KR20170114525A - 탄성을 갖는 고분자 코팅층을 포함하는 페트리 접시 - Google Patents

탄성을 갖는 고분자 코팅층을 포함하는 페트리 접시 Download PDF

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KR20170114525A
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김권우
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재단법인대구경북과학기술원
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Abstract

본 발명은 탄성을 갖는 고분자 코팅층을 포함하는 페트리 접시에 관한 것으로, 내부 바닥에 탄성을 갖는 고분자 코팅층이 포함되어 있어, 페트리 접시에 커버 글라스를 넣어 세포를 배양하고, 세포 배양이 완료되면 커버 글라스를 페트리 접시로부터 꺼내어 세포를 관찰 및 분석하는 데 있어, 커버 글라스가 페트리 접시로부터 보다 용이하게 떼어낼 수 있어 커버 글라스 및 배양된 세포를 손상 없이 현미경으로 옮겨 관찰할 수 있는 장점이 있다.
또한, 상기 코팅층에 형성된 홈을 이용하여 수직 방향으로 커버 글라스를 세울 수 있어, 커버 글라스의 폴리 라이신(poly-L-lysin)이나 젤라틴(gelatin) 등으로 보다 용이하게 코팅할 수 있는 장점이 있다.

Description

탄성을 갖는 고분자 코팅층을 포함하는 페트리 접시{Petri dish comprising elastic coating layer}
본 발명은 탄성을 갖는 고분자 코팅층을 포함하는 페트리 접시에 관한 것이다.
세포 또는 조직 배양 기술은 분자생물학을 포함한 생물학 연구에서 매우 기본적이고 중요한 기술이며, 암 진단 연구, 암 치료 물질을 비롯한 바이오 신약 개발 연구, 유전자 치료 연구, 줄기세포 분화 연구, 특성 물질 생성연구 등 다양한 연구 분야에 활용되고 있는 기술이다.
상기의 연구 목적에 따라 다양한 방법으로 배양된 세포는 살아있는 세포의 상태로 세포의 기능적 또는 형태적 연구(live cell research)를 수행하기도 하고, 또는 세포 또는 조직 고정액을 선택하여 세포가 변성되지 않도록 고정(fixation)한 후 일련의 과정으로 된 면역세포학적 염색이나 면역 형광염색을 완료하고 봉입하여 광학현미경(light microscope), 형광현미경(fluorescent microscope), 콘포칼 레이저 현미경(confocal laser microscope) 등 실험 목적에 맞는 현미경으로 관찰함으로써 실험 결과의 계량화 및 실험의 재현성에 대한 신뢰를 확보할 수 있다.
종래의 세포 배양 및 분석 방법은 크게 2가지 방법으로 나누어 볼 수 있다.
첫째는 세포 배양에 널리 사용되고 있는 원형으로 된 세포 또는 조직 배양 접시에서 세포를 배양한 후 배양된 세포를 배양 접시로부터 분리시키고 이를 수거하여 조직검사용 유리슬라이드에 부착시켜 연구 목적에 맞는 현미경(microscope) 등으로 관찰·분석하는 방법이다.
이와 관련된 종래의 기술로 대한민국 등록특허 제10-1359865호에서는 아민기 또는 카르복실기가 코팅된 배양 접시에 심장 줄기세포를 배양하는 방법을 개시하고 있으며, 상세하게는 아민기 또는 카르복실기가 코팅된 표면을 제조하는 단계, 및 상기 표면 위에 심장줄기세포를 1시간 내지 60일 동안 배양하는 단계를 포함하는 심장줄기세포의 배양 방법을 개시하고 있다.
그러나 상기 방법으로 배양된 세포를 관찰하기 위해서는 조직검사용 유리슬라이드에 상기 배양 세포를 부착시켜야 하는데 이때 상기 배양된 세포를 배양 접시에서처럼 고르게 단층(monolayer)으로 부착시키기 어렵고, 특히 배양 접시로부터 수거된 세포를 조직검사용 유리슬라이드에 얹은 후 즉시 고정을 해야 세포의 변성을 최소화할 수 있는데 이에 대한 어려움이 있다는 단점이 있다.
