JP2012507275A - 細胞の培養及び鏡検のためのペトリ皿 - Google Patents

Abstract

細胞の培養及び鏡検のための皿が提供され、この皿は、リングと、リングから上方に軸方向に突出した外壁とを有しており、リングが底側において透明な膜で被覆されており、これにより、リングの内側と膜とによって区切られた凹所を形成しており、凹所が接着剤充填物で満たされている。択一的に、細胞の培養及び鏡検のための皿が提供され、この皿は、基部と、基部の縁部から上方に軸方向に突出した外壁を有しており、基部と外壁とが透明なプラスチックから形成されており、基部が、外壁の内面とともに、接着剤充填物で満たされた凹所を形成し、基部と充填物とを合わせた厚さが、約１ｍｍ未満である。

Description

発明の分野
本発明は、細胞を培養し、培養した細胞を顕微鏡で観察するために使用することができ、特にレーザ顕微解剖鏡検に適した、細胞の培養及び鏡検のためのペトリ皿に関する。

従来技術
従来、シリコーンで被覆されたガラス製ペトリ皿と、箔で被覆された金属リングとの組合せは、生細胞の顕微解剖のために使用されている。細胞は、膜リングにおいて培養され、次いで、リングはペトリ皿に配置され、顕微鏡に挿入される。抽出される細胞は、顕微解剖によって周縁に沿って切断され、リングはその後ペトリ皿から取り出される。ペトリ皿に残った切り取られた細胞は、次いでさらにそこで培養される。

独国実用新案第２０２００４００１７０３号明細書に開示されたリングは、薄い膜で被覆されたリングの例として言及され、薄い膜は、さらに、例えばテフロンから形成された、薄い膜の下側に提供された保護膜を有していてよい。

リングを有しておりかつレーザ顕微解剖のために顕微鏡に挿入されるペトリ皿の底部の全体的な厚さは、約２ｍｍであり、これは、長距離物体（２０×，４０×）のためにさえも境界線である値である。さらに、ガラスから形成された標準的なペトリ皿は、著しい幾何学的公差を有しており、従って、著しく変化する底部厚さを有している。さらに、正確に規定されたシリコーン挿入、ひいては予め決定可能な光学特性を提供することができる、シリコーンが充填されたガラス製ペトリ皿のための制御された製造プロセスは存在しない。従って、これは、シリコーンが充填されたガラス製ペトリ皿の極めて悪い鏡検特性を生じ、これにより、これらは、位相コントラスト鏡検、蛍光鏡検又はＤＩＣ等の現代の鏡検方法のために全く使用することができないか、又は使用できるとしても質に著しい制限を伴う。より容易にかつより正確に製造することができるプラスチック製ペトリ皿は、ＵＶ透過性が不十分であるために、レーザ顕微解剖のために使用することができない。最後に、存在しないか又は全面に亘って存在しない、シリコーン充填物における膜の付着に、別の問題があった。

発明の概要
従って、本発明の課題は、基部の光学特性を正確に規定することができかつ細胞の培養及びレーザ顕微解剖の両方に適した、細胞の培養及び鏡検のための皿を提供することである。この課題は、請求項１又は８記載の、細胞の培養及び鏡検のための皿によって達成される。別の好適な選択的特徴は、従属請求項に定義されている。

リングと、凸面状の接着剤充填物とを有する、本発明による皿を示している。 リングと、凹面状の接着剤充填物とを有する皿を示している。 リングと、平坦な接着剤充填物とを有する皿を示している。 本発明による皿を示しており、この皿に、レーザ顕微解剖膜リングが挿入されている。 全幅基部と、凸面状の充填物とを有する、本発明の択一的な実施の形態による皿を示している。

好適な実施の形態の詳細な説明
図１には、本発明の第１の実施の形態によるペトリ皿１が示されている。皿は、基部の一部を形成するリング２を有しており、このリング２に、皿の外壁若しくは枠３が結合されており、この外壁若しくは枠３は、外側において、軸線方向上方へ延びている。リングと、外壁とは、好適には、石英ガラス（融解石英ガラス）等の光学的に透明な材料、又は光学的に透明なプラスチックから形成されており、１つの部分として（一体に）製造されるか、又はそれぞれ別個に製造されてから接合されてよい。特に、リング及び／又は外壁がプラスチックから形成されている場合、高い製造精度と、一定の製品品質とは、例えば射出成形によって達成されてよい。高い製造精度と、一定の製品品質とは、鏡検において皿を使用するための必要条件である。リングの厚さは、好適には、約１ｍｍであり、この厚さは、慣用の顕微鏡対象物スライドの厚さに相当する。

