JP2011527345A

JP2011527345A - 新規な化合物、この化合物を含む医薬組成物、この化合物の使用方法、およびこの化合物の調製方法

Info

Publication number: JP2011527345A
Application number: JP2011517507A
Authority: JP
Inventors: クレイグエー．タウンゼンド，; フランシスクハイダ，; スーザンメドガールチ，
Original assignee: ファスジェン，インコーポレイテッド; ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティー
Priority date: 2008-07-07
Filing date: 2009-07-07
Publication date: 2011-10-27
Also published as: MX2011000051A; US20120083471A1; CA2729767A1; CN102395270B; EP2303013A1; WO2010005922A1; CN102395270A

Abstract

本発明は、式Ｉを含む新規な類型の化合物に関し、式中、ｎは０または１である。Ａは、ＮＲ^１、ＯまたはＳであり、ここで、Ｒ^１は、Ｈ、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルコキシ、アルケニル、アリール、アルキルアリールまたはアリールアルキルである。Ｘは、カルボキシレート残基、ホスホネート残基もしくはホスフェート残基、またはカルボキシレート残基、ホスホネート残基もしくはホスフェート残基で任意選択で置換されたＣ_１〜Ｃ_１０アルキル残基である。ＹおよびＺは、明細書中に記載のとおりである。

Description

優先権出願
本出願は、２００８年７月７日に出願された米国仮特許出願第６１／１２９，５７８号からの優先権を主張し、この出願は、本明細書に参考として援用される。

発明の分野
本発明は、新規な化合物、該化合物を含む医薬組成物、およびグリセロール３−リン酸アシルトランスフェラーゼ（ＧＰＡＴ）の活性をすることによるさまざまな治療上有益な用途、例えば限定されないが、肥満の処置のための使用方法に関する。

発明の背景
トリアシルグリセロール量の増加と関連している肥満および他の疾患の発生は、次第に、公衆の深刻な健康問題として認識されてきている。現在、世界保健機関によると、世界中で少なくとも４億人の成人が肥満であると推定されている。米国単独では、成人のほぼ３分の２が太り過ぎまたは肥満であると推定されている。種々の疾患、例えば、２型糖尿病、高血圧、心血管疾患、非アルコール性脂肪肝疾患、および一部の特定の型の癌が肥満と関連している。

有効で広く利用可能な抗肥満治療薬の必要性が明白であるにもかかわらず、米国で長期使用が承認されているかかる薬物は２つしかない。オルリスタットは、食事脂肪の吸収をブロックすることにより機能を果たし、シブトラミンは、中枢神経系に作用してエネルギー摂取量を減少させ、エネルギー使用量を増大させる。完全に無効ではないが、これらの薬物はいずれも、示される有効性が限定的であり、望ましくない副作用が生じる。

現在開発中の抗肥満薬は、中枢対象と末梢対象の両方を伴う多種多様な機構を利用するものである。トリグリセリドのデノボ合成を低減させるとともに貯蔵された脂肪の酸化を増大させることによる脂質代謝の改変は、末梢機構である。このアプローチは、化合物Ｃ７５、セルレニンおよびｈＧＨ_{（１７７−１９１）}で観察された体重減少効果に基づいたものであり、抗肥満薬の開発において高度に有益であり得る。

