー(nanobody)からなる群から選択される、請求項25記載の組成物。
- 請求項25の抗体をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸分子。
- 調節制御配列(regulatory control sequence)に操作可能に結合した(operably linked)請求項35の核酸分子を含む発現ベクター。
- 請求項30のベクターまたは請求項36の核酸分子を含む宿主細胞。
- 抗体を産生するために請求項37の宿主細胞を用いる方法であって、請求項の宿主細胞を適切な条件下で培養することにより、抗体を産生するために核酸を発現させることを含む方法。
- 医薬的に許容される担体、希釈剤または賦形剤をさらに含む、請求項25記載の組成物。
- BMP−6関連疾患を診断する方法であって、
(a)ヒトBMP−6への抗体の結合に適切な条件下、該疾患を有している疑いがあるヒトから採取した生体サンプルをBMP−6に特異的に結合する抗体と接触させること;および
(b)抗体に結合したBMP−6を定量化することを含む方法であって、(b)にて定量化された該サンプル中のBMP−6の量が正常なレベル以上または以下であることがBMP−6関連疾患の存在を示す方法。 - BMP−6アンタゴニストが投与される治療をモニターする方法であって、
(a)ヒトBMP−6への抗体の結合に適切な条件下、BMP−6アンタゴニストを投与されたヒトから採取した生体サンプルを、BMP−6に特異的に結合する抗体と接触させること;および
(b)抗体に結合したBMP−6を定量化することを含む方法であって、(b)にて定量化された血清BMP−6レベルの量の変化がBMP−6アンタゴニストの有効性を示す方法。 - アンタゴニストが抗体である、請求項41記載の方法。
- アンタゴニストが小分子である、請求項41記載の方法。
- 治療を必要とする対象における鉄の恒常性の疾患を治療する方法であって、請求項25のモノクローナル抗体を該対象に投与する工程を含む方法。
- 鉄の恒常性の疾患が貧血である、請求項44記載の方法。
- ヒトBMP−6に結合する化合物をスクリーニングする方法であって、生理活性BMP−6を含む組成物と候補化合物を接触させること、および候補化合物と組成物中のヒトBMP−6の複合体を検出することを含む方法であって、複合体の検出が、候補化合物がヒトBMP−6に結合することを示し、さらに、候補化合物がBMP−6とHJV.Fcの結合を少なくとも25%阻害する方法。
- ヒトBMP−6に特異的に結合する抗体であって、TQSQDVARVSSASDY(配列番号3)のアミノ酸配列を含む一定濃度のペプチドの存在下、ヒトBMP−6への特異的な結合から離れて競合される抗体。
- TQSQDVARVSSASDY(配列番号3)のいずれか5個の連続するアミノ酸に特異的に結合する抗体。
- 抗体が、TQSQDVARVSSASDY(配列番号3)のいずれか6個の連続するアミノ酸に特異的に結合する、請求項48記載の抗体。
- 抗体が、TQSQDVARVSSASDY(配列番号3)のいずれか7個の連続するアミノ酸に特異的に結合する、請求項48記載の抗体。
- 抗体が、TQSQDVARVSSASDY(配列番号3)のいずれか8個の連続するアミノ酸に特異的に結合する、請求項48記載の抗体。
- 抗体が、TQSQDVARVSSASDY(配列番号3)のいずれか9個の連続するアミノ酸に特異的に結合する、請求項48記載の抗体。
- 抗体が、TQSQDVARVSSASDY(配列番号3)のいずれか10個の連続するアミノ酸に特異的に結合する、請求項48記載の抗体。
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Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9289383B2 (en) | 2010-03-26 | 2016-03-22 | Inotek Pharmaceuticals Corporation | Method of reducing intraocular pressure in humans |
US9370530B2 (en) | 2010-01-11 | 2016-06-21 | Inotek Pharmaceuticals Corporation | Combination, kit and method of reducing intraocular pressure |
US9522160B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-12-20 | Inotek Pharmaceuticals Corporation | Ophthalmic formulations |
US9718853B2 (en) | 2012-01-26 | 2017-08-01 | Inotek Pharmaceuticals Corporation | Anhydrous polymorphs of [(2R,3S,4R,5R)-5-(6-(cyclopentylamino)-9H-purin-9-YL)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-YL)] methyl nitrate and processes of preparation thereof |
JP2018504893A (ja) * | 2014-12-19 | 2018-02-22 | ノバルティス アーゲー | Bmp6を標的とする抗体のための組成物および方法 |
JP2019515933A (ja) * | 2016-05-03 | 2019-06-13 | カイマブ・リミテッド | 方法、レジメン、組み合わせ、及びアンタゴニスト |
Families Citing this family (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20110070242A1 (en) * | 2009-09-01 | 2011-03-24 | Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) | Methods for Diagnosing and Treating Iron Dysregulation |
AU2012251919B2 (en) | 2011-01-19 | 2016-12-15 | Ferrumax Pharmaceuticals, Inc. | Compositions for regulating iron homeostasis and methods of using same |
JP6189754B2 (ja) | 2011-03-04 | 2017-08-30 | イントレキソン コーポレーション | タンパク質を条件的に発現するベクター |
CN104136462B (zh) * | 2011-12-14 | 2017-06-09 | 艾伯维德国有限责任两合公司 | 用于诊断和治疗铁相关病症的组合物和方法 |
AU2012352168C1 (en) | 2011-12-14 | 2018-01-25 | AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG | Composition and method for the diagnosis and treatment of iron-related disorders |
