CN111263820A - 抗序列相似家族19成员a5抗体用于治疗和诊断情绪障碍的用途 - Google Patents

抗序列相似家族19成员a5抗体用于治疗和诊断情绪障碍的用途 Download PDF

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Abstract

本公开涉及一种在受试者中诊断情绪障碍的方法，其包括用特异性结合FAM19A5的拮抗剂(例如，抗体或其抗原结合片段)测量血清FAM19A5浓度。本公开还涉及一种在有此需要的受试者中治疗情绪障碍的方法，该方法包括向该受试者施用FAM19A5拮抗剂。

Description

抗序列相似家族19成员A5抗体用于治疗和诊断情绪障碍的 用途
对电子提交的序列表的引用
随本申请一起递交的在ASCII文本文件(名称：3763.007PC02_ST25.txt；大小：166,984字节；以及创建日期：2018年10月1日)中的电子提交序列表的内容通过引用整体并入本文。
技术领域
本公开提供了使用特异性结合序列相似家族19成员A5(FAM19A5)的拮抗剂(例如抗体或其抗原结合片段)或包括此类拮抗剂的组合物在受试者(例如人)中诊断和/或治疗情绪障碍如重度抑郁症和躁郁症的方法。本公开还提供了使用FAM19A5拮抗剂鉴定患有情绪障碍的受试者的方法。
背景技术
情绪障碍是一类精神疾病，主要影响个体的感情状态。根据潜在的症状，情绪障碍可以分为三个基本类别：(i)情绪高涨(躁狂或轻度躁狂)；(ii)抑郁；和(iii)在躁狂和抑郁之间循环的情绪。情绪障碍的主要类型包含：重度抑郁症、心境恶劣(持续至少两年的慢性、低度、抑郁和/或易怒的情绪)、与另一种健康状况(例如，癌症、受伤、感染和慢性疾病)相关的情绪障碍以及物质诱发的(例如药物治疗、药物滥用、酒精中毒、暴露于毒素)情绪障碍。
重度抑郁症(MDD)，也称为严重抑郁、临床抑郁和单相抑郁，是最常见的情绪障碍并影响全球超过2亿人。Vos T等人，《柳叶刀(Lancet)》388:1545-1602(2016)。躁郁症(BD)，也称为躁狂抑郁病或躁狂抑郁症，与极端情绪波动的反复发作相关，包括感情高涨(躁狂或轻度躁狂)和低落(抑郁)。Anderson I.M.等人，《英国医学杂志(BMJ)》345:e8508(2012)。BD可以影响各个年龄段的个体(尽管中位发病年龄为25岁)，并且是世界第六大致残原因。
虽然尚不清楚情绪障碍的确切原因，但通常认为神经递质(例如多巴胺、去甲肾上腺素或5-羟色胺)水平的失衡起着重要作用。Manji H.K.等人，《世界精神病学(WorldPsychiatry)》2:136-46(2003)；Nutt D.J.，《临床精神病学杂志(J Clin Psychiatry)》69Suppl E1:4-7(2008)。神经影像学和验尸研究还表明，情绪障碍与大脑某些区域(例如，亚属前扣带皮层、海马、额叶皮层、亚属前额叶皮层、纹状体和白质)的细胞组成中的明显异常之间的关联。Harrison P.J.等人，《大脑(Brain)》125:1428-1449(2002)；Banasr M等人，《细胞生物学现状(Curr Opin Cell Biol.)》23:730-737(2011)。
目前，尚无用于诊断情绪障碍的精确定量方法。当前的方法在很大程度上是定性的，并且基于医疗保健专业人员对个体行为的主观评估和/或个体或护理人员提供的信息。此类方法导致许多患者的不正确诊断。Ruggero C.J.等人，《临床精神病学杂志(J ClinPsychiatry)》72:1207-13(2011)。因此，当前需要针对情绪障碍的更有效的治疗和诊断选择。
发明内容
本文提供了一种在有此需要的受试者中诊断情绪障碍的方法，该方法包括使抗序列相似家族19成员A5(FAM19A5)的拮抗剂(“FAM19A5拮抗剂”)与受试者的生物样品接触，并测量样品中的FAM19A5蛋白水平或FAM19A5 mRNA水平。在一些实施例中，接触和测量在体外进行。
在一些实施例中，与FAM19A5的参考蛋白水平(在没有情绪障碍的受试者的样品中的FAM19A5的蛋白水平)或编码FAM19A5的参考核酸水平(在没有情绪障碍的受试者样品中的编码FAM19A5的核酸水平)相比，受试者表现出更高的FAM19A5蛋白水平或更高的编码FAM19A5的核酸水平。
在一些实施例中，通过免疫组织化学、蛋白印迹、放射性免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫扩散、免疫沉淀测定、Ouchterlony免疫扩散方法、火箭免疫电泳、组织免疫染色方法、补体结合测定、FACS、蛋白芯片或其任何组合测量FAM19A5的蛋白水平。在一些实施例中，通过RT-PCT、实时聚合酶链反应或RNA印迹测量编码FAM19A5的核酸水平。
在一些实施例中，生物样品包括组织、细胞、血液、血清、血浆、唾液、尿液、脑脊髓液(CSF)或其任何组合。
本文还公开了用于治疗有此需要的受试者的情绪障碍的FAM19A5拮抗剂。
本公开还提供了用于在患有情绪障碍的受试者中增加皮质回厚度的FAM19A5拮抗剂。在一些实施例中，皮质回包括横向额极回、背后扣带回、岛盖部、三角部、额中回、梭状回、舌回、颞平面、楔叶、眶部、颞横前回、颞平面或其任何组合。
在一些实施例中，情绪障碍(例如，关于用于本文公开用途的方法和/或FAM19A5拮抗剂)包括重度抑郁症(MDD)、躁郁症(BD)、轻度抑郁症、持续性抑郁症(心境恶劣)、季节性情感障碍(SAD)、精神病性抑郁、产后抑郁、经前焦虑症(PMDD)、情境性抑郁、非典型抑郁、焦虑症或其任何组合。
在一些实施例中，FAM19A5拮抗剂是反义寡核苷酸、siRNA、shRNA、miRNA、靶向FAM19A5的dsRNA、适体、PNA、包括其的载体或其任何组合。在其他实施例中，FAM19A5拮抗剂是与FAM19A5蛋白特异性结合的抗体(“抗FAM19A5抗体”)。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中
(i)重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：11、12和13所示的氨基酸序列，和轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：23、24和25所示的氨基酸序列；
(ii)重链CDR1，CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：14、15和16所示的氨基酸序列，和轻链CDR1，CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：26、27和28所示的氨基酸序列；
(iii)重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：17、18和19所示的氨基酸序列，和轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：29、30和31所示的氨基酸序列；或者
(iv)重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：20、21和22所示的氨基酸序列，和轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：32、33和34所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中
(i)VH包括SEQ ID NO：35所示的氨基酸序列，和VL包括SEQ ID NO：39所示的氨基酸序列；
(ii)VH包括SEQ ID NO：36所示的氨基酸序列，和VL包括SEQ ID NO：40所示的氨基酸序列；
(iii)VH包括SEQ ID NO：37所示的氨基酸序列，和VL包括SEQ ID NO：41所示的氨基酸序列；或者
(iv)VH包括SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列，和VL包括SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括重链可变区(VH)和轻链可变区，其中所述重链可变区包括与SEQ ID NO：35、36、37或38所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列；并且其中所述轻链可变区包括与SEQID NO：39、40、41或42所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体是嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。
实施例
实施例1.一种在有此需要的受试者中诊断情绪障碍的方法，包括测量受试者的样品中的序列相似家族19成员A5(FAM19A5)的蛋白水平或编码FAM19A5的核酸水平。
实施例2.一种鉴定患有情绪障碍的受试者的方法，包括测量受试者的样品中的FAM19A5的蛋白水平或编码FAM19A5的核酸水平。
实施例3.实施例1或2的方法，其中所述测量包括使抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段与受试者的样品接触。
实施例4.实施例1或2的方法，其中通过与所述核酸互补的核苷酸序列测量编码FAM19A5的核酸水平。
实施例5.实施例1-3中任一项的方法，其中通过免疫组织化学、蛋白印迹、放射性免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫扩散、免疫沉淀测定、Ouchterlony免疫扩散方法、火箭免疫电泳、组织免疫染色方法、补体结合测定、FACS、蛋白芯片或其任何组合测量FAM19A5的蛋白水平。
实施例6.实施例1、2和4中任一项的方法，其中通过RT-PCT、实时聚合酶链反应或RNA印迹测量编码FAM19A5的核酸水平。
实施例7.实施例1-6中任一项的方法，其中所述样品包括组织、细胞、血液、血清、血浆、唾液、尿液、脑脊髓液(CSF)或其任何组合。
实施例8.实施例1-7中任一项的方法，其中与FAM19A5的参考蛋白水平(在没有情绪障碍的受试者的样品中的FAM19A5的蛋白水平)或编码FAM19A5的参考核酸水平(在没有情绪障碍的受试者样品中的编码FAM19A5的核酸水平)相比，所述受试者表现出更高的FAM19A5蛋白水平或更高的编码FAM19A5的核酸水平。
实施例9.实施例8的方法，其中所述受试者表现出FAM19A5的蛋白水平或编码FAM19A5的核酸水平增加至少1.1倍、至少1.2倍、至少1.3倍、至少1.4倍、至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少15倍、至少20倍、至少25倍或至少30倍。
实施例10.实施例1、2、3、5和7-9中任一项的方法，其中所述FAM19A5的蛋白水平通过ELISA测量。
实施例11.实施例10的方法，其中通过ELISA测量的FAM19A5的参考蛋白水平为约2.0ng/ml、约1.9ng/ml、约1.8ng/ml、约1.7ng/ml、约1.6ng/ml、约1.5ng/ml、约1.4ng/ml、约1.3ng/ml、约1.2ng/ml、约1.1ng/ml、约1ng/ml、约0.9ng/ml、约0.8ng/ml、约0.7ng/ml、约0.6ng/ml、约0.5ng/ml、约0.4ng/ml、约0.3ng/ml、约0.2ng/ml、约0.1ng/ml或更低。
实施例12.实施例11的方法，其中通过ELISA测量的FAM19A5的参考蛋白水平为约2.0ng/ml或更低。
实施例13.实施例9-12中任一项的方法，其中FAM19A5的蛋白水平增加或编码FAM19A5的核酸水平增加与受试者的皮质回厚度降低有关。
实施例14.实施例1-13中任一项的方法，其中在诊断或鉴定之后用抗抑郁药或抗精神病药治疗所述受试者。
实施例15.实施例14的方法，其中所述抗抑郁药包括选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)、5-羟色胺-去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRI)、5-羟色胺调节剂和刺激剂(SMS)、5-羟色胺拮抗剂和再摄取抑制剂(SARI)、去甲肾上腺素再摄取抑制剂(NRI)、三环抗抑郁药(TCA)、四环抗抑郁药(TeCA)、单胺氧化酶抑制剂(MAOI)或其任何组合。
实施例16.实施例15的方法，其中所述SSRI包括西酞普兰
Figure BDA0002433381950000051
依他普仑
Figure BDA0002433381950000052
帕罗西汀
Figure BDA0002433381950000053
氟西汀
Figure BDA0002433381950000054
氟伏沙明
Figure BDA0002433381950000055
舍曲林
Figure BDA0002433381950000056
齐美利定
Figure BDA0002433381950000061
吲达品
Figure BDA0002433381950000062
或其任何组合。
实施例17.实施例15的方法，其中所述SNRI包括去甲文拉法辛
Figure BDA0002433381950000063
度洛西汀
Figure BDA0002433381950000064
左旋米那普仑
Figure BDA0002433381950000065
米那普仑
Figure BDA0002433381950000066
Figure BDA0002433381950000067
托芬那辛
Figure BDA0002433381950000068
文拉法辛
Figure BDA0002433381950000069
或其任何组合。
实施例18.实施例15的方法，其中所述SMS包括维拉唑酮
Figure BDA00024333819500000610
沃替西汀
Figure BDA00024333819500000611
或其任何组合。
实施例19.实施例15的方法，其中所述SARI包括依托哌酮
Figure BDA00024333819500000612
Figure BDA00024333819500000613
奈法唑酮
Figure BDA00024333819500000614
曲唑酮
Figure BDA00024333819500000615
或其任何组合。
实施例20.实施例15的方法，其中所述NRI包括瑞波西汀
Figure BDA00024333819500000616
维洛沙秦
Figure BDA00024333819500000617
阿托西汀
Figure BDA00024333819500000618
或其任何组合。
实施例21.实施例15的方法，其中所述TCA包括阿米替林
Figure BDA00024333819500000619
氧阿米替林
Figure BDA00024333819500000620
氯米帕明
Figure BDA00024333819500000621
地昔帕明
Figure BDA00024333819500000622
二苯西平
Figure BDA00024333819500000623
二甲他林
Figure BDA00024333819500000624
度硫平
Figure BDA00024333819500000625
多虑平
Figure BDA00024333819500000626
丙咪嗪
Figure BDA00024333819500000627
洛非帕明
Figure BDA00024333819500000628
美利曲辛
Figure BDA00024333819500000629
Figure BDA00024333819500000630
硝沙西平
Figure BDA00024333819500000631
去甲替林
Figure BDA00024333819500000632
Figure BDA00024333819500000633
诺昔替林
Figure BDA00024333819500000634
哌泊非嗪
Figure BDA00024333819500000635
普罗替林
Figure BDA00024333819500000636
曲米帕明
Figure BDA00024333819500000637
布替林
Figure BDA00024333819500000638
地美替林
Figure BDA00024333819500000639
氧米帕明
Figure BDA00024333819500000640
Figure BDA00024333819500000641
伊普吲哚
Figure BDA00024333819500000642
美他帕明
Figure BDA00024333819500000643
丙吡西平
Figure BDA00024333819500000644
奎纽帕明
Figure BDA00024333819500000645
奥匹哌醇
Figure BDA00024333819500000646
噻奈普汀
Figure BDA00024333819500000647
咪奈丁
Figure BDA00024333819500000648
硫西新
Figure BDA00024333819500000649
或其任何组合。
实施例22.实施例15的方法，其中所述TeCA包括阿莫沙平
Figure BDA00024333819500000650
马普替林
Figure BDA00024333819500000651
米安色林
Figure BDA00024333819500000652
米氮平
Figure BDA00024333819500000653
司普替林
Figure BDA00024333819500000654
或其任何组合。
实施例23.实施例15的方法，其中所述MAOI包括异卡波肼
Figure BDA00024333819500000655
苯乙肼
Figure BDA00024333819500000656
苯环丙胺
Figure BDA00024333819500000657
苯莫辛
Figure BDA00024333819500000658
异丙氯肼
Figure BDA0002433381950000071
异丙烟肼
Figure BDA00024333819500000753
美巴那肼
Figure BDA0002433381950000072
尼亚酰胺
Figure BDA0002433381950000073
奥他莫辛
Figure BDA0002433381950000074
苯异丙肼
Figure BDA0002433381950000075
苯氧丙肼
Figure BDA0002433381950000076
匹戊肼
Figure BDA0002433381950000077
沙夫肼
Figure BDA0002433381950000078
司来吉兰
Figure BDA0002433381950000079
Figure BDA00024333819500000710
卡罗沙酮
Figure BDA00024333819500000711
美曲吲哚
Figure BDA00024333819500000712
吗氯贝胺
Figure BDA00024333819500000713
吡吲哚
Figure BDA00024333819500000714
托洛沙酮
Figure BDA00024333819500000715
依普贝胺
Figure BDA00024333819500000716
苯哒吗啉
Figure BDA00024333819500000717
或其任何组合。
实施例24.实施例14的方法，其中所述抗精神病药包括典型的抗精神病药或非典型的抗精神病药。
实施例25.实施例24的方法，其中所述典型的抗精神病药包括氯丙嗪
Figure BDA00024333819500000718
氯普噻吨
Figure BDA00024333819500000719
左米丙嗪
Figure BDA00024333819500000720
Figure BDA00024333819500000721
美索达嗪
Figure BDA00024333819500000722
哌氰嗪
Figure BDA00024333819500000723
普马嗪
Figure BDA00024333819500000724
甲硫哒嗪
Figure BDA00024333819500000725
洛沙平
Figure BDA00024333819500000726
吗啉吲酮
Figure BDA00024333819500000727
奋乃静
Figure BDA00024333819500000728
替沃噻吨
Figure BDA00024333819500000729
氟哌利多
Figure BDA00024333819500000730
氟哌噻吨
Figure BDA00024333819500000731
氟奋乃静
Figure BDA00024333819500000732
氟哌啶醇
Figure BDA00024333819500000733
匹莫齐特
Figure BDA00024333819500000734
普鲁氯嗪
Figure BDA00024333819500000735
硫丙拉嗪
Figure BDA00024333819500000736
三氟啦嗪
Figure BDA00024333819500000737
珠氯噻醇
Figure BDA00024333819500000738
或其任何组合。
实施例26.实施例24的方法，其中所述非典型的抗精神病药包括氨磺必利
Figure BDA00024333819500000739
鲁拉西酮
Figure BDA00024333819500000740
喹硫平
Figure BDA00024333819500000741
利培酮
Figure BDA00024333819500000742
奥氮平
Figure BDA00024333819500000743
阿立哌唑
Figure BDA00024333819500000744
齐拉西酮
Figure BDA00024333819500000745
匹莫范色林
Figure BDA00024333819500000746
氯氮平
Figure BDA00024333819500000747
帕潘立酮
Figure BDA00024333819500000748
阿塞那平
Figure BDA00024333819500000749
依匹哌唑
Figure BDA00024333819500000750
卡利拉嗪
Figure BDA00024333819500000751
伊潘立酮
Figure BDA00024333819500000752
或其任何组合。
实施例27.实施例14的方法，其中所述抗抑郁药是FAM19A5拮抗剂。
实施例28.一种在有此需要的受试者中治疗情绪障碍的方法，包括向所述受试者施用FAM19A5拮抗剂。
实施例29.一种在有此需要的受试者中减轻、抑制或改善情绪障碍的一种或多种症状的方法，包括向所述受试者施用FAM19A5拮抗剂。
实施例30.实施例1-29中任一项的方法，其中所述情绪障碍选自由重度抑郁症(MDD)、躁郁症(BD)、轻度抑郁症、持续性抑郁症(心境恶劣)、季节性情感障碍(SAD)、精神病性抑郁、产后抑郁、经前焦虑症(PMDD)、情境性抑郁、非典型抑郁、焦虑症或其任何组合组成的群组。
实施例31.实施例28-30中任一项的方法，其中所述情绪障碍与受试者的皮质回厚度降低有关或由其引起。
实施例32.一种用于在患有情绪障碍的受试者中增加皮质回厚度的方法，包括向所述受试者施用FAM19A5拮抗剂。
实施例33.实施例13-32中任一项的方法，其中所述皮质回选自由横向额极回、背后扣带回、岛盖部、三角部、额中回、梭状回、舌回、颞平面、楔叶、眶部、颞横前回、颞平面或其任何组合组成的群组。
实施例34.实施例1-33中任一项的方法，其中所述情绪障碍是重度抑郁症(MDD)。
实施例35.实施例1-33中任一项的方法，其中所述情绪障碍是躁郁症(BD)。
实施例36.实施例28-35中任一项的方法，其中所述情绪障碍与受试者中FAM19A5的蛋白水平或编码FAM19A5蛋白的核酸水平的增加有关。
实施例37.实施例27-36中任一项的方法，其中所述FAM19A5拮抗剂是反义寡核苷酸、siRNA、shRNA、miRNA、靶向FAM19A5的dsRNA、适体、PNA、包括其的载体或其任何组合。
实施例38.实施例27-36中任一项的方法，其中所述FAM19A5拮抗剂是抗FAM19A5抗体、编码所述抗FAM19A5抗体的多核苷酸、包括其多核苷酸的载体、包括其多核苷酸的细胞或其任何组合。
实施例39.实施例38的方法，其中所述FAM19A5拮抗剂是抗FAM19A5抗体。
实施例40.实施例39的方法，其中所述抗FAM19A5抗体表现出选自以下的性质：
(a)以ELISA测量的10nM或更小的KD结合可溶性人FAM19A5；
(b)以ELISA测量的10nM或更小的KD结合膜结合的人FAM19A5；或者
(c)(a)和(b)二者。
实施例41.实施例39或40的方法，其中所述抗FAM19A5抗体与包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3的参考抗体交叉竞争与人FAM19A5表位结合，
(i)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：11的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：12的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：13的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：23的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：24的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：25的氨基酸序列；
(ii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：14的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：15的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：26的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：28的氨基酸序列；
(iii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：17的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：18的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：29的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：30的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：31的氨基酸序列；或者
(iv)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：20的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：21的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：22的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：32的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：33的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：34的氨基酸序列。
实施例42.实施例39-41中任一项的方法，其中所述抗FAM19A5抗体与包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3的参考抗体结合相同的FAM19A5表位，
(i)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：11的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：12的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：13的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：23的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：24的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：25的氨基酸序列；
(ii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：14的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：15的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：26的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：28的氨基酸序列；
(iii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：17的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：18的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：29的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：30的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：31的氨基酸序列；或者
(iv)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：20的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQID NO：21的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：22的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：32的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：33的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：34的氨基酸序列。
实施例43.实施例39-42中任一项的方法，其中所述抗FAM19A5抗体结合至少一个FAM19A5表位，其为SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：9。
实施例44.实施例39-42中任一项的方法，其中所述抗FAM19A5抗体仅结合FAM19A5表位，其为SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：9。
实施例45.实施例39-43中任一项的方法，其中所述抗FAM19A5抗体进一步结合另外的FAM19A5表位。
实施例46.实施例45的方法，其中所述另外的FAM19A5表位选自由SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10及其任何组合组成的群组。
实施例47.实施例39-46中任一项的方法，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3。
实施例48.实施例47的方法，其中所述抗FAM19A5抗体的重链CDR3包括SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：19或SEQ ID NO：22的氨基酸序列。
实施例49.实施例47或48的方法，其中所述抗FAM19A5抗体的重链CDR1包括SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：17或SEQ ID NO：20的氨基酸序列。
实施例50.实施例47-49中任一项的方法，其中所述抗FAM19A5抗体的重链CDR2包括SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：18或SEQ ID NO：21的氨基酸序列。
实施例51.实施例47-50中任一项的方法，其中所述抗FAM19A5抗体的轻链CDR1包括SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：29或SEQ ID NO：32的氨基酸序列。
实施例52.实施例47-51中任一项的方法，其中所述抗FAM19A5抗体的轻链CDR2包括SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：30或SEQ ID NO：33的氨基酸序列。
实施例53.实施例47-52中任一项的方法，其中所述抗FAM19A5抗体的轻链CDR3包括SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：31或SEQ ID NO：34的氨基酸序列。
实施例54.实施例47的方法，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中
(i)重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：11、12和13，和轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：23、24和25；
(ii)重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：14、15和16，和轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：26、27和28；
(iii)重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：17、18和19，和轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：29、30和31；或者
(iv)重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：20、21和22，和轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：32、33和34。
实施例55.实施例39-47中任一项的方法，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链可变结构域和/或轻链可变结构域，所述重链可变结构域包括SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQID NO：37或SEQ ID NO：38且所述轻链可变结构域包括SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：40、SEQID NO：41或SEQ ID NO：42。
实施例56.实施例55的方法，其中所述抗FAM19A5抗体包括含SEQ ID NO：35的重链可变结构域和含SEQ ID NO：39的轻链可变结构域。
实施例57.实施例55的方法，其中所述抗FAM19A5抗体包括含SEQ ID NO：36的重链可变结构域和含SEQ ID NO：40的轻链可变结构域。
实施例58.实施例55的方法，其中所述抗FAM19A5抗体包括含SEQ ID NO：37的重链可变结构域和含SEQ ID NO：41的轻链可变结构域。
实施例59.实施例55的方法，其中所述抗FAM19A5抗体包括含SEQ ID NO：38的重链可变结构域和含SEQ ID NO：42的轻链可变结构域。
实施例60.实施例39-47中任一项的方法，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括与SEQ ID NO：35、36、37或38所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
实施例61.实施例39-47中任一项的方法，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：39、40、41或42所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