グリセロール３−リン酸アシルトランスフェラーゼ（ＧＰＡＴ）は、グリセロ脂質生合成の律速段階である、飽和長鎖アシル−ＣｏＡによるグリセロール３−リン酸のアシル化を触媒する。現在、４つのＧＰＡＴファミリー構成員：肝臓での大量のトリグリセリド合成を触媒するミトコンドリア内異性体である、ＧＰＡＴ１；トリグリセリドを合成するが、食事制限にあまり応答性でない第２のミトコンドリア内異性体である、ＧＰＡＴ２；小胞体に局在しており、脂肪細胞、小腸、腎臓および心臓における大量のトリグリセリド合成を担うＧＰＡＴ３；ならびに機能が完全に解明されていないミクロソーム内異性体であるＧＰＡＴ４が確認されている。グリセロール−３−リン酸アシルトランスフェラーゼ−１のミトコンドリア内異性体（ｍｔＧＰＡＴ）は、ｓｎ−グリセロール３−リン酸による長鎖アシル−ＣｏＡのエステル化を触媒し、リゾホスファチド酸（ＬＰＡ）を生成させる。この反応は、グリセロ脂質の生合成の第一の律速（ｃｏｍｍｉｔｔｅｄａｎｄｒａｔｅ−ｌｉｍｉｔｉｎｇ）段階を構成していると考えられる。この反応の推定される（ｐｕｒｐｏｒｔｅｄ）機構は、セリンプロテアーゼのものと類似しており、グリセロール３−リン酸では、３つの触媒性部分内のセリンが第１級ヒドロキシル基に置き換えられる。次に、ＬＰＡがさらにエステル化され、種々のリン脂質（例えば、動物脂肪の主成分であるトリアシルグリセロール（ＴＡＧ））の前駆物質であるホスファチジン酸が生成される。肥満に加え、血流中の高ＴＡＧレベルは、いくつかの疾患、特に、アテローム性動脈硬化および膵炎と関連している。

ｍｔＧＰＡＴ１は、パルミトイル−ＣｏＡ（１６：０）の組込みに対して強い優先性を示し、それにより、主に飽和リン脂質を生成させるが、他の２つの酵素は選択的ではないことが示されている。ＧＰＡＴの３つの異性体のうち、ｍｔＧＰＡＴ１だけが食事または運動の変化に影響される。高炭水化物の食事により過剰なカロリーが摂取された場合、ｍｔＧＰＡＴ１のｍＲＮＡの発現が増大し、より大きなｍｔＧＰＡＴ１活性がもたらされる。長時間の運動治療プログラムの後、１０時間静置させたマウスは、全く運動をさせず、トリアシルグリセロール（ＴＡＧ）合成の有意なオーバーシュートがもたらされたマウスと比べて、ｍｔＧＰＡＴ１活性の増大が見られたことが示されている。ＭｔＧＰＡＴ１欠損マウスでは、対照マウスよりも低い肝臓内ＴＡＧレベルが示され、分泌される超低密度リポタンパク質（ＶＬＤＬ）が少ない。対照的に、２．７倍高いｍｔＧＰＡＴ１活性を有するラット肝細胞では、ジアシルグリセロールのデノボ合成の有意な増加が示された。インビボでのｍｔＧＰＡＴ１の過剰発現により、既報の結果から予測されるように、マウス肝臓内に蓄積されたＴＡＧおよびジアシルグリセロール（ＤＡＧ）のレベルが正常レベルの１２倍および７倍に劇的に上昇した。存在する活性酵素の量に依存性である一定量のＴＡＧの生成に加え、ｍｔＧＰＡＴ１活性は、脂肪族アシルＣｏＡのβ−酸化またはグリセロ脂質合成への分配の制御に不可欠である。

ｍｔＧＰＡＴ１、およびβ−酸化の律速段階を触媒する酵素であるカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ−１（ＣＰＴ−１）はともに、ミトコンドリアの外側膜に局在している。これは、これらの酵素間に、脂肪族アシル−ＣｏＡ基質に対する競合が存在することを示唆する。ＡＭＰ活性化型プロテインキナーゼ（ＡＭＰＫ）は、リン酸化によるアセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）を不活化し、これらの酵素の両方を短期的に調節するようである。ＡＭＰＫによるＡＣＣの不活化により、ＣＰＴ−１のアロステリック抑制因子であるマロニル−ＣｏＡの構築が抑制され、β−酸化の増大がもたらされる。ＡＭＰＫはまた、ｍｔＧＰＡＴ１を阻害し、それにより、生成されるＴＡＧの量が減少する。この２つのプロセス間の関係はインビボで実証されている。ｍｔＧＰＡＴ１ノックアウトマウスに高脂肪、高糖分食事を与えて肥満を誘導させると、長鎖アシル−ＣｏＡ基質の分配がＴＡＧ合成経路からＣＰＴ−１およびβ−酸化の方に移行するため、酸化の増大がもたらされた。ラット肝細胞でのＭｔＧＰＡＴ１の過剰発現により、脂肪酸酸化の８０％の低減とともに、リン脂質生合成の増大がもたらされた。インビボでの過剰発現でも同様に、β−酸化の低減がもたらされた。

