CN109207340B - 核酸萃取组件 - Google Patents
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Abstract
本发明揭露一种核酸萃取组件的固定管及核酸萃取组件,核酸萃取组件包括一柱膜管,柱膜管套设于固定管;固定管包括一筒身部、一管口部以及一底部;筒身部沿一第一方向延伸;管口部远离筒身部的一端具有一往第二方向突出的一突出部,第一方向与第二方向垂直;底部与管口部分别连接筒身部的相对两侧,底部具有一肩部,底部的肩部与柱膜管连接。本发明可快速与方便由较大体积的检体中萃取出较高浓度的核酸。
Description
技术领域
本发明关于一种固定管,特别关于一种核酸萃取组件的固定管及核酸萃取组件。
背景技术
随着人类基因组测序技术的革新、生物医学分析技术的进步以及大数据分析工具的出现,精准医疗(Precision Medicine)的时代已经到来。精准医疗是一种定制医疗模式,它以人体基因组信息为基础,结合蛋白质组、代谢组等相关内环境信息,为患者量身制定出最佳治疗方案,以期达到治疗效果最大化和副作用最小化。
血液是流动在人体的血管和心脏中的一种红色不透明的粘稠液体,主要成分为血浆、血细胞、遗传物质(染色体和基因)。其中,cfDNA(cell free DNA)就是在血浆中发现的游离DNA片段,而ctDNA就是循环肿瘤DNA片段(circulating tumor DNA),其是指cfDNA中来自肿瘤释放的DNA片段。
几乎每个人的血液中都含有游离的DNA片段(cfDNA),它们可能来源于细胞的凋亡、坏死,也可能是通过主动释放的方式(剧烈运动)进入血液。然而,血液中的cfDNA含量很低,在1ml的血浆中,cfDNA的含量约为1ng~100ng之间,ctDNA的含量更低,仅占cfDNA的0.1%~5%之间。
有研究已经证实,肿瘤患者外周血中的cfDNA总量高于健康人,通过这一点,cfDNA的含量若增多,可以起到一个很好的提示作用,借此作为肿瘤初筛的手段。因此,由液态生物检体(Liquid Biopsy)中纯化出极微量的cfDNA(核酸的一种)乃是精准医疗的第一步。
在液体活检的微量游离核酸(Nucleic Acid)手动纯化程序中,一般是利用膜管系统(Column System)通过硅胶膜由检体中提取极微量的核酸。为了得到较大量的核酸,公知的作法是利用小容量(例如0.7ml)的柱膜管并通过多次操作来获取,或是加大柱膜管的尺寸而以较大容量(例如10ml以上)的柱膜管对应较大的硅胶膜一次来获取较大量的核酸。然而,第一种作法将耗费相当多的操作时间与成本,第二种作法虽然一次可得到较多量的核酸,但因大柱膜管的硅胶膜增大又增厚,需以较多溶液方可从硅胶膜中冲提出该核酸,故所得到的微量游离核酸浓度并不会提高。
发明内容
本发明的目的为提供一种核酸萃取组件的固定管及核酸萃取组件。相较于上述公知的作法而言,本发明核酸萃取组件的设计可快速与方便由较大体积的检体中萃取出较高浓度的核酸。
本发明提出一种核酸萃取组件的固定管,核酸萃取组件包括一柱膜管,柱膜管与固定管相互套接,固定管包括一筒身部、一管口部以及一底部;筒身部沿一第一方向延伸;管口部远离筒身部的一端具有往一第二方向突出的一突出部,第一方向与第二方向垂直;底部与管口部分别连接筒身部的相对两侧,底部具有一肩部,底部的肩部与柱膜管连接。
在一实施例中,管口部的相对两侧还分别具有一第一开口,所述第一开口将突出部区分成两段。
在一实施例中,底部还包括一阶梯状结构与一第四开口,阶梯状结构是从第四开口处沿第一方向延伸,阶梯状结构与柱膜管连接,且柱膜管由阶梯状结构突出于固定管。