实施例62.实施例39-47中任一项的方法，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括与SEQ ID NO：35、36、37或38所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列；并且其中所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：39、40、41或42所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
实施例63.实施例39-62中任一项的方法，其中所述抗FAM19A5抗体是嵌合抗体、人抗体或人源化抗体。
实施例64.实施例39-63中任一项的方法，其中所述抗FAM19A5抗体包括Fab、Fab'、F(ab')2、Fv或单链Fv(scFv)。
实施例65.实施例39-64中任一项的方法，其中所述抗FAM19A5抗体选自由IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、其变体及其任何组合组成的群组。
实施例66.实施例65的方法，其中所述抗FAM19A5抗体是IgG2、IgG4或其组合。
实施例67.实施例65的方法，其中所述抗FAM19A5抗体包括IgG2/IgG4同种型抗体。
实施例68.实施例39-64中任一项的方法，其中所述抗FAM19A5抗体进一步包括没有Fc功能的恒定区。
实施例69.实施例39-68中任一项的方法，其中所述抗FAM19A5抗体与试剂连接，从而形成免疫缀合物。
实施例70.实施例27-69中任一项的方法，其中所述FAM19A5拮抗剂与药学上可接受的载体一起配制。
实施例71.实施例70的方法，其中所述FAM19A5拮抗剂静脉内、口服、肠胃外、鞘内、脑室内、肺、肌内、皮下、玻璃体内或心室内施用。
实施例72.实施例1-71中任一项的方法，其中所述受试者是人。
附图说明
图1显示了(i)未给药的重度抑郁症(DN-MDD)(n＝58)、(ii)给药的重度抑郁症(M-MDD)(n＝52)、(iii)躁郁症I(n＝26)和II(n＝17)(统称为“BD”)、以及(iv)健康对照组(HC)(n＝112)的血清FAM19A5浓度(ng/ml)比较。每个圆圈代表一个患者。所示的水平黑线表明每个组中的平均血清FAM19A5浓度。所有比较均使用ANCOVA进行，包含年龄和性别作为协变量。数据点上方的“*”表明与健康患者相比在统计学上有显著差异(p<0.001)。
图2A至2D提供了散点图，其显示了在不同组的患者中观察到的血清FAM19A5浓度(ng/ml)的分布。图2A显示了健康患者(HC)的FAM19A5蛋白水平。图2B显示了未给药的重度抑郁症患者(DN-MDD)的FAM19A5蛋白水平。图2C和2D分别显示了给药的重度抑郁症患者(M-MDD)和未给药的I或II型躁郁症(BD)的FAM19A5蛋白水平。每个圆圈代表一个患者(x轴)。虚线表明血清FAM19A5浓度的参考值(即2ng/ml)。
图3提供了显示在未给药的重度抑郁症(n＝51)、给药的重度抑郁症(n＝51)、躁郁症(n＝28)和健康对照组(n＝92)中，血清FAM19A5浓度与全脑皮质厚度之间的相关性的表格。仅显示在皮质厚度和血清FAM19A5浓度之间显示显著相关性的皮质区。进行了双尾Pearson偏相关分析，以分析皮质厚度与血清FAM19A5浓度之间的相关性，以年龄、性别、HDRS得分和药物(仅针对MDD组)作为协变量进行调整。进行Fisher的r到z转换，以比较未给药的MDD(DN-MDD)、给药的MDD(M-MDD)或躁郁症(BD)组与健康对照组(HC)组的相关系数。在相关分析中应用错误发现率(FDR)进行多重比较校正，q<0.05；在两个半球进行了76次比较。在多重比较校正系数的比较中应用错误发现率(FDR)，q<0.05；未给药的MDD组中有15次比较。
图4A至4F提供了散点图，显示了来自健康患者(HC，深灰色)或未给药的重度抑郁症患者(DN-MDD，浅灰色)的皮质厚度(y轴)与血清FAM19A5蛋白浓度(x轴)之间的关系。显示了六个不同脑区域的皮质厚度：左横向额极回(图4A)、左背后扣带回(图4B)、左岛盖部(图4C)、左三角部(图4D)、左额中回(图4E)和右岛盖部(图4F)。进行了Pearson的偏相关分析，以年龄、性别和HDRS得分(未用于HC组)进行了调整。为了比较MDD和健康对照组之间的相关系数，使用了Fisher的r到z转换。在图4A至4F中，每个圆圈代表单个患者，并且水平线显示最佳拟合线。
图5A至5E提供了来自不同比较组的血清FAM19A5蛋白水平的受试者工作特征曲线(ROC曲线)。不同的比较组包括：(i)针对健康患者(HC)的未给药的重度抑郁症患者(DN-MDD)，(图5A)；(ii)针对健康患者(HC)的给药的重度抑郁症患者(M-MDD)，(图5B)；(iii)针对健康患者(HC)的未给药的I或II型躁郁症患者(BD)，(图5C)；和(iv)针对给药的重度抑郁症患者(M-MDD)的未给药的I或II型躁郁症患者(BD)，(图5D)；和(v)针对未给药的重度抑郁症患者(DN-MDD)的未给药的I或II型躁郁症患者(BD)，(图5E)。每条曲线的右下象限中均提供了AUC、灵敏度、特异性和准确性值。
具体实施方式
本公开提供了可以通过测量受试者样品(例如血清)中的FAM19A5的蛋白水平或编码FAM19A5的核酸水平来诊断情绪障碍如重度抑郁症或躁郁症。本公开还提供了可以通过测量受试者的样品(例如血清)中的FAM19A5的蛋白水平或编码FAM19A5的核酸水平来鉴定患有情绪障碍的受试者。本公开进一步提供了用于治疗、控制或改善情绪障碍(例如，重度抑郁症或躁郁症)的方法，所述方法包括向有此需要的受试者施用试剂，例如抗FAM19A5拮抗剂，例如抗FAM19A5抗体。
为了便于理解本文公开的公开内容，定义了许多术语和短语。在整个详细描述中阐述了附加定义。
I.定义
在整个本公开中，术语“一”或“一个”实体是指该实体中的一个或多个；例如，“抗体”应理解为代表一个或多个抗体。因此，术语“一”(或“一个”)、“一个或多个”和“至少一个”在本文中可以互换使用。
此外，在本文中使用的“和/或”应被视为两个指定的特征或部件中的每个与或不与另一个的具体公开。因此，在短语中使用的术语“和/或”如本文的“A和/或B”旨在包括“A和B”、“A或B”、“A”(单独)和“B”(单独)。同样地，在短语中使用的术语“和/或”如“A、B和/或C”旨在涵盖以下方面中的每个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。
应当理解，无论在本文何处用语言“包括”描述方面，也都另外提供了根据“由……组成”和/或“基本上由……组成”描述的类似方面。
除非另外定义，否则本文中使用的所有技术和科学术语具有与本公开相关的领域的普通技术人员通常理解的相同含义。例如，《生物医学和分子生物学简明词典(ConciseDictionary of Biomedicine and Molecular Biology)》，Juo,Pei-Show，第二版，2002，CRC Press；《细胞和分子生物学词典(The Dictionary of Cell and MolecularBiology)》，第三版，1999，Academic Press；和《生物化学和分子生物学牛津词典(OxfordDictionary Of Biochemistry And Molecular Biology)》修订版，2000，OxfordUniversity Press为本领域技术人员提供了本公开中使用的许多术语的通用词典。
单位、前缀和符号以其国际单位制(SI)可接受的形式表示。数字范围包含定义所述范围的数字。除非另外指明，否则氨基酸序列是以氨基至羧基定向自左至右书写。本文提供的标题不限制本公开的各种方面，其可通过参考整个说明书得出。因此，即将在下文定义的术语通过参考说明书全文而得到更充分地定义。
本文使用术语“约”意指大约、大致、左右或在其区域中。当术语“约”与数值范围结合使用时，它通过在所述数值的上方和下方扩展边界来修改该范围。通常，术语“约”可以以上或下(高于或低于)例如10％的差异来修改高于或低于所述值的数值。
本文使用术语“治疗(treat、treating和treatment)”是指对受试者执行的任何类型的干预或过程，或将活性剂施用于受试者，目的是逆转、缓解、改善、抑制或减慢或预防与疾病相关的症状、并发症、状况或生化标记的进展、发展、严重程度或复发。治疗可以是患有疾病的受试者或未患疾病的受试者的治疗(例如，用于预防)。
如本文所用，“施用”是指使用本领域技术人员已知的各种方法和递送系统将治疗剂或包括治疗剂的组合物物理引入受试者。本文所述抗体的不同施用途径包含静脉内、腹膜内、肌内、皮下、脊柱或其他肠胃外施用途径，例如通过注射或输注。如本文所用，短语“肠胃外施用”意指除肠和局部施用以外的施用方式，通常通过注射，并且包括但不限于静脉内、腹膜内、肌内、动脉内、鞘内、淋巴内、病灶内、囊内、眶内、心内、皮内、经气管、气管内、肺、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、心室内、玻璃体内、硬膜外和胸骨内注射和输注，以及体内电穿孔。或者，本文所述的抗体可以通过非肠胃外途径施用，例如局部、表皮或粘膜施用途径，例如鼻内、口服、阴道、直肠、舌下或局部。也可以例如一次、多次和/或在一个或多个延长的时段内进行施用。
如本文所用，术语“治疗有效量”是指有效“治疗”受试者的情绪障碍或降低疾病或病症(例如情绪障碍如重度抑郁症或躁郁症)的风险、潜力、可能性或发生的单独或与另一种治疗剂组合的药物量。“治疗有效量”包含为患有疾病或病症或处于患有疾病或病症的风险中的受试者提供一些改善或益处的药物或治疗剂的量。因此，“治疗有效”量是降低疾病或病症的风险、潜力、可能性或发生或提供一些缓解、缓和和/或降低疾病或病症(例如情绪障碍如重度抑郁症或躁郁症)的至少一种指示物和/或减少疾病或病症的至少一种临床症状的量。
如本文所用，术语“诊断”是指可用于确定或预测患者是否患有给定疾病或病况，从而鉴定适合治疗的受试者的方法。技术人员可以基于一种或多种诊断标记物(例如，FAM19A5)进行诊断，其中诊断标记物的存在、不存在、量或量的变化指示了该病况的存在、严重程度或不存在。在一些实施例中，来自受试者的生物样品中FAM19A5表达的增加指示情绪障碍(例如，重度抑郁症或躁郁症)。术语“诊断”不是指以100％的准确性确定特定疾病或病症的存在或不存在的能力，或者甚至相比不发生给定的过程或结果更有可能发生。相反，技术人员将理解，术语“诊断”是指受试者中某种疾病或病症存在的可能性增加。在一些实施例中，术语“诊断”包含一种或多种鉴定患有情绪障碍的受试者的诊断方法。
用于诊断情绪障碍(例如，重度抑郁症或躁郁症)的组合物包含用于测量有此需要(例如，怀疑患有情绪障碍)的受试者的样品中的FAM19A5的蛋白水平或编码FAM19A5的核酸(例如，mRNA)水平的试剂。此类试剂包含具有与FAM19A5 mRNA互补的序列的寡核苷酸，与FAM19A5 mRNA特异性结合的引物或核酸探针，以及与FAM19A5蛋白特异性结合的抗体或其抗原结合片段。
如本文所用，术语“受试者”包含任何人或非人动物。术语“非人动物”包含所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，例如非人灵长类、羊、狗、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。
术语“情绪障碍”是指影响个体感情状态的任何类型的精神疾病。如本文所用，情绪障碍的特征在于与行为、生理、认知、神经化学和精神运动功能障碍有关的情绪和情感的普遍、长期和失效的夸大。情绪障碍可以与持续的情绪高涨(躁狂)、持续的情绪抑郁或在躁狂和抑郁之间循环的情绪有关。情绪障碍本质上可以是遗传性的和/或由次要因素(例如疾病、药物、药物治疗)诱发的。情绪障碍的实例包括但不限于重度抑郁症(MDD)、躁郁症(BD)、轻度抑郁症、持续性抑郁症(心境恶劣)、季节性情感障碍(SAD)、精神病性抑郁、产后抑郁、复发性短暂抑郁、经前焦虑症(PMDD)、情境性抑郁、非典型抑郁、焦虑症和循环情感性精神障碍。
如本文所用，术语“重度抑郁症”或“MDD”是指特征为两个或更多个重度抑郁发作的情绪障碍。MDD的症状可包括疲劳、毫无价值或内疚感、注意力不集中或犹豫不定、失眠或嗜睡、对几乎所有活动的兴趣或愉悦感明显减弱、坐立不安、反复出现的死亡或自杀想法以及体重显著下降或增加(5％体重变化)。MDD以及其他情绪障碍的诊断标准可在例如《精神障碍诊断和统计手册(Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders)》，第四版，DSM-
Figure BDA0002433381950000171
-TR，美国精神病学协会(DSM IV)中找到，并可用于评估受试者。
术语“躁郁症”是指特征为交替的极端情绪时段的情绪障碍。患有躁郁症的人会经历情绪循环，通常从过度兴奋或易怒(躁狂)转变为悲伤和绝望(抑郁)，然后回到原地。躁郁症的诊断描述在例如DSM IV中。躁郁症的类别包含但不限于I型躁郁症(躁狂伴有或不伴有重度抑郁)和II型躁郁症(轻度躁狂伴有重度抑郁)。
如本文所用，术语“情绪”是指人的内部感情状态。
如本文所用，术语“躁狂”或“躁狂的”是指极端兴奋的精神错乱状态。术语“轻度躁狂”是指极端程度稍低的躁狂发作，严重程度级别较低。
术语“序列相似家族19成员A5”或“FAM19A5”是指属于TAFA家族(也称为FAM19家族)的五个高度同源蛋白的蛋白，并且主要在脑和脊髓中表达。Tang T.Y.等人，《基因组学(Genomics)》83(4):727-34(2004)。这些蛋白在固定位置含有保守的半胱氨酸残基，并且与CC趋化因子家族成员巨噬细胞炎症蛋白1-α(MIP-1-α)远缘相关。TAFA蛋白主要在脑和脊髓的特定区域表达。据信这些蛋白是在神经发生过程中由成年神经干细胞产生和分泌的。FAM19A5也称为TAFA5或趋化因子样蛋白TAFA-5。
FAM19A5主要在脊椎动物的脑中表达，并且据信FAM19A5对于完整中枢神经系统的发育、分化和形成是重要的。FAM19A5在许多中枢神经系统损害和/或变性脑疾病(例如亨廷顿氏病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏病、脑脊髓损伤、中风和脑肿瘤)的发病机理中也起着重要作用。中枢神经系统受损后，神经干细胞会产生FAM19A5，从而诱导正常星形胶质细胞分化为反应性星形胶质细胞。这些反应性星形胶质细胞(连同小胶质细胞)可以表达多种ECM(例如蛋白聚糖)并诱导神经胶质瘢痕的形成，神经胶质疤痕可以像网一样围绕中枢神经系统的受损区域并阻止神经元的再生。抗FAM19A5的抗体可用于预防和/或治疗中枢神经系统损伤和/或疾病。参见美国专利号9,579,398。
在人类中，编码FAM19A5的基因位于22号染色体上。存在三种人FAM19A5(UniProt：Q7Z5A7)同种型，据信其由选择性剪接产生：由132个氨基酸组成的同种型1(UniProt：Q7Z5A7-1)；由125个氨基酸组成同种型2(UniProt：Q7Z5A7-2)；和由53个氨基酸组成的同种型3(UniProt：Q7Z5A7-3)。据信人FAM19A5蛋白以膜结合和可溶性(分泌)形式存在。据信同种型1是具有一个跨膜区的膜蛋白。在Tang T.Y.等人，《基因组学(Genomics)》83(4):727-34(2004)中作为分泌蛋白(可溶性)报道的同种型2，在氨基酸位置1-25处含有信号肽。根据EST数据预测同种型3。以下是三种已知的人FAM19A5同种型的氨基酸序列。
(I)同种型1(UniProt：Q7Z5A7-1，跨膜蛋白)：该同种型已选为规范序列。
MAPSPRTGSRQDATALPSMSSTFWAFMILASLLIAYCSQLAAGTCEIVTLDRDSSQPRRTIARQTARCACRKGQIAGTTRARPACVDARIIKTKQWCDMLPCLEGEGCDLLINRSGWTCTQPGGRIKTTTVS(SEQ ID NO：1)
(II)同种型2(UniProt：Q7Z5A7-2，可溶性蛋白)：
MQLLKALWALAGAALCCFLVLVIHAQFLKEGQLAAGTCEIVTLDRDSSQPRRTIARQTARCACRKGQIAGTTRARPACVDARIIKTKQWCDMLPCLEGEGCDLLINRSGWTCTQPGGRIKTTTVS(SEQ ID NO：2)
(III)同种型3(UniProt：Q7Z5A7-3)：
MYHHREWPARIIKTKQWCDMLPCLEGEGCDLLINRSGWTCTQPGGRIKTTTVS(SEQ ID NO：3)
术语“FAM19A5”包括细胞天然表达的FAM19A5的任何变体或同种型。因此，本文所述的抗体可以与相同物种中的不同同种型(例如，人FAM19A5的不同同种型)交叉反应，或与来自人类以外物种的FAM19A5(例如，小鼠FAM19A5)交叉反应。或者，抗体可以对人FAM19A5具有特异性，并且不能表现出与其他物种的任何交叉反应性。FAM19A5或其任何变体和同种型可以从天然表达它们的细胞或组织中分离或重组产生。编码人FAM19A5的多核苷酸具有GenBank登录号BC039396和以下序列：
表1A：人FAM19A5的多核苷酸序列
Figure BDA0002433381950000191
Figure BDA0002433381950000201
术语“针对FAM19A5蛋白的拮抗剂”或“FAM19A5拮抗剂”是指抑制FAM19A5蛋白表达的所有拮抗剂。此类拮抗剂可以是肽、核酸或化合物。更具体地，拮抗剂可以是反义寡核苷酸、siRNA、shRNA、miRNA、dsRNA、适体、靶向FAM19A5的PNA(肽核酸)或包括其的载体。在一些实施例中，拮抗剂可以是特异性结合FAM19A5蛋白的抗体或其抗原结合片段。
术语“抗体(antibody或antibodies)”是本领域的术语，并且在本文中可互换使用，并且是指具有特异性结合抗原的抗原结合位点的分子。本文所用的术语包括完整抗体和其任何抗原结合片段(即“抗原结合片段”)或单链。在一个实施例中，“抗体”指包括通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白或其抗原结合片段。在另一实施例中，“抗体”指包括单个可变结构域例如VHH结构域的单链抗体。每条重链由重链可变区(本文缩写为VH)和重链恒定区构成。在某些天然存在的抗体中，重链恒定区由三个结构域CH1、CH2和CH3构成。在某些天然存在的抗体中，每条轻链由轻链可变区(本文缩写为VL)和轻链恒定区构成。轻链恒定区由一个结构域CL构成。
VH和VL区可进一步细分为称为互补决定区(CDR)的高变区，其中散布有更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR构成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)。
术语“Kabat编号”和类似术语是本领域公认的，指对抗体或其抗原结合片段的重链和轻链可变区中的氨基酸残基进行编号的系统。在某些方面，抗体的CDR可根据Kabat编号系统(参见，例如，Kabat EA和Wu TT(1971)《纽约科学院年鉴(Ann NY Acad Sci)》190:382-391和Kabat EA等人，(1991)《具有免疫学意义的蛋白序列(Sequences of Proteinsof Immunological Interest)》第五版，美国卫生与公共服务部，NIH公开号91-3242)确定。使用Kabat编号系统，抗体重链分子内的CDR典型存在于第31位至第35位氨基酸(其任选地可以包含一个或两个另外的氨基酸)、(在35位之后(在Kabat编号方案中称为35A和35B)(CDR1))第50位至第65位氨基酸(CDR2)和第95位至第102位氨基酸(CDR3)。使用Kabat编号系统，抗体轻链分子内的CDR典型存在于第24位至第34位氨基酸(CDR1)、第50位至第56位氨基酸(CDR2)和第89位至第97位氨基酸(CDR3)。在一个具体的实施例中，本文所述抗体的CDR已根据Kabat编号方案确定。
短语“如Kabat中的氨基酸位置编号”、“Kabat位置”及其语法变体是指Kabat等人，《具有免疫学意义的蛋白序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)》第五版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)中的抗体编译的用于重链可变结构域或轻链可变结构域的编号系统。使用这种编号系统，实际的线性氨基酸序列可以含有更少或更多的氨基酸，对应于可变结构域的FW或CDR的缩短或插入。例如，重链可变结构域可包含H2的残基52之后的单个氨基酸插入物(根据Kabat的残基52a)和重链FW残基82之后的插入残基(例如，根据Kabat的残基82a、82B和82c等)。参见表1B。
表1B
Figure BDA0002433381950000211
对于给定抗体，可以通过在抗体序列的同源区与“标准”Kabat编号序列比对来确定残基的Kabat编号。而Chothia是指结构环的位置(Chothia和Lesk，《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》196:901-917(1987))。当使用Kabat编号惯例编号时，Chothia CDR-H1环的末端在H32和H34之间变化，这取决于环的长度(这是因为Kabat编号方案将插入物置于H35A和H35B；如果35A和35B都不存在，则环在32处结束；如果仅35A存在，则环在33处结束；如果35A和35B都存在，则环在34处结束)。AbM高变区代表Kabat CDR和Chothia结构环之间的折衷，并且被Oxford Molecular的AbM抗体建模软件使用。
IMGT(ImMunoGeneTics)也提供了免疫球蛋白可变区(包括CDR)的编号系统。参见，例如，通过引用并入本文的Lefranc M.P.等人，《发展与比较免疫学(Dev.Comp.Immunol.)》27:55-77(2003)。IMGT编号系统基于超过5,000个序列的比对、结构数据和高变环的表征，并且允许容易地比较所有物种的可变区和CDR区。根据IMGT编号方案，VH-CDR1在第26位至第35位，VH-CDR2在第51位至第57位，VH-CDR3在第93位至第102位，VL-CDR1在第27位至第32位，VL-CDR2在第50位至第52位，并且VL-CDR3在第89位至第97位。
对于本公开中讨论的所有重链恒定区氨基酸位置，编号是根据Edelman等人(1969)《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》63(1):78-85中首先描述的EU索引，该EU索引描述了骨髓瘤蛋白EU的氨基酸序列，其是测序的首个人IgG1。Edelman等人的EU索引也在Kabat等人(1991)《具有免疫学意义的蛋白序列(Sequences of Proteins ofImmunological Interest)》第五版，United States Public Health Service,NationalInstitutes of Health,Bethesda中列出。因此，短语“Kabat中列出的EU索引”或“Kabat的EU索引”和“根据Kabat中列出的EU索引的第……位”及其语法变体是指基于如Kabat 1991中列出的Edelman等人的人IgG1 EU抗体的残基编号系统。
用于可变结构域(重链和轻链二者)和轻链恒定区氨基酸序列的编号系统如Kabat1991中所列。
抗体可以是任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY)、任何类别(例如IgD、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1或IgA2)或任何亚类(例如人IgG1、IgG2、IgG3和IgG4；和小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3)的免疫球蛋白分子。免疫球蛋白如IgG1以几种同种异型存在，它们在至多几个氨基酸上彼此不同。本文公开的抗体可以来自任何通常已知的同种型、类别、亚类或同种异型。在某些实施例中，本文所述的抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类的抗体或其任何杂合体。在某些实施例中，抗体是人IgG1亚类或人IgG2或人IgG4亚类的抗体。
“抗体”包含，例如，天然存在的和非天然存在的抗体二者；单克隆和多克隆抗体；嵌合和人源化抗体；人和非人抗体；完全合成的抗体；单链抗体；单特异性抗体；多特异性抗体(包括双特异性抗体)；包括两个重链和两个轻链分子的四聚体抗体；抗体轻链单体；抗体重链单体；抗体轻链二聚体、抗体重链二聚体；抗体轻链-抗体重链对；胞内抗体；异源缀合抗体；单价抗体；骆驼化抗体；affybody；抗独特型(抗-Id)抗体(包括，例如，抗-抗-Id抗体)，和单结构域抗体(sdAbs)，其包含由完全能够进行抗原结合的单一单体可变抗体结构域(例如，VH结构域或VL结构域)组成的结合分子。Harmen M.M.和Hard H.J.《应用微生物学与生物技术(Appl Microbiol Biotechnol.)》77(1):13-22(2007)。
抗体的术语“抗原结合部分”和“抗原结合片段”可互换使用并且指保留特异性结合抗原(例如人FAM19A5)的能力的抗体的一个或多个片段。此类“片段”的长度为例如约8个至约1500个氨基酸，合适的长度为约8个至约745个氨基酸，合适的长度为约8个至约300个氨基酸，例如约8个至约200个氨基酸，或约10个至约50个或100个氨基酸。已经显示抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来进行。包括在抗体例如本文所述的抗FAM19A5抗体的术语“抗原结合部分”内的结合片段的实例包含(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包括在铰链区由二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)Fd片段，由VH和CH1结构域组成；(iv)Fv片段，由抗体单臂的VL和VH结构域组成，和二硫键连接的Fvs(sdFv)；(v)dAb片段(Ward等人，《自然(Nature)》341:544-546(1989))，由VH结构域组成；和(vi)分离的互补决定区(CDR)或(vii)两个或更多个分离的可任选地通过合成接头连接的CDR的组合。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由单独的基因编码，但是它们可以使用重组方法通过合成接头连接，所述合成接头使得它们能够被制备成单个蛋白链，其中VL和VH区配对以形成单价分子(称为单链Fv(scFv))；参见，例如，Bird等人《科学(Science)》242:423-426(1988)；和Huston等人《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》85:5879-5883(1988)。此类单链抗体也旨在包括在抗体的术语“抗原结合部分”内。这些抗体片段使用本领域技术人员已知的常规技术获得，并且以与完整抗体相同的方式筛选片段的效用。抗原结合部分可以通过重组DNA技术或通过完整免疫球蛋白的酶或化学裂解来产生。
如本文所用，术语“可变区”和“可变结构域”可互换使用，并且是本领域常见的。可变区典型地指抗体的一部分，通常指轻链或重链的一部分，典型地在成熟重链氨基末端的约110至120个氨基酸及在成熟轻链中的约90至115个氨基酸，其在抗体之间在序列方面广泛不同，并用于特定抗体对其特定抗原的结合和特异性。序列的可变性集中在称为互补决定区(CDR)的那些区域中，而可变结构域中更高度保守的区域称为框架区(FR)。
不希望受任何特定机制或理论的束缚，据信轻链和重链的CDR主要负责抗体与抗原的相互作用和特异性。在某些实施例中，可变区是人可变区。在某些实施例中，可变区包括啮齿类或鼠CDR和人框架区(FR)。在一些实施例中，可变区是灵长类(例如，非人灵长类)可变区。在其他实施例中，可变区包括啮齿类或鼠CDR和灵长类(例如非人灵长类)框架区(FR)。
如本文所用，术语“重链”(HC)在用于指代抗体时，可指基于恒定结构域的氨基酸序列的任何不同类型，例如α、δ、ε、γ和μ，其分别产生IgA、IgD、IgE、IgG和IgM类抗体，包含IgG亚类，例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
如本文所用，术语“轻链”(LC)在用于指代抗体时，可以指基于恒定结构域的氨基酸序列的任何不同类型，例如κ或λ。轻链氨基酸序列是本领域公知的。在具体的实施例中，轻链是人轻链。
术语“VL”和“VL结构域”可互换使用，并且是指抗体的轻链可变区。
术语“VH”和“VH结构域”可互换使用，并且是指抗体的重链可变区。
如本文所用，术语“恒定区”和“恒定结构域”可互换，并且在本领域中已知。恒定区是抗体部分，例如轻链和/或重链的羧基末端部分，其不直接参与抗体与抗原的结合，但可表现出各种效应子功能，例如与Fc受体的相互作用。免疫球蛋白分子的恒定区通常具有相对于免疫球蛋白可变结构域更保守的氨基酸序列。
“Fc区”(可结晶片段区)或“Fc结构域”或“Fc”是指抗体重链的C-末端区，其介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包含与位于免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)上的Fc受体的结合或与经典补体系统的第一组分(C1q)的结合。因此，Fc区包括抗体的恒定区，不包括第一恒定区免疫球蛋白结构域(例如CH1或CL)。在IgG、IgA和IgD抗体同种型中，Fc区包括两个相同的蛋白片段，其源自抗体两条重链的第二(CH2)和第三(CH3)恒定结构域；IgM和IgE Fc区在每条多肽链中包括三个重链恒定结构域(CH结构域2-4)。对于IgG，Fc区包括免疫球蛋白结构域Cγ2和Cγ3以及Cγ1和Cγ2之间的铰链。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可能变化，但是人IgG重链Fc区通常被定义为从C226或P230位的氨基酸残基(或这两个氨基酸之间的氨基酸)延伸至重链的羧基末端，其中编号根据如Kabat中的EU索引。人IgGFc区的CH2结构域从约氨基酸231延伸至约氨基酸340，而CH3结构域位于Fc区中Cm结构域的C-末端侧，即它从IgG的约氨基酸341延伸至约氨基酸447。如本文所用，Fc区可以是天然序列Fc，包括任何同种异型变体，或变体Fc(例如，非天然存在的Fc)。Fc也可以指分离的或在含Fc的蛋白多肽的上下文中的该区域，例如“包括Fc区的结合蛋白”，其也称为“Fc融合蛋白”(例如抗体或免疫粘附素)。
“天然序列Fc区”或“天然序列Fc”包括与天然存在的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fc区包含天然序列人IgG1 Fc区；天然序列人IgG2 Fc区；天然序列人IgG3 Fc区；和天然序列人IgG4 Fc区及其天然存在的变体。天然序列Fc包含各种Fes同种异型(参见，例如Jeffris等人《单克隆抗体(mAbs)》1:1(2009)；Vidarsson G.等人《免疫学前沿(Front Immunol.)》5:520(在线公开于2014年10月20日))。
“Fc受体”或“FcR”是结合免疫球蛋白Fc区的受体。结合IgG抗体的FcR包括FcγR家族的受体，包含这些受体的等位基因变体和可变剪接形式。FcγR家族由三种激活受体(小鼠中的FcγRI、FcγRIII和FcγRIV；人中的FcγRIA、FcγRIIA和FcγRIIIA)和一种抑制受体(FcγRIIB)组成。人IgG1结合至大部分人Fc受体并引起最强的Fc效应子功能。就其结合的激活Fc受体的类型而言，认为其等同于鼠IgG2a。相反，人IgG4引起最小的Fc效应子功能。Vidarsson G.等人《免疫学前沿(Front Immunol.)》5:520(在线公开于2014年10月20日)。
恒定区可以例如通过重组技术来操作，以消除一种或多种效应子功能。“效应子功能”是指抗体Fc区与Fc受体或配体的相互作用，或由此产生的生物化学事件。示例性的“效应子功能”包含C1q结合、补体依赖的细胞毒性(CDC)、Fc受体结合、FcγR-介导的效应子功能如ADCC和抗体依赖的细胞介导的吞噬作用(ADCP)以及细胞表面受体(例如B细胞受体；BCR)的下调。此类效应子功能通常需要Fc区与结合结构域(例如抗体可变结构域)组合。因此，术语“无Fc功能的恒定区”包含由Fc区介导的具有降低的或不具有一种或多种效应子功能的恒定区。
抗体的效应子功能可以通过不同的方法降低或避免。通过使用缺乏Fc区的抗体片段(如例如Fab、F(ab')2、单链Fv(scFv)或由单体VH或VL结构域组成的sdAb)可以降低或避免抗体的效应子功能。或者，所谓的非糖基化抗体可通过除去与Fc区中特定残基连接的糖来产生，以降低抗体的效应子功能，同时保留Fc区的其它有价值的属性(例如延长的半衰期和异二聚化)。非糖基化抗体可以通过例如缺失或改变糖所连接的残基、酶促除去糖、在糖基化抑制剂存在下培养的细胞中产生抗体或通过在不能糖基化蛋白的细胞(例如细菌宿主细胞)中表达抗体来产生。参见例如美国公开号20120100140。另一种方法是使用来自IgG亚类的具有降低的效应子功能的Fc区，例如，IgG2和IgG4抗体的特征在于具有比IgG1和IgG3更低水平的Fc效应子功能。Fc部分CH2结构域中最接近铰链区的残基负责抗体的效应子功能，因为它含有针对先天免疫系统效应细胞上的C1q(补体)和IgG-Fc受体(FcγR)的大部分重叠结合位点。Vidarsson G.等人《免疫学前沿(Front Immunol.)》5:520(在线公开于2014年10月20日)。因此，具有降低的Fc效应子功能或不具有Fc效应子功能的抗体可通过产生例如包括来自IgG4同种型的IgG抗体的CH2结构域和来自IgG1同种型的IgG抗体的CH3结构域的嵌合Fc区，或包括来自IgG2的铰链区和来自IgG4的CH2区的嵌合Fc区(参见例如Lau C等人《免疫学杂志(J.Immunol.)》191:4769-4777(2013))，或具有导致Fc效应子功能改变(例如，降低的FC功能或无FC功能)的突变的Fc区来制备。此类具有突变的Fc区是本领域已知的。参见，例如，美国公开号20120100140和其中引用的美国和PCT申请以及An等人《单克隆抗体(mAbs)》1:6,572-579(2009)。
“铰链”、“铰链结构域”、“铰链区”或“抗体铰链区”是指连接CH1结构域和CH2结构域的重链恒定区的结构域，并包含铰链的上部、中部和下部(Roux等人《免疫学杂志(J.Immunol.)》161:4083(1998))。铰链在抗体的结合区和效应区之间提供不同水平的灵活性，并且还为两个重链恒定区之间的分子间二硫键提供位点。如本文所用，对于所有IgG同种型，铰链起始于Glu216并终止于Gly237(Roux等人，《免疫学杂志(J.Immunol.)》161:4083(1988))。野生型IgG1、IgG2、IgG3和IgG4铰链的序列是本领域已知的。参见，例如，Kabat EA等人(1991)《具有免疫学意义的蛋白序列(Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest)》第五版，美国卫生与公共服务部，NIH公开号91-3242；Vidarsson G.等人《免疫学前沿(Front Immunol.)》5:520(在线公开于2014年10月20日)。
术语“CH1结构域”是指重链恒定区，其在重链恒定结构域中连接可变结构域与铰链。如本文所用，CH1结构域起始于A118并终止于V215。术语“CH1结构域”包含野生型CH1结构域，及其天然存在的变体(例如同种异型)。IgG1、IgG2、IgG3和IgG4(包含野生型和同种异型)的CH1结构域序列是本领域已知的。参见，例如，Kabat EA等人，(1991)同上和VidarssonG.等人《免疫学前沿(Front Immunol.)》5:520(在线公开于2014年10月20日)。示例性CH1结构域包含具有改变抗体生物活性例如半衰期的突变的CH1结构域，例如描述于美国公开号20120100140和其中引用的美国专利和出版物以及PCT出版物中。
术语“CH2结构域”指重链恒定结构域中连接铰链与CH3结构域的重链恒定区。如本文所用，CH2结构域起始于P238并终止于K340。术语“CH2结构域”包含野生型CH2结构域，及其天然存在的变体(例如同种异型)。IgG1、IgG2、IgG3和IgG4(包括野生型和同种异型)的CH2结构域序列是本领域已知的。参见，例如，Kabat EA等人，(1991)同上和Vidarsson G.等人《免疫学前沿(Front Immunol.)》5:520(在线公开于2014年10月20日)。示例性CH2结构域包含具有改变抗体生物活性例如半衰期和/或Fc效应子功能降低的突变的CH2结构域，例如描述于美国公开号20120100140和其中引用的美国专利和出版物以及PCT出版物中。