이에, 세포의 부착이 불충분하여 많은 세포들이 탈락되는 문제가 있어, 유리슬라이드에 세포 접착을 용이하게 하는 물질을 코팅하여 이를 극복하고자 하였으나, 유리슬라이드가 코팅되어 있을지라도 세포가 부착되기 위해서는 일정 시간이 필요하며, 이때 세포가 변성되고, 결국 세포 관련 실험 결과의 오류가 발생하는 문제점이 있었다. 따라서 이러한 방법은 단순 형태 관찰 등에만 제한적으로 이용될 수 밖에 없는 실정이다.
이러한 문제를 해결하기 위한 종래의 기술로 대한민국 등록특허 제10-1571608호에서는 슬라이드 분리형 세포 배양 접시 및 이를 이용한 세포 분석 방법을 개시하고 있으며, 상세하게는 기판 및 기판의 외주변을 둘러싼 벽체(wall)를 구비하고 세포를 배양할 수 있는 하나의 세포 배양 접시에 있어서, 세포 배양 접시의 바닥면을 형성하는 상기 기판에는 하나의 세포 배양 접시에 대하여 기판이 2 개 이상의 슬라이드로 절단할 수 있도록 하는 홈들이 형성되어 있는 것을 특징으로 하는 세포 배양 접시를 개시하고 있다.
그러나 상기 방법은, 배양 접시 자체를 유리 슬라이드화 하는 방법으로, 상기 페트리 접시를 제조하기 어려운 단점을 가지고 있다.
두 번째 방법은 세포를 배양할 때부터 아예 세포가 부착될 수 있는 지지체인 커버 글라스를 폴리 라이신(poly-L-lysin)이나 젤라틴(gelatin) 등으로 코팅한 후 널리 사용되고 있는 종래의 원형의 페트리 접시에 넣어서 세포를 배양하고, 세포 배양이 완료되면 커버 글라스를 페트리 접시로부터 꺼내어 세포를 관찰 및 분석하는 방법이다.
그러나 이 경우, 커버 글라스에 세포를 증식시킨 후 다음 단계의 실험과정을 진행시키기 위해 상기 커버 글라스를 핀셋이나 그와 유사한 기구를 이용하여 페트리 접시로부터 꺼내야 하는데, 이때 커버 글라스가 매우 얇고, 또한 커버 글라스와 배양 접시 사이에는 세포 배양액이 스며들어서 막이 형성되므로 핀셋이나 그와 유사한 기구를 이용하여 커버 글라스를 페트리 접시로부터 분리하기가 매우 어려운 문제점이 있다. 특히, 커버 글라스는 매우 얇은 유리 재질이므로 분리하는 과정에서 핀셋이나 그와 유사한 기구에 의해 파손되기 쉬운 문제점이 있다.
이에 본 발명에서는 세포가 배양된 커버 글라스를 페트리 접시에 넣어 세포를 배양하는데 있어, 종래의 문제를 해결하기 위해, 접시 내부 바닥에 탄성을 갖는 고분자 코팅층을 포함하는 페트리 접시를 개발하고 본 발명을 완성하였다.
대한민국 등록특허 제10-1359865호 대한민국 등록특허 제10-1571608호
본 발명의 목적은
탄성을 갖는 고분자 코팅층을 포함하는 페트리 접시를 제공하는 데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은
탄성을 갖는 고분자 코팅층을 포함하는 페트리 접시를 제공한다.
또한, 본 발명은
페트리 접시 내부 바닥에 탄성을 갖는 고분자 코팅층을 형성하는 단계;를 포함하는 페트리 접시 제조방법을 제공한다.
본 발명의 페트리 접시는 내부 바닥에 탄성을 갖는 고분자 코팅층이 포함되어 있어, 페트리 접시에 커버 글라스를 넣어 세포를 배양하고, 세포 배양이 완료되면 커버 글라스를 페트리 접시로부터 꺼내어 세포를 관찰 및 분석하는 데 있어, 커버 글라스가 페트리 접시로부터 보다 용이하게 떼어낼 수 있어 커버 글라스 및 배양된 세포를 손상 없이 현미경으로 옮겨 관찰할 수 있는 장점이 있다.