リング２の底側には底側膜４が取り付けられており、この底側膜４の厚さは、底側リング２の厚さよりも実質的に小さく、底側膜４は、リング開口を下方から閉鎖している。底側膜は、ＵＶ放射に対して透明な材料、例えば、ポリスチレンとポリプロピレンとの特別な合成物から形成されている。好適には、膜は、例えば超高純度石英ガラス（融解石英ガラス）から形成されたカバーガラスであってもよい。膜４又はカバーガラスの厚さは、好適には５００μｍ未満、好適には１００μｍである。

リングの内面５は、底側膜４とともに凹所を形成しており、この凹所の深さは、リングの厚さに相当し、つまり約１ｍｍである。凹所は、ＵＶ放射に対して透明な、好適にはシリコーンから形成された接着剤充填物６で、好適には僅かに凸状の表面７が形成されるように、満たされている。これにより、透明な底面が形成され、この底面は、一方では、顕微鏡対象物スライドの厚さに適応されており、光学的に十分に透明であり、同時に、その凸状の構成により、皿に配置される膜リングとの接着面を最大化する。接着剤充填物６は凹所によって空間的に規定されているので、容易な製造が保証される。その他に、このように、底側層の厚さは、本発明による皿が慣用の顕微鏡対象物とともに直接利用されるように、標準的な顕微鏡対象物スライドの厚さに適応されていてよい。充填物と、膜又はカバーガラスのＵＶ透過性は、特に、解剖される対象物がＵＶレーザによって、皿に保持された試料から切断されるような作業にとって必要である。

図２及び図３は、本発明によるペトリ皿の択一的な実施の形態を示しており、この場合、図２における接着剤充填物の表面７′は凹面状であり、図３の表面７′′は平坦である。凹面状の充填物は特に、少量のバッファが必要であるような用途に適しており、平坦な充填物は、好適には大きな顕微鏡倍率において、浅い（狭い）被写界深度しか許容されず、これにより試料の湾曲が不都合であるような用途に適している。

図１から図３までの実施の形態において、充填物の厚さは、凹所のうちの１つに相当し、つまり約１ｍｍであるが、これは厳密には図３の平坦な実施の形態だけに当てはまり、図１及び図２の実施の形態の場合、表面形状による皿の半径方向で見たこの厚さの変動（凸面状又は凹面状）を考慮する必要があり、５００μｍ〜１２００μｍの範囲の変動が考慮される。

図４には、凸面状の充填物と、レーザ顕微解剖（ＬＭＤ）膜リング８とが配置された本発明による皿が示されている。図面から分かるように、ＬＭＤ膜９は、接着剤充填物６の凸状の表面７上で緊張（張設）されており、これにより、全面に亘って接着剤充填物６に付着している。これにより、付着しているため、レーザ切断後に切断されたＬＭＤ膜に存在する細胞をずらすことはできず、高い参照能力（referenceability）を達することができる。

最後に、図５は、ペトリ皿１０が、基部（底部）１２と、この基部の縁部において軸線方向に上方へ延びた、皿の外壁若しくは枠１３とを有している。この場合、基部と、外壁とは、プラスチックから形成されており、このプラスチックは基部のために透明であり、特定の用途によれば、外壁のために透明又は不透明である。外壁の内面１５とともに、基部は凹所を形成しており、この凹所は、上述の実施の形態と同様に、ＵＶ放射に対して透明な、好適にはシリコーンから形成された接着剤充填物１６で満たされており、これにより、好適には僅かに凸状の表面１７が形成されている。基部と充填物とを合わせた厚さは、約１ｍｍ未満である。このようにして形成された透明な底面は、図１の実施の形態と同じ利点を提供するが、さらに一層容易に製造することができる。

