KR102344589B1 - 기분 장애의 치료 및 진단을 위한 항-서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 a5 항체의 용도 - Google Patents

기분 장애의 치료 및 진단을 위한 항-서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 a5 항체의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 길항제(예를 들어, 항체 또는 그것의 항원-결합 단편)로 혈청 FAM19A5 농도를 측정하는 단계를 포함하는, 대상의 기분 장애를 진단하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 FAM19A5 길항제를 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 치료가 필요한 대상의 기분 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다.

Description

기분 장애의 치료 및 진단을 위한 항-서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5 항체의 용도
전자적으로 제출된 서열목록의 참조
본 출원과 함께 제출된 ASCII 텍스트 파일(파일명: 3763.007PC02_ST25.txt; 크기: 166,984 바이트; 및 생성일: 2018년 10월 1일) 형태의 전자적으로 제출된 서열목록의 내용물은 그 전체가 참고로 본 발명에 포함된다.
기술분야
본 발명은 서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5(FAM19A5)에 특이적으로 결합하는 길항제(예를 들어, 항체 또는 그것의 항원-결합 단편) 또는 이러한 길항제를 포함하는 조성물을 사용하여 대상(예를 들어, 인간)의 우울 장애 및 양극성 장애와 같은 기분 장애를 진단 및/또는 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 FAM19A5 길항제를 사용하여 기분 장애를 가진 대상을 확인하는 방법을 제공한다.
기분 장애는 개체의 감정 상태에 주로 영향을 미치는 정신적 질병의 한 범주이다. 기저 증상에 기초하여, 기분 장애는 세 가지 기본적 그룹, (i) 고조된 기분(조증 또는 경조증); (ii) 우울증; 및 (iii) 조증과 울증이 주기적으로 반복되는 기분으로 구분될 수 있다. 기분 장애는 주요 우울증, 기분저하증(적어도 2년 동안 지속된 만성적, 저-등급, 우울한 및/또는 짜증나는 기분), 다른 건강 상태(예를 들어, 암, 상해, 감염, 및 만성 질병)와 관련된 기분 장애, 및 물질-유도(예를 들어, 약물요법, 약물남용, 알코올중독, 독소 노출) 기분 장애를 포함한다.
주요 우울증, 임상적 우울증, 및 단극성 우울증이라고도 하는 주요 우울 장애(MDD)는 가장 흔한 기분 장애이며, 전 세계적으로 200만명이 넘는 사람에게 영향을 미치고 있다(Vos T et al., Lancet 388:1545-1602 (2016)). 조울증(manic-depressive illness) 또는 조증성 우울증이라고도 하는 양극성 장애(BD)는 감정적 고(조증 또는 경조증)/저(우울증)를 포함하는 극한적 기분 교대의 재발성 에피소드와 관련된다(Anderson I.M. et al., BMJ 345:e8508 (2012). BD는 모든 연령의 개체(개시 연령 중간값은 25세임)에게 영향을 미칠 수 있고, 전 세계적으로 무기력의 6번째 원인이다.
기분 장애의 정확한 원인은 아직 불명이지만, 일반적으로 신경전달물질(예를 들어, 도파민, 노르에피네프린, 또는 세로토닌) 수준의 불균형이 중요한 역할을 하는 것으로 생각된다(Manji H.K. et al., World Psychiatry 2:136-46 (2003); Nutt D.J., J Clin Psychiatry 69 Suppl E1:4-7 (2008)). 뇌영상 및 사체 연구는 기분 장애와 뇌의 특정 영역(예를 들어, 슬하전두대상피질, 해마, 전두엽, 슬하전전두피질, 선조체, 및 백질)의 세포 조성에서의 상당한 비정상성 간의 관련성을 시사했다(Harrison P.J. et al., Brain 125:1428-1449 (2002); Banasr M et al., Curr Opin Cell Biol. 23:730-737 (2011)).
현재 기분 장애를 진단하는 정확한 정량 방법은 없다. 현재 사용되는 방법은 상당히 정성적이며, 개체의 행동 및/또는 개체나 간병인에 의해 제공된 정보에 대한 의료전문가의 주관적 평가에 기초한다. 이러한 접근법은 많은 환자의 부적절한 진단을 가져왔다(Ruggero C.J. et al., J Clin Psychiatry 72:1207-13 (2011)). 따라서, 기분 장애에 대한 더 효과적인 치료 및 진단 옵션이 요구된다.
서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5(FAM19A5)에 대한 길항제("FAM19A5 길항제")를 대상의 생물학적 샘플과 접촉시키는 단계 및 샘플의 FAM19A5 단백질 수준 또는 FAM19A5 mRNA 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 진단이 필요한 대상의 기분 장애를 진단하는 방법이 본 발명에서 제공된다. 일부 구체예에서, 접촉 및 측정은 시험관내 수행된다.
일부 구체예에서, 대상은 FAM19A5의 기준 단백질 수준(기분 장애를 갖지 않는 대상의 샘플의 FAM19A5의 단백질 수준) 또는 FAM19A5를 암호화하는 기준 핵산 수준(기분 장애를 갖지 않는 대상의 샘플의 FAM19A5를 암호화하는 핵산 수준)과 비교하여 FAM19A5의 더 높은 단백질 수준 또는 FAM19A5를 암호화하는 더 높은 핵산 수준을 나타낸다.
일부 구체예에서, FAM19A5의 단백질 수준은 면역조직화학, 웨스턴 블롯팅, 방사성면역분석, 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA), 방사성면역확산, 면역침전 분석, 옥터로니 면역확산, 로켓 면역전기영동, 조직 면역염색, 보체 고정 분석, FACS, 단백질 칩, 또는 이들의 임의의 조합에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, FAM19A5를 암호화하는 핵산 수준은 RT-PCT, 실시간 중합효소 연쇄 반응, 또는 노던 블롯에 의해 측정된다.
일부 구체예에서, 생물학적 샘플은 조직, 세포, 혈액, 혈청, 혈장, 침, 소변, 뇌척수액(CSF), 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
또한, 치료가 필요한 대상의 기분 장애를 치료하기 위한 FAM19A5 길항제가 개시된다.
본 발명은 또한 기분 장애를 가진 대상의 대뇌피질회(cortical gyrus)의 두께를 증가시키기 위한 FAM19A5 길항제를 제공한다. 일부 구체예에서, 대뇌피질회는 횡전두극회, 배측후대상회, 판개부, 삼각부, 중전두회, 방추상회, 설회, 측두 평면, 설상엽, 안와부, 전횡측두회, 측두 평면, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
일부 구체예에서, 기분 장애(예를 들어, 본 발명에 개시된 방법 및/또는 사용을 위한 FAM19A5 길항제와 관련하여)는 주요 우울 장애(MDD), 양극성 장애(BD), 경도 우울 장애, 지속성 우울 장애(기분저하증), 계절성 정서 장애(SAD), 정신병적 우울증, 산후 우울증, 월경전 불쾌 장애(PMDD), 상황성 우울증, 비정형 우울증, 불안장애, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다.
일부 구체예에서, FAM19A5 길항제는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, miRNA, FAM19A5를 표적화하는 dsRNA, 앱타머, PNA, 이들을 포함하는 벡터, 또는 이들의 임의의 조합이다. 다른 구체예에서, FAM19A5 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체("항-FAM19A5 항체")이다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하며,
(i) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 11, 12, 및 13에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 23, 24, 및 25에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
(ii) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 14, 15, 및 16에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 26, 27, 및 28에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
(iii) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 17, 18, 및 19에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 29, 30, 및 31에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iv) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 20, 21, 및 22에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 32, 33, 및 34에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며,
(i) VH는 SEQ ID NO: 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO: 39에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
(ii) VH는 SEQ ID NO: 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO: 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
(iii) VH는 SEQ ID NO: 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO: 41에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iv) VH는 SEQ ID NO: 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO: 42에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 35, 36, 37, 또는 38에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 39, 40, 41, 또는 42에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 키메라 항체, 인간화된 항체, 또는 인간 항체이다.
구체예
구체예 1. 대상의 샘플의 서열 유사성 19를 가진 패밀리 멤버 A5(FAM19A5)의 단백질 수준 또는 FAM19A5를 암호화하는 핵산 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 진단이 필요한 대상의 기분 장애를 진단하는 방법.
구체예 2. 대상의 샘플의 FAM19A5의 단백질 수준 또는 FAM19A5를 암호화하는 핵산 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 기분 장애를 가진 대상을 확인하는 방법.
구체예 3. 구체예 1 또는 2에서, 측정은 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편을 대상의 샘플과 접촉시키는 것을 포함하는 것인 방법.
구체예 4. 구체예 1 또는 2에서, FAM19A5를 암호화하는 핵산 수준은 상기 핵산에 상보성인 뉴클레오타이드 서열에 의해 측정되는 것인 방법.
구체예 5. 구체예 1 내지 3 중 어느 하나에서, FAM19A5의 단백질 수준은 면역조직화학, 웨스턴 블롯팅, 방사성면역분석, 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA), 방사성면역확산, 면역침전 분석, 옥터로니 면역확산 방법, 로켓 면역전기영동, 조직 면역염색 방법, 보체 고정 분석, FACS, 단백질 칩, 또는 이들의 임의의 조합에 의해 측정되는 것인 방법.
구체예 6. 구체예 1, 2, 및 4 중 어느 하나에서, FAM19A5를 암호화하는 핵산 수준은 RT-PCT, 실시간 중합효소 연쇄 반응, 또는 노던 블롯에 의해 측정되는 것인 방법.
구체예 7. 구체예 1 내지 6 중 어느 하나에서, 샘플은 조직, 세포, 혈액, 혈청, 혈장, 침, 소변, 뇌척수액(CSF), 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
구체예 8. 구체예 1 내지 7 중 어느 하나에서, 대상은 FAM19A5의 기준 단백질 수준(기분 장애를 갖지 않는 대상의 샘플에서 FAM19A5의 단백질 수준) 또는 FAM19A5를 암호화하는 기준 핵산 수준(기분 장애를 갖지 않는 대상의 샘플에서 FAM19A5를 암호화하는 핵산 수준)과 비교하여 FAM19A5의 더 높은 단백질 수준 또는 FAM19A5를 암호화하는 더 높은 핵산 수준을 나타내는 것인 방법.
구체예 9. 구체예 8에서, 대상의 FAM19A5의 단백질 수준 또는 FAM19A5를 암호화하는 핵산 수준이 적어도 1.1배, 적어도 1.2배, 적어도 1.3배, 적어도 1.4배, 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 11배, 적어도 12배, 적어도 13배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 25배, 또는 적어도 30배 증가되는 것인 방법.
구체예 10. 구체예 1, 2, 3, 5, 및 7 내지 9 중 어느 하나에서, FAM19A5의 단백질 수준은 ELISA에 의해 측정되는 것인 방법.
구체예 11. 구체예 10에서, FAM19A5의 기준 단백질 수준은 ELISA에 의해 측정되었을 때 약 2.0 ng/ml, 약 1.9 ng/ml, 약 1.8 ng/ml, 약 1.7 ng/ml, 약 1.6 ng/ml, 약 1.5 ng/ml, 약 1.4 ng/ml, 약 1.3 ng/ml, 약 1.2 ng/ml, 약 1.1 ng/ml, 약 1 ng/ml, 약 0.9 ng/ml, 약 0.8 ng/ml, 약 0.7 ng/ml, 약 0.6 ng/ml, 약 0.5 ng/ml, 약 0.4 ng/ml, 약 0.3 ng/ml, 약 0.2 ng/ml, 약 0.1 ng/ml, 또는 더 낮은 것인 방법.
구체예 12. 구체예 11에서, FAM19A5의 기준 단백질 수준은 ELISA에 의해 측정되었을 때 약 2.0 ng/ml 이하인 방법.
구체예 13. 구체예 9 내지 12 중 어느 하나에서, FAM19A5의 증가된 단백질 수준 또는 FAM19A5를 암호화하는 증가된 핵산 수준은 대상의 대뇌피질회 두께의 감소와 관련되는 것인 방법.
구체예 14. 구체예 1 내지 13 중 어느 하나에서, 대상은 진단 또는 확인 후에 항우울성 제제 또는 항정신병성 제제로 치료되는 것인 방법.
구체예 15. 구체예 14에서, 항우울성 제제는 선택적 세로토닌 재흡수 억제제(SSRI), 세로토닌-노르에피네프린 재흡수 억제제(SNRI), 세로토닌 조정제 및 자극제(SMS), 세로토닌 길항제 및 재흡수 억제제(SARI), 노르에피네프린 재흡수 억제제(NRI), 3환 항우울제(TCA), 4환 항우울제(TeCA), 모노아민 산화효소 억제제(MAOI), 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
구체예 16. 구체예 15에서, SSRI는 시탈로프람(CELEXA®), 에스시탈로프람(LEXAPRO®, CIPRALEX®), 파록세틴(PAXIL®, SEROXAT®), 플루옥세틴(PROZAC®), 플루복사민(LUVOX®), 서트랄린(ZOLOFT®, LUSTRAL®), 지멜리딘(NORMUD®, ZELMID®), 인달핀(UPSTENE®), 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
구체예 17. 구체예 15에서, SNRI는 데스벤라팍신(PRISTIQ®), 듀록세틴(CYMBALTA®), 레보밀나시프란(FETZIMA®), 밀나시프란(IXEL®, SAVELLA®), 토페나신(ELAMOL®, TOFACINE®), 벤라팍신(EFFEXOR®), 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
구체예 18. 구체예 15에서, SMS는 빌라조돈(VIIBRYD®), 보르티옥세틴(TRINTELLIX®), 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
구체예 19. 구체예 15에서, SARI는 에토페리돈(AXIOMIN®, ETONIN®), 네파조돈(NEFADAR®, SERZONE®), 트라조돈(DESYREL®), 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
구체예 20. 구체예 15에서, NRI는 레복세틴(EDRONAX®), 빌록사진(VIVALAN®), 아토목세틴(STRATTERA®), 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
구체예 21. 구체예 15에서, TCA는 아미트립틸린(ELAVIL®, ENDEP®), 아미트립틸리녹시드(AMIOXID®, AMBIVALON®, EQUILIBRIN®), 클로미프라민(ANAFRANIL®), 데시프라민(NORPRAMIN®, PERTOFRANE®), 디벤제핀(NOVERIL®, VICTORIL®), 디메타크린(ISTONIL®), 도술레핀(PROTHIADEN®), 독세핀(ADAPIN®, SINEQUAN®), 이미프라민(TOFRANIL®), 로페프라민(LOMONT®, GAMANIL®), 멜리트라센(DIXERAN®, MELIXERAN®, TRAUSABUN®), 니트록사제핀(SINTAMIL®), 노르트립틸린(PAMELOR®, AVENTYL®), 녹십틸린(AGEDAL®, ELRONON®, NOGEDAL®), 피포페진(AZAFEN®/AZAPHEN®), 프로트립틸린(VIVACTIL®), 트리미프라민(SURMONTIL®), 부트립틸린(EVADYNE®), 데멕십틸린(DEPARON®, TINORAN®), 이미프라미녹시드(IMIPREX®, ELEPSIN®), 이프린돌(PRONDOL®, GALATUR®, TETRAN®), 메타프라민(TIMAXEL®), 프로피제핀(DEPRESSIN®, VAGRAN®), 퀴누프라민(KINUPRIL®, KEVOPRIL®), 오피프라몰(INSIDON®), 티아넵틴(STABLON®), 아미넵틴(SURVECTOR®, MANEON®), 티아제심(ALTINIL®), 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
구체예 22. 구체예 15에서, TeCA는 아목사핀(ASENDIN®), 마프로틸린(LUDIOMIL®), 미안세린(BOLVIDON®, NORVAL®, TOLVON®), 미르타자핀(REMERON®), 세팁틸린(TECIPUL®), 또는 이들의 조합을 포함하는 것인 방법.
구체예 23. 구체예 15에서, MAOI는 이소카복사지드(MARPLAN®), 페넬진(NARDIL®), 트라닐시프로민(PARNATE®), 벤목신(NEURALEX®), 이프로클로지드(SURSUM®), 이프로니아지드(MARSILID®), 메바나진(ACTOMOL®), 니알라미드(NIAMID®), 옥타목신(XIMAOL®), 페니프라진(CATRON®), 페녹시프로파진(DRAZINE®), 피브히드라진(TERSAVID®), 사프라진(SAFRA®), 셀레길린(ELDEPRYL®, ZELAPAR®, EMSAM®), 카록사존(SURODIL®, TIMOSTENIL®), 메트랄린돌(INKAZAN®), 모클로베미드(AURORIX®, MANERIX®), 피르린돌(PIRAZIDOL®), 톨록사톤(HUMORYL®), 에프로베미드(BEFOL®), 미나프린(BRANTUR®, CANTOR®), 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
구체예 24. 구체예 14에서, 항정신병성 제제는 전형적 항정신병성 제제 또는 비전형적 항정신병성 제제를 포함하는 것인 방법.
구체예 25. 구체예 24에서, 전형적 항정신병성 제제는 클로르프로마진(THORAZINE®, LARGACTIL®), 클로르프로틱센(TARACTAN®), 레보메프로마진(NOZINAN®, LEVOPROME®), 메소리다진(SERENTIL®), 페리시아진(NEULEPTIL®), 프로마진(SPARINE®), 티오리다진(MELLARIL®), 록사핀(LOXITANE®), 몰린돈(MOBAN®), 퍼페나진(TRILAFON®), 티오틱센(NAVANE®), 드로페리돌(INAPSINE®), 플루펜틱솔(DEPIXOL®, FLUANXOL®), 플루페나진(PROLIXIN®), 할로페리돌(HALDOL®), 피모지드(ORAP®), 프로클로르페라진(COMPAZINE®), 티오프로페라진(MAJEPTIL®), 트리플루오페라진(STELAZINE®), 주클로펜틱솔(CLOPIXOL®), 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
구체예 26. 구체예 24에서, 비전형적 항정신병성 제제는 아미술프리드(SOLIAN®), 루라시돈(LATUDA®), 퀴티아핀(SEROQUEL®), 리스페리돈(RISPERDAL®), 올란자핀(ZYPREXA®), 아리핍라졸(ABILIFY®), 지프라시돈(GEODON®), 피마반세린(NUPLAZID®), 클로자핀(CLOZARIL®), 팔리페리돈(INVEGA®), 아세나핀(SAPHRIS®), 브렉스핍라졸(REXULTI®), 카리프라진(VRAYLAR®), 일로페리돈(FANAPT®), 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
구체예 27. 구체예 14에서, 항우울성 제제는 FAM19A5 길항제인 방법.
구체예 28. FAM19A5 길항제를 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 치료가 필요한 대상의 기분 장애를 치료하는 방법.
구체예 29. FAM19A5 길항제를 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 치료가 필요한 대상의 기분 장애의 하나 이상의 증상을 감소, 억제, 또는 완화하는 방법.
구체예 30. 구체예 1 내지 29 중 어느 하나에서, 기분 장애는 주요 우울 장애(MDD), 양극성 장애(BD), 경도 우울 장애, 지속성 우울 장애(기분저하증), 계절성 정서 장애(SAD), 정신병적 우울증, 산후 우울증, 월경전 불쾌 장애(PMDD), 상황성 우울증, 비정형 우울증, 불안장애, 또는 이들의 임의의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인 방법.
구체예 31. 구체예 28 내지 30 중 어느 하나에서, 기분 장애는 대상의 대뇌피질회 두께의 감소와 관련되거나 감소에 의해 야기되는 것인 방법.
구체예 32. FAM19A5 길항제를 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 기분 장애를 가진 대상의 대뇌피질회의 두께를 증가시키는 방법.
구체예 33. 구체예 13 내지 32 중 어느 하나에서, 대뇌피질회는 횡전두극회, 배측후대상회, 판개부, 삼각부, 중전두회, 방추상회, 설회, 측두 평면, 설상엽, 안와부, 전횡측두회, 측두 평면, 및 이들의 임의의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인 방법.
구체예 34. 구체예 1 내지 33 중 어느 하나에서, 기분 장애는 주요 우울 장애(MDD)인 방법.
구체예 35. 구체예 1 내지 33 중 어느 하나에서, 기분 장애는 양극성 장애(BD)인 방법.
구체예 36. 구체예 28 내지 35 중 어느 하나에서, 기분 장애는 대상에서의 FAM19A5의 단백질 수준 또는 FAM19A5 단백질을 암호화하는 핵산 수준의 증가와 관련되는 것인 방법.
구체예 37. 구체예 27 내지 36 중 어느 하나에서, FAM19A5 길항제는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, miRNA, FAM19A5를 표적화하는 dsRNA, 앱타머, PNA, 이들을 포함하는 벡터, 또는 이들의 임의의 조합인 방법.
구체예 38. 구체예 27 내지 36 중 어느 하나에서, FAM19A5 길항제는 항-FAM19A5 항체, 항-FAM19A5 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 그 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터, 그 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 세포, 또는 이들의 임의의 조합인 방법.
구체예 39. 구체예 38에서, FAM19A5 길항제는 항-FAM19A5 항체인 방법.
구체예 40. 구체예 39에서, 항-FAM19A5 항체는 아래로부터 선택된 특성을 나타내는 것인 방법.
(a) ELISA에 의해 측정되었을 때 10 nM 이하의 KD로 가용성 인간 FAM19A5에 결합하거나;
(b) ELISA에 의해 측정되었을 때 10 nM 이하의 KD로 막 결합 인간 FAM19A5에 결합하거나; 또는
(c) (a)와 (b)가 둘 다 가능하다.
구체예 41. 구체예 39 또는 40에서, 항-FAM19A5 항체는 인간 FAM19A5 에피토프에 대한 결합에 대해 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 기준 항체와 교차-경쟁하며,
(i) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하거나;
(ii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하거나;
(iii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
구체예 42. 구체예 39 내지 41 중 어느 하나에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 기준 항체와 동일한 FAM19A5 에피토프에 결합하며,
(i) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하거나;
(ii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하거나;
(iii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
구체예 43. 구체예 39 내지 42 중 어느 하나에서, 항-FAM19A5 항체는 SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 9인, 적어도 하나의 FAM19A5 에피토프에 결합하는 것인 방법.
구체예 44. 구체예 39 내지 42 중 어느 하나에서, 항-FAM19A5 항체는 SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 9인, FAM19A5 에피토프에만 결합하는 것인 방법.
구체예 45. 구체예 39 내지 43 중 어느 하나에서, 항-FAM19A5 항체는 추가의 FAM19A5 에피토프에 더 결합하는 것인 방법.
구체예 46. 구체예 45에서, 추가의 FAM19A5 에피토프는 SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, 및 이들의 임의의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인 방법.
구체예 47. 구체예 39 내지 46 중 어느 하나에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 것인 방법.
구체예 48. 구체예 47에서, 항-FAM19A5 항체의 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
구체예 49. 구체예 47 또는 48에서, 항-FAM19A5 항체의 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 17, 또는 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
구체예 50. 구체예 47 내지 49 중 어느 하나에서, 항-FAM19A5 항체의 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 18, 또는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
구체예 51. 구체예 47 내지 50 중 어느 하나에서, 항-FAM19A5 항체의 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 29, 또는 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
구체예 52. 구체예 47 내지 51 중 어느 하나에서, 항-FAM19A5 항체의 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
구체예 53. 구체예 47 내지 52 중 어느 하나에서, 항-FAM19A5 항체의 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 31, 또는 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
구체예 54. 구체예 47에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하며,
(i) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 11, 12, 및 13을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 23, 24, 및 25를 포함하거나;
(ii) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 14, 15, 및 16을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 26, 27, 및 28을 포함하거나;
(iii) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 17, 18, 및 19를 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 29, 30, 및 31을 포함하거나; 또는
(iv) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 20, 21, 및 22를 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 32, 33, 및 34를 포함하는 것인 방법.
구체예 55. 구체예 39 내지 47 중 어느 하나에서, 항-FAM19A5 항체는 SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, 또는 SEQ ID NO: 38을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및/또는 SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, 또는 SEQ ID NO: 42를 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 것인 방법.
구체예 56. 구체예 55에서, 항-FAM19A5 항체는 SEQ ID NO: 35를 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 39를 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 것인 방법.
구체예 57. 구체예 55에서, 항-FAM19A5 항체는 SEQ ID NO: 36을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 40을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 것인 방법.
구체예 58. 구체예 55에서, 항-FAM19A5 항체는 SEQ ID NO: 37을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 41을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 것인 방법.
구체예 59. 구체예 55에서, 항-FAM19A5 항체는 SEQ ID NO: 38을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 42를 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 것인 방법.
구체예 60. 구체예 39 내지 47 중 어느 하나에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 35, 36, 37, 또는 38로서 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
구체예 61. 구체예 39 내지 47 중 어느 하나에서, 항-FAM19A5 항체는 SEQ ID NO: 39, 40, 41, 또는 42로서 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
구체예 62. 구체예 39 내지 47 중 어느 하나에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 35, 36, 37, 또는 38로서 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 39, 40, 41, 또는 42로서 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
구체예 63. 구체예 39 내지 62 중 어느 하나에서, 항-FAM19A5 항체는 키메라 항체, 인간 항체, 또는 인간화된 항체인 방법.
구체예 64. 구체예 39 내지 63 중 어느 하나에서, 항-FAM19A5 항체는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 또는 단쇄 Fv(scFv)를 포함하는 것인 방법.
구체예 65. 구체예 39 내지 64 중 어느 하나에서, 항-FAM19A5 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, 이들의 변이체, 및 이들의 임의의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것인 방법.
구체예 66. 구체예 65에서, 항-FAM19A5 항체는 IgG2, IgG4, 또는 이들의 조합인 방법.
구체예 67. 구체예 65에서, 항-FAM19A5 항체는 IgG2/IgG4 이소타입 항체를 포함하는 것인 방법.
구체예 68. 구체예 39 내지 64 중 어느 하나에서, 항-FAM19A5 항체는 Fc 기능이 없는 불변 영역을 더 포함하는 것인 방법.
구체예 69. 구체예 39 내지 68 중 어느 하나에서, 항-FAM19A5 항체는 제제와 결합되어, 면역콘쥬게이트를 형성하는 것인 방법.
구체예 70. 구체예 27 내지 69 중 어느 하나에서, FAM19A5 길항제는 제약학적으로 허용되는 담체와 함께 제제화되는 것인 방법.
구체예 71. 구체예 70에서, FAM19A5 길항제가 정맥내, 경구, 비경구, 척추강내, 뇌실내, 폐, 근육내, 피하, 유리체내, 또는 심실내 경로로 투여되는 것인 방법.
구체예 72. 구체예 1 내지 71 중 어느 하나에서, 대상이 인간인 방법.
도 1은 (i) 무약물 주요 우울 장애(DN-MDD)(n=58), (ii) 약물치료-주요 우울 장애(M-MDD)(n=52), (iii) 양극성 장애 I(n=26) 및 II(n=17)(종합하여 "BD"), 및 (iv) 건강한 대조군 그룹(HC)(n=112)에서 혈청 FAM19A5 농도(ng/ml)를 비교한 것을 도시한다. 각 원은 개별 환자를 나타낸다. 검은색 수평선은 각 그룹의 평균 혈청 FAM19A5 농도를 나타낸다. 모든 비교는 공변량으로서 연령 및 성별을 포함하는 ANCOVA를 사용하여 수행되었다. 데이터 포인트 위의 "*"는 건강한 환자와 비교하여 통계적으로 유의한 차이(p < 0.001)를 나타낸다.
도 2A-2D는 상이한 그룹에 속한 환자에서 관찰된 혈청 FAM19A5 농도(ng/ml)의 분포를 나타낸 산점도를 제공한다. 도 2A는 건강한 환자(HC)의 FAM19A5 단백질 수준을 나타낸다. 도 2B는 비-약물치료 주요 우울 장애 환자(DN-MDD)의 FAM19A5 단백질 수준을 나타낸다. 도 2C 및 2D는 각각 약물치료 주요 우울 장애 환자(M-MDD) 및 비-약물치료 양극성 I 또는 II 장애 환자(BD)의 FAM19A5 단백질 수준을 나타낸다. 각 원은 개별 환자(x-축)를 나타낸다. 점선은 혈청 FAM19A5 농도의 기준값(즉, 2ng/ml)을 나타낸다.