ｍｔＧＰＡＴ活性の低下によってＴＡＧレベルの低下ならびにβ−酸化量の増大がもたらされることを示す証拠により、この酵素を小分子で阻害することが、肥満、糖尿病、およびＴＡＧ合成の増大と関連している他の健康問題の処置に有効であり得ることが示唆される。したがって、ｍｔＧＰＡＴおよび他のＧＰＡＴ異性体を阻害し得る小分子の必要性が存在している。かかる化合物は、肥満の処置または体重減少の誘導に使用され得る。

発明の概要
本発明は、式Ｉ：

を含む新規な類型の化合物に関し、式中、ｎは、０または１のいずれかである。Ａは、ＮＲ^１、ＯおよびＳからなる群より選択され、ここで、Ｒ^１は、Ｈ、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルコキシ、アルケニル、アリール、アルキルアリールまたはアリールアルキルのいずれかである。Ｘは、カルボキシレート残基、ホスホネート残基、ホスフェート残基、またはＣ_１〜Ｃ_１０アルキル残基からなる群より選択され、該アルキル残基は任意選択で、１つ以上のカルボキシレート残基、ホスホネート残基またはホスフェート残基で置換されている。Ｙは、Ｃ_１〜Ｃ_２０アルキル、アルケニル、ハライド、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_２０アルコキシ、アリール、アルキルアリール、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニルまたは複素環からなる群より選択され、任意選択で、１つ以上の位置がハライドで置換されていてもよい。Ｚは、Ｈ、ヒドロキシル基、ハライド、アリール基、アルキルアリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基または複素環からなる群より選択される。Ｚがアリール基、アルキルアリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基または複素環である実施形態では、該環部分は、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル基、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルコキシ基、ヒドロキシル基、シアノ基、カルボキシレート基、ハライド、アリール基、アルキルアリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基または複素環から選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよい。

前述のことに基づき、本発明の１種類以上の化合物は、単独または別の活性成分との組合せのいずれかで、合成され得、本明細書において想定される投薬形態および投与経路、あるいは当該技術分野で知られた投薬形態および投与経路を用いて治療用組成物として投与され得る。さらに、投薬の様式および持続期間は、本明細書において示す要素および当業者によって通常考慮される要素に依存する。この目的を達成ため、治療有効量の決定は、特に、本明細書において提供する詳細な開示および実施例に鑑みると、充分当業者の能力の範囲内である。