AR093620A1 (es) | 2012-12-17 | 2015-06-10 | Lilly Co Eli | Anticuerpos bmp-6 |
CN103255143A (zh) * | 2013-01-24 | 2013-08-21 | 新疆维吾尔自治区畜牧科学院中国-澳大利亚绵羊育种研究中心 | 一个抑制BMPR-lB基因表达合成的shRNA分子 |
CN105263514B (zh) | 2013-03-15 | 2019-04-26 | 本质生命科学有限公司 | 抗铁调素抗体及其用途 |
US9139648B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-09-22 | Kymab Limited | Precision medicine by targeting human NAV1.9 variants for treatment of pain |
CA2961917A1 (en) | 2014-09-22 | 2016-03-31 | Intrinsic Lifesciences Llc | Humanized anti-hepcidin antibodies and uses thereof |
WO2016071701A1 (en) * | 2014-11-07 | 2016-05-12 | Kymab Limited | Treatment of disease using ligand binding to targets of interest |
EA039579B1 (ru) * | 2014-12-19 | 2022-02-14 | Новартис Аг | Способы и композиции антител, направленных против bmp6 |
KR102492057B1 (ko) | 2016-06-15 | 2023-01-26 | 노파르티스 아게 | 골 형태형성 단백질 6(bmp6)의 억제제를 사용한 질병의 치료 방법 |
EP3415527A1 (de) | 2017-06-14 | 2018-12-19 | Technische Universität Dresden | Verwendung der extrazellulären domäne des transferrinrezeptor 2 zur diagnostik und behandlung von primär und sekundär sklerosierenden erkrankungen |
US11292846B2 (en) * | 2017-11-02 | 2022-04-05 | Bayer Aktiengesellschaft | Bispecific antibodies binding ALK-1 and BMPR-2 |
CN112236166A (zh) * | 2018-06-13 | 2021-01-15 | 科马布有限公司 | 用于治疗骨疾病的转铁蛋白受体-2的拮抗剂和激动剂 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001511650A (ja) * | 1997-02-10 | 2001-08-14 | ザ・プレジデント・アンド・フェローズ・オブ・ハーバード・カレッジ | 造血及び血管生成の調節方法 |
JP2006522103A (ja) * | 2003-03-14 | 2006-09-28 | セルテック アール アンド ディー, インコーポレイテッド | TGFβ結合タンパク質のリガンドおよびその使用 |
JP2008530222A (ja) * | 2005-02-16 | 2008-08-07 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション | ヘプシジンによる鉄代謝を制御するためのTGF−βスーパーファミリーの化合物の調節因子の使用 |
Family Cites Families (104)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4554101A (en) | 1981-01-09 | 1985-11-19 | New York Blood Center, Inc. | Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
NZ210501A (en) | 1983-12-13 | 1991-08-27 | Kirin Amgen Inc | Erythropoietin produced by procaryotic or eucaryotic expression of an exogenous dna sequence |
KR850004274A (ko) | 1983-12-13 | 1985-07-11 | 원본미기재 | 에리트로포이에틴의 제조방법 |
US4703008A (en) | 1983-12-13 | 1987-10-27 | Kiren-Amgen, Inc. | DNA sequences encoding erythropoietin |
US4667016A (en) | 1985-06-20 | 1987-05-19 | Kirin-Amgen, Inc. | Erythropoietin purification |
US5567610A (en) | 1986-09-04 | 1996-10-22 | Bioinvent International Ab | Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor |
GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
US5175384A (en) | 1988-12-05 | 1992-12-29 | Genpharm International | Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice |
DE3920358A1 (de) | 1989-06-22 | 1991-01-17 | Behringwerke Ag | Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung |
US5856298A (en) | 1989-10-13 | 1999-01-05 | Amgen Inc. | Erythropoietin isoforms |
WO1991005867A1 (en) | 1989-10-13 | 1991-05-02 | Amgen Inc. | Erythropoietin isoforms |
US7217689B1 (en) | 1989-10-13 | 2007-05-15 | Amgen Inc. | Glycosylation analogs of erythropoietin |
US5229275A (en) | 1990-04-26 | 1993-07-20 | Akzo N.V. | In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies |
KR100272077B1 (ko) | 1990-08-29 | 2000-11-15 | 젠팜인터내셔날,인코포레이티드 | 이종 항체를 생산할 수 있는 전이유전자를 가진 인간이외의 동물 |