도 3은 무약물 주요 우울 장애(n=51), 약물치료-주요 우울 장애(n=51), 양극성 장애(n=28), 및 건강한 대조군 그룹(n=92)에서 혈청 FAM19A5 농도와 전체 뇌의 대뇌피질 두께 사이의 상관관계를 나타낸 표를 제공한다. 대뇌피질 두께와 혈청 FAM19A5 농도 사이에 유의한 상관관계를 나타낸 피질 영역만 도시된다. 대뇌피질 두께와 혈청 FAM19A5 농도 사이의 상관관계를 분석하기 위해 공변량으로서 연령, 성별, HDRS 점수, 및 약물치료(MDD 그룹에 대해서만)에 대해 조정한 양방향 피어슨 부분 상관이 수행되었다. 무약물-MDD(DN-MDD), 약물치료-MDD(M-MDD) 또는 양극성 장애(BD) 그룹과 건강한 대조군(HC) 그룹의 상관 계수의 비교를 위해 피셔의 r-to-z 변형이 수행되었다. 다중 비교 보정을 위한 보정 분석에 거짓 발견 비율(FDR)이 적용되었다(q < 0.05; 양 반구에서 76건 비교). 거짓 발견 비율(FDR)은 다중 비교 보정을 위한 계수의 비교에도 적용되었다(q < 0.05; 무약물 MDD 그룹에서 15건 비교).
도 4A-4F는 건강한 환자(HC, 진회색) 또는 비-약물치료 주요 우울 장애 환자(DN-MDD, 연회색)로부터의 대뇌피질 두께(y-축)와 혈청 FAM19A5 단백질 농도(x-축) 사이의 관계를 나타낸 산점도를 제공한다. 6곳의 상이한 뇌 영역의 피질 두께가 도시된다: L 횡전두극회(도 4A), L 배측후대상회(도 4B), L 판개부(도 4C), L 삼각부(도 4D), L 중전두회(도 4E), 및 R 판개부(도 4F). 연령, 성별, 및 HDRS 점수(HC 그룹에 대해서는 아님)에 대해 조정한 피어슨 부분 상관 분석이 수행되었다. MDD와 건강한 대조군 그룹 사이에 상관 계수의 비교를 위해 피셔의 r-to-z 변형이 사용되었다. 도 4A-4F에서 각 원은 개별 환자를 나타내고, 수평선은 최상의 핏 라인을 나타낸다.
도 5A-5E는 상이한 비교 그룹으로부터의 혈청 FAM19A5 단백질 수준에 대한 수용자 작용 특징 곡선(ROC 곡선)을 제공한다. 상이한 비교 그룹은 다음을 포함했다:(i) 건강한 환자(HC)에 대한 무약물 주요 우울 장애 환자(DN-MDD)(도 5A); (ii) 건강한 환자(HC)에 대한 약물치료 주요 우울 장애 환자(M-MDD)(도 5B); (iii) 건강한 환자(HC)에 대한 비-약물치료 양극성 I 또는 II 장애 환자(BD)(도 5C); 및 (iv) 약물치료 주요 우울 장애 환자(M-MDD)에 대한 비-약물치료 양극성 I 또는 II 장애 환자(BD)(도 5D); 및 (v) 무약물 주요 우울 장애 환자(DN-MDD)에 대한 비-약물치료 양극성 I 또는 II 장애 환자(BD)(도 5E). AUC, 민감성, 특이성 및 정확성 값은 각 곡선의 오른쪽 아래 사분면에 제공된다.
본 발명은 대상의 샘플(예를 들어, 혈청)에서 FAM19A5의 단백질 수준 또는 FAM19A5를 암호화하는 핵산 수준을 측정함으로써 기분 장애, 예를 들어 주요 우울 장애 또는 양극성 장애가 진단될 수 있는 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 대상의 샘플(예를 들어, 혈청)에서 FAM19A5의 단백질 수준 또는 FAM19A5를 암호화하는 핵산 수준을 측정함으로써 기분 장애를 가진 대상이 확인될 수 있는 방법을 제공한다. 더 나아가, 본 발명은 제제, 예를 들어 항-FAM19A5 길항제, 예를 들어 항-FAM19A5 항체를 그것을 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 기분 장애(예를 들어, 주요 우울 장애 또는 양극성 장애)를 치료, 제어 또는 완화하는 방법을 제공한다.
본 발명에 개시된 내용의 이해를 용이하게 하기 위해 다수의 용어 및 문구가 정의된다. 추가의 정의는 상세한 설명 전체에서 제시된다.
I. 정의
본 발명 전체에서, 용어 "한" 또는 "어떤" 존재는 그 존재의 하나 이상을 말한다; 예를 들어 "한 항체"는 하나 이상의 항체를 나타내는 것으로 이해된다. 이와 같이, 용어 "한"(또는 "어떤"), "하나 이상의" 및 "적어도 하나의"는 본 발명에서 상호 교환하여 사용될 수 있다.
또한, "및/또는"은 본 발명에서 사용된 경우 두 가지의 명시된 특징 또는 성분의 각각이 나머지 하나와 함께 또는 단독으로 구체적으로 개시된다는 것으로 해석되어야 한다. 따라서, "A 및/또는 B"와 같은 문구에서 사용된 용어 "및/또는"은 "A 및 B", "A 또는 B", "A"(단독), 및 "B"(단독)을 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, "A, B 및/또는 C"와 같은 문구에서 사용된 용어 "및/또는"은 A, B 및 C; A, B 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독)의 양태들을 각각 포함하는 것으로 의도된다.
어떤 양태가 "포함하는"과 함께 본 발명에서 설명되면 "구성되는" 및/또는 "본질적으로 구성되는"으로 설명된 다른 유사한 양태들도 또한 제공된다는 것이 이해된다.
달리 정의되지 않는다면, 본 발명에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 당업자에게 통상 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 예를 들어, the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology(Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press); the Dictionary of Cell and Molecular Biology(3rd ed., 1999, Academic Press); 및 the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology(Revised, 2000, Oxford University Press)가 본 발명에서 사용된 대부분의 용어에 대한 일반적인 사전적 의미를 당업자에게 제공한다.
단위, 접두사 및 기호는 Systeme International de Unites(SI)에서 승인된 형태로 표시된다. 수치 범위는 그 범위를 한정하는 숫자들을 포괄적으로 포함한다. 달리 나타내지 않는다면, 아미노산 서열은 아미노에서 카복시 방향으로 왼쪽에서 오른쪽으로 쓰여진다. 본 발명에서 제공된 표제는 본 발명의 다양한 양태의 제한이 아니며, 이들은 전체적으로 명세서를 참조했을 수 있다. 따라서, 아래 정의된 용어들은 그 전체가 명세서를 참조하여 더 충분히 정의된다.
용어 "약"은 대략, 대충, 근처, 또는 의 영역 내에를 의미하기 위해 본 발명에서 사용된다. 용어 "약"이 수치 범위와 함께 사용될 때 그것은 제시된 수치 값의 위와 아래로 경계를 확장시킴으로써 해당 범위를 변형한다. 일반적으로, 용어 "약"은, 예를 들어 위나 아래로(더 높거나 더 낮게) 10 퍼센트의 변동까지, 언급된 값의 위와 아래로 수치 값을 변형할 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어 "치료한다", "치료하는" 및 "치료"는 질환과 관련된 증상, 합병증, 상태 또는 생화학적 지표의 진행, 발생, 중증도 또는 재발의 반전, 완화, 개선, 저해, 또는 지연 또는 예방의 목적으로 대상에 대해 수행된, 또는 대상에게 활성제를 투여하는 중재나 과정의 어떤 종류를 말한다. 치료는 질환을 가진 대상이나 질환을 갖지 않은 대상(예를 들어, 예방을 위해)에서 모두 수행될 수 있다.
본 발명에서 사용된 "투여하는"은 당업자에게 공지된 다양한 방법 및 송달 시스템 중 어느 것을 사용하여, 치료제 또는 치료제를 포함하는 조성물을 대상에게 물리적으로 도입하는 것을 말한다. 본 발명에서 설명된 항체에 대한 상이한 투여 경로는 정맥내, 복강내, 근육내, 피하, 척추 또는 다른 비경구 투여 경로, 예를 들어 주사 또는 주입에 의한 경로를 포함한다. 본 발명에서 사용된 문구 "비경구 투여"는 장내 투여 및 국부적 투여 이외의 투여 방식을 의미하며, 일반적으로 주사에 의한 방식을 말하고, 제한은 아니지만 정맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 척수내, 림프내, 병소내, 낭내, 안와내, 심장내, 피내, 기관경유, 기관내, 폐, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 뇌실내, 유리체내, 경막외, 및 흉골내 주사 및 주입, 뿐만 아니라 생체내 전기천공을 포함한다. 또는, 본 발명에서 설명된 항체는 비-경구 경로, 예컨대 국부, 상피 또는 점막 투여 경로를 통해서, 예를 들어 비내, 경구, 질, 직장, 설하 또는 국부적 방식으로 투여될 수 있다. 또한, 투여는, 예를 들어 한 번, 여러 번, 및/또는 한 번 이상의 연장된 기간에 걸쳐서 수행될 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어 "치료적 유효량"은 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여, 대상의 기분 장애를 "치료하기에" 효과적인 또는 질환 또는 장애(예를 들어, 주요 우울 장애 또는 양극성 장애와 같은 기분 장애)의 위험, 잠재성, 가능성 또는 발생을 감소시키기에 효과적인, 약물의 양을 말한다. "치료적 유효량"은 질환 또는 장애를 갖고 있거나 가질 위험이 있는 대상에게 일부 개선이나 이익을 제공하는 약물 또는 치료제의 양을 포함한다. 따라서, "치료적 유효량"은 질환 또는 장애의 위험, 잠재성, 가능성 또는 발생을 감소시키거나 또는 일부 완화, 경감을 제공하고, 및/또는 적어도 하나의 지표를 감소시키고, 및/또는 질환 또는 장애(예를 들어, 본 발명에서 설명된 주요 우울 장애 또는 양극성 장애와 같은 기분 장애)의 적어도 하나의 임상 증상을 감소시키는 양이다.
본 발명에서 사용된 용어 "진단"은 환자가 주어진 질환 또는 상태로 고통받고 있는지를 결정하거나 예측함으로써 치료에 적합한 대상을 확인하기 위해 사용될 수 있는 방법을 말한다. 당업자는 하나 이상의 진단 마커(예를 들어, FAM19A5)에 근거하여 진단을 내릴 수 있으며, 진단 마커의 존재, 부재, 양 또는 양의 변화는 상태의 존재, 중증도 또는 부재를 표시한다. 일부 구체예에서, 대상으로부터의 생물학적 샘플에서 FAM19A5 발현의 증가는 기분 장애(예를 들어, 주요 우울 장애 또는 양극성 장애)의 표시이다. 용어 "진단"은 특정 질환이나 장애의 존재 또는 부재를 100% 정확성으로 결정하는 능력을 말하지 않으며, 심지어 주어진 경과나 성과가 반드시 일어난다고 할 수 있는 것도 아니다. 대신, 당업자는 용어 "진단"이 특정 질환이나 장애가 대상에 존재할 증가된 확률을 말하는 것이라고 이해할 것이다. 일부 구체예에서, 용어 "진단"은 기분 장애를 가진 대상을 확인하는 하나 이상의 진단 방법을 포함한다.
기분 장애(예를 들어, 주요 우울 장애 또는 양극성 장애)를 진단하기 위한 조성물은 진단이 필요한 대상(예를 들어, 기분 장애를 가진다고 의심되는)의 샘플에서 FAM19A5의 단백질 수준 또는 FAM19A5를 암호화하는 핵산(예를 들어, mRNA) 수준을 측정하기 위한 제제를 포함한다. 이러한 제제는 FAM19A5 mRNA에 상보성인 서열, 프라이머, 또는 FAM19A5 mRNA에 특이적으로 결합하는 핵산 프로브를 포함하는 올리고뉴클레오타이드, 및 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편을 포함한다.
본 발명에서 사용된 용어 "대상"은 임의의 인간 또는 비-인간 동물을 포함한다. 용어 "비-인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어 포유류 및 비-포유류, 예컨대 영장류, 양, 개, 소, 닭, 양서류, 파충류 등을 포함한다.
용어 "기분 장애"는 개체의 감정 상태에 영향을 미치는 정신적 질병의 종류를 말한다. 본 발명에서 사용된 기분 장애는 과도하고 오래가며 무기력한 과장된 기분을 특징으로 할 수 있고, 행동, 생리, 인지, 신경화학 및 정신운동적 기능장애와 관련되어 영향을 미칠 수 있다. 기분 장애는 지속적인 고조된 기분(조증), 지속적인 우울한 기분, 또는 조증과 울증이 주기적으로 반복되는 기분과 관련될 수 있다. 기분 장애는 사실상 유전적인 것일 수 있고 및/또는 이차적 요인(예를 들어, 질병, 약물, 약물요법)에 의해 유도될 수 있다. 기분 장애의 예는, 제한은 아니지만, 주요 우울 장애(MDD), 양극성 장애(BD), 경도 우울 장애, 지속성 우울 장애(기분저하증), 계절성 정서 장애(SAD), 정신병적 우울증, 산후 우울증, 단기적 재발성 우울증, 월경전 불쾌장애(PMDD), 상황성 우울증, 비정형 우울증, 불안장애, 및 순환성 장애를 포함한다.
본 발명에서 사용된 용어 "주요 우울 장애" 또는 "MDD"는 둘 이상의 주요 우울성 에피소드를 특징으로 하는 기분 장애를 말한다. MDD의 증상은 피로, 무가치함 또는 죄책감의 느낌, 손상된 집중력 또는 우유부단함, 불면증 또는 과다수면증, 거의 모든 활동에서 현저히 감소된 관심 또는 기쁨, 차분하지 못함, 죽음이나 자살에 관한 반복된 생각, 및 상당한 체중 손실이나 증가(5% 체중 변화)를 포함할 수 있다. 다른 기분 장애와 함께, MDD의 진단 기준은, 예를 들어 "정신 장애의 진단 및 통계 매뉴얼"(제4판, DSM-VI®-TR, 미국정신의학회)(DSM IV)에서 찾을 수 있으며, 이것은 대상을 평가하는데 유용하다.
용어 "양극성 장애"는 극한적 기분의 기간이 교대로 나타나는 것을 특징으로 하는 기분 장애를 말한다. 양극성 장애를 가진 사람은 일반적으로 과도하게 기뻐하거나 짜증을 내는 기분(조증)에서 슬프고 희망이 없는(울증) 기분으로 돌아간 다음, 중간에 정상적인 기분을 느끼는 기간을 지나 다시 원래대로 되는 기분의 순환을 경험한다. 양극성 장애의 진단은, 예를 들어 DSM IV에 설명된다. 양극성 장애의 범주는, 제한은 아니지만, 양극성 장애 I(주요 울증을 동반하거나 동반하지 않는 조증) 및 양극성 장애 II(주요 울증을 동반하는 경조증)를 포함한다.
본 발명에서 사용된 용어 "기분"은 사람의 내부의 감정 상태를 말한다.
본 발명에서 사용된 용어 "조증" 또는 "조증의"는 극도로 흥분한 병적인 정신 상태를 말한다. 용어 "경조증"은 중증도가 낮은 덜 극한적인 조증 에피소드를 말한다.
용어 "서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5" 또는 "FAM19A5"는 5개의 고도로 상동성인 단백질들의 TAFA 패밀리(FAM19 패밀리라고도 함)에 속하는 단백질을 말하며, 뇌와 척수에서 우세하게 발현된다(Tang T.Y. et al., Genomics 83(4):727-34 (2004)). 이들 단백질은 고정된 위치에 보존적 시스테인 잔기를 함유하며, CC-케모카인 패밀리의 일원인 대식세포 염증성 단백질 1-알파(MIP-1-알파)와 먼 친척이다. TAFA 단백질은 뇌 및 척수의 특정 영역에서 우세하게 발현된다. 이들 단백질은 신경형성 과정에서 성체 신경줄기세포에 의해 생성되고 분비되는 것으로 생각된다. FAM19A5는 TAFA5 또는 케모카인-유사 단백질 TAFA-5라고도 알려져 있다.
FAM19A5는 척추동물의 뇌에서 우세하게 발현되며, FAM19A5는 완전한 중추신경계의 발생, 분화, 형성에서 중요하다고 생각된다. FAM19A5는 또한 많은 중추신경계 손상 및/또는 퇴행성 뇌 질환(예를 들어, 헌팅턴병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 뇌척수 손상, 뇌졸중, 및 뇌종양)의 발병학에서 유의한 역할을 한다. 중추신경계의 손상시 신경줄기세포가 FAM19A5를 생성하고, 이것은 정상 성상세포의 반응성 성상세포로의 분화를 유도한다. 이들 반응성 성상세포는 (소교세포와 함께) 광범위한 ECM(예를 들어, 프로테오글리칸)을 발현할 수 있고, 신경교 상흔의 형성을 유도할 수 있으며, 이것은 중추신경계의 손상된 영역을 그물처럼 둘러싸서 뉴런의 재생을 방해할 수 있다. FAM19A5에 대한 항체는 중추신경계 상해 및/또는 질환의 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있다(예를 들어, 미국특허 No. 9,579,398 참조).
인간에서, FAM19A5를 암호화하는 유전자는 염색체 22에 위치된다. 3개의 인간 FAM19A5(UniProt: Q7Z5A7) 이소폼이 있으며, 이들은 다음과 같이 선택적 스플라이싱에 의해 생성되는 것으로 생각된다: 이소폼 1(UniProt: Q7Z5A7-1), 이것은 132개 아미노산으로 구성된다; 이소폼 2(UniProt: Q7Z5A7-2), 이것은 125개 아미노산으로 구성된다; 및 이소폼 3(UniProt: Q7Z5A7-3), 이것은 53개 아미노산으로 구성된다. 인간 FAM19A5 단백질은 막 결합 형태와 가용성(분비된) 형태로 모두 존재한다고 여겨진다. 이소폼 1은 하나의 경막 영역을 가진 막 단백질인 것으로 생각된다. 이소폼 2는 분비된 단백질(가용성)로서 Tang T.Y. et al., Genomics 83(4): 727-34 (2004)에 보고되었고, 아미노산 위치 1-25에 신호 펩타이드를 함유한다. 이소폼 3은 EST 데이터에 기초하여 예상된다. 아래는 3개의 공지된 인간 FAM19A5 이소폼의 아미노산 서열이다.
(I) 이소폼 1(UniProt: Q7Z5A7-1, 경막 단백질): 이 이소폼이 표준 서열로서 선택되었다.
MAPSPRTGSRQDATALPSMSSTFWAFMILASLLIAYCSQLAAGTCEIVTLDRDSSQPRRTIARQTARCACRKGQIAGTTRARPACVDARIIKTKQWCDMLPCLEGEGCDLLINRSGWTCTQPGGRIKTTTVS (SEQ ID NO: 1)
(II) 이소폼 2(UniProt: Q7Z5A7-2, 가용성 단백질):
MQLLKALWALAGAALCCFLVLVIHAQFLKEGQLAAGTCEIVTLDRDSSQPRRTIARQTARCACRKGQIAGTTRARPACVDARIIKTKQWCDMLPCLEGEGCDLLINRSGWTCTQPGGRIKTTTVS (SEQ ID NO: 2)
(III) 이소폼 3(UniProt: Q7Z5A7-3):
MYHHREWPARIIKTKQWCDMLPCLEGEGCDLLINRSGWTCTQPGGRIKTTTVS (SEQ ID NO: 3)
용어 "FAM19A5"는 세포에 의해 자연적으로 발현되는 FAM19A5의 임의의 변이체 또는 이소폼을 포함한다. 따라서, 본 발명에서 설명된 항체는 동일한 종의 상이한 이소폼(예를 들어, 인간 FAM19A5의 상이한 이소폼)과 교차-반응할 수 있거나, 또는 인간 이외의 종의 FAM19A5(예를 들어, 마우스 FAM19A5)와 교차-반응할 수 있다. 또는, 항체는 인간 FAM19A5에 특이적일 수 있으며, 다른 종과는 교차-반응성을 나타내지 못할 수 있다. FAM19A5, 또는 그것의 임의의 변이체 및 이소폼은 이들을 자연적으로 발현하는 세포 또는 조직으로부터 분리되거나 또는 재조합 방식으로 생성될 수 있다. 인간 FAM19A5를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 GenBank 기탁 번호 No. BC039396을 가지며 다음의 서열을 가진다:
[표 1A]
인간 FAM19A5의 폴리뉴클레오타이드 서열
Figure 112020036596511-pct00001
용어 "FAM19A5 단백질에 대한 길항제" 또는 "FAM19A5 길항제"는 FAM19A5 단백질의 발현을 억제하는 모든 길항제를 말한다. 이러한 길항제는 펩타이드, 핵산, 또는 화합물일 수 있다. 더 구체적으로, 길항제는 안티센스-올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, miRNA, dsRNA, 앱타머, FAM19A5를 표적화하는 PNA(펩타이드 핵산), 또는 이들을 포함하는 벡터일 수 있다. 일부 구체예에서, 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편일 수 있다.
용어 "항체" 및 "항체들"은 본 분야의 용어이며 본 발명에서 상호 교환하여 사용될 수 있고, 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 가진 분자를 말한다. 본 발명에서 사용된 용어는 전체 항체 및 임의의 항원 결합 단편(즉 "항원-결합 단편") 또는 이들의 단쇄를 포함한다. 한 구체예에서, "항체"는 이황화물 결합에 의해 상호-연결된 적어도 2개의 중쇄(H)와 2개의 경쇄(L)를 포함하는 당단백질, 또는 그것의 항원-결합 단편을 말한다. 다른 구체예에서, "항체"는 단일 가변 도메인, 예를 들어 VHH 도메인을 포함하는 단쇄 항체를 말한다. 각 중쇄는 중쇄 가변 영역(본 발명에서는 VH로 약기됨)과 중쇄 불변 영역으로 이루어진다. 특정한 자연-발생 항체에서, 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인 CH1, CH2 및 CH3으로 이루어진다. 특정한 자연-발생 항체에서, 각 경쇄는 경쇄 가변 영역(본 발명에서는 VL로 약기됨)과 경쇄 불변 영역으로 이루어진다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인 CL로 이루어진다.
VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)이라 칭하는, 더 보존성인 영역들이 산재된, 상보성 결정 영역(CDR)이라 칭하는, 초가변성 영역으로 더 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR와 4개의 FR로 이루어지며, 이들은 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4의 순서로 아미노-말단에서 카복시-말단을 향해 배열된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역 시스템의 다양한 세포(예를 들어, 이펙터 세포) 및 정통 보체 시스템의 제1 성분(C1q)를 포함하는 숙주 조직 또는 인자들과 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다.
용어 "Kabat 넘버링" 및 유사한 용어들은 본 분야에서 인정되며 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄 가변 영역에서 아미노산 잔기를 넘버링하는 시스템을 말한다. 특정 양태에서, 항체의 CDR은 Kabat 넘버링 시스템에 따라서 결정될 수 있다(예를 들어, Kabat EA & Wu TT (1971) Ann NY Acad Sci 190: 382-391 및 Kabat EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참조). Kabat 넘버링 시스템을 사용하면, 항체 중쇄 분자 내에서 CDR은 전형적으로 아미노산 위치 31 내지 35(이것은 선택적으로 35 이후에 하나 또는 2개의 추가의 아미노산을 포함할 수 있다; Kabat 넘버링 방식에서 35A 및 35B로 언급된다)(CDR1), 아미노산 위치 50 내지 65(CDR2), 및 아미노산 위치 95 내지 102 (CDR3)에 존재한다. Kabat 넘버링 시스템을 사용하면, 항체 경쇄 분자 내에서 CDR은 전형적으로 아미노산 위치 24 내지 34(CDR1), 아미노산 위치 50 내지 56(CDR2), 및 아미노산 위치 89 내지 97(CDR3)에 존재한다. 특정 구체예에서, 본 발명에서 설명된 항체의 CDR은 Kabat 넘버링 방식에 따라서 결정되었다.
문구 "Kabat에 따른 아미노산 위치 넘버링", "Kabat 위치" 및 이들의 문법적 변형들은 Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.(1991)에서 항체 컴필레이션의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 대해 사용된 넘버링 시스템을 말한다. 이 넘버링 시스템을 사용하면, 실제 선형 아미노산 서열은 더 적은 또는 추가의 아미노산을 함유할 수 있는데, 이것은 가변 도메인의 FW 또는 CDR의 단축, 또는 이것에의 삽입에 해당한다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 이후 단일 아미노산 삽입(Kabat에 따르면 잔기 52a) 및 중쇄 FW 잔기 82 이후 삽입된 잔기(예를 들어 Kabat에 따르면 잔기 82a, 82b, 및 82c 등)를 을 포함할 수 있다(표 1B 참조).
[표 1B]
Figure 112020036596511-pct00002
잔기의 Kabat 넘버링은 "표준" Kabat 넘버링된 서열과 항체 서열의 상동성의 영역에서 정렬에 의해, 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다. Chothia는 구조 루프의 위치를 말한다(Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917(1987)). Chothia CDR-H1 루프의 단부는 Kabat 넘버링 관례를 사용하여 넘버링되었을 때 루프의 길이에 따라 H32 내지 H34 사이에서 변한다(이것은 Kabat 넘버링 방식이 H35A와 H35B에 삽입을 위치시키기 때문이다; 35A도 35B도 존재하지 않는다면 루프는 32에서 끝난다; 35A만 존재하면 루프는 33에서 끝난다; 35A와 35B가 둘 다 존재하면 루프는 34에서 끝난다). AbM 초가변 영역은 Kabat CDR과 Chothia 구조 루프 사이의 절충점을 표시하며, Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다.
IMGT(ImMunoGeneTics)는 CDR을 포함하는 면역글로불린 가변 영역에 대한 넘버링 시스템을 제공한다. 예를 들어, Lefranc, M.P. et al., Dev. Comp. Immunol. 27: 55-77(2003)를 참조하며, 이것은 본 발명에 참고로 포함된다. IMGT 넘버링 시스템은 5,000개를 넘는 서열의 정렬, 구조 데이터 및 초가변 루프의 특성화에 기초했으며, 이것은 모든 종에 대해 가변 영역과 CDR 영역의 용이한 비교를 가능케한다. IMGT 넘버링 스키마에 따르면, VH-CDR1은 위치 26 내지 35에 있고, VH-CDR2는 위치 51 내지 57에 있고, VH-CDR3은 위치 93 내지 102에 있고, VL-CDR1은 위치 27 내지 32에 있고, VL-CDR2는 위치 50 내지 52에 있고, VL-CDR3은 위치 89 내지 97에 있다.
본 발명에서 논의된 모든 중쇄 불변 영역 아미노산 위치에 대해, 넘버링은 서열화된 최초의 인간 IgG1인 골수종 단백질 EU의 아미노산 서열을 설명한 Edelman et al., 1969, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 63(1):78-85에 최초로 설명된 EU 인덱스에 따른다. Edelman et al.의 EU 인덱스는 또한 Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest(5th Ed., United States Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda)에 제시된다. 따라서, 문구 "Kabat에 제시된 EU 인덱스" 또는 "Kabat의 EU 인덱스" 및 "Kabat에 제시된 EU 인덱스에 따른 위치" 및 이들의 문법적 변형들은 Kabat 1991에 제시된 것과 같은 Edelman et al.의 인간 IgG1 EU 항체에 기초한 잔기 넘버링 시스템을 말한다.
가변 도메인(중쇄와 경쇄 모두) 및 경쇄 불변 영역 아미노산 서열에 사용된 넘버링 시스템은 Kabat 1991에 제시된 것이다.
항체는 면역글로불린 분자의 임의의 타입(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY), 임의의 유형(예를 들어, IgD, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 또는 IgA2), 또는 임의의 아형(예를 들어, 인간에서 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4; 및 마우스에서IgG1, IgG2a, IgG2b 및 IgG3)을 가질 수 있다. 면역글로불린, 예를 들어 IgG1은 몇몇 알로타입으로 존재하며, 이들은 최대 몇 개의 아미노산이 서로 상이하다. 본 발명에 개시된 항체는 통상 알려진 이소타입, 유형, 아형, 또는 알로타입 중 임의의 것으로부터 유래할 수 있다. 특정 구체예에서, 본 발명에 개시된 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아형 또는 이들의 임의의 하이브리드이다. 특정 구체예에서, 항체는 인간 IgG1 아형 또는 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 아형의 것이다.
"항체"는, 예로서, 자연-발생 및 비-자연-발생 항체; 모노클로날 및 폴리클로날 항체; 키메라 및 인간화 항체; 인간 및 비-인간 항체, 전체 합성 항체; 단쇄 항체; 단일특이적 항체; (이중특이적 항체를 포함하는) 다중특이적 항체; 2개의 중쇄와 2개의 경쇄 분자를 포함하는 테트라머 항체; 항체 경쇄 모노머; 항체 중쇄 모노머; 항체 경쇄 다이머; 항체 중쇄 다이머; 항체 경쇄-항체 중쇄 쌍; 인트라바디; 헤테로콘쥬게이트 항체; 1가 항체; 낙타화 항체; 아피바디; (예를 들어, 항-항-Id 항체를 포함하는) 항-이디오타입(항-Id) 항체, 및 충분히 항원 결합할 수 있는 단일 모노머 가변 항체 도메인(예를 들어, VH 도메인 또는 VL 도메인)으로 구성된 결합 분자를 포함하는 단일-도메인 항체(sdAb)를 포함한다(Harmen M. M. and Haard H. J. Appl Microbiol Biotechnol. 77(1): 13-22 (2007) 참조).
