JP2012228518A - 分離容器および分離方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】 試料から分離対象物を分離するための分離容器であって、外容器、内容器および蓋部を有し、
前記外容器は、上端が開口し、下端が閉口した有底筒状であり、
前記内容器は、上端および下端が開口した筒状であり、
前記外容器および前記内容器は、それぞれの上下の方向を揃えた状態で、前記外容器の内部に前記内容器が配置可能であり、
前記外容器の内部に前記内容器を配置した状態で、前記外容器の内部において、配置された前記内容器よりも下方の領域が、前記試料からの沈殿物の収容部であり、
前記蓋部は、前記内容器の上端の開口部に、脱着可能であり、
前記蓋部を前記内容器の前記開口部に装着した際、前記内容器の内部が液密状態となることを特徴とする。
【選択図】 図1
Description
前記外容器は、
上端が開口し、下端が閉口した有底筒状であり、
前記内容器は、
上端および下端が開口した筒状であり、
前記外容器および前記内容器は、それぞれの上下の方向を揃えた状態で、前記外容器の内部に前記内容器が配置可能であり、
前記外容器の内部に前記内容器を配置した状態で、
前記外容器の内部において、配置された前記内容器よりも下方の領域が、前記試料からの沈殿物の収容部であり、
前記蓋部は、
前記内容器の上端の開口部に、脱着可能であり、
前記蓋部を前記内容器の前記開口部に装着した際、前記内容器の内部が液密状態となることを特徴とする。
前記本発明の分離容器を使用し、下記の(A1)から(D1)の工程を有することを特徴とする。
(A1)前記外容器の内部に前記内容器を配置し、前記内容器の内部および前記外容器の前記収容部に、遠心処理液を充填する工程
(B1)前記(A1)工程後、前記内容器の内部に、前記試料を導入する工程
(C1)前記(B1)工程後、前記分離容器を遠心分離に供して、前記試料由来の沈殿物を、前記外容器の前記収容部に収容する工程
(D1)前記(C1)工程後、前記内容器に前記蓋部を装着した状態で、前記外容器から前記内容器を取り出す工程
本発明の分離容器は、前述のように、試料から分離対象物を分離するための分離容器であって、外容器、内容器および蓋部を有し、
前記外容器は、
上端が開口し、下端が閉口した有底筒状であり、
前記内容器は、
上端および下端が開口した筒状であり、
前記外容器および前記内容器は、それぞれの上下の方向を揃えた状態で、前記外容器の内部に前記内容器が配置可能であり、
前記外容器の内部に前記内容器を配置した状態で、
前記外容器の内部において、配置された前記内容器よりも下方の領域が、前記試料からの沈殿物の収容部であり、
前記蓋部は、
前記内容器の上端の開口部に、脱着可能であり、
前記蓋部を前記内容器の前記開口部に装着した際、前記内容器の内部が液密状態となることを特徴とする。
本発明の分離方法は、試料から分離対象物を分離する分離方法であって、
前記本発明の分離容器を使用し、下記の(A1)から(D1)の工程を有することを特徴とする。
(A1)前記外容器の内部に前記内容器を配置し、前記内容器の内部および前記外容器の前記収容部に、遠心処理液を充填する工程
(B1)前記(A1)工程後、前記内容器の内部に、前記試料を導入する工程
(C1)前記(B1)工程後、前記分離容器を遠心分離に供して、前記試料由来の沈殿物を、前記外容器の前記収容部に収容する工程
(D1)前記(C1)工程後、前記内容器に前記蓋部を装着した状態で、前記外容器から前記内容器を取り出す工程
(A1−1)前記外容器の内部に前記内容器を配置した後、前記内容器の内部に前記遠心処理液を導入することで、前記内容器の内部および前記外容器の前記収容部に、前記遠心処理液を充填する工程
(A1−2)前記外容器の内部に、前記遠心処理液を導入した後、前記外容器の内部に前記内容器を配置することで、前記内容器の内部および前記外容器の前記収容部に、前記遠心処理液を充填する工程
(E1)前記(D1)工程後、前記外容器に、新たな前記内容器を配置し、前記配置の前後いずれかに、前記内容器に、精子が遊泳可能な液体を充填する工程
(F1)前記(E1)工程後、前記外容器の前記収容部から、前記内容器に遊泳してきた精子を回収する工程
(A2)前記外容器の前記収容部に、精子を含む試料を導入する工程
(B2)前記(A2)工程後、前記外容器の内部に、前記内容器を配置し、前記配置の前後いずれかに、前記内容器の内部に、精子が遊泳可能な液体を充填する工程
(C2)前記(B2)工程後、前記外容器の前記収容部から、前記内容器に遊泳してきた精子を回収する工程
本例の分離容器を、図1および図2の断面図に示す。図1は、分離容器を構成する部材の断面図であり、(A)が外容器、(B)が内容器、(C)が蓋部である。図2は、分離容器の断面図である。
本例の分離容器を、図3および図4に示す。図3は、分離容器を構成する部材の断面図であり、(A)が外容器、(B)が内容器、(C)が蓋部である。図4は、分離容器の断面図である。