上記の実施の形態において説明された皿は、特に、干渉コントラスト鏡検、位相コントラスト鏡検、蛍光法及びレーザ顕微解剖に適している。

リングを有しておりかつレーザ顕微解剖のために顕微鏡に挿入されるペトリ皿の底部の全体的な厚さは、約２ｍｍであり、これは、長距離物体（２０×，４０×）のためにさえも境界線である値である。さらに、ガラスから形成された標準的なペトリ皿は、著しい幾何学的公差を有しており、従って、著しく変化する底部厚さを有している。さらに、正確に規定されたシリコーン挿入、ひいては予め決定可能な光学特性を提供することができる、シリコーンが充填されたガラス製ペトリ皿のための制御された製造プロセスは存在しない。従って、これは、シリコーンが充填されたガラス製ペトリ皿の極めて悪い鏡検特性を生じ、これにより、これらは、位相コントラスト鏡検、蛍光鏡検又はＤＩＣ等の現代の鏡検方法のために全く使用することができないか、又は使用できるとしても質に著しい制限を伴う。より容易にかつより正確に製造することができるプラスチック製ペトリ皿は、ＵＶ透過性が不十分であるために、レーザ顕微解剖のために使用することができない。最後に、存在しないか又は全面に亘って存在しない、シリコーン充填物における膜の付着に、別の問題があった。
米国特許出願公開第２００６／０１２１２９８号明細書は、ペトリ皿を開示しており、このペトリ皿において、底部に設けられた中央開口が、薄いレーザ光吸収フィルムによって下方から閉鎖されている。形成された凹所は、生物学的標本が満たされている。同様に、独国特許出願公開第３１０２５７１号明細書は、ペトリ皿を開示しており、このペトリ皿において、底部に設けられた中央開口はカバーガラスによって下方から閉鎖されている。この場合、生物学的標本を培養するための手段が凹所内に配置されている。

Claims (14)

1. 細胞の培養及び鏡検のための皿（１）であって、
   リング（２）と、該リングから軸線方向上方に突出した外壁（３）とが設けられており、前記リングが、底側において透明な膜（４）によって被覆されており、これによって、リングの内面（５）と膜とによって区切られた凹所を形成している形式のものにおいて、
   該凹所が、接着剤充填物（６）で満たされていることを特徴とする、細胞の培養及び鏡検のための皿（１）。
2. 前記膜（４）が、カバーガラスである、請求項１記載の皿（１）。
3. 前記膜（４）が、紫外線に対して透明である、請求項１又は２記載の皿（１）。
4. 前記膜（４）の厚さが、５００μｍ未満である、請求項１から３までのいずれか１項記載の皿（１）。
5. 充填物（６）と膜（４）とを合わせた厚さが、約１ｍｍ未満である、請求項１から４までのいずれか１項記載の皿（１）。
6. 前記リング（２）の厚さが、約１ｍｍである、請求項１から５までのいずれか１項記載の皿（１）。
7. 前記リング（２）と、前記外壁（３）とが、透明な材料、好適には透明なプラスチックから形成されている、請求項１から６までのいずれか１項記載の皿（１）。
8. 細胞の培養及び鏡検のための皿（１０）において、
   基部（１２）と、該基部の縁部において軸線方向上方に突出した外壁（１３）とが設けられており、前記基部と、前記外壁とが、透明なプラスチックから形成されており、基部が、外壁の内面（１５）とともに、接着剤充填物（１６）で満たされた凹所を形成しており、基部と充填物とを合わせた厚さが、約１ｍｍ未満であることを特徴とする、細胞の培養及び鏡検のための皿（１０）。
9. 凹所における接着剤充填物（６）の表面（７′）が、凹面状である、請求項１から８までのいずれか１項記載の皿（１）。
10. 凹所における接着剤充填物（６，１６）の表面（７，１７）が、凸面状である、請求項１から８までのいずれか１項記載の皿（１）。
11. 凹所における接着剤充填物（６）の表面（７′′）が、平坦である、請求項１から８までのいずれか１項記載の皿（１）。
12. 前記充填物（６，１６）が、ポリマ材料、特にシリコーン又はカウチューク、又はゲルである、請求項１から１１までのいずれか１項記載の皿（１，１０）。
13. 接着剤充填物（６，１６）が、紫外線に対して透明である、請求項１から１２までのいずれか１項記載の皿（１，１０）。
14. 膜（９）で被覆された、皿に配置可能なリング挿入体（８）が設けられている、請求項１から１３までのいずれか１項記載の皿（１）。

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