CN103260768A

CN103260768A - 分离容器及分离方法

Info

Publication number: CN103260768A
Application number: CN2011800538235A
Authority: CN
Inventors: 平井聪; 武田典子; 冲津摄
Original assignee: JMS Co Ltd
Current assignee: JMS Co Ltd
Priority date: 2010-11-09
Filing date: 2011-11-09
Publication date: 2013-08-21
Also published as: JP5716925B2; JP5051557B2; JP2012228518A; JP2012115829A; AU2011327246A1; US20130225387A1; WO2012063877A1

Abstract

本发明提供一种能够防止混入不需要的成分、并能够高效地分离分离对象物的分离容器。该分离容器用于从试样中分离分离对象物，其特征在于，该分离容器包括外容器、内容器及盖部，上述外容器是上端开口、下端闭口的有底筒状，上述内容器是上端和下端开口的筒状，上述外容器和上述内容器在上述外容器的上下方向和上述内容器的上下方向一致的状态下，上述内容器能够配置于上述外容器的内部，在将上述内容器配置于上述外容器的内部的状态下，在上述外容器的内部，比所配置的上述内容器靠下方的区域是用于容纳来自上述试样的沉淀物的容纳部，上述盖部能够装卸于上述内容器的上端的开口部，当将上述盖部安装于上述内容器的上述开口部时，上述内容器的内部成为液密状态。

Description

分离容器及分离方法

技术领域

本发明涉及分离容器及分离方法。

背景技术

在不育症中，被认为是男性方面原因的事例占50%以上。作为男性不育症，例如可列举出精液中的精子浓度较低而导致的缺精子症、精子缺乏运动能力而导致的精子无力症等。在这种事例中，例如应用有使用从精液中回收的精子的、人工授精法、体外受精法以及显微授精法等辅助生殖医疗。

作为精子样品的调制方法，可列举出利用密度梯度离心进行的分离法（密度梯度离心法）和利用精子的运动性的分离法（上游法（日文：スイムアップ法））。前者是首先向离心管中加入Percoll，在上述Percoll中叠加精液来进行离心分离。由此形成密度梯度，精子被分离到最下层。从上述离心管的上部插入吸液管，通过提取上述最下层的部分而能够获得精子样品。后者是首先通过离心分离将精液分离为含有精清的上层和固形物的浓度较高的下层。在上述下层中含有精子。接着，使上述固形物沉入到放入有培养基的容器的底部。此时，具有运动性的成熟精子通过直线运动从上述底部游动并浮出到上述培养基的上部。因此，通过回收上述培养基的上层，从而能够获得成熟精子。

但是，前者的密度梯度离心法由于将上述吸液管从上部插入到下层，因此存在于上述Percoll的中层附近的成分附着于上述吸液管。因此，存在有不需要的成分混入所提取的精子样品中这样的问题。在上述中层附近，存在有精清或睾丸组织成分，也有时存在细菌或病毒。精清等的混入会导致精子样品中的精子被稀释化，有可能会影响精子的运动性。细菌等的混入有可能会影响受精卵和胎儿的安全性，而且，也有可能会影响进行精子调制的操作者的安全性。另外，基于相同的理由，后者的上游法也有可能产生相同的影响。为了解决这种问题，提出了以下这样的精子提取用具。

在专利文献1中公开了一种在离心管中配置了提取管的提取用具。上述提取管以其顶端到达上述离心管的底部的状态配置于上述离心管。然后，向上述离心管内放入Percoll和精液来进行离心分离。在上述离心分离后，将注射器连接于上述提取管，吸引并提取沉淀在上述离心管的底部的精子。但是，上述提取用具由于上述提取管的顶端位于上述离心管的底部，因此在离心分离时，精子有可能因上述提取管的顶端而受到物理性损伤。

在专利文献2中公开了一种在轴线方向上内部被分隔壁划分为试样导入室与分离对象物的回收室的用具。在上述用具中，上述分隔壁具有能够在下部连通上述试样导入室与上述回收室的通孔。使用了该用具的密度梯度离心法用以下方式来进行。首先，向上述试样导入室与上述回收室内导入Percoll，在上述试样导入室中进一步叠加精液。接着，通过离心分离，使精子沉淀在上述试样导入室的下部。此时，由于上述试样导入室与上述回收室利用下部的上述通孔相连通，因此沉淀的精子通过上述通孔向上述回收室移动。然后，向上述回收室内插入吸液管来提取Percoll液。在上述回收室中，由于只有精子进行移动，因此能够获得没有混入杂质的精子样品。但是，该用具由于在轴线方向上被划分为上述试样导入室与上述回收室，因此不能够确保在上述试样导入室内具有充分的容积，而且，有时难以向上述回收室内插入吸液管。

另外，在专利文献2中还公开了一种在容器主体的内部配置有成为上述试样导入室的配件的用具。若在上述容器主体中配置上述配件，则在轴线方向上，上述容器主体的内部被上述配件的侧壁划分为上述试样导入室与上述回收室。即，上述配件的内部成为上述试样导入室，上述容器主体的内部的剩余区域成为上述回收室。上述配件的侧壁在其下部具有通孔。在使用该用具的情况下，当精子通过离心而在上述试样导入室内部沉淀时，精子通过上述通孔从上述试样导入室向上述回收室移动。离心后，在保持着上述配件的内部的液密性的状态下，从上述容器主体中取出上述配件，则在上述容器主体的内部仅存在含有精子的Percoll。因此，仅靠卸下上述配件，就能够获得没有混入杂质的精子样品。但是，在离心前，也向上述回收室导入大量的Percoll。因此，离心后，残留在上述容器主体中的精子样品存在精子浓度较低这样的问题。而且，由于Percoll比较昂贵，因此也存在成本问题。

这种问题不仅存在于精子样品的调制中而且还存在于通过离心分离从试样中分离分离对象物的领域中。

专利文献1：日本特开2004－313500号公报

专利文献2：日本特开2009－119457号公报

发明内容

因此，本发明的目的在于提供一种能够防止不需要的成分混入、并能够高效地分离分离对象物的分离容器。

为了达到上述目的，本发明的分离容器用于从试样中分离分离对象物，其特征在于，

该分离容器包括外容器、内容器及盖部，

上述外容器是上端开口、下端闭口的有底筒状，

上述内容器是上端和下端均开口的筒状，

上述外容器和上述内容器在上述外容器的上下方向和上述内容器的上下方向一致的状态下，上述内容器能够配置于上述外容器的内部，

在将上述内容器配置于上述外容器的内部的状态下，

在上述外容器的内部，比所配置的上述内容器靠下方的区域是用于容纳来自上述试样的沉淀物的容纳部，

上述盖部能够相对于上述内容器的上端装卸的开口部，

当将上述盖部安装于上述内容器的上述开口部时，上述内容器的内部成为液密状态。

本发明的分离方法用于从试样中分离分离对象物，其特征在于，

该分离方法使用上述本发明的分离容器，并包括下述（A1）～（D1）工序：

（A1）工序：在上述外容器的内部配置上述内容器，向上述内容器的内部和上述外容器的上述容纳部内填充离心处理液；

（B1）工序：在上述（A1）工序之后，向上述内容器的内部导入上述试样；

（C1）工序：在上述（B1）工序之后，将上述分离容器用于离心分离，将来自上述试样的沉淀物容纳到上述外容器的上述容纳部；

（D1）工序：在上述（C1）工序之后，在上述内容器上安装有上述盖部的状态下，从上述外容器中取出上述内容器。

采用本发明的分离容器，例如能够通过离心分离使沉淀的分离对象物从上述内容器穿过其下端的顶端口而容纳到上述外容器的上述容纳部。而且，由于上述内容器通过安装上述盖部而成为液密状态，因此仅靠卸下上述内容器就能够将分离对象物回收到上述外容器中。另外，采用本发明的分离容器，能够任意地设计上述容纳部的大小。因此，通过使上述容纳部小型化，从而能够将在卸下上述内容器之后残留在上述外容器的内部的液量设定为任意的量、例如能设定为少量。若上述液量是相对少量，就能够获得分离对象物为相对高浓度的样品。而且，与此相伴，所使用的离心处理液的量也减少，因此例如在使用Percoll的情况下，能够实现低成本化。