図１は、本発明の化合物、特に、本明細書に開示した化合物５ａ〜５ｄの製造のための第１の反応スキームを示す。図２は、本発明の化合物、特に、本明細書に開示した化合物５ｅ〜５ｆの製造のための第２の反応スキームを示す。図３は、本発明の化合物、特に、本明細書に開示した化合物１３ａ〜１３ｆの製造のための第３の反応スキームを示す。図４は、本発明の化合物、特に、本明細書に開示した化合物１５ａ〜１５ｉの製造のための第４の反応スキームを示す。図５は、本発明の化合物、特に、本明細書に開示した化合物１７ａ〜１７ｆの製造のための第５の反応スキームを示す。図６は、本発明の化合物、特に、本明細書に開示した化合物２１ａ〜２１ｃの製造のための第６の反応スキームを示す。図７は、本発明の化合物、特に、本明細書に開示した化合物２４ａ〜２４ｆの製造のための第１の反応スキームを示す。図８は、本明細書に開示した化合物４ａ〜ｔの製造のための反応スキームを示す。図９は、化合物７ａ〜ｔの製造のための反応スキームを示す。図１０は、３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞におけるアシルグリセリド合成のＦＳＧ６７による阻害を示す。トリグリセリド合成の濃度依存性の低減は、対応する脂肪滴の蓄積の低減を示す培養細胞の位相差顕微鏡写真（×４００）に反映されている。図１１は、痩せ型およびＤＩＯマウスの短期ＦＳＧ６７処置により、味覚嫌悪学習（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄｔａｓｔｅａｖｅｒｓｉｏｎ）なしで体重が減少し、飼料消費量が減少したことを示す。体重および飼料摂取量は、痩せ型またはＤＩＯマウス（８匹／群）においてＦＳＧ６７の単回用量の２０ｍｇ／ｋｇｉｐ後に測定し、（ａ）ＦＳＧ６７処置痩せ型マウス（灰色バー）は３．７±０．９％（１．０±０．２ｇ）減少し、絶食マウスは１５．５±０．７％（３．９±０．２ｇ）減少した（黒バー）。処置マウスおよび絶食マウスではいずれも、体重の減少は、２．５±０．５％（０．６±０．１ｇ）増加したビヒクル対照マウス（白色バー）と比べて有意であった（ｐ＜０．０００１両側ｔ−検定）。（ｂ）ＦＳＧ６７処置により、飼料消費量がビヒクル対照の３３％に減少した（１．４±０．２ｇ，灰色バーに対して、４．２±０．２ｇ白色バー，ｐ＜０．０００１，両側ｔ−検定）。（ｃ）ＦＳＧ６７処置ＤＩＯマウス（灰色バー）は体重が４．３±０．５％（１．７±０．２ｇ）減少し、絶食マウス（黒バー）では５．３±０．４％（２．１±０．２ｇ）、ビヒクル対照（白色バー）では２．５±０．６％（１．０±０．２ｇ）減少した。ビヒクル対照と比較すると、体重減少は、ＦＳＧ６７処置（ｐ＝０．０２６，両側ｔ−検定）および絶食（ｐ＝０．００２，両側ｔ−検定）の両方のマウスで有意であり、（ｄ）ＦＳＧ６７により、飼料消費量がヒクル対照の４１．６％に減少した（０．５±０．１ｇ，灰色バーに対して、１．２±０．３ｇ，白色バー，ｐ＝０．０４３，両側ｔ−検定）。（ｅ）ＦＳＧ６７は、マウスにおいて味覚嫌悪学習を誘導しなかった。８匹の痩せ型マウスの群における２瓶選択パラダイムを用いたＣＴＡ試験において、５ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．１２）または２０ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．１０）で、サッカリン摂取量の有意な低減は得られなかった（両側ｔ−検定）。したがって、飼料摂取量に対するＦＳＧ６７の効果は、おそらく、疾病挙動の誘導ではなく、食欲に対する特異的効果であった。データはすべて、平均±ＳＥＭで表示している（＊，ｐ＜０．０５；＊＊，ｐ＜０．０１；＊＊＊，ｐ＜０．００１）。図１２は、ＤＩＯマウスの長期ＦＳＧ６７処置により、体重および飼料摂取量は可逆的に減少するが、脂肪酸の酸化は増強されることを示す。（ａ）ＤＩＯマウス（４匹／群）を、ＦＳＧ６７５ｍｇ／ｋｇｉｐ（赤）またはビヒクル対照（黒）で２０日間（黒矢印は処置の終了を示す）毎日処置し、次いで体重を回復させた。ＦＳＧ６７処置マウスは、処置中（第０日〜第１９日）に体重が１０．３±０．