항체의 "항원-결합 부분" 및 "항원-결합 단편"이란 용어는 상호 교환하여 사용되며, 항원(예를 들어, 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유한 항체의 하나 이상의 단편을 말한다. 이러한 "단편"은, 예를 들어 약 8 내지 약 1500개 아미노산 길이, 적합하게는 약 8 내지 약 745개 아미노산 길이, 적합하게는 약 8 내지 약 300개, 예를 들어 약 8 내지 약 200개 아미노산, 또는 약 10개 내지 약 50 또는 100개 아미노산 길이이다. 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있다는 것이 밝혀졌다. 항체, 예를 들어 본 발명에서 설명된 항-FAM19A5 항체의 "항원-결합 부분"이란 용어에 포함되는 결합 단편의 예들은 (i) VL, VH, CL, 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 이황화물 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 팔의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편, 및 이황화물-연결된 Fvs(sdFv); (v) VH 도메인으로 구성된 dAb 단편(Ward et al., Nature 341: 544-546 (1989)); 및 (vi) 분리된 상보성 결정 영역(CDR) 또는 (vii) 합성 링커에 의해 선택적으로 이어질 수 있는 둘 이상의 분리된 CDR의 조합을 포함한다. 또한, Fv 단편의 두 도메인인 VL과 VH는 별개의 유전자에 의해 코딩되지만, 이들은 합성 링커에 의해 재조합 방법을 사용하여 이어질 수 있으며, 이로써 VL과 VH 영역이 쌍을 이루어 1가 분자를 형성한 단일 단백질 사슬이 될 수 있다(단쇄 Fv(scFv)라고 함);(예를 들어 Bird et al., Science 242:423-426 (1988); 및 Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 (1988) 참조). 이러한 단쇄 항체도 또한 항체의 "항원-결합 부분"이라는 용어 내에 포함된다. 이들 항체 단편은 당업자에게 공지된 종래의 기술을 사용하여 얻어지며, 단편들은 무손상 항체와 동일한 방식으로 유용성에 대해 스크리닝된다. 항원-결합 부분은 재조합 DNA 기술에 의해, 또는 무손상 면역글로불린의 효소 또는 화학 절단에 의해 생성될 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어 "가변 영역" 및 "가변 도메인"은 본 분야에서 통상적으로 상호 교환하여 사용된다. 가변 영역은 전형적으로 항체의 일부분, 일반적으로 경쇄 또는 중쇄의 일부분, 전형적으로 성숙한 중쇄에서 약 아미노 말단 110 내지 120개 아미노산과 성숙한 경쇄에서 약 90 내지 115개 아미노산을 말하며, 이들은 항체별로 서열이 광범하게 상이하고, 특정 항원에 대한 특정 항체의 결합 및 특이성 때문에 사용된다. 서열 변동성은 상보성 결정 영역(CDR)이라고 불리는 영역에 집중되며, 가변 도메인에서 더 고도로 보존된 영역은 프레임워크 영역(FR)이라고 불린다.
경쇄 및 중쇄의 CDR은 항원과 항체의 상호작용 및 특이성을 주로 담당한다고 여겨진다. 특정 구체예에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다. 특정 구체예에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR과 인간 프레임워크 영역(FR)을 포함한다. 일부 구체예에서, 가변 영역은 영장류(예를 들어, 비-인간 영장류) 가변 영역이다. 다른 구체예에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR과 영장류(예를 들어, 비-인간 영장류) 프레임워크 영역(FR)을 포함한다.
본 발명에서 사용된 용어 "중쇄"(HC)는 항체와 관련하여 사용되었을 때, 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 임의의 상이한 타입, 예를 들어 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 및 뮤(μ)를 말할 수 있으며, 이들은 각각 IgG의 아형, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하여, 항체의 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 유형을 발생시킨다.
본 발명에서 사용된 용어 "경쇄"(LC)는 항체와 관련하여 사용되었을 때, 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 임의의 상이한 타입, 예를 들어 카파(κ) 및 람다(λ)를 말할 수 있다. 경쇄 아미노산 서열은 본 분야에 잘 공지되어 있다. 특정 구체예에서, 경쇄는 인간 경쇄이다.
용어 "VL" 및 "VL 도메인"은 상호 교환하여 사용되며 항체의 경쇄 가변 영역을 말한다.
용어 "VH" 및 "VH 도메인"은 상호 교환하여 사용되며 항체의 중쇄 가변 영역을 말한다.
본 발명에서 사용된 용어 "불변 영역" 및 "불변 도메인"은 상호 교환 가능하며 본 분야에 공지되어 있다. 불변 도메인은 항체 부분이며, 예를 들어 항체와 항원의 결합에는 직접 연루되지 않지만, Fc 수용체와의 상호작용과 같은 다양한 이펙터 기능을 나타낼 수 있는 경쇄 및/또는 중쇄의 카복시 말단 부분이다. 면역글로불린 분자의 불변 영역은 일반적으로 면역글로불린 가변 도메인에 비해 더 보존성인 아미노산 서열을 가진다.
"Fc 영역"(단편 결정화 가능한 영역) 또는 "Fc 도메인" 또는 "Fc"는 면역 시스템의 다양한 세포(예를 들어 이펙터 세포) 상에 위치된 Fc 수용체 또는 정통 보체 시스템의 제1 성분(C1q)과의 결합을 포함하여, 숙주 조직 또는 인자들과 면역글로불린의 결합을 매개하는 항체의 중쇄의 C-말단 영역을 말한다. 따라서, Fc 영역은 제1 불변 영역 면역글로불린 도메인(예를 들어, CH1 또는 CL)을 제외한 항체의 불변 영역을 포함한다. IgG, IgA 및 IgD 항체 이소타입에서, Fc 영역은 항체의 두 중쇄의 제2(CH2) 및 제3(CH3) 불변 도메인으로부터 유래된 2개의 동일한 단백질 단편을 포함한다; IgM 및 IgE Fc 영역은 각 폴리펩타이드 사슬에 3개의 중쇄 불변 도메인(CH 도메인 2-4)을 포함한다. IgG의 경우, Fc 영역은 면역글로불린 도메인 Cγ2 및 Cγ3과 Cγ1과 Cγ2 사이의 힌지를 포함한다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 다양하지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 일반적으로 위치 C226이나 P230에 있는 아미노산 잔기(또는 이들 두 아미노산 사이의 아미노산)에서 중쇄의 카복시-말단까지 늘어난 것으로서 한정되며, 넘버링은 Kabat의 EU 인덱스를 따른다. 인간 IgG Fc 영역의 CH2 도메인은 약 아미노산 231에서 약 아미노산 340까지 연장되고, CH3 도메인은 Fc 영역에서 Cm 도메인의 C-말단 측에 위치되는데, 그것은 IgG의 약 아미노산 341에서 약 아미노산 447까지 연장된다. 본 발명에서 사용된 Fc 영역은 임의의 알로타입 변이체를 포함하는 자생 서열 Fc, 또는 변이체 Fc(예를 들어, 비-자연-발생 Fc)일 수 있다. 또한, Fc는 분리된 상태의 영역을 말하거나 또는 "Fc 융합 단백질"(예를 들어, 항체 또는 면역유착(immunoadhesion))이라고도 하는, "Fc 영역을 포함하는 결합 단백질"과 같은 Fc-포함 단백질 폴리펩타이드와 관계된 영역을 말한다.
"자생 서열 Fc 영역" 또는 "자생 서열 Fc"는 자연에서 발견된 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 자생 서열 인간 Fc 영역은 자생 서열 인간 IgG1 Fc 영역; 자생 서열 인간 IgG2 Fc 영역; 자생 서열 인간 IgG3 Fc 영역; 및 자생 서열 인간 IgG4 Fc 영역뿐만 아니라 이들의 자연-발생 변이체를 포함한다. 자생 서열 Fc는 Fe들의 다양한 알로타입을 포함한다(예를 들어, Jefferis et al., mAbs 1:1 (2009); Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개) 참조).
"Fc 수용체" 또는 "FcR"은 면역글로불린의 Fc 영역에 결합하는 수용체이다. IgG 항체에 결합하는 FcR은 Fcγ 패밀리의 수용체를 포함하고, 이들 수용체의 대립형질 변이체 및 다른 방식으로 스플라이싱된 형태를 포함한다. Fcγ 패밀리는 3개의 활성화 수용체(마우스에서 FcγRI, FcγRIII, 및 FcγRIV; 인간에서 FcγRIA, FcγRIIA, 및 FcγRIIIA)와 하나의 저해 수용체(FcγRIIB)로 구성된다. 인간 IgG1은 대부분의 인간 Fc 수용체와 결합하며 가장 강한 Fc 이펙터 기능을 도출한다. 그것이 결합하는 활성화 Fc 수용체의 종류에 대해서는 뮤린 IgG2a와 동등하다고 간주된다. 반면, 인간 IgG4는 최소한의 Fc 이펙터 기능을 도출한다(Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개) 참조).
불변 영역은 하나 이상의 이펙터 기능을 제거하기 위해, 예를 들어 재조합 기술에 의해 조작될 수 있다. "이펙터 기능"은 항체 Fc 영역과 Fc 수용체 또는 리간드의 상호작용, 또는 그로부터 생기는 생화학적 이벤트를 말한다. 예시적인 "이펙터 기능"은 C1q 결합, 보체 의존성 세포독성(CDC), Fc 수용체 결합, FcγR-매개 이펙터 기능, 예컨대 ADCC 및 항체 의존성 세포-매개 포식작용(ADCP), 및 세포 표면 수용체(예를 들어 B 세포 수용체; BCR)의 하향조절을 포함한다. 이러한 이펙터 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 도메인(예를 들어 항체 가변 도메인)과 조합되는 것을 필요로 한다. 따라서, 용어 "Fc 기능이 없는 불변 영역"은 Fc 영역에 의해 매개된 하나 이상의 이펙터 기능이 감소되거나 없는 불변 영역을 포함한다.
항체의 이펙터 기능은 상이한 접근법에 의해 감소 또는 회피될 수 있다. 항체의 이펙터 기능은 Fc 영역을 결여한 항체 단편(예를 들어, 예컨대 Fab, F(ab')2, 단쇄 Fv(scFv), 또는 모노머 VH 또는 VL 도메인으로 구성된 sdAb)을 사용하여 감소되거나 회피될 수 있다. 또는, Fc 영역의 다른 가치 있는 속성(예를 들어 연장된 반감기 및 헤테로다이머화)은 보유하면서 항체의 이펙터 기능을 감소시키기 위해 소위 말하는 무글리코실화(aglycosylated) 항체가 Fc 영역에서 특정 잔기에 연결된 당을 제거함으로써 생성될 수 있다. 무글리코실화 항체는, 예를 들어 당이 부착된 잔기를 결실 또는 변경함으로써, 당을 효소적으로 제거함으로써, 글리코실화 저해제의 존재하에 배양된 세포에서 항체를 생성함으로써, 또는 단백질을 글리코실화할 수 없는 세포(예를 들어, 박테리아 숙주 세포)에서 항체를 발현함으로써 생성될 수 있다(예를 들어, 미국 특허공개 No. 20120100140 참조). 다른 접근법은 이펙터 기능이 감소된 IgG 아형으로부터의 Fc 영역을 이용하는 것인데, 예를 들어 IgG2 및 IgG4 항체는 IgG1 및 IgG3보다 더 낮은 수준의 Fc 이펙터 기능을 갖는 것을 특징으로 한다. Fc 부분의 CH2 도메인에서 힌지 영역에 가장 가까이 있는 잔기가 항체의 이펙터 기능을 담당하며, 그것은 선천 면역 시스템의 이펙터 세포 상에서 C1q(보체) 및 IgG-Fc 수용체(FcγR)에 대해 상당히 중첩된 결합 부위를 함유한다(Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개 참조). 따라서, Fc 이펙터 기능이 감소되거나 없는 항체는, 예를 들어 IgG4 이소타입의 IgG 항체로부터 CH2 도메인과 IgG1 이소타입의 IgG 항체로부터 CH3 도메인을 포함하는 키메라 Fc 영역, 또는 IgG2로부터 힌지 영역과 IgG4로부터 CH2 영역을 포함하는 키메라 Fc 영역(예를 들어, Lau C. et al., J. Immunol. 191:4769-4777 (2013) 참조), 또는 변경된 Fc 이펙터 기능, 예를 들어 Fc 기능이 감소되거나 없는 돌연변이를 가진 Fc 영역을 생성함으로써 제조될 수 있다. 돌연변이를 가진 이러한 Fc 영역은 본 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 미국특허 공개 No. 2012-0100140호와 거기 인용된 미국출원 및 PCT 출원 그리고 An et al., mAbs 1:6, 572-579 (2009)를 참조한다.
"힌지", "힌지 도메인" 또는 "힌지 영역" 또는 "항체 힌지 영역"은 CH1 도메인을 CH2 도메인과 연결하고 힌지의 상부, 중앙, 및 하부 부분을 포함하는 중쇄 불변 영역의 도메인을 말한다(Roux et al., J. Immunol. 161:4083 (1998) 참조). 힌지는 항체의 결합 영역과 이펙터 영역 사이에 가요성의 수준을 변화시키며, 또한 두 중쇄 불변 영역 사이에 분자간 이황화물 결합을 위한 부위를 제공한다. 본 발명에서 사용된 힌지는 모든 IgG 이소타입에 대해 Glu216에서 시작해서 Gly237에서 끝난다(Roux et al., J. Immunol. 161:4083 (1998) 참조). 야생형 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 힌지의 서열이 본 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, Kabat E.A. et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개)를 참조한다.
용어 "CH1 도메인"은 중쇄 불변 도메인에서 가변 도메인과 힌지를 연결하는 중쇄 불변 영역을 말한다. 본 발명에서 사용된 CH1 도메인은 A118에서 시작해서 V215에서 끝난다. 용어 "CH1 도메인"은 야생형 CH1 도메인뿐만 아니라 그것의 자연적으로 존재하는 변이체(예를 들어 알로타입)를 포함한다. (야생형 및 알로타입을 포함하는) IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 CH1 도메인 서열은 본 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, Kabat E.A. et al., (1991)(상동) 및 Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개)를 참조한다. 예시적인 CH1 도메인은 항체의 생물학적 활성, 예를 들어 반감기를 변형하는 돌연변이를 가진 CH1 도메인을 포함하며, 이들은 예를 들어 미국특허 공개 No. 20120100140 및 거기 인용된 미국특허 및 출원과 PCT 출원에 개시된다.
용어 "CH2 도메인"은 중쇄 불변 도메인에서 힌지와 CH3 도메인을 연결하는 중쇄 불변 영역을 말한다. 본 발명에서 사용된 CH2 도메인은 P238에서 시작해서 K340에서 끝난다. 용어 "CH2 도메인"은 야생형 CH2 도메인뿐만 아니라 그것의 자연적으로 존재하는 변이체(예를 들어 알로타입)를 포함한다. (야생형 및 알로타입을 포함하는) IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 CH2 도메인 서열은 본 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, Kabat E.A. et al., (1991)(상동) 및 Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개)를 참조한다. 예시적인 CH2 도메인은 항체의 생물학적 활성, 예를 들어 반감기 및/또는 감소된 Fc 이펙터 기능을 변형하는 돌연변이를 가진 CH2 도메인을 포함하며, 이들은 예를 들어 미국특허 공개 No. 20120100140호 및 거기 인용된 미국특허 및 출원과 PCT 출원에 개시된다.
용어 "CH3 도메인"은 중쇄 불변 도메인에서 CH2 도메인에 대해 C-말단인 중쇄 불변 영역을 말한다. 본 발명에서 사용된 CH3도메인은 G341에서 시작해서 K447에서 끝난다. 용어 "CH3 도메인"은 야생형 CH3 도메인뿐만 아니라 그것의 자연적으로 존재하는 변이체(예를 들어 알로타입)를 포함한다. (야생형 및 알로타입을 포함하는) IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 CH3 도메인 서열은 본 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, Kabat E.A. et al., (1991)(상동) 및 Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개)를 참조한다. 예시적인 CH3 도메인은 항체의 생물학적 활성, 예를 들어 반감기를 변형하는 돌연변이를 가진 CH3 도메인을 포함하며, 이들은 예를 들어 미국특허 공개 No. 20120100140호 및 거기 인용된 미국특허 및 출원과 PCT 출원에 개시된다.
본 발명에서 사용된 "이소타입"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 암호화되는 항체 유형(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE 항체)을 말한다.
"알로타입"은 몇 개의 아미노산이 차이가 있는 특정한 이소타입 그룹 내에서 자연-발생한 변이체를 말한다(예를 들어, Jefferis et al., (2009) mAbs 1:1 참조). 본 발명에서 설명된 항체는 임의의 알로타입을 가질 수 있다. IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 알로타입은 본 분야에 공지되어 있다. 예를 들어, Kabat E.A. et al., (1991)(상동); Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개); 및 Lefranc M.P., mAbs 1:4, 1-7(2009)를 참조한다.
문구 "항원을 인식하는 항체" 및 "항원에 특이적인 항체"는 용어 "항원에 특이적으로 결합하는 항체"와 함께 본 발명에서 상호 교환하여 사용된다.
본 발명에서 사용된 "분리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 가진 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 말한다(예를 들어, FAM19A5에 특이적으로 결합하는 분리된 항체는 FAM19A5 이외의 다른 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다). 그러나, FAM19A5의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체는 상이한 종으로부터의 다른 FAM19A5 단백질에 대해 교차-반응성을 가질 수 있다.
"결합 친화성"은 일반적으로 분자(예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그것의 결합 파트너(예를 들어, 항원) 간의 상호작용의 전체 합계 강도를 말한다. 달리 나타내지 않는다면, 본 발명에서 사용된 "결합 친화성"은 결합 쌍의 구성원(예를 들어, 항체와 항원) 간의 1:1 상호작용을 반영하는 고유한 결합 친화성을 말한다. 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화성은 일반적으로 해리 상수(KD)에 의해 표시될 수 있다. 친화성은, 제한은 아니지만, 평형 해리 상수(KD), 및 평형 결합 상수(KA)를 포함하는, 본 분야에 공지된 다수의 방식으로 측정 및/또는 표시될 수 있다. KD는 koff/kon로부터 계산되고 몰 농도(M)로 표시되며, KA는 kon/koff로부터 계산된다. kon은, 예를 들어 항원에 대한 항체의 결합 속도 상수를 말하고, koff는, 예를 들어 항원에 대한 항체의 해리 속도 상수를 말한다. kon 및 koff는 면역분석(예를 들어, 효소-결합 면역흡착 분석(ELISA)), BIACORE™ 또는 역학적 배제 분석(KINEXA®)과 같은, 당업자에게 공지된 기술에 의해 결정될 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어 "특이적으로 결합한다", "특이적으로 인식한다", "특이적 결합", "선택적 결합" 및 "선택적으로 결합한다"는 항체와 관련하여 유사한 용어들로서 항원(예를 들어, 에피토프 또는 면역 복합체)에 결합하는 분자(예를 들어, 항체)를 말하며, 이러한 결합은 당업자에 의해 이해되는 바와 같다. 예를 들어, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는, 예를 들어 면역분석, BIACORE™, KINEXA® 3000 기기(Sapidyne Instruments, Boise, 인도), 또는 본 분야에 공지된 다른 분석들에 의해 결정되었을 때, 일반적으로 더 낮은 친화성으로 다른 펩타이드 또는 폴리펩타이드에 결합할 수 있다. 특정 구체예에서, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는 이 분자가 다른 항원에 결합할 때의 KA보다 적어도 2 logs, 2.5 logs, 3 logs, 4 logs 또는 그 이상 더 큰 KA으로 그 항원에 결합한다.
항체는 전형적으로 10-5 내지 10-11 M 이하의 해리 상수에 의해 반영되는, 높은 친화성으로 동족 항원에 특이적으로 결합한다. 약 10-4 M를 초과하는 KD는 일반적으로 비특이적 결합을 나타낸다고 간주된다. 본 발명에서 사용된, 항원과 "특이적으로 결합하는" 항체는 높은 친화성으로 항원 및 실질적으로 동일한 항원에 결합하는 항체를 말하며, 이것은 예를 들어 정해진 항원을 사용하여 면역분석(예를 들어 ELISA) 또는 BIACORE™ 2000 기기에서 표면 플라즈몬 공명(SPR) 기술에 의해 결정되었을 때, 10-7 M 이하, 바람직하게 10-8 M 이하, 더욱더 바람직하게 10-9 M 이하, 및 가장 바람직하게 10-8 M 내지 10-10 M 이하의 KD를 갖는 것을 의미하고, 이것은 관련 없는 항원에는 높은 친화성으로 결합하지 않는다.
본 발명에서 사용된 용어 "항원"은 임의의 천연 또는 합성 면역원성 물질, 예컨대 단백질, 펩타이드 또는 합텐을 말한다. 항원은 FAM19A5 또는 그것의 단편일 수 있다.
본 발명에서 사용된 "에피토프"는 본 분야의 용어로서 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 국소화된 영역을 말한다. 에피토프는, 예를 들어 폴리펩타이드의 연속(contiguous) 아미노산들(선형 또는 연속 에피토프)일 수 있거나, 또는 에피토프는, 예를 들어 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 둘 이상의 비-연속 영역(입체형태적, 비-선형, 불연속, 또는 비-연속 에피토프)들이 합쳐진 것일 수 있다. 연속 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 항상 그렇지는 않지만 전형적으로 변성 용매에 노출시 보유되고, 3차 접힘에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매로 처리시 상실된다. 에피토프는 전형적으로 독특한 공간적 입체형태에서 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 20개 아미노산을 포함한다. 에피토프가 주어진 항체에 의해 결합된 것을 결정하는 방법(즉, 에피토프 맵핑)이 본 분야에 잘 공지되어 있으며, 이들은, 예를 들어 면역블롯팅 및 면역침전 분석을 포함하고, (예를 들어, FMAM19A5로부터의) 중첩 또는 연속 펩타이드가 주어진 항체(예를 들어, 항-FAM19A5 항체)와의 반응성에 대해 시험된다. 에피토프의 공간적 입체형태를 결정하는 방법은 본 분야의 기술 및 본 발명에서 설명된 것들을 포함하며, 예를 들어 엑스선 결정학, 2-차원 핵자기공명 및 HDX-MS를 포함한다(예를 들어, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996) 참조).
특정 구체예에서, 항체가 결합한 에피토프는, 예를 들어 NMR 분광법, 엑스선 회절 결정학 연구, ELISA 분석, 질량분광법과 결합된 수소/중수소 교환(예를 들어, 액체 크로마토그래피 전자분무 질량분광법), 어레이-기반 올리고-펩타이드 스캐닝 분석, 및/또는 돌연변이유발 맵핑(예를 들어, 부위-지정 돌연변이유발 맵핑)에 의해 결정될 수 있다. 엑스선 결정학의 경우, 결정화는 본 분야에 공지된 방법 중 어느 것을 사용하여 달성될 수 있다(예를 들어, Giege R. et al., (1994) Acta. Crystallogr. D. Biol. Crystallogr. 50(Pt 4):339-350; McPherson A. Eur. J. Biochem. 189:1-23 (1990); Chayen N.E. Structure 5:1269-1274 (1997); McPherson A. J. Biol. Chem. 251:6300-6303 (1976) 참조). 항체:항원 결정은 잘 공지된 엑스선 회절 기술을 사용하여 연구될 수 있으며, X-PLOR(Yale University, 1992, Molecular Simulations, Inc.에 의해 배포; 예를 들어 Meth. Enzymol. (1985) volumes. 114 & 115, eds Wyckoff H.W. et al.,; 미국특허 공개 No. 2004/0014194 참조), BUSTER(Bricogne G. Acta. Crystallogr. D. Biol. Crystallogr. 49(Pt1): 37-60 (1993); Bricogne G. Meth. Enzymol. 276A:361-423, ed Carter C.W. (1997); Roversi P. et al., Acta. Crystallogr. D. Biol. Crystallogr. 56(Pt 10):1316-1323 (2000) 참조)과 같은 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 정리될 수 있다. 돌연변이유발 맵핑 연구는 당업자에게 공지된 임의의 방법을 사용하여 달성될 수 있다. 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 기술을 포함하는 돌연변이유발 기술의 설명은, 예를 들어 Champe M. et al., J. Biol. Chem. 270:1388-1394 (1995) 및 Cunningham B.C. & Wells J.A. Science 244:1081-1085 (1989)를 참조한다.
용어 "에피토프 맵핑"은 항체-항원 인식에 대한 분자 결정소의 확인 과정을 말한다.
둘 이상의 항체와 관련하여 용어 "동일한 에피토프에 결합한다"는 주어진 방법에 의해 결정되었을 때 항체들이 아미노산 잔기의 동일한 세그먼트에 결합한다는 것을 의미한다. 항체들이 본 발명에서 설명된 항체와 "FAM19A5 상의 동일한 에피토프"에 결합하는지 여부를 결정하는 기술은, 예를 들어 에피토프 맵핑 방법, 예컨대 에피토프의 원자 분해능을 제공하는 항원:항체 복합체의 결정의 엑스선 분석 및 수소/중수소 교환 질량분광법(HDX-MS)을 포함한다. 다른 방법은 항체와 항원 단편 또는 항원의 돌연변이된 변이체의 결합을 모니터링하며, 여기서 항원 서열 내에서 아미노산 잔기의 변형으로 인한 결합의 손실이 주로 에피토프 성분의 표시로서 간주된다. 또한, 에피토프 맵핑을 위한 컴퓨터 조합 방법도 사용될 수 있다. 이들 방법은 조합 파지 전시 펩타이드 라이브러리로부터 특정한 짧은 펩타이드를 친화성 분리할 수 있는 관심 항체의 능력에 의존한다. 동일한 VH 및 VL 또는 동일한 CDR1, 2 및 3 서열을 가진 항체는 동일한 에피토프에 결합할 것으로 예상된다.
"표적과의 결합에 대해 다른 항체와 경쟁하는 항체"는 나머지 항체와 표적의 결합을 (부분적으로 또는 완전히) 저해하는 항체를 말한다. 두 항체가 표적과의 결합에 대해 서로 경쟁하는지 여부, 즉 하나의 항체가 나머지 항체와 표적의 결합의 저해하는지의 여부와 저해하는 정도는 공지된 경쟁 실험을 사용하여 결정될 수 있다. 특정 구체예에서, 항체는 다른 항체와 표적의 결합에서 경쟁하며 이 결합을 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%까지 저해한다. 저해 또는 경쟁의 수준은 항체가 "차단 항체"(즉, 표적과 먼저 인큐베이션된 저온 항체)인지에 따라 상이할 수 있다. 경쟁 분석은, 예를 들어 E.d. Harlow and David Lane, Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.prot4277 또는 E.d. Harlow and David Lane에 의한 "Using Antibodies"(Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA 1999)의 제11장에 설명된 대로 수행될 수 있다. 경쟁 항체는 (예를 들어, 입체 장해에 의해) 동일한 에피토프, 중첩 에피토프 또는 인접 에피토프에 결합한다.
다른 경쟁 결합 분석은 고체상 직접 또는 간접 방사성면역분석(RIA), 고체상 직접 또는 간접 효소면역분석(EIA), 샌드위치 경쟁 분석(Stahli et al., Methods in Enzymology 9:242 (1983) 참조); 고체상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(Kirkland et al., J. Immunol. 137:3614 (1986) 참조); 고체상 직접 표지화 분석, 고체상 직접 표지화 샌드위치 분석(Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988) 참조); 1-125 표지를 사용한 고체상 직접 표지 RIA( Morel et al., Mol. Immunol. 25(1):7 (1988) 참조); 고체상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(Cheung et al., Virology 176:546 (1990)); 및 직접 표지화 RIA(Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol. 32:77 (1990))를 포함한다.
"이중특이적" 또는 "이중기능성 항체"는 두 상이한 중쇄/경쇄 쌍과 두 상이한 결합 부위를 가진 인공 하이브리드 항체이다. 이중특이적 항체는 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 연결을 포함하는 다양한 방법에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990); Kostelny et al., J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992)를 참조한다.
본 발명에서 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 특정 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타내는 항체 또는 모든 항체가 특정 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타내는 항체들의 조성물을 말한다. 따라서, 용어 "인간 모노클로날 항체"는 단일 결합 특이성을 나타내고 인간 점라인 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 선택적 불변 영역을 가진 항체 또는 항체 조성물을 말한다. 한 구체예에서, 인간 모노클로날 항체는 트랜스제닉 비-인간 동물, 예를 들어 불멸화 세포에 융합된 인간 중쇄 트랜스젠과 경쇄 트랜스젠을 포함하는 게놈을 가진, 트랜스제닉 마우스로부터 얻어진 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생성된다.