在一实施例中,筒身部的管径大于阶梯状结构的管径。
在一实施例中,离筒身部越远的阶梯状结构的管径越小。
在一实施例中,筒身部具有一第二开口,第二开口由其中一所述第一开口沿第一方向延伸至阶梯状结构。
在一实施例中,固定管具有一第三开口,第三开口由管口部沿第一方向延伸至阶梯状结构。
在一实施例中,柱膜管具有一第一顶部,固定管的肩部套设于柱膜管的第一顶部的外侧。
本发明还提出一种核酸萃取组件,其包括柱膜管以及上述的固定管。
在一实施例中,固定管的突出部顶抵在一离心管的管口上。
承上所述,在本发明的核酸萃取组件的固定管与核酸萃取组件中,通过固定管的管口部远离筒身部的一端所具有的突出部的设计,让操作者可由离心管中易于拿取固定管。另外,通过固定管的底部的设计可使离心操作时,柱膜管不会掉至离心管底,检体不会由柱膜管中洒出,增加操作的成功率。此外,通过本发明核酸萃取组件中的固定管与柱膜管的结构设计,也可快速与方便由较大体积的检体中萃取出较高浓度的核酸。
在本发明的一实施例中,通过固定管的第一开口的设计,可将突出部区分成两段,借此,也可让操作者于萃取的过程中易于操作。
附图说明
以下附图仅旨在于对本发明做示意性说明和解释,并不限定本发明的范围。其中:
图1与图2分别为本发明一实施例的核酸萃取组件的分解示意图。
图3为本发明一实施例的核酸萃取组件的组合示意图。
图4A为图3的核酸萃取组件沿直线A-A的剖视示意图。
图4B为图3的核酸萃取组件中另一种实施方式的套管的剖视示意图。
图5A与图5B为本发明不同实施方式的固定管的示意图。
图6为本发明不同实施方式的核酸萃取组件的组合示意图。
图7与图8分别为本发明一实施例的离心组件的分解示意图与组合示意图。
图9为图8的离心组件沿直线B-B的剖视示意图。
具体实施方式
以下将参照相关附图,说明依本发明实施例的核酸萃取组件的固定管及核酸萃取组件,其中相同的元件将以相同的附图标号加以说明。
本发明在液体活检的核酸纯化过程中,是利用一核酸萃取组件通过离心机由检体中提取极微量的核酸。其中,检体可例如但不限于血液、血浆、尿液或组织液。另外,利用本发明的核酸萃取组件并不需要多次操作,也不需要加大柱膜管或膜片的尺寸,就可快速与方便由较大体积的检体中萃取出较高产量及较高浓度的核酸。以下将以实施例来说明核酸萃取组件的结构与特征。
请参照图1至图4A所示,其中,图1与图2分别为本发明一实施例的核酸萃取组件1的分解示意图,图3为核酸萃取组件1的组合示意图,而图4A为图3的核酸萃取组件1沿直线A-A的剖视示意图。
如图1至图4A所示,核酸萃取组件1包括一固定管11以及一柱膜管12。本实施例的柱膜管12内可包括一膜片3。另外,本实施例的核酸萃取组件1还可包括一套管13。
柱膜管12与固定管11相互套接。本实施例的柱膜管12连接套管13并套设于固定管11内,且柱膜管12的一部分突出于固定管11。其中,固定管11、柱膜管12与套管13实质上分别为直筒状。固定管11、柱膜管12与套管13的材料例如但不限于为塑料。另外,本发明并不限制柱膜管12、套管13及固定管11的容量与尺寸,只要三者相互搭配即可。在一些实施例中,柱膜管12的容量例如介于0.5ml与1ml之间,故柱膜管12可容纳的检体体积相当少,相对地,设置于柱膜管12内部的膜片3的尺寸也很小。在一些实施例中,套管13的容量较大,例如但不限于可容纳10ml以上的检体。因此,当柱膜管12内的检体溶液通过膜片3而流出时,套管13内的检体可补充至柱膜管12内。由于套管13内的检体量较多,因此,离心操作完成后,膜片3上可吸附较多量的核酸,进而可萃取出较高浓度的核酸。此外,本实施例的柱膜管12与套管13为两个不同的构件,然并不以此为限,在一些实施例中,柱膜管12与套管13可为单一构件而为一体成型结构,本发明并不限制。