또한, 상기 페트리 접시 코팅층에 홈이 형성되어 있어, 커버 글라스를 세포가 잘 부착될 수 있도록 폴리 라이신(poly-L-lysin)이나 젤라틴(gelatin) 등으로 코팅하는데 있어, 상기 커버 글라스를 상기 페트리 접시 홈에 수직방향으로 삽입하여 보다 용이하게 코팅할 수 있는 장점이 있다.
도 1은 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 페트리 접시를 나타낸 모식도이고,
도 2는 본 발명의 실시예 5에 따라 제조된 페트리 접시를 나타낸 모식도이고,
도 3은 본 발명의 실시예 1에 따라 제조된 페트리 접시에 대해 커버 글라스분리실험을 수행한 결과 사진이고,
도 4는 본 발명의 비교예 1에 따라 제조된 페트리 접시에 대해 커버 글라스분리실험을 수행한 결과 사진이다.
본 발명은
탄성을 갖는 고분자 코팅층을 포함하는 페트리 접시를 제공한다.
이하, 본 발명의 탄성을 갖는 고분자 코팅층을 포함하는 페트리 접시를 도면을 참고하여 상세히 설명한다.
본 발명의 페트리 접시는 도 1에 나타낸 바와 같이, 탄성을 갖는 고분자 코팅층을 포함한다.
이는 페트리 접시 내에서 배양한 세포를 고배율 렌즈를 사용한 현미경에서 용이하게 관찰하기 위한 것이다.
종래의 경우, 페트리 접시에 직접 세포를 배양할 경우, 배양된 세포를 현미경으로 관찰하기 위해 페트리 접시 자체를 사용하는 경우, 고배율 관찰이 어려운 문제점이 있다. 즉, 고배율 현미경은 짧은 초점거리를 가지고 있어 세포를 고배율로 관찰하기 위해서는 현미경 렌즈와 세포와의 거리가 가까워야 하지만 페트리 접시의 하부 두께에 의해 충분히 가까워지지 못하는 문제점이 있다.
이에, 세포가 부착될 수 있는 지지체인 커버 글라스를 폴리 라이신(poly-L-lysin)이나 젤라틴(gelatin) 등으로 코팅한 후 페트리 접시에 넣어서 세포를 배양하고, 세포 배양이 완료되면 커버 글라스를 페트리 접시로부터 꺼내어 세포를 관찰 및 분석하는 방법이 있다. 하지만, 상기와 같은 방법은 커버 글라스를 핀셋이나 그와 유사한 기구를 이용하여 페트리 접시로부터 꺼내야 하는데, 이때 커버 글라스가 매우 얇고, 또한 커버 글라스와 페트리 접시 사이에는 세포 배양액이 스며들어서 막이 형성되므로 핀셋이나 그와 유사한 기구를 이용하여 커버 글라스를 페트리 접시로부터 분리하기가 매우 어려운 문제점이 있다. 특히, 커버 글라스는 매우 얇은 유리 재질이므로 분리하는 과정에서 핀셋이나 그와 유사한 기구에 의해 파손되기 쉬운 문제점이 있다.
반면, 본 발명의 페트리 접시의 경우, 상기 페트리 접시 내부 바닥에 탄성을 갖는 고분자 코팅층이 있어, 커버 글라스를 보다 용이하게 분리해낼 수 있는 장점이 있다.
예를 들어, 페트리 접시 내부에 폴리 라이신(poly-L-lysin)이나 젤라틴(gelatin) 등으로 코팅된 커버 글라스를 넣고 세포를 배양한 후 핀셋이나 그와 유사한 기구를 이용하여 상기 커버 글라스 근처의 고분자 코팅층을 누름으로써 배양액이 스며들어 밀착되어있던 커버 글라스를 보다 용이하게 분리해낼 수 있다.
이때, 상기 코팅층으로 사용되는 상기 고분자는 생체 적합성(biocompatible)
또는 세포독성이 없는(non-cytotoxicity) 고분자를 사용하는 것이 바람직하다.
이는 상기 페트리 접시 내에서 세포 배양시, 세포가 잘 배양되게 하기 위한 것이다.