本実施形態の分離容器は、前記外容器の内部における前記収容部の容量を変動できる形態の一例である。
本例の分離容器を構成する外容器および内容器を、図6、図7および図8に示す(蓋部は、図示せず)。
本実施形態において、前記内容器の前記係合用突起部の数は、特に制限されない。前記係合用突起部の数は、例えば、1個でもよいし、2個以上でもよく、例えば、1〜4個、好ましくは、1〜3個、より好ましくは、1個または2個である。係合用突起部を複数設けることで、例えば、外容器内における内容器の安定性を、より向上できる。
本実施形態において、前記外容器の係合用溝部の形状は、さらに、他の形態が例示できる。
本実施形態の分離容器は、前記外容器から前記内容器を取り出した後、前記外容器の収容部における液量の変動を防止する形態の一例である。
本実施形態の分離容器は、前記外容器から前記内容器を取り出す際、前記内容器の内部の液体が、前記外容器の内部に混入することを防止する形態の一例である。
本実施形態の分離容器は、遠心時の荷重負荷による物理的なダメージを軽減する形態の一例である。
本実施形態は、内容器の下端と外容器との接触の状態を例示する。
本実施形態は、内容器の下端と外容器との接触の状態を例示する。
本例では、本発明の分離容器を用いて、遠心分離により精子を含む沈殿画分を回収し、生存精子の回収率を確認した。
外容器20
全体の容量:9.85mL
全体の内部の高さ:85mm
本体部101の高さ:60mm
テーパー部102の高さ:14mm
収容部103の高さ:12mm
開口部104の直径:14.5mm
テーパー部102の上端の内周の直径:12.41mm
テーパー部102の下端の内周の直径:7.2mm
突起部200の内周の直径:6.2mm
収容部103の容量:0.3mL
収容部103の内部の高さ:11mm
内容器11
全体の容量:7.7mL
全体の高さ:84mm
本体部111の高さ:68mm
テーパー部112の高さ:16mm
上端の開口部114の内周の直径:12.4mm
上端の開口部114の外周の直径:16.3mm
テーパー部112の上端の外周の直径:12.2mm
下端の開口部113の外周の直径:7mm
下端の開口部113の内周の直径:5mm
蓋部12
把持部121の外周の直径:16.47mm
挿入部122の外周の直径:12.47mm
挿入部122の高さ:5mm
本例では、従来の分離容器を用いて、実施例と同じ精液0.28mLから、遠心分離により精子を含む沈殿画分を回収し、生存精子の回収率を確認した。
本例では、分離容器として、容量15mLの遠沈管(商品名15mL遠沈管、コーニング社製)、および、ノズル(商品名ARTキャピラール、ニプロ社製)と前記ノズルにセット可能なシリンジ(商品名 JMSシリンジ ジェイ・エム・エス社製)とを使用した。前記遠沈管の内部に、その先端が底部に位置するように、前記ノズルを配置した。そして、前記遠沈管の内部に、前記パーコールを導入した。具体的には、まず、90%パーコール1.5mLを導入し、この上に45%パーコール1.5mLを積層した。さらに、前記パーコールに、前記精液0.28mLを重層した。そして、前記遠沈管に蓋をして、前記実施例1と同様に遠心分離を行った。遠心後、前記蓋を取り外し、前記遠沈管内に配置した前記ノズルの後端部に、前記シリンジをセットして、前記遠沈管の底から、前記ノズルを介して、パーコール液0.3mLを、精子を含む沈殿画分として吸引した。回収した前記パーコール液について、前記実施例1と同様にして、生存精子、死細胞および不純物を測定し、それぞれの割合(%)を算出した。
本例では、分離容器として、容量15mLの遠沈管(商品名15mL遠沈管、コーニング社製)、および、ピペットを使用した。前記遠沈管の内部に、パーコールを導入した。具体的には、まず、90%パーコール1.5mLを導入し、この上に45%パーコール1.5mLを積層した。さらに、前記パーコールに、前記精液0.28mLを重層した。そして、前記遠沈管に蓋をして、前記実施例1と同様に遠心分離を行った。遠心後、前記蓋を取り外し、前記遠沈管に、ピペットを挿入し、前記遠沈管の底から、パーコール液0.3mLを、精子を含む沈殿画分として吸引した。このようにして回収したパーコール液について、前記実施例1と同様にして、生存精子、死細胞および不純物を測定し、それぞれの割合(%)を算出した。
本例では、本発明の分離容器を用いて、遠心分離により精子を含む沈殿画分を回収し、生存精子の回収率について再現性の確認を行った。
本例では、本発明の分離容器を用いて回収した精子の運動率を確認した。
10、20、30、40、50、60、70、80 外容器
11、31、41、61、71 内容器
12 蓋部
101、111、301、311、501、601、611 本体部
102、112、302、312、612 テーパー部
103、303a、303b、603 収容部