固定管11具有一筒身部111、一管口部112与一底部113。其中,筒身部111沿一第一方向D1延伸,且管口部112与底部113分别连接筒身部111的相对两侧。另外,管口部112远离筒身部111的一端具有往一第二方向D2突出的一突出部1121,第一方向D1与第二方向D2垂直。另外,本实施例的底部113具有一肩部1131、一阶梯状结构1132以及一第四开口O4。其中,筒身部111的管径大于阶梯状结构1132的管径,且是通过底部113的肩部1131与柱膜管12连接。阶梯状结构1132是从第四开口O4处沿第一方向D1延伸,其中,阶梯状结构1132与柱膜管12连接,且柱膜管12由阶梯状结构1132突出于固定管11。于此,柱膜管12是由底部131的第四开口O4突出于固定管11。
本实施例的管口部112的相对两侧还分别具有一第一开口O1,该些第一开口O1可将突出部1121区分成两段。于此,第一方向D1与第二方向D2之间夹一角度。在本实施例中,第一方向D1与第二方向D2之间的夹角例如但不限于90度。在不同的实施例中,第一方向D1与第二方向D2之间的夹角也可大于90度(例如120度)或小于90度(例如75度),并不限制。具体来说,由于管口部112的相对两侧形成了两个第一开口O1,因此,可将管口部112与突出部1121一分为二,方便后续的操作。另外,离筒身部111越远的阶梯状结构1132的管径越小,即该阶梯状结构离该筒身部越远的部分管径越小,借此使得柱膜管12连接套管13且套设于固定管11内时可固定柱膜管12与套管13,使柱膜管12与套管13不会分离。
本实施例的筒身部111的一侧具有一第二开口O2,第二开口O2由该些第一开口O1的其中之一沿第一方向D1延伸至阶梯状结构1132。在不同的实施例中,筒身部111于上述第二开口O2的相对侧也可具有另一第二开口(未绘示),该另一第二开口也可由第一开口O1的其中之一沿第一方向D1延伸;或者,如图5A所示,除了第一开口O1之外,固定管11不具有第二开口O2,但是具有一第三开口O3,第三开口O3是由管口部112的突出部1121沿第一方向D1延伸至阶梯状结构1132。在一些实施例中,固定管11可不具有第一开口O1、第二开口O2与第三开口O3,以及阶梯状结构1132。如图5B所示,本实施例的固定管11的底部113具有肩部1131以及第四开口O4,不具有阶梯状结构1132,而且,也没有第一开口O1、第二开口O2与第三开口O3;或者,在另一些实施例中,固定管11可不具有第一开口O1、第二开口O2和/或与第三开口O3,但具有阶梯状结构1132;或者,又一些实施例中,固定管11也可不具有阶梯状结构1132,但具有第一开口O1、第二开口O2和/或与第三开口O3,本发明皆不限制。
柱膜管12具有一直筒部121、一第一顶部122及一第一底部125,直筒部121沿一第一方向D1延伸,且第一顶部122与第一底部125分别连接于直筒部121的相对两侧。本实施例的柱膜管12的第一顶部122为环状,第一底部125呈漏斗状,且如图3所示,第一底部125与部分的直筒部121是突出于固定管11的底部113。另外,如图4A所示,本实施例的固定管11的底部113与柱膜管12的第一顶部122连接,且柱膜管12的第一底部125由底部113的第四开口O4往外侧突出于固定管11。不过,在不同的实施例中,柱膜管12也可不突出于固定管11,例如直筒部121与底部113切齐或内缩于底部113之内,并不限制。