세포는 상기 페트리 접시 전체에서 배양될 수 있으나, 만약 생체에 적합하지 않거나 세포독성이 있는 고분자를 사용할 경우, 세포배양이 이루어 지지 않는 문제점이 발생 될 수 있다.
이때, 상기 생체 적합성(biocompatible) 또는 세포독성이 없는(non-cytotoxicity) 고분자는 PDMS, PE(poly ethylene), PS(poly styrene) 및 파라핀으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것일 수 있으나 이에 제한된 것은 아니며, 상기 페트리 접시 내에서 세포가 배양될 수 있는 적절한 다른 고분자 물질이 사용될 수 있다.
한편, 상기 페트리 접시 내부 바닥 및 코팅층은 두께의 합이 1 내지 2 mm인 것이 바람직하다.
이는 커버 글라스를 용이하게 분리하기 위한 것이고, 또한 세포 배양하는 과정을 현미경을 통해 용이하게 관찰하기 위한 것이다.
만약 상기 페트리 접시 내부 바닥 및 코팅층 두께의 합이 1 mm 이하일 경우, 페트리 접시의 내구성이 약화됨과 동시에 코팅층이 얇아 커버 글라스가 페트리 접시로부터 분리되는 효과가 작을 수 있고, 상기 페트리 접시 내부 바닥 및 코팅층 두께의 합이 2 mm를 초과하는 경우, 세포를 배양하는 과정을 관찰하기 위해 커버글라스를 포함하는 페트리 접시 자체를 현미경으로 관찰하기 어려운 문제점이 발생 될 수 있다.
또한, 본 발명의 페트리 접시는 도 2에 나타낸 바와 같이, 상기 코팅층에 홈이 형성될 수 있다.
상기 홈은 커버 글라스에 세포를 부착하기 위해 상기 커버 글라스를 폴리 라이신(poly-L-lysin)이나 젤라틴(gelatin) 등으로 코팅하는 과정을 보다 용이하게 수행하기 위해 이용될 수 있다.
종래의 경우, 커버 글라스를 폴리 라이신(poly-L-lysin)이나 젤라틴(gelatin) 등으로 코팅하는 과정에서, 상기 커버 글라스에 라이신(poly-L-lysin)이나 젤라틴(gelatin) 등이 고르게 코팅되게 하기 위해, 상기 폴리 라이신(poly-L-lysin)이나 젤라틴(gelatin) 등이 포함된 용액에 넣고 앞 뒷면을 바꾸어가며 용액에 코팅해 주어야하는 어려움이 있었다.
이에, 본 발명의 페트리 접시의 코팅층에 형성된 홈을 이용할 경우, 즉, 상기 코팅층에 형성된 홈에 커버 글라스를 수직으로 삽입시켜 상기 폴리 라이신(poly-L-lysin)이나 젤라틴(gelatin) 등이 포함된 용액을 넣어줌으로써 상기 커버 글라스에 상기 폴리 라이신(poly-L-lysin)이나 젤라틴(gelatin)등을 용이하게 코팅할 수 있는 장점이 있다.
한편, 본 발명은
페트리 접시 내부 바닥에 탄성을 갖는 고분자 코팅층을 형성하는 단계를 포함하는 페트리 접시 제조방법을 제공한다.
이때, 상기 코팅층은 PDMS, PE(poly ethylene), PS(poly styrene) 및 파라핀으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종의 방법으로 수행될 수 있으나 이에 제한된 것은 아니며, 상기 고분자 코팅층을 형성시킬 수 있는 적절한 다른 방법으로 수행될 수 있다.
상기 코팅층으로 사용되는 상기 고분자는 생체 적합성(biocompatible) 또는 세포 독성이 없는(non-cytotoxicity) 고분자를 사용하는 것이 바람직하다.
이는 상기 페트리 접시 내에서 세포 배양시, 세포가 잘 배양되게 하기 위한 것이다.
세포는 상기 페트리 접시 전체에서 배양될 수 있으나, 만약 생체에 적합하지 않거나 세포 독성을 가지는 고분자를 사용할 경우, 세포배양이 이루어 지지 않는 문제점이 발생 될 수 있다.