104、113、114、304、313、314、604、613、614 開口部
121 把持部
122 挿入部
115、200 突起部
306a〜d、406a〜c、406a’〜c’、506a〜c、506a’〜c’ 溝部
305、317、605、617 先端部
315、316、416a、416a’ 突起部
506ab、506bc、506ab’、506bc’ ガイド部
606 溝部
607 側壁
618 突起部
701 一方弁
16、81 リブ
105 空隙
106a〜d、116a〜d 突起部
Claims (15)
- 試料から分離対象物を分離するための分離容器であって、
前記分離対象物が精子であり、
外容器、内容器および蓋部を有し、
前記外容器は、
上端が開口し、下端が閉口した有底筒状であり、
前記内容器は、
上端および下端が開口した筒状であり、
前記外容器および前記内容器は、
それぞれの上下の方向を揃えた状態で、前記外容器の内部に前記内容器が配置可能であり、
前記外容器の内部に前記内容器を配置した状態で、前記外容器の内部において、配置された前記内容器よりも下方の領域が、前記試料からの沈殿物の収容部であり、
前記内容器の下端は、その先端口の端面およびその先端の外周面の少なくとも一方が、前記外容器の内周面に接触しており、
前記蓋部は、
前記内容器の上端の開口部に、脱着可能であり、
前記蓋部を前記内容器の前記開口部に装着した際、前記内容器の内部が液密状態となる、ことを特徴とする分離容器。 - 前記内容器の下端は、その先端口の端面の全体または一部が、前記外容器の内周面に接触している、請求項1記載の分離容器。
- 前記内容器の下端は、その先端の外周面の全体または一部が、前記外容器の内周面に接触している、請求項1記載の分離容器。
- 前記外容器は、前記収容部の上端の内周面に、周状に突起部を有し、
前記内容器の下端の先端口の端面は、前記突起部に接触する、請求項1から3のいずれか一項に記載の分離容器。 - 前記内容器は、その外周面がテーパー状であるテーパー部を有する、請求項1から4のいずれか一項に記載の分離容器。
- 前記内容器の前記テーパー状の外周面が、前記外容器の内周面に接触している、請求項5記載の分離容器。
- 前記外容器の内周面および前記内容器の外周面の一方が、突起部を有し、他方が、前記突起部と係合可能な溝部を有する、請求項1から6のいずれか一項に記載の分離容器。
- 前記外容器が、前記収容部の外側に、同心円状の溝部を有し、
前記内容器が、前記先端の外側に、同心円状の突起部を有し、
前記外容器の内部に、前記内容器を配置する際、前記外容器の前記溝部に、前記内容器の前記突起部が挿入可能である、請求項1から7のいずれか一項に記載の分離容器。 - 用途が、試料からの精子の分離用である、請求項1から8のいずれか一項に記載の分離容器。
- 試料から分離対象物を分離する分離方法であって、
請求項1から9のいずれか一項に記載の分離容器を使用し、
下記の(A1)から(D1)の工程を有することを特徴とする分離方法。
(A1)前記外容器の内部に前記内容器を配置し、前記内容器の内部および前記外容器の前記収容部に、遠心処理液を充填する工程
(B1)前記(A1)工程後、前記内容器の内部に、前記試料を導入する工程
(C1)前記(B1)工程後、前記分離容器を遠心分離に供して、前記試料由来の沈殿物を、前記外容器の前記収容部に収容する工程
(D1)前記(C1)工程後、前記内容器に前記蓋部を装着した状態で、前記外容器から前記内容器を取り出す工程 - 前記(A1)工程が、下記(A1−1)工程または(A1−2)工程である請求項10記載の分離方法。
(A1−1)前記外容器の内部に前記内容器を配置した後、前記内容器の内部に前記遠心処理液を導入することで、前記内容器の内部および前記外容器の前記収容部に、前記遠心処理液を充填する工程
(A1−2)前記外容器の内部に、前記遠心処理液を導入した後、前記外容器の内部に前記内容器を配置することで、前記内容器の内部および前記外容器の前記収容部に、前記遠心処理液を充填する工程 - 前記遠心処理液が、密度勾配担体、培地および緩衝液からなる群から選択された少なくとも一つである、請求項10または11記載の分離方法。
- 前記遠心処理液が、密度勾配担体であり、
前記(B1)工程において、前記密度勾配担体の上に、前記試料を重層する、請求項10から12のいずれか一項に記載の分離方法。 - 前記分離対象物が、精子であり、
前記(C1)工程において、前記分離容器を遠心分離に供して、前記試料中の精子を、沈殿により、前記外容器の前記収容部に収容し、
前記(D1)工程において、前記外容器から前記内容器を取り出し、前記外容器の前記収容部内の前記精子を回収する、請求項10から13のいずれか一項に記載の分離方法。 - 前記試料が精液を含む、請求項10から14のいずれか一項に記載の分離方法。
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