US5545806A (en) | 1990-08-29 | 1996-08-13 | Genpharm International, Inc. | Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies |
US5571894A (en) | 1991-02-05 | 1996-11-05 | Ciba-Geigy Corporation | Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor |
US5587458A (en) | 1991-10-07 | 1996-12-24 | Aronex Pharmaceuticals, Inc. | Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof |
DK1136556T3 (da) | 1991-11-25 | 2005-10-03 | Enzon Inc | Fremgangsmåde til fremstilling af multivalente antigen-bindende proteiner |
CA2129663C (en) | 1992-02-06 | 2005-07-05 | James S. Huston | Biosynthetic binding protein for cancer marker |
IL110669A (en) | 1993-08-17 | 2008-11-26 | Kirin Amgen Inc | Erythropoietin analogs |
US5830851A (en) | 1993-11-19 | 1998-11-03 | Affymax Technologies N.V. | Methods of administering peptides that bind to the erythropoietin receptor |
US5773569A (en) | 1993-11-19 | 1998-06-30 | Affymax Technologies N.V. | Compounds and peptides that bind to the erythropoietin receptor |
US5885574A (en) | 1994-07-26 | 1999-03-23 | Amgen Inc. | Antibodies which activate an erythropoietin receptor |
US5641870A (en) | 1995-04-20 | 1997-06-24 | Genentech, Inc. | Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification |
US5869046A (en) | 1995-04-14 | 1999-02-09 | Genentech, Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
US5767078A (en) | 1995-06-07 | 1998-06-16 | Johnson; Dana L. | Agonist peptide dimers |
DE19544393A1 (de) | 1995-11-15 | 1997-05-22 | Hoechst Schering Agrevo Gmbh | Synergistische herbizide Mischungen |
ATE375363T1 (de) | 1997-07-14 | 2007-10-15 | Bolder Biotechnology Inc | Derivate des wachstumshormons und verwandte proteine |
US6753165B1 (en) | 1999-01-14 | 2004-06-22 | Bolder Biotechnology, Inc. | Methods for making proteins containing free cysteine residues |
PT986644E (pt) | 1997-07-23 | 2007-01-31 | Roche Diagnostics Gmbh | Preparação de eritropoietina por activação genética endógena com promotores virais |
US7078500B1 (en) | 1998-01-30 | 2006-07-18 | The General Hospital Corporation | Genetic immunization with nonstructural proteins of hepatitis C virus |
US6030086A (en) | 1998-03-02 | 2000-02-29 | Becton, Dickinson And Company | Flash tube reflector with arc guide |
US6310078B1 (en) | 1998-04-20 | 2001-10-30 | Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. | Substituted amino acids as erythropoietin mimetics |
JP4087563B2 (ja) | 1998-06-15 | 2008-05-21 | ジーティーシー バイオセラピューティックス インコーポレイテッド | エリスロポエチン類似体−ヒト血清アルブミン融合物 |
US20050181482A1 (en) | 2004-02-12 | 2005-08-18 | Meade Harry M. | Method for the production of an erythropoietin analog-human IgG fusion proteins in transgenic mammal milk |
CN1346369B (zh) | 1998-10-23 | 2011-09-28 | 安姆根有限公司 | 用于预防和治疗贫血的方法以及组合物 |
EP1169352A4 (en) | 1999-04-14 | 2005-05-04 | Smithkline Beecham Corp | ANTIBODY AGAINST THE ERYTHROPOIETIN RECEPTOR |
US7297680B2 (en) | 1999-04-15 | 2007-11-20 | Crucell Holland B.V. | Compositions of erythropoietin isoforms comprising Lewis-X structures and high sialic acid content |
CZ299516B6 (cs) | 1999-07-02 | 2008-08-20 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem |
US6824780B1 (en) | 1999-10-29 | 2004-11-30 | Genentech, Inc. | Anti-tumor antibody compositions and methods of use |