附图说明

图1是表示本发明的分离容器的构成构件的一例的剖视图，（A）是外容器的剖视图，（B）是内容器的剖视图，（C）是盖部的剖视图。

图2是表示本发明的分离容器的一例的剖视图。

图3是表示本发明的分离容器的构成构件的一例的剖视图，（A）是外容器的剖视图，（B）是内容器的剖视图，（C）是盖部的剖视图。

图4是表示本发明的分离容器的一例的剖视图。

图5的（A）、（B）及（C）是表示本发明的分离容器的一例的剖视图。

图6是表示本发明中的外容器的一例的概略图，（A）是剖视图，（B）是其上部的俯视图，（C）是上述上部的立体图。

图7是表示本发明中的内容器的一例的概略图，（A）是剖视图，（B）是其上部的立体图。

图8是表示本发明的分离容器的一例的概略图，（A）和（B）是分别表示在外容器的不同的槽部中向内容器内插入了突起部的状态的剖视图。

图9是表示本发明中的构成构件的一例的概略图，（A）是表示外容器的上部的立体图，（B）是表示内容器的上部的立体图。

图10是表示本发明中的外容器的一例的立体图。

图11是表示本发明中的外容器的一例的概略图，（A）是轴线方向上的剖视图，（B）是上述（A）的I－I方向剖视图。

图12是表示本发明中的内容器的一例的概略图，（A）是轴线方向上的剖视图，（B）是上述（A）的II－II方向剖视图。

图13是表示本发明的分离容器的一例的剖视图。

图14是表示本发明中的构成构件的一例的概略图，（A）是外容器的剖视图，（B）是内容器的剖视图。

图15是表示本发明中的外容器的一例的概略图，（A）是其顶端部的俯视图，（B）是外容器的剖视图。

图16是表示本发明的分离容器的一例的概略图，（A）是轴线方向剖视图、（B）是上述（A）的III－III方向剖视图。

图17是表示本发明的分离容器的一例的概略图，（A）是内容器具有突起部的分离容器的剖视图，（B）是外容器具有突起部的分离容器的剖视图。

图18是表示本发明的分离容器的一例的概略图，（A）是表示具有肋的内容器的顶端的立体图，（B）是具有上述（A）的内容器的分离容器的剖视图。

图19是表示本发明的分离容器的一例的概略图，（A）是具有椭圆状的内容器的分离容器的剖视图，（B）是内容器向一侧偏移配置的分离容器的剖视图。

图20是表示在本发明的实施例2中回收的生存精子的平均浓缩率的图表。

具体实施方式

分离容器

如上所述，本发明的分离容器用于从试样中分离分离对象物，其特征在于，

该分离容器包括外容器、内容器及盖部，

上述外容器是上端开口、下端闭口的有底筒状，

上述内容器是上端和下端均开口的筒状，

上述外容器和上述内容器在上述外容器的上下方向与上述内容器的上下方向一致的状态下，上述内容器能够配置于上述外容器的内部，

在将上述内容器配置于上述外容器的内部的状态下，

上述盖部能够相对于上述内容器的上端装卸的开口部，

上述外容器和上述内容器分别呈筒状，特别优选为圆筒状。

本发明的分离容器例如优选的是，在将上述内容器配置于上述外容器的内部的状态下，上述内容器的下端的、顶端口的端面和顶端的外周面中的至少一者与上述外容器的内周面相接触。这样，在上述内容器的下部，与上述外容器接触，从而例如在进行离心时能够减少作用于上述内容器的物理载荷。

上述内容器的下端既可以是其顶端口的端面与上述外容器的内周面相接触，也可以是其顶端的外周面与上述外容器的内周面相接触，亦可以是上述顶端口的端面和上述顶端的外周面都与上述外容器的内周面相接触。

这样，通过使上述内容器的下端与上述外容器的内周面相接触，例如还能够获得以下这样的效果。即，本发明的分离容器例如也适合于利用上游法进行的精子的分离。在应用于上游法的情况下，例如在上述外容器的上述容纳部内配置精子，向上述内容器的内部导入能够供精子游动的液体。表现出良好运动性的精子通过直线运动从上述容纳部穿过上述内容器的下端的开口部向上述内容器的内部浮出。本发明的分离容器如上所述，上述内容器的下端与上述外容器的内周面相接触。因此，从上述容纳部浮出的精子穿过上述开口部被高效地引导到上述内容器的内部。因此，能够以优异的回收率回收表现出运动性能的精子。

上述内容器的下端例如既可以是其顶端口的端面整体与上述外容器的内周面相接触，也可以是上述端面的部分区域与上述外容器的内周面相接触。在后者的情况下，例如，与上述外容器相接触的部位既可以是1处，也可以是两处以上。

上述内容器的下端例如既可以是其顶端的外周面整体与上述外容器的内周面相接触，也可以是上述端面的部分区域与上述外容器的内周面相接触。在后者的情况下，例如，与上述外容器相接触的部位既可以是1处，也可以是两处以上。

上述内容器例如也可以是在其顶端的外周面上具有突起部。在该情况下，上述内容器的下端也可以在上述突起部处与上述外容器的内周面相接触。在上述内容器中，上述突起部并不特别被限制，例如可以是1个或2个以上。

上述外容器例如也可以是在上述容纳部的上端部的内周面上具有突起部。在该情况下，上述内容器的下端也可以在上述顶端口的端面和其顶端的外周面中的至少一者处与上述外容器的上述突起部相接触。在上述外容器中，上述突起部并不特别被限制，例如可以是1个或2个以上。

上述外容器例如也可以是在上述容纳部的上端部的内周面上具有呈周状的突起部。具体地说，例如也可以是，形成上述容纳部的侧壁成为周状的突起部，在上述容纳部的外周形成有周状的槽部。在该情况下，上述内容器的下端也可以是上述顶端口的端面与上述突起部相接触，具体地说，也可以与上述突起部的内表面相接触。在本发明中，例如在上述外容器的内周面具有上述突起部的情况下，上述外容器的内周面包括上述突起部的表面。

上述外容器与上述内容器例如也可以分别在对应的部位具有当将上述内容器配置于上述外容器时能够卡合两者的凹部（例如槽部）与凸部（突起部）。由于具有上述凹部和上述凸部，例如在将上述内容器安装于上述外容器时，能够实现更稳定的安装性。而且，例如在将上述内容器安装于上述外容器时，能够通过操作者的手指的触觉感觉来确认上述凹部与上述凸部之间的卡合，因此能够进一步提高操作性。

如上所述，上述内容器的下端与上述外容器的内周面相接触。上述内容器的下端与上述外容器的内周面也可以如上所述部分接触，由此，在上述内容器的下端与上述外容器的上述容纳部的上端之间的边界处，例如在上述内容器的外周面与上述外容器的内周面之间，既可以存在间隙，也可以没有间隙，优选后者。另外，在前者的情况下，上述间隙例如优选为精子无法通过的间隙。如果是上述间隙，例如在精子自上述外容器的上述容纳部上游时，就能够将上述精子高效地引导到上述内容器的内部。精子无法通过的间隙并不特别被限制。上述间隙例如优选的是，在与轴线垂直的方向上，上述内容器的下端的外周面与上述外容器的同该外周面相对的内周面之间的距离为200μm以下，更优选为100μm以下，进一步优选为50μm以下。

也可以是，上述内容器具有外周面呈锥形状的锥形部。上述锥形部例如也可以是其整体或部分与上述外容器的内周面相接触。另外，上述内容器也可以是，上述锥形部的内周面与上述外周面相同地呈锥形状。在上述内容器中，上述锥形部的位置并不特别被限制，例如可列举下部，也可以是下端。另外，上述内容器例如也可以是在锥形部的下方具有圆筒状的顶端部。

也可以是，上述外容器具有内周面呈锥形状的锥形部。在上述外容器中，上述锥形部的位置并不特别被限制，例如，可列举上述容纳部的上部，也可以与上述容纳部的上端部相连结。在该情况下，在将上述内容器配置于上述外容器的内部的状态下，上述内容器的上述锥形状的外周面例如也可以是其整体或部分与上述外容器的锥形状的内周面相接触。另外，在上述外容器中，上述锥形部例如也可以是，其外周面与上述内周面相同地呈锥形状。

上述内容器例如也可以是，还在其上端的外周面具有呈周状的突起部。优选的是，上述突起部例如未插入至上述外容器的内部而露出到上述外容器的开口部上。上述突起部例如成为上述内容器的把持部。另外，优选的是，利用上述突起部，例如在上述上端闭塞上述外容器与上述内容器之间的间隙。