术语“CH3结构域”指重链恒定区，其是重链恒定结构域中CH2结构域的C-末端。如本文所用，CH3结构域起始于G341并终止于K447。术语“CH3结构域”包含野生型CH3结构域，及其天然存在的变体(例如同种异型)。IgG1、IgG2、IgG3和IgG4(包括野生型和同种异型)的CH3结构域序列是本领域已知的。参见，例如，Kabat EA等人，(1991)同上和Vidarsson G.等人《免疫学前沿(Front Immunol.)》5:520(在线公开于2014年10月20日)。示例性CH3结构域包含具有改变抗体生物活性例如半衰期的突变的CH3结构域，例如描述于美国公开号20120100140和其中引用的美国专利和出版物以及PCT出版物中。
如本文所用，“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类别(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE抗体)。
“同种异型”指特定同种型组中天然存在的变体，这些变体在几个氨基酸上有所不同(参见例如Jeffris等人(2009)《单克隆抗体(mAbs)》1:1)。本文所述的抗体可以是任何同种异型的。IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的同种异型是本领域已知的。参见，例如，Kabat EA等人，(1991)同上；Vidarsson G.等人《免疫学前沿(Front Immunol.)》5:520(在线公开于2014年10月20日)；和Lefranc MP，《单克隆抗体(mAbs)》1:4,1-7(2009)。
短语“识别抗原的抗体”和“对抗原具有特异性的抗体”在本文中与术语“特异性结合抗原的抗体”可互换使用。
如本文所用，“分离的抗体”旨在是指基本上不含具有不同抗原特异性的其它抗体的抗体(例如，特异性结合FAM19A5的分离的抗体基本上不含特异性结合除FAM19A5以外的抗原的抗体)。然而，特异性结合FAM19A5表位的分离的抗体可与来自不同物种的其它FAM19A5蛋白具有交叉反应性。
“结合亲和力”通常指分子(例如抗体)的单个结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间的相互作用的总和的强度。除非另有说明，否则如本文所用，“结合亲和力”是指反映结合对成员(例如抗体和抗原)之间1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以由解离常数(KD)表示。亲和力可以以本领域已知的多种方式测量和/或表达，包括但不限于平衡解离常数(KD)和平衡缔合常数(KA)。KD由koff/kon的商计算并且表示为摩尔浓度(M)，而KA由kon/koff的商计算。kon是指例如抗体与抗原的缔合速率常数，并且koff是指例如抗体与抗原的解离。kon和koff可以通过本领域普通技术人员已知的技术来确定，例如免疫测定(例如酶联免疫吸附测定(ELISA))、BIACORETM或动力学排除测定
Figure BDA0002433381950000281
如本文所用，术语“特异性结合”、“特异性识别”、“特异的结合”、“选择的结合”和“选择性结合”是抗体上下文中的类似术语，并且是指结合抗原(例如表位或免疫复合物)的分子(例如抗体)，此类结合是本领域技术人员所理解的。例如，特异性结合抗原的分子可以通过较低的亲和力结合其它肽或多肽，如通过例如免疫测定、BIACORETM、
Figure BDA0002433381950000282
3000仪器(Sapidyne Instruments,Boise,ID)或本领域已知的其它测定所确定的。在一个具体实施例中，特异性结合抗原的分子结合抗原的KA至少是2log、2.5log、3log、4log或大于该分子结合另一抗原时的KA。
抗体典型地以高亲和力特异性结合其同源抗原，这通过10-5至10-11M或更低的解离常数(KD)反映。任何KD大于约10-4M一般被认为是表明非特异性结合。如本文所用，“特异性结合”抗原的抗体是指以高亲和力结合抗原和基本上相同的抗原的抗体，意指当通过例如免疫测定(例如ELISA)或表面等离子体共振(SPR)技术在BIACORETM2000仪器中使用预定抗原测定时，具有10-7M或更低，优选10-8M或更低，甚至更优选10-9M或更低，并且最优选10-8M至10-10M或更低的KD，但不以高亲和力结合无关抗原。
如本文所用，术语“抗原”是指任何天然或合成的免疫原性物质，例如蛋白、肽或半抗原。抗原可以是FAM19A5或其片段。
如本文所用，“表位”是本领域的术语，并且是指抗体可特异性结合的抗原的局部区域。表位可以是例如多肽的连续氨基酸(线性或连续表位)，或者表位可以例如来自一个或多个多肽的两个或更多个非连续区域(构象、非线性、不连续或非连续表位)。由连续氨基酸形成的表位典型但不总是在暴露于变性溶剂时保留，而由三级折叠形成的表位典型地在用变性溶剂处理时丢失。表位典型包含独特空间构象中的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或20个氨基酸。用于确定哪些表位被给定抗体结合的方法(即表位作图)是本领域公知的，并且包含例如免疫印迹和免疫沉淀测定，其中测试来自(例如来自FMAM19A5)的重叠或连续肽与给定抗体(例如抗FAM19A5抗体)的反应性。测定表位空间构象的方法包含本领域技术和本文所述的那些，例如，x-射线晶体学、2-维核磁共振和HDX-MS(参见，例如，《分子生物学方法中的表位作图方案(Epitope Mapping Protocols in Methods inMolecular Biology)》，Vol.66,G.E.Morris,Ed.(1996))。
在某些实施例中，抗体结合的表位可以通过例如NMR光谱、X射线衍射晶体学研究、ELISA测定、与质谱(例如液相色谱电喷雾质谱)偶联的氢/氘交换、基于阵列的寡肽扫描测定和/或诱变作图(例如定点诱变作图)来测定。对于X射线晶体学，结晶可以使用本领域已知的任何方法完成(例如Giege R等人，《晶体学报D卷：生物晶体学(Acta Crystallogr DBiol Crystallogr)》50(Pt 4):339-350(1994)；McPherson A《欧洲生物化学杂志(Eur JBiochem)》189:1-23(1990)；Chayen NE《结构(Structure)》5:1269-1274(1997)；McPhersonA《生物化学杂志(J Biol Chem)》251:6300-6303(1976))。抗体：抗原晶体可以使用公知的X射线衍射技术研究，并且可以使用计算机软件如X-PLOR精制(Yale University,1992，由Molecular Simulations,Inc.发布；参见例如《酶学方法(Meth Enzymol)》(1985)，第114卷和第115卷，Wyckoff HW等人编辑；U.S.2004/0014194)和BUSTER(Bricogne G《晶体学报D卷：生物晶体学(Acta Crystallogr D Biol Crystallogr)》49(Pt 1):37-60(1993)；Bricogne G《酶学方法(Meth Enzymol)》276A:361-423(1997),ed Carter CW；Roversi P等人，《晶体学报D卷：生物晶体学(Acta Crystallogr D Biol Crystallogr)》56(Pt 10):1316-1323(2000))。诱变作图研究可以使用本领域技术人员已知的任何方法完成。参见，例如，Champe M等人，《生物化学杂志(J Biol Chem)》270(1995):1388-1394和Cunningham BC和Wells JA《科学(Science)》244:1081-1085(1989)描述了诱变技术，包含丙氨酸扫描诱变技术。
术语“表位作图”是指鉴定用于抗体-抗原识别的分子决定簇的过程。
关于两种或更多种抗体的术语“结合相同表位”是指抗体结合相同的氨基酸残基区段，如通过给定方法所测定的。用于确定抗体是否与本文所述抗体“FAM19A5上相同表位”结合的技术包含例如表位作图方法，例如，抗原：抗体复合物的晶体的x-射线分析，其提供了表位的原子分辨率和氢/氘交换质谱(HDX-MS)。其它方法监测抗体与抗原片段或抗原的突变变体的结合，其中由于抗原序列内的氨基酸残基的修饰而导致的结合丧失通常被认为是表位组分的指示。此外，也可以使用用于表位作图的计算组合方法。这些方法依赖于相关抗体从组合噬菌体展示肽文库亲和分离特异性短肽的能力。具有相同VH和VL或相同CDR1、2和3序列的抗体预期结合相同表位。
“与另一抗体竞争结合靶标”的抗体是指(部分或完全)抑制另一抗体与靶标结合的抗体。可以使用已知的竞争实验来确定两种抗体是否彼此竞争结合靶标，即一种抗体是否抑制另一种抗体与靶标的结合以及抑制程度。在某些实施例中，抗体与另一种抗体竞争与靶标的结合并抑制另一种抗体与靶标的结合至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。抑制或竞争的水平可以不同，这取决于哪种抗体是“封闭抗体”(即，首先与靶标一起孵育的冷抗体)。竞争测定可如例如Ed Harlow和David Lane，《冷泉港方案(Cold Spring Harb Protoc)》；2006；doi:10.1101/pdb.prot4277或Ed Harlow和David Lane“《使用抗体(Using Antibodies)》”(Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY,USA 1999)的第11章中所述进行。竞争性抗体结合相同表位、重叠表位或相邻表位(例如，如通过位阻所证明的)。
其它竞争性结合测定包含：固相直接或间接放射性免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定(参见Stahli等人，《酶学方法(Methods inEnzymology)》9:242(1983))；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(参见Kirkland等人，《免疫学杂志(J.Immunol.)》137:3614(1986))；固相直接标记测定、固相直接标记夹心测定(参见Harlow和Lane，《抗体：实验室手册(Antibodies:A Laboratory Manual)》，Cold SpringHarbor Press(1988))；使用1-125标记的固相直接标记RIA(参见Morel等人，《分子免疫学(Mol.Immunol.)》25(1):7(1988))；固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(Cheung等人，《病毒学(Virology)》176:546(1990))；和直接标记的RIA(Moldenhauer等人，《斯堪的纳维亚免疫学杂志(Scand.J.Immunol.)》32:77(1990))。
“双特异性”或“双功能抗体”是具有两个不同的重链/轻链对和两个不同的结合位点的人工杂交抗体。双特异性抗体可通过多种方法产生，包含融合杂交瘤或连接Fab'片段。参见，例如Songsivilai和Lachmann，《临床与实验免疫学(Clin.Exp.Immunol.)》79:315-321(1990)；Kostelny等人，《免疫学杂志(J.Immunol.)》148,1547-1553(1992)。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指对特定表位显示单一结合特异性和亲和力的抗体或其中所有抗体对特定表位显示单一结合特异性和亲和力的抗体组合物。因此，术语“人单克隆抗体”是指显示单一结合特异性并且具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变和任选恒定区的抗体或抗体组合物。在一个实施例中，人单克隆抗体由杂交瘤产生，所述杂交瘤包含B细胞，所述B细胞得自转基因非人动物，例如转基因小鼠，其基因组包括与永生化细胞融合的人重链转基因和轻链转基因。
如本文所用，术语“重组人抗体”包含通过重组方法制备、表达、产生或分离的所有人抗体，例如(a)从对人免疫球蛋白基因转基因或转染色体的动物(例如小鼠)或从其制备的杂交瘤分离的抗体，(b)从转化以表达抗体的宿主细胞，例如从转染瘤分离的抗体，(c)从重组、组合人抗体文库分离的抗体，和(d)通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪接到其它DNA序列的任何其它方法制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人抗体包括利用由种系基因编码的特定人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区，但包含例如在抗体成熟期间发生的后续重排和突变。如本领域已知的(参见，例如，Lonberg《自然生物技术(NatureBiotech.)》23(9):1117-1125(2005))，可变区含有抗原结合结构域，其由重排以形成对外源抗原具有特异性的抗体的各种基因编码。除了重排之外，可变区还可以通过多个单个氨基酸改变(称为体细胞突变或超突变)来进一步修饰，以增加抗体对外源抗原的亲和力。恒定区将在对抗原的进一步响应中改变(即同种型转换)。因此，响应于抗原而编码轻链和重链免疫球蛋白多肽的重排和体细胞突变的核酸分子不能与原始核酸分子具有序列同一性，而是将基本上相同或相似(即，具有至少80％的同一性)。
“人”抗体(HuMAb)指具有可变区的抗体，其中框架区和CDR区都源自人种系免疫球蛋白序列。此外，如果抗体含有恒定区，则恒定区也源自人种系免疫球蛋白序列。本文所述的抗体可以包含不由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或通过体内体细胞突变引入的突变)。然而，如本文所用，术语“人抗体”不旨在包含其中源自另一哺乳动物物种如小鼠的种系的CDR序列已被移植到人框架序列上的抗体。术语“人”抗体和“全人”抗体同义使用。
“人源化”抗体指非人抗体CDR结构域之外的一些、大部分或全部氨基酸被源自人免疫球蛋白的相应氨基酸代替的抗体。在抗体的人源化形式的一个实施例中，CDR结构域之外的一些、大部分或所有氨基酸已被来自人免疫球蛋白的氨基酸代替，而一个或多个CDR区内的一些、大部分或所有氨基酸未改变。氨基酸的小添加、缺失、插入、取代或修饰是允许的，只要它们不消除抗体结合特定抗原的能力。“人源化”抗体保留了与原始抗体相似的抗原特异性。
“嵌合抗体”是指可变区源自一个物种而恒定区源自另一个物种的抗体，例如其中可变区源自小鼠抗体而恒定区源自人抗体的抗体。
如本文所用，术语“交叉反应性”是指本文所述抗体结合来自不同物种的FAM19A5的能力。例如，本文所述结合人FAM19A5的抗体也可结合另一物种FAM19A5(例如小鼠FAM19A5)。如本文所用，交叉反应性可通过在结合测定(例如SPR、ELISA)中检测与纯化抗原的特异反应性或与生理学表达FAM19A5的细胞结合或以其他方式与其功能相互作用来测量。测定交叉反应性的方法包含本文所述的标准结合测定，例如，通过使用BIACORETM2000SPR仪器(Biacore AB,Uppsala,Sweden)的BIACORETM表面等离子体共振(SPR)分析，或流式细胞术技术。
术语“天然存在的”在应用于本文的物体时是指物体可以在自然界中发现的事实。例如，存在于生物体(包括病毒)中的多肽或多核苷酸序列是天然存在的，所述生物体可以从天然来源分离并且在实验室中没有被人有意修饰。
“多肽”是指包括至少两个连续连接的氨基酸残基的链，链的长度没有上限。蛋白中的一个或多个氨基酸残基可以含有修饰，例如但不限于糖基化、磷酸化或二硫键形成。“蛋白”可以包括一种或多种多肽。
如本文所用，术语“核酸分子”旨在包含DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链或双链的，并且可以是cDNA。
如本文所用，术语“治疗有效量”是指有效“治疗”受试者的情绪障碍(例如重度抑郁症或躁郁症)或降低情绪障碍的风险、潜力、可能性或发生的单独或与另一种治疗剂组合的药物量。“治疗有效量”包含为患有情绪障碍或处于患有情绪障碍的风险中的受试者提供一些改善或益处的药物或治疗剂的量。因此，“治疗有效”量是降低情绪障碍的风险、潜力、可能性或发生或提供一些缓解、缓和和/或降低情绪障碍(例如重度抑郁症或躁郁症)的至少一种指示物和/或减少情绪障碍的至少一种临床症状的量。
II.诊断情绪障碍的方法
本文公开了在需要包括使FAM19A5拮抗剂(例如，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段)与受试者的生物样品接触并测量样品中FAM19A5的蛋白水平或编码FAM19A5的核酸(例如，mRNA)水平的受试者中诊断情绪障碍(例如，重度抑郁症或躁郁症)的方法。在一些实施例中，情绪障碍选自由重度抑郁症(MDD)、躁郁症(BD)、持续性抑郁症、季节性情感障碍(SAD)、精神病性抑郁、产后抑郁、经前焦虑症(PMDD)、情境性抑郁、非典型抑郁和其任何组合组成的群组。在某些实施例中，情绪障碍是重度抑郁症。在其他实施例中，情绪障碍是躁郁症。
在一个实施例中，与参考样品(例如，没有情绪障碍的受试者的样品)中FAM19A5的蛋白水平或编码FAM19A5的核酸水平相比，生物样品的FAM19A5的蛋白水平或编码FAM19A5的核酸水平增加至少1.1倍、至少1.2倍、至少1.3倍、至少1.4倍、至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少11倍、至少12倍、至少13倍、至少15倍、至少20倍、至少25倍或至少30倍。表现出FAM19A5的蛋白水平增加或编码FAM19A5的核酸水平增加的受试者可以被鉴定为疑似情绪障碍的受试者。
在一个实施例中，参考样品可以获自同一受试者，其中参考样品是在情绪障碍开始之前获得的。在另一个实施例中，参考样品可获自没有情绪障碍的对照受试者或对照受试者群体，例如健康对照受试者。
在某些实施例中，通过ELISA测量的FAM19A5的参考蛋白水平为约2.0ng/ml、约1.9ng/ml、约1.8ng/ml、约1.7ng/ml、约1.6ng/ml、约1.5ng/ml、约1.4ng/ml、约1.3ng/ml、约1.2ng/ml、约1.1ng/ml、约1ng/ml、约0.9ng/ml、约0.8ng/ml、约0.7ng/ml、约0.6ng/ml、约0.5ng/ml、约0.4ng/ml、约0.3ng/ml、约0.2ng/ml、约0.1ng/ml或更低。在其他实施例中，通过ELISA测量的FAM19A5的参考蛋白水平为约2.0ng/ml或更低。
在一些实施例中，怀疑患有情绪障碍的受试者显示的FAM19A5蛋白水平为至少2.1ng/ml、至少2.2ng/ml、至少2.3ng/ml、至少2.4ng/ml、至少2.5ng/ml、至少2.6ng/ml、至少2.7ng/ml、至少2.8ng/ml、至少2.9ng/ml、至少3.0ng/ml、至少3.5ng/ml、至少4.0ng/ml、至少4.5ng/ml、至少5.0ng/ml、至少6.0ng/ml、至少7ng/ml、至少9ng/ml、至少10ng/ml、至少11ng/ml、至少12ng/ml、至少13ng/ml、至少14ng/ml、至少15ng/ml、至少16ng/ml、至少17ng/ml、至少18ng/ml、至少19ng/ml、至少20ng/ml或至少25ng/ml。在其他实施例中，怀疑患有情绪障碍的受试者显示的FAM19A5蛋白水平为约2.0ng/ml至约1μg/ml、10ng/ml至约1μg/ml、2ng/ml至约500ng/ml(或约400ng/ml、300ng/ml、200ng/ml或100ng/ml)、3ng/ml至约400ng/ml。
关于本公开，已经表明患有情绪障碍的受试者在外周血中表达较高水平的FAM19A5。参见实例1。因此，本文公开的方法可用于通过测量受试者的血清中FAM19A5的蛋白水平或编码FAM19A5的核酸水平来诊断受试者的情绪障碍(例如，重度抑郁症或躁郁症)，其中与参考水平(例如，无情绪障碍的受试者中的FAM19A5水平)相比，增加的水平将表明该受试者患有情绪障碍。在一些实施例中，本公开可用于通过测量怀疑患有情绪障碍的受试者中的FAM19A5蛋白水平来确认情绪障碍的存在。在其他实施例中，本公开可以用于鉴定患有情绪障碍的受试者。此类方法可以比当前可用的诊断方法(例如，医疗保健专业人员对患者行为的主观评估)更加精确和定量。
在其他实施例中，本公开包含鉴定需要治疗情绪障碍的受试者的方法，该方法包括测量FAM19A5的蛋白或核酸水平，其中与对照水平相比，FAM19A5蛋白或编码FAM19A5的核酸水平增加表明受试者患有情绪障碍。在一些实施例中，本公开进一步包括指示医疗保健提供者治疗被鉴定为患有情绪障碍的受试者。在其他实施例中，本公开进一步包括通知医疗保健提供者诊断，例如存在情绪障碍。在一些实施例中，本公开进一步包括施用一种或多种试剂来治疗情绪障碍。
在一些实施例中，本公开的方法包含一种测量怀疑患有情绪障碍的受试者的皮质厚度的方法。如本文所示，本申请显示皮质厚度与FAM19A5蛋白水平成逆相关。因此，在一个实施例中，本公开包含一种测量除FAM19A5蛋白或核酸水平之外的皮质厚度的方法，以鉴定患有情绪障碍的受试者，其中皮质厚度的降低表明该受试者患有情绪障碍。
在某些实施例中，与对照受试者例如健康受试者的皮质厚度相比，潜在受试者的皮质厚度减少至少约1％、至少约2％、至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约6％、至少约7％、至少约8％、至少约9％、至少约10％、至少约11％、至少约12％、至少约13％、至少约14％、至少约15％、至少约16％、至少约17％、至少约18％、至少约19％或至少约20％。
在一些实施例中，可以为该方法测量的皮质区包括岛盖部、颞平面、左横向额极和背后扣带回、三角部、额中回和右舌和/或颞横前回。在一些实施例中，皮质厚度通过MRI测量，例如高分辨率MRI，任选地使用本领域已知的强大图像处理技术。在其他实施例中，皮质厚度通过3.0T Siemens Trio全身成像系统(Siemens Medical Systems,Iselin,NewJersey,United States)测量。
在一个实施例中，通过免疫组织化学、蛋白印迹、放射性免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫扩散、免疫沉淀测定、Ouchterlony免疫扩散方法、火箭免疫电泳、组织免疫染色方法、补体结合测定、FACS或蛋白芯片测量FAM19A5的蛋白水平。在一个实施例中，通过RT-PCR、实时聚合酶链反应或RNA印迹测量编码FAM19A5蛋白的核酸水平。在一些实施例中，生物样品包括组织、细胞、血液、血清、血浆、唾液、脑脊髓液、玻璃体内液或尿液。
在一些实施例中，通过使用抗FAM19A5抗体的测定来测量FAM19A5的蛋白水平。在其他实施例中，抗FAM19A5抗体是本文公开的抗体，例如2-13、3-2、1-65、1-28或其任何组合。
在其他实施例中，本公开的诊断可以与一种或多种已知的情绪障碍诊断方法结合。在一个实施例中，可以使用一个或多个诊断测试来排除可能导致情绪障碍的类似症状的其他严重医学病况，例如甲状腺疾病、维生素D缺乏、中枢神经系统肿瘤，头部创伤、多发性硬化、中风、梅毒、各种癌症(胰腺癌、前列腺癌、乳腺癌)和/或其他医学问题。在受试者患有其他严重医学病况的情况下，仅在不治疗情绪障碍的情况下才可以治疗受试者的其他严重医学病况。在其他实施例中，可以治疗受试者的其他严重医学病况以及情绪障碍。
在其他实施例中，一个或多个诊断测试包括身体检查。身体检查可以用来排除造成抑郁的物理原因，例如甲状腺功能低下、甲状腺功能亢进、库兴氏病。
除了FAM19A5蛋白或核酸水平，在一些实施例中，本公开的方法还包括血液测试以检查贫血以及甲状腺、其他激素、钙和/或维生素D水平、电解质、肝功能、毒理学筛查和/或肾功能。在其他实施例中，测试还可以包含鉴定严重疾病如脑肿瘤的大脑的CT扫描或MRI，诊断某些心脏问题的心电图(ECG)和/或记录脑电活动的脑电图(EEG)。
在其他实施例中，可以与FAM19A5蛋白和/或核酸水平组合使用的一个或多个诊断测试是问卷。示例性问卷包含：(i)患者健康问卷-9(PHQ-9)(即，基于当前的重度抑郁诊断标准的9项自我施用的诊断筛查和严重程度工具)；(ii)贝克抑郁量表(BDI)(即用于测量抑郁症状和感觉的严重程度的21题多项选择式自我报告)；(iii)Zung自评抑郁量表(即测量抑郁水平的简短调查，范围从正常到严重抑郁)；(iv)流行病学研究中心-抑郁量表(CES-D)(即允许患者评价其前一周的感觉、行为和观点的仪器)；(v)汉密尔顿抑郁量表(HRSD)，也称为HDRS或缩写为HAM-D(即，医生可以用来评估患者抑郁严重程度的多项选择问卷)，或其(i)至(v)的任何组合。
III.治疗情绪障碍的方法
本文还公开了基于本文公开的诊断来治疗、控制、改善或减少有此需要的受试者的情绪障碍(例如，重度抑郁症或躁郁症)的方法。在一些实施例中，情绪障碍的治疗包括向受试者施用针对FAM19A5的拮抗剂。在一个实施例中，拮抗剂是特异性结合FAM19A5蛋白的抗体或其抗原结合片段(“抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段”)、编码抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分的多核苷酸，或包括其多核苷酸的载体。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段与FAM19A5蛋白结合并降低FAM19A5活性。在某些实施例中，降低的FAM19A5活性将皮质回的厚度增加至正常水平(例如，健康受试者中相应皮质回的厚度)。
在其他实施例中，用一种或多种抗抑郁药治疗被诊断为患有情绪障碍的受试者。如本文所用，术语“抗抑郁药”或“抗抑郁药治疗”是指典型用于治疗或减轻临床抑郁的任何试剂或任何形式的心理治疗或心理疗法。抗抑郁药包含不同种类的化合物，包含例如选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(例如舍曲林或依他普仑)、三环抗抑郁药(例如地昔帕明)和多巴胺再摄取抑制剂(例如安非他酮)。典型地，不同类别的抗抑郁药通过不同的生化途径发挥其治疗作用。
抗抑郁药的实例包含但不限于选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)、5-羟色胺-去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRI)、5-羟色胺调节剂和刺激剂(SMS)、5-羟色胺拮抗剂和再摄取抑制剂(SARI)、去甲肾上腺素再摄取抑制剂(NRI)、三环抗抑郁药(TCA)、四环抗抑郁药(TeCA)和单胺氧化酶抑制剂(MAOI)。
SSRI的实例包含西酞普兰
Figure BDA0002433381950000361
依他普仑
Figure BDA0002433381950000362
帕罗西汀
Figure BDA0002433381950000363
氟西汀
Figure BDA0002433381950000364
氟伏沙明
Figure BDA0002433381950000365
舍曲林
Figure BDA0002433381950000366
齐美利定
Figure BDA0002433381950000367
和吲达品
Figure BDA0002433381950000368
SNRI的实例包含去甲文拉法辛
Figure BDA0002433381950000369
度洛西汀
Figure BDA00024333819500003610
左旋米那普仑
Figure BDA00024333819500003611
米那普仑
Figure BDA00024333819500003612
托芬那辛
Figure BDA00024333819500003613
和文拉法辛
Figure BDA00024333819500003614
SMS的实例包含维拉唑酮
Figure BDA00024333819500003615
和沃替西汀
Figure BDA00024333819500003616
SARI的实例包含依托哌酮
Figure BDA00024333819500003617
奈法唑酮
Figure BDA00024333819500003618
和曲唑酮
Figure BDA00024333819500003619
NRI的实例包含瑞波西汀
Figure BDA00024333819500003620
维洛沙秦
Figure BDA00024333819500003621
和阿托西汀
Figure BDA0002433381950000371
TCA的实例包含阿米替林
Figure BDA0002433381950000372
氧阿米替林
Figure BDA0002433381950000373
氯米帕明
Figure BDA0002433381950000374
地昔帕明
Figure BDA0002433381950000375
二苯西平
Figure BDA0002433381950000376
二甲他林
Figure BDA0002433381950000377
度硫平
Figure BDA0002433381950000378
多虑平
Figure BDA0002433381950000379
丙咪嗪
Figure BDA00024333819500003710
洛非帕明
Figure BDA00024333819500003711
美利曲辛
Figure BDA00024333819500003712
Figure BDA00024333819500003713
硝沙西平
Figure BDA00024333819500003714
去甲替林
Figure BDA00024333819500003715
Figure BDA00024333819500003716
诺昔替林
Figure BDA00024333819500003717
哌泊非嗪
Figure BDA00024333819500003718
普罗替林
Figure BDA00024333819500003719
曲米帕明
Figure BDA00024333819500003720
布替林
Figure BDA00024333819500003721
地美替林
Figure BDA00024333819500003722
氧米帕明
Figure BDA00024333819500003723
Figure BDA00024333819500003724
伊普吲哚
Figure BDA00024333819500003725
美他帕明
Figure BDA00024333819500003726
丙吡西平
Figure BDA00024333819500003727
奎纽帕明
Figure BDA00024333819500003728
奥匹哌醇
Figure BDA00024333819500003729
噻奈普汀
Figure BDA00024333819500003730
咪奈丁
Figure BDA00024333819500003731
和硫西新
Figure BDA00024333819500003732
TeCA的实例包含阿莫沙平
Figure BDA00024333819500003733
马普替林
Figure BDA00024333819500003734
米安色林
Figure BDA00024333819500003735
米氮平
Figure BDA00024333819500003736
和司普替林
Figure BDA00024333819500003737
MAOI的实例包含异卡波肼
Figure BDA00024333819500003738
苯乙肼
Figure BDA00024333819500003739
苯环丙胺
Figure BDA00024333819500003740
苯莫辛
Figure BDA00024333819500003741
异丙氯肼
Figure BDA00024333819500003742
异丙烟肼
Figure BDA00024333819500003743
美巴那肼
Figure BDA00024333819500003744
尼亚酰胺
Figure BDA00024333819500003745
奥他莫辛
Figure BDA00024333819500003746
苯异丙肼
Figure BDA00024333819500003747
苯氧丙肼
Figure BDA00024333819500003748
匹戊肼
Figure BDA00024333819500003749
沙夫肼
Figure BDA00024333819500003750
司来吉兰
Figure BDA00024333819500003751
Figure BDA00024333819500003752
卡罗沙酮
Figure BDA00024333819500003753
美曲吲哚
Figure BDA00024333819500003754
吗氯贝胺
Figure BDA00024333819500003755
吡吲哚
Figure BDA00024333819500003756
托洛沙酮
Figure BDA00024333819500003757
依普贝胺
Figure BDA00024333819500003758
苯哒吗啉
Figure BDA00024333819500003759
在一些实施例中，用一种或多种抗精神病药治疗被诊断为患有情绪障碍的受试者。如本文所用，术语“抗精神病药(antipsychotics或antipsychotic agents)”(也称为安定药或强安定药)是指用于管理精神病(例如妄想、幻觉、偏执或思维紊乱)的一类药物。抗精神病药可分为典型(第一代或常规)和非典型(第二代)。
典型的抗精神病药的实例包含氯丙嗪
Figure BDA00024333819500003760
氯普噻吨
Figure BDA00024333819500003761
左米丙嗪
Figure BDA00024333819500003762
美索达嗪
Figure BDA00024333819500003763
哌氰嗪
Figure BDA00024333819500003764
普马嗪
Figure BDA00024333819500003765
甲硫哒嗪
Figure BDA00024333819500003766
洛沙平
Figure BDA00024333819500003767
吗啉吲酮
Figure BDA00024333819500003768
奋乃静
Figure BDA00024333819500003769
替沃噻吨
Figure BDA00024333819500003770
氟哌利多
Figure BDA0002433381950000381
氟哌噻吨
Figure BDA0002433381950000382
氟奋乃静
Figure BDA0002433381950000383
氟哌啶醇
Figure BDA0002433381950000384
匹莫齐特
Figure BDA0002433381950000385
普鲁氯嗪
Figure BDA0002433381950000386
硫丙拉嗪
Figure BDA0002433381950000387
三氟啦嗪
Figure BDA0002433381950000388
和珠氯噻醇
Figure BDA0002433381950000389
非典型的抗精神病药的实例包含氨磺必利
Figure BDA00024333819500003810
鲁拉西酮
Figure BDA00024333819500003811
喹硫平
Figure BDA00024333819500003812
利培酮
Figure BDA00024333819500003813
奥氮平
Figure BDA00024333819500003814
阿立哌唑
Figure BDA00024333819500003815
齐拉西酮
Figure BDA00024333819500003816
匹莫范色林
Figure BDA00024333819500003817
氯氮平
Figure BDA00024333819500003818
帕潘立酮
Figure BDA00024333819500003819
阿塞那平
Figure BDA00024333819500003820
依匹哌唑
Figure BDA00024333819500003821
卡利拉嗪
Figure BDA00024333819500003822
和伊潘立酮
Figure BDA00024333819500003823
在其他实施例中，用心理疗法治疗根据本公开被诊断为患有情绪障碍的受试者。术语“心理疗法”包含涉及患者与治疗师之间的交流的各种方式中的任何一种。抗抑郁药治疗还可以包含抗抑郁药和心理疗法的组合。
在一个实施例中，用该方法治疗的受试者是非人动物，例如大鼠或小鼠。在一个实施例中，该方法中所治疗的受试者是人。