６％減少したのに対して、ビヒクル対照では４．０±０．５％増加した（ｐ＞０．０００１，二元配置ＡＮＯＶＡ解析）。ＦＳＧ６７による体重減少は、処置動物では可逆的であり第３２日目に元の体重に戻った。（ｂ）飼料消費量は、ＦＳＧ６７処置中（２．６±０．１ｇ／日）、ビヒクル対照と比べて（３．１±０．１ｇ／日）有意に低かった（ｐ＝０．０００８，二元配置ＡＮＯＶＡ）。第２０日目に処置を中止後、ＦＳＧ６７処置群では、飼料消費量が３．５±０．１ｇ／日に増加し、ビヒクル対照３．２±０．１ｇ／日と比べて飼料摂取量の有意な増加を示す（ｐ＝０．００６，二元配置ＡＮＯＶＡ）。（ｃ）カロリーメーター内での３日間の馴化後、８匹のＤＩＯマウス／群を、ＦＳＧ６７５ｍｇ／ｋｇｉｐ（赤）またはビヒクル対照（黒）で毎日１６日間、ＦＳＧ６７処置動物のペアフィード群（青）とともに処置した。体重は、ＦＳＧ６７処置動物では９．５±０．６％減少し、ペアフィードでは５．５±０．９％減少したが、ビヒクル対照では３．５±１．３％増加した。ＦＳＧ６７処置動物での体重減少は、ビヒクル対照およびペアフィード動物のどちらと比べても有意であった（ｐ＜０．０００１，二元配置ＡＮＯＶＡ）。（ｄ）ＦＳＧ６７処置（赤）により、１日の平均飼料消費量は、ビヒクル対照（黒）３．１±０．１ｇ／日と比べて３３％減少した（２．０±０．１ｇ／日）（ｐ＜０．０００１，二元配置ＡＮＯＶＡ）。（ｅ）ＦＳＧ６７処置により、平均ＶＯ２は、処置前の値の１０６．５±１．１％に増大した（赤線）のに対して、ペアフィード群（青線）では８９．９±１．１％に減少し（ｐ＜０．０００１二元配置ＡＮＯＶＡ）、エネルギー利用量の増大と整合した。（ｆ）対照的に、平均ＲＥＲは、ＦＳＧ６７処置ＤＩＯマウス（０．７３２±０．００２）（赤線）の方が、ペアフィード群（０．７８２±０．００６）（青線）と比べて低く（ｐ＜０．０００１，二元配置ＡＮＯＶＡ）、燃料の脂肪酸に対する依存性が高いことが示された。図１３は、薬理学的ＧＰＡＴ阻害により、ＤＩＯマウスにおいて脂肪過多が減少し、脂質生成遺伝子の発現が下方調節されたことを示す。（ａ）ＦＳＧ６７処置またはビヒクル対照動物１０匹／群のＱ−ＮＭＲ分析。ＦＳＧ６７処置動物（格子縞のバー）では、ビヒクル対照と比べて（白色バー）脂肪量の有意な低減（４．０ｇ）が示されたが、除脂肪量（ｌｅａｎ）および水分量は影響を受けなかった（ｐ＜０．０００１，両側ｔ−検定）。実験終了時、ビヒクル対照マウスはＦＳＧ６７対照よりも４．４ｇ体重が多かった（ｐ＝０．００１４，両側ｔ−検定）。（ｂ）ＦＳＧ６７処置（格子縞のバー）、ビヒクル対照（白色バー）、およびペアフィード（黒バー）ＤＩＯマウスにおける脂質生成遺伝子の発現のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ解析（図４ｃに示す実験による）。ＦＳＧ６７によりＡＣＣ１の発現が低減され（対照に対してｐ＝０．０００５，ペアフィードに対してｐ＝０．０００４）、ＦＡＳ（対照に対してｐ＝０．０００１，ペアフィードに対してｐ＝０．０００７）、ＰＰＡＲγ（対照に対してｐ＝０．０３２，ペアフィードに対してｐ＝０．００１９）、およびＧＰＡＴ（対照に対してｐ＝０．００３４，ペアフィードに対してｐ＝０．０００２）はすべて、白色脂肪組織において下方調節された。データは両側ｔ−検定により解析したものである（＊，ｐ＜０．０５；＊＊，ｐ＜０．０１；＊＊＊，ｐ＜０．００１）。図１４は、ＦＳＧ６７処置に関連する肝臓脂肪症および血清トリグリセリドおよびグルコースレベルの低減を示す。図４の１６日間の処置実験の（ａ）ビヒクル対照、（ｂ）ペアフィードおよび（ｃ）ＦＳＧ６７処置ＤＩＯマウス由来の肝臓のオイルレッドで染色した組織学的検査用切片。細胞質内の大小の脂肪滴の蓄積は、主に、ビヒクル対照（ａ）で顕著なことに注目のこと。ペアフィードでは脂肪症は低減され、一方、ＦＳＧ６７処置動物では、ほぼ完全な脂肪蓄積の改善が示された。（ｄ）同じ動物のビヒクル対照、ＦＳＧ６７処置およびペアフィードマウスの平均血清トリグリセリド、コレステロールおよびグルコースの測定値。ＦＳＧ６７処置動物では、血清グルコースレベル（１５３．３±１０．５ｍｇ／ｄＬ）が、ペアフィードマウス（１８９．０±２０．