具体来说,为了使固定管11可固定柱膜管12,本实施例的固定管11的底部113的管径与柱膜管12的第一顶部122的管径对应设置,使得固定管11的肩部1131可套设于柱膜管12的第一顶部122的外侧(图4A,柱膜管12的第一顶部122的延伸部1221卡在固定管11的肩部1131上),使柱膜管12的第一顶部122的下缘卡在固定管11的底部113的阶梯状结构1132上,使柱膜管12的第一顶部122与底部113连接。但是,在一些实施例中,固定管11的底部113的管径与柱膜管12的第一顶部122的管径也可不需对应设置,或不需紧配,只要例如柱膜管12的第一顶部122的延伸部1221卡在固定管11的肩部1131上,或者柱膜管12的第一顶部122的下缘卡在固定管11的肩部1131上,即可使柱膜管12与固定管11连接,本发明并不限制。此外,本实施例的柱膜管12还具有一管帽123及一连接部124,管帽123是通过连接部124连接于柱膜管12的第一顶部122。于此,管帽123是用以盖住柱膜管12的第一顶部122,当检体放置于柱膜管12内时,可避免检体流出(萃取核酸时,管帽123会打开)。
另外,请再参照图3所示,在本实施例中,由于筒身部111具有第二开口O2,因此当柱膜管12放置于固定管11内时,其管帽123可由第一开口O1沿着筒身部111的第二开口O2往下,一直到肩部1131为止,使得柱膜管12可设置于固定管11内而使柱膜管12的第一底部125与部分的直筒部121可从底部113的第四开口O4突出于固定管11,进而使柱膜管12的第一顶部122可与阶梯状结构1132连接。在不同的实施例中,如图6所示,若柱膜管12没有设置管帽123与连接部124的话,则筒身部111可不需具有第二开口O2。
本实施例的套管13具有一直筒部131、一第二底部132与一第二顶部133。直筒部131也沿第一方向D1延伸,且第二底部132与第二顶部133分别连接于直筒部131的相对两侧。其中,第二顶部133为环状,第二底部132也呈漏斗状,且其管径与柱膜管12的第一顶部122的管径对应设置,使得套管13与柱膜管12连接时,套管13的第二底部132可插设于柱膜管12的第一顶部122内,使检体可由套管13流向柱膜管12。此外,在本实施例中,当柱膜管12连接套管13并套设于固定管11内时,套管13的第二底部132的一部分由第一顶部122插设于柱膜管12,使柱膜管12的第一顶部122可套设于套管13的第二底部132的外侧后,再将其放置于固定管11内。而如图4A及图4B所示,第二底部132与直筒部131之间的夹角α的角度可以是大于157度(如图4A)至小于或等于180度(如图4B)。如此一来,可避免样本残留在夹角α处,进一步可提升核酸萃取组件1的萃取效率。此外,本实施例的套管13并不具有管帽,但是在一些实施例中,套管13也可具有一管帽(未绘示),以盖合于第二顶部133,并不限制。
膜片3设置于柱膜管12内部,并邻近第一底部125。在一些实施例中,膜片3例如但不限于为硅胶膜片(Silica Membrane),并带有正电,而检体经前一处理程序后,其内含有的核酸可带有负电,利用正负电相吸的特性可于离心时使核酸附着于膜片3上,再通过后续的程序将附着于膜片3上的核酸萃取出来。