在一些实施例中，将FAM19A5拮抗剂静脉内、口服、肠胃外、鞘内、脑室内、肺、肌内、皮下、玻璃体内或心室内施用给受试者。对于例如本文所述的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分的施用，剂量范围为约0.0001至100mg/kg。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分或其组合物可以与一种或多种其他用于治疗情绪障碍的药剂组合施用。在一些实施例中，所述另外的药剂是抗抑郁药，其包括选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)、5-羟色胺-去甲肾上腺素再摄取抑制剂(SNRI)、5-羟色胺调节剂和刺激剂(SMS)、5-羟色胺拮抗剂和再摄取抑制剂(SARI)、去甲肾上腺素再摄取抑制剂(NRI)、三环抗抑郁药(TCA)、四环抗抑郁药(TeCA)、单胺氧化酶抑制剂(MAOI)或其任何组合。在一些实施例中，另外的药剂是抗精神病药(例如，典型的或非典型的)。抗抑郁药和抗精神病药的实例在本文中公开并且也是本领域已知的。一种或多种其他治疗药物的剂量和施用是本领域已知的，例如，根据相应药物的产品标签的指示。
IV.FAM19A5拮抗剂
一种或多种FAM19A5拮抗剂可用于诊断患有情绪障碍的受试者或治疗该受试者。在一个实施例中，FAM19A5拮抗剂是特异性靶向FAM19A5的反义寡核苷酸、siRNA、shRNA、miRNA、dsRNA、适体、PNA(肽核酸)或包括它们的载体。在另一个实施例中，FAM19A5拮抗剂是特异性结合FAM19A5蛋白的抗体或其抗原结合片段、编码抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段的多核苷酸或包括其多核苷酸的载体。
可用于本文公开的方法的抗体包含单克隆抗体，其特征在于特定的功能特征或性质。例如，抗体特异性结合人FAM19A5，包含可溶性FAM19A5和膜结合FAM19A5。除了特异性结合可溶性和/或膜结合人FAM19A5之外，本文所述的抗体还(a)以10nM或更低的KD结合可溶性人FAM19A5；(b)以10nM或更低的KD结合膜结合的人FAM19A5；或(a)和(b)两者。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分以高亲和力特异性结合可溶性人FAM19A5或膜结合人，例如KD为10-7M或更低、10-8M或更低、10-9M(1nM)或更低、10-10M(0.1nM)或更低、10-11M或更低或10-12M(1pM)或更低，例如10-12M至10-7M、10-11M至10-7M、10- 10M至10-7M或10-9M至10-7M，例如，10-12M、5X 10-12M、10-11M、5X 10-11M、10-10M、5X 10-10M、10- 9M、5X 10-9M、10-8M、5X10-8M、10-7M或5X 10-7M。评价各种物种的抗体对人FAM19A5的结合能力的标准测定是本领域已知的，包含例如ELISA、蛋白印迹和RIA。合适的测定在实例中详细描述。抗体的结合动力学(例如结合亲和力)也可通过本领域已知的标准测定来评估，例如通过ELISA、BIACORETM分析或
Figure BDA0002433381950000391
下文和实例中进一步详细描述了评价抗体对FAM19A5功能特性(例如配体结合)的影响的测定。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段以10-7M或更低、10-8M(10nM)或更低、10-9M(1nM)或更低、10-10M或更低、10-12M至10-7M、10-11M至10-7M、10-10M至10-7M、10-9M至10-7M或10-8M至10-7M的KD结合可溶性人FAM19A5，如例如通过ELISA测定的。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段以10nM或更低，例如0.1至10nM、0.1至5nM、0.1至1nM、0.5至10nM、0.5至5nM、0.5至1nM、1至10nM、1至5nM或5至10nM的KD结合可溶性FAM19A5。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分以约1pM、2pM、3pM、4pM、5pM、6pM、7pM、8pM、9pM、10pM、20pM、30pM、40pM、50pM、60pM、70pM、80pM、90pM、100pM、200pM、300pM、400pM、500pM、600pM、700pM、800pM或900pM，或约1nM、2nM、3nM、4nM、5nM、6nM、7nM、8nM或9nM，或约10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM或90nM的KD特异性结合可溶性人FAM19A5，如通过ELISA测定的。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分以10-7M或更低、10-8M(10nM)或更低、10-9M(1nM)或更低、10-10M或更低、10-12M至10-7M、10-11M至10-7M、10-10M至10-7M、10-9M至10-7M或10-8M至10-7M的KD结合膜结合人，如例如通过ELISA测定的。在某些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分以10nM或更低的KD，例如0.1至10nM、0.1至5nM、0.1至1nM、0.5至10nM、0.5至5nM、0.5至1nM、1至10nM、1至5nM或5至10nM的KD特异性地结合膜结合人FAM19A5，如通过ELISA测定的。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段以约1pM、2pM、3pM、4pM、5pM、6pM、7pM、8pM、9pM、10pM、20pM、30pM、40pM、50pM、60pM、70pM、80pM、90pM、100pM、200pM、300pM、400pM、500pM、600pM、700pM、800pM或900pM或约1nM、2nM、3nM、4nM、5nM、6nM、7nM、8nM或9nM或约10nM、20nM、30nM、40nM、50nM、60nM、70nM、80nM或90nM的KD结合膜结合人FAM19A5，如通过ELISA测定的。
在某些实施例中，适合于本文公开的方法的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段与包括本文公开的CDR或可变区的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段交叉竞争(或抑制其结合)结合人FAM19A5表位。
在某些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段抑制包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3的参考抗体的结合，(i)其中参考抗体的重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12和SEQ ID NO：13的氨基酸序列，以及参考抗体的轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24和SEQ ID NO：25的氨基酸序列；(ii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：14的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：15的氨基酸序列，和重链CDR3包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：26的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：28的氨基酸序列；(iii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：17的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ IDNO：18的氨基酸序列，和重链CDR3包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ IDNO：29的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：30的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ IDNO：31的氨基酸序列；(iv)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：20的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：21的氨基酸序列，和重链CDR3包括SEQ ID NO：22的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：32的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：33的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：34的氨基酸序列；(v)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：89的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：90的氨基酸序列，和重链CDR3包括SEQ ID NO：91的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：92的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：93的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：94的氨基酸序列；(vi)其中重链CDR1包括氨基酸序列SEQ ID NO：95的氨基酸序列，重链CDR2包括氨基酸序列SEQ ID NO：96的氨基酸序列，和重链CDR3包括氨基酸序列SEQ ID NO：97的氨基酸序列，轻链CDR1包括氨基酸序列SEQ ID NO：98的氨基酸序列，轻链CDR2包括氨基酸序列SEQ ID NO：99的氨基酸序列，和轻链CDR3包括氨基酸序列SEQ IDNO：100的氨基酸序列；(vii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：101的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：102的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：103的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：104的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：105的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：106的氨基酸序列；(viii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：107的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：108的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：109的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：110的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：111的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：112的氨基酸序列；(ix)其中重链CDR1包括氨基酸序列SEQID NO：113的氨基酸序列，重链CDR2包括氨基酸序列SEQ ID NO：114的氨基酸序列，重链CDR3包括氨基酸序列SEQ ID NO：115的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：116的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：117的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：118的氨基酸序列；(x)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：119的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：120的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：121的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：122的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：123的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：124的氨基酸序列；(xi)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：125的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQID NO：126的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：127的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQID NO：128的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：129的氨基酸序列，和轻链CDR1包括SEQID NO：130的氨基酸序列；(xii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：131的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：132的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：133的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：134的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：135的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：136的氨基酸序列；(xiii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：137的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：138的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：139的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：140的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：141的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：142的氨基酸序列；(xiv)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：143的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：144的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：145的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：146的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：147的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：148的氨基酸序列；或者(xv)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：149的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：150的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：151的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：152的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：153的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：154的氨基酸序列。
在一些实施例中，所述参考抗体包括(a)分别包括SEQ ID NO：35和39的重链和轻链可变区序列；(b)分别包括SEQ ID NO：36和40的重链和轻链可变区序列；(c)分别包括SEQID NO：37和41的重链和轻链可变区序列；(d)分别包括SEQ ID NO：38和42的重链和轻链可变区序列；(e)分别包括SEQ ID NO：155和166的重链和轻链可变区序列；(f)分别包括SEQID NO：156和167的重链和轻链可变区序列；(g)分别包括SEQ ID NO：157和168的重链和轻链可变区序列；(h)分别包括SEQ ID NO：158和169的重链和轻链可变区序列；(i)分别包括SEQ ID NO：159和170的重链和轻链可变区序列；(j)分别包括SEQ ID NO：160和171的重链和轻链可变区序列；(k)分别包括SEQ ID NO：161和172的重链和轻链可变区序列；(l)分别包括SEQ ID NO：162和173的重链和轻链可变区序列；(m)分别包括SEQ ID NO：163和174的重链和轻链可变区序列；(n)分别包括SEQ ID NO：164和175的重链和轻链可变区序列；或(o)分别包括SEQ ID NO：165和176的重链和轻链可变区序列。
在某些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段抑制此类参考抗体与人FAM19A5的结合至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％或100％。竞争性抗体结合相同表位、重叠表位或相邻表位(例如，如通过位阻所证明的)。两种抗体是否彼此竞争结合靶标可以使用本领域已知的竞争实验例如RIA和EIA来确定。
在某些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段与本文公开的参考抗体结合相同的FAM19A5表位，所述参考抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，(i)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：11的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：12的氨基酸序列，和重链CDR3包括SEQ ID NO：13的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：23的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：24的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：25的氨基酸序列；(ii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：14的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：15的氨基酸序列，和重链CDR3包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：26的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：28的氨基酸序列；(iii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：17的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ IDNO：18的氨基酸序列，和重链CDR3包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ IDNO：29的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：30的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ IDNO：31的氨基酸序列；(iv)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：20的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：21的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：22的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQID NO：32的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：33的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQID NO：34的氨基酸序列；(v)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：89的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：90的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：91的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQID NO：92的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：93的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQID NO：94的氨基酸序列；(vi)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：95的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：96的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：97的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：98的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：99的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：100的氨基酸序列；(vii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：101的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：102的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：103的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：104的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：105的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：106的氨基酸序列；(viii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：107的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：108的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：109的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：110的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：111的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：112的氨基酸序列；(ix)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：113的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：114的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：115的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：116的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：117的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：118的氨基酸序列；(x)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：119的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：120的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：121的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：122的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：123的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：124的氨基酸序列；(xi)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：125的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：126的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：127的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：128的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：129的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：130的氨基酸序列；(xii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：131的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：132的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：133的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：134的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：135的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：136的氨基酸序列；(xiii)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：137的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ IDNO：138的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：139的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ IDNO：140的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：141的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ IDNO：142的氨基酸序列；(xiv)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：143的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：144的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：145的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：146的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：147的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：148的氨基酸序列；或者(xv)其中重链CDR1包括SEQ ID NO：149的氨基酸序列，重链CDR2包括SEQ ID NO：150的氨基酸序列，重链CDR3包括SEQ ID NO：151的氨基酸序列，轻链CDR1包括SEQ ID NO：152的氨基酸序列，轻链CDR2包括SEQ ID NO：153的氨基酸序列，和轻链CDR3包括SEQ ID NO：154的氨基酸序列。
在一些实施例中，所述参考抗体包括(a)分别包括SEQ ID NO：35和39的重链和轻链可变区序列；(b)分别包括SEQ ID NO：36和40的重链和轻链可变区序列；(c)分别包括SEQID NO：37和41的重链和轻链可变区序列；(d)分别包括SEQ ID NO：38和42的重链和轻链可变区序列；(e)分别包括SEQ ID NO：155和166的重链和轻链可变区序列；(f)分别包括SEQID NO：156和167的重链和轻链可变区序列；(g)分别包括SEQ ID NO：157和168的重链和轻链可变区序列；(h)分别包括SEQ ID NO：158和169的重链和轻链可变区序列；(i)分别包括SEQ ID NO：159和170的重链和轻链可变区序列；(j)分别包括SEQ ID NO：160和171的重链和轻链可变区序列；(k)分别包括SEQ ID NO：161和172的重链和轻链可变区序列；(l)分别包括SEQ ID NO：162和173的重链和轻链可变区序列；(m)分别包括SEQ ID NO：163和174的重链和轻链可变区序列；(n)分别包括SEQ ID NO：164和175的重链和轻链可变区序列；或(o)分别包括SEQ ID NO：165和176的重链和轻链可变区序列。
用于确定两种抗体是否结合相同表位的技术包含，例如，表位作图方法(例如，抗原：抗体复合物的晶体的X-射线分析，其提供表位的原子分辨率和氢/氘交换质谱(HDX-MS))、监测抗体与抗原片段或抗原的突变变体的结合的方法(其中由于抗原序列内的氨基酸残基的修饰而导致的结合的丧失通常被认为是表位组分的指示)及用于表位作图的计算组合方法。
可用于本文公开的方法的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段可结合成熟人FAM19A5的至少一个表位，如例如通过抗体与人FAM19A5的片段结合所确定的。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段结合位于TLDRDSSQPRRTIARQTARC(SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：2的氨基酸残基42至61)的氨基酸序列内的片段，例如具有SEQ ID NO：6的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸的表位。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分在对应于SEQ ID NO：2的氨基酸残基46至51(即DSSQPR)的一个或多个氨基酸处结合SEQ ID NO：6，例如氨基酸残基46、50和52(即D---P-R)，例如氨基酸残基46、47、48和50(即DSS-P)。在一些实施例中，抗FAM19A5或其抗原结合片段结合位于CDMLPCLEGEGCDLLINRSG(SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：2的氨基酸90至109)的氨基酸序列内的片段，例如具有SEQ ID NO：9的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸的表位。在某些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分在一个或多个氨基酸残基99至107(即EGCDLLINR)处结合SEQ ID NO：9，例如SEQ ID NO：4的氨基酸残基102、103、105和107(即DL-I-R)，例如氨基酸残基99、100、102、103、105和107(即EG-DL-I-R)，例如氨基酸残基99、100和107(即EG------R)。
在一些实施例中，所述至少一个表位具有与SEQ ID NO：6至少90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。在一些实施例中，所述至少一个表位具有与SEQ ID NO：9至少90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段仅结合为SEQ ID NO：5、6、7、8、9或10的人FAM19A5表位，或位于SEQ ID NO：5、6、7、8、9或10的氨基酸序列内的片段，例如具有SEQ ID NO：5、6、7、8、9或10的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸的表位。