CA2391080A1 (en) | 1999-11-12 | 2001-05-25 | Merck Patent Gesellschaft Mit Beschraenkter Haftung | Erythropoietin forms with improved properties |
US20050202538A1 (en) | 1999-11-12 | 2005-09-15 | Merck Patent Gmbh | Fc-erythropoietin fusion protein with improved pharmacokinetics |
US20030224501A1 (en) * | 2000-03-17 | 2003-12-04 | Young Paul E. | Bone morphogenic protein polynucleotides, polypeptides, and antibodies |
US6586398B1 (en) | 2000-04-07 | 2003-07-01 | Amgen, Inc. | Chemically modified novel erythropoietin stimulating protein compositions and methods |
AU5551601A (en) | 2000-04-21 | 2001-11-07 | Amgen Inc | Methods and compositions for the prevention and treatment of anemia |
US7078376B1 (en) | 2000-08-11 | 2006-07-18 | Baxter Healthcare S.A. | Therapeutic methods for treating subjects with a recombinant erythropoietin having high activity and reduced side effects |
HUP0303854A2 (hu) | 2000-09-08 | 2004-03-01 | Gryhon Therapeutics, Inc. | Szintetikus erythropoiesis-stimuláló proteinek |
WO2002049673A2 (en) | 2000-12-20 | 2002-06-27 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Conjugates of erythropoietin (pep) with polyethylene glycol (peg) |
WO2002085940A2 (en) | 2001-04-04 | 2002-10-31 | Genodyssee | New polynucleotides and polypeptides of the erythropoietin gene |
ATE427114T1 (de) * | 2001-05-25 | 2009-04-15 | Inst Nat Sante Rech Med | Verwendung von hepcidin zur herstellung eines arzneimittels zur behandlung von eisenhomíostase stírungen |
US6900292B2 (en) | 2001-08-17 | 2005-05-31 | Lee-Hwei K. Sun | Fc fusion proteins of human erythropoietin with increased biological activities |
US6930086B2 (en) | 2001-09-25 | 2005-08-16 | Hoffmann-La Roche Inc. | Diglycosylated erythropoietin |
US7214660B2 (en) | 2001-10-10 | 2007-05-08 | Neose Technologies, Inc. | Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin |
WO2003055526A2 (en) | 2001-12-21 | 2003-07-10 | Maxygen Aps | Erythropoietin conjugates |
GB0202252D0 (en) | 2002-01-31 | 2002-03-20 | Oxford Biomedica Ltd | Anemia |
WO2003064664A1 (en) | 2002-01-31 | 2003-08-07 | Oxford Biomedica (Uk) Limited | Physiologically regulated erythropoietin- exprressing vector for the treatment of anaemia |
DE60220451T2 (de) | 2002-03-26 | 2008-01-24 | Lek Pharmaceutical And Chemical Co. D.D. | Verfahren für die herstellung eines gewünschten profils von erythropoietin glyko-isoformen |
EP1572079A4 (en) | 2002-03-29 | 2006-09-06 | Centocor Inc | MAMMAL-CDR MIMETIC BODIES, COMPOSITIONS, PROCESSES AND APPLICATION PURPOSES |
AU2003234136A1 (en) | 2002-04-18 | 2003-11-03 | The General Hospital Corporation | Drg11-responsive (dragon) gene family |
CA2485365A1 (en) | 2002-05-13 | 2003-11-20 | Modigenetech Ltd. | Ctp-extended erythropoietin |
US7771952B2 (en) | 2002-06-26 | 2010-08-10 | Abott Laboratories | Modulators and modulation of the interaction between RGM and Neogenin |
MXPA05000202A (es) | 2002-06-28 | 2005-09-30 | Johnson & Johnson | Cuerpos mimeicos ch1-deletados de epo de mimetica de mamifero. |
WO2004002417A2 (en) | 2002-06-28 | 2004-01-08 | Centocor, Inc. | Mammalian ch1 deleted mimetibodies, compositions, methods and uses |
DE10230381A1 (de) | 2002-07-05 | 2004-01-22 | Institut für Medizintechnologie Magdeburg GmbH, IMTM | Verwendung von Inhibitoren der Alanyl-Aminopeptidasen und diese umfassende pharmazeutischen Zubereitungen |