承上,在本实施例的核酸萃取组件1中,通过管口部112远离筒身部111的一端具有往第二方向D2突出的突出部1121的设计,可使操作者容易拿取固定管11。另外,通过固定管11的底部113的肩部1131可卡住柱膜管12,使离心操作时检体不会由柱膜管12或套管13中洒出,增加操作时的成功率(若没有卡住,离心时柱膜管则有可能会脱落,检体会洒出而不会通过膜片3,离心操作将失败)。另外,通过固定管11的该些第一开口O1的设计,可将突出部1121区分成两段,借此,可让操作者于萃取时易于操作。例如方便将柱膜管12与套管13置放于固定管11内,也方便将柱膜管12与套管13由固定管11内取出。此外,由于套管13的容量较大,可容纳的检体量较大、但是膜片3的尺寸不放大,故通过核酸萃取组件1的结构设计,也可快速与方便由检体中萃取出较高产量及较高浓度的核酸。
请参照图7至图9所示,其中,图7与图8分别为本发明一实施例的离心组件2的分解示意图与组合示意图,而图9为图8的离心组件2沿直线B-B的剖视示意图。
本实施例的离心组件2包括一核酸萃取组件1、一离心管21与一管盖22。核酸萃取组件1的具体技术特征及其变化方式已于上述中详述,不再赘述。
在一些实施例中,离心管21的容量例如但不限于为50ml。在实施上,柱膜管12连接套管13并套设于固定管11以组成核酸萃取组件1后,可先将检体4加入套管13与柱膜管12,由于套管13的容量较大(例如10m以上),故可容纳较多的检体4,再将核酸萃取组件1放置于离心管21内,使固定管11的突出部1121顶抵在离心管21的管口211上,使得固定管11可架设于离心管21,再以管盖22盖合离心管21后(例如但不限于锁合),将离心组件2放置于离心机中,以通过离心作用使检体4通过膜片3,使检体4内含的核酸可被膜片3所吸附,进而由检体4中萃取出核酸。
在公知萃取核酸的技术中,并不使用套管13与固定管11。另外,柱膜管12的容量相当小,要萃取出一定含量的核酸时,则需通过多次操作才可,如此,将花费很多任务时与操作成本。若操作一次就要得到一定含量核酸的话,则必须加大柱膜管的尺寸(例如10ml以上),以容置较大量的检体,同时也要因应柱膜管的容量加大而使用较大尺寸的膜片。
然而,上述的这种方式有以下三种缺点:(1)、用较大尺寸的膜片回收相同量的核酸时,由于膜片较大,故核酸会较为分散结合于膜片上,使用溶液(例如纯水)冲提膜片时,较易未浸润完全而导致该部分核酸回收率降低。(2)、用较多的溶液冲提膜片时,也会稀释核酸的浓度,导致浓度太低则无法进行后续的侦测反应,如次世代定序(NGS)反应。(3)、为了使核酸带有呈负电,必需对检体进行前处理程序,由于前处理程序所使用的裂解溶液中带有高浓度的盐,因此,即使经洗涤液洗涤后,仍然会有小部分的盐留在膜片上,当膜片太大时会增加这些盐类的残留量,这些盐将会干扰后面的PCR(聚合连锁反应)的结果。
在本实施例的离心组件2中不需进行多次的操作,而且通过核酸萃取组件1的固定管11、柱膜管12与套管13的结构设计,不需加大柱膜管12的尺寸就可容量较大量的检体。另外,在液体活检中,核酸量都很少,且远低于膜片3的最大吸附量,故也不需加大膜片3,因此,只要一次操作就可得到较高产量的核酸,除了不会有上述的三种缺点外,而且也可用较少的溶液就可将核酸由膜片中冲提下来,相较于公知技术而言,只要一次的萃取操作就可故可萃取出较高产量与较高浓度的核酸。
特别说明的是,由于上述实施例是利用固定管11支撑柱膜管12,为了使后续的提取核酸过程更容易进行,可将柱膜管12由固定管11中取出,柱膜管12即可放在一般的(例如2ml)收集管(collection tube)中,再进行后续冲洗、干燥与冲提(Elution)等步骤。因此,使柱膜管12与固定管11可分离的设计让后续这三个步骤更为简便,也让检体4可以用较小体积的溶液冲提在例如1.5ml的离心管中,不仅可提高核酸的浓度,柱膜管12也更方便储存与日后取用。