上述盖部通过安装于上述内容器的上端的开口部而能够闭塞上述开口部。上述盖部例如优选的是，通过安装在配置于上述外容器的内部的上述内容器，也使上述外容器的上端的开口部闭塞。上述盖部例如既可以是与上述内容器相连结的形态，也可以是与上述内容器分开的构件并在使用时安装于上述内容器的形态。上述盖部例如也可以是与上述外容器相连结的形态。上述盖部的安装形态并不特别被限制，例如可列举螺纹结合、咬合、嵌合、压接等。

上述外容器的内周面和上述内容器的外周面例如优选的是，任意一者具有突起部（凸部），另一者具有能够与上述突起部相卡合的槽部（凹部）。上述突起部与上述槽部例如优选的是，能够将上述内容器卡定于上述外容器的内部，上述突起部与上述槽部例如分别是指卡合用突起部和卡合用槽部。上述外容器和上述内容器例如既可以是任一者具有上述突起部，也可以是任一者具有上述槽部。当在上述外容器的内部配置上述内容器时，上述突起部与上述槽部配置在例如两者能够卡合的部位。作为具体例子，既可以是，在上述外容器的内周面上具有上述槽部，在上述内容器的外周面上具有上述突起部，也可以是，在上述外容器的内周面上具有上述突起部，在上述内容器的外周面上具有上述槽部。上述突起部和上述槽部的形状和数量并不特别被限制。

上述槽部与上述突起部例如优选设置在轴线方向上。优选的是，在从上述外容器的上部的开口部向其内部插入上述内容器时，通过向设于上述轴线方向的槽部内插入设于上述轴线方向的突起部，从而使上述外容器与上述内容器卡合。上述外容器例如也可以具有多个深度不同的槽部。在该情况下，优选的是，上述内容器具有能够插入到最深的槽部内的长度的突起部。在外容器如上所述具有多个深度不同的槽部的情况下，通过向上述槽部中的任意槽部内插入上述突起部，能够调节上述内容器向上述外容器的内部插入的深度，即能够调节上述内容器在在上述外容器的内部的在轴线方向上的位置。另外，如上所述也可以是，上述外容器具有上述突起部，上述内容器具有上述槽部。

上述外容器例如优选的是，上述外容器在上述容纳部的外侧具有同心圆状的槽部，上述内容器例如优选的是，在上述顶端的外侧具有同心圆状的突起部。而且，优选的是，当在上述外容器的内部配置上述内容器时，上述内容器的上述突起部能够插入到上述外容器的上述槽部。优选的是，上述外容器的上述槽部由上述容纳部的外壁与上述外容器的外壁形成。这样，在上述外容器中，由于在上述容纳部的外侧具有上述槽部，因此，例如即使在附着于上述外容器的上部的液体沿着上述外容器的内壁流下的情况下，也能够将上述液体容纳于上述槽部，能够防止混入到上述容纳部。由此、例如在从上述外容器中卸下上述内容器时，能够充分地防止上述容纳部中的液量增加。

用于形成上述分离容器的材料并不特别被限制。上述材料例如可列举合成树脂材料、金属材料、玻璃材料等。其中，例如基于成形性、组装性、根据需要还有粘接性等材料的加工性、添加物向试样溶出等卫生方面、确认性等功能性、成本方面等观点，优选上述合成树脂材料。上述材料例如可列举氟树脂、聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯、聚酯、聚氨酯、聚甲基戊烯、甲基丙烯酸类（methacryl）、ABS（丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物）、PET（聚对苯二甲酸乙酯）、聚氯乙烯、硅、乙烯-醋酸乙烯酯共聚物、合成橡胶、各种弹性体等合成树脂，其中，优选氟树脂、聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯。上述氟树脂例如优选疏水性氟树脂，特优选聚四氟乙烯（PTFE）。

本发明的分离容器的用途并不特别限制。优选的是，本发明的分离容器例如用于从试样中分离精子。在将本发明的分离容器用于从试样中分离精子的情况下，该分离方法并不特别被限制，例如能够应用密度梯度离心法、上游法等。在将本发明的分离容器使用于密度梯度离心法的情况下，除了精子的分离以外，例如也能够使用于细胞小器官的分离、DNA或RNA的分离、血液的特定成分（例如红血球、单核细胞、血浆）的分离等。上述试样并不特别被限制，可列举含有上述分离对象物的试样，作为具体例子，可列举精液、血液等。

分离方法

（A1）在上述外容器的内部配置上述内容器，向上述内容器的内部和上述外容器的上述容纳部内填充离心处理液；

（B1）在上述（A1）工序之后，向上述内容器的内部导入上述试样；

（C1）在上述（B1）工序之后，将上述分离容器用于离心分离，将来自上述试样的沉淀物容纳到上述外容器的上述容纳部；

（D1）在上述（C1）工序之后，在上述内容器上安装有上述盖部的状态下，从上述外容器中取出上述内容器。

上述离心处理液并不特别被限制，例如能够根据试样和分离对象物的种类来适当地确定。上述离心处理液例如可列举密度梯度载体、培养基、缓冲液等。上述密度梯度载体例如也可称作比重调整剂。上述密度梯度载体并不特别被限制，例如可列举Percoll、改性胶体二氧化硅、蔗糖聚合物、聚蔗糖等。上述Percoll通常是具有聚乙烯基吡咯烷酮皮膜的胶状硅溶胶。上述Percoll例如优选在去除了内毒素之后添加上述培养基并实现等渗化Percoll。Percoll的浓度并不特别被限制，例如优选90%～98%。上述培养基例如在分离对象物为精子的情况下，可列举含有HEPES的液体等。

在上述（A1）工序中，上述内容器向上述外容器的内部的配置与上述离心处理液的充填的顺序并不受到限制。上述（A1）工序例如也可以是下述（A1－1）工序和（A1－2）工序中的任一者。

（A1－1）工序：在将上述内容器配置于上述外容器的内部之后，通过向上述内容器的内部导入上述离心处理液，从而向上述内容器的内部和上述外容器的上述容纳部填充上述离心处理液；

（A1－2）工序：在向上述外容器的内部导入了上述离心处理液之后，通过在上述外容器的内部配置上述内容器，从而向上述内容器的内部和上述外容器的上述容纳部填充上述离心处理液。

上述（A1－1）工序例如在将上述内容器配置于上述外容器的内部之后，向上述内容器的内部注入上述离心处理液。由此，例如，从上述内容器的下端的开口部也能够向上述外容器的上述容纳部填充上述离心处理液。另外，上述（A1－2）工序例如在向上述外容器的内部注入了上述离心处理液之后，将上述内容器配置于上述外容器的内部。由此，例如，也能够向上述内容器的内部填充离心处理液。在该情况下，从上述内容器的下端的开口部向内部导入上述离心处理液。

在上述（B1）工序中，上述试样的导入方法并不特别被限制。在上述离心处理液为密度梯度载体的情况下，例如优选的是，上述试样叠加在上述密度梯度载体上。

在上述（C1）工序中，离心分离的条件并不特别被限制，例如能够根据试样和分离对象物的种类来适当地确定。作为具体例子，例如以1000G（1000×9.80665m/s²）进行20分钟～30分钟的条件。上述离心分离例如优选的是在上述内容器上安装有上述盖部的状态下进行。通过上述离心分离，来自上述试样的沉淀物从上述内容器的下端的开口部向上述外容器的上述容纳部导出。

在上述（D1）工序中，若在上述内容器上安装上述盖部，则上述内容器的内部成为液密状态。因此，能够上述内容器的内部的液体不会从下端的开口部漏出地从上述外容器中取出上述内容器。由于来自上述试样的沉淀物容纳于上述外容器的容纳部内，因此通过回收上述容纳部的液体，而能够回收沉淀了的分离对象物。

如上所述，上述分离对象物并不特别被限制，本发明的分离方法优选应用于精子的分离。在用于分离精子的情况下，本发明的分离容器例如能够应用于离心分离法、上游法。

本发明的分离方法例如作为第1形态可列举离心分离法、即通过离心分离使精子沉淀、并回收精子的方法。在该情况下，例如优选的是，在上述（B1）工序中，将含有精子的试样、例如精液等导入上述内容器的内部，然后，在上述（C1）工序中，将上述分离容器用于离心分离，通过沉淀将上述试样中的精子容纳到上述外容器的上述容纳部，接着，在上述（D1）工序中，从上述外容器中取出上述内容器，回收上述外容器的上述容纳部内的上述精子。