본 발명에서 사용된 용어 "재조합 인간 항체"는 (a) 인간 면역 글로불린 유전자에 대해 트랜스젠이거나 트랜스염색체성(transchromosomal)인 동물(예를 들어, 마우스)로부터 분리된 항체 또는 그로부터 제조된 하이브리도마, (b) 항체를 발현하도록 형질전환된 숙주 세포로부터, 예를 들어 트랜스펙토마(transfectoma)로부터 분리된 항체, (c) 재조합, 조합 인간 항체 라이브러리로부터 분리된 항체, 및 (d) 다른 DNA 서열에 대한 인간 면역글로불린 유전자 서열을 스플라이싱을 수반하는 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 분리된 항체와 같은, 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 분리된 모든 인간 항체를 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는 점라인 유전자에 의해 암호화되지만, 예를 들어 항체 성숙화 동안 발생하는 후속 재배열 및 돌연변이를 포함하는 특정한 인간 점라인 면역글로불린 서열을 이용하는 가변 및 불변 영역을 포함한다. 본 분야에 공지된 대로(예를 들어, Lonberg, Nature Biotech. 23(9): 1117-1125 (2005) 참조), 가변 영역은 외래 항원에 대해 특이적인 항체를 형성하도록 재배열한 다양한 유전자에 의해 암호화된, 항원 결합 도메인을 함유한다. 재배열에 더하여, 가변 영역은 외래 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시키기 위해 다수의 단일 아미노산 변화(체세포 돌연변이 또는 초돌연변이라고 함)에 의해 더 변형될 수 있다. 불변 영역은 항원에 대한 추가의 반응에서 변할 것이다(즉, 이소타입 스위치). 따라서, 항원에 반응하여 경쇄 및 중쇄 면역글로불린 폴리펩타이드를 암호화하는 재배열되고 체세포 돌연변이된 핵산 분자는 원래 핵산 분자와 서열 동일성을 가질 수 없지만, 대신 실질적으로 동일하거나 유사할 것이다(즉, 적어도 80% 동일성을 가진다).
"인간" 항체(HuMAb)는 프레임워크와 CDR 영역이 둘 다 인간 점라인 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 가진 항체를 말한다. 또한, 이 항체가 불변 영역을 함유한다면, 불변 영역 역시 인간 점라인 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 본 발명에서 설명된 항체는 인간 점라인 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다(예를 들어, 시험관내 무작위 또는 부위-특정 돌연변이유발에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이). 그러나, 본 발명에서 사용된 용어 "인간 항체"는 마우스와 같은 다른 포유류 종의 점라인으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 접목된 항체는 포함하지 않는다. 용어 "인간" 항체와 "완전한 인간" 항체는 동의어로서 사용된다.
"인간화" 항체는 비-인간 항체의 CDR 도메인 밖의 아미노산의 일부, 대부분 또는 전부가 인간 면역글로불린으로부터 유래된 상응하는 아미노산으로 치환된 항체를 말한다. 항체의 인간화 형태의 한 구체예에서, CDR 도메인 밖의 아미노산의 일부, 대부분 또는 전부가 인간 면역글로불린으로부터의 아미노산으로 치환되었고, 하나 이상의 CDR 영역 내의 아미노산의 일부, 대부분 또는 전부는 그대로 남는다. 아미노산의 첨가, 결실, 삽입, 치환 또는 변형은 이들이 항체가 특정 항원에 결합하는 능력을 없애지 않는 한 허용된다. "인간화 항체"는 원래 항체의 것과 유사한 항원 특이성을 보유한다.
"키메라 항체"는 하나의 종으로부터 가변 영역이 유래되고 다른 종으로부터 불변 영역이 유래된 항체, 예컨대 마우스 항체로부터 가변 영역이 유래되고 인간 항체로부터 불변 영역이 유래된 항체를 말한다.
본 발명에서 사용된 용어 "교차-반응한다"는 상이한 종들로부터의 FAM19A5에 결합하는 본 발명에서 설명된 항체의 능력을 말한다. 예를 들어, 인간 FAM19A5에 결합하는 본 발명에 설명된 항체는 다른 종의 FAM19A5(예를 들어, 마우스 FAM19A5)에도 결합할 수 있다. 본 발명에서 사용된 교차-반응성은 결합 분석(예를 들어, SPR, ELISA)에서 정제된 항원과의 특이적 반응성을 검출함으로써 또는 FAM19A5를 생리학적으로 발현하는 세포와의 결합, 또는 기능적 상호작용을 검출함으로써 측정될 수 있다. 교차-반응성을 결정하기 위한 방법은 본 발명에서 설명된 표준 결합 분석, 예를 들어, BIACORE™ 2000 SPR 기기(Biacore AB, Uppsala, 스웨덴)를 사용한 BIACORE™ 표면 플라즈몬 공명(SPR) 분석, 또는 유세포계수 기술을 포함한다.
본 발명에서 어떤 물체에 적용된 용어 "자연-발생"은 그 물체가 자연에서 발견될 수 있다는 사실을 말한다. 예를 들어, 자연의 출처로부터 분리될 수 있고 실험실에서 인간에 의해 의도적으로 변형되지 않은 유기체에 존재하는 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 서열은 자연-발생적이다.
"폴리펩타이드"는 적어도 두 개의 연속 연결된 아미노산 잔기를 포함하는 사슬을 말하며, 사슬의 길이에는 상한은 없다. 단백질의 하나 이상의 아미노산 잔기는, 제한은 아니지만, 글리코실화, 포스포릴화 또는 이황화물 결합 형성과 같은 변형을 함유할 수 있다. "단백질"은 하나 이상의 폴리펩타이드를 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어 "핵산 분자"는 DNA 분자 및 RNA 분자를 포함한다. 핵산 분자는 단일-가닥 또는 이중-가닥일 수 있고, cDNA일 수 있다.
본 발명에서 사용된 용어 "치료적 유효량"은 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여, 대상의 기분 장애를 "치료하기에" 효과적인 또는 기분 장애(예를 들어, 주요 우울 장애 또는 양극성 장애)의 위험, 잠재성, 가능성 또는 발생을 감소시키기에 효과적인, 약물의 양을 말한다. "치료적 유효량"은 기분 장애를 갖고 있거나 가질 위험이 있는 대상에게 일부 개선이나 이익을 제공하는 약물 또는 치료제의 양을 포함한다. 따라서, "치료적 유효량"은 기분 장애의 위험, 잠재성, 가능성 또는 발생을 감소시키거나 또는 완화, 경감을 제공하고, 및/또는 적어도 하나의 지표를 감소시키고, 및/또는 기분 장애(예를 들어, 주요 우울 장애 또는 양극성 장애)의 적어도 하나의 임상 증상을 감소시키는 양이다.
II. 기분 장애의 진단 방법
FAM19A5 길항제(예를 들어, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편)을 대상의 생물학적 샘플과 접촉시키는 단계 및 샘플의 FAM19A5의 단백질 수준 또는 FAM19A5를 암호화하는 핵산(예를 들어, mRNA) 수준을 측정하는 단계를 포함하는 진단이 필요한 대상의 기분 장애(예를 들어, 주요 우울 장애 또는 양극성 장애)를 진단하는 방법이 본 발명에 개시된다. 일부 구체예에서, 기분 장애는 주요 우울 장애(MDD), 양극성 장애(BD), 지속성 우울 장애, 계절성 정서 장애(SAD), 정신병적 우울증, 산후 우울증, 월경전 불쾌 장애(PMDD), 상황성 우울증, 비정형 우울증, 및 이들의 임의의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, 기분 장애는 주요 우울 장애이다. 다른 구체예에서, 기분 장애는 양극성 장애이다.
한 구체예에서, 생물학적 샘플은 기준 샘플(예를 들어, 기분 장애를 갖지 않은 대상의 샘플)의 FAM19A5의 단백질 수준 또는 FAM19A5를 암호화하는 핵산 수준과 비교하여 FAM19A5의 단백질 수준 또는 FAM19A5를 암호화하는 핵산 수준의 적어도 1.1배, 적어도 1.2배, 적어도 1.3배, 적어도 1.4배, 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 11배, 적어도 12배, 적어도 13배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 25배, 또는 적어도 30배 증가를 가진다. FAM19A5의 증가된 단백질 수준 또는 FAM19A5를 암호화하는 증가된 핵산 수준을 나타내는 대상은 기분 장애가 의심되는 대상으로서 확인될 수 있다.
한 구체예에서, 기준 샘플은 기분 장애의 개시 전에 기준 샘플이 얻어진 대상과 동일한 대상으로부터 얻어질 수 있다. 다른 구체예에서, 기준 샘플은 기분 장애를 갖지 않는 대조군 대상 또는 대조군 대상의 집단, 예를 들어 건강한 대조군 대상으로부터 얻어질 수 있다.
특정 구체예에서, FAM19A5의 기준 단백질 수준은 ELISA에 의해 측정되었을 때 약 2.0 ng/ml, 약 1.9 ng/ml, 약 1.8 ng/ml, 약 1.7 ng/ml, 약 1.6 ng/ml, 약 1.5 ng/ml, 약 1.4 ng/ml, 약 1.3 ng/ml, 약 1.2 ng/ml, 약 1.1 ng/ml, 약 1 ng/ml, 약 0.9 ng/ml,, 약 0.8 ng/ml, 약 0.7 ng/ml, 약 0.6 ng/ml, 약 0.5 ng/ml, 약 0.4 ng/ml, 약 0.3 ng/ml, 약 0.2 ng/ml, 약 0.1 ng/ml, 또는 더 낮은 값이다.
일부 구체예에서, 기분 장애를 가진다고 의심되는 대상은 적어도 2.1 ng/ml, 적어도 2.2 ng/ml, 적어도 2.3 ng/ml, 적어도 2.4 ng/ml, 적어도 2.5 ng/ml, 적어도 2.6 ng/ml, 적어도 2.7 ng/ml, 적어도 2.8 ng/ml, 적어도 2.9 ng/ml, 적어도 3.0 ng/ml, 적어도 3.5 ng/ml, 적어도 4.0 ng/ml, 적어도 4.5 ng/ml, 적어도 5.0 ng/ml, 적어도 6.0 ng/ml, 적어도 7 ng/ml, 적어도 9 ng/ml, 적어도 10 ng/ml, 적어도 11 ng/ml, 적어도 12 ng/ml, 적어도 13 ng/ml, 적어도 14 ng/ml, 적어도 15 ng/ml, 적어도 16 ng/ml, 적어도 17 ng/ml, 적어도 18 ng/ml, 적어도 19 ng/ml, 적어도 20 ng/ml, 또는 적어도 25 ng/ml의 FAM19A5 단백질 수준을 나타낸다. 다른 구체예에서,기분 장애를 가진다고 의심되는 대상은 약 2.0 ng/ml 내지 약 1 ug/ml, 10 ng/ml 내지 약 1 ug/ml, 2 ng/ml 내지 약 500 ng/ml(또는 약 400 ng/ml, 300 ng/ml, 200 ng/ml, 또는 100 ng/ml), 3 ng/ml 내지 약 400 ng/ml의 FAM19A5 단백질 수준을 나타낸다.
본 발명과 관련하여, 기분 장애를 가진 대상은 말초 혈액에서 FAM19A5를 더 높은 수준으로 발현하는 것으로 나타났다(실시예 1 참조). 따라서, 본 발명에 개시된 방법은 대상의 혈청 중 FAM19A5의 단백질 수준 또는 FAM19A5를 암호화하는 핵산 수준을 측정함으로써 대상의 기분 장애(예를 들어, 주요 우울 장애 또는 양극성 장애)를 진단하기 위해 사용될 수 있으며, 기준 수준(예를 들어, 기분 장애를 갖지 않는 대상에서의 FAM19A5 수준)과 비교하여 증가된 수준은 상기 대상이 기분 장애를 가진다는 것을 시사할 것이다. 일부 구체예에서, 본 발명은 기분 장애를 가진다고 의심되는 대상의 FAM19A5 단백질 수준을 측정함으로써 기분 장애의 존재를 확인하기 위해 사용될 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명은 기분 장애를 가진 대상을 확인하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 방법은 현재 이용가능한 진단 방법(예를 들어, 환자의 행동을 의료전문가가 주관적으로 평가하는 것)보다 더 정확하고 정량적일 수 있다.
다른 구체예에서, 본 발명은 FAM19A5의 단백질 또는 핵산 수준을 측정하는 단계를 포함하는 기분 장애의 치료를 필요로 하는 대상을 확인하는 방법을 포함하며, 대조군 수준과 비교하여 FAM19A5 단백질 또는 FAM19A5를 암호화하는 핵산의 증가된 수준은 상기 대상이 기분 장애를 가진다는 것을 나타낸다. 일부 구체예에서, 본 발명은 기분 장애를 갖는 것으로 확인된 대상을 치료하도록 의료제공자에게 지시하는 단계를 더 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 진단, 예를 들어 기분 장애의 존재를 의료제공자에게 알리는 단계를 더 포함한다. 일부 구체예에서, 본 발명은 기분 장애를 치료하기 위해 하나 이상의 제제를 투여하는 단계를 더 포함한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 방법은 기분 장애를 가진다고 의심되는 대상의 대뇌피질 두께를 측정하는 방법을 포함한다. 본 발명에서 나타낸 대로, 본 출원은 대뇌피질 두께가 FAM19A5 단백질의 수준과 역 관계를 가진다는 것을 나타낸다. 따라서, 한 구체예에서, 본 발명은 기분 장애를 가진 대상을 확인하기 위해 FAM19A5 단백질 또는 핵산 수준에 더하여 대뇌피질 두께를 측정하는 방법을 포함하며, 감소된 대뇌피질 두께는 대상이 기분 장애를 가진다는 것을 나타낸다.
특정 구체예에서, 잠재적 대상의 대뇌피질 두께는 대조군 대상, 예를 들어 건강한 대상의 대뇌피질 두께와 비교하여 적어도 약 1%, 적어도 약 2%, 적어도 약 3%, 적어도 약 4%, 적어도 약 5%, 적어도 약 6%, 적어도 약 7%, 적어도 약 8%, 적어도 약 9%, 적어도 약 10%, 적어도 약 11%, 적어도 약 12%, 적어도 약 13%, 적어도 약 14%, 적어도 약 15%, 적어도 약 16%, 적어도 약 17%, 적어도 약 18%, 적어도 약 19%, 또는 적어도 약 20% 감소된다.
일부 구체예에서, 본 방법을 위해 측정될 수 있는 대뇌피질 영역은 판개부, 좌측 횡전두극회 및 배측후대상회, 삼각부, 중전두회, 및 우측 설회 및/또는 전횡측두회를 포함한다. 일부 구체예에서, 대뇌피질 두께는 MRI, 예를 들어 선택적으로 당업계에 공지된 강력한 영상처리 기술을 가진 고 해상도 MRI에 의해 측정된다. 다른 구체예에서, 대뇌피질 두께는 3.0 T Siemens Trio 전신 영상 시스템(Siemens Medical Systems, Iselin, 미국 뉴저지)에 의해 측정된다.
한 구체예에서, FAM19A5의 단백질 수준은 면역조직화학, 웨스턴 블롯팅, 방사성면역분석, 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA), 방사성면역확산, 면역침전 분석, 옥터로니 면역확산 방법, 로켓 면역전기영동, 조직 면역염색 방법, 보체 고정 분석, FACS, 또는 단백질 칩에 의해 측정된다. 한 구체예에서, FAM19A5 단백질을 암호화하는 핵산 수준은 RT-PCR, 실시간 중합효소 연쇄반응, 또는 노던 블롯에 의해 측정된다. 일부 구체예에서, 생물학적 샘플은 조직, 세포, 혈액, 혈청, 혈장, 침, 뇌척수액, 유리체내액, 또는 소변을 포함한다.
일부 구체예에서, FAM19A5의 단백질 수준은 항-FAM19A5 항체를 사용한 분석에 의해 측정된다. 다른 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 본 발명에 개시된 항체, 예를 들어 2-13, 3-2, 1-65, 1-28, 또는 이들의 임의의 조합이다.
다른 구체예에서, 본 발명의 진단은 기분 장애에 대한 하나 이상의 공지된 진단 방법과 조합될 수 있다. 한 구체예에서, 기분 장애의 유사한 증상을 야기할 수 있는 다른 중증의 의학적 상태, 예를 들어 갑상선 질환, 비타민 D 결핍, 중추신경계 종양, 두부 외상, 다발성 경화증, 뇌졸중, 매독, 각종 암(췌장암, 전립선암, 유방암), 및/또는 다른 의학적 문제를 배제하기 위해 하나 이상의 진단 시험이 사용될 수 있다. 대상이 다른 중증의 의학적 상태를 갖는 상황에서, 상기 대상은 기분 장애의 치료 없이 나머지 중증의 의학적 상태에 대해서만 치료될 수 있다. 다른 구체예에서, 대상은 기분 장애와 함께 나머지 중증의 의학적 상태에 대해 치료될 수 있다.
다른 구체예에서, 하나 이상의 진단 시험은 신체검사를 포함한다. 신체검사는 우울증에 대한 신체적 원인, 예를 들어 갑상성 기능 저하증, 갑상선 기능 항진증, 쿠싱병을 배제하기 위해 사용될 수 있다.
FAM19A5 단백질 또는 핵산 수준에 더하여, 일부 구체예에서, 본 발명의 방법은 또한 빈혈 및 갑상선, 다른 호르몬, 칼슘 및/또는 비타민 D 수준, 전해질, 간 기능, 독성 스크리닝, 및/또는 신장 기능을 점검하기 위한 혈액 시험을 포함한다. 다른 구체예에서, 상기 시험은 또한 뇌종양과 같은 중증 질병을 확인하기 위한 뇌의 CT 스캔 또는 MRI, 일부 심장 문제를 진단하기 위한 심전도(ECG), 및/또는 뇌의 전기적 활성을 기록하기 위한 뇌파도(EEG)를 포함할 수 있다.
다른 구체예에서, FAM19A5 단백질 및/또는 핵산 수준과 조합하여 사용될 수 있는 하나 이상의 진단 시험은 설문지이다. 예시적인 설문지는 (i) 환자 건강 설문지-9(PHQ-9)(즉, 주요 우울에 대한 현재 진단 기준에 기초한 9-항목 자기-관리 진단 스크리닝 및 중증도 도구); (ii) 벡 우울 척도(BDI)(즉, 우울 증상 및 느낌의 중증도를 측정하는 21-질문 다중-선택 자기-보고서); (iii) 정 자기-평가 우울 척도(즉, 정상에서 심한 우울 상태까지 우울의 수준을 측정하는 간단한 조사); (iv) 역학 연구 센터-우울 척도(CES-D)(즉, 환자가 자신의 기분, 행동 및 지난 주의 성찰을 평가할 수 있는 기관); (v) 해밀튼 우울 평가 척도(HDRS)라고도 하거나 HAM-D로 약기되는 우울에 대한 헤밀튼 평가 척도(HRSD)(즉, 환자의 우울감의 중증도를 평가하기 위해 의사가 사용할 수 있는 다중 선택 설문지), 또는 (i) 내지 (v)의 임의의 조합을 포함한다.
III. 기분 장애의 치료 방법
또한, 본 발명에 개시된 진단에 기초하여 치료가 필요한 대상의 기분 장애(예를 들어, 주요 우울 장애 또는 양극성 장애)를 치료, 제어, 완화 또는 감소시키는 방법이 본 발명에 개시된다. 일부 구체예에서, 기분 장애의 치료는 FAM19A5에 대한 길항제를 대상에게 투여하는 단계를 포함한다. 한 구체예에서, 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원-결합 부분을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 그 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터이다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 FAM19A5 단백질에 결합하고 FAM19A5 활성을 감소시킨다. 특정 구체예에서, 감소된 FAM19A5 활성은 대뇌피질 회의 두께를 정상 수준(예를 들어, 건강한 대상의 상응하는 대뇌피질 회의 두께)까지 증가시킨다.
다른 구체예에서, 기분 장애를 갖는 것으로 진단된 대상은 하나 이상의 항우울제로 치료된다. 본 발명에서 사용된 용어 "항우울제" 또는 "항우울제 치료"는 임상적 우울감을 치료하거나 완화하기 위해 전형적으로 사용되는 정신학적 치료 또는 정신요법의 임의의 제제 또는 임의의 형태를 말한다. 항우울성 제제는, 예를 들어 선택적 세로토닌 재흡수 억제제(예를 들어, 서트랄린 또는 에스시탈로프람), 3환 항우울제(예를 들어, 데시프라민), 및 도파민 재흡수 억제제(예를 들어, 부프로피온)를 포함하는 상이한 부류의 화합물들을 포함한다. 전형적으로, 상이한 부류의 항우울제는 상이한 생화학적 경로를 통해서 치료 효과를 발휘한다.
항우울제의 예는, 제한은 아니지만, 선택적 세로토닌 재흡수 억제제(SSRI), 세로토닌-노르에피네프린 재흡수 억제제(SNRI), 세로토닌 조정제 및 자극제(SMS), 세로토닌 길항제 및 재흡수 억제제(SARI), 노르에피네프린 재흡수 억제제(NRI), 3환 항우울제(TCA), 4환 항우울제(TeCA), 및 모노아민 산화효소 억제제(MAOI)를 포함한다.
SSRI의 예들은 시탈로프람(Celexa®), 에스시탈로프람(Lexapro®, Cipralex®), 파록세틴(Paxil®, Seroxat®), 플루옥세틴(Prozac®), 플루복사민(Luvox®), 서트랄린(Zoloft®, Lustral®), 지멜리딘(Normud®, Zelmid®) 및 인달핀(Upstene®)을 포함한다. SNRI의 예들은 데스벤라팍신(PRISTIQ®), 듀록세틴(CYMBALTA®), 레보밀나시프란(FETZIMA®), 밀나시프란(IXEL®, SAVELLA®), 토페나신(ELAMOL®, TOFACINE®) 및 벤라팍신(EFFEXOR®)을 포함한다. SMS의 예들은 빌라조돈(VIIBRYD®) 및 보르티옥세틴(TRINTELLIX®)을 포함한다. SARI의 예들은 에토페리돈(AXIOMIN®, ETONIN®), 네파조돈(NEFADAR®, SERZONE®) 및 트라조돈(DESYREL®)을 포함한다. NRI의 예들은 레복세틴(EDRONAX®), 빌록사진(VIVALAN®) 및 아토목세틴(STRATTERA®)을 포함한다. TCA의 예들은 아미트립틸린(ELAVIL®, ENDEP®), 아미트립틸리녹시드(AMIOXID®, AMBIVALON®, EQUILIBRIN®), 클로미프라민(ANAFRANIL®), 데시프라민(NORPRAMIN®, PERTOFRANE®), 디벤제핀(NOVERIL®, VICTORIL®), 디메타크린(ISTONIL®), 도술레핀(PROTHIADEN®), 독세핀(ADAPIN®, SINEQUAN®), 이미프라민(TOFRANIL®), 로페프라민(LOMONT®, GAMANIL®), 멜리트라센(DIXERAN®, MELIXERAN®, TRAUSABUN®), 니트록사제핀(SINTAMIL®), 노르트립틸린(PAMELOR®, AVENTYL®), 녹십틸린(AGEDAL®, ELRONON®, NOGEDAL®), 피포페진(AZAFEN®/AZAPHEN®), 프로트립틸린(VIVACTIL®), 트리미프라민(SURMONTIL®), 부트립틸린(EVADYNE®), 데멕십틸린(DEPARON®, TINORAN®), 이미프라미녹시드(IMIPREX®, ELEPSIN®), 이프린돌(PRONDOL®, GALATUR®, TETRAN®), 메타프라민(TIMAXEL®), 프로피제핀(DEPRESSIN®, VAGRAN®), 퀴누프라민(KINUPRIL®, KEVOPRIL®), 오피프라몰(INSIDON®), 티아넵틴(STABLON®), 아미넵틴(SURVECTOR®, MANEON®), 및 티아제심(ALTINIL®)을 포함한다. TeCA의 예들은 아목사핀(ASENDIN®), 마프로틸린(LUDIOMIL®), 미안세린(BOLVIDON®, NORVAL®, TOLVON®), 미르타자핀(REMERON®), 및 세팁틸린(TECIPUL®)을 포함한다. MAOI의 예들은 이소카복사지드(MARPLAN®), 페넬진(NARDIL®), 트라닐시프로민(PARNATE®), 벤목신(NEURALEX®), 이프로클로지드(SURSUM®), 이프로니아지드(MARSILID®), 메바나진(ACTOMOL®), 니알라미드(NIAMID®), 옥타목신(XIMAOL®), 페니프라진(CATRON®), 페녹시프로파진(DRAZINE®), 피브히드라진(TERSAVID®), 사프라진(SAFRA®), 셀레길린(ELDEPRYL®, ZELAPAR®, EMSAM®), 카록사존(SURODIL®, TIMOSTENIL®), 메트랄린돌(INKAZAN®), 모클로베미드(AURORIX®, MANERIX®), 피르린돌(PIRAZIDOL®), 톨록사톤(HUMORYL®), 에프로베미드(BEFOL®), 및 미나프린(BRANTUR®, CANTOR®)을 포함한다.
일부 구체예에서, 기분 장애를 갖는 것으로 진단된 대상은 하나 이상의 항정신병성 제제로 치료된다. 본 발명에서 사용된 용어 "항정신병제" 또는 "항정신병성 제제"(신경이완제 또는 주요 진정제라고도 함)는 정신병(예를 들어, 망상, 환각, 편집증 또는 정리되지 않은 생각)을 관리하기 위해 사용되는 의약의 부류를 말한다. 항정신병제는 전형적인 것(제1세대 또는 종래의)과 비전형적인 것(제2세대)으로 분류될 수 있다.
전형적 항정신병제의 예들은 클로르프로마진(THORAZINE®, LARGACTIL®), 클로르프로틱센(TARACTAN®), 레보메프로마진(NOZINAN®, LEVOPROME®), 메조리다진(SERENTIL®), 페리시아진(NEULEPTIL®), 프로마진(SPARINE®), 티오리다진(MELLARIL®), 록사핀(LOXITANE®), 몰린돈(MOBAN®), 퍼페나진(TRILAFON®), 티오틱센(NAVANE®), 드로페리돌(INAPSINE®), 플루펜틱솔(DEPIXOL®, FLUANXOL®), 플루페나진(PROLIXIN®), 할로페리돌(HALDOL®), 피모지드(ORAP®), 프로클로르페라진(COMPAZINE®), 티오프로페라진(MAJEPTIL®), 트리플루오페라진(STELAZINE®), 및 주클로펜틱솔(CLOPIXOL®)을 포함한다.
비전형적 항정신병제의 예들은 아미술프리드(SOLIAN®), 루라시돈(LATUDA®), 퀴티아핀(SEROQUEL®), 리스페리돈(RISPERDAL®), 올란자핀(ZYPREXA®), 아리핍라졸(ABILIFY®), 지프라시돈(GEODON®), 피마반세린(NUPLAZID®), 클로자핀(CLOZARIL®), 팔리페리돈(INVEGA®), 아세나핀(SAPHRIS®), 브렉스핍라졸(REXULTI®), 카리프라진(VRAYLAR®), 및 일로페리돈(FANAPT®)을 포함한다.
다른 구체예에서, 본 발명에 따라서 기분 장애를 갖는 것으로 진단된 대상은 정신요법으로 치료된다. 용어 "정신요법"은 환자와 치료사 간의 소통을 수반하는 다양한 수단 중 어느 것을 포함한다. 항우울제 치료는 또한 항우울성 제제와 정신요법의 조합을 포함할 수 있다.
한 구체예에서, 본 방법에서 치료되는 대상은 래트 또는 마우스와 같은 비-인간 동물이다. 한 구체예에서, 본 방법에서 치료되는 대상은 인간이다.
일부 구체예에서, FAM19A5 길항제는 정맥내, 경구, 비경구, 척추강내, 뇌실내, 폐, 근육내, 피하, 유리체내, 또는 심실내 경로로 대상에게 투여된다. 예를 들어 본 발명에서 설명된, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원-결합 부분의 투여를 위한, 투약량은 약 0.0001 내지 100 mg/kg의 범위이다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원-결합 부분, 또는 그것의 조성물은 기분 장애를 치료하기 위해 하나 이상의 추가 제제와 조합하여 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 추가 제제는 선택적 세로토닌 재흡수 억제제(SSRI), 세로토닌-노르에피네프린 재흡수 억제제(SNRI), 세로토닌 조정제 및 자극제(SMS), 세로토닌 길항제 및 재흡수 억제제(SARI), 노르에피네프린 재흡수 억제제(NRI), 3환 항우울제(TCA), 4환 항우울제(TeCA), 모노아민 산화효소 억제제(MAOI), 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 항우울성 제제이다. 일부 구체예에서, 추가 제제는 항정신병성 제제(예를 들어, 전형적 또는 비전형적)이다. 항우울성 제제 및 항정신병성 제제의 예들은 본 발명에 개시되며 당업계에도 공지되어 있다. 하나 이상의 추가 치료 약물의 용량 및 투여는 당업계에 공지이며, 예를 들어 각 약물의 제품 라벨에 지시된다.