３ｍｇ／ｄＬ，ｐ＝０．０４７）およびビヒクル対照（２００．６±２２．２ｍｇ／ｄＬ，ｐ＝０．０３１二元配置ＡＮＯＶＡ）と比べて有意に低かった。このトリグリセリドレベルの低下は統計学的に有意ではなかった。コレステロールレベルは影響を受けなかった。データは、平均±ＳＥＭで表示している（＊，ｐ＜０．０５；＊＊，ｐ＜０．０１；＊＊＊，ｐ＜０．００１）。図１５は、脳室内（ｉｃｖ）ＦＳＧ６７処置に関連する飼料消費量と体重の低減を示す。（ａ）ＦＳＧ６７またはビヒクルを６匹の痩せ型マウスの群にｉｃｖ投与した。処置の１日後、マウスの体重は、１００（縦縞のバー）および３２０ｎｍｏｌ（格子縞のバー）の両方の用量で有意に減少した（ｐ＝０．０１６，ｐ＝０．０００３，両側ｔ−検定）。（ｂ）飼料摂取量の有意な低減は、３２０ｎｍｏｌ群（格子縞のバー）でのみ、みられた（ｐ＝０．００５，両側ｔ−検定）（＊，ｐ＜０．０５；＊＊，ｐ＜０．０１；＊＊＊，ｐ＜０．００１）。図１６は、短期および長期ＦＳＧ６７処置により、視床下部内神経ペプチドの発現が改変されたことを示す。（ａ）視床下部内神経ペプチドのリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ解析を、２０ｍｇ／ｋｇの単回用量のＦＳＧ６７（図３ａのもの）で処置した痩せ型マウスにおいて実施した。ＮＰＹは、ＦＳＧ６７処置群（灰色バー）では、絶食マウス（黒バー）（ｐ＝０．０１６）と比べて有意に少なく、一方、ＡＧＲＰ発現は、ビヒクル対照（白色バー）（ｐ＝０．０２）および絶食マウス（ｐ＝０．０００９）の両方と比べて低減されていた。ＰＯＭＣおよびＣＡＲＴの発現は影響を受けなかった。（ｂ）１６日間処置したＤＩＯマウス（図４ｃのもの）による同様の解析では、ＦＳＧ６７処置（ｐ＝０．００７４）およびペアフィード対照（ｐ＝０．００５７）の両方でＮＰＹ発現の低減が示された。ＡＧＲＰ、ＰＯＭＣおよびＣＡＲＴの発現は影響を受けなかった。データは両側ｔ−検定により解析したものである（＊，ｐ＜０．０５；＊＊，ｐ＜０．０１；＊＊＊，ｐ＜０．００１）。図１７は、ＤＩＯマウスにおけるＦＳＧ６７の用量応答を示す。ＤＩＯマウスの群を、表示した用量のＦＳＧ６７またはビヒクルで毎日ｉｐ処置した。５日間の過程で、５ｍｇ／ｋｇは、ビヒクル対照と比べて３．９％の有意な体重減少がもたらされた最小用量であった（ｐ＝０．００８，二元配置ＡＮＯＶＡ）（＊ｐ＜０．０５；＊＊，ｐ＜０．０１；＊＊＊，ｐ＜０．００１）。図１８は、Ｑ−ＮＭＲ分析のためのＤＩＯマウスのＦＳＧ６７処置を示す。ＦＳＧ６７（５ｍｇ／ｋｇ）で１０日間、毎日処置したＤＩＯマウス（１０匹／群）では、ビヒクル対照と比べて（１．１ｇ，２．４％）、体重が有意に減少した（６．１ｇ，１３．１％）（ｐ＜０．０００１，二元配置ＡＮＯＶＡ）。図１９は、ＦＳＧ６７処置により、肝臓およびＷＡＴにおいてＵＣＰ２発現が増大することを示す。肝臓および白色脂肪組織におけるＬＣＰＴ−１およびＵＣＰ２発現のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ発現解析。ＵＣＰ２発現は、ＦＳＧ６７で１６日間処置したＤＩＯマウスの（ａ）肝臓（対照に対してｐ＝０．０４３）および（ｂ）ＷＡＴ（ペアフィードに対してｐ＝０．０１３）において増大した（図４Ｃ参照）。Ｌ−ＣＰＴ−１発現は、ＦＳＧ６７処置またはペアフィードでは影響されなかった。データは両側ｔ−検定で解析した。ｐ＜０．０５；＊＊，ｐ＜０．０１；＊＊＊，ｐ＜０．００１。図２０は、ＦＳＧ６７処置により、肝臓内脂質生成遺伝子が下方調節されたことを示す。ＦＳＧ６７で１６日間処置したＤＩＯマウスの肝臓における脂質生成遺伝子の発現のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ発現解析（図１２Ｃ参照）。ＦＡＳ発現は、ビヒクルおよびペアフィード動物と比べて低減された（対照に対してｐ＝０．００１６，ペアフィードに対してｐ＝０．０１８）、一方、ＡＣＣ１は、ペアフィード動物と比べて低減された（ｐ＝０．０３７）。ＧＰＡＴ発現は影響されなかった。データは両側ｔ−検定で解析した。ｐ＜０．０５；＊＊，ｐ＜０．０１；＊＊＊，ｐ＜０．００１。