上述第1形态例如优选为使用了上述密度梯度载体作为上述离心处理液的密度梯度法。

上述第1形态也能够进一步与上游法组合。在该情况下，例如，在上述（C1）工序中，将上述分离容器用于离心分离，通过沉淀将上述试样中的精子容纳到上述外容器的上述容纳部，在上述（D1）工序中，从上述外容器中取出上述内容器。而且，优选的是还包括下述（E1）和（F1）工序：

（E1）工序：在上述（D1）工序之后，在上述外容器中配置新的上述内容器，在上述配置之前或上述配置之后，向上述内容器内填充能够供精子游动的液体；

（F1）工序：在上述（E1）工序之后，回收从上述外容器的上述容纳部中游到上述内容器内的精子。

在上述（D1）工序中，通过从上述外容器中取出上述内容器，从而在上述外容器的上述容纳部中存在有含有沉淀的精子的上述离心处理液。然后，在上述（E1）工序中，配置新的上述内容器，通过向上述内容器内填充上述液体，从而运动性优异的精子从上述外容器的上述容纳部穿过上述内容器的开口部朝向上述内容器的内部游动。因此，通过回收上述内容器的内部的液体，而能够回收运动性优异的精子。在上述（E1）工序中，上述液体向上述内容器的充填并不特别被限制，例如既可以在配置于上述外容器之后进行充填，也可以将预先填充有上述液体的上述内容器以维持着液密状态的状态配置于上述外容器。

在上述（F1）工序中，例如也可以是，在上述内容器上安装有上述盖部的状态下，从上述外容器中取出上述内容器，回收上述内容器内的上述精子。在该情况下，在取出了上述内容器之后，例如也可以是，将其下端放入试管等其他容器中，通过卸下上述盖部，来解除液密状态，从而使上述液体从上述内容器的内部向上述其他容器内移动。另外，在上述（F1）工序中，例如也可以是使用吸液管等从上述内容器的内部回收含有精子的液体。

能够供上述精子游动的液体并不特别被限制，例如可列举上述培养基。作为上述培养基的具体例子，例如可列举含有HEPES的液体等。

另外，本发明的分离方法作为第2形态例如可列举上游法。在该情况下，优选的是，上述分离方法使用本发明的分离容器，并包括下述（A2）～（C2）工序：

（A2）工序：向上述外容器的上述容纳部内导入含有精子的试样；

（B2）工序：在上述（A2）工序之后，在上述外容器的内部配置上述内容器，在上述配置之前或上述配置之后，向上述内容器的内部填充能够供精子游动的液体；

（C2）工序：在上述（B2）工序之后，回收从上述外容器的上述容纳部中游到上述内容器内的精子。

在上述（C2）工序中，优选的是，在上述内容器上安装有上述盖部的状态下，从上述外容器中取出上述内容器，回收上述内容器内的上述精子。

以下，例示本发明的分离容器及使用了该分离容器的分离方法。本发明的分离容器和分离方法并不限制于这些形态。以下，使用附图进行说明，但是只要没有特别表示，就在各附图中对同一部位标注相同的附图标记。另外，只要没有特别表示，各实施方式就能够引用各自的说明。

实施方式1

将本例的分离容器示出于图1和图2的剖视图中。图1是构成分离容器的构件的剖视图，（A）是外容器，（B）是内容器，（C）是盖部。图2是分离容器的剖视图。

如图1的（A）所示，外容器10是在上端具有开口部104的有底的圆筒状，并包括主体部101、锥形部102及容纳部103。如图1的（B）所示，内容器11在上端和下端分别具有开口部114、开口部113，并包括主体部111、锥形部112，在主体部111的上部的外周面上具有呈周状的突起部115。突起部115例如如上所述成为内容器11的把持部。另外，盖部12位于比上述突起部靠例如上述上端，如图1的（C）所示，盖部12包括把持部121和插入部122。

外容器10、内容器11及盖部12的大小并不特别被限制。上述各构件只要是如下设置即可：例如内容器11能够配置于外容器10的内部，内容器11在下端的开口部113的端面和开口部113的外周面中的至少一者处与外容器10的内周面相接触，盖部12能够安装于内容器11的上端的开口部114，通过盖部12向容器11的安装，内容器11的内部成为液密状态。

各构件的大小例如能够根据试样和分离对象物的种类、上述试样的量等适当地确定。在本发明中，“轴线方向”在分离容器、内容器及外容器中是指上下方向，“垂直方向”是指与上述轴线方向垂直的方向，“高度”是指上述轴线方向上的长度，“直径”是指上述垂直方向的截面中的直径。

外容器10的大小并不特别被限制，例如能够例示以下条件。整体容量例如为0.5mL～100mL，优选为1.0mL～50mL。外容器10整体的内部高度例如为30mm～200mm，优选为50mm～120mm。主体部101的高度例如为80mm～120mm，优选为105mm～115mm。锥形部102的高度例如为5mm～20mm，优选为10mm～15mm。容纳部103的高度例如为5mm～15mm，优选为8mm～12mm。开口部104的内周直径例如为10mm～20mm，优选为13mm～15mm。锥形部102的上端的内周直径例如为8mm～18mm，优选为10mm～13mm。容纳部103的上端的内周直径例如为5mm～15mm，优选为6mm～7mm。容纳部103的容量例如为0.1mL～0.5mL，优选为0.2mL～0.4mL。容纳部103的内部高度例如为4mm～10mm，优选为5mm～8mm。

内容器11的大小并不特别被限制，例如能够例示以下条件。整体容量例如为0.3mL～100mL，优选为0.5mL～50mL。内容器11整体的高度例如为60mm～100mm，优选为80mm～90mm。主体部111的高度例如为50mm～90mm，优选为60mm～70mm。锥形部112的高度例如为5mm～30mm，优选为10mm～20mm。上端的开口部114的内周直径例如为5mm～20mm，优选为10mm～14mm。上端的开口部114的外周直径、即突起部115的外周直径例如为10mm～20mm，优选为14mm～18mm。锥形部112的上端的外周直径例如为8mm～18mm，优选为10mm～15mm。锥形部112的下端的外周直径、即下端的开口部113的外周直径例如为3mm～8mm，优选为4mm～7mm。下端的开口部113的内周直径例如为2mm～7mm，优选为3mm～6mm。

盖部12的大小并不特别限制，例如能够例示以下条件。把持部121的外周直径例如为10mm～20mm，优选为12mm～18mm。插入部122的外周直径例如为5mm～20mm，优选为10mm～14mm。插入部122的高度例如为2mm～10mm，优选为4mm～6mm。

接着，根据图1和图2来说明使用本例的分离容器、通过离心分离来分离精子的方法。

首先，在外容器10的内部配置内容器11。此时，内容器11的下端的外周面与外容器10的内周面相接触。在图2中，具体地说，内容器11的锥形部112的外周面与外容器10的锥形部102的内周面相接触。在本例中，内容器11与外容器10只要是内容器11的下端的外周面与外容器10的内周面相接触即可，例如也可以不是内容器11的外周面整体都与外容器10的内周面相接触。

接着，向内容器11的内部注入离心处理液。内容器11的下端具有开口部113。因此，注入到内容器11内的上述离心处理液穿过开口部113向外容器10的容纳部103导入。上述离心处理液的量并不特别被限制，能够根据外容器10和内容器11的大小适当地确定。上述离心处理液例如为1mL～10mL，优选为2mL～5mL。

接着，向内容器11的内部导入含有精子的试样。优选的是，上述试样叠加于内容器11的内部的上述离心处理液。

然后，向内容器11的开口部114内插入盖部12的插入部122，使内容器11的内部成为液密状态。然后，将分离容器1用于离心分离。离心分离的条件并不特别被限制，例如以1000G（1000×9.80665m/s²）进行20分钟～30分钟的条件。通过离心分离，精子从上述试样中被分离，精子从内容器11的开口部113沉淀于外容器10的容纳部103。采用本例，即使在离心分离时，物理稳定性也优异。