IV. FAM19A5 길항제
하나 이상의 FAM19A5 길항제가 기분 장애를 가진 대상을 진단하거나 상기 대상을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 한 구체예에서, FAM19A5 길항제는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, miRNA, dsRNA, 앱타머, FAM19A5를 특이적으로 표적화하는 PNA(펩타이드 핵산), 또는 이들을 포함하는 벡터이다. 다른 구체예에서, FAM19A5 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 그 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터이다.
본 발명에 개시된 방법에서 유용한 항체는 특정한 기능적 특징 또는 특성을 특징으로 하는 모노클로날 항체를 포함한다. 예를 들어, 항체는 가용성 FAM19A5 및 막 결합 FAM19A5를 포함하는 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합한다. 가용성 및/또는 막 결합 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 것에 더하여, 본 발명에서 설명된 항체는 또한 (a) 10 nM 이하의 KD로 가용성 인간 FAM19A5에 결합하거나; (b) 10 nM 이하의 KD로 막 결합 인간 FAM19A5에 결합하거나; 또는 (a)와 (b)가 둘 다 가능하다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은, 예를 들어 10-7 M 이하, 10-8 M 이하, 10-9 M(1 nM) 이하, 10-10 M(0.1 nM) 이하, 10-11 M 이하, 또는 10-12 M(1 pM) 이하, 예를 들어 10-12 M 내지 10-7 M, 10-11 M 내지 10-7 M, 10-10 M 내지 10-7 M, 또는 10-9 M 내지 10-7 M, 예를 들어 10-12 M, 5 X 10-12 M, 10-11 M, 5 X 10-11 M, 10-10 M, 5 X 10-10 M, 10-9 M, 5 X 10-9 M, 10-8 M, 5 X 10-8 M, 10-7 M, 또는 5 X 10-7 M의 KD의 높은 친화성으로 가용성 인간 FAM19A5 또는 막-결합 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합한다. 다양한 종의 인간 FAM19A5에 대한 항체의 결합 능력을 평가하는 표준 분석은 본 분야에 공지되어 있으며, 예를 들어 ELISA, 웨스턴 블롯 및 RIA를 포함한다. 적합한 분석들이 실시예에 상세히 설명된다. 항체의 결합 동력학(예를 들어, 결합 친화성)이 또한 ELISA, BIACORE™ 분석 또는 KINEXA®과 같은 본 분야에 공지된 표준 분석에 의해 평가될 수 있다. FAM19A5의 기능적 특성(예를 들어, 리간드 결합)에 대한 항체의 효과를 평가하는 분석이 아래 및 실시예에 더 상세히 설명된다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은, 예를 들어 ELISA에 의해 결정되었을 때, 10-7 M 이하, 10-8 M(10 nM) 이하, 10-9 M(1 nM) 이하, 10-10 M 이하, 10-12 M 내지 10-7 M, 10-11 M 내지 10-7 M, 10-10 M 내지 10-7 M, 10-9 M 내지 10-7 M, 또는 10-8 M 내지 10-7 M의 KD로 가용성 인간 FAM19A5와 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 10 nM 이하, 예를 들어 0.1 내지 10 nM, 0.1 내지 5 nM, 0.1 내지 1 nM, 0.5 내지 10 nM, 0.5 내지 5 nM, 0.5 내지 1 nM, 1 내지 10 nM, 1 내지 5 nM, 또는 5 내지 10 nM의 KD로 가용성 FAM19A5와 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 ELISA에 의해 결정되었을 때, 약 1 pM, 2 pM, 3 pM, 4 pM, 5 pM, 6 pM, 7 pM, 8 pM, 9 pM, 10 pM, 20 pM, 30 pM, 40 pM, 50 pM, 60 pM, 70 pM, 80 pM, 90 pM, 100 pM, 200 pM, 300 pM, 400 pM, 500 pM, 600 pM, 700 pM, 800 pM, 또는 900 pM, 또는 약 1 nM, 2 nM, 3 nM, 4 nM, 5 nM, 6 nM, 7 nM, 8 nM, 또는 9 nM, 또는 약 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 또는 90 nM의 KD로 가용성 인간 FAM19A5와 특이적으로 결합한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은, 예를 들어 ELISA에 의해 결정되었을 때, 10-7 M 이하, 10-8 M(10 nM) 이하, 10-9 M(1 nM) 이하, 10-10 M 이하, 10-12 M 내지 10-7 M, 10-11 M 내지 10-7 M, 10-10 M 내지 10-7 M, 10-9 M 내지 10-7 M, 또는 10-8 M 내지 10-7 M의 KD로 막-결합 인간 FAM19A5와 결합한다. 특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은, ELISA에 의해 결정되었을 때, 10 nM 이하, 예를 들어 0.1 내지 10 nM, 0.1 내지 5 nM, 0.1 내지 1 nM, 0.5 내지 10 nM, 0.5 내지 5 nM, 0.5 내지 1 nM, 1 내지 10 nM, 1 내지 5 nM, 또는 5 내지 10 nM의 KD로 막 결합 인간 FAM19A5와 특이적으로 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 ELISA에 의해 결정되었을 때, 약 1 pM, 2 pM, 3 pM, 4 pM, 5 pM, 6 pM, 7 pM, 8 pM, 9 pM, 10 pM, 20 pM, 30 pM, 40 pM, 50 pM, 60 pM, 70 pM, 80 pM, 90 pM, 100 pM, 200 pM, 300 pM, 400 pM, 500 pM, 600 pM, 700 pM, 800 pM, 또는 900 pM, 또는 약 1 nM, 2 nM, 3 nM, 4 nM, 5 nM, 6 nM, 7 nM, 8 nM, 또는 9 nM, 또는 약 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 또는 90 nM의 KD로 막 결합 인간 FAM19A5와 결합한다.
특정 구체예에서, 본 발명에 개시된 방법에 적합한 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 인간 FAM19A5 에피토프에 대한 결합에 대해 본 발명에 개시된 CDR 또는 가변 영역을 포함하는 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편과 교차-경쟁한다(또는 결합을 억제한다).
특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 기준 항체의 결합을 억제하며, (i) 기준 항체의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, 및 SQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, 및 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하거나; (ii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하거나; (iii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하거나; (iv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하거나; (v) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 89의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 90의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 91의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 92의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 93의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 94의 아미노산 서열을 포함하거나; (vi) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 95의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 96의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 98의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 100의 아미노산 서열을 포함하거나; (vii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 101의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 103의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 104의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 105의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하거나; (viii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 108의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 109의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 110의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 111의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 112의 아미노산 서열을 포함하거나; (ix) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 113의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 114의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 115의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 116의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 118의 아미노산 서열을 포함하거나; (x) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 119의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 120의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 121의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 122의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 123의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 124의 아미노산 서열을 포함하거나; (xi) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 125의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 126의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 127의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 128의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 129의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 130의 아미노산 서열을 포함하거나; (xii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 131의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 132의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 133의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 135의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열을 포함하거나; (xiii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 138의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 139의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 140의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 141의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 142의 아미노산 서열을 포함하거나; (xiv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 143의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 144의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 145의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 147의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 148의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (xv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 149의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 150의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 151의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 152의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 153의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 기준 항체는 (a) 각각 SEQ ID NO: 35 및 39를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (b) 각각 SEQ ID NO: 36 및 40을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (c) 각각 SEQ ID NO: 37 및 41을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (d) 각각 SEQ ID NO: 38 및 42를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (e) 각각 SEQ ID NO: 155 및 166을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (f) 각각 SEQ ID NO: 156 및 167을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (g) 각각 SEQ ID NO: 157 및 168을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (h) 각각 SEQ ID NO: 158 및 169를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (i) 각각 SEQ ID NO: 159 및 170을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (j) 각각 SEQ ID NO: 160 및 171을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (k) 각각 SEQ ID NO: 161 및 172를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (l) 각각 SEQ ID NO: 162 및 173을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (m) 각각 SEQ ID NO: 163 및 174를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (n) 각각 SEQ ID NO: 164 및 175를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; 또는 (o) 각각 SEQ ID NO: 165 및 176을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 이러한 기준 항체의 인간 FAM19A5에 대한 결합을 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90%까지 또는 100%까지 억제한다. 경쟁 항체는 동일한 에피토프, 중첩 에피토프 또는 인접 에피토프(예를 들어, 입체 장해에 의해 증명된 대로)에 결합한다. 표적에 대한 결합에 대해 2개의 항체가 서로 경쟁하는지의 여부는 RIA 및 EIA와 같은 당업계에 공지된 경쟁 실험을 사용하여 결정될 수 있다.
특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 본 발명에 개시된 기준 항체와 동일한 FAM19A5 에피토프에 결합하며, (i) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하거나; (ii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하거나; (iii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하거나; (iv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하거나; (v) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 89의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 90의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 91의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 92의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 93의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 94의 아미노산 서열을 포함하거나; (vi) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 95의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 96의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 98의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 100의 아미노산 서열을 포함하거나; (vii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 101의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 103의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 104의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 105의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하거나; (viii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 108의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 109의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 110의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 111의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 112의 아미노산 서열을 포함하거나; (ix) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 113의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 114의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 115의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 116의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 118의 아미노산 서열을 포함하거나; (x) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 119의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 120의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 121의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 122의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 123의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 124의 아미노산 서열을 포함하거나; (xi) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 125의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 126의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 127의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 128의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 129의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 130의 아미노산 서열을 포함하거나; (xii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 131의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 132의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 133의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 135의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열을 포함하거나; (xiii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 138의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 139의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 140의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 141의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 142의 아미노산 서열을 포함하거나; (xiv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 143의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 144의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 145의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 147의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 148의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (xv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 149의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 150의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 151의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 152의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 153의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 기준 항체는 (a) 각각 SEQ ID NO: 35 및 39를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (b) 각각 SEQ ID NO: 36 및 40을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (c) 각각 SEQ ID NO: 37 및 41을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (d) 각각 SEQ ID NO: 38 및 42를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (e) 각각 SEQ ID NO: 155 및 166을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (f) 각각 SEQ ID NO: 156 및 167을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (g) 각각 SEQ ID NO: 157 및 168을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (h) 각각 SEQ ID NO: 158 및 169를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (i) 각각 SEQ ID NO: 159 및 170을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (j) 각각 SEQ ID NO: 160 및 171을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (k) 각각 SEQ ID NO: 161 및 172를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (l) 각각 SEQ ID NO: 162 및 173을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (m) 각각 SEQ ID NO: 163 및 174를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (n) 각각 SEQ ID NO: 164 및 175를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; 또는 (o) 각각 SEQ ID NO: 165 및 176을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
2개의 항체가 동일한 에피토프에 결합하는지 결정하는 기술은, 예를 들어 에피토프 맵핑 방법, 예컨대 에피토프의 원자 분해능을 제공하는 항원:항체 복합체 결정의 엑스선 분석 및 수소/중수소 교환 질량분광법(HDX-MS), 항원 단편 또는 항원의 돌연변이된 변형에 대한 항체의 결합을 모니터링하는 방법(이 경우 항원 서열 내에서 아미노산 잔기의 변형으로 인한 결합의 손실이 에피토프 성분의 징표로 주로 간주됨), 에피토프 맵핑을 위한 컴퓨터 조합 방법을 포함한다.
본 발명에 개시된 방법에서 유용할 수 있는 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은, 예를 들어 인간 FAM19A5의 단편에 대한 항체의 결합에 의해 결정되는 바와 같이, 성숙한 인간 FAM19A5의 적어도 하나의 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 TLDRDSSQPRRTIARQTARC(SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 잔기 42 내지 61)의 아미노산 서열 내에 위치된 단편, 예를 들어 SEQ ID NO: 6의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 에피토프에 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 잔기 46 내지 51(즉, DSSQPR)에 상응하는 하나 이상의 아미노산에서, 예를 들어 아미노산 잔기 46, 50 및 52(즉, D---P-R), 예를 들어 아미노산 잔기 46, 47, 48 및 50(즉, DSS-P)에서 SEQ ID NO: 6에 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 CDMLPCLEGEGCDLLINRSG(SEQ ID NO: 9 또는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 90 내지 109)의 아미노산 서열 내에 위치된 단편, 예를 들어 SEQ ID NO: 9의 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 에피토프에 결합한다. 특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 4의 하나 이상의 아미노산 잔기 99 내지 107(즉, EGCDLLINR)에서, 예를 들어 아미노산 잔기 102, 103, 105, 및 107(즉, DL-I-R), 예를 들어 아미노산 잔기 99, 100, 102, 103, 105, 및 107(즉, EG-DL-I-R), 예를 들어 아미노산 잔기 99, 100, 및 107(즉, EG------R)에서 SEQ ID NO: 9에 결합한다.
일부 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 SEQ ID NO: 6과 적어도 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 SEQ ID NO: 9와 적어도 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은, SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10인 인간 FAM19A5 에피토프에만, 또는 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10의 아미노산 서열 내에 위치된 단편, 예를 들어 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 에피토프에 결합한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 6 또는 그것의 단편과 자생 입체형태(즉, 비변성) 상태로 결합한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 9 또는 그것의 단편과 자생 입체형태(즉 비변성) 상태로 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 글리코실화 및 비글리코실화 인간 FAM19A5에 둘 다 결합한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 하나 이상의 추가의 FAM19A5 에피토프에 더 결합한다. 따라서, 특정한 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 6의 에피토프와 추가의 에피토프 또는 SEQ ID NO: 9의 에피토프와 추가의 에피토프에 결합한다. 다른 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 5의 에피토프, SEQ ID NO: 9의 에피토프, 및 추가의 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 6의 에피토프, SEQ ID NO: 10의 에피토프, 및 추가의 에피토프에 결합한다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 추가의 FAM19A5 에피토프는 QLAAGTCEIVTLDR(SEQ ID NO: 5, 에피토프 F1), TLDRDSSQPRRTIARQTARC(SEQ ID NO: 6, 에피토프 F2), TARCACRKGQIAGTTRARPA(SEQ ID NO: 7, 에피토프 F3), ARPACVDARIIKTKQWCDML(SEQ ID NO: 8, 에피토프 F4), CDMLPCLEGEGCDLLINRSG(SEQ ID NO: 9, 에피토프 F5), 또는 NRSGWTCTQPGGRIKTTTVS(SEQ ID NO: 10, 에피토프 F6), 또는 SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, 또는 이들의 임의의 조합의 아미노산 서열 내에 위치된 단편으로부터 선택된다. SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, 및 SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, 또는 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열 내에 위치된 단편은 SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, 또는 SEQ ID NO: 10 중 어느 것의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 단편을 포함한다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 추가의 FAM19A5 에피토프는 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10, 또는 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10의 아미노산 서열 내에 위치된 단편, 예를 들어 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 단편, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 하나 이상의 추가의 에피토프에 자생 입체형태(즉, 비변성) 상태로 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은 하나 이상의 추가의 FAM19A5 에피토프의 글리코실화 및 비글리코실화 형태에 모두 결합한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 EP2, EP4, 및/또는 EP8로서 확인된 적어도 하나의 FAM19A5 에피토프에 결합하며, EP2는 아미노산 DSSQP(SEQ ID NO: 66)을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나, 또는 구성되고, EP4는 아미노산 ARCACRK(SEQ ID NO: 68)을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나, 또는 구성되고, EP8은 아미노산 TCTQPGGR(SEQ ID NO: 72)을 포함하거나, 본질적으로 구성되거나, 또는 구성된다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 EP2, EP4, 또는 EP8과 적어도 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 단지 EP2에만 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 EP4와 EP8에 결합한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분은 EP6, EP7 또는 EP8로서 확인된 적어도 하나의 FAM19A5 에피토프에 결합하며, EP6은 아미노산 KTKQWCDML(SEQ ID NO: 70)을 포함하고, EP7은 아미노산 GCDLLINR(SEQ ID NO: 71)을 포함하고, EP8은 아미노산 TCTQPGGR(SEQ ID NO: 72)을 포함한다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 EP6, EP7 또는 EP8과 적어도 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분은 단지 EP6, EP7, 또는 EP8에만 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분은 EP6, EP7, 및 EP8에 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분은 EP7 및 EP8에 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분은 EP7에 결합한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, 및 이들의 임의의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 FAM19A5 에피토프에 결합한다.
일부 구체예에서, 예를 들어 면역분석(예를 들어, ELISA), 표면 플라즈몬 공명, 또는 역학적 배제 분석에 의해 측정되었을 때, FAM19A 패밀리의 다른 단백질보다 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 더 높은 친화성으로 FAM19A5(예를 들어, 인간 FAM19A5)와 결합하는 항체 또는 그것의 항원 결합 단편이 본 발명에서 제공된다. 특정 구체예에서, 항-FAM-19A5 항체 또는 그것의 항원 결합 단편은, 예를 들어 면역분석에 의해 측정되었을 때, FAM19A 패밀리의 다른 단백질과 교차 반응성 없이 FAM19A5(예를 들어, 인간 FAM19A5)에 결합한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 자생 항체가 아니거나 또는 자연 발생 항체가 아니다. 예를 들어, 항-FAM19A5 항체는 더 많은, 더 적은, 또는 상이한 타입의 번역 후 변형을 가짐으로써, 자연 발생인 항체의 것과는 상이한 번역 후 변형을 가진다.
V. 전형적인 항-FAM19A5 항체
본 발명에 개시된 방법에서 사용될 수 있는 특정 항체는 본 발명에 개시된 CDR 및/또는 가변 영역 서열을 가진 항체, 예를 들어 모노클로날 항체, 및 이들의 가변 영역 또는 CDR 서열과 적어도 80% 동일성(예를 들어, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성)을 가진 항체이다. 본 발명의 상이한 항-FAM19A5 항체의 VH 및 VL 아미노산 서열이 표 4 및 5에 각각 제공된다.
가변 중쇄 CDR 아미노산 서열
항체 VH-CDR1 VH-CDR2 VH-CDR3
항-FAM19A5
("2-13")		 SHGMF
(SEQ ID NO: 11)		 EITNDGSGTNYGSAVKG
(SEQ ID NO: 12)		 STYECPGGFSCWGDTGQIDA
(SEQ ID NO: 13)
항-FAM19A5
("3-2")		 SFNMF
(SEQ ID NO: 14)		 QISSSGSSTNYAPAVRG
(SEQ ID NO: 15)		 SSYDCPYGHCSSGVDSAGEIDA
(SEQ ID NO: 16)
항-FAM19A5
("1-65")		 SYQMG
(SEQ ID NO: 17)		 VINKSGSDTS
(SEQ ID NO: 18)		 GSASYITAATIDA
(SEQ ID NO: 19)
항-FAM19A5
("1-28")		 GFDFSDYG
(SEQ ID NO: 20)		 IRSDGSNP
(SEQ ID NO: 21)		 AKDGNGYCALDAYRSGGYSCGVYPGSIDA
(SEQ ID NO: 22)
항-FAM19A5
("P2-C12")		 TYAVT
(SEQ ID NO: 89)		 YINWRGGTSYANWAKG
(SEQ ID NO: 90)		 DASSGAAFGSYGMDP
(SEQ ID NO: 91)
항-FAM19A5
("13B4")		 SSNWWS
(SEQ ID NO: 95)		 EIYHGGTTNYNPSLKG
(SEQ ID NO: 96)		 WQLVGGLDV
(SEQ ID NO: 97)
항-FAM19A5
("13F7")		 GYSWT
(SEQ ID NO: 101)		 EISHFGSANYNPSLKS
(SEQ ID NO: 102)		 ALRGTYSRFYYGMDV
(SEQ ID NO: 103)
항-FAM19A5
("15A9")		 SYYWS
(SEQ ID NO: 107)		 YIYPSGSTNYNPSLKS
(SEQ ID NO: 108)		 VNPFGYYYAMDV
(SEQ ID NO: 109)
항-FAM19A5
("P1-A03")		 SDYMS
(SEQ ID NO: 113)		 IIYPSTTTYYASWAKG
(SEQ ID NO: 114)		 GSNWSSGMNL
(SEQ ID NO: 115)
항-FAM19A5
("P1-A08")		 TYYMS
(SEQ ID NO: 119)		 IVYPSGTTYYANWAKG
(SEQ ID NO: 120)		 GDSFGYGL
(SEQ ID NO: 121)
항-FAM19A5
("P1-F02")		 NYYMG
(SEQ ID NO: 125)		 IIYASGSTYYASWAKG
(SEQ ID NO: 126)		 IDIGVGDYGWAYDRLDL
(SEQ ID NO: 127)
항-FAM19A5
("P2-A01")		 GYYMS
(SEQ ID NO: 131)		 IIYPSGSTDYASWAKG
(SEQ ID NO: 132)		 VAGYVGYGYETFFDI
(SEQ ID NO: 133)
항-FAM19A5
("P2-A03")		 NYDMS
(SEQ ID NO: 137)		 FMDTDGSAYYATWAKG
(SEQ ID NO: 138)		 RGSSYYGGIDI
(SEQ ID NO: 139)
항-FAM19A5
("P2-F07")		 SYYMN
(SEQ ID NO: 143)		 IIYPSGTTYYAGWAKG
(SEQ ID NO: 144)		 TVSGYFDI
(SEQ ID NO: 145)
항-FAM19A5
("P2-F11")		 SYGVS
(SEQ ID NO: 149)		 YIANNYNPHYASWAKG
(SEQ ID NO: 150)		 DNYGMDP
(SEQ ID NO: 151)
가변 경쇄 CDR 아미노산 서열
항체 VL-CDR1 VL-CDR2 VL-CDR3
항-FAM19A5
("2-13")		 SGGSYSYG
(SEQ ID NO: 23)		 WDDERPS
(SEQ ID NO: 24)		 GTEDISGTAGV
(SEQ ID NO: 25)
항-FAM19A5
("3-2")		 SGGGSYAGSYYYG
(SEQ ID NO: 26)		 ESNKRPS
(SEQ ID NO: 27)		 GSWDSSNGGI
(SEQ ID NO: 28)
항-FAM19A5
("1-65")		 SGGGSSGYGYG
(SEQ ID NO: 29)		 WNDKRPS
(SEQ ID NO: 30)		 GNDDYSSDSGYVGV
(SEQ ID NO: 31)
항-FAM19A5
("1-28")		 GYGYG
(SEQ ID NO: 32)		 QND
(SEQ ID NO: 33)		 GSEDSSTLAGI
(SEQ ID NO: 34)
항-FAM19A5
("P2-C12")		 QASQSISSYLS
(SEQ ID NO: 92)		 EASKLAS
(SEQ ID NO: 93)		 QQGYSSTNVWNA
(SEQ ID NO: 94)
항-FAM19A5
("13B4")		 SGDKLGNVYAS
(SEQ ID NO: 98)		 QDNKRPS
(SEQ ID NO: 99)		 QAWDSSTAV
(SEQ ID NO: 100)
항-FAM19A5
("13F7")		 RSSQSLLHSNGYNYLD
(SEQ ID NO: 104)		 LGSNRAS
(SEQ ID NO: 105)		 MQARQTPLT
(SEQ ID NO: 106)
항-FAM19A5
("15A9")		 RASQSISTSLN
(SEQ ID NO: 110)		 GASTLQS
(SEQ ID NO: 111)		 QESASIPRT
(SEQ ID NO: 112)
항-FAM19A5
("P1-A03")		 LASEDIYSGIS
(SEQ ID NO: 116)		 GASNLES
(SEQ ID NO: 117)		 LGGYSYSSTGLT
(SEQ ID NO: 118)
항-FAM19A5
("P1-A08")		 TADTLSRSYAS
(SEQ ID NO: 122)		 RDTSRPS
(SEQ ID NO: 123)		 ATSDGSGSNYQYV
(SEQ ID NO: 124)
항-FAM19A5
("P1-F02")		 LASEDIYSGIS
(SEQ ID NO: 128		 GASNLES
(SEQ ID NO: 129)		 LGGYSYSSIT
(SEQ ID NO: 130)
항-FAM19A5
("P2-A01")		 LASEDIYSGIS
(SEQ ID NO: 134)		 GASNLES
(SEQ ID NO: 135)		 LGGVTYSSTGTHLT
(SEQ ID NO: 136)
항-FAM19A5
("P2-A03")		 QASQSIGGNLA
(SEQ ID NO: 140)		 RASTLAS
(SEQ ID NO: 141)		 QSPAYDPAAYVGNA
(SEQ ID NO: 142)
항-FAM19A5
("P2-F07")		 LASEDIYSALA
(SEQ ID NO: 146)		 GTSNLES
(SEQ ID NO: 147)		 QGYSSYPLT
(SEQ ID NO: 148)
항-FAM19A5
("P2-F11")		 QASQSVYNNKNLA
(SEQ ID NO: 152)		 AASTLAS
(SEQ ID NO: 153)		 QGEFSCSSADCNA
(SEQ ID NO: 154)
가변 중쇄 아미노산 서열
항체 VH 아미노산 서열 (SEQ ID NO)
항-FAM19A5
("2-13")		 AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSHGMFWVRQTPGKGLEYVAEITNDGSGTNYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYFCARSTYECPGGFSCWGDTGQIDAWGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 35)
항-FAM19A5
("3-2")		 AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEYVAQISSSGSSTNYAPAVRGRATISRDNGQSTVRLQLNNPGAEDTGTYYCAKSSYDCPYGHCSSGVDSAGEIDAWGHGTEVIVSS
(SEQ ID NO: 36)
항-FAM19A5
("1-65")		 AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSYQMGWVRQAPGKGLEWVGVINKSGSDTSYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYFCAKGSASYITAATIDAWGHGTEVIVSS (SEQ ID NO: 37)
항-FAM19A5
("1-28")		 AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFDFSDYGMGWVRQAPGKGLEWVAAIRSDGSNPSYGSAVKGRATISKDNGRSTVRLQLNNLRAEDTATYYCAKDGNGYCALDAYRSGGYSCGVYPGSIDAWGHGTEVIVSS
(SEQ ID NO: 38)
항-FAM19A5
("P2-C12")		 QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSTYAVTWVRQAPGKGLEWIGYINWRGGTSYANWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARDASSGAAFGSYGMDPWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 155)
항-FAM19A5
("13B4")		 QVQLQESGPGLVKPSGTLSLNCAVSGGSISSSNWWSWVRQPPGKGLEWIGEIYHGGTTNYNPSLKGRVTMSVDKTKNQFSLRLSSVTAVDTAVYYCARWQLVGGLDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 156)
항-FAM19A5
("13F7")		 QVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAINAESFNGYSWTWIRQTPGKGLEWIGEISHFGSANYNPSLKSRATISADKSKNQFSLKLTSVTAVDTAVYYCARALRGTYSRFYYGMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 157)
항-FAM19A5
("15A9")		 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYPSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLNLKSVTAVDTAVYYCARVNPFGYYYAMDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 158)
항-FAM19A5
("P1-A03")		 QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSDYMSWVRQAPGEGLEWIGIIYPSTTTYYASWAKGRFTISKTSSTTVELKMTSLTTEDTATYFCARGSNWSSGMNLWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
항-FAM19A5
("P1-A08")		 QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSTYYMSWVRQAPGKGLEWIGIVYPSGTTYYANWAKGRFTISTASTTVDLMITSPTTEDTATYFCARGDSFGYGLWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 160)
항-FAM19A5
("P1-F02")		 QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYMGWVRQAPGEGLEWIGIIYASGSTYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARIDIGVGDYGWAYDRLDLWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 161)
항-FAM19A5
("P2-A01")		 QEQLVESGGRLVTPGTPLTLSCTASGFFLSGYYMSWVRQAPGKGLEWIGIIYPSGSTDYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITTPTTEDTATYFCARVAGYVGYGYETFFDIWGPGTLVTVSL (SEQ ID NO: 162)
항-FAM19A5
("P2-A03")		 QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLNNYDMSWVRQAPGKGLEYIGFMDTDGSAYYATWAKGRFTISRTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARRGSSYYGGIDIWGPGTPVTVSL (SEQ ID NO: 163)
항-FAM19A5
("P2-F07")		 QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSSYYMNWVRQAPGKGLEWIGIIYPSGTTYYAGWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTSEDTATYFCARTVSGYFDIWGPGTLVTVSL (SEQ ID NO: 164)
항-FAM19A5
("P2-F11")		 QEQLVESGGRLVTPGTTLTLTCTVSGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEWIGYIANNYNPHYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARDNYGMDPWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 165)
가변 경쇄 아미노산 서열
항체 VL 아미노산 서열 (SEQ ID NO)
항-FAM19A5
("2-13")		 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGSYSYGWFQQKSPGSALVTVIYWDDERPSDIPSRFSGALSGSTNTLTITGVQADDEAVYFCGTEDISGTAGVFGAGTTLTVL (SEQ ID NO: 39)
항-FAM19A5
("3-2")		 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYAGSYYYGWYQQKAPGSAPVTLIYESNKRPSDIPSRFSGSTSGSTATLTITGVQADDEAIYYCGSWDSSNGGIFGAGTTLTVL (SEQ ID NO: 40)
항-FAM19A5
("1-65")		 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSSGYGYGWYQQKSPSSAPLTVIYWNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTHTLTITGVQAEDEAVYFCGNDDYSSDSGYVGVFGAGTTLTVL (SEQ ID NO: 41)
항-FAM19A5
("1-28")		 ALTQPSSVSANLEGTVEITCSGSGYGYGWYQQKSPGSAPVTVIYQNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVQVEDEAVYYCGSEDSSTLAGIFGAGTTLTVL (SEQ ID NO: 42)
항-FAM19A5
("P2-C12")		 ELDMTQTPSSVSAAVGGTVTIKCQASQSISSYLSWYQQKPGQPPKLLIYEASKLASGVPSRFSGSGYGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSSTNVWNAFGGGTNVEIK (SEQ ID NO: 166)
항-FAM19A5
("13B4")		 SYELTQPLSVSVSPGQTASITCSGDKLGNVYASWYQQKPGQSPTLVIYQDNKRPSGIPERFSGSNSGKTATLTISGTQALDEADYYCQAWDSSTAVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 167)
항-FAM19A5
("13F7")		 DIVMTQTPLSLPVAPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYVQKPGQPPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQARQTPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 168)
항-FAM19A5
("15A9")		 DIQMTQSPSSLSASVGDRITISCRASQSISTSLNWYQQTPGKAPRLLIYGASTLQSGVPSRFSGGGSGTDFSLTITSLQPEDFATYYCQESASIPRTFGQGTKLDIK (SEQ ID NO: 169)
항-FAM19A5
("P1-A03")		 ELVMTQTPPSLSASVGETVRIRCLASEDIYSGISWYQQKPEKPPTLLISGASNLESGVPPRFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDAATYYCLGGYSYSSTGLTFGAGTNVEIK (SEQ ID NO: 170)
항-FAM19A5
("P1-A08")		 ELVLTQSPSVQVNLGQTVSLTCTADTLSRSYASWYQQKPGQAPVLLIYRDTSRPSGVPDRFSGSSSGNTATLTISGAQAGDEADYYCATSDGSGSNYQYVFGGGTQLTVT (SEQ ID NO: 171)
항-FAM19A5
("P1-F02")		 ELDMTQTPPSLSASVGETVRIRCLASEDIYSGISWYQQKPGKPPTLLIYGASNLESGVPPRFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDAATYYCLGGYSYSSITFGAGTNVEIK (SEQ ID NO: 172)
항-FAM19A5
("P2-A01")		 ELVMTQTPPSLSASVGETVRIRCLASEDIYSGISWYQQKPGKPPTLLIYGASNLESGVPPRFSGSGSGSDYTLTIGGVQAEDAATYYCLGGVTYSSTGTHLTFGAGTNVEIK (SEQ ID NO: 173)
항-FAM19A5
("P2-A03")		 ELDLTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQSIGGNLAWYQQKPGQPPKLLIYRASTLASGVPSRFKGSGSGTDFTLTISDLECADAATYYCQSPAYDPAAYVGNAFGGGTELEIL (SEQ ID NO: 174)
항-FAM19A5
("P2-F07")		 ELDLTQTPPSLSASVGGTVTINCLASEDIYSALAWYQQKPGKPPTLLISGTSNLESGVPPRFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDAATYFCQGYSSYPLTFGAGTNVEIK (SEQ ID NO: 175)
항-FAM19A5
("P2-F11")		 ELDLTQTPSSVSAAVGGTVTINCQASQSVYNNKNLAWYQQKPGQPPKLLIYAASTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCQGEFSCSSADCNAFGGGTELEIL (SEQ ID NO: 176)
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 35-38 또는 155-165의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구체예에서, 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 35-38 또는 155-165로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역의 CDR을 포함한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 39-42 또는 166-176의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구체예에서, 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 39-42 또는 166-176로 구성되는 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역의 CDR을 포함한다.