在一些实施例中，本公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段以其天然构象(即未变性)结合SEQ ID NO：6或其片段。在一些实施例中，本公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段以其天然构象(即未变性)结合SEQ ID NO：9或其片段。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段结合糖基化和未糖基化的人FAM19A5二者。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段还结合一个或多个另外的FAM19A5表位。因此，某些抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段结合SEQ ID NO：6的表位和另外的表位或SEQ ID NO：9的表位和另外的表位。其它抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段可结合SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：9的表位和另外的表位。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段结合SEQ ID NO：6的表位、SEQ ID NO：10的表位和另外的表位。在一些实施例中，所述一个或多个另外的FAM19A5表位选自QLAAGTCEIVTLDR(SEQ ID NO：5，表位F1)、TLDRDSSQPRRTIARQTARC(SEQ ID NO：6，表位F2)、TARCACRKGQIAGTTRARPA(SEQ ID NO：7，表位F3)、ARPACVDARIIKTKQWCDML(SEQ ID NO：8，表位F4)、CDMLPCLEGEGCDLLINRSG(SEQ IDNO：9，表位F5)或NRSGWTCTQPGGRIKTTTVS(SEQ ID NO：10，表位F6)或位于SEQ ID NO：5、SEQID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10或其任何组合的氨基酸序列内的片段。位于SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10的氨基酸序列内的片段，包含具有SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6和SEQ IDNO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：10中任一个的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸的片段。在一些实施例中，所述一个或多个另外的FAM19A5表位选自SEQ ID NO：5、6、7、8、9或10，或位于SEQ ID NO：5、6、7、8、9或10的氨基酸序列内的片段，例如，具有SEQ ID NO：5、6、7、8、9或10或其任何组合的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20个氨基酸的片段。在一些实施例中，本公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段结合处于其天然构象(即未变性)的一个或多个另外表位中的任一个。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段结合糖基化和非糖基化的一个或多个另外的FAM19A5表位二者。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合鉴定为EP2、EP4和/或EP8的至少一个FAM19A5表位，其中EP2包括氨基酸DSSQP(SEQ ID NO：66)、基本上由其组成或由其组成，其中EP4包括氨基酸ARCACRK(SEQ ID NO：68)、基本上由其组成或由其组成，且其中EP8包括氨基酸TCTQPGGR(SEQ ID NO：72)、基本上由其组成或由其组成。在一些实施例中，所述至少一个表位具有与EP2、EP4或EP8至少90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分仅结合EP2。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合EP4和EP8。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合鉴定为EP6、EP7或EP8的至少一个FAM19A5表位，其中EP6包括氨基酸KTKQWCDML(SEQ ID NO：70)，其中EP7包括氨基酸GCDLLINR(SEQ ID NO：71)，并且其中EP8包括氨基酸TCTQPGGR(SEQ ID NO：72)。在一些实施例中，所述至少一个表位具有与EP6、EP7或EP8至少90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分仅结合EP6、EP7或EP8。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合EP6、EP7和EP8。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合EP7和EP8。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合EP7。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分结合一个或多个FAM19A5表位，所述表位选自由SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68、SEQ IDNO：69、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：72及其任何组合组成的群组。
在一些实施例中，本文提供了以高于FAM19A家族中另一蛋白的亲和力20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更高的亲和力结合FAM19A5(例如人FAM19A5)的抗体或其抗原结合片段，所述亲和力通过例如免疫测定(例如ELISA)、表面等离子体共振或动力学排除测定来测量。在某些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段与FAM19A5(例如人FAM19A5)结合，并且与FAM19A家族中的另一种蛋白没有交叉反应，例如通过免疫测定法进行测量。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体不是天然抗体或不是天然存在的抗体。例如，抗FAM19A5抗体例如通过具有更多、更少或不同类型的翻译后修饰而具有与天然存在的抗体不同的翻译后修饰。
V.示例性抗FAM19A5抗体
可用于本文公开的方法的特定抗体是具有本文公开的CDR和/或可变区序列的抗体，例如单克隆抗体，以及与其可变区或CDR序列具有至少80％同一性(例如至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性)的抗体。本公开的不同抗FAM19A5抗体的VH和VL氨基酸序列分别提供于表4和5中。
表2：可变重链CDR氨基酸序列
Figure BDA0002433381950000481
Figure BDA0002433381950000491
Figure BDA0002433381950000501
表3：可变轻链CDR氨基酸序列
Figure BDA0002433381950000502
Figure BDA0002433381950000511
表4：可变重链氨基酸序列
Figure BDA0002433381950000512
Figure BDA0002433381950000521
Figure BDA0002433381950000531
表5：可变轻链氨基酸序列
Figure BDA0002433381950000532
Figure BDA0002433381950000541
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：35-38或155-165的氨基酸序列。在其它实施例中，分离的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括选自由SEQ ID NO：35-38或155-165组成的群组的重链可变区的CDR。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，其中轻链可变区包括SEQ ID NO：39-42或166-176的氨基酸序列。在其它实施例中，分离的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括选自由SEQ ID NO：39-42或166-176组成的群组的轻链可变区的CDR。
在某些实施例中，分离的抗FAM19A5抗体或其抗原结合部分包括选自由SEQ IDNO：35-38或155-165组成的群组的重链可变区的CDR，以及选自由SEQ ID NO：39-42或166-176组成的群组的轻链可变区的CDR。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，(i)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：35的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：39的氨基酸序列；(ii)其中重链可变区包括SEQ ID NO：36的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包括SEQ ID NO：40的氨基酸序列；(iii)其中所述重链可变区包括SEQID NO：37的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：41的氨基酸序列；(iv)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：38的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括SEQID NO：42的氨基酸序列；(v)其中重链可变区包括SEQ ID NO：155的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包括SEQ ID NO：166的氨基酸序列；(vi)其中重链可变区包括SEQ ID NO：156的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包括SEQ ID NO：167的氨基酸序列；(vii)其中重链可变区包括SEQ ID NO：157的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包括SEQ ID NO：168的氨基酸序列；(viii)其中重链可变区包括SEQ ID NO：158的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包括SEQ ID NO：169的氨基酸序列；(ix)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：159的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：170的氨基酸序列；(x)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：160的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：171的氨基酸序列；(xi)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：161的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：172的氨基酸序列；(xii)其中重链可变区包括SEQ ID NO：162的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包括SEQ ID NO：173的氨基酸序列；(xiii)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：163的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：174的氨基酸序列；(xiv)其中所述重链可变区包括SEQ ID NO：164的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括SEQ ID NO：175的氨基酸序列；和(xv)其中重链可变区包括SEQ ID NO：165的氨基酸序列，并且其中轻链可变区包括SEQ ID NO：176的氨基酸序列。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括与如SEQ ID NO：35-38或155-165所列的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，其中所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：39-42或166-176所列的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包括与SEQ ID NO：35-38或155-165所列的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列，并且其中所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：39-42或166-176所列的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括：
(a)分别包括SEQ ID NO：35和39的重链和轻链可变区序列；
(b)分别包括SEQ ID NO：36和40的重链和轻链可变区序列；
(c)分别包括SEQ ID NO：37和41的重链和轻链可变区序列；
(d)分别包括SEQ ID NO：38和42的重链和轻链可变区序列；
(e)分别包括SEQ ID NO：155和166的重链和轻链可变区序列；
(f)分别包括SEQ ID NO：156和167的重链和轻链可变区序列；
(g)分别包括SEQ ID NO：157和168的重链和轻链可变区序列；
(h)分别包括SEQ ID NO：158和169的重链和轻链可变区序列；
(i)分别包括SEQ ID NO：159和170的重链和轻链可变区序列；
(j)分别包括SEQ ID NO：160和171的重链和轻链可变区序列；
(k)分别包括SEQ ID NO：161和172的重链和轻链可变区序列；
(l)分别包括SEQ ID NO：162和173的重链和轻链可变区序列；
(m)分别包括SEQ ID NO：163和174的重链和轻链可变区序列；
(n)分别包括SEQ ID NO：164和175的重链和轻链可变区序列；或
(o)分别包括SEQ ID NO：165和176的重链和轻链可变区序列。
在一些实施例中，本公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括(i)2-13的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或2-13的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(ii)3-2的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或3-2的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(iii)1-65的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或1-65的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(iv)1-28的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或1-28的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(v)P2-C12的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或P2-C12的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(vi)13B4的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或13B4的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(vii)13F7的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或13F7的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(viii)15A9的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或15A9的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(ix)P1-A03的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或P1-A03的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(x)P1-A08的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或P1-A08的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xi)P1-F02的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或P1-F02的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xii)P2-A01的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或P2-A01的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xiii)P2-A03的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或P2-A03的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；(xiv)P2-F07的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或P2-F07的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合；或(xv)P2-F11的重链CDR1、CDR2和CDR3或其组合，和/或F2-F11的轻链CDR1、CDR2和CDR3或其任何组合。表2中提供了本文公开的不同抗FAM19A5抗体的VH CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列。表3中提供了本文公开的不同抗FAM19A5抗体的VL CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列。
在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括：
(a)包括SEQ ID NO：11的氨基酸序列的VH CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：12的氨基酸序列的VH CDR2；和/或
(c)包括SEQ ID NO：13的氨基酸序列的VH CDR3。
在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段包括一个、两个或所有三个上述VHCDR。
在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括：
(a)包括SEQ ID NO：23的氨基酸序列的VL CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：24的氨基酸序列的VL CDR2；和/或
(c)包括SEQ ID NO：25的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段包括一个、两个或所有三个上述VL CDR。
在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括：
(a)包括SEQ ID NO：11的氨基酸序列的VH CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：12的氨基酸序列的VH CDR2；
(c)包括SEQ ID NO：13的氨基酸序列的VH CDR3；
(d)包括SEQ ID NO：23的氨基酸序列的VL CDR1；
(e)包括SEQ ID NO：24的氨基酸序列的VL CDR2；和/或
(f)包括SEQ ID NO：25的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的本公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括：
(a)包括SEQ ID NO：14的氨基酸序列的VH CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：15的氨基酸序列的VH CDR2；和/或
(c)包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列的VH CDR3。
在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段包括一个、两个或所有三个上述VH CDR。
在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括：
(a)包括SEQ ID NO：26的氨基酸序列的VL CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列的VL CDR2；和/或
(c)包括SEQ ID NO：28的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段包括一个、两个或所有三个上述VL CDR。
在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括：
(a)包括SEQ ID NO：14的氨基酸序列的VH CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：15的氨基酸序列的VH CDR2；
(c)包括SEQ ID NO：16的氨基酸序列的VH CDR3；
(d)包括SEQ ID NO：26的氨基酸序列的VL CDR1；
(e)包括SEQ ID NO：27的氨基酸序列的VL CDR2；和/或
(f)包括SEQ ID NO：28的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的本公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括：
(a)包括SEQ ID NO：17的氨基酸序列的VH CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：18的氨基酸序列的VH CDR2；和/或
(c)包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列的VH CDR3。
在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段包括一个、两个或所有三个上述VH CDR。
在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括：
(a)包括SEQ ID NO：29的氨基酸序列的VL CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：30的氨基酸序列的VL CDR2；和/或
(c)包括SEQ ID NO：31的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段包括一个、两个或所有三个上述VL CDR。
在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括：
(a)包括SEQ ID NO：17的氨基酸序列的VH CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：18的氨基酸序列的VH CDR2；
(c)包括SEQ ID NO：19的氨基酸序列的VH CDR3；
(d)包括SEQ ID NO：29的氨基酸序列的VL CDR1；
(e)包括SEQ ID NO：30的氨基酸序列的VL CDR2；和/或
(f)包括SEQ ID NO：31的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的本公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括：
(a)包括SEQ ID NO：20的氨基酸序列的VH CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：21的氨基酸序列的VH CDR2；和/或
(c)包括SEQ ID NO：22的氨基酸序列的VH CDR3。
在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段包括一个、两个或所有三个上述VH CDR。
在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括：
(a)包括SEQ ID NO：32的氨基酸序列的VL CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：33的氨基酸序列的VL CDR2；和/或
(c)包括SEQ ID NO：34的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施例中，抗体或其抗原结合片段包括一个、两个或所有三个上述VL CDR。
在一些实施例中，特异性结合人FAM19A5的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括：
(a)包括SEQ ID NO：20的氨基酸序列的VH CDR1；
(b)包括SEQ ID NO：21的氨基酸序列的VH CDR2；
(c)包括SEQ ID NO：22的氨基酸序列的VH CDR3；
(d)包括SEQ ID NO：32的氨基酸序列的VL CDR1；
(e)包括SEQ ID NO：33的氨基酸序列的VL CDR2；和/或
(f)包括SEQ ID NO：34的氨基酸序列的VL CDR3。
在一些实施例中，抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括上述CDR中的一个、两个、三个、四个、五个或六个。
本文所述的VH结构域或其一个或多个CDR可与恒定结构域连接以形成重链，例如全长重链。类似地，本文所述的VL结构域或其一个或多个CDR可以与恒定结构域连接以形成轻链，例如全长轻链。全长重链和全长轻链组合形成全长抗体。
因此，在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括抗体轻链和重链，例如单独的轻链和重链。关于轻链，在某些实施例中，本文所述抗体的轻链是κ轻链。在一些实施例中，本文所述抗体的轻链是λ轻链。在一些实施例中，本文所述抗体的轻链是人κ轻链或人λ轻链。在某些实施例中，特异性结合FAM19A5多肽(例如人FAM19A5)的本文所述抗体包括轻链，所述轻链包括本文所述的任何VL或VL CDR氨基酸序列，且其中所述轻链的恒定区包括人κ轻链恒定区的氨基酸序列。在一些实施例中，特异性结合FAM19A5多肽(例如人FAM19A5)的本文所述抗体包括轻链，所述轻链包括本文所述VL或VL CDR氨基酸序列，且其中所述轻链的恒定区包括人λ轻链恒定区的氨基酸序列。人恒定区序列的非限制性实例已在本领域中描述，例如参见美国专利号5,693,780和Kabat EA等人，(1991)同上。
关于重链，在一些实施例中，本文所述抗体的重链可以是α、δ、ε、γ或μ重链。在另一个具体实施例中，所述抗体的重链可包括人α、δ、ε、γ或μ重链。在一个实施例中，特异性结合FAM19A5(例如人FAM19A5)的本文所述抗体包括重链，所述重链包括本文所述的VH或VHCDR氨基酸序列，并且其中所述重链的恒定区包括人γ重链恒定区的氨基酸序列。在一些实施例中，特异性结合FAM19A5(例如人FAM19A5)的本文所述抗体包括重链，所述重链包括本文公开的VH或VH CDR氨基酸序列，并且其中重链的恒定区包括本文所述或本领域已知的人重链的氨基酸。人恒定区序列的非限制性实例已在本领域中描述，参见例如美国专利号5,693,780和Kabat EA等人，(1991)同上。
在一些实施例中，特异性结合FAM19A5(例如人FAM19A5)的本文所述抗体包括VL结构域和VH结构域，所述VL结构域和VH结构域包括本文所述的VH或VH CDR以及VL和VL CDR，并且其中恒定区包括IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子或人IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子的恒定区的氨基酸序列。在某些实施例中，特异性结合FAM19A5(例如人FAM19A5)的本文所述抗体包括VL结构域和VH结构域，所述VL结构域和VH结构域包括本文所述的任何氨基酸序列，并且其中恒定区包括IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY免疫球蛋白分子、免疫球蛋白分子的任何亚类(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)的恒定区的氨基酸序列。在一些实施例中，恒定区包括天然存在的人IgG恒定区的氨基酸序列，包括亚类(例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)和同种异型(例如G1m、G2m、G3m和nG4m)及其变体。参见，例如，Vidarsson G.等人，《免疫学前沿(Front Immunol.)》5:520(在线公开于2014年10月20日)以及Jefferis R.和Lefranc MP，《单克隆抗体(mAbs)》1:4,1-7(2009)。在一些实施例中，恒定区包括人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4或其变体的恒定区的氨基酸序列。
在某些实施例中，本文公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段不具有Fc效应子功能，例如补体依赖的细胞毒性(CDC)和/或抗体依赖的细胞吞噬作用(ADCP)。效应子功能由Fc区介导，并且在Fc区的CH2结构域中最接近铰链区的残基负责抗体的效应子功能，因为它含有针对先天免疫系统的效应细胞上的C1q(补体)和IgG-Fc受体(FcγR)的大部分重叠的结合位点。此外，IgG2和IgG4抗体的Fc效应子功能水平比IgG1和IgG3抗体低。抗体的效应子功能可以通过本领域已知的不同方法来降低或避免，包含(1)使用缺乏Fc区的抗体片段(例如，诸如Fab、F(ab')2、单链Fv(scFv)或由单体VH或VL结构域组成的sdAb)；(2)产生非糖基化抗体，其可以通过例如缺失或改变糖所连接的残基、酶促除去糖、在糖基化抑制剂存在下培养的细胞中产生抗体或通过在不能糖基化蛋白的细胞(例如细菌宿主细胞，参见例如美国公开号20120100140)中表达抗体来产生；(3)使用来自IgG亚类的具有降低的效应子功能的Fc区(例如，来自IgG2或IgG4抗体的Fc区或包括来自IgG2或IgG4抗体的CH2结构域的嵌合Fc区，参见例如美国公开号20120100140和Lau C等人《免疫学杂志(J.Immunol.)》191:4769-4777(2013))；和(4)产生具有导致Fc功能降低或无Fc功能的突变的Fc区。参见例如美国公开号20120100140和其中引用的美国和PCT申请以及An等人《单克隆抗体(mAbs)》1:6,572-579(2009)。
因此，在一些实施例中，本文公开的其抗原结合片段为Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、单链Fv(scFv)或由单体VH或VL结构域组成的sdAb。此类抗体片段是本领域公知的，并且如上所述。
在一些实施例中，本文公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段包括Fc效应子功能降低或无Fc效应子功能的Fc区。在一些实施例中，恒定区包括人IgG2或IgG4Fc区的氨基酸序列，在一些实施例中，抗FAM19A5抗体是IgG2/IgG4同种型。在一些实施例中，抗FAM19A5抗体包括嵌合Fc区，其包括来自IgG4同种型的IgG抗体的CH2结构域和来自IgG1同种型的IgG抗体的CH3结构域，或包括来自IgG2的铰链区和来自IgG4的CH2区的嵌合Fc区，或具有导致Fc功能降低或无Fc功能的突变的Fc区。Fc效应子功能降低或无Fc效应子功能的Fc区包含本领域已知的那些。参见例如Lau C等人《免疫学杂志(J.Immunol.)》191:4769-4777(2013)；An等人，《单克隆抗体(mAbs)》1:6,572-579(2009)；和美国公开号20120100140以及其中引用的美国专利和出版物和PCT出版物。本领域普通技术人员也可以容易地制备Fc效应子功能降低或无Fc效应子功能的Fc区。
VI.核酸分子
本文所述的另一个方面涉及编码本文所述的任何一种抗体或其抗原结合片段的一种或多种核酸分子。核酸可以完整细胞、细胞裂解物或部分纯化或基本上纯的形式存在。当通过标准技术，包含碱/SDS处理、CsCl带、柱层析、限制酶、琼脂糖凝胶电泳和本领域公知的其它技术，与其它细胞组分或其它污染物，例如其它细胞核酸(例如其它染色体DNA，例如与天然分离的DNA连接的染色体DNA)或蛋白纯化分离时，核酸是“分离的”或“使得基本上纯的”。参见，F.Ausubel等人编辑，《分子生物学最新方案(Current Protocols in MolecularBiology)》，Greene Publishing and Wiley Interscience,New York(1987)。本文所述的核酸可以是例如DNA或RNA，并且可以含有或不含有内含子序列。在某些实施例中，核酸是cDNA分子。
本文所述的核酸可以使用标准分子生物学技术获得。对于杂交瘤(例如，由如下进一步描述的携带人免疫球蛋白基因的转基因小鼠制备的杂交瘤)表达的抗体，编码由杂交瘤制备的抗体的轻链和重链的cDNA可以通过标准PCR扩增或cDNA克隆技术获得。对于从免疫球蛋白基因文库(例如，使用噬菌体展示技术)获得的抗体，可以从文库回收编码抗体的核酸。
本文所述的某些核酸分子是编码本公开的各种抗FAM19A5抗体的VH和VL序列的那些。编码此类抗体的VH序列的示例性DNA序列列于SEQ ID NO：43-46和177。编码此类抗体的VL序列的示例性DNA序列列于SEQ ID NO：47-50和178。
表6：可变重链多核苷酸序列
Figure BDA0002433381950000631
Figure BDA0002433381950000641
Figure BDA0002433381950000651
表7：可变轻链多核苷酸序列
Figure BDA0002433381950000652
Figure BDA0002433381950000661
用于制备本文公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段的方法可包括在包括编码具有信号肽的重链和轻链的核苷酸序列的细胞系中表达抗体的相关重链和轻链，所述核苷酸序列分别例如SEQ ID NO：43和47、SEQ ID NO：44和48、SEQ ID NO：45和49、SEQ ID NO：46和50、SEQ ID NO：177和178。包括这些核苷酸序列的宿主细胞包括在本文内。
一旦获得编码VH和VL区段的DNA片段，这些DNA片段就可以通过标准重组DNA技术进一步操作，例如将可变区基因转化为全长抗体链基因、Fab片段基因或scFv基因。在这些操作中，编码VL或VH的DNA片段与编码另一种蛋白的另一种DNA片段如抗体恒定区或柔性接头可操作地连接。如本上下文所用，术语“可操作地连接”旨在指两个DNA片段连接，使得由两个DNA片段编码的氨基酸序列保持在框内。
通过将编码VH的DNA与编码重链恒定区(铰链、CH1、CH2和/或CH3)的另一DNA分子可操作地连接，可以将编码VH区的分离的DNA转化为全长重链基因。人重链恒定区基因的序列是本领域已知的(参见，例如，Kabat E.A.等人，(1991)《具有免疫学意义的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)》第五版，美国卫生与公共服务部，NIH公开号91-3242)，并且包括这些区域的DNA片段可以通过标准PCR扩增获得。重链恒定区可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区，例如IgG2和/或IgG4恒定区。对于Fab片段重链基因，编码VH的DNA可与仅编码重链CH1恒定区的另一DNA分子可操作地连接。