离心后，在安装有盖部12的状态下，从外容器10中取出内容器11。内容器11的内部含有上述试样的废物。但是，通过安装盖部12，来使内容器11的内部成为液密状态。因此，能够液体不会从内容器11的内部漏出地从外容器10中取出内容器11。由此，在外容器10的容纳部103中，回收有含有精子的上述离心处理液。能够将回收到容纳部103内的离心处理液用作回收精子的样品。

在本例中，还能够进行上游法。首先，从外容器10中取出内容器11之后，在外容器10中配置新的内容器11。优选的是，向新的内容器11内预先填充能够供精子游动的液体。在该情况下，只要向内容器11的开口部114内插入盖部12，就能够维持液密状态，因此能够上述液体不会从开口部113漏出地将内容器11配置于外容器10。然后，以该状态进行放置。由此，表现出运动性的精子从外容器10的容纳部103穿过内容器11的开口部113向内容器11的内部上游过来。此时，由于分离容器1在内容器11的开口部113的外周面与外容器10的内周面之间没有间隙，因此上游来的精子能够高效地向内容器11的内部上游。

这样，只有表现出运动性的精子向内容器11内移动。因而，在放置之后，在内容器11上安装盖部12，在保持着内部的液密性的状态下，从外容器10中取出内容器11，从而能够回收仅表现出运动性的精子。另外，例如也可以从内容器11上卸下盖部12来解除液密性、使液体从上述内部导出而将所取出的内容器11的内部的精子回收到其他容器中。

离心分离通常在离心转子上设置分离容器来进行。此时，在所设置的本例的分离容器与上述离心转子之间产生间隙的情况下，也可以在上述分离容器上安装调整装置。

实施方式2

将本例的分离容器示出于图3和图4。图3是构成分离容器的构件的剖视图，（A）是外容器，（B）是内容器，（C）是盖部。图4是分离容器的剖视图。

如图3的（A）所示，外容器20是在上端具有开口部104的有底的圆筒状，包括主体部101、锥形部102及容纳部103，在容纳部103的上端的内周面上具有呈周状的突起部200。突起部200的大小并不特别被限制。图3的（B）和（C）与上述图1的（B）和（C）相同。而且，如图4所示，分离容器2在外容器20的内部配置有内容器11，在上部的开口部安装有盖部12。

作为外容器20的突起部200和内容器11的下端的开口部113各自的内周直径例如可列举以下形态。第1形态例如是突起部200的内周直径与内容器11的开口部113的内周直径大致一致的形态。将该形态的一例示出于图5的（A）中。图5的（A）是在外容器20的内部配置了内容器11的状态下的分离容器2的剖视图。如图5的（A）所示，突起部200与内容器11的开口部113各自的内周直径大致相同。第2形态例如是突起部200的内周直径大于内容器11的开口部113的内周直径的形态。将该形态的一例示出于图5的（B）中。图5的（B）是在外容器20的内部配置了内容器11的状态下的分离容器2的剖视图。如图5的（B）所示，突起部200的内周直径大于内容器11的开口部113的内周直径。第3形态例如是突起部200的内周直径小于内容器11的开口部113的内周直径的形态。将该形态的一例示出于图5的（C）中。图5的（C）是在外容器20的内部配置了内容器11的状态下的分离容器2的剖视图。如图5的（C）所示，突起部200的内周直径小于内容器11的开口部113的内周直径。

在通过离心分离使分离对象物自试样沉淀时，例如优选图5的（A）所例示的上述第1形态和图5的（B）所例示的上述第2形态。采用这些形态，例如在液体从内容器11的内部向外容器20的容纳部移动时，在内容器11与外容器20之间能够构成没有妨碍液体移动的凸部的流路。因此，当使分离容器进行离心分离、目标分离对象物从内容器的内部向外容器的容纳部移动时，能够抑制由与上述凸部接触而产生的物理载荷。在上述分离对象物例如为精子的情况下，通过减少物理载荷，从而能够抑制精子的存活率降低。

在分离对象物是精子、使精子自容纳部向上游、而回收运动性优异的精子的情况下，例如优选图5的（A）所例示的上述第1形态和图5的（C）所例示的上述第3形态。采用这些形态，例如在精子从外容器20的容纳部103的内部向内容器11的内部移动时，在容纳部103与内容器11之间能够构成未存在有妨碍精子上游的凸部的流路。因此，能够将向上游过来的精子高效地引导到内容器11的内部。

本例的分离容器2与上述实施方式1相同地在外容器20的内部配置内容器11。此时，内容器11的下端的开口部113的端面与外容器20的内周面相接触、即与突起部200的上侧的端面相接触。本例的分离容器2能够与上述实施方式1相同地来进行使用。

实施方式3

本实施方式的分离容器是能够改变上述外容器的内部的上述容纳部的容量的形态的一例。

（1）实施方式3－1

将构成本例的分离容器的外容器和内容器示出于图6、图7及图8（盖部未图示）。

图6是外容器的概略图，（A）是外容器的剖视图，（B）是外容器的上部的俯视图，（C）是外容器的上部的立体图。如图6的（A）所示，外容器30是在上端具有开口部304的有底的圆筒状，包括主体部301、锥形部302及顶端部305。而且，如图6的（A）、（B）及（C）所示，在主体部301的上部的内周面上形成有卡合用的4个槽部（凹部）306a、306b、306c、306d。槽部306a、306b、306c、306d从主体部301的开口部304侧的端部起沿着轴线方向以不同的长度形成。在图6中，各槽部的长度（深度）按照306a、306b、306c及306d的顺序被设定为逐渐变长。槽部的形状并不特别被限制，例如除了如图6所示的长方形之外，还可列举字母Ｖ字形等。

图7是内容器的概略图，（A）是剖视图，（B）是内容器的上部的立体图。如图7所示，内容器31在上端和下端分别具有开口部314、开口部313，并包括主体部311、锥形部312及顶端部317。内容器31在主体部311的上部的外周面上具有呈周状的突起部315，突起部315与上述实施方式1相同地成为内容器31的把持部。内容器31还在主体部311的外周面上、在把持部315的下部形成有卡合用的突起部（凸部）316。突起部316的形状并不特别被限制，优选与外容器30的槽部的形状相对应，例如除了如图7所示的长方形之外，还可列举字母Ｖ字形等。

本例的分离容器当在外容器30的内部配置内容器31时，向外容器30的卡合用槽部306a、306b、306c、306d的任一者内插入内容器31的卡合用突起部316，使外容器30与内容器31卡合。优选的是，内容器31的卡合用突起部316比最深的卡合用槽部306d长。如上所述，外容器的卡合用槽部306a、306b、306c、306d的长度各不相同。因此，通过向任意长度不同的上述卡合用槽部内插入卡合用突起部316，从而能够调节内容器31在外容器30的内部的配置部位。

具体地使用图8的概略图来进行说明。图8是表示在外容器30的内部配置了内容器31的状态的剖视图，（A）表示向外容器30的卡合用槽部306a内插入了内容器31的卡合用突起部316的状态，（B）表示向外容器30的卡合用槽部306d内插入了内容器31的卡合用突起部316的状态。如图8所示，在向上述槽部内插入突起部316的情况下，槽部的长度越短，内容器31越相对浅地插入到外容器30的内部（图8的（A）），上述槽部的长度越长，内容器31越相对深地插入到外容器的内部（图8的（B））。因此，若将前者与后者进行比较，结果如下：前者通过内容器31向外容器30的内部的配置而形成的容纳部303a的体积相对变大，后者通过内容器31向外容器30的内部的配置而形成的容纳部303b的体积相对变小。这样，通过外容器30的卡合用槽部与内容器31的卡合用突起部之间的组合，能够调节内容器31向外容器30的内部的插入深度，因此，由此能够容易地调节通过内容器31向外容器30的内部的配置而形成的容纳部的体积。

另外，采用本例的分离容器，例如如上所述，由于使外容器30的槽部与内容器的突起部相卡合，因此在离心处理时等，能够充分地抑制内容器31进一步向外容器30的内部插入。另外，利用上述卡合，能够充分地抑制在外容器30的内部，内容器31旋转。

在本例中，外容器30和内容器31以及外容器30和内容器31的各部位的大小并不特别被限制，例如能够引用实施方式1的例示。

外容器30的大小并不特别被限制，例如能够例示以下条件。顶端部305的内部高度例如为4mm～20mm，优选为5mm～15mm。卡合用槽部的宽度例如为0.5mm～4mm，优选为1.5mm～2.5mm。卡合用槽部的长度例如为1mm～20mm，优选为2mm～5mm，优选在各槽部中长度发生变化。卡合用槽部的数量不受任何限制，下限例如优选为2个，更优选为3个、4个，上限例如优选为10个。