특정 구체예에서, 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 35-38 또는 155-165로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역의 CDR 및 SEQ ID NO: 39-42 또는 166-176으로 구성되는 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역의 CDR을 포함한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, (i) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 40의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 41의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 42의 아미노산 서열을 포함하고; (v) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 155의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 166의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 156의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 167의 아미노산 서열을 포함하고; (vii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 157의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 168의 아미노산 서열을 포함하고; (viii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 158의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 169의 아미노산 서열을 포함하고; (ix) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 159의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 170의 아미노산 서열을 포함하고; (x) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 160의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 171의 아미노산 서열을 포함하고; (xi) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 172의 아미노산 서열을 포함하고; (xii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 162의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 173의 아미노산 서열을 포함하고; (xiii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 163의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 174의 아미노산 서열을 포함하고; (xiv) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 164의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 175의 아미노산 서열을 포함하고; 및 (xv) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 165의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 176의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 35-38 또는 155-165로서 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 39-42 또는 166-176으로서 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 35-38 또는 155-165로서 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 39-42 또는 166-176으로서 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은:
(a) 각각 SEQ ID NO: 35 및 39를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(b) 각각 SEQ ID NO: 36 및 40을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(c) 각각 SEQ ID NO: 37 및 41을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(d) 각각 SEQ ID NO: 38 및 42를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(e) 각각 SEQ ID NO: 155 및 166을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(f) 각각 SEQ ID NO: 156 및 167을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(g) 각각 SEQ ID NO: 157 및 168을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(h) 각각 SEQ ID NO: 158 및 169를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(i) 각각 SEQ ID NO: 159 및 170을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(j) 각각 SEQ ID NO: 160 및 171을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(k) 각각 SEQ ID NO: 161 및 172를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(l) 각각 SEQ ID NO: 162 및 173을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(m) 각각 SEQ ID NO: 163 및 174를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(n) 각각 SEQ ID NO: 164 및 175를 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; 또는
(o) 각각 SEQ ID NO: 165 및 176을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열
을 포함한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 (i) 2-13의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 2-13의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (ii) 3-2의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 3-2의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (iii) 1-65의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 1-65의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (iv) 1-28의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 1-28의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (v) P2-C12의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-C12의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (vi) 13B4의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 13B4의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (vii) 13F7의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 13F7의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (viii) 15A9의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 15A9의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (ix) P1-A03의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P1-A03의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (x) P1-A08의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P1-A08의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xi) P1-F02의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P1-F02의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xii) P2-A01의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-A01의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xiii) P2-A03의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-A03의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xiv) P2-F07의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-F07의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; 또는 (xv) P2-F11의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-F11의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 발명에 개시된 상이한 항-FAM19A5 항체에 대한 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열은 표 2에 제공된다. 본 발명에 개시된 상이한 항-FAM19A5 항체에 대한 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열은 표 3에 제공된다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은:
(a) SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 상기 VH CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은:
(a) SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(b) SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 상기 VL CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은:
(a) SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2;
(c) SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3;
(d) SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(e) SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(f) SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
일부 구체예에서, 인간FAM19A5에 특이적으로 결합하는 본 발명의 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은:
(a) SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 상기 VH CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은:
(a) SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(b) SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 상기 VL CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은:
(a) SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2;
(c) SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3;
(d) SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(e) SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(f) SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 본 발명의 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은:
(a) SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 상기 VH CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은:
(a) SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(b) SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 상기 VL CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은:
(a) SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2;
(c) SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3;
(d) SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(e) SEQ ID NO: 30 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(f) SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 본 발명의 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은:
(a) SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 상기 VH CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은:
(a) SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(b) SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
일부 구체예에서, 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 상기 VL CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은:
(a) SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2;
(c) SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3;
(d) SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(e) SEQ ID NO: 33 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(f) SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 상기 CDR 중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개를 포함한다.
본 발명에서 설명된 VH 도메인, 또는 그것의 하나 이상의 CDR은 중쇄, 예를 들어 전장 중쇄를 형성하기 위해 불변 도메인에 연결될 수 있다. 유사하게, 본 발명에서 설명된 VL 도메인, 또는 그것의 하나 이상의 CDR은 경쇄, 예를 들어 전장 경쇄를 형성하기 위해 불변 도메인에 연결될 수 있다. 전장 중쇄와 전장 경쇄는 조합되어 전장 항체를 형성할 수 있다.
따라서, 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 항체 경쇄 및 중쇄, 예를 들어 분리된 경쇄 및 중쇄를 포함한다. 경쇄와 관련하여, 특정 구체예에서, 본 발명에서 설명된 항체의 경쇄는 카파 경쇄이다. 일부 구체예에서, 본 발명에서 설명된 항체의 경쇄는 람다 경쇄이다. 일부 구체예에서, 본 발명에서 설명된 항체의 경쇄는 인간 카파 경쇄 또는 인간 람다 경쇄이다. 특정 구체예에서, FAM19A5 폴리펩타이드(예를 들어, 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는, 본 발명에서 설명된 항체는 본 발명에 설명된 임의의 VL 또는 VL CDR 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, 경쇄의 불변 영역은 인간 카파 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, FAM19A5 폴리펩타이드(예를 들어, 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는, 본 발명에서 설명된 항체는 본 발명에 설명된 VL 또는 VL CDR 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, 경쇄의 불변 영역은 인간 람다 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 인간 불변 영역 서열의 비제한적 예들은 본 분야에서 설명되었고, 예를 들어 미국특허 No. 5,693,780 및 Kabat E.A. et al., (1991)(상동)을 참조한다.
중쇄와 관련하여, 일부 구체예에서, 본 발명에서 설명된 항체의 중쇄는 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 또는 뮤(μ) 중쇄일 수 있다. 다른 특정 구체예에서, 본 발명에서 설명된 항체의 중쇄는 인간 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 또는 뮤(μ) 중쇄를 포함할 수 있다. 한 구체예에서, FAM19A5(예를 들어, 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는, 본 발명에서 설명된 항체는 본 발명에 설명된 VH 또는 VH CDR 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하며, 중쇄의 불변 영역은 인간 감마(γ) 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, FAM19A5(예를 들어, 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는, 본 발명에서 설명된 항체는 본 발명에 개시된 VH 또는 VH CDR 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하며, 중쇄의 불변 영역은 본 발명에서 설명되거나 본 분야에 공지된 인간 중쇄의 아미노산 서열을 포함한다. 인간 불변 영역 서열의 비제한적 예들은 본 분야에 설명되었으며, 예를 들어 미국특허 No. 5,693,780 및 Kabat E.A. et al., (1991)(상동)을 참조한다.
일부 구체예에서, FAM19A5(예를 들어, 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는, 본 발명에서 설명된 항체는 본 발명에 설명된 VH 또는 VH CDR 및 VL 또는 VL CDR을 포함하는 VL 도메인 및 VH 도메인을 포함하며, 불변 영역은 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY 면역글로불린 분자, 또는 인간 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY 면역글로불린 분자의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구체예에서, FAM19A5(예를 들어, 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는, 본 발명에서 설명된 항체는 본 발명에 설명된 임의의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인 및 VH 도메인을 포함하며, 불변 영역은 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY 면역글로불린 분자, 면역글로불린 분자의 임의의 아형(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2)의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 불변 영역은 아형(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4) 및 알로타입(예를 들어, G1m, G2m, G3m 및 nG4m) 및 이들의 변이체를 포함하는, 자연-발생인, 인간 IgG의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 예를 들어, Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개) 및 Jefferis R. and Lefranc M.P., mAbs 1:4, 1-7 (2009)를 참조한다. 일부 구체예에서, 불변 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4, 또는 이들의 변이체의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명에 개시된 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 Fc 이펙터 기능, 예를 들어 보체-의존성 세포독성(CDC) 및/또는 항체-의존성 세포 포식작용(ADCP)을 갖지 않는다. 이펙터 기능은 Fc 영역에 의해 매개되며, Fc 영역의 CH2 도메인에서 힌지 영역에 가장 가까이 있는 잔기가 항체의 이펙터 기능을 담당하고, 그것은 선천 면역 시스템의 이펙터 세포 상에서 C1q(보체) 및 IgG-Fc 수용체(FcγR)에 대해 상당히 중첩된 결합 부위를 함유한다. 또한, IgG2 및 IgG4 항체는 IgG1 및 IgG3 항체보다 더 낮은 수준의 Fc 이펙터 기능을 가진다. 항체의 이펙터 기능은 다음과 같은 본 분야에 공지된 상이한 접근법들에 의해 감소되거나 회피될 수 있다: (1) Fc 영역을 결여한 항체 단편(예를 들어, Fab, F(ab')2, 단쇄 Fv(scFv), 또는 모노머 VH 또는 VL 도메인으로 구성된 sdAb)의 사용; (2) 예를 들어 당이 부착된 잔기의 결실 또는 변경, 효소적으로 당의 제거, 글리코실화 저해제의 존재하에 배양된 세포에서 항체의 생성, 또는 단백질을 글리코실화할 수 없는 세포(예를 들어, 박테리아 숙주 세포, 미국특허 공개 No. 20120100140 참조)에서 항체의 발현에 의해 생성될 수 있는, 무글리코실화 항체의 생성; (3) 이펙터 기능이 감소된 IgG 아형으로부터 Fc 영역(예를 들어, IgG2 또는 IgG4 항체로부터의 Fc 영역 또는 IgG2 또는 IgG4 항체로부터의 CH2 도메인을 포함하는 키메라 Fc 영역)의 이용(예를 들어 미국특허 공개 No. 20120100140 및 Lau C. et al., J. Immunol. 191:4769-4777 (2013) 참조); 및 (4) Fe 기능이 감소되거나 없는 상태를 가져오는 돌연변이를 가진 Fc 영역의 생성(예를 들어, 미국특허 공개 No. 2012-0100140 및 거기 인용된 미국출원 및 PCT 출원과 An et al., mAbs 1:6, 572-579 (2009) 참조).
따라서, 일부 구체예에서, 본 발명에 개시된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 단쇄 Fv(scFv), 또는 모노머 VH 또는 VL 도메인으로 구성된 sdAb이다. 이러한 항체 단편은 본 분야에 잘 공지되어 있으며 상기 설명된다.
일부 구체예에서, 본 발명에 개시된 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 Fc 이펙터 기능이 감소되거나 없는 Fc 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 불변 영역은 인간 IgG2 또는 IgG4의 Fc 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 IgG2/IgG4 이소타입의 것이다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 IgG4 이소타입의 IgG 항체로부터 CH2 도메인과 IgG1 이소타입의 IgG 항체로부터 CH3 도메인을 포함하는 키메라 Fc 영역, 또는 IgG2로부터 힌지 영역과 IgG4로부터 CH2 영역을 포함하는 키메라 Fc 영역, 또는 Fc 기능이 감소되거나 없는 돌연변이를 가진 Fc 영역을 포함한다. Fc 이펙터 기능이 감소되거나 없는 Fc 영역은 본 분야에 공지된 것들을 포함한다. 예를 들어, Lau C. et al., J. Immunol. 191:4769-4777 (2013); An et al., mAbs 1:6, 572-579 (2009); 및 미국특허 공개 No. 20120100140 및 거기 인용된 미국특허와 특허공개 및 PCT 공개를 참조한다. 또한, Fc 이펙터 기능이 감소되거나 없는 Fc 영역은 당업자에 의해 쉽게 제조될 수 있다.
VI. 핵산 분자
본 발명에서 설명된 다른 양태는 본 발명에서 설명된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편 중 어느 하나를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자에 관한 것이다. 핵산은 전체 세포에, 세포 용해물에, 또는 부분적으로 정제된 형태나 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있다. 핵산은 알칼리성/SDS 처리, CsCl 밴딩, 칼럼 크로마토그래피, 제한 효소, 아가로오스 겔 전기영동 및 본 분야에 잘 공지된 다른 기술들을 포함하는 표준 기술에 의해, 다른 세포 성분 또는 다른 오염물, 예를 들어 다른 세포 핵산(예를 들어, 다른 염색체 DNA, 예를 들어 자연에서 분리된 DNA에 연결된 염색체 DNA) 또는 단백질로부터 정제되었을 때, "분리되거나" 또는 "실질적으로 순수하다"(F. Ausubel, et al., ed. Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York (1987) 참조). 본 발명에 설명된 핵산은, 예를 들어 DNA 또는 RNA일 수 있고, 인트론 서열을 함유할 수 있거나 또는 함유하지 않을 수 있다. 특정 구체예에서, 핵산은 cDNA 분자이다.
본 발명에 설명된 핵산은 표준 분자생물학 기술을 사용하여 얻어질 수 있다. 하이브리도마(예를 들어, 아래 더 상세히 설명된 대로 인간 면역글로불린 유전자를 지닌 트랜스제닉 마우스로부터 제조된 하이브리도마)에 의해 발현된 항체의 경우, 이 하이브리도마에 의해 제조된 항체의 경쇄 및 중쇄를 암호화하는 cDNA는 표준 PCR 증폭 또는 cDNA 클로닝 기술에 의해 획득될 수 있다. 면역글로불린 유전자 라이브러리(예를 들어, 파지 전시 기술을 사용)로부터 얻어진 항체의 경우, 이 항체를 암호화하는 핵산이 라이브러리로부터 회수될 수 있다.
본 발명에서 설명된 특정 핵산 분자는 본 발명의 다양한 항-FAM19A5 항체의 VH 및 VL 서열을 암호화하는 것들이다. 이러한 항체의 VH 서열을 암호화하는 예시적인 DNA 서열은 SEQ ID NO: 43-46 및 177에 제시된다. 이러한 항체의 VL 서열을 암호화하는 예시적인 DNA 서열은 SEQ ID NO: 47-50 및 178에 제시된다.
다양한 중쇄 폴리뉴클레오타이드 서열
항체 다양한 중쇄 폴리뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO)
항-FAM19A5 (2-13) GCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGCGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCACCTTCAGCAGCCATGGCATGTTCTGGGTGCGACAGACGCCCGGCAAGGGGTTGGAATATGTCGCTGAAATTACCAATGATGGTAGTGGCACAAACTACGGGTCGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTTCTGCGCCAGATCTACTTATGAATGTCCTGGTGGTTTTAGTTGTTGGGGTGATACTGGTCAAATAGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCCA (SEQ ID NO: 43)
항-FAM19A5 (3-2) GCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGCGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCACCTTCAGCAGCTTCAACATGTTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATACGTCGCTCAAATTAGCAGCAGTGGTAGTAGCACAAACTACGCACCCGCGGTGAGGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCCCGGGGCTGAAGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAAAAGTAGTTATGACTGTCCTTACGGTCATTGTAGTAGTGGTGTTGATAGTGCTGGTGAGATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCCA (SEQ ID NO: 44)
항-FAM19A5 (1-65) GCCGTGACACTGGACGAATCTGGGGGAGGGCTGCAGACTCCAGGCGGAGCTCTGAGCCTGGTGTGCAAGGCATCCGGGTTCACCTTTAGCTCCTACCAGATGGGATGGGTGCGGCAGGCACCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCGGAGTGATCAACAAATCTGGGAGTGACACAAGCTACGGCAGCGCCGTGAAGGGAAGGGCCACCATCAGCAGGGACAATGGCCAGAGTACCGTGCGGCTGCAGCTGAACAATCTGCGCGCTGAGGACACTGGCACCTACTTCTGTGCTAAGGGATCAGCAAGCTATATCACAGCCGCTACTATTGATGCATGGGGACACGGGACAGAAGTCATCGTGTCTAGT (SEQ ID NO: 45)
항-FAM19A5 (1-28) GCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGCGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCGATTATGGCATGGGTTGGGTGCGACAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTTGCTGCTATTAGAAGTGATGGTAGTAACCCATCATACGGGTCGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAAGGACAACGGGCGAAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGAGGACACCGCCACCTACTACTGCGCCAAGGATGGTAATGGTTACTGTGCTCTCGATGCTTATCGTAGTGGTGGTTATAGTTGTGGTGTTTATCCTGGTAGCATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCC (SEQ ID NO: 46)
항-FAM19A5
(P2-C12)		 CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTACCTATGCAGTGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGATACATTAATTGGCGTGGTGGGACATCCTACGCGAACTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGCTAGTAGTGGTGCTGCTTTTGGGTCTTACGGCATGGACCCCTGGGGCCCAGGGACCCTCGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID NO: 177)
다양한 경쇄 폴리뉴클레오타이드 서열
항체 다양한 경쇄 폴리뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO)
항-FAM19A5 (2-13) GGCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCCAGGAGAAACCGTCAAGATAACCTGCTCCGGGGGTAGCTATAGCTATGGCTGGTTCCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCTTGTCACTGTGATCTACTGGGATGATGAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTGCCCTATCCGGCTCCACAAACACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGACGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGACTGAAGACATCAGCGGCACTGCTGGTGTATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTGGG (SEQ ID NO: 47)
항-FAM19A5 (3-2) GGCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCCAGGAGAAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGCAGCTATGCTGGAAGTTACTATTATGGCTGGTACCAGCAGAAGGCACCTGGCAGTGCCCCTGTCACTCTGATCTATGAAAGCAACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCACATCTGGCTCCACAGCCACACTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGATGACGAGGCTATCTATTACTGTGGGAGCTGGGACAGTAGCAATGGTGGTATATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTAGG (SEQ ID NO: 48)
항-FAM19A5 (1-65) GCCCTGACTCAGCCCTCTTCCGTGTCAGCCAACCCTGGAGAAACTGTGAAGATCACCTGCAGCGGAGGAGGGAGCTCCGGATACGGATATGGGTGGTATCAGCAGAAATCCCCATCTAGTGCCCCCCTGACTGTGATCTATTGGAACGACAAGAGGCCTAGTGATATTCCATCAAGATTCAGTGGATCAAAAAGCGGGTCCACTCACACCCTGACAATCACTGGCGTGCAGGCAGAGGACGAAGCCGTCTACTTCTGCGGAAATGACGATTACTCAAGCGATTCTGGCTATGTGGGCGTCTTTGGCGCAGGAACCACACTGACAGTGCTG (SEQ ID NO: 49)
항-FAM19A5 (1-28) GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGAAGGAACCGTCGAGATCACCTGCTCCGGGAGTGGCTATGGTTATGGCTGGTATCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATCAGAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACGGGCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGTCGAGGACGAGGCTGTCTATTACTGTGGGAGTGAAGACAGCAGCACTCTTGCTGGTATATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 50)
항-FAM19A5
(P2-C12)		 GAGCTCGATATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAGTAGCTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGAAGCATCCAAACTGGCCTCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATATGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTAGTACTAATGTTTGGAATGCTTTCGGCGGAGGCACCAATGTGGAAATCAAA (SEQ ID NO: 178)
본 발명에 개시된 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원-결합 단편의 제조 방법은 신호 펩타이드와 함께 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 예를 들어 각각 SEQ ID NO: 43 및 47, SEQ ID NO: 44 및 48, SEQ ID NO: 45 및 49, SEQ ID NO: 46 및 50, SEQ ID NO: 177 및 178을 포함하는 셀라인에서 항체의 관련된 중쇄 및 경쇄를 발현시키는 것을 포함할 수 있다. 이들 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 숙주 세포가 본 발명에 포함된다.
VH 및 VL 세그먼트를 암호화하는 DNA 단편이 얻어진 후, 이들 DNA 단편은, 예를 들어 가변 영역 유전자를 전장 항체 사슬 유전자, Fab 단편 유전자 또는 scFv 유전자로 전환하기 위해, 표준 재조합 DNA 기술에 의해 더 조작될 수 있다. 이들 조작에서, VL- 또는 VH-암호화 DNA 단편은 항체 불변 영역 또는 가요성 링커와 같은 다른 단백질을 암호화하는 다른 DNA 단편에 작동 가능하게 연결된다. 이와 관련하여 사용된 용어 "작동 가능하게 연결된"은 2개의 DNA 단편에 의해 암호화된 아미노산 서열이 인-프레임(in-frame)을 유지하도록 2개의 DNA 단편이 이어지는 것을 의미한다.
VH 영역을 암호화하는 분리된 DNA는 VH-암호화 DNA를 중쇄 불변 영역(힌지, CH1, CH2 및/또는 CH3)을 암호화하는 다른 DNA 분자에 작동 가능하게 연결함으로써 전장 중쇄 유전자로 전환될 수 있다. 인간 중쇄 불변 영역 유전자의 서열은 본 분야에 공지되어 있으며(예를 들어, Kabat, E.A., et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참조), 이들 영역을 포함하는 DNA 단편이 표준 PCR 증폭에 의해 얻어질 수 있다. 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM 또는 IgD 불변 영역, 예를 들어 IgG2 및/또는 IgG 4 불변 영역일 수 있다. Fab 단편 중쇄 유전자의 경우, VH-암호화 DNA는 단지 중쇄 CH1 불변 영역만을 암호화하는 다른 DNA 분자에 작동 가능하게 연결될 수 있다.
VL 영역을 암호화하는 분리된 DNA는 VL-암호화 DNA를 경쇄 불변 영역 CL을 암호화하는 다른 DNA 분자에 작동 가능하게 연결함으로써 전장 경쇄 유전자로 전환될 수 있다. 인간 경쇄 불변 영역 유전자의 서열은 본 분야에 공지되어 있으며(예를 들어, Kabat, E.A., et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참조), 이들 영역을 포함하는 DNA 단편이 표준 PCR 증폭에 의해 얻어질 수 있다. 경쇄 불변 영역은 카파 또는 람다 불변 영역일 수 있다.
scFv 유전자를 생성하기 위해, VH- 및 VL-암호화 DNA 단편이 가요성 링커를 암호화하는, 예를 들어 아미노산 서열 (Gly4-Ser)3을 암호화하는 다른 단편에 작동 가능하게 연결되며, 이로써 VL과 VH 영역이 가요성 링커에 의해 이어진 상태로 VH 및 VL 서열이 연속 단쇄 단백질로서 발현될 수 있다(예를 들어, Bird et al., Science 242:423-426 (1988); Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883 (1988); McCafferty et al., Nature 348:552-554 (1990) 참조).
일부 구체예에서, 본 발명에 개시된 벡터는 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자를 포함한다. 특정 구체예에서, 벡터는 유전자 요법에 사용될 수 있다.
본 발명에서 적합한 벡터는 발현 벡터, 바이러스 벡터, 및 플라스미드 벡터를 포함한다. 한 구체예에서, 벡터는 바이러스 벡터이다.
본 발명에서 사용된 대로, "발현 벡터"는 적절한 숙주 세포에 도입되었을 때, 삽입된 코딩 서열의 전사 및 번역을 위한 필수 요소, 또는 RNA 바이러스 벡터의 경우, 복제 및 번역을 위한 필수 요소를 함유하는 임의의 핵산 구성물을 말한다. 발현 벡터는 플라스미드, 파지미드, 바이러스, 및 이들의 유도체를 포함할 수 있다.
VII. 항체 생성
본 발명에 개시된 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 항체의 합성을 위한 본 분야에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어 화학적 합성 또는 재조합 발현 기술에 의해 생성될 수 있다. 본 발명에서 설명된 방법은, 달리 나타내지 않는다면, 분자생물학, 미생물학, 유전자 분석, 재조합 DNA, 유기화학, 생화학, PCR, 올리고뉴클레오타이드 합성 및 변형, 핵산 혼성화, 및 본 분야의 기술 범위 내의 관련 분야의 종래의 기술들을 이용한다. 이들 기술은 인용된 참고자료들에 기술되며 문헌에 충분히 설명된다. 예를 들어, Maniatis T. et al., (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J. et al., (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J. et al., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel F.M. et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren B. et al., (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press를 참조한다.
일부 구체예에서, 본 발명에서 설명된 항체는, 예를 들어 합성, DNA 서열의 유전자 조작을 통한 생성을 수반하는 임의의 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 분리된 항체(예를 들어, 재조합 항체)이다. 특정 구체예에서, 이러한 항체는 생체내 동물 또는 포유류(예를 들어, 인간)의 항체 점라인 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않는 서열(예를 들어, DNA 서열 또는 아미노산 서열)을 포함한다.