이때, 상기 생체 적합성(biocompatible) 또는 세포 독성이 없는(non-cytotoxicity) 고분자는 PDMS, PE(poly ethylene), PS(poly styrene) 및 파라핀으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것일 수 있으나 이에 제한된 것은 아니며, 상기 페트리 접시 내에서 세포가 배양될 수 있는 적절한 다른 고분자 물질이 사용될 수 있다.
한편, 상기 페트리 접시 내부 바닥 및 코팅층은 두께의 합이 1 내지 2 mm인 것이 바람직하다.
이는 커버 글라스를 용이하게 분리하기 위한 것이고, 또한 세포 배양하는 과정을 현미경을 통해 용이하게 관찰하기 위한 것이다.
만약 상기 페트리 접시 내부 바닥 및 코팅층 두께의 합이 1 mm 이하일 경우, 페트리 접시의 내구성이 약화됨과 동시에 코팅층이 얇아 커버 글라스가 페트리 접시로부터 분리되는 효과가 작을 수 있고, 상기 페트리 접시 내부 바닥 및 코팅층 두께의 합이 2 mm를 초과하는 경우, 세포를 배양하는 과정을 관찰하기 위해 커버글라스를 포함하는 페트리 접시 자체를 현미경으로 관찰하기 어려운 문제점이 발생 될 수 있다.
또한, 상기 페트리 접시 제조방법은, 상기 단계 1 이후에 상기 코팅층에 홈을 형성시키는 단계가 포함될 수 있다.
상기 홈은 커터칼 등을 이용하여 코팅층에 빗금을 긋는 방법으로 수행될 수 있으나 이에 제한된 것은 아니며, 그외 다양한 방법이 적용될 수 있다.
상기 홈은 커버 글라스를 폴리 라이신(poly-L-lysin)이나 젤라틴(gelatin) 등으로 코팅하는 과정을 보다 용이하게 수행하기 위해 이용될 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 상세하게 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기의 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1>
지름 100 mm인 페트리 접시를 에탄올로 세척하고 완전히 건조한 후, 주사기를 이용하여 Sylgard 184 (Dow Corning) A제와 B제를 질량기준 9:1로 혼합한 혼합액을 8 ml 주입하여 접시 표면에 고르게 퍼지도록 한 후 진공 desiccator 에 넣고 기포를 제거한다. 이후 약 24시간 동안 상온에서 경화시켜 두께 약 1 mm인 PDMS 코팅층이 형성된 페트리 접시를 제조하였다.
<실시예 2>
상기 실시예 1에서 코팅하는 Sylgard 184 혼합액의 양을 16 ml로 으로 달리하고 오븐에서 약 80 ℃로 2시간 동안 경화시키는 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 수행하여 두께 약 2 mm인 PDMS 코팅층이 형성된 페트리 접시를 제조하였다.한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 수행하여 두께 약 2 mm인 PDMS 코팅층이 형성된 페트리 접시를 제조하였다.
<실시예 3>
지름 100 mm인 페트리 접시를 에탄올로 세척하고 완전히 건조한 후, PE(poly ethylene) 코팅액을 8 ml 도포하여 접시 표면에 고르게 퍼지도록 한 후 진공 desiccator 에 넣고 기포를 제거한다. 이후 약 100 ℃로 2시간 동안 경화시켜 두께 약 1 mm인 PE(poly ethylene) 코팅층이 형성된 페트리 접시를 제조하였다.
<실시예 4>
상기 실시예 3에서 PE(poly ethylene) 코팅액의 양을 16 ml로 달리한 것을 제외하고는 실시예 3과 동일한 방법으로 수행하여 두께 약 2 mm인 PE(poly ethylene) 코팅층이 형성된 페트리 접시를 제조하였다.
<실시예 5>
상기 실시예 1에서 제조한 페트리 접시의 코팅층을 커터칼로 커버 슬립을 삽입할 수 있을 정도의 홈을 5개 내어 PDMS 코팅층에 홈이 5개 형성된 페트리 접시를 제조하였다.
<비교예 1>
페트리 접시를 준비하였다.