通过将编码VL的DNA与编码轻链恒定区CL的另一DNA分子可操作地连接，可以将编码VL区的分离DNA转化为全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列是本领域已知的(参见，例如，Kabat E.A.等人，(1991)《具有免疫学意义的蛋白质序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)》第五版，美国卫生与公共服务部，NIH公开号91-3242)，并且包括这些区域的DNA片段可以通过标准PCR扩增获得。轻链恒定区可以是κ或λ恒定区。
为了产生scFv基因，将编码VH和VL的DNA片段与另一个编码柔性接头(例如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3)的片段可操作地连接，以使VH和VL序列可表达为连续的单链蛋白，其中VL和VH区通过柔性接头连接(参见例如Bird等人，《科学(Science)》242:423-426(1988)；Huston等人，《美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)》85:5879-5883(1988)；McCafferty等人，《自然(Nature)》348:552-554(1990))。
在一些实施例中，本文公开的载体包括分离的核酸分子，其包括编码抗体或其抗原结合片段的核苷酸序列。在某些实施例中，载体可用于基因治疗。
本公开的合适载体包含表达载体、病毒载体和质粒载体。在一个实施例中，载体是病毒载体。
如本文所用，“表达载体”是指任何核酸构建体，其含有插入的编码序列的转录和翻译所必需的元件，或在RNA病毒载体的情况下，当引入适当的宿主细胞时，含有复制和翻译所必需的元件。表达载体可以包含质粒、噬菌粒、病毒及其衍生物。
VII.抗体生产
本文公开的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段可通过本领域已知的用于合成抗体的任何方法产生，例如通过化学合成或通过重组表达技术。除非另有说明，否则本文所述的方法采用分子生物学、微生物学、遗传分析、重组DNA、有机化学、生物化学、PCR、寡核苷酸合成和修饰、核酸杂交和本领域技术的相关领域中的常规技术。这些技术描述于例如本文引用的参考文献中，并在文献中充分解释。参见，例如，Maniatis T等人，(1982)《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)》，Cold Spring HarborLaboratory Press；Sambrook J等人，(1989)《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)》第二版，Cold Spring Harbor Laboratory Press；Sambrook J等人，(2001)《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:A Laboratory Manual)》，ColdSpring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY；Ausubel FM等人，《分子生物学最新方案(Current Protocols in Molecular Biology)》，John Wiley&Sons(1987和每年的更新版)；《免疫学最新方案(Current Protocols inImmunology)》，John Wiley&Sons(1987和每年的更新版)；Gait编辑，(1984)《寡核苷酸合成：实用方法(OligonucleotideSynthesis:A Practical Approach)》，IRL Press；Eckstein编辑，(1991)《寡核苷酸和类似物：实用方法(Oligonucleotides and Analogues:A Practical Approach)》，IRL Press；Birren B等人编辑，(1999)《基因组分析：实验室手册(Genome Analysis:A LaboratoryManual)》，Cold Spring Harbor Laboratory Press。
在一些实施例中，本文所述的抗体是通过涉及产生的任何方法，例如通过合成、DNA序列的遗传工程而制备、表达、产生或分离的抗体(例如重组抗体)。在某些实施例中，此类抗体包括在体内在动物或哺乳动物(例如人)的全套抗体种系内不天然存在的序列(例如DNA序列或氨基酸序列)。
VIII.药物组合物
本文提供了包括在生理学上可接受的载体、赋形剂或稳定剂(《雷氏药学大全(Remington's Pharmaceutical Sciences)》(1990)Mack Publishing Co.,Easton,PA)中的具有期望纯度的本文所述的抗体或其抗原结合片段的组合物。可接受的载体、赋形剂或稳定剂在所用的剂量和浓度下对接受者无毒，并且包含缓冲剂如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包含抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包含葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子，如钠；金属复合物(例如，Zn-蛋白复合物)；和/或非离子表面活性剂，如
Figure BDA0002433381950000681
或聚乙二醇(PEG)。
在一个具体实施例中，药物组合物包括在药学上可接受的载体中的本文所述的抗体或其抗原结合片段、双特异性分子或免疫缀合物，以及任选地一种或多种另外的预防剂或治疗剂。在一个具体实施例中，药物组合物包括在药学上可接受的载体中的有效量的本文所述的抗体或其抗原结合片段，以及任选地一种或多种另外的预防剂或治疗剂。在一些实施例中，抗体是药物组合物中包含的唯一活性成分。本文所述的药物组合物可用于降低FAM19A5活性，从而治疗情绪障碍，例如重度抑郁症或躁郁症。
用于肠胃外制剂的药学上可接受的载体包含水性媒介物、非水性媒介物、抗微生物剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂、局部麻醉剂、悬浮剂和分散剂、乳化剂、多价螯合剂或螯合剂和其它药学上可接受的物质。水性媒介物的实例包含氯化钠注射剂、林格注射剂、等渗右旋糖注射剂、无菌水注射剂、右旋糖和乳酸林格注射剂。非水肠胃外媒介物包含植物来源的不挥发油、棉籽油、玉米油、芝麻油和花生油。抑制细菌或抑制真菌浓度的抗微生物剂可以加入到包装在多剂量容器中的肠胃外制剂中，所述抗微生物剂包括苯酚或甲酚、汞制剂、苯甲醇、氯丁醇、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯扎氯铵和苄索氯铵。等渗剂包含氯化钠和右旋糖。缓冲剂包含磷酸盐和柠檬酸盐。抗氧化剂包含硫酸氢钠。局部麻醉剂包含盐酸普鲁卡因。悬浮剂和分散剂包含羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。乳化剂包含聚山梨醇酯80(
Figure BDA0002433381950000691
80)。金属离子的多价螯合剂或螯合剂包含EDTA。药物载体还包含用于水混溶性媒介物的乙醇、聚乙二醇和丙二醇；和用于pH调节的氢氧化钠、盐酸、柠檬酸或乳酸。
药物组合物可以被配制用于向受试者施用的任何途径。施用途径的具体实例包含鼻内、口服、肠胃外、鞘内、脑室内、肺、皮下或心室内。本文还考虑了特征为皮下、肌内或静脉内注射的肠胃外施用。注射剂可以常规形式制备，作为液体溶液或悬浮液、适于在注射前在液体中溶解或悬浮的固体形式或作为乳液。注射剂、溶液和乳液还含有一种或多种赋形剂。合适的赋形剂是例如水、盐水、右旋糖、甘油或乙醇。此外，如果期望，待施用的药物组合物也可以含有少量无毒的辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、稳定剂、增溶剂和其它这样的试剂，例如乙酸钠、脱水山梨醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯和环糊精。
用于抗体的肠胃外施用的制剂包含准备注射的无菌溶液、准备在临用前与溶剂组合的无菌干燥可溶产品，例如冻干粉末，包含皮下注射片剂、准备注射的无菌悬浮液、准备在临用前与媒介物组合的无菌干燥不溶产品和无菌乳液。溶液可以是水性或非水性的。
如果静脉内施用，合适的载体包含生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)，以及含有增稠剂和增溶剂如葡萄糖、聚乙二醇和聚丙二醇及其混合物的溶液。
如所述制备包括抗体的局部混合物用于局部和全身施用。所得混合物可以是溶液、悬浮液、乳液等，并且可以配制成乳膏、凝胶、软膏、乳液、溶液、酏剂、洗剂、悬浮液、酊剂、糊剂、泡沫、气雾剂、冲洗剂、喷雾、栓剂、绷带、皮肤贴剂或任何其它适于局部施用的制剂。
本文所述的抗体或其抗原结合片段可以配制成用于局部施用的气雾剂，例如通过吸入(参见，例如，美国专利号4,044,126、4,414,209和4,364,923，其描述了用于递送可用于治疗炎性疾病，特别是哮喘的类固醇的气雾剂)。这些用于向呼吸道施用的制剂可以是用于喷雾器的气雾剂或溶液的形式，或者是用于吹入的微细粉末，单独地或与惰性载体如乳糖组合。在这种情况下，在一个实施例中，制剂的颗粒的直径小于50微米，在一个实施例中小于10微米。
本文所述的抗体或其抗原结合片段可以配制成用于局地或局部施用，例如用于局部施用至皮肤和粘膜，例如在眼中，以凝胶、乳膏和洗剂的形式，并且用于施用至眼或用于脑池内或脊柱内施用。局部施用考虑用于经皮递送，也用于向眼睛或粘膜施用，或用于吸入疗法。也可以施用单独的抗体鼻溶液或与其它药学上可接受的赋形剂组合的抗体鼻溶液。
经皮贴剂，包括离子电渗和电泳装置，是本领域技术人员公知的，并且可以用于施用抗体。例如，这种贴剂公开于美国专利号6,267,983、6,261,595、6,256,533、6,167,301、6,024,975、6,010715、5,985,317、5,983,134、5,948,433和5,860,957中。
在某些实施例中，包括本文所述的抗体或其抗原结合片段的药物组合物是冻干粉末，其可以重构用于作为溶液、乳液和其它混合物施用。它也可以被重构和配制成固体或凝胶。通过将本文所述的抗体或其抗原结合片段或其药学上可接受的衍生物溶解在合适的溶剂中来制备冻干粉末。在一些实施例中，冻干粉末是无菌的。溶剂可以含有改善稳定性的赋形剂或粉末或由粉末制备的重构溶液的其它药理学组分。可以使用的赋形剂包括但不限于右旋糖、山梨糖醇、果糖、玉米糖浆、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其它合适的试剂。溶剂也可含有缓冲剂，例如柠檬酸盐、磷酸钠或磷酸钾或本领域技术人员已知的其它此类缓冲剂，在一个实施例中，其pH为约中性。随后将溶液无菌过滤，接着在本领域技术人员已知的标准条件下冻干，以提供期望的制剂。在一个实施例中，将所得溶液分配到小瓶中以进行冻干。每个小瓶将含有单剂量或多剂量的化合物。冻干粉末可以在适当的条件下储存，例如在约4℃至室温下。
用注射用水重构该冻干粉末提供了用于肠胃外施用的制剂。为了重构，将冻干粉末加入到无菌水或其它合适的载体中。精确的量取决于所选择的化合物。此类量可以凭经验确定。
本文所述的抗体或其抗原结合片段、双特异性分子或免疫缀合物和本文提供的其他组合物还可以被配制为靶向待治疗的受试者的身体的特定组织、受体或其他区域。许多此类靶向方法是本领域技术人员公知的。本文的所有此类靶向方法都预期用于本公开组合物。靶向方法的非限制性实例参见，例如美国专利号6,316,652、6,274,552、6,271,359、6,253,872、6,139,865、6,131,570、6,120,751、6,071,495、6,060,082、6,048,736、6,039,975、6,004,534、5,985,307、5,972,366、5,900,252、5,840,674、5,759,542和5,709,874。在一个具体实施例中，本文所述的抗FAM19A5抗体或其抗原结合片段可用于治疗情绪障碍，例如重度抑郁症或躁郁症。
用于体内施用的组合物可以是无菌的。这可以通过例如无菌滤膜过滤而容易地实现。
IX.试剂盒
本文提供了试剂盒，其包括本文所述的一种或多种抗体或其抗原结合片段，其中所述试剂盒用于诊断或治疗。在一个具体实施例中，本文提供了试剂包或试剂盒，其包括一个或多个容器，所述容器填充有本文所述的组合物的一种或多种成分，例如本文提供的一种或多种抗体或其抗原结合片段，任选的使用说明。在一些实施例中，试剂盒含有本文所述的组合物和任何诊断剂、预防剂或治疗剂，例如本文所述的那些。
实例
下面的实验方法和细节在下面的实例中被引用。
实例1人FAM19A5蛋白的表达和纯化
产生并纯化重组人FAM19A5蛋白，并将纯化的蛋白用于基于结合亲和力分析的抗体筛选测定。首先，将含有FAM19A5基因的LPS-hT质粒转化到细菌中，并诱导蛋白过表达。一旦产生，就使用Ni-NTA亲和色谱(Qiagen,Valencia,CA,USA)纯化FAM19A5蛋白。使用逐渐增加浓度的咪唑，我们从Ni柱上除去His-标记的FAM19A5蛋白。使用考马斯亮蓝R-250染料测量溶液中的蛋白表达。仅取含FAM19A5咪唑的溶液，我们使用PBS浓缩FAM19A5蛋白。当浓缩完成时，使用蛋白印迹测定测量FAM19A5蛋白的纯度和浓度。随后将浓缩的蛋白用于筛选FAM19A5特异性抗体。
实例2抗体文库FAM19A5的产生
合成FAM19A5肽，将其在C-末端与KLH(Anygen Co.,Ltd.)缀合，并用作使鸡免疫的抗原。将50μg合成肽KLH缀合物混合在750μl磷酸盐缓冲盐水(PBS)中，并在37℃孵育30分钟。然后，在2％角鲨烯内毒素MPL(单磷酸化的脂质A种类)和乳化的含有油包水乳液佐剂(RIBI+MPL+TDM+CWS佐剂，Sigma,St.Louis,Mo,USA)的TDW和CWS的细胞壁组分的分枝杆菌中除去毒素，然后皮下注射到三只鸡中。使鸡免疫共三次，免疫之间相隔约2-3周。使用过表达FAM19A5蛋白的HEK293T细胞的裂解物，通过免疫印迹测量从免疫鸡获得的抗体的滴度。将接受三次免疫的鸡的血清用作第一抗体。所用的第二抗体是缀合到HRP(辣根过氧化物酶)的抗鸡IgG(Y)多克隆抗体(兔抗鸡IgG(Y)-HRP，Millipore Corporation,Billeria,MA,USA)。
由免疫鸡制备单链可变片段(scFv)文库。使用TRI试剂(Invitrogen,Carlsbad,CAUSA)，我们从上述免疫的鸡的脾、骨髓和滑膜囊提取了RNA。使用寡-dT引物和SUPERSCRIPTTMIII第一链合成系统(Invitrogen)合成第一链cDNA。对于从鸡的免疫系统获得的cDNA，使用Expand高保真PCR系统(Roche Molecular Systems,IN,USA)产生单链可变区文库。在每个反应中，将1μL cDNA、60pmol各引物、10μL的10×反应缓冲液、8μL的2.5mMdNTP(Promega,Madison,WI,USA)和0.5μL的Taq DNA聚合酶与水混合。最终体积为100μL。使用以下条件进行PCR反应：30个循环的(i)94℃下15秒(ii)56℃下30秒和(iii)72℃下90秒，随后72℃下最终延伸10分钟。将包括长度约为350bp的片段的PCR产物上样到1.5％琼脂糖凝胶上，电泳后用QIAGEN Gel II提取试剂盒(QIAGEN,Valencia,CA,USA)纯化核苷酸片段。通过在OD 260nm处读数来定量纯化的PCR产物。(1单位OD＝50μg/ml)。
通过重叠延伸PCR将来自第二次PCR的两个VH和VL第一产物随机连接。将每个PCR反应与100ng纯化的VL和VH产物、60pmol各引物、10μL的10×反应缓冲液、8μL的2.5mMdNTP、0.5μL的Taq DNA聚合酶和水混合，最终体积为100μL。PCR在下列条件下进行：25个循环的(i)94℃下15秒，(ii)56℃下30秒，和(iii)72℃下2分钟，接着72℃下最终延伸10分钟。将包括长度约700bp的单链可变区片段的PCR产物上样到1.5％琼脂糖凝胶上，电泳后用QIAGEN II凝胶提取试剂盒(QIAGEN)纯化核苷酸片段。通过在OD 260nm处读数来定量纯化的PCR产物。(1单位OD＝50/ml)。
将PCR产物的scFv片段和载体pComb3X-SS(The Scripps Research Institute,CA,USA)用Sfi I限制酶消化。将10μg纯化的重叠PCT产物与360单位Sif I(μg DNA/16单位，Roche Molecular Systems,Pleasanton,CA,USA)、20μL的10X反应缓冲液和水混合至最终体积为200μL。将20μg pComb3X-SS载体与120单位Sfi L(μg DNA/6单位)、20μL的10×反应缓冲液和水混合至最终体积为200μL。将混合物在50℃消化8小时。然后，将包括scFv片段(约700bp)和载体(约3400bp)的消化产物上样到1％琼脂糖凝胶上，并使用凝胶提取试剂盒II QIAGEN(QIAGEN,Valencia,CA,USA)纯化。将1400ng Sfi I限制的pComb3X载体和700ng消化的scFv片段与5×连接酶缓冲液、10μL的T4 DNA连接酶(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)和水混合至最终体积为200μL。将混合物在16℃下孵育16小时以进行连接。
用乙醇沉淀后，将DNA沉淀溶解在15μL水中。为了产生文库，使用振荡器基因(Genepulser:Bio-Rad Laboratories,Hercules,CA,USA)通过电穿孔将连接样品转化到大肠杆菌菌株ER2738(New England Biolabs Inc.,Hitchin,Hertfordshine,SG4 OTY,England,UK)中。将细胞混合在5ml超级肉汤(SB)培养基中，并在37℃下以250rpm搅拌一小时进行孵育。然后，将3μL的100mg/mL卡那霉素加入10mL SB培养基。为了确定文库大小，将0.1μL、1μL和10μL培养样品涂布在含有50μg/mL卡那霉素的Luria肉汤(LB)琼脂平板上。搅拌1小时后，将4.5μL的100mg/mL卡那霉素加入LB培养物中，并进一步搅拌另外1小时。然后，将2mLVCM13辅助噬菌体的水溶液(>1011cfu/mL)与含有92.5μL的100mg/mL卡那霉素的预热LB(183mL)一起加入LB培养基中。将该混合物在37℃下以250rpm搅拌另外2小时。然后，将280μL(50mg/mL)卡那霉素加入培养物中，并在37℃搅拌过夜。第二天，使用高速离心机(Beckman，JA-10转子)在3,000g、4℃下离心细菌沉淀。然后，使用细菌沉淀提取噬菌粒DNA，同时将上清液转移至无菌离心瓶。接着将8克聚乙二醇-8000(PEG-8000，Sigma)和6克氯化钠(NaCl，Merck)加入到上清液中，然后在冰中保持30分钟。然后，将上清液在15,000g、4℃下离心15分钟。然后弃去上清液，将含有1％BSA的噬菌体沉淀Tris(复制)悬浮于缓冲盐水(TBS)中。
实例3固定化抗原上的文库淘选(生物淘选)
使用磁珠(Dynabeads M-270环氧树脂，Invitrogen)进行生物淘选。在室温下，通过在室温下一起搅拌同时旋转珠子和蛋白20小时，用5μg重组FAM19A5蛋白包被大约1×107个珠子。一旦完成包被，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤珠子4次，并在室温下在含有3％BSA的PBS中封闭一小时。然后，将包被的珠子与上述噬菌体展示的scFv在室温下培养两小时。为了除去任何未与抗原包被的珠子结合的噬菌体，用0.05％Tween20/PBS洗涤珠子。然后用50μL的0.1M甘氨酸/氯化氢(0.1M甘氨酸-HCl，pH 2.2)洗脱结合的噬菌体，并用3μL的2M Tris与氯化氢(tris-HCl，pH 9.1)中和。将该含有噬菌体的上清液用于感染大肠杆菌ER2738细胞，并将VCSM13辅助噬菌体用于扩增和拯救过夜。通过在含有50μg/ml卡那霉素的LB琼脂平板上印迹噬菌体感染的培养物，还测定来自噬菌体感染的培养物的噬菌体滴度的输入(输入)和产生(输出)。第二天，使用PEG-8000和NaCl沉淀噬菌体，随后将其用于生物淘选。通过重复上述过程进行生物淘选，直至总共五次不同的淘选。每次扩增时，筛选并选择对FAM19A5蛋白具有高亲和力的噬菌体。
实例4通过噬菌体ELISA选择克隆
为了分析从生物淘选中选择的克隆，我们从噬菌体展示的scFv中随机选择单个克隆，并使用ELISA证实克隆与FAM19A5重组蛋白结合。将FAM19A5重组蛋白稀释在0.1MNaHCO3缓冲液中，并使用100ng/孔的蛋白在4℃包被96孔微量滴定板16小时。第二天，用3％BSA/PBS在37℃封闭板1小时。然后，将噬菌体上清液与6％BSA/PBS混合，并在37℃培养2小时。然后用0.05％Tween20/PBS洗涤含有上清液的板。将HRP缀合的M13抗体(a-M13-HRP,Pierce Chemical Co,Rockford,IL,USA)稀释至1/5000。将50μl稀释的抗体加入到板中，并在37℃孵育1小时。孵育和洗涤后，向板中加入0.05M柠檬酸盐缓冲液、1μg/ml的2,2'-连氮基-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS,Amresco,Solon,OH,USA)和0.1％H2O2用于显色。在405nm下测量每个孔的吸光度。
分析了与FAM19A5重组蛋白结合并显示高吸光度的克隆(n＝24)。从这些克隆中获得了13个具有独特序列的scFv克隆。进一步选择后，获得了克隆2-13、3-2、1-65和1-28。
实例5抗FAM19A5-IgG2/4抗体的产生
将抗FAM19A5 scFv亚克隆到哺乳动物表达载体中。在FAM19A5 scFv基因序列中，将人Cκ基因与轻链可变结构域连接，并将人免疫球蛋白同种型IgG2/4的CH1、CH2和CH3基因与重链可变区连接。通过添加限制性位点(Genscript,USA)合成具有每条轻链和每条重链的抗体。将合成的基因插入到具有修饰的限制性位点的哺乳动物细胞表达载体中以促进克隆。首先，使用Hind III和Xba I(New England Biolabs,UK)限制酶将轻链基因插入载体中，然后通过使用NheI和BamHI(New England Biolabs,UK)限制酶将重链基因加入载体中。
为了表达和纯化抗FAM19A5-IgG2/4抗体，我们使用了哺乳动物细胞转染和过表达注射系统。我们将2μg/ml哺乳动物表达载体与4μg聚乙烯亚胺(PEI,Polysciences,Warrington,PA,USA)在150mM氯化钠(NaCl，Merck)中混合，相当于细胞培养体积的1/10。将混合物在室温下静置15分钟。将混合物加入HEK293F细胞(2×106细胞/ml，Invitrogen)，然后在含有100U/ml青霉素和链霉素(Invitrogen)的FREESTYLETM293表达培养基中，在7％CO2和37℃下，在135rpm的搅拌条件下，孵育六天。为了从细胞培养上清液中纯化表达的抗FAM19A5 IgG2/4抗体，我们使用蛋白A珠(RepliGen,Waltham,MA,USA)亲和凝胶色谱。将蛋白A色谱在4-12％Bis-Tris梯度凝胶电泳上运行。通过考马斯亮蓝染色证实蛋白的大小和产量。
实例6人口统计学和临床特征与血清FAM19A5蛋白浓度的比较
参与者
为了开始评估患有情绪障碍的患者中FAM19A5蛋白的水平，从高丽大学安南医院(韩国首尔)的精神诊所门诊患者招募总共110名诊断患重度抑郁症(MDD)的患者和总共43名诊断患I型躁郁症(n＝26)或II型躁郁症(BD)的患者(n＝17)。患者的平均年龄为20-65岁，并且被两个独立的精神病医师诊断为MDD或BD。对于对照组，从当地社区招募总共112名健康志愿者(20-65岁，无精神病史)。
MDD和BD的初始诊断基于精神障碍诊断和统计手册(DSM)-IV标准。这种诊断由精神病医师使用DSV-IV的组织临床会诊轴I障碍(SCID-I)来证实。使用生命图表方法在会诊中评估疾病的持续时间，包括重度抑郁、躁狂或轻度躁狂发作。在MRI扫描当天，使用17项汉密尔顿抑郁量表(HDRS)评价所有参与者的抑郁症状。Hamilton M.，《神经学神经外科精神病学杂志(J Neurol Neurosurg Psychiatry)》23:56-62(1960)。
MDD组的排除标准如下：(1)在最近6个月内任何其它大轴I或轴II精神疾病的初级共病诊断；(2)具有精神病特征的MDD；(3)需要住院治疗的急性自杀或杀人患者；(4)严重或不稳定的医学疾病的病史；(5)原发性神经疾病；以及(6)磁共振成像(MRI)的任何禁忌症。BD组的排除标准与MDD组中使用的标准相同，除了使用精神病特征。
在研究登记中，58名MDD患者未给药(确定为未给药MDD组)和52名MDD患者用抗抑郁药治疗(确定为给药-MDD组)。所有BD患者均服用精神药物。根据爱丁堡利手测试，所有参与者都是右撇子。Oldfield R.C.，《神经心理学(Neuropsychologia)》9:97-113(1971)。研究方案已根据赫尔辛基宣言(2008年修订)由高丽大学安南医院的机构审查委员会批准，并且所有参与者在参加之前均已提供书面知情同意书。
统计学分析
关于亚组中血清FAM19A5浓度的比较，以个体皮质厚度作为因变量；以子组作为自变量；以及以年龄和性别作为协变量进行协方差分析(ANCOVA)。关于皮质厚度分析，包含51名患有MDD的未给药患者和51名患有MDD的给药患者、28名BD患者和92名健康对照的数据。皮质厚度和血清FAM19A5浓度之间的相关性使用双尾Pearson偏相关进行分析，分别用于以下通过诊断和药物治疗状态确定的每组：MDD组、BD组(无BD患者是未给药的)、HC组、未给药的MDD组和给药的MDD组。在血清FAM19A5浓度和皮质厚度之间的Pearson偏相关分析中，以年龄、性别、HDRS得分和药物治疗状态(仅对MDD组)作为协变量进行调整。此外，我们应用Fisher的r到z转换来比较获得的如下组之间的任何显著相关性(P<0.05)的相关系数：未给药MDD组与HC组；给药MDD组与HC组；BD组与HC组。我们还使用针对年龄、性别和药物(仅针对MDD组与HC组)调整的ANCOVA作为扰嚷协变量进行组间皮质厚度的比较。对于多重比较校正，在相关性分析中应用错误发现率(FDR)以进行多重比较校正，q<0.05；两个半球的76次比较(Benjamini和Hochberg，1995)。我们还进行了受试者工作特征(ROC)曲线分析，以测试血清FAM19A5浓度作为筛选工具是否可以准确区分MDD或BD患者与健康对照或BD患者与MDD患者。曲线下面积(AUC)用作测试的对立筛选能力的量度。计算未给药MDD组与HC组之间、给药MDD组与HC组之间、BD组与HC组之间、未给药MDD组与BD组之间以及给药MDD组与BD组之间的筛选能力。随后计算相应的灵敏度、特异性、准确性和AUC。为了分析由于人口统计学和临床特征引起的组间差异，使用方差分析(ANOVA)分析年龄、HDRS得分和疾病持续时间，并使用卡方检验分析性别分布。所有统计学分析都是使用SPSS版本18.0(SPSS Inc.,Chicago,IL,USA)进行的。
结果
表8(下)提供了年龄、性别、HDRS-17得分、疾病持续时间(以月计)、未给药或给药患者数和来自每个组-即健康个体(HC)、未给药MDD患者(DN-MDD)、给药MDD患者(M-MDD)以及未给药I型躁郁症或II型躁郁症(BD)-的参与者的血清FAM19A5蛋白浓度(ng/mL)。观察到年龄(F(1,264)＝7.391，P<0.001)、性别(χ2＝22.060，P＝0.004)、HDRS得分(F(1,264)＝118.075，P<0.001)和疾病持续时间(F(1,264)＝7.391，P＝0.004)的显著差异。
表8.重度抑郁症、躁郁症和健康对照组的人口统计学和临床特征
Figure BDA0002433381950000771
数据代表年龄、HDRS-17得分、疾病持续时间和血清FAM19A5浓度的平均值±标准误。
通过卡方检验获得性别分布的p值。
通过方差分析(ANOVA)获得用于比较年龄、HDRS-17得分和疾病持续时间的p值。
通过对年龄和性别进行调整的协方差分析(ANCOVA)，获得用于比较血清FAM19A5的p值。
MDD，重度抑郁症；HC，健康对照；BD，躁郁症患者；HDRS-17，汉密尔顿抑郁量表。
在四组之间的血清FAM19A5蛋白浓度也观察到显著差异。参见表9(上)和图1。与HC组相比，未给药的MDD组(F(1,169)＝76.620，P<0.001)和BD组(F(1,154)＝302.718，P<0.001)均显示血清FAM19A5蛋白浓度显著更高。未给药组(F(1,109)＝36.912，P<0.001)和BD组(F(1,94)＝139.808，P<0.001)的血清FAM19A5蛋白水平也显著高于给药MDD组。在未给药MDD组和BD组之间，BD组具有更高的血清FAM19A5蛋白浓度。
在给药MDD组和HC组(F(1,163)＝2.936，P＝0.089)之间未观察到血清FAM19A5蛋白浓度的显著差异。在图2A至2D中提供了表示来自不同组的血清FAM19A5浓度分布的散点图。
实例7
皮质厚度和血清FAM19A5蛋白浓度的比较
MRI数据采集
为了评估上述不同诊断组之间的皮质厚度与血清FAM19A5蛋白浓度之间的关联(实例6)，使用3.0T Siemens Trio全身成像系统(Siemens Medical Systems,Iselin,NewJersey,United States)获得参与者大脑的T1加权图像。使用3D T1加权磁化准备的快速梯度回波(MP-RAGE)序列以及以下参数：重复时间(TR)，1900ms；回声时间(TE)，2.6ms；视野，220mm；矩阵大小，256×256；切片厚度，1mm；冠状切片的数量，176(无间隙)；体素尺寸，0.86×0.86×1mm3；翻转角，16°翻转角；和激发次数，1与前连合-后连合线平行地获取T1加权图像。
图像处理
然后，使用在FreeSurfer 5.3开发版本(Massachusetts General Hospital,Boston,U.S.,surfer.nmr.mgh.harvard.edu)中实施的自动化程序，从T1加权图像计算皮质厚度。为此，在FreeSurfer程序中使用T1加权图像计算皮质表面重建的三维模型。这些程序的技术方面的详细信息已在以前的出版物中进行了描述。参见Dale A.M.等人，《神经影像学(Neuroimage)》9:179-94(1999)；Fischl B.等人，《IEEE医学影像学汇刊(IEEE TransMed Imaging)》20:70-80(2001)；Fischl B.等人，《神经元(Neuron)》33:341-55(2002)；Fischl B.等人，《神经影像学(Neuroimage)》9:195-207(1999)；Fischl B.等人，《大脑皮层(Cereb Cortex)》14:11-22(2004)；和Segonne F.等人，《IEEE医学影像学汇刊(IEEE TransMed Imaging)》26:518-29(2007)。
简而言之，进行了以下步骤(Han K.M.等人，《科学报告(Sci Rep.)》7:42621(2017))：去除非脑组织，对每个受试者的原始脑进行自动Talairach转化，对体积结构进行分割，将皮质表面充气到平均球形表面，强度归一化和自动拓扑校正。通过检测表面变形引起的最大强度变化来确定灰质/白质和软膜界限之间的过渡。然后目视检查每个受试者的整个皮层，并丢弃来自分割不准确的受试者的数据。然后通过以前描述的方法(Han等人，2017)将每个半球自动分成74个不同的皮质区，这些区域由回和沟组成，并自动计算这些皮质区的厚度。分析包含了每个半球中38个皮质回的皮质厚度。
结果
如图3所示，在未给药的MDD组中，在15个皮质回(两个前额皮层、后扣带回皮层、上颞区、枕区、岛盖部以及颞平面、左横向额极和背后扣带回、三角部、额中回、右舌回和颞横前回)的厚度和血清FAM19A5蛋白浓度(全部，经FDR校正的P[PFDR]<0.05)之间存在统计学上显著的逆相关。在HC组中，在这些皮质回中没有观察到这种关系(全部，PFDR>0.05)。来自给药MDD组或BD组的参与者的皮质厚度与血清FAM19A5蛋白浓度之间也无显著相关性(全部，PFDR>0.05)。
此外，与HC组中相应的皮质区相比时，血清FAM19A5蛋白浓度与某些大脑区域(即岛盖部以及颞平面、左横向额极和背后扣带回、三角部、额中回以及右舌回和颞横前回)的皮质厚度之间的相关系数显著不同。图4A至4E提供了散点图，其示出了来自这些皮质区中的一些的皮质厚度与血清FAM19A5浓度之间的关系。
实例8
用于诊断情绪障碍的血清FAM19A5蛋白浓度的ROC曲线分析
为了进一步评估测量血清中FAM19A5蛋白水平以诊断情绪障碍(例如重度抑郁症或躁郁症)的能力，针对不同的比较组进行了受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析。比较组包含：(i)未给药的MDD与HC；(ii)给药的MDD与HC；(iii)BD与HC；(iv)BD与未给药的MDD；和(v)BD与给药的MDD。
如图5C和5D所示，BD与HC和BD与M-MDD之间的分析表明，血清FAM19A5蛋白浓度可能是诊断I或II型躁郁症的好指标。BD与HC分析的相关值包含：AUC：0.998，灵敏度：0.977，特异性：0.973，准确性：0.974。BD与M-MDD的相关值包含：AUC：1.000，灵敏度：1.000，特异性：1.000，准确性：1.000。而且，如图5A所示，血清FAM19A5蛋白浓度也可能在诊断重度抑郁症中有效(AUC：0.752，灵敏度：0.655，特异性：0.652，准确性：0.653)。不足为奇，如图5B和5E所示，血清FAM19A5蛋白浓度不可能有效区分M-MDD与HC(AUC：0.571，灵敏度：0.654，特异性：0.652，准确性：0.652)和BD与DN-MDD(AUC：0.598，灵敏度：0.535，特异性：0.534，准确性：0.535)。
总的来说，以上结果表明，测量患者血清FAM19A5蛋白浓度并与健康个体的浓度进行比较可能是诊断情绪障碍(例如重度抑郁症或躁郁症)的有效方法。
实例9
体内施用抗FAM19A5抗体后对急性应激反应的评价
为了评估抗FAM19A5抗体在治疗情绪障碍(特别是重度抑郁症)中的功效，将使用抑郁症的大鼠模型，其中将FAM19A5抗体施用于大鼠，并且使用强制游泳试验(FST)评估其对急性应激的反应，如Porsolt R.D.等人，《自然(Nature)》266:730-732(1977)所述。
简言之，将大鼠分为三个不同的组，并且每组将接受(i)未治疗(即阴性对照)，(ii)抗FAM19A5抗体(即实验组)或(iii)已知抗抑郁药(即阳性对照)约一周。然后，将来自每个组的大鼠放入含有水的逃脱不了的圆筒中。在最初的挣扎、游泳和/或攀爬期之后，大鼠最终将表现出漂浮或不动的姿势，其鼻子恰好保持在水上。将在各组之间比较作为“固定”(除了使鼻子保持在水上所必需的动作以外，没有其他动作)、“挣扎/攀爬”(观察到的使得前爪破坏水面的前肢快速运动)，以及“游泳”(观察到的前肢或后肢以划桨的方式运动)的花费的持续时间。强制游泳测试完成后，还将从动物收集外周血以测量其血清FAM19A5蛋白水平。可以预料的是，与未治疗的大鼠相比，用已知的抗抑郁药或抗FAM19A5抗体治疗的大鼠将花费更多的时间“挣扎/攀爬”或“游泳”。还预测与未治疗的动物相比，在用已知抗抑郁药或抗FAM19A5抗体治疗的大鼠中血清FAM19A5蛋白水平将更低。
应当理解，包含发明内容和摘要部分在内的具体实施方式部分旨在用于解释权利要求。发明内容和摘要部分可以阐述发明人所设想的本公开的一个或多个但不是所有示例性实施例，因此，不旨在以任何方式限制本公开和所附权利要求。
以上已经借助于示出了指定功能及其关系的实现的功能构建块描述了本公开。为了便于描述，在本文任意定义了这些功能性构建块的边界。只要适当地执行指定的功能及其关系，就可以定义可替代的边界。
具体实施例的上述描述将如此充分地揭示本公开的一般性质，以致其他人可以通过应用本领域技术内的知识，在不偏离本公开的一般概念的情况下，在不进行过度实验的情况下，容易地修改和/或改变此类具体实例的各种应用。因此，基于本文所呈现的教示和指导，此类改变和修改旨在处于所公开实施例的等效物的含义和范围内。应当理解，这里的措辞或术语是为了描述而不是限制的目的，使得本说明书的术语或措辞由技术人员根据教示和指导来解释。
本公开的广度和范围不应由上述示例性实施例中的任何一个限制，而应仅根据所附权利要求及其等同物来限定。
本文引用的所有出版物、专利、专利申请、互联网站点和登录号/数据库序列(包含多核苷酸和多肽序列二者)通过引用整体并入本文，用于所有目的，其程度如同每个单独的出版物、专利、专利申请、互联网站点或登录号/数据库序列被具体和单独地指明通过引用如此并入。
该PCT申请要求2017年10月2日提交的第62/566,877号美国临时申请和2017年11月7日提交的第62/582,888号美国临时申请的优先权，这两个申请均通过引用整体并入本文。
序列表
<110> 纽洛可科学有限公司(NEURACLE SCIENCE CO., LTD.)