内容器31的大小并不特别被限制，例如能够例示以下条件。卡合用突起部的宽度例如优选小于上述卡合用槽部的宽度，例如为0.4mm～3.9mm，优选为1mm～2mm。卡合用突起部的长度例如优选与最长的上述卡合用槽部的深度相同或比最长的上述卡合用槽部的深度长，例如为2mm～21mm，优选为3mm～6mm。

在外容器30的内部配置了内容器31的状态下的容纳部的大小并不特别被限制，优选的是能够通过如上所述的卡合用槽部与卡合用突起部之间的组合，例如使从下限的体积到上限的体积呈阶段性地变化。上述下限例如为0.05mL～0.1mL，上限例如为0.6mL～1.0mL。

（2）实施方式3－2

在本实施方式中，上述内容器的上述卡合用突起部的数量并不特别被限制。上述卡合用突起部的数量例如既可以是1个，也可以是2个以上，例如为1个～4个，优选为1个～3个，更优选为1个或两个。通过设置多个卡合用突起部，从而例如能够进一步提高内容器在外容器内的稳定性。

在将上述卡合用突起部设定为2个的情况下，优选的是，上述内容器的上述卡合用突起部例如在上述内容器的外周面上且相对的位置具有成对的两个卡合用突起部（突起部组）。而且，优选的是，上述外容器的上述卡合用槽部例如以与上述突起部组相对应的方式在外容器30的内周面上且相对的位置具有多组成对的两个卡合用槽部（槽部组）。

将本例的外容器和内容器的例子示出于图9中。在图9中，（A）是表示外容器的上部的立体图，（B）是表示内容器的上部的立体图。如图9的（A）所示，外容器40在其内周面上形成有卡合用的6个槽部（凹部）406a、406b、406c、406a’、406b’及406c’。槽部406a与槽部406a’、槽部406b与槽部406b’、槽部406c与槽部406c’分别形成在相对的位置。槽部406a与槽部406a’、槽部406b与槽部406b’、槽部406c与槽部406c’分别是相同的长度，设定为长度按照上述顺序逐渐变长。另一方面，如图9的（B）所示，内容器41在其外周面上以相同的长度在相对的位置形成有卡合用的两个突起部（凸部）416a和416a’。

在将内容器41配置于外容器40的情况下，只要将内容器41的突起部416a与突起部416a’插入外容器40的槽部406a与槽部406a’、槽部406b与槽部406b’或槽部406c与槽部406c’中即可。通过在外容器40内配置内容器41而形成的容纳部按照槽部406a与槽部406a’、槽部406b与槽部406b’、槽部406c与槽部406c’的顺序，其体积相对变小。

（3）实施方式3－3

在本实施方式中，上述外容器的卡合用槽部的形状能够进一步例示出其他形态。

将上述外容器的其他例子示出于图10中。图10是外容器的上部的立体图。如图10所示，外容器50是在上端具有开口部的有底的圆筒状，包括主体部501、锥形部及顶端部。而且，如图10所示，在主体部501的上部的内周面上形成有卡合用的6个槽部（凹部）506a、506b、506c、506a’、506b’及506c’。而且，在外容器50的上述内周面上还形成有在向外容器50的内部插入上述内容器时，用于将上述内容器的卡合用突起部的顶端向期望的槽部内引导的引导部。具体地说，在槽部506a与槽部506b之间设有引导部506ab、在槽部506b与槽部506c之间设有引导部506bc。优选的是，引导部506ab和引导部506bc分别呈朝向更深的槽部倾斜的形状。同样地，对于与槽部506a、506b及506c相对应的槽部506a’、506b’及506c’，也同样地设有引导部506ab’和引导部506bc’。

实施方式4

本实施方式的分离容器是防止在从上述外容器中取出了上述内容器之后，上述外容器的容纳部中的液量变动的形态的一例。

在向上述外容器的内部注入了上述离心处理液之后，在将上述内容器配置于上述外容器的内部的情况下，例如在比上述内容器的顶端靠上部的位置，若在上述外容器与上述内容器之间产生间隙，则上述离心处理液有可能进入上述间隙。在这种情况下，在离心处理后，若从上述外容器中卸下上述内容器，则进入上述间隙内的上述离心处理液沿着上述外容器的内周面向下方移动，有可能流入上述外容器的上述容纳部。若上述离心处理液流入上述容纳部，则有可能例如回收的精子被稀释，浓度降低。因此，本实施方式的分离容器是进一步充分地防止这种由混入上述离心处理液而引起的上述容纳部的液量变动的形态的例示。

将本例的分离容器示出于图11、图12及图13中。图11是外容器的剖视图，（A）是外容器的轴线方向上的剖视图，（B）是上述（A）中的上述外容器的顶端的I－I方向剖视图。图12是内容器的剖视图，（A）是内容器的轴线方向上的剖视图，（B）是上述（A）中的上述内容器的顶端的II－II方向剖视图。图13是由上述外容器和上述内容器构成的上述分离容器的剖视图。

如图11的（A）所示，外容器60是在上端具有开口部604的有底的圆筒状，包括主体部601、顶端部605及槽部606。顶端部605呈圆筒状，利用其圆周状的侧壁607与主体部601的侧壁形成有圆周状的槽部606。具体地说，如图11的（B）所示，在圆筒状的顶端部605的周围，侧壁607成为分隔壁并呈同心圆状形成有槽部606。

如图12的（A）所示，内容器61在上端和下端分别具有开口部614、开口部613，包括主体部611、锥形部612及顶端部617，在顶端部617的周围进一步形成有圆周状的突起部618。具体地说，如图12的（B）所示，在圆筒状的顶端部617的周围形成有圆周状的突起部618。

而且，通过在外容器60内配置内容器61，从而能够作为分离容器6来进行使用。如图13所示，在分离容器6中，外容器60的顶端部605供内容器61的顶端部617插入，在外容器60的顶端部605形成有容纳部603。另外，在外容器60的槽部606内插入有内容器61的突起部618。

采用这种分离容器6，例如离心分离后，即使从外容器60中卸下内容器61，沿着外容器60的内壁落下的离心处理液也被导入外容器60的槽部606，能够阻止其向顶端部605内导入。因此，能够充分地防止如上所述的、容纳部603中的液量变动。另外，在离心分离时，由于在外容器60的槽部606内插入有内容器61的突起部618，因此在从外容器60中卸下内容器61之前，也能够防止离心处理液被导入槽部606。因此，当卸下了内容器61时，能够将流下的离心处理液可靠地容纳到槽部606。

实施方式5

本实施方式的分离容器是在从上述外容器中取出上述内容器时防止上述内容器的内部的液体混入上述外容器的内部的形态的一例。

作为本例的分离容器的一个样式，将构成上述分离容器的外容器示出于图14的（A）中。图14的（A）是外容器的剖视图。本例的分离容器例如能够组合图14的（A）的外容器与图3的（B）的内容器来使用。另外，在图14的（A）中，对与图3相同的部位标注相同的附图标记。

如图14的（A）所示，外容器70是图3的（A）的外容器进一步在容纳部103的上侧的开口部具有单向阀701的形态。单向阀701利用离心分离等的压力变化使液体从上方向下方通过。因而，在外容器70的内部，仅在配置图3的（B）的内容器11并进行离心分离的期间，液体经由单向阀701从内容器11导入外容器70的容纳部103。而且，在离心分离后，例如即使在液体从内容器11的下侧的开口部113落下的情况下，也能够防止上述液体经由单向阀701混入外容器70的容纳部103内部。另外，在液体从内容器11落下的情况下，由于例如能够利用滴液吸移管等容易地去除存在于单向阀701的上部的液体，之后，能够提取容纳部103内的回收液。

另外，作为本例的分离容器的其他样式，将构成上述分离容器的内容器示出于图14的（B）中。图14的（B）是内容器的剖视图。本例的分离容器例如能够组合图3的（A）的外容器与图14的（B）的内容器来使用。另外，在图14的（B）中，对与图3相同的部位标注相同的附图标记。