WO2004009627A1 (en) | 2002-07-19 | 2004-01-29 | Cangene Corporation | Pegylated erythropoietic compounds |
GB0217786D0 (en) | 2002-07-31 | 2002-09-11 | Glaxo Group Ltd | Compounds |
AU2003254950A1 (en) | 2002-08-26 | 2004-03-11 | Kirin Beer Kabushiki Kaisha | Peptides and drugs containing the same |
IL166506A0 (en) | 2002-09-11 | 2006-01-15 | Fresenius Kabi De Gmbh | Hasylated polypeptides especially hasylated erythropoietin |
TWI320716B (en) | 2002-10-14 | 2010-02-21 | Abbott Lab | Erythropoietin receptor binding antibodies |
US7396913B2 (en) | 2002-10-14 | 2008-07-08 | Abbott Laboratories | Erythropoietin receptor binding antibodies |
US20040071694A1 (en) | 2002-10-14 | 2004-04-15 | Devries Peter J. | Erythropoietin receptor binding antibodies |
US20040091961A1 (en) | 2002-11-08 | 2004-05-13 | Evans Glen A. | Enhanced variants of erythropoietin and methods of use |
TWI353991B (en) | 2003-05-06 | 2011-12-11 | Syntonix Pharmaceuticals Inc | Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids |
US20070184052A1 (en) | 2003-05-09 | 2007-08-09 | Lin Herbert Y | Soluble tgf-b type III receptor fusion proteins |
KR101163683B1 (ko) | 2003-05-12 | 2012-07-10 | 아피맥스, 인크. | 에리스로포이에틴 수용체에 결합하는 신규의 펩티드 |
KR20060028675A (ko) | 2003-05-12 | 2006-03-31 | 아피맥스, 인크. | 신규한 폴리 (에틸렌 글리콜) 개질 화합물 및 그의 용도 |
PT1625156E (pt) | 2003-05-12 | 2013-01-09 | Affymax Inc | Novos péptidos que se fixam ao receptor da eritropoietina |
US7074755B2 (en) | 2003-05-17 | 2006-07-11 | Centocor, Inc. | Erythropoietin conjugate compounds with extended half-lives |
KR20060032140A (ko) | 2003-05-30 | 2006-04-14 | 센토코 인코포레이티드 | 트랜스글루타미나아제를 이용한 신규 에리트로포이에틴접합체의 형성 |
US20050037390A1 (en) | 2003-06-04 | 2005-02-17 | Irm Llc, A Delaware Limited Liability Company | Methods and compositions for modulating erythropoietin expression |
US8614204B2 (en) | 2003-06-06 | 2013-12-24 | Fibrogen, Inc. | Enhanced erythropoiesis and iron metabolism |
US20050019914A1 (en) | 2003-07-24 | 2005-01-27 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Perfusion process for producing erythropoietin |
WO2005021579A2 (en) | 2003-08-28 | 2005-03-10 | Biorexis Pharmaceutical Corporation | Epo mimetic peptides and fusion proteins |
CN1882355A (zh) | 2003-09-09 | 2006-12-20 | 沃伦药品公司 | 保持内源性促红细胞生成素组织保护活性的长效促红细胞生成素 |
UA89481C2 (uk) | 2003-09-30 | 2010-02-10 | Центокор, Инк. | Еритропоетинові міметичні шарнірно-серцевинні міметитіла людини, композиції, способи та застосування |
WO2005081687A2 (en) | 2003-09-30 | 2005-09-09 | Centocor, Inc. | Human hinge core mimetibodies, compositions, methods and uses |
AU2004293103C1 (en) | 2003-11-24 | 2010-12-02 | Ratiopharm Gmbh | Glycopegylated erythropoietin |
US8633157B2 (en) | 2003-11-24 | 2014-01-21 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated erythropoietin |
EP1548031A1 (en) | 2003-12-22 | 2005-06-29 | Dubai Genetics FZ-LLC | Nature-identical erythropoietin |
JP2008500275A (ja) | 2003-12-31 | 2008-01-10 | セントカー・インコーポレーテツド | N末端の遊離チオールを有する新規な組み換えタンパク質 |
DK1699821T3 (da) | 2003-12-31 | 2012-07-16 | Merck Patent Gmbh | Fc-ERYTHROPOIETIN-FUSIONSPROTEIN MED FORBEDREDE FARMAKOKINETIKKER |
US7423139B2 (en) | 2004-01-20 | 2008-09-09 | Insight Biopharmaceuticals Ltd. | High level expression of recombinant human erythropoietin having a modified 5′-UTR |