综上所述,在本发明的核酸萃取组件的固定管与核酸萃取组件中,通过固定管的管口部远离筒身部的一端所具有的突出部的设计,让操作者可由离心管中易于拿取固定管。另外,通过固定管的底部的设计可使离心操作时,柱膜管不会与套管分离,检体不会由柱膜管中洒出,增加操作的成功率。此外,通过本发明核酸萃取组件中的固定管与柱膜管的结构设计,也可快速与方便由较大体积的检体中萃取出较高产量及较高浓度的核酸。
在本发明的一实施例中,通过固定管的第一开口的设计,可将突出部区分成两段,借此,也可让操作者于萃取的过程中易于操作。
以上所述仅为举例性,而非为限制性者。任何未脱离本发明的精神与范畴,而对其进行的等效修改或变更,均应包含于本发明的保护范围中。
Claims (6)
1.一种核酸萃取组件,其特征在于,所述核酸萃取组件包括:
一套管;
一柱膜管,其内包括一膜片;以及
一固定管,所述柱膜管连接该套管并套设于所述固定管,所述柱膜管的一部份突出于所述固定管,所述固定管的特征在于包括:
一筒身部,沿一第一方向延伸;
一管口部,其远离所述筒身部的一端具有一往第二方向突出的一突出部,所述第一方向与所述第二方向垂直;以及
一底部,其与所述管口部分别连接所述筒身部的相对两侧,所述底部具有一肩部,所述底部的所述肩部与所述柱膜管连接,其中所述管口部的相对两侧还分别具有一第一开口,所述第一开口将所述突出部区分成两段,所述底部还包括一阶梯状结构与一第四开口,所述阶梯状结构是从所述第四开口处沿所述第一方向延伸,所述阶梯状结构与所述柱膜管连接,且所述柱膜管由所述阶梯状结构突出于所述固定管,所述筒身部具有一第二开口,所述第二开口由其中一所述第一开口沿所述第一方向延伸至所述阶梯状结构;
其中所述柱膜管具有一第一顶部,所述固定管的所述肩部套设于所述柱膜管的所述第一顶部的外侧;
其中,离所述筒身部越远的所述阶梯状结构的管径越小。
2.如权利要求1所述的核酸萃取组件,其特征在于,其中所述固定管的所述突出部顶抵在一离心管的管口上。
3.如权利要求1所述的核酸萃取组件,其特征在于,其中所述筒身部的管径大于所述阶梯状结构的管径。
4.一种核酸萃取组件,其特征在于,所述核酸萃取组件包括:
一套管;
一柱膜管,其内包括一膜片;以及
一固定管,所述柱膜管连接该套管并套设于所述固定管,所述柱膜管的一部份突出于所述固定管,所述固定管的特征在于包括:
一筒身部,沿一第一方向延伸;
一管口部,其远离所述筒身部的一端具有一往第二方向突出的一突出部,所述第一方向与所述第二方向垂直;以及
一底部,其与所述管口部分别连接所述筒身部的相对两侧,所述底部具有一肩部,所述底部的所述肩部与所述柱膜管连接,其中所述管口部的相对两侧还分别具有一第一开口,所述第一开口将所述突出部区分成两段,所述底部还包括一阶梯状结构与一第四开口,所述阶梯状结构是从所述第四开口处沿所述第一方向延伸,所述阶梯状结构与所述柱膜管连接,且所述柱膜管由所述阶梯状结构突出于所述固定管,其中所述固定管具有一第三开口,所述第三开口由所述管口部沿所述第一方向延伸至所述阶梯状结构;
其中所述柱膜管具有一第一顶部,所述固定管的所述肩部套设于所述柱膜管的所述第一顶部的外侧;
其中,离所述筒身部越远的所述阶梯状结构的管径越小。
5.如权利要求4所述的核酸萃取组件,其特征在于,其中所述筒身部的管径大于所述阶梯状结构的管径。
6.如权利要求4所述的核酸萃取组件,其特征在于,其中,所述固定管的所述突出部顶抵在一离心管的管口上。
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