如图14的（B）所示，内容器71是图3的（B）的内容器进一步在顶端的开口部113的位置具有单向阀701的形态。在该情况下，在图3的（A）的外容器20的内部，仅在配置内容器71来进行离心分离的期间，液体经由单向阀701从内容器71向外容器20的容纳部103导入。而且，在离心分离后，即使从外容器20中卸下内容器71，由于安装有单向阀701而也能够防止液体从内容器71的开口部113漏出到外部。

这样，通过单向阀配置于上述外容器或上述内容器，从而例如能够进一步提高分离精度。

单向阀的种类不受任何限制，例如可列举鸭嘴式和伞式等，优选为前者。

实施方式6

本实施方式的分离容器是减少由离心时的载重载荷带来的物理损害的形态的一例。

将构成本例的分离容器的外容器示出于图15中。在图15中，（A）是外容器的顶端部的俯视图，（B）是上述外容器的剖视图。如图15的（A）所示，外容器80是图6的（A）的外容器进一步在其顶端的外周面上具有肋81的形态。外容器例如如上所述，优选的是缩小容纳部的体积，因此其顶端部例如如图6的（A）等所例示，可列举使顶端部的内周和外周的直径小于主体部的直径的形态。因此，对于外容器，通过在较细的顶端部的外周面上如此配置肋，从而能够减少由离心时的载重载荷产生的物理损害。

肋的条件、例如大小、个数及形状等并不特别被限制。肋的个数并不特别被限制，例如优选为2个以上。优选的是，上述肋在上述外周面上呈放射状等间隔地配置。

实施方式7

本实施方式例示有内容器的下端与外容器相接触的状态。

在分离容器中，内容器的外周面与外容器的内周面例如也可以不接触。将该形态的分离容器的一例示出于图16的剖视图中。图16的（A）是分离容器的剖视图，图16的（B）是上述（A）的III－III方向的剖视图。

如图16的（B）所示，内容器11的外周面与外容器10的内周面也可以不接触。在不接触的情况下，内容器11与外容器10之间例如也可以具有空隙105。在轴线的垂直方向上，内容器11的外周面与外容器10的内周面之间的距离（空隙105的长度）例如如上所述，优选为200μm以下，更优选为100μm以下，进一步优选为50μm以下。

另外，在图16的（A）的IV－IV方向的截面、V－V方向的截面和/或VI－VI方向的截面中，也与图16的（B）一样，内容器11与外容器10也可以不接触。

实施方式8

本实施方式例示有内容器的下端与外容器相接触的状态。

在分离容器中，内容器的外周面与外容器的内周面例如也可以部分接触。将该形态的分离容器的一例示出于图17的剖视图中。图17的（A）和（B）是图16的（A）的分离容器的III－III方向的剖视图。

如图17的（A）所示，内容器11的外周面具有突起部（116a、116b、116c、116d），在这些突起部处与外容器10的内周面相接触。另外，如图17的（B）所示，外容器10的内周面具有突起部（106a、106b、106c、106d），在这些突起部处与内容器11的外周面相接触。

接着，将其他例子示出于图18中。图18的（A）是表示内容器的顶端部的概略情况的立体图，图18的（B）是关于具有图18的（A）的内容器的分离容器的、图16的（A）的分离容器的III－III方向的剖视图。

如图18的（A）所示，内容器11在顶端的外周面上具有突起状的肋16。而且，如图18的（B）所示，分离容器的内容器11与外容器10隔着肋16相接触。肋16不是周状，而是具有缺口部，因此在该缺口部中形成有空隙105。在本例中，在内容器11的顶端设置了肋16，但是并不限制于此，例如也可以在比顶端靠上部的位置，在外周面上形成有肋。

在本例中，内容器11的外周面具有肋16，但是并不限制于此，也可以在外容器10的内周面上形成有肋16。

而且，将其他例子示出于图19中。图19的（A）和（B）是图16的（A）的分离容器的III－III方向的剖视图。

如图19的（A）所示，内容器11也可以是呈椭圆形的筒状，在与轴线垂直的方向上，在长轴方向两端的外周面处与外容器10的内周面相接触。另外，在图19的（B）中，内容器11也可以在外容器10内与外容器10非同轴地配置，一部分外周面与外容器10的内周面相接触，不与上述接触的部位相对应的外周面与外容器10的内周面不相接触。

实施例

接着，说明本发明的实施例。但是，本发明并不被以下实施例所限制。

[实施例1]

在本例中，使用本发明的分离容器，通过离心分离来回收含有精子的沉淀部分，并确认存活精子的回收率。

制作图3和图4所示的分离容器。分离容器的大小如下所述。

外容器20

总体容量：9.85mL

整体的内部高度：85mm

主体部101的高度：60mm

锥形部102的高度：14mm

容纳部103的高度：12mm

开口部104的直径：14.5mm

锥形部102的上端的内周直径：12.41mm

锥形部102的下端的内周直径：7.2mm

突起部200的内周直径：6.2mm

容纳部103的容量：0.3mL

容纳部103的内部高度：11mm

内容器11

总体容量：7.7mL

整体的高度：84mm

主体部111的高度：68mm

锥形部112的高度：16mm

上端的开口部114的内周直径：12.4mm

上端的开口部114的外周直径：16.3mm

锥形部112的上端的外周直径：12.2mm

下端的开口部113的外周直径：7mm

下端的开口部113的内周直径：5mm

盖部12

把持部121的外周直径：16.47mm

插入部122的外周直径：12.47mm

插入部122的高度：5mm

在外容器20的内部配置内容器11。然后，向内容器11的内部导入Percoll（商品名Percoll，GE Healthcare Japan公司制）。具体地说，首先，导入90%的Percoll1.5mL，在其之上叠加45%的Percoll1.5mL。然后，在上述Percoll上叠加精液0.28mL。在内容器11的开口部114上安装盖部12，以700G（700×9.80665m/s²）进行30分钟的离心分离。进行了离心后，在安装了盖部12的状态下，从外容器20中取出内容器11。然后，对于外容器20内的Percoll液（总量300μL），利用流式细胞仪测量存活精子、死细胞及杂质，计算出各自的比例（%）。

[比较例1]

在本例中，使用以往的分离容器，通过离心分离从与实施例相同的精液0.28mL中回收含有精子的沉淀部分，并确认存活精子的回收率。

（比较例1－1）

在本例中，作为分离容器，使用了容量15mL的离心管（商品名15mL离心管，康宁公司制）、喷嘴（商品名ARTキャピラール，尼普洛公司制）以及能够设置于上述喷嘴的注射器（商品名JMS注射器JMS公司制）。在上述离心管的内部，以顶端位于底部的方式配置上述喷嘴。然后，向上述离心管的内部导入上述Percoll。具体地说，首先，导入90%的Percoll1.5mL，在其之上叠加45%的Percoll1.5mL。然后，在上述Percoll上叠加上述精液0.28mL。然后，把盖盖在上述离心管上，与上述实施例1相同地进行离心分离。离心后，卸下上述盖，在配置于上述离心管内的上述喷嘴的后端部设置上述注射器，从上述离心管的底部经由上述喷嘴吸引Percoll液0.3mL来作为含有精子的沉淀部分。对于回收的上述Percoll液，与上述实施例1一样地测量存活精子、死细胞及杂质，计算出各自的比例（%）。

（比较例1－2）

在本例中，作为分离容器，使用了容量15mL的离心管（商品名15mL离心管，康宁公司制）和吸液管。向上述离心管的内部导入Percoll。具体地说，首先，导入90%的Percoll1.5mL，在其上层叠45%的Percoll1.5mL。然后，在上述Percoll上叠加上述精液0.28mL。然后，把盖盖在上述离心管上，与上述实施例1相同地进行离心分离。离心后，卸下上述盖，向上述离心管内插入吸液管，作为含有精子的沉淀部分，从上述离心管的底部吸引Percoll液0.3mL。对于这样回收的Percoll液，与上述实施例1一样，测量生存精子、死细胞及杂质，计算出各自的比例（%）。

将这些结果一并示出于下述表1中。如表1所示，采用本发明，杂质的比例极低，能够高效地回收存活精子。另外，采用本实施例的分离容器，不用进行移液，仅靠卸下内容器11就能够获得300μL这样的极少量、且存活精子的浓度较高的样品。

[表1]

[实施例2]