VIII. 제약학적 조성물
생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제(Remington's Pharmaceu-tical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, 펜실베니아) 중의 원하는 정도의 순도를 가진 본 발명에서 설명된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 포함하는 조성물이 본 발명에서 제공된다. 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제는 이용된 투약량 및 농도에서 수혜자에게 비독성이며, 버퍼, 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예컨대 염화 옥타데실디메틸벤질암모늄; 염화헥사메토늄; 염화벤잘코늄; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레졸시놀; 사이클로헥산올; 3-펜타놀; 및 m-크레졸); 저 분자량(약 10개 잔기 미만) 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신; 단당류, 이당류, 및 글루코오스, 만노오스, 또는 덱스트린을 포함하는 다른 탄수화물들; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로오스, 만니톨, 트레할로오스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예컨대 나트륨; 금속 복합체(예를 들어, Zn-단백질 복합체); 및/또는 비-이온 계면활성제, 예컨대 TWEEN®, PLURONICS® 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다.
특정 구체예에서, 제약학적 조성물은 본 발명에서 설명된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 이중특이적 분자, 또는 면역콘쥬게이트, 및 선택적으로 하나 이상의 추가의 예방 또는 치료제를, 제약학적으로 허용되는 담체 중에 포함한다. 특정 구체예에서, 제약학적 조성물은 본 발명에서 설명된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편의 유효량, 및 선택적으로 하나 이상의 추가의 예방 또는 치료제를, 제약학적으로 허용되는 담체 중에 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 제약학적 조성물에 포함된 유일한 활성 성분이다. 본 발명에서 설명된 제약학적 조성물은 FAM19A5 활성을 감소시키는데 유용할 수 있으며, 따라서 주요 우울 장애 또는 양극성 장애와 같은 기분 장애를 치료할 수 있다.
비경구 제조물에서 사용된 제약학적으로 허용되는 담체는 수성 비히클, 비수성 비히클, 항균제, 등장제, 버퍼, 항산화제, 국소 마취제, 현탁 및 분산제, 유화제, 봉쇄 또는 킬레이트화제 및 다른 제약학적으로 허용되는 물질을 포함한다. 수성 비히클의 예들은 염화나트륨 주사액, 링거 주사액, 등장 덱스트로오스 주사액, 멸균수 주사액, 덱스트로오스 및 락테이트 링거 주사액을 포함한다. 비수성 비경구 비히클은 식물 기원의 고정유, 면실유, 옥수수유, 참깨유 및 땅콩유를 포함한다. 정균 또는 정진균 농도의 항균제가 다수-용량 용기에 패키지된 비경구 제조물에 첨가될 수 있으며, 이들은 페놀 또는 크레졸, 수은함유물질, 벤질 알코올, 클로로부탄올, 메틸 및 프로필 p-하이드록시벤조산 에스테르, 티메로살, 염화벤잘코늄 및 염화벤제토늄을 포함한다. 등장제는 염화나트륨 및 덱스트로오스를 포함한다. 버퍼는 포스페이트 및 시트레이트를 포함한다. 항산화제는 중황산나트륨을 포함한다. 국소 마취제는 프로카인 염산염을 포함한다. 현탁 및 분산제는 나트륨 카복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 및 폴리비닐피롤리돈을 포함한다. 유화제는 폴리소르베이트 80(TWEEN® 80)을 포함한다. 금속 이온의 봉쇄 또는 킬레이트화제는 EDTA를 포함한다. 제약학적 담체는 또한 수 혼화성 비히클을 위해 에틸 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜을 포함하고, pH 조정을 위해 수산화나트륨, 염산, 시트르산 또는 락트산을 포함한다.
제약학적 조성물은 대상에 대한 임의의 투여 경로에 맞게 제제화될 수 있다. 투여 경로의 구체적인 예들은 비내, 경구, 비경구, 척추강내, 뇌실내, 폐, 피하, 또는 심실내 경로를 포함한다. 피하, 근육내 또는 정맥내 주사를 특징으로 하는 비경구 투여가 또한 본 발명에서 고려된다. 주사가능물질이 종래의 형태로, 액체 용액 또는 현탁액, 주사 전에 액체 중에서 용액 또는 현탁액으로 되기에 적합한 고체 형태, 또는 에멀젼으로서 제조될 수 있다. 주사가능물질, 용액 및 에멀젼은 또한 하나 이상의 부형제를 함유한다. 적합한 부형제는, 예를 들어 물, 식염수, 덱스트로오스, 글리세롤 또는 에탄올이다. 이에 더하여, 원한다면, 투여될 제약학적 조성물은 또한 소량의 비-독성 보조 물질, 예컨대 습윤 또는 유화제, pH 완충제, 안정화제, 용해성 증진제, 및 다른 이러한 제제들, 예컨대 나트륨 아세테이트, 소르비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민 올레에이트 및 사이클로덱스트린을 함유할 수 있다.
항체의 비경구 투여를 위한 제조물은 바로 주사 가능한 멸균 용액, 피하주사용 정제를 포함하는 사용 직전에 용매와 바로 조합될 수 있는 멸균 건조 가용성 제품, 예컨대 동결건조된 분말, 바로 주사 가능한 멸균 현탁액, 사용 직전에 비히클과 바로 조합될 수 있는 멸균 건조 불용성 제품 및 멸균 에멀젼을 포함한다. 용액은 수성 또는 비수성일 수 있다.
정맥내 투여되는 경우, 적합한 담체는 생리학적 식염수 또는 포스페이트 완충 식염수(PBS), 및 증점 및 용해제를 함유하는 용액, 예컨대 글루코오스, 폴리에틸렌 글리콜, 및 폴리프로필렌 글리콜 및 이들의 혼합물을 포함한다.
항체를 포함하는 국부용 혼합물은 국소 및 전신 투여에 대해 설명된 대로 제조된다. 얻어진 혼합물은 용액, 현탁액, 에멀젼 등일 수 있으며, 크림, 겔, 연고, 에멀젼, 용액, 엘릭시르, 로션, 현탁액, 팅크, 페이스트, 폼, 에어로졸, 관주제, 스프레이, 좌약, 붕대, 피부 패치 또는 국부적 투여에 적합한 임의의 다른 제제로서 제제화될 수 있다.
본 발명에서 설명된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은, 예컨대 흡입에 의한, 국부적 투여를 위한 에어로졸로서 제제화될 수 있다(예를 들어, 미국특허 Nos. 4,044,126, 4,414,209 및 4,364,923 참조, 이들은 염증성 질환, 특히 천식의 치료에 유용한 스테로이드의 송달을 위한 에어로졸을 설명한다). 기도에 투여하기 위한 이들 제제는 분무기용의 에어로졸 또는 용액의 형태이거나, 또는 흡입제용의 마이크로파인 분말일 수 있으며, 단독으로 사용되거나 또는 락토오스와 같은 비활성 담체와 조합된다. 이러한 경우, 제제의 입자는, 한 구체예에서 50 마이크론 미만, 한 구체예에서 10 마이크론 미만의 직경을 가질 것이다.
본 발명에서 설명된 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편은 국소 또는 국부적 적용, 예컨대 피부 및 점막에 국부적 적용, 예컨대 눈에 국소 적용을 위해, 젤, 크림 및 로션으로 제제화될 수 있고, 눈에 적용 또는 수조내(intracisternal) 또는 척추내 적용을 위해 제제화될 수 있다. 국부적 투여는 경피 송달을 위해 고려되며, 또한 눈이나 점막 투여, 또는 흡입 요법을 위해 고려된다. 다른 제약학적으로 허용되는 부형제와 조합하여 또는 단독으로 항체의 코 용액이 또한 투여될 수 있다.
이온영동 및 전기영동 장치를 포함하는 경피 패치가 당업자에게 잘 공지되어 있으며, 항체를 투여하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 이러한 패치는 미국특허 Nos. 6,267,983, 6,261,595, 6,256,533, 6,167,301, 6,024,975, 6,010715, 5,985,317, 5,983,134, 5,948,433, 및 5,860,957에 설명된다.
특정 구체예에서, 본 발명에서 설명된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 포함하는 제약학적 조성물은 동결건조된 분말이며, 이것은 용액, 에멀젼 및 다른 혼합물로서 투여를 위해 복원될 수 있다. 동결건조된 분말은 또한 고체 또는 겔로서 복원 및 제제화될 수 있다. 동결건조된 분말은 본 발명에서 설명된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 그것의 제약학적으로 허용되는 유도체를 적합한 용매에 용해함으로써 제조된다. 일부 구체예에서, 동결건조된 분말은 멸균 상태이다. 용매는 분말 또는 분말로부터 제조된 복원된 용액의 안정성 또는 다른 약물학적 성분을 개선하는 부형제를 함유할 수 있다. 사용될 수 있는 부형제는, 제한은 아니지만, 덱스트로오스, 소르비톨, 프럭토오스, 콘 시럽, 자일리톨, 글리세린, 글루코오스, 수크로오스 또는 다른 적합한 제제를 포함한다. 또한, 용매는, 한 구체예에서, 약 중성 pH의, 버퍼, 예컨대 시트레이트, 나트륨 또는 칼륨 포스페이트 또는 당업자에게 알려진 다른 버퍼를 함유할 수 있다. 용액의 후속 멸균 여과 후 당업자에게 공지된 표준 조건하에서의 동결건조는 원하는 제제를 제공한다. 한 구체예에서, 얻어진 용액은 동결건조용 바이알에 배분될 것이다. 각 바이알은 화합물의 단일 투약량 또는 다수 투약량을 함유할 것이다. 동결건조된 분말은 적절한 조건하에, 예컨대 약 4℃ 내지 실온에서 보관될 수 있다.
주사용수에 의한 이 동결건조된 분말의 복원은 비경구 투여에 사용하기 위한 제제를 제공한다. 복원을 위해 동결건조된 분말이 멸균수 또는 다른 적합한 담체에 첨가된다. 정확한 양은 선택된 화합물에 따른다. 이러한 양은 경험적으로 결정될 수 있다.
본 발명에서 설명된 항체 또는 그것의 항원-결합 단편, 이중특이적 분자, 또는 면역콘쥬게이트 및 본 발명에서 제공된 다른 조성물은 또한 치료될 대상의 특정 조직, 수용체, 또는 다른 신체 영역에 표적화되도록 제제화될 수 있다. 많은 이러한 표적화 방법이 당업자에게 잘 공지되어 있다. 모든 이러한 표적화 방법을 본 조성물에 사용하는 것이 본 발명에서 고려된다. 표적화 방법의 비제한적 예들은, 예를 들어 미국특허 Nos. 6,316,652, 6,274,552, 6,271,359, 6,253,872, 6,139,865, 6,131,570, 6,120,751, 6,071,495, 6,060,082, 6,048,736, 6,039,975, 6,004,534, 5,985,307, 5,972,366, 5,900,252, 5,840,674, 5,759,542 및 5,709,874를 참조한다. 특정 구체예에서, 본 발명에서 설명된 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원-결합 단편은 주요 우울 장애 또는 양극성 장애와 같은 기분 장채를 치료하기 위해 사용될 수 있다.
생체내 투여에 사용되는 조성물은 멸균될 수 있다. 예를 들어, 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 쉽게 멸균된다.
IX. 키트
본 발명에서 설명된 하나 이상의 항체, 또는 그것의 항원-결합 단편을 포함하는 키트가 본 발명에서 제공되며, 상기 키트는 진단 또는 치료를 위한 것이다. 특정 구체예에서, 본 발명에서 제공된 하나 이상의 항체 또는 그것의 항원-결합 단편과 같은, 본 발명에 설명된 조성물의 성분들 중 하나 이상으로 채워진 하나 이상의 용기, 선택적인 사용 설명서를 포함하는 팩 또는 키트가 본 발명에서 제공된다. 일부 구체예에서, 키트는 본 발명에서 설명된 조성물 및 본 발명에 설명된 것들과 같은 임의의 진단, 예방 또는 치료제를 함유한다.
실시예
이후의 실시예에서 다음의 실험 방법 및 상세한 내용이 참조된다.
실시예 1
인간 FAM19A5 단백질의 발현 및 정제
재조합 인간 FAM19A5 단백질을 제조하여 정제하고, 정제된 단백질을 결합 친화성 분석에 기초한 항체 스크리닝 분석에 사용했다. 먼저, FAM19A5 유전자를 함유하는 LPS-hT 플라스미드를 박테리아에 형질전환시켜 단백질 과발현을 유도했다. 제조 후, FAM19A5 단백질을 Ni-NTA 친화성 크로마토그래피(Qiagen, Valencia, 미국 캘리포니아)를 사용하여 정제했다. 이미다졸을 점차 더 높은 농도로 사용하여 Ni-칼럼으로부터 Hig-태그된 FAM19A5 단백질을 제거했다. 용액 중 단백질 발현은 코마씨 브릴리언트 블루 R-250 염료를 사용하여 측정된다. FAM19A5 이미다졸 함유 용액만을 가지고 PBS를 사용하여 FAM19A5 단백질을 농축했다. 농축이 완료되었을 때 FAM19A5 단백질의 순도 및 농도를 웨스턴 블롯 분석을 사용하여 측정했다. 이어서, 농축된 단백질을 사용하여 FAM19A5-특이적 항체를 스크리닝했다.
실시예 2
FAM19A5 항체 라이브러리의 생성
FAM19A5 펩타이드를 합성하고 KLH(Anygen Co., Ltd.)에 C-말단 단부에서 콘쥬게이트해서 닭의 면역화를 위한 항원으로 사용했다. 합성 펩타이드 KLH 콘쥬게이트 50μg을 750μL 포스페이트 완충 식염수(PBS)에 혼합하고 30분 동안 37℃에서 인큐베이션했다. 이후, 독소를 2% 스쿠알렌 엔도톡신 MPL(모노포스포릴레이트 지질 A 종)에서 제거하고, 유-중-수 에멀젼 애쥬번트(RIBI + MPL + TDM + CWS 애쥬번트, Sigma, St. Louis, 미국 미주리)를 함유하는 TDW 및 CWS의 세포벽 성분의 미코박테리아를 에멀젼화한 다음, 이것을 3마리의 닭에 피하 주사했다. 닭은 대략 2-3주 간격으로 총 3회 면역화했다. 면역화된 닭으로부터 얻어진 항체의 역가를 FAM-19A5 단백질을 과발현했던 HEK293T 세포의 세포용해물을 사용하여 면역블롯팅을 통해서 측정했다. 3회 면역화된 닭으로부터의 혈청을 1차 항체로 사용했다. 사용된 2차 항체는 HRP(양고추냉이 퍼옥시다아제)에 콘쥬게이트된 항-닭 IgG(Y) 폴리클로날 항체(토끼 항-닭 IgG(Y)-HRP, Millipore corporation, Billeria, 미국 매사츄세츠)였다.
TRI 시약(Invitrogen, Carlsbad, 미국 캘리포니아)을 사용하여 면역화된 닭으로부터 단쇄 가변 단편(scFv) 라이브러리를 제조했고, 상기 설명된 면역화된 닭의 비장, 골수, 및 활액낭으로부터 RNA를 추출했다. 올리고-dT 프라이머와 SUPER-SCRIPT™ III 제1-가닥 합성 시스템(Invitrogen)을 사용하여 제1 가닥 cDNA를 합성했다. 닭의 면역 시스템으로부터 얻어진 cDNA에 대해, 확장형 고 충실도 PCR 시스템(Roche Molecular Systems, 미국 인디애나폴리스)을 사용하여 단쇄 가변 영역 라이브러리를 생성했다. 각 반응에서, 1μL cDNA, 각 프라이머 60 pmol, 10x 반응 버퍼 용액 10μL, 2.5mM dNTP(Promega, Madison, 미국 위스콘신) 8μL, 및 Taq DNA 중합효소 0.5μL를 물과 혼합했다. 최종 부피는 100μL였다. PCR 반응을 다음의 조건을 사용하여 수행했다: (i) 94℃에서 15초, (ii) 56℃에서 30초, 및 (iii) 72℃에서 90초의 30 사이클, 이후 72℃에서 10분간 최종 확장. 약 350bp의 길이를 가진 단편을 포함하는 PCR 생성물을 1.5% 아가로오스 겔 위에 로딩하고 전기영동 후, QIAGEN Gel II 추출 키트(QIAGEN, Valencia, 미국 캘리포니아)를 사용하여 상기 뉴클레오타이드 단편을 정제했다. 정제된 PCR 생성물을 OD 260nm에서 판독하여 정량했다(1 유닛 OD = 50μg/ml).
두 번째 PCR로부터 2개의 VH 및 VL 1차 생성물을 중첩 확장 PCR에 의해 무작위로 연결했다. 각 PCR 반응물을 정제된 VL 및 VH 생성물 100ng, 각 프라이머 60 pmol, 10x 반응 버퍼 10μL, 2.5mM dNTP 8μL, Taq DNA 중합효소 0.5μL, 및 최종 부피 100μL가 되는 양의 물과 혼합했다. PCR을 다음의 조건에서 수행했다: (i) 94℃에서 15초, (ii) 56℃에서 30초, 및 (iii) 72℃에서 2분의 25 사이클, 이후 72℃에서 10분간 최종 확장. 약 700bp의 길이를 가진 단쇄 가변 영역 단편을 포함하는 PCR 생성물을 1.5% 아가로오스 겔 위에 로딩하고 전기영동 후, QIAGEN Gel II 추출 키트(QIAGEN)를 사용하여 상기 뉴클레오타이드 단편을 정제했다. 정제된 PCR 생성물을 OD 260nm에서 판독하여 정량했다(1 유닛 OD = 50μg/ml).
PCR 생성물의 scFv 단편과 벡터 pComb3X-SS(The Scripps Research Institute 미국 캘리포니아)를 Sfi I 제한 효소로 효소절단했다. 정제된 중첩 PCR 생성물 10μg를 Sif I 360유닛(16유닛 당 1μg DNA, Roche Molecular Systems, Pleasanton, 미국 캘리포니아), 10x 반응 버퍼 20μL 및 최종 부피 200μL가 되는 양의 물과 혼합했다. pComb3X-SS 벡터 20μg을 Sfi I 120유닛(6유닛 당 1μg DNA), 10x 반응 버퍼 용액 20μL 및 최종 부피가 200μL가 되는 양의 물과 혼합했다. 혼합물을 8시간 동안 50℃에서 효소절단했다. 이후, scFv 단편(약 700bp)과 벡터(약 3400bp)를 포함하는 효소절단된 생성물을 1% 아가로오스 위에 로딩하고 겔 추출 키트 II QIAGEN(QIAGEN, Valencia, 미국 캘리포니아)을 사용하여 정제했다. Sfi I-제한된 pComb3X 벡터 1400ng과 효소절단된 scFv 단편 700ng을 5x 리가아제 버퍼, T4 DNA 리가아제 10μL(Invitrogen, Carlsbad, 미국 캘리포니아) 및 최종 부피가 200μL가 되는 양의 물과 혼합했다. 혼합물을 16시간 동안 16℃에서 인큐베이션하여 리게이션을 수행했다.
에탄올 침전 후, DNA 펠릿을 물 15μL에 용해했다. 라이브러리를 생성하기 위해, 리게이션 샘플을 바이브레이터 유전자(Gene pulser: Bio-Rad Laboratories, Hercules, 미국 캘리포니아)를 사용하여 전기천공을 통해 이콜리 균주 ER2738(New England Biolabs Inc, Hitchin, Hertfordshine, SG4 OTY, 영국 잉글랜드)에 형질전환시켰다. 세포를 5mL 수퍼 브로스(SB) 배지와 혼합하고 37℃에서 1시간 동안 250 rpm으로 교반하면서 인큐베이션했다. 다음에, 100mg/mL 카나마이신 3μL를 SB 배지 10mL에 첨가했다. 라이브러리 크기를 결정하기 위해, 0.1μL, 1μL 및 10μL의 배양물 샘플을 50μg/mL 카나마이신을 함유하는 루리아 브로스(LB) 한천 평판 위에 문질러 발랐다. 1시간 교반 후, 100mg/mL 카나마이신 4.5μL를 LB 배양물에 첨가하고 추가로 1시간 더 교반했다. 다음에, 물에 넣은 VCM13 헬퍼 파지 2mL(> 1011 cfu/ml)를 100mg/mL 카나마이신 92.5μL를 함유하는 예열된 LB(183mL)와 함께 LB 배지에 첨가했다. 이 혼합물을 2시간 동안 더 37℃에서 250rpm으로 교반했다. 다음에, 카나마이신 280μL(50mg/mL)를 배양물에 첨가하고 37℃에서 하룻밤 교반했다. 다음 날, 박테리아 펠릿을 고속 원심분리기(Beckman, JA-10 로터)를 사용하여 4℃에서 3,000g으로 원심분리했다. 이후, 박테리아 펠릿을 사용하여 플라스미드 DNA를 추출하는 한편, 상청액을 멸균 원심분리 병에 옮겨 담았다. 다음에, 폴리에틸렌 글리콜-8000(PEG-8000, Sigma) 8g과 염화나트륨(NaCl) 6g을 상청액에 첨가한 다음 얼음에 30분간 넣어 두었다. 이후, 상청액을 4℃에서 15,000g으로 15분간 원심분리했다. 다음에, 상청액을 따라 버리고, 파지 펠릿을 완충 식염수(TBS)에 현탁했다.
실시예 3
고정된 항원 상에서의 라이브러리 패닝(바이오-패닝)
마그네틱 비드(Dynabeads M-270 에폭시, Invitrogen)를 사용하여 바이오-패닝을 수행했다. 실온에서 20시간 동안 비드와 단백질을 함께 회전 교반시켜서 실온에서 대략 1 x 107 비드를 재조합 FAM19A5 단백질 5μg으로 코팅했다. 코팅이 완료된 후, 비드를 포스페이트 완충 식염수(PBS)로 4번 세척하고 실온에서 3% BSA를 함유하는 PBS 중에서 1시간 동안 차단시켰다. 다음에, 코팅된 비드를 상기 설명된 파지-전시된 scFv와 함께 실온에서 2시간 동안 배양했다. 항원 코팅된 비드에 결합되지 않은 파지를 제거하기 위해 비드를 0.05% Tween 20/PBS로 세척했다. 다음에, 결합된 파지를 0.1M 글리신/염화수소(0.1M 글리신-HCl, pH 2.2) 50μL로 용출시키고 염화수소와 함께 2M Tris(트리스-HCl, pH 9.1) 3μL로 중화시켰다. 이 파지-함유 상청액을 사용하여 이콜리 ER2738 세포를 감염시켰고, VCSM13 헬퍼 파지를 사용하여 하룻밤 증폭시켜 구제했다. 또한, 50μg/mL 카나마이신을 함유하는 LB 한천 평판 위에 파지-감염된 배양물을 블롯팅하여 파지-감염된 배양물로부터 파지 역가에 의해 투입량(인풋) 및 생성량(아웃풋)을 결정했다. 다음 날, PEG-8000과 NaCl을 사용하여 파지를 침전시켰고, 이어서 바이오-패닝에 사용했다. 상기 과정을 반복함으로써 최대 총 5번의 바이오-패닝을 수행했다. 각 증폭마다 FAM19A5 단백질에 대한 높은 친화성을 위해 파지를 스크리닝하고 선택했다.
실시예 4
파지 ELISA에 의한 클론의 선택
바이오-패닝으로부터 선택된 클론을 분석하기 위해, 파지-전시된 scFv로부터 개별 클론들을 무작위로 선택하고 ELISA를 사용하여 선택된 클론이 FAM19A5 재조합 단백질에 결합하는지 확인했다. FAM19A5 재조합 단백질을 0.1M NaHCO3 버퍼로 희석하고, 웰 당 100ng의 단백질을 사용하여 16시간 동안 4℃에서 96-웰 마이크로타이터 플레이트를 코팅했다. 다음 날, 플레이트를 1시간 동안 37℃에서 3% BSA/PBS로 차단시켰다. 다음에, 파지 상청액을 6% BSA/PBS와 혼합하고 37℃에서 2시간 동안 배양했다. 다음에, 상청액을 함유한 플레이트를 0.05% Tween 20/PBS로 세척했다. HRP-콘쥬게이트된 M13 항체(a-M13-HRP, Pierce Chemical Co, Rockford, 미국 일리노이)를 1/5000으로 희석했다. 희석된 항체 50μL를 플레이트에 첨가하고 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션했다. 인큐베이션 및 세척 후, 색 전개를 위해 플레이트에 0.05M 시트레이트 버퍼 용액, 1μg/mL의 2,2'-아지노-비스(3-에틸벤조티아졸린-6-설폰산)(ABTS, Amresco, Solon, 미국 오하이오) 및 0.1% H2O2를 첨가했다. 405nm에서 각 웰의 흡광도를 측정했다.
FAM19A5 재조합 단백질에 결합하며 높은 흡광도를 나타낸 클론(n=24)을 분석했다. 이들 클론으로부터 독특한 서열을 가진 13개의 scFv 클론을 획득했다. 추가 선택 후, 클론 2-13, 3-2, 1-65, 및 1-28을 획득했다.
실시예 5
항-FAM19A5-IgG2/4 항체의 생성
항-FAM19A5 scFv를 포유류 발현 벡터에 서브클로닝했다. FAM19A5 scFv 유전자 서열에서, 인간 Cκ 유전자를 경쇄 가변 도메인에 연결했고, CH1, CH2, 및 CH3 유전자의 인간 면역글로불린 이소타입 IgG2/4를 중쇄 가변 영역에 연결했다. 제한 부위(Genscript, 미국)를 부가하여 각 경쇄 및 각 중쇄를 가진 항체를 합성했다. 클로닝을 용이하게 하기 위해 합성된 유전자를 변형된 제한 부위를 가진 포유류 세포 발현 벡터에 삽입했다. 먼저, 경쇄 유전자를 Hind III 및 Xba I(New England Biolabs, 영국) 제한 효소를 사용하여 벡터에 삽입했고, 이어서 NheI 및 BamHI(New England Biolabs, 영국) 제한 효소를 사용하여 벡터에 중쇄 유전자를 부가했다.
항-FAM19A5-IgG2/4 항체를 발현하고 정제하기 위해 포유류 세포 형질도입 및 과발현 주사 시스템을 사용했다. 세포 배양 부피의 1/10에 상응하는 150mM 염화나트륨(NaCl, Merck) 중에 폴리에틸렌이민(PEI, Polysciences, Warrington, 미국 펜실베니아) 4μg과 포유류 발현 벡터 2μg/mL를 혼합했다. 혼합물을 실온에서 15분간 그대로 두었다. 혼합물을 HEK293F 세포(2 x 106 세포/mL, Invitrogen)에 첨가한 다음, 6일 동안 135rpm의 교반 조건에서 7% CO2 및 37℃에서 100 U/mL 페니실린 및 스트렙토마이신(Invitrogen)을 함유하는 FREESTYLE™ 293 발현 배양 배지 중에서 인큐베이션했다. 세포 배양 상청액으로부터 발현된 항-FAM19A5 IgG2/4 항체를 정제하기 위해 단백질 A 비드(RepliGen, Waltham, 미국 매사츄세츠) 친화성 겔 크로마토그래피를 사용했다. 단백질 A 크로마토그래피는 4-12% Bis-Tris 구배 겔 전기영동 상에서 진행되었다. 단백질의 크기 및 수율을 코마씨 브릴리언트 블루 염색에 의해 확인했다.
실시예 6
인구통계적 특성 및 임상 특성과 혈청 FAM19A5 단백질 농도의 비교
참가자:
기분 장애를 가진 환자의 FAM19A5 단백질의 수준을 평가하기 위해, 주요 우울 장애(MDD)로 진단된 총 110명의 환자와 양극성 I(n = 26) 또는 II(n = 17) 장애(BD)로 진된된 총 43명의 환자를 고려대학고 안암병원(대한민국 서울) 정신과 외래로부터 모집했다. 환자의 평균 연령은 20-65세의 범위였고 2명의 정신과 의사에 의해 MDD 또는 BD로 진단되었다. 대조군으로, 총 112명의 건강한 지원자(20-65세의 정신질환 병력이 없음)를 지역 공동체로부터 모집했다.
MDD 및 BD의 초기 진단은 정신질환의 진단 및 통계 매뉴얼(DSM)-IV 기준을 기초로 했다. 이 진단은 DSV-IV Axis I 장애에 대한 구조화 임상 인터뷰를 이용하여 정신과 의사에 의해 확인되었다. 생애 그래프 방법을 이용한 인터뷰에서 주요 우울, 조증, 또는 경조증 에피소드를 포함하는 질병 기간이 평가되었다. MRI 스캔 당일 17항목 해밀튼 우울 평가 척도(HDRS)를 사용하여 모든 참가자에 대해 우울 증상이 평가되었다(Hamilton M., J Neurol Neurosurg Psychiatry 23:56-62 (1960)).