高丽大学校产学协力团(KOREA UNIVERSITY RESEARCH AND BUSINESS FOUNDATION)
<120> 抗序列相似家族19成员A5抗体用于治疗和诊断情绪障碍的用途
<130> 3763.007PC02/C-K/DKC
<150> 62/566,877
<151> 2017-10-02
<150> 62/582,888
<151> 2017-11-07
<160> 200
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 132
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Met Ala Pro Ser Pro Arg Thr Gly Ser Arg Gln Asp Ala Thr Ala Leu
1 5 10 15
Pro Ser Met Ser Ser Thr Phe Trp Ala Phe Met Ile Leu Ala Ser Leu
20 25 30
Leu Ile Ala Tyr Cys Ser Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val
35 40 45
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
50 55 60
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
65 70 75 80
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
85 90 95
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
100 105 110
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
115 120 125
Thr Thr Val Ser
130
<210> 2
<211> 125
<212> PRT
<213> 智人
<400> 2
Met Gln Leu Leu Lys Ala Leu Trp Ala Leu Ala Gly Ala Ala Leu Cys
1 5 10 15
Cys Phe Leu Val Leu Val Ile His Ala Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln
20 25 30
Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser
35 40 45
Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg
50 55 60
Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp
65 70 75 80
Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu
85 90 95
Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys
100 105 110
Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr Thr Thr Val Ser
115 120 125
<210> 3
<211> 53
<212> PRT
<213> 智人
<400> 3
Met Tyr His His Arg Glu Trp Pro Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln
1 5 10 15
Trp Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu
20 25 30
Ile Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys
35 40 45
Thr Thr Thr Val Ser
50
<210> 4
<211> 1501
<212> DNA
<213> 智人
<400> 4
ggcggcggag gatggcgcgc gcggggcccg cacgtggagg ccggcgcggg ggcgcgggca 60
gggccggctg ctgagacgcg ctgctgcccc ccgcgcgggc gccgcggctt caatggcgcc 120
atcgcccagg accggcagcc ggcaagatgc gaccgccctg cccagcatgt cctcaacttt 180
ctgggcgttc atgatcctgg ccagcctgct catcgcctac tgcagtcagc tggccgccgg 240
cacctgtgag attgtgacct tggaccggga cagcagccag cctcggagga cgatcgcccg 300
gcagaccgcc cgctgtgcgt gtagaaaggg gcagatcgcc ggcaccacga gagcccggcc 360
cgcctgtgtg gacgcaagaa tcatcaagac caagcagtgg tgtgacatgc ttccgtgtct 420
ggagggggaa ggctgcgact tgttaatcaa ccggtcaggc tggacgtgca cgcagcccgg 480
cgggaggata aagaccacca cggtctcctg acaaacacag cccctgaggg ggccccggga 540
gtggccttgg ctccctggag agcccacgtc tcagccacag ttctccactc gcctcggact 600
tcacccgttc tctgccgccc gcccactccg tttccctgtg gtccgtgaag gacggcctca 660
ggccttggca tcctgagctt cggtctgtcc agccgacccg aggaggccgg actcagacac 720
ataggcgggg ggcggcacct ggcatcagca atacgcagtc tgtgggagcc cggccgcgcc 780
cagcccccgc cgaccgtggc gttggccctg ctgtcctcag aggaggagga ggaggaggca 840
gctccggcag ccacagaagg ctgcagccca gcccgcctga gacacgacgc ctgccccagg 900
ggactgtcag gcacagaagc ggcctcctcc cgtgccccag actgtccgaa ttgcttttat 960
tttcttatac tttcagtata ctccatagac caaagagcaa aatctatctg aacctggacg 1020
caccctcact gtcagggtcc ctggggtcgc ttgtgcgggc gggagggcaa tggtggcaga 1080
gacatgctgg tggccccggc ggagcggaga gggcggccgt ggtggaggcc tccaccccag 1140
gagcaccccg cacaccctcg gaggacgggc ttcggctgcg cggaggccgt ggcacacctg 1200
cgggaggcag cgacggcccc cacgcagacg ccgggaacgc aggccgcttt attcctctgt 1260
acttagatca acttgaccgt actaaaatcc ctttctgttt taaccagtta aacatgcctc 1320
ttctacagct ccatttttga tagttggata atccagtatc tgccaagagc atgttgggtc 1380
tcccgtgact gctgcctcat cgatacccca tttagctcca gaaagcaaag aaaactcgag 1440
taacacttgt ttgaaagaga tcattaaatg tattttgcaa agcccaaaaa aaaaaaaaaa 1500
a 1501
<210> 5
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位F1
<400> 5
Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val Thr Leu Asp Arg
1 5 10
<210> 6
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位F2
<400> 6
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 7
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位F3
<400> 7
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
1 5 10 15
Ala Arg Pro Ala
20
<210> 8
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位F4
<400> 8
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
1 5 10 15
Cys Asp Met Leu
20
<210> 9
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位F5
<400> 9
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
1 5 10 15
Asn Arg Ser Gly
20
<210> 10
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位F6
<400> 10
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
1 5 10 15
Thr Thr Val Ser
20
<210> 11
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体VH-CDR1
<400> 11
Ser His Gly Met Phe
1 5
<210> 12
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体VH-CDR2
<400> 12
Glu Ile Thr Asn Asp Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Gly Ser Ala Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 13
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体VH-CDR3
<400> 13
Ser Thr Tyr Glu Cys Pro Gly Gly Phe Ser Cys Trp Gly Asp Thr Gly
1 5 10 15
Gln Ile Asp Ala
20
<210> 14
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体VH-CDR1
<400> 14
Ser Phe Asn Met Phe
1 5
<210> 15
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体VH-CDR2
<400> 15
Gln Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Asn Tyr Ala Pro Ala Val Arg
1 5 10 15
Gly
<210> 16
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体VH-CDR3
<400> 16
Ser Ser Tyr Asp Cys Pro Tyr Gly His Cys Ser Ser Gly Val Asp Ser
1 5 10 15
Ala Gly Glu Ile Asp Ala
20
<210> 17
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体VH-CDR1
<400> 17
Ser Tyr Gln Met Gly
1 5
<210> 18
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体VH-CDR2
<400> 18
Val Ile Asn Lys Ser Gly Ser Asp Thr Ser
1 5 10
<210> 19
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体VH-CDR3
<400> 19
Gly Ser Ala Ser Tyr Ile Thr Ala Ala Thr Ile Asp Ala
1 5 10
<210> 20
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VH-CDR1
<400> 20
Gly Phe Asp Phe Ser Asp Tyr Gly
1 5
<210> 21
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VH-CDR2
<400> 21
Ile Arg Ser Asp Gly Ser Asn Pro
1 5
<210> 22
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VH-CDR3
<400> 22
Ala Lys Asp Gly Asn Gly Tyr Cys Ala Leu Asp Ala Tyr Arg Ser Gly
1 5 10 15
Gly Tyr Ser Cys Gly Val Tyr Pro Gly Ser Ile Asp Ala
20 25
<210> 23
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体VL-CDR1
<400> 23
Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Gly
1 5
<210> 24
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体VL-CDR2
<400> 24
Trp Asp Asp Glu Arg Pro Ser
1 5
<210> 25
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体VL-CDR3
<400> 25
Gly Thr Glu Asp Ile Ser Gly Thr Ala Gly Val
1 5 10
<210> 26
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体VL-CDR1
<400> 26
Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr Gly
1 5 10
<210> 27
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体VL-CDR2
<400> 27
Glu Ser Asn Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 28
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体VL-CDR3
<400> 28
Gly Ser Trp Asp Ser Ser Asn Gly Gly Ile
1 5 10
<210> 29
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体VL-CDR1
<400> 29
Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly
1 5 10
<210> 30
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体VL-CDR2
<400> 30
Trp Asn Asp Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 31
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体VL-CDR3
<400> 31
Gly Asn Asp Asp Tyr Ser Ser Asp Ser Gly Tyr Val Gly Val
1 5 10
<210> 32
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VL-CDR1
<400> 32
Gly Tyr Gly Tyr Gly
1 5
<210> 33
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VL-CDR2
<400> 33
Gln Asn Asp
1
<210> 34
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VL-CDR3
<400> 34
Gly Ser Glu Asp Ser Ser Thr Leu Ala Gly Ile
1 5 10
<210> 35
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体VH
<400> 35
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His
20 25 30
Gly Met Phe Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Glu Ile Thr Asn Asp Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Gly Ser Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Tyr Glu Cys Pro Gly Gly Phe Ser Cys Trp Gly Asp
100 105 110
Thr Gly Gln Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 36
<211> 131
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体VH
<400> 36
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Asn Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gln Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Asn Tyr Ala Pro Ala Val
50 55 60
Arg Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Pro Gly Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Ser Tyr Asp Cys Pro Tyr Gly His Cys Ser Ser Gly Val
100 105 110
Asp Ser Ala Gly Glu Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser
130
<210> 37
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体VH
<400> 37
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gln Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Asn Lys Ser Gly Ser Asp Thr Ser Tyr Gly Ser Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Ala Ser Tyr Ile Thr Ala Ala Thr Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
115 120
<210> 38
<211> 136
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VH
<400> 38
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Arg Ser Asp Gly Ser Asn Pro Ser Tyr Gly Ser Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Lys Asp Asn Gly Arg Ser Thr Val Arg
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Gly Asn Gly Tyr Cys Ala Leu Asp Ala Tyr Arg Ser Gly
100 105 110
Gly Tyr Ser Cys Gly Val Tyr Pro Gly Ser Ile Asp Ala Trp Gly His
115 120 125
Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser
130 135
<210> 39
<211> 104
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体VL
<400> 39
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1 5 10 15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Gly Trp Phe Gln Gln
20 25 30
Lys Ser Pro Gly Ser Ala Leu Val Thr Val Ile Tyr Trp Asp Asp Glu
35 40 45
Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ala Leu Ser Gly Ser
50 55 60
Thr Asn Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Gly Thr Glu Asp Ile Ser Gly Thr Ala Gly Val Phe Gly
85 90 95
Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100
<210> 40
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体VL
<400> 40
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1 5 10 15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr
20 25 30
Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ser Asn Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Thr Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Asp Asp Glu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ser Ser Asn Gly
85 90 95
Gly Ile Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 41
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体VL
<400> 41
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1 5 10 15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly Trp
20 25 30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Ser Ser Ala Pro Leu Thr Val Ile Tyr Trp
35 40 45
Asn Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys
50 55 60
Ser Gly Ser Thr His Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Glu Asp
65 70 75 80
Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Asn Asp Asp Tyr Ser Ser Asp Ser Gly
85 90 95
Tyr Val Gly Val Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 42
<211> 104
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VL
<400> 42
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Leu Glu Gly Thr Val
1 5 10 15
Glu Ile Thr Cys Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln
20 25 30
Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Gln Asn Asp Lys
35 40 45
Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser
50 55 60
Thr Gly Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Val Glu Asp Glu Ala Val
65 70 75 80
Tyr Tyr Cys Gly Ser Glu Asp Ser Ser Thr Leu Ala Gly Ile Phe Gly
85 90 95
Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu
100
<210> 43
<211> 388
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体VH
<400> 43
gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctcagcctc 60
gtctgcaagg cctccgggtt caccttcagc agccatggca tgttctgggt gcgacagacg 120
cccggcaagg ggttggaata tgtcgctgaa attaccaatg atggtagtgg cacaaactac 180
gggtcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacagtgagg 240
ctgcagctga acaacctcag ggctgaggac accggcacct acttctgcgc cagatctact 300
tatgaatgtc ctggtggttt tagttgttgg ggtgatactg gtcaaataga cgcatggggc 360
cacgggaccg aagtcatcgt ctcctcca 388
<210> 44
<211> 394
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体VH
<400> 44
gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctcagcctc 60
gtctgcaagg cctccgggtt caccttcagc agcttcaaca tgttctgggt gcgacaggcg 120
cccggcaagg ggctggaata cgtcgctcaa attagcagca gtggtagtag cacaaactac 180
gcacccgcgg tgaggggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacagtgagg 240
ctgcagctga acaaccccgg ggctgaagac accggcacct actactgcgc caaaagtagt 300
tatgactgtc cttacggtca ttgtagtagt ggtgttgata gtgctggtga gatcgacgca 360
tggggccacg ggaccgaagt catcgtctcc tcca 394
<210> 45
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体VH
<400> 45
gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctcagcctc 60
gtctgcaagg cctccgggtt caccttcagc agctatcaga tgggctgggt gcgacaggcg 120
cccggcaagg ggctggaatg ggtcggtgtt attaacaaga gtggtagtga cacatcatac 180
gggtcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgagggaca acgggcagag cacagtgagg 240
ctgcagctga acaacctcag ggctgaggac accggcacct acttctgcgc caaaggttct 300
gctagttata taactgctgc taccatcgac gcatggggcc acgggaccga agtcatcgtc 360
tcctcc 366
<210> 46
<211> 408
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VH
<400> 46
gccgtgacgt tggacgagtc cgggggcggc ctccagacgc ccggaggagc gctcagcctc 60
gtctgcaagg cctccgggtt cgacttcagc gattatggca tgggttgggt gcgacaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggttgctgct attagaagtg atggtagtaa cccatcatac 180
gggtcggcgg tgaagggccg tgccaccatc tcgaaggaca acgggcgaag cacagtgagg 240
ctgcagctga acaacctcag ggctgaggac accgccacct actactgcgc caaggatggt 300
aatggttact gtgctctcga tgcttatcgt agtggtggtt atagttgtgg tgtttatcct 360
ggtagcatcg acgcatgggg ccacgggacc gaagtcatcg tctcctcc 408
<210> 47
<211> 315
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体VL
<400> 47
ggccctgact cagccgtcct cggtgtcagc aaacccagga gaaaccgtca agataacctg 60
ctccgggggt agctatagct atggctggtt ccagcagaag tctcctggca gtgcccttgt 120
cactgtgatc tactgggatg atgagagacc ctcggacatc ccttcacgat tctccggtgc 180
cctatccggc tccacaaaca cattaaccat cactggggtc caagccgacg acgaggctgt 240
ctatttctgt gggactgaag acatcagcgg cactgctggt gtatttgggg ccgggacaac 300
cctgaccgtc ctggg 315
<210> 48
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体VL
<400> 48
ggccctgact cagccgtcct cggtgtcagc aaacccagga gaaaccgtca agatcacctg 60
ctccgggggt ggcagctatg ctggaagtta ctattatggc tggtaccagc agaaggcacc 120
tggcagtgcc cctgtcactc tgatctatga aagcaacaag agaccctcgg acatcccttc 180
acgattctcc ggttccacat ctggctccac agccacacta accatcactg gggtccaagc 240
cgatgacgag gctatctatt actgtgggag ctgggacagt agcaatggtg gtatatttgg 300
ggccgggaca accctgaccg tcctagg 327
<210> 49
<211> 331
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体VL
<400> 49
ggccctgact cagccgtcct cggtgtcagc aaaccctggg gaaactgtca agatcacctg 60
ctccgggggt ggtagcagtg gctatggtta tggctggtat cagcagaagt cacctagcag 120
tgcccctctc actgtgatct actggaacga caagagaccc tcggacatcc cttcacgatt 180
ctccggttcc aaatccggct ccacacacac attaaccatc actggggtcc aagccgagga 240
cgaggctgta tatttctgtg ggaatgatga ctacagcagt gatagtggat atgtcggtgt 300
atttggggcc gggacaaccc tgaccgtcct a 331
<210> 50
<211> 312
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体VL
<400> 50
gccctgactc agccgtcctc ggtgtcagca aacctggaag gaaccgtcga gatcacctgc 60
tccgggagtg gctatggtta tggctggtat cagcagaagt ctcctggcag tgcccctgtc 120
actgtgatct atcagaacga caagagaccc tcggacatcc cttcacgatt ctccggttcc 180
aaatccggct ccacgggcac attaaccatc actggggtcc aagtcgagga cgaggctgtc 240
tattactgtg ggagtgaaga cagcagcact cttgctggta tatttggggc cgggacaacc 300
ctgaccgtcc ta 312
<210> 51
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M3突变体
<400> 51
Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val
1 5 10 15
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Ile Glu Glu Arg Ser Gln
20 25 30
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
35 40 45
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
50 55 60
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
65 70 75 80
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
85 90 95
Thr Thr Val Ser
100
<210> 52
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M4突变体
<400> 52
Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val
1 5 10 15
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
20 25 30
Thr Val Lys Cys Ser Cys Phe Pro Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
35 40 45
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
50 55 60
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
65 70 75 80
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
85 90 95
Thr Thr Val Ser
100
<210> 53
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M5突变体
<400> 53
Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val
1 5 10 15
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
20 25 30
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
35 40 45
Asn Lys Pro Ser Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
50 55 60
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
65 70 75 80
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
85 90 95
Thr Thr Val Ser
100
<210> 54
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M6突变体
<400> 54
Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val
1 5 10 15
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
20 25 30
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
35 40 45
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Leu Gln Arg Trp Trp
50 55 60
Cys Gln Met Glu Leu Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
65 70 75 80
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
85 90 95
Thr Thr Val Ser
100
<210> 55
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M7突变体
<400> 55
Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val
1 5 10 15
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
20 25 30
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
35 40 45
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
50 55 60
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Glu Cys Lys Thr Leu Pro
65 70 75 80
Asp Asn Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
85 90 95
Thr Thr Val Ser
100
<210> 56
<211> 101
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M8突变体
<400> 56
Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val
1 5 10 15
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
20 25 30
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
35 40 45
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
50 55 60
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
65 70 75 80
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Ser Cys Ser Ser Gly Asn Lys Ile Lys
85 90 95
Thr Thr Thr Val Ser
100
<210> 57
<211> 459
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体HC
<400> 57
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His
20 25 30
Gly Met Phe Trp Val Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Glu Ile Thr Asn Asp Gly Ser Gly Thr Asn Tyr Gly Ser Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Tyr Glu Cys Pro Gly Gly Phe Ser Cys Trp Gly Asp
100 105 110
Thr Gly Gln Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser
115 120 125
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
130 135 140
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
145 150 155 160
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
165 170 175
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
180 185 190
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln
195 200 205
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
210 215 220
Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
225 230 235 240
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
245 250 255
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
260 265 270
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
275 280 285
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
290 295 300
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
305 310 315 320
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
325 330 335
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
340 345 350
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
355 360 365
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
370 375 380
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
385 390 395 400
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
405 410 415
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
420 425 430
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
435 440 445
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 58
<211> 461
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体HC
<400> 58
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Asn Met Phe Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Val
35 40 45
Ala Gln Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Asn Tyr Ala Pro Ala Val
50 55 60
Arg Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Pro Gly Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Ser Tyr Asp Cys Pro Tyr Gly His Cys Ser Ser Gly Val
100 105 110
Asp Ser Ala Gly Glu Ile Asp Ala Trp Gly His Gly Thr Glu Val Ile
115 120 125
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
130 135 140
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
145 150 155 160
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
165 170 175
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
180 185 190
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
195 200 205
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
210 215 220
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
225 230 235 240
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
245 250 255
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
260 265 270
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
275 280 285
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
290 295 300
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
305 310 315 320
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
325 330 335
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
340 345 350
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
355 360 365
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
370 375 380
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
385 390 395 400
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
405 410 415
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
420 425 430
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
435 440 445
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455 460
<210> 59
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体HC
<400> 59
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gln Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Val Ile Asn Lys Ser Gly Ser Asp Thr Ser Tyr Gly Ser Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Gln Ser Thr Val Arg
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Ser Ala Ser Tyr Ile Thr Ala Ala Thr Ile Asp Ala Trp
100 105 110
Gly His Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 60
<211> 466
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体HC
<400> 60
Ala Val Thr Leu Asp Glu Ser Gly Gly Gly Leu Gln Thr Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ala Leu Ser Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ala Ile Arg Ser Asp Gly Ser Asn Pro Ser Tyr Gly Ser Ala Val
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Lys Asp Asn Gly Arg Ser Thr Val Arg
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Gly Asn Gly Tyr Cys Ala Leu Asp Ala Tyr Arg Ser Gly
100 105 110
Gly Tyr Ser Cys Gly Val Tyr Pro Gly Ser Ile Asp Ala Trp Gly His
115 120 125
Gly Thr Glu Val Ile Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
130 135 140
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
145 150 155 160
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
165 170 175
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
180 185 190
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
195 200 205
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
210 215 220
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
225 230 235 240
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
245 250 255
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
260 265 270
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
275 280 285
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
290 295 300
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
305 310 315 320
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
325 330 335
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
340 345 350
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
355 360 365
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
370 375 380
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
385 390 395 400
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
405 410 415
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
420 425 430
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
435 440 445
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
450 455 460
Gly Lys
465
<210> 61
<211> 211
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 2-13抗体LC
<400> 61
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1 5 10 15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Ser Tyr Ser Tyr Gly Trp Phe Gln Gln
20 25 30
Lys Ser Pro Gly Ser Ala Leu Val Thr Val Ile Tyr Trp Asp Asp Glu
35 40 45
Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ala Leu Ser Gly Ser
50 55 60
Thr Asn Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val
65 70 75 80
Tyr Phe Cys Gly Thr Glu Asp Ile Ser Gly Thr Ala Gly Val Phe Gly
85 90 95
Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val
100 105 110
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
115 120 125
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
130 135 140
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
145 150 155 160
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
165 170 175
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
180 185 190
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
195 200 205
Gly Glu Cys
210
<210> 62
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3-2抗体LC
<400> 62
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1 5 10 15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Tyr Ala Gly Ser Tyr Tyr Tyr
20 25 30
Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ser Asn Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Thr Ser Gly Ser Thr Ala Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Asp Asp Glu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Ser Ser Asn Gly
85 90 95
Gly Ile Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Arg Ser Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 63
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-65抗体LC
<400> 63
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Pro Gly Glu Thr Val
1 5 10 15
Lys Ile Thr Cys Ser Gly Gly Gly Ser Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly Trp
20 25 30
Tyr Gln Gln Lys Ser Pro Ser Ser Ala Pro Leu Thr Val Ile Tyr Trp
35 40 45
Asn Asp Lys Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys
50 55 60
Ser Gly Ser Thr His Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Ala Glu Asp
65 70 75 80
Glu Ala Val Tyr Phe Cys Gly Asn Asp Asp Tyr Ser Ser Asp Ser Gly
85 90 95
Tyr Val Gly Val Phe Gly Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Arg Ser
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 64
<211> 211
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 1-28抗体LC
<400> 64
Ala Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Asn Leu Glu Gly Thr Val
1 5 10 15
Glu Ile Thr Cys Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Tyr Gly Trp Tyr Gln Gln
20 25 30
Lys Ser Pro Gly Ser Ala Pro Val Thr Val Ile Tyr Gln Asn Asp Lys
35 40 45
Arg Pro Ser Asp Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser
50 55 60
Thr Gly Thr Leu Thr Ile Thr Gly Val Gln Val Glu Asp Glu Ala Val
65 70 75 80
Tyr Tyr Cys Gly Ser Glu Asp Ser Ser Thr Leu Ala Gly Ile Phe Gly
85 90 95
Ala Gly Thr Thr Leu Thr Val Leu Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val
100 105 110
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
115 120 125
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
130 135 140
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
145 150 155 160
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
165 170 175
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
180 185 190
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
195 200 205
Gly Glu Cys
210
<210> 65
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EP1表位
<400> 65
Ile Val Thr Leu Asp
1 5
<210> 66
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EP2表位
<400> 66
Asp Ser Ser Gln Pro
1 5
<210> 67
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EP3表位
<400> 67
Arg Thr Ile Ala Arg
1 5
<210> 68
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EP4表位
<400> 68
Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys
1 5
<210> 69
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EP5表位
<400> 69
Ala Arg Pro Ala
1
<210> 70
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EP6表位
<400> 70
Lys Thr Lys Gln Trp Cys Asp Met Leu
1 5
<210> 71
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EP7表位
<400> 71
Gly Cys Asp Leu Leu Ile Asn Arg
1 5
<210> 72
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> EP8表位
<400> 72
Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg
1 5
<210> 73
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-01-BSA (#1)
<400> 73
Thr Ala Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 74
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-02-BSA (#2)
<400> 74
Thr Leu Ala Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 75
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-03-BSA (#3)
<400> 75
Thr Leu Asp Arg Ala Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 76
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-04-BSA (#4)
<400> 76
Thr Leu Asp Arg Asp Ala Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 77
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-05-BSA (#5)
<400> 77
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ala Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 78
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-06-BSA (#6)
<400> 78
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Ala Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 79
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-07-BSA (#7)
<400> 79
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Ala Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 80
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-08-BSA (#8)
<400> 80
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Ala Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 81
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-09-BSA (#9)
<400> 81
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Ala Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 82
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-10-BSA (#10)
<400> 82
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ala Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 83
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-11-BSA (#11)
<400> 83
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Arg Arg Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 84
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-12-BSA (#12)
<400> 84
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Ala Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Cys
20
<210> 85
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2-12-BSA (#13)
<400> 85
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Cys
20
<210> 86
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 野生型FAM19A5同种型2（无信号肽）
<400> 86
Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val
1 5 10 15
Thr Leu Asp Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
20 25 30
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
35 40 45
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
50 55 60
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
65 70 75 80
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
85 90 95
Thr Thr Val Ser
100
<210> 87
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M1突变体
<400> 87
Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Val Ile
1 5 10 15
Ala Ala His Arg Asp Ser Ser Gln Pro Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
20 25 30
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
35 40 45
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
50 55 60
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
65 70 75 80
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
85 90 95
Thr Thr Val Ser
100
<210> 88
<211> 100
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> M2突变体
<400> 88
Gln Phe Leu Lys Glu Gly Gln Leu Ala Ala Gly Thr Cys Glu Ile Val
1 5 10 15
Thr Leu Asp Arg Cys Cys Asn Lys Asn Arg Arg Thr Ile Ala Arg Gln
20 25 30
Thr Ala Arg Cys Ala Cys Arg Lys Gly Gln Ile Ala Gly Thr Thr Arg