<실험예 1>
본 발명에 따라 제조된 페트리 접시 및 종래의 페트리 접시를 비교하기 위해, 실시예 1에 의하여 제조된 페트리 접시 및 비교예 1의 페트리 접시에 대하여, 이하와 같은 실험을 수행하였다.
실시예 1에 의하여 제조된 페트리 접시 및 비교예 1의 페트리 접시 내부 바닥에 커버 글라스을 넣고 물을 일부 체운 후, 핀셋을 이용하여 상기 커버 글라스를 페트리 접시로부터 꺼내었으며, 그 결과를 도 3 및 도4에 나타내었다.
도 3 및 도 4에 나타난 바와 같이, 도 3의 실시예 1에 의해 제조된 페트리 접시를 사용한 경우, 커버 글라스의 손상 없이 페트리 접시로부터 분리할 수 있었으나, 도 4의 비교예 1의 페트리 접시의 경우, 핀셋으로 커버 글라스를 집기가 용이하지 않으며, 계속하여 집기를 시도할 경우 커버 글라스가 손상되어 나타났다.
이는 커버 글라스가 매우 얇고, 또한 커버 글라스와 페트리 접시 사이에 세포 배양액이 스며들어 막이 형성되어, 핀셋을 이용하여 커버 글라스를 페트리 접시로부터 분리하기가 매우 어렵기 때문으로 볼 수 있다.
이를 통해, 본 발명의 탄성을 갖는 고분자 코팅층을 포함하는 페트리 접시는 종래의 페트리 접시에 비해 세포 배양 이후 커버 글라스의 분리를 보다 원활히 할 수 있음을 알 수 있다.
1: 고분자 코팅층
2: 코팅층에 형성시킨 홈

Claims (11)

  1. 페르리 접시 내부 바닥에 탄성을 갖는 고분자 코팅층을 포함하는 페트리 접시.
  2. 제1항에 있어서, 상기 고분자는 생체 적합성(biocompatible) 또는 세포독성이 없는(non-cytotoxicity) 고분자인 것을 특징으로 하는 페트리 접시.
  3. 제2항에 있어서, 상기 생체 적합성(biocompatible) 또는 세포독성이 없는(non-cytotoxicity) 고분자는 PDMS, PE(poly ethylene), PS(poly styrene) 및 파라핀으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 페트리 접시.
  4. 제1항에 있어서, 상기 내부 바닥 및 코팅층 두께의 합이 1 내지 2 mm인 것을 특징으로 하는 페트리 접시
  5. 제1항에 있어서, 상기 페트리 접시는 상기 코팅층에 홈이 형성되어 있는 것을 특징으로 하는 페트리 접시.
  6. 페트리 접시 내부 바닥에 탄성을 갖는 고분자 코팅층을 형성하는 단계;를 포함하는 페트리 접시 제조방법.
  7. 제6항에 있어, 상기 코팅층은 PDMS, PE(poly ethylene), PS(poly styrene) 및 파라핀으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종의 방법으로 수행되는 것을 특징으로 하는 페트리 접시 제조방법.
  8. 제6항에 있어서, 상기 고분자는 생체 적합성(biocompatible) 또는 세포독성이 없는(non-cytotoxicity) 고분자인 것을 특징으로 하는 페트리 접시 제조방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 생체 적합성(biocompatible) 또는 세포독성이 없는 (non-cytotoxicity) 고분자는 PDMS, PE(poly ethylene), PS(poly styrene) 및 파라핀으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 페트리 접시 제조방법.
  10. 제6항에 있어서, 상기 코팅층은 상기 페트리 접시 내부 바닥에 형성되며, 상기 내부 바닥 및 코팅층 두께의 합이 1 내지 2 mm인 것을 특징으로 하는 페트리 접시 제조방법.
  11. 제6항에 있어서, 상기 페트리 접시 제조방법은 상기 코팅층에 홈을 형성시키는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 페트리 접시 제조방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115992050A (zh) * 2023-02-23 2023-04-21 深圳市第二人民医院(深圳市转化医学研究院) 一种可控刚性模量培养皿及其制备方法和应用

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