MDD 그룹의 배제 기준은 다음과 같았다: (1) 지난 6개월 이내에 임의의 다른 주요 Axis I 또는 Axis II 정신적 질병의 일차적 동시이환 진단; (2) 정신병적 특징을 동반한 MDD; (3) 입원 치료가 필요한 급성 자살 또는 살인 충동 환자; (4) 심각한 또는 불안정한 의학적 병력; (5) 일차적 신경학적 질병; 및 (6) 자기공명영상(MRI)의 금지. BD 그룹의 배제 기준은 정신병적 특징의 사용을 빼면 MDD 그룹에서 사용된 것과 동일했다.
연구에 참여한 58명의 MDD 환자는 약물치료를 받은 적이 없었고(무약물 MDD 그룹으로 결정됨), 52명의 MDD 환자는 항우울제로 치료 중이었다(약물치료-MDD 그룹으로 결정됨). 모든 BD 환자는 정신과 약을 복용 중이었다. 모든 참가자는 에딘버러 손잡이 시험에서 오른손잡이였다(Oldfield R. C., Neuropsychologia 9:97-113 (1971)).
연구 프로토콜은 헬싱키 선언(2008년 개정)에 따라서 고려대학교 안암병원 임상연구심의위원회에 의해 승인되었고, 모든 참가자는 참여 전에 서면동의서를 작성했다.
통계 분석:
하위그룹 간 혈청 FAM19A5 농도 비교와 관련하여, 개별 대뇌피질 두께를 종속 변수로, 하위그룹을 독립변수로, 연령 및 성별을 공변량으로 하여 공분산 분석(ANCOVA)을 수행했다. 대뇌피질 두께 분석과 관련하여, MDD를 가진 51명의 무약물 환자와 51명의 약물치료 환자, 28명의 BD 환자, 및 92명의 건강한 대조군의 데이터가 포함되었다. 대뇌피질의 두께와 혈청 FAM19A5 농도 사이의 상관관계를 양방향 피어슨 부분 상관을 사용하여 분석했는데, 진단 및 약물치료 상태에 따라 결정된 다음의 각 그룹에 대해 개별적으로 분석했다: MDD 그룹, BD 그룹(BD 환자에는 무약물 환자가 없었음), HC 그룹, 무약물 MDD 그룹, 및 약물치료-MDD 그룹. 혈청 FAM19A5 농도와 대뇌피질 두께 사이의 피어슨 부분 상관 분석에서, 연령, 성별, HDRS 점수, 및 약물치료 상태(MDD 그룹에 대해서만)를 공변량으로서 조정했다. 또한, 피셔의 r-to-z 변형을 적용하여 다음의 그룹에서 유의한 상관관계(P < 0.05)의 얻어진 상관 계수를 비교했다: 무약물 MDD 그룹 vs. HC 그룹; 약물치료-MDD 그룹 vs. HC 그룹; BD 그룹 vs. HC 그룹. 또한, 잡음적 공변량으로서 연령, 성별, 및 약물치료(MDD 그룹 vs. HC 그룹에 대해서만)에 대해 조정된 ANCOVA를 사용하여 그룹 간 대뇌피질 두께를 비교했다. 다중 비교 보정을 위해, 다중 비교 보정을 위한 보정 분석에 거짓 발견 비율(FDR)을 적용했다(q < 0.05; 양 반구에서 76건 비교) (Benjamini and Hochberg, 1995). 또한, 혈청 FAM19A5 농도가 스크리닝 도구로서 건강한 대조군과 MDD 또는 BD를 가진 환자를 정확히 구별하고, MDD 환자와 BD 환자를 정확히 구별할 수 있는지 시험하기 위해 수용자 작용 특징(ROC) 곡선 분석을 수행했다. 곡선 아래 면적(AUC)을 이 시험의 이분법적 스크리닝 능력의 척도로서 사용했다. 무약물 MDD 그룹 vs. HC 그룹, 약물치료-MDD 그룹 vs. HC 그룹, BD 그룹 vs. HC 그룹, 무약물 MDD 그룹 vs. BD 그룹, 및 약물치료-MDD 그룹 vs. BD 그룹에대해서 스크리닝 능력을 컴퓨터로 산출했다. 이어서 상응하는 민감성, 특이성, 정확성 및 AUC를 계산했다. 인구통계적 특징 및 임상 특징으로 인한 그룹 차이를 분석하기 위해, 분산 분석(ANOVA)을 사용하여 연령, HDRS 점수, 및 질병 기간을 분석했고, 카이-제곱 검정을 사용하여 성별 분포를 분석했다. 모든 통계 분석은 SPSS 버전 18.0(SPSS Inc., Chicago, 미국 일리노이)을 사용하여 수행했다.
결과:
표 8(아래)은 각 그룹, 즉 건강한 개체(HC), 비-약물치료 MDD 환자(DN-MDD), 약물치료 MDD 환자(M-MDD), 및 비-약물치료 양극성 I 또는 II 장애 환자(BD)에 속한 참가자의 연령, 성별, HDRS-17 점수, 질병 기간(월 단위), 무약물 또는 약물치료 환자의 수, 및 혈청 FAM19A5 단백질 농도(ng/mL)의 비교를 제공한다. 연령(F(1,264) = 7.391, P < 0.001), 성별(c2 = 22.060, P = 0.004), HDRS 점수(F(1,264) = 118.075, P < 0.001), 및 질병 기간(F(1,264) = 7.391, P = 0.004)에 대해서 유의한 차이가 관찰되었다.
주요 우울 장애, 양극성 장애, 및 건강한 대조군 그룹의 인구통계적 특징 및 임상 특징
특징 HC(n=112) DN-MDD(n=58) M-MDD(n=52) BD(n=43) p 값(F, c2)
연령 39.83±13.23 41.93±11.90 46.50±11.69 34.81±11.61 <0.001(F=7.391)
성(남/여) 75/37 42/16 42/10 16/27 0.004(c2 =22.060)
HDRS-17 점수 1.92±2.02 17.10±6.75 9.46±7.66 5.23±4.27 <0.001(F=118.075)
질병 기간(개월) n.a. 27.76±41.34 61.85±47.76 51.05±71.70 0.004(F=5.839)
무약물/약물치료 110/0 58/0 0/52 0/43 n.a.
혈청 FAM19A5
(ng/mL)
1.03±0.30
2.05±1.14
1.10±0.29
2.37±0.60
<0.001(F=35.008)
연령, HDRS-17 점수, 질병 기간, 및 혈청 FAM19A5 농도에 대한 데이터는 평균±표준오차를 나타낸다.
성별 분포에 대한 p 값은 카이-제곱 검정에 의해 얻어졌다.
연령, HDRS-17 점수, 및 질병 기간의 비교에 대한 p 값은 분산 분석(ANOVA)에 의해 얻어졌다.
혈청 FAM19A5의 비교에 대한 p 값은 연령 및 성별에 대해 조정한 공분산 분석(ANCOVA)에 의해 얻어졌다.
MDD, 주요 우울 장애; HC, 건강한 대조군; BD, 양극성 장애 환자; HDRS-17, 해밀튼 우울 평가 척도.
또한, 4개의 그룹에서 혈청 FAM19A5 단백질 농도에도 유의한 차이가 관찰되었다(표 8과 도 1을 참조). HC 그룹과 비교하면, 무약물 MDD 그룹(F(1,169) = 76.620, P < 0.001) 및 BD 그룹(F(1,154) = 302.718, P < 0.001)은 모두 혈청에서 유의하게 더 높은 FAM19A5 단백질 농도를 나타냈다. 무약물 MDD 그룹(F(1,109) = 36.912, P < 0.001) 및 BD 그룹(F(1,94) = 139.808, P < 0.001)은 또한 약물치료-MDD 그룹보다 유의하게 더 높은 혈청 FAM19A5 단백질 수준을 가졌다. 무약물 MDD 그룹과 BD 그룹을 비교하면 BD 그룹이 혈청 FAM19A5 단백질 농도가 더 높았다.
약물치료-MDD 그룹과 HC 그룹(F(1,163) = 2.936, P = 0.089) 사이에서는 혈청 FAM19A5 단백질 농도에 유의한 차이가 관찰되지 않았다. 상이한 그룹들의 혈청 FMA19A5 농도의 분포를 나타낸 산점도가 도 2A 내지 2D에 제공된다.
실시예 7
대뇌피질 두께와 혈청 FAM19A5 단백질 농도의 비교
MRI 데이터 획득:
상기 설명된(실시예 6) 상이한 진단 그룹에서 대뇌피질 두께와 혈청 FAM19A5 단백질 농도 사이의 관련성을 평가하기 위해, 3.0 T Siemens Trio 전신 영상 시스템(Siemens Medical Systems, Iselin, 미국 뉴저지)을 사용하여 참가자의 뇌의 T1-가중 영상을 얻었다. T1-가중 영상은 3D T1-가중 자화-준비 고속 구배-에코(MP-RAGE) 시퀀스를 사용하여 전측-교련-후측-교련 라인에 평행하게 획득되었으며, 다음의 변수가 사용되었다: 반복 시간(TR), 1900 ms; 에코 시간(TE), 2.6 ms; 관측 시야, 220 mm; 매트릭스 크기, 256 x 256; 슬라이스 두께, 1 mm; 관상 슬라이스의 수, 176 (갭 없음); 복셀 크기, 0.86 x 0.86 x 1 mm3; 플립 각도, 16°; 및 여기 수, 1.
영상 처리:
다음에, FreeSurfer 5.3 개발 버전(Massachusetts General Hospital, 미국 보스턴, surfer.nmr.mgh.harvard.edu)에서 실시되는 자동화 과정을 이용하여 T1-가중 영상으로부터 대뇌피질 두께를 계산했다. 이를 위해, 대뇌피질 표면 재구성 3차원 모델을 FreeSurfer 프로그램에서 T1-가중 영상을 사용하여 만들었다. 이 과정의 기술적 측면에 대한 상세한 내용은 선행 간행물에 설명되었다(Dale A. M. et al., Neuroimage 9:179-94 (1999); Fischl B. et al., IEEE Trans Med Imaging 20:70-80 (2001); Fischl B. et al., Neuron 33:341-55 (2002); Fischl B. et al., Neuroimage 9:195-207 (1999); Fischl B. et al., Cereb Cortex 14:11-22 (2004); 및 Segonne F. et al., IEEE Trans Med Imaging 26:518-29 (2007) 참조).
비-뇌 조직의 제거, 각 대상의 천연 뇌의 자동화 Talairach 변형, 체적 구조의 단편화, 대뇌피질 표면을 평균 구체 표면으로 확장, 강도 정규화, 및 자동화 위상 보정의 단계를 수행했다(Han K. M. et al., Sci Rep. 7:42621 (2017)). 표면 변형을 통해 강도의 최대 이행을 검출함으로써 회/백색 물질과 연막 경계 사이의 변천을 결정했다. 다음에, 각 대상의 전체 피질을 육안 검사하고, 단편화가 부정확한 대상으로부터의 데이터는 버렸다. 다음에, 이전에 설명된 방법(Han et al., 2017)에 의해 각 반구를 뇌회와 열구로 구성된 74개의 분리된 피질 영역으로 자동으로 구획화했고, 이들 피질 영역의 두께를 자동으로 계산했다. 각 반구에서 38개의 피질 회로부터 구한 피질 두께를 분석에 포함시켰다.
결과:
도 3에 도시된 대로, 무약물 MDD 그룹에서, 15개 피질 회(양측 전액골 피질, 후측 대상 피질, 상측 측두 영역, 후두 영역, 양측 판개부 및 측두 평면, 좌측 횡전두극회 및 배측후대상회, 삼각부, 중전두회, 우측 설회, 및 전횡측두회)의 두께와 혈청 FAM19A5 단백질 농도 사이에 통계적으로 유의한 역 관계가 있었다(전부, FDR-보정 P[PFDR] < 0.05). HC 그룹에서는 피질 회에서 이러한 관계가 관찰되지 않았다(전부, PFDR > 0.05). 약물치료-MDD 그룹 또는 BD 그룹에 속한 참가자에서도 피질 두께와 혈청 FAM19A5 농도 사이에 유의한 관계가 없었다(전부, PFDR > 0.05).
추가로, HC 그룹에서 상응하는 피질 영역과 비교했을 때, 혈청 FAM19A5 단백질 농도와 특정 뇌 영역(즉, 양측 판개부 및 측두 평면, 좌측 횡전두극회 및 배측후대상회, 삼각부, 중전두회, 및 우측 설회 및 전횡측두회)의 피질 두께 사이의 상관 계수는 상당히 상이했다. 도 4A 내지 4E는 일부 피질 영역에서 피질 두께와 혈청 FAM19A5 농도 사이의 관계를 나타낸 산점도를 제공한다.
실시예 8
기분 장애의 진단을 위한 혈청 FAM19A5 단백질 농도의 ROC 곡선 분석
혈청 중 FMA19A5 단백질 수준을 측정함으로써 기분 장애(예를 들어, 주요 우울 장애 또는 양극성 장애)를 진단할 수 있는 능력을 더 평가하기 위해, 상이한 비교 그룹에 대해 수용자 작용 특징 곡선(ROC 곡선) 분석을 수행했다. 비교 그룹은 (i) 무약물 MDD vs. HC; (ii) 약물치료-MDD vs. HC; (iii) BD vs. HC; (iv) BD vs. 무약물 MDD; 및 (v) BD vs. 약물치료-MDD를 포함했다.
도 5C 및 5D에 도시된 대로, BD vs. HC와 BD vs. M-MDD 사이의 분석은 혈청 FAM19A5 단백질 농도가 양극성 I 또는 II 장애의 진단을 위한 훌륭한 지표일 수 있음을 시사한다. BD vs. HC 분석을 위한 관련 값은 AUC: 0.998, 민감성: 0.977, 특이성: 0.973, 정확성: 0.974를 포함한다. BD vs. M-MDD의 관련 값은 AUC: 1.000, 민감성: 1.000, 특이성: 1.000, 정확성: 1.000을 포함한다. 또한, 도 5A에 도시된 대로, 혈청 FAM19A5 단백질 농도는 주요 우울 장애를 진단하는데도 효과적일 수 있다(AUC: 0.752, 민감성: 0.655, 특이성: 0.652, 정확성: 0.653). 도 5B 및 5E에 도시된 대로, 혈청 FAM19A5 단백질 농도는 M-MDD vs. HC(AUC: 0.571, 민감성: 0.654, 특이성: 0.652, 정확성: 0.652)와 BD vs. DN-MDD(AUC: 0.598, 민감성: 0.535, 특이성: 0.534, 정확성: 0.535)를 구별하는데는 효과적이지 않은 것으로 확인되었다.
종합하면, 상기 결과는 환자의 혈청 FAM19A5 단백질 농도를 측정하고 건강한 개체로부터의 농도와 비교하는 것이 기분 장애(예를 들어, 주요 우울 장애 또는 양극성 장애)를 진단하는 효과적인 수단일 수 있음을 증명한다.
실시예 9
항-FAM19A5 항체의 생체내 투여 후 급성 스트레스에 대한 반응의 평가
기분 장애, 특히 주요 우울 장애를 치료하는데 있어 항-FAM19A5 항체의 효능을 평가하기 위해, 우울증 래트 모델이 사용되며, 이 래트에 FAM19A5 항체가 투여되고, Porsolt R. D. et al., Nature 266:730-732 (1977)에 설명된 대로 강제 수영 시험(FST)을 사용하여 급성 스트레스에 대한 반응을 평가하였다.
래트를 3개의 상이한 그룹으로 나누고, 각 그룹은 대략 1주일 동안 (i) 비치료(즉, 음성 대조군), (ii) 항-FAM19A5 항체(즉, 실험 그룹) 또는 (iii) 공지된 항우울제(즉, 양성 대조군)을 투여받았다. 이후, 각 그룹에 속한 래트를 물이 담긴 탈출할 수 없는 실린더에 배치하였다. 래트는 초기에는 허우적댐, 수영 및/또는 기어오름의 양태를 보이다가, 마침내 코만 물 위에 내놓은 상태로 부유하거나 고정된 자세를 취하였다. "비고정"(코를 물 위로 유지하기 위해 필요한 것 이외의 움직임은 없음), "허우적댐/기어오름"(앞발이 수면을 치는 것이 관찰되는 앞다리의 빠른 움직임), 및 "수영"(노 젓는 방식이 관찰되는 앞다리나 뒷다리의 움직임)의 양태를 보인 시간을 그룹 간 비교하였다. 강제 수영 시험 완료시 동물로부터 말초 혈액을 수집하여 혈청 FAM19A5 단백질 수준을 측정하였다. 공지된 항우울제 또는 항-FAM19A5 항체로 치료된 래트는 비치료 래트와 비교하여 더 긴 시간 동안 "허우적댐/기어오름" 또는 "수영"의 양태를 보였다. 또한, 혈청 FAM19A5 단백질 수준은 비치료 동물과 비교하여 공지된 항우울제 또는 항-FAM19A5 항체로 치료된 래트에서 더 낮았다.
발명의 내용 및 요약서 부분을 포함하는 상세한 설명 부분이 청구항을 해석하는데 사용될 수 있다는 것이 인정되어야 한다. 발명의 내용 및 요약서 부분은 본 발명자(들)에 의해 고찰된 본 발명의 예시적인 구체예를 전부는 아니지만 하나 이상을 제시할 수 있으며, 따라서 본 발명 및 첨부된 청구항을 어떤 식으로도 제한하지 않는다.
본 발명은 명시된 기능 및 이들의 관계의 구현을 예시하는 기능적 구성요소의 도움을 받아 상기 설명되었다. 이들 기능적 구성요소의 구분은 설명의 편의를 위해 임의로 규정되었다. 명시된 기능 및 이들의 관계가 적절히 수행되는 한 다른 방식으로 구분될 수도 있다.
특정한 구체예들에 대한 전술한 설명은 본 발명의 일반적인 성격을 충분히 드러낼 것이며, 제3자는 당업계의 지식을 적용함으로써 본 발명의 일반적인 개념으로부터 벗어나지 않고 부당하게도 실험 없이 이러한 특정한 구체예들을 다양한 용도에 맞게 쉽게 변형 및/또는 개조할 수 있을 것이다. 따라서, 이러한 개조 및 변형은 본 발명에서 제시된 교시 및 지침에 기초하여 개시된 구체예들의 등가물의 의미와 범위 내에 있어야 한다. 본 발명에서 사용된 문구 또는 용어는 제한이 아닌 설명의 목적을 위한 것임이 이해되어야 하며, 본 명세서의 용어 또는 문구는 상기 교시 및 지침에 비추어 당업자에 의해 해석되어야 한다.
본 발명의 범위는 상기 설명된 예시적인 구체예들 중 어느 것에 의해 제한되어서는 안 되며, 이후의 청구항 및 그것의 등가물에 따라서만 한정되어야 한다.
본 발명에서 인용된 모든 간행물, 특허, 특허출원, 인터넷 사이트, 및 기탁 번호/데이터베이스 서열(폴리뉴클레오타이드 및 폴리펩타이드 서열을 포함)은 각 개별 간행물, 특허, 특허출원, 인터넷 사이트, 또는 기탁 번호/데이터베이스 서열이 참고로 포함되도록 구체적으로 그리고 개별적으로 적시된 것과 동일한 범위까지 모든 목적을 위해 그 전체가 참고로 본 발명에 포함된다.
이 PCT 출원은 2017년 10월 2일자 제출된 미국 임시출원 No. 62/566,877 및 2017년 11월 7일자 제출된 No. 62/582,888의 우선권의 이익을 주장하며, 이들은 모두 그 전체가 본 발명에 참고로 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> NEURACLE SCIENCE CO., LTD. KOREA UNIVERSITY RESEARCH AND BUSINESS FOUNDATION <120> USE OF ANTI-FAMILY WITH SEQUENCE SIMILARITY 19, MEMBER A5 ANTIBODIES FOR THE TREATMENT AND DIAGNOSIS OF MOOD DISORDERS <130> 3763.007PC02/C-K/DKC <150> 62/566,877 <151> 2017-10-02 <150> 62/582,888 <151> 2017-11-07 <160> 200 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 132 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 1 Met Ala Pro Ser Pro Arg Thr Gly Ser Arg Gln Asp Ala Thr Ala Leu 1 5 10 15 Pro Ser Met Ser Ser Thr Phe Trp Ala Phe Met Ile Leu Ala Ser Leu 20 25 30 Leu Ile Ala Tyr Cys Ser Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val 35 40 45 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln 50 55 60 Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg 65 70 75 80 Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp 85 90 95 Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile 100 105 110 Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr 115 120 125 Thr Thr Val Ser 130 <210> 2 <211> 125 <212> 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ctgccccagg 900 ggactgtcag gcacagaagc ggcctcctcc cgtgccccag actgtccgaa ttgcttttat 960 tttcttatac tttcagtata ctccatagac caaagagcaa aatctatctg aacctggacg 1020 caccctcact gtcagggtcc ctggggtcgc ttgtgcgggc gggagggcaa tggtggcaga 1080 gacatgctgg tggccccggc ggagcggaga gggcggccgt ggtggaggcc tccaccccag 1140 gagcaccccg cacaccctcg gaggacgggc ttcggctgcg cggaggccgt ggcacacctg 1200 cgggaggcag cgacggcccc cacgcagacg ccgggaacgc aggccgcttt attcctctgt 1260 acttagatca acttgaccgt actaaaatcc ctttctgttt taaccagtta aacatgcctc 1320 ttctacagct ccatttttga tagttggata atccagtatc tgccaagagc atgttgggtc 1380 tcccgtgact gctgcctcat cgatacccca tttagctcca gaaagcaaag aaaactcgag 1440 taacacttgt ttgaaagaga tcattaaatg tattttgcaa agcccaaaaa aaaaaaaaaa 1500 a 1501 <210> 5 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope F1 <400> 5 Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val Thr Leu Asp Arg 1 5 10 <210> 6 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope F2 <400> 6 Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro 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taccatcgac gcatggggcc acgggaccga agtcatcgtc 360 tcctcc 366 <210> 46 <211> 408 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 1-28 Antibody VH <400> 46 gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctcagcctc 60 gtctgcaagg cctccgggtt cgacttcagc gattatggca tgggttgggt gcgacaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggttgctgct attagaagtg atggtagtaa cccatcatac 180 gggtcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgaaggaca acgggcgaag cacagtgagg 240 ctgcagctga acaacctcag ggctgaggac accgccacct actactgcgc caaggatggt 300 aatggttact gtgctctcga tgcttatcgt agtggtggtt atagttgtgg tgtttatcct 360 ggtagcatcg acgcatgggg ccacgggacc gaagtcatcg tctcctcc 408 <210> 47 <211> 315 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2-13 Antibody VL <400> 47 ggccctgact cagccgtcct cggtgtcagc aaacccagga gaaaccgtca agataacctg 60 ctccgggggt agctatagct atggctggtt ccagcagaag tctcctggca gtgcccttgt 120 cactgtgatc tactgggatg atgagagacc ctcggacatc ccttcacgat tctccggtgc 180 cctatccggc tccacaaaca cattaaccat cactggggtc caagccgacg acgaggctgt 240 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Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 193 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 15A9 LC <400> 193 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Ile Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ser 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Glu Ser Ala Ser Ile Pro Arg 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys Arg Ser Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 194 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A03 LC <400> 194 Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly 20 25 30 Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser 85 90 95 Thr Gly Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys Arg Ser 100 105 110 Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 115 120 125 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 130 135 140 Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 145 150 155 160 Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 165 170 175 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 180 185 190 Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 195 200 205 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 195 <211> 217 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-A08 LC <400> 195 Glu Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Val Gln Val Asn Leu Gly Gln 1 5 10 15 Thr Val Ser Leu Thr Cys Thr Ala Asp Thr Leu Ser Arg Ser Tyr Ala 20 25 30 Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Ile Tyr 35 40 45 Arg Asp Thr Ser Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Ser Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Gly 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Ser Asp Gly Ser Gly Ser Asn 85 90 95 Tyr Gln Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Thr Arg Ser 100 105 110 Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu 115 120 125 Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro 130 135 140 Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 145 150 155 160 Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr 165 170 175 Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His 180 185 190 Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val 195 200 205 Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 196 <211> 215 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P1-F02 LC <400> 196 Glu Leu Asp Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly 20 25 30 Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser 85 90 95 Ile Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys Arg Ser Val Ala 100 105 110 Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 115 120 125 Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 130 135 140 Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 145 150 155 160 Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 165 170 175 Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 180 185 190 Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 195 200 205 Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 197 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A01 LC <400> 197 Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly 20 25 30 Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Ser Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Val Thr Tyr Ser Ser 85 90 95 Thr Gly Thr His Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 198 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-A03 LC <400> 198 Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Gly Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys 65 70 75 80 Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Pro Ala Tyr Asp Pro Ala 85 90 95 Ala Tyr Val Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile Leu 100 105 110 Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 199 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F07 LC <400> 199 Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Ala 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile 35 40 45 Ser Gly Thr Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gly Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys Arg Ser Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 200 <211> 220 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-F11 LC <400> 200 Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly 1 5 10 15 Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn 20 25 30 Lys Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu 35 40 45 Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe 50 55 60 Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val 65 70 75 80 Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Glu Phe Ser Cys 85 90 95 Ser Ser Ala Asp Cys Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile 100 105 110 Leu Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 165 170 175 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 195 200 205 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220

Claims (17)

  1. 서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5(FAM19A5)에 대한 길항제("FAM19A5 길항제")를 대상의 생물학적 샘플과 접촉시키는 단계, 및 샘플의 FAM19A5 단백질 수준 또는 FAM19A5 mRNA 수준을 측정하는 단계를 포함하는, 진단이 필요한 대상의 기분 장애의 진단을 위한 정보 제공 방법으로서,
    상기 기분 장애는 주요 우울 장애(MDD) 또는 양극성 장애(BD)이고,
    상기 FAM19A5 길항제는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, miRNA, FAM19A5를 표적화하는 dsRNA, 앱타머, PNA, 이들을 포함하는 벡터, 또는 이들의 임의의 조합;이거나 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체("항-FAM19A5 항체") 또는 그것의 항원-결합 단편, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 그 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터;
    인 것을 특징으로 하는 방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 접촉 및 측정 단계는 시험관내 수행되는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 대상은 FAM19A5의 기준 단백질 수준(기분 장애를 갖지 않는 대상의 샘플의 FAM19A5의 단백질 수준) 또는 FAM19A5를 암호화하는 기준 핵산 수준(기분 장애를 갖지 않는 대상의 샘플의 FAM19A5를 암호화하는 핵산 수준)과 비교하여 FAM19A5의 더 높은 단백질 수준 또는 FAM19A5를 암호화하는 더 높은 핵산 수준을 나타내는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제 1 항에 있어서, FAM19A5의 단백질 수준은 면역조직화학, 웨스턴 블롯팅, 방사성면역분석, 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA), 방사성면역확산, 면역침전 분석, 옥터로니 면역확산 방법, 로켓 면역전기영동, 조직 면역염색 방법, 보체 고정 분석, FACS, 단백질 칩, 또는 이들의 임의의 조합에 의해 측정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 1 항에 있어서, FAM19A5를 암호화하는 핵산 수준은 RT-PCT, 실시간 중합효소 연쇄 반응, 또는 노던 블롯에 의해 측정되는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 1 항에 있어서, 생물학적 샘플은 조직, 세포, 혈액, 혈청, 혈장, 침, 소변, 뇌척수액(CSF), 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 삭제
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 제 1 항에 있어서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 및 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하며,
    (i) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 11, 12, 및 13에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 23, 24, 및 25에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
    (ii) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 14, 15, 및 16에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 26, 27, 및 28에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
    (iii) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 17, 18, 및 19에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 29, 30, 및 31에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    (iv) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 20, 21, 및 22에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 32, 33, 및 34에 제시된 아미노산 서열을 포함하는
    것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제 1 항 또는 제 13 항에 있어서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며,
    (i) VH는 SEQ ID NO: 35에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO: 39에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
    (ii) VH는 SEQ ID NO: 36에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO: 40에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
    (iii) VH는 SEQ ID NO: 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO: 41에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    (iv) VH는 SEQ ID NO: 38에 제시된 아미노산 서열을 포함하고, VL은 SEQ ID NO: 42에 제시된 아미노산 서열을 포함하는
    것을 특징으로 하는 방법.
  15. 삭제
  16. 제 1 항에 있어서, 항-FAM19A5 항체는 키메라 항체, 인간화된 항체, 또는 인간 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5(FAM19A5)에 대한 길항제("FAM19A5 길항제")를 포함하는 진단이 필요한 대상의 기분 장애 진단용 조성물로서,
    상기 기분 장애는 주요 우울 장애(MDD) 또는 양극성 장애(BD)이고,
    상기 FAM19A5 길항제는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, miRNA, FAM19A5를 표적화하는 dsRNA, 앱타머, PNA, 이들을 포함하는 벡터, 또는 이들의 임의의 조합;이거나 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체("항-FAM19A5 항체") 또는 그것의 항원-결합 단편, 항-FAM19A5 항체 또는 그것의 항원-결합 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 그 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터;
    인 것을 특징으로 하는 조성물.
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