在本例中，使用本发明的分离容器，通过离心分离来回收含有精子的沉淀部分，对于存活精子的回收率进行再现性确认。

作为分离容器，使用了上述实施例1的分离容器和上述比较例1－2的分离容器。上述精子使用了新鲜的猪精液。而且，精子分离操作由没有经验的3位实验者使用各个分离容器来进行存活精子自上述精子的分离。分离方法除了如下改变Percoll的条件以外，根据各个分离容器，与上述实施例1和比较例1－2相同地来进行。Percoll的条件是：（1）导入90%的Percoll1.5mL之后，叠加45%的Percoll1.5mL；（2）导入80%的Percoll1.5mL之后，叠加50%的Percoll1.5mL；（3）导入80%的Percoll3.0mL。

分离后，与上述实施例1相同地利用流式细胞仪测量离心分离前的精子中的存活精子与离心分离后的上述外容器内的Percoll液（总量300mL）中的存活精子，求出后者与将前者设为1时的与前者的比作为浓缩率。然后，针对各个条件，计算出3位实验者的浓缩率的结果的平均值。

将这些结果示出于图20的图表中。在图20中，纵轴表示存活精子的平均浓缩率。在图20中，90%－45%表示Percoll条件（1），80%－50%表示Percoll条件（2），80%表示Percoll条件（3）。另外，在各Percoll条件中，两个柱形从左依次表示上述比较例1-2的分离容器的结果与上述实施例1的分离容器的结果。如图20所示，采用上述实施例1的分离容器，在任意Percoll条件下均能够实现最高的浓缩率。另外，采用上述实施例1的分离容器，与上述比较例1－2的分离容器相比较，实验者之间的偏差极小。根据这些结果可知，采用本发明的分离容器，与操作者是否是熟练操作者无关地能够以较高的再现性、效率较佳地以使存活精子浓缩了的状态进行回收。

[实施例3]

在本例中，确认使用本发明的分离容器所回收的精子的运动率。

作为分离容器，使用了上述实施例1的分离容器、上述比较例1－1的分离容器及上述比较例1－2的分离容器。而且，对于5份人体精液检体，根据各个分离容器，与上述实施例1、比较例1－1及比较例1－2相同地来进行分离。

分离后，对于回收的精子，按照WHO laboratory manual forthe Examination and processing of human semen FIFTH EDITION（2010）（日语版：WHO精液检查实验手册第5版（2010年）计算出其运动率和高速前进运动率。然后，对于各个分离容器，求出5份检体的平均值。将这些结果示出于下述表2中。如下述表2所示，示出了用实施例1的分离容器回收的精子比用比较例的分离容器回收的精子优异的结果。特别是高速前进运动率，示出了与比较例相比得到了极其优异的结果。根据这些结果可知，采用实施例的分离容器，能够不对精子带来影响地回收存活精子。

[表2]

产业上的可利用性

采用本发明的分离容器，例如能够通过离心分离使沉淀的分离对象物穿过上述内容器的下端的顶端口而容纳到上述外容器的上述容纳部。而且，上述内容器通过安装盖部而能够使其内部成为液密状态，因此仅靠卸下上述内容器就能够将分离对象物回收到上述外容器。另外，采用本发明的分离容器，能够任意地设计上述容纳部的大小，因此能够将上述内容器卸下之后残留在上述外容器的内部的液量设定为任意的量、即能设定为少量。只要上述液量为少量，就能够获得分离对象物为高浓度的样品。而且，在使用Percoll等作为离心处理液的情况下，也能够减少其使用量，因此也能够实现低成本化。

以上，参照实施方式说明了本发明，但是本发明并不限定于上述实施方式。对于本发明的结构、详细内容，能够在本发明的范围内进行本领域技术人员能够想到的各种变更。

本申请以2010年11月9日提出申请的日本申请特愿2010－250699作为要求优选权的基础，并在此引入其公开的所有内容。

附图标记说明

1、2、6分离容器；10、20、30、40、50、60、70、80外容器；11、31、41、61、71内容器；12盖部；101、111、301、311、501、601、611主体部；102、112、302、312、612锥形部；103、303a、303b、603容纳部；104、113、114、304、313、314、604、613、614开口部；121把持部；122插入部；115、200突起部；306a～306d、406a～406c、406a’～406c’、506a～506c、506a’～506c’槽部；305、317、605、617顶端部；315、316、416a、416a’突起部；506ab、506bc、506ab’、506bc’引导部；606槽部；607侧壁；618突起部；701单向阀；16、81肋；105空隙；106a～106d、116a～116d突起部。

Claims

1.一种分离容器，其用于从试样中分离分离对象物，其特征在于，

该分离容器包括外容器、内容器及盖部，

上述外容器是上端开口、下端闭口的有底筒状，

上述内容器是上端和下端均开口的筒状，

在将上述内容器配置于上述外容器的内部的状态下，

上述盖部能够相对于上述内容器的上端装卸的开口部，

2.根据权利要求1所述的分离容器，其特征在于，

在将上述内容器配置于上述外容器的内部的状态下，

上述内容器的下端的、顶端口的端面和顶端的外周面中的至少一者与上述外容器的内周面相接触。

3.根据权利要求2所述的分离容器，其特征在于，

上述内容器的下端的、顶端口的端面整体或部分与上述外容器的内周面相接触。

4.根据权利要求2所述的分离容器，其特征在于，

上述内容器的下端的、顶端的外周面整体或部分与上述外容器的内周面相接触。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的分离容器，其特征在于，

上述外容器在上述容纳部的上端的内周面上具有呈周状的突起部，

上述内容器的下端的顶端口的端面与上述突起部相接触。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的分离容器，其特征在于，

上述内容器具有其外周面呈锥形状的锥形部。

7.根据权利要求6所述的分离容器，其特征在于，

上述内容器的上述锥形状的外周面与上述外容器的内周面相接触。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的分离容器，其特征在于，

上述外容器的内周面和上述内容器的外周面中的一者具有突起部，另一者具有能够与上述突起部相卡合的槽部。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的分离容器，其特征在于，

上述外容器在上述容纳部的外侧具有同心圆状的槽部，

上述内容器在上述顶端的外侧具有同心圆状的突起部，

当在上述外容器的内部配置上述内容器时，上述内容器的上述突起部能够插入到上述外容器的上述槽部内。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的分离容器，其特征在于，

该分离容器的用途是用于从试样中分离精子。

11.一种分离方法，其用于从试样中分离分离对象物，其特征在于，

该分离方法使用权利要求1至10任一项所述的分离容器，并包括下述（A1）～（D1）工序：

12.根据权利要求11所述的分离方法，其特征在于，

上述（A1）工序包括下述（A1－1）工序或（A1－2）工序：

13.根据权利要求11或12所述的分离方法，其特征在于，

上述离心处理液是从由密度梯度载体、培养基及缓冲液构成的群中选择的至少一种。

14.根据权利要求11至13中任一项所述的分离方法，其特征在于，

上述离心处理液是密度梯度载体，

在上述（B1）工序中，在上述密度梯度载体上叠加上述试样。

15.根据权利要求11至14中任一项所述的分离方法，其特征在于，

上述分离对象物是精子，

在上述（C1）工序中，将上述分离容器用于离心分离，通过使上述试样中的精子沉淀而容纳到上述外容器的上述容纳部，

在上述（D1）工序中，从上述外容器中取出上述内容器，回收上述外容器的上述容纳部内的上述精子。

16.根据权利要求11至14中任一项所述的分离方法，其特征在于，

上述分离对象物是精子，

在上述（D1）工序中，从上述外容器中取出上述内容器，

该分离方法还包括下述（E1）工序和（F1）工序：

17.根据权利要求16所述的分离方法，其特征在于，

在上述（F1）工序中，在上述内容器上安装有上述盖部的状态下，从上述外容器中取出上述内容器，回收上述内容器内的上述精子。

18.根据权利要求11至17中任一项所述的分离方法，其特征在于，

上述试样含有精液。

19.一种分离方法，其用于从试样中分离分离对象物，其特征在于，

上述分离对象物是精子，

该分离方法使用权利要求1至10中任一项所述的分离容器，并包括下述（A2）～（C2）工序：

（A2）工序：向上述外容器的上述容纳部内导入上述试样；

20.根据权利要求19所述的分离方法，其特征在于，

在上述（C2）工序中，在上述内容器上安装有上述盖部的状态下，从上述外容器中取出上述内容器，回收上述内容器内的上述精子。