35 40 45
Ala Arg Pro Ala Cys Val Asp Ala Arg Ile Ile Lys Thr Lys Gln Trp
50 55 60
Cys Asp Met Leu Pro Cys Leu Glu Gly Glu Gly Cys Asp Leu Leu Ile
65 70 75 80
Asn Arg Ser Gly Trp Thr Cys Thr Gln Pro Gly Gly Arg Ile Lys Thr
85 90 95
Thr Thr Val Ser
100
<210> 89
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VH CDR1
<400> 89
Thr Tyr Ala Val Thr
1 5
<210> 90
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VH CDR2
<400> 90
Tyr Ile Asn Trp Arg Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 91
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VH CDR3
<400> 91
Asp Ala Ser Ser Gly Ala Ala Phe Gly Ser Tyr Gly Met Asp Pro
1 5 10 15
<210> 92
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VL CDR1
<400> 92
Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 93
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VL CDR2
<400> 93
Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser
1 5
<210> 94
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VL CDR3
<400> 94
Gln Gln Gly Tyr Ser Ser Thr Asn Val Trp Asn Ala
1 5 10
<210> 95
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4抗体VH CDR1
<400> 95
Ser Ser Asn Trp Trp Ser
1 5
<210> 96
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4抗体VH CDR2
<400> 96
Glu Ile Tyr His Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Gly
1 5 10 15
<210> 97
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4抗体VH CDR3
<400> 97
Trp Gln Leu Val Gly Gly Leu Asp Val
1 5
<210> 98
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4抗体VL CDR1
<400> 98
Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asn Val Tyr Ala Ser
1 5 10
<210> 99
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4抗体VL CDR2
<400> 99
Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 100
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4抗体VL CDR3
<400> 100
Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Ala Val
1 5
<210> 101
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7抗体VH CDR1
<400> 101
Gly Tyr Ser Trp Thr
1 5
<210> 102
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7抗体VH CDR2
<400> 102
Glu Ile Ser His Phe Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 103
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7抗体VH CDR3
<400> 103
Ala Leu Arg Gly Thr Tyr Ser Arg Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10 15
<210> 104
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7抗体VL CDR1
<400> 104
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 105
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7抗体VL CDR2
<400> 105
Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser
1 5
<210> 106
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7抗体VL CDR3
<400> 106
Met Gln Ala Arg Gln Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 107
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9抗体VH CDR1
<400> 107
Ser Tyr Tyr Trp Ser
1 5
<210> 108
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9抗体VH CDR2
<400> 108
Tyr Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 109
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9抗体VH CDR3
<400> 109
Val Asn Pro Phe Gly Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val
1 5 10
<210> 110
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9抗体VL CDR1
<400> 110
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ser Leu Asn
1 5 10
<210> 111
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9抗体VL CDR2
<400> 111
Gly Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9抗体VL CDR3
<400> 112
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 114
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<220>
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<220>
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<220>
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Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser
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<220>
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<400> 118
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<220>
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Gly Asp Ser Phe Gly Tyr Gly Leu
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 122
Thr Ala Asp Thr Leu Ser Arg Ser Tyr Ala Ser
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<213> 人工序列
<220>
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<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A08抗体VL CDR3
<400> 124
Ala Thr Ser Asp Gly Ser Gly Ser Asn Tyr Gln Tyr Val
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<213> 人工序列
<220>
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<220>
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<400> 126
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<213> 人工序列
<220>
<223> P1-F02抗体VH CDR3
<400> 127
Ile Asp Ile Gly Val Gly Asp Tyr Gly Trp Ala Tyr Asp Arg Leu Asp
1 5 10 15
Leu
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<213> 人工序列
<220>
<223> P1-F02抗体VL CDR1
<400> 128
Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly Ile Ser
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 129
Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-F02抗体VL CDR3
<400> 130
Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser Ile Thr
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 131
Gly Tyr Tyr Met Ser
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<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A01抗体VH CDR2
<400> 132
Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 133
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A01抗体VH CDR3
<400> 133
Val Ala Gly Tyr Val Gly Tyr Gly Tyr Glu Thr Phe Phe Asp Ile
1 5 10 15
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A01抗体VL CDR1
<400> 134
Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly Ile Ser
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A01抗体VL CDR2
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Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser
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<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A01抗体VL CDR3
<400> 136
Leu Gly Gly Val Thr Tyr Ser Ser Thr Gly Thr His Leu Thr
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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Asn Tyr Asp Met Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A03抗体VH CDR2
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Phe Met Asp Thr Asp Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A03抗体VH CDR3
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Arg Gly Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Ile Asp Ile
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A03抗体VL CDR1
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Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Gly Asn Leu Ala
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A03抗体VL CDR2
<400> 141
Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
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<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A03抗体VL CDR3
<400> 142
Gln Ser Pro Ala Tyr Asp Pro Ala Ala Tyr Val Gly Asn Ala
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F07抗体VH CDR1
<400> 143
Ser Tyr Tyr Met Asn
1 5
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<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F07抗体VH CDR2
<400> 144
Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Gly Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F07抗体VH CDR3
<400> 145
Thr Val Ser Gly Tyr Phe Asp Ile
1 5
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F07抗体VL CDR1
<400> 146
Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Ala Leu Ala
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F07抗体VL CDR2
<400> 147
Gly Thr Ser Asn Leu Glu Ser
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F07抗体VL CDR3
<400> 148
Gln Gly Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu Thr
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F11抗体VH CDR1
<400> 149
Ser Tyr Gly Val Ser
1 5
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<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F11抗体VH CDR2
<400> 150
Tyr Ile Ala Asn Asn Tyr Asn Pro His Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
1 5 10 15
<210> 151
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F11抗体VH CDR3
<400> 151
Asp Asn Tyr Gly Met Asp Pro
1 5
<210> 152
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F11抗体VL CDR1
<400> 152
Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn Lys Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 153
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F11抗体VL CDR2
<400> 153
Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser
1 5
<210> 154
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F11抗体VL CDR3
<400> 154
Gln Gly Glu Phe Ser Cys Ser Ser Ala Asp Cys Asn Ala
1 5 10
<210> 155
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VH
<400> 155
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ala
20 25 30
Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Tyr Ile Asn Trp Arg Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp
85 90 95
Ala Ser Ser Gly Ala Ala Phe Gly Ser Tyr Gly Met Asp Pro Trp Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 156
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4抗体VH
<400> 156
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Asn Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Glu Ile Tyr His Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Ser Val Asp Lys Thr Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gln Leu Val Gly Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 157
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7抗体VH
<400> 157
Gln Val Gln Leu Gln Glu Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Asn Ala Glu Ser Phe Asn Gly Tyr
20 25 30
Ser Trp Thr Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Ser His Phe Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Leu Arg Gly Thr Tyr Ser Arg Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 158
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9抗体VH
<400> 158
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Asn Leu Lys Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Asn Pro Phe Gly Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 159
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A03抗体VH
<400> 159
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Asp Tyr
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Tyr Pro Ser Thr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Glu Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly
85 90 95
Ser Asn Trp Ser Ser Gly Met Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 160
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A08抗体VH
<400> 160
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Tyr
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Val Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Thr Ala Ser Thr Thr Val Asp Leu Met Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Asp
85 90 95
Ser Phe Gly Tyr Gly Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 161
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-F02抗体VH
<400> 161
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr Tyr
20 25 30
Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Tyr Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ile Asp
85 90 95
Ile Gly Val Gly Asp Tyr Gly Trp Ala Tyr Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 162
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A01抗体VH
<400> 162
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr
1 5 10 15
Pro Leu Thr Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Phe Leu Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile
65 70 75 80
Thr Thr Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Val
85 90 95
Ala Gly Tyr Val Gly Tyr Gly Tyr Glu Thr Phe Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Leu
115 120
<210> 163
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A03抗体VH
<400> 163
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Tyr Asp
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
Phe Met Asp Thr Asp Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Thr Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Arg Gly
85 90 95
Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Ile Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Pro Val
100 105 110
Thr Val Ser Leu
115
<210> 164
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F07抗体VH
<400> 164
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Tyr
20 25 30
Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Gly Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Thr Val
85 90 95
Ser Gly Tyr Phe Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Leu
<210> 165
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F11抗体VH
<400> 165
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Ala Asn Asn Tyr Asn Pro His Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys
65 70 75 80
Met Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
85 90 95
Asp Asn Tyr Gly Met Asp Pro Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 166
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VL
<400> 166
Glu Leu Asp Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ser Ser Thr Asn
85 90 95
Val Trp Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 167
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4抗体VL
<400> 167
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Leu Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asn Val Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Thr Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Lys Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Leu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Ala Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 168
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7抗体VL
<400> 168
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ala Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Val Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Arg Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 169
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9抗体VL
<400> 169
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Ile Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ser
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Glu Ser Ala Ser Ile Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys
100 105
<210> 170
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A03抗体VL
<400> 170
Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly
20 25 30
Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
Thr Gly Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 171
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A08抗体VL
<400> 171
Glu Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Val Gln Val Asn Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Ser Leu Thr Cys Thr Ala Asp Thr Leu Ser Arg Ser Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Arg Asp Thr Ser Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Ser Asp Gly Ser Gly Ser Asn
85 90 95
Tyr Gln Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Thr
100 105 110
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-F02抗体VL
<400> 172
Glu Leu Asp Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly
20 25 30
Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A01抗体VL
<400> 173
Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly
20 25 30
Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Val Thr Tyr Ser Ser
85 90 95
Thr Gly Thr His Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 174
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A03抗体VL
<400> 174
Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Gly Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Pro Ala Tyr Asp Pro Ala
85 90 95
Ala Tyr Val Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile Leu
100 105 110
<210> 175
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F07抗体VL
<400> 175
Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Thr Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gly Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 176
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F11抗体VL
<400> 176
Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Lys Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val
65 70 75 80
Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Glu Phe Ser Cys
85 90 95
Ser Ser Ala Asp Cys Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile
100 105 110
Leu
<210> 177
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VH
<400> 177
cagtcgctgg aggagtccgg gggtcgcctg gtcacgcctg ggacacccct gacactcacc 60
tgcaccgtct ctggattctc cctcagtacc tatgcagtga cctgggtccg ccaggctcca 120
gggaaggggc tggaatggat cggatacatt aattggcgtg gtgggacatc ctacgcgaac 180
tgggcgaaag gccgattcac catctccaaa acctcgtcga ccacggtgga tctgaaaatg 240
accagtccga caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagatgc tagtagtggt 300
gctgcttttg ggtcttacgg catggacccc tggggcccag ggaccctcgt caccgtctct 360
tca 363
<210> 178
<211> 330
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12抗体VL
<400> 178
gagctcgata tgacccagac tccatcctcc gtgtctgcag ctgtgggagg cacagtcacc 60
atcaagtgcc aggccagtca gagcattagt agctacttat cctggtatca gcagaaacca 120
gggcagcctc ccaagctcct gatctatgaa gcatccaaac tggcctctgg ggtcccatcg 180
cggttcagcg gcagtggata tgggacagag ttcactctca ccatcagcga cctggagtgt 240
gccgatgctg ccacttacta ctgtcaacag ggttatagta gtactaatgt ttggaatgct 300
ttcggcggag gcaccaatgt ggaaatcaaa 330
<210> 179
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12 HC
<400> 179
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ala
20 25 30
Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Tyr Ile Asn Trp Arg Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Asp
85 90 95
Ala Ser Ser Gly Ala Ala Phe Gly Ser Tyr Gly Met Asp Pro Trp Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 180
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4 HC
<400> 180
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Asn Cys Ala Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Glu Ile Tyr His Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Ser Val Asp Lys Thr Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Gln Leu Val Gly Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 181
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7 HC
<400> 181
Gln Val Gln Leu Gln Glu Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Asn Ala Glu Ser Phe Asn Gly Tyr
20 25 30
Ser Trp Thr Trp Ile Arg Gln Thr Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Ser His Phe Gly Ser Ala Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Ala Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Thr Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Ala Leu Arg Gly Thr Tyr Ser Arg Phe Tyr Tyr Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 182
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9 HC
<400> 182
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Asn Leu Lys Ser Val Thr Ala Val Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Asn Pro Phe Gly Tyr Tyr Tyr Ala Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 183
<211> 446
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A03 HC
<400> 183
Gln Ser Val Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Asp Tyr
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Tyr Pro Ser Thr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Ser Thr Thr Val Glu Leu Lys Met
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly
85 90 95
Ser Asn Trp Ser Ser Gly Met Asn Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 184
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A08 HC
<400> 184
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Tyr
20 25 30
Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Val Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Thr Ala Ser Thr Thr Val Asp Leu Met Ile Thr
65 70 75 80
Ser Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Asp
85 90 95
Ser Phe Gly Tyr Gly Leu Trp Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
115 120 125
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
130 135 140
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
145 150 155 160
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln
180 185 190
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 185
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-F02 HC
<400> 185
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Asn Tyr Tyr
20 25 30
Met Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile Gly
35 40 45
Ile Ile Tyr Ala Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Ser Trp Ala Lys Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Met Thr
65 70 75 80
Ser Leu Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Ile Asp
85 90 95
Ile Gly Val Gly Asp Tyr Gly Trp Ala Tyr Asp Arg Leu Asp Leu Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
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<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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<400> 186
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr
1 5 10 15
Pro Leu Thr Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Phe Leu Ser Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Thr Ser Thr Thr Val Asp Leu Lys Ile
65 70 75 80
Thr Thr Pro Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Val
85 90 95
Ala Gly Tyr Val Gly Tyr Gly Tyr Glu Thr Phe Phe Asp Ile Trp Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Leu Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
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385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
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Pro Gly Lys
450
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<220>
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1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Asn Asn Tyr Asp
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Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Tyr Ile Gly
35 40 45
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50 55 60
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Ser Ser Tyr Tyr Gly Gly Ile Asp Ile Trp Gly Pro Gly Thr Pro Val
100 105 110
Thr Val Ser Leu Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
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Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
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Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
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Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
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Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr
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Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr
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Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
260 265 270
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
290 295 300
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
325 330 335
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
370 375 380
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
405 410 415
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 188
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F07 HC
<400> 188
Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro
1 5 10 15
Leu Thr Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Tyr
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35 40 45
Ile Ile Tyr Pro Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Gly Trp Ala Lys Gly
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Leu Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
115 120 125
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
130 135 140
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
145 150 155 160
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln
180 185 190
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F11 HC
<400> 189
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1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr
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Gly Val Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Tyr Ile Ala Asn Asn Tyr Asn Pro His Tyr Ala Ser Trp Ala Lys
50 55 60
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65 70 75 80
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115 120 125
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
130 135 140
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
145 150 155 160
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
180 185 190
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
195 200 205
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
260 265 270
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
275 280 285
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
305 310 315 320
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440
<210> 190
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-C12 LC
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Glu Leu Asp Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
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Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
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50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
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Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Tyr Ser Ser Thr Asn
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Val Trp Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys Arg Ser
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 191
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13B4 LC
<400> 191
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Leu Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asn Val Tyr Ala
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Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Thr Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Lys Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Leu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Ala Val
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Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Arg Ser Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 192
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 13F7 LC
<400> 192
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ala Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Val Gln Lys Pro Gly Gln Pro
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Arg Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 193
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 15A9 LC
<400> 193
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Ile Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Thr Ser
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Glu Ser Ala Ser Ile Pro Arg
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys Arg Ser Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 194
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A03 LC
<400> 194
Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly
20 25 30
Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile
35 40 45
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50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
Thr Gly Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys Arg Ser
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 195
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-A08 LC
<400> 195
Glu Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Val Gln Val Asn Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Ser Leu Thr Cys Thr Ala Asp Thr Leu Ser Arg Ser Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Arg Asp Thr Ser Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Ser Asp Gly Ser Gly Ser Asn
85 90 95
Tyr Gln Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Thr Val Thr Arg Ser
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 196
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P1-F02 LC
<400> 196
Glu Leu Asp Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly
20 25 30
Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Tyr Ser Tyr Ser Ser
85 90 95
Ile Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys Arg Ser Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 197
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A01 LC
<400> 197
Glu Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Arg Ile Arg Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Gly
20 25 30
Ile Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gly Gly Val Thr Tyr Ser Ser
85 90 95
Thr Gly Thr His Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 198
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-A03 LC
<400> 198
Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ala Ser Val Ser Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Gly Gly Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Lys Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Cys
65 70 75 80
Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Pro Ala Tyr Asp Pro Ala
85 90 95
Ala Tyr Val Gly Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile Leu
100 105 110
Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 199
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F07 LC
<400> 199
Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Pro Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Leu Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Ser Ala
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Pro Pro Thr Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Gly Thr Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Pro Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Gly Gly Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gly Tyr Ser Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Asn Val Glu Ile Lys Arg Ser Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 200
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2-F11 LC
<400> 200
Glu Leu Asp Leu Thr Gln Thr Pro Ser Ser Val Ser Ala Ala Val Gly
1 5 10 15
Gly Thr Val Thr Ile Asn Cys Gln Ala Ser Gln Ser Val Tyr Asn Asn
20 25 30
Lys Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Ser Ser Arg Phe
50 55 60
Lys Gly Ser Gly Ser Gly Thr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Val
65 70 75 80
Gln Cys Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gly Glu Phe Ser Cys
85 90 95
Ser Ser Ala Asp Cys Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Glu Ile
100 105 110
Leu Arg Ser Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220

Claims (16)

1.一种在有此需要的受试者中诊断情绪障碍的方法，包括使对抗序列相似家族19成员A5(FAM19A5)的拮抗剂(“FAM19A5”拮抗剂)与所述受试者的生物样品接触，并测量所述样品中的FAM19A5蛋白水平或FAM19A5 mRNA水平。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述接触和所述测量在体外进行。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中与FAM19A5的参考蛋白水平(未患有情绪障碍的受试者的样品中的FAM19A5蛋白水平)或编码FAM19A5的参考核酸水平(未患有情绪障碍的受试者的样品中的编码FAM19A5的核酸水平)相比，所述受试者表现出更高的FAM19A5蛋白水平或更高的编码FAM19A5的核酸水平。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中通过免疫组织化学、蛋白印迹、放射性免疫测定、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫扩散、免疫沉淀测定、Ouchterlony免疫扩散方法、火箭免疫电泳、组织免疫染色方法、补体结合测定、FACS、蛋白芯片或其任何组合测量FAM19A5的蛋白水平。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中通过RT-PCT、实时聚合酶链反应或RNA印迹测量编码FAM19A5的核酸水平。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述生物样品包括组织、细胞、血液、血清、血浆、唾液、尿液、脑脊髓液(CSF)或其任何组合。
7.一种FAM19A5拮抗剂，用于治疗有此需要的受试者的情绪障碍。
8.一种FAM19A5拮抗剂，其用于增加患有情绪障碍的受试者的皮质回的厚度。
9.用于根据权利要求8所述的用途的FAM19A5拮抗剂，其中所述皮质回包括横向额极回、背后扣带回、岛盖部、三角部、额中回、梭状回、舌回、颞平面、楔叶、眶部、颞横前回、颞平面或其任何组合。
10.根据权利要求1至6中任一项所述的方法或用于根据权利要求7至9中任一项所述用途的FAM19A5拮抗剂，其中所述情绪障碍包括重度抑郁症(MDD)、躁郁症(BD)、轻度抑郁症、持续性抑郁症(心境恶劣)、季节性情感障碍(SAD)、精神病性抑郁、产后抑郁、经前焦虑症(PMDD)、情境性抑郁、非典型抑郁、焦虑症或其任何组合。
11.根据权利要求1至6和10中任一项所述的方法或用于根据权利要求7至10中任一项所述用途的FAM19A5拮抗剂，其中所述FAM19A5拮抗剂是反义寡核苷酸、siRNA、shRNA、miRNA、靶向FAM19A5的dsRNA、适体、PNA、包含它们的载体或其任何组合。
12.根据权利要求1至6和10中任一项所述的方法或用于根据权利要求7至10中任一项所述用途的FAM19A5拮抗剂，其中所述FAM19A5拮抗剂是与FAM19A5蛋白特异性结合的抗体(“抗FAM19A5抗体”)。
13.根据权利要求12所述的方法或用于根据权利要求12所述用途的FAM19A5拮抗剂，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3，其中
(i)所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：11、12和13所示的氨基酸序列，和所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：23、24和25所示的氨基酸序列；
(ii)所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：14、15和16所示的氨基酸序列，和所述轻链CDR1，CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：26、27和28所示的氨基酸序列；
(iii)所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：17、18和19所示的氨基酸序列，和所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NOs：29、30和31所示的氨基酸序列；或者
(iv)所述重链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：20、21和22所示的氨基酸序列，和所述轻链CDR1、CDR2和CDR3分别包括SEQ ID NO：32、33和34所示的氨基酸序列。
14.根据权利要求12或13所述的方法或用于根据权利要求12或13所述用途的FAM19A5拮抗剂，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，其中
(i)所述VH包括SEQ ID NO：35所示的氨基酸序列，和所述VL包括SEQ ID NO：39所示的氨基酸序列；
(ii)所述VH包括SEQ ID NO：36所示的氨基酸序列，和所述VL包括SEQ ID NO：40所示的氨基酸序列；
(iii)所述VH包括SEQ ID NO：37所示的氨基酸序列，和所述VL包括SEQ ID NO：41所示的氨基酸序列；或者
(iv)所述VH包括SEQ ID NO：38所示的氨基酸序列，和所述VL包括SEQ ID NO：42所示的氨基酸序列。
15.根据权利要求12或13所述的方法或用于根据权利要求12或13所述用途的FAM19A5拮抗剂，其中所述抗FAM19A5抗体包括重链可变区(VH)和轻链可变区，其中所述重链可变区包括与SEQ ID NO：35、36、37或38所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列；并且其中所述轻链可变区包括与SEQ ID NO：39、40、41或42所示的氨基酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
16.根据权利要求12至15中任一项所述的方法或用于根据权利要求12至15中任一项所述用途的FAM19A5拮抗剂，其中所述抗FAM19A5抗体是嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。
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