US20050187158A1 (en) | 2004-01-22 | 2005-08-25 | Ranby Mats G. | Pharmaceutical composition |
WO2005084711A1 (fr) | 2004-03-02 | 2005-09-15 | Chengdu Institute Of Biological Products | Erythropoietine recombinante pegylee a activite in vivo |
WO2005092369A2 (en) | 2004-03-11 | 2005-10-06 | Fresenius Kabi Deutschland Gmbh | Conjugates of hydroxyethyl starch and erythropoietin |
US20050227289A1 (en) | 2004-04-09 | 2005-10-13 | Reilly Edward B | Antibodies to erythropoietin receptor and uses thereof |
AU2005235794A1 (en) | 2004-04-23 | 2005-11-03 | Cambridge Antibody Technology Limited | Erythropoietin protein variants |
DE602005014117D1 (de) | 2004-07-07 | 2009-06-04 | Lundbeck As Valby H | Neues carbamyliertes epo und verfahren zu dessen herstellung |
US20060063208A1 (en) | 2004-08-02 | 2006-03-23 | Woolf Clifford J | DRG11-responsive (DRAGON) gene and uses thereof |
WO2006029094A2 (en) | 2004-09-02 | 2006-03-16 | Xencor, Inc. | Erythropoietin derivatives with altered immunogenicity |
KR20070092706A (ko) | 2004-11-10 | 2007-09-13 | 아플라겐 게엠베하 | 조혈을 촉진하는 분자 |
MX2007011591A (es) * | 2005-03-30 | 2007-12-10 | Wyeth Corp | Metodo para estimular el crecimiento de cabello administrando bmps. |
US8895002B2 (en) | 2007-04-09 | 2014-11-25 | The General Hospital Corporation | Hemojuvelin fusion proteins and uses thereof |
-
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001511650A (ja) * | 1997-02-10 | 2001-08-14 | ザ・プレジデント・アンド・フェローズ・オブ・ハーバード・カレッジ | 造血及び血管生成の調節方法 |
JP2006522103A (ja) * | 2003-03-14 | 2006-09-28 | セルテック アール アンド ディー, インコーポレイテッド | TGFβ結合タンパク質のリガンドおよびその使用 |
JP2008530222A (ja) * | 2005-02-16 | 2008-08-07 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレイション | ヘプシジンによる鉄代謝を制御するためのTGF−βスーパーファミリーの化合物の調節因子の使用 |
Non-Patent Citations (7)
Title |
---|
JPN6013008283; Blood. 2008 Aug 15, Vol.112 No.4, p.1503-9. * |
JPN6013008285; Blood. 2008 May 15, Vol.111 No.10, p.5195-5204. * |
JPN6013008289; J Clin Invest., 2007, Vol.117 No.7, p.1933-9 * |
JPN6013008290; Cancer Res., 2005, Vol.65 No.18, p.8274-85 * |
JPN6013008295; Nat Gen., 2006, Vol.38 No.5, p.531-539 * |
JPN6014009977; Cellular Signalling, Vol.19, Issue.4, p.731-739 (2007) * |
JPN6014009978; R&D systems 商品データシート, Human BMP-6 Antibody, Antigen Affinity-purified Polyclonal Goat IgG, * |
Cited By (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9370530B2 (en) | 2010-01-11 | 2016-06-21 | Inotek Pharmaceuticals Corporation | Combination, kit and method of reducing intraocular pressure |
US9289383B2 (en) | 2010-03-26 | 2016-03-22 | Inotek Pharmaceuticals Corporation | Method of reducing intraocular pressure in humans |
US9718853B2 (en) | 2012-01-26 | 2017-08-01 | Inotek Pharmaceuticals Corporation | Anhydrous polymorphs of [(2R,3S,4R,5R)-5-(6-(cyclopentylamino)-9H-purin-9-YL)-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-YL)] methyl nitrate and processes of preparation thereof |
US9522160B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-12-20 | Inotek Pharmaceuticals Corporation | Ophthalmic formulations |
JP2018504893A (ja) * | 2014-12-19 | 2018-02-22 | ノバルティス アーゲー | Bmp6を標的とする抗体のための組成物および方法 |
JP2019515933A (ja) * | 2016-05-03 | 2019-06-13 | カイマブ・リミテッド | 方法、レジメン、組み合わせ、及びアンタゴニスト |
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