発明の詳細な説明
定義
本明細書で用いる場合、「アルキル基」は、１つ以上の炭素原子を有する直鎖の炭素鎖と分枝鎖の炭素鎖の両方を示すが、「プロピル」などの個々の原子団に対する言及は直鎖の原子団のみを包含し、「イソプロピル」などの分枝鎖異性体は、具体的に分枝鎖の原子団のみをいう。「置換アルキル」は、１個以上の水素が、本明細書において別途規定した１つ以上の置換基で置換されたアルキル基である。

本明細書で用いる場合、「アルコキシ基」は、式アルキル−Ｏ−の基をいい、該アルキルは本明細書において規定したものである。「置換アルコキシ」は、１個以上の水素が、本明細書において別途規定した置換基の１つ以上で置換されたアルコキシ基である。

本明細書で用いる場合、「アルケニル」は、アルキル鎖から１個以上の水素原子を、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含むように除去することによって誘導される部分不飽和アルキル原子団をいう。

本明細書で用いる場合、「アリール基」は、６個の炭素原子を含む芳香族環から誘導される構造を示す。例としては、限定されないが、フェニルまたはベンジル原子団およびその誘導体が挙げられる。

本明細書で用いる場合、「アリールアルキル」は、結合点でない１つ以上のアルキル基を有するアリール基を示す。

本明細書で用いる場合、「アルキルアリール」は結合点にアルキル基を有するアリール基を示す。

本明細書で用いる場合（Ａｕｓｅｄｈｅｒｅｉｎ）、「カルボキシレート」は、原子団−ＣＯＯＲを含む有機酸の塩またはエステルを示し、式中、Ｒは、限定されないが、Ｈ、アルキル基、アルケニル基、あるいは当該技術分野で知られた任意の他の残基であり得る。

本明細書で用いる場合、「カルボン酸」は下記の構造：−ＣＯＯＨまたは−ＣＯ_２Ｈを含む有機官能基を示す。

本明細書で用いる場合、「シアノ」は下記の構造：−Ｃ≡Ｎを含む有機官能基を示す。

本明細書で用いる場合、「シクロアルキル」は、環構造内に含まれる原子が全部炭素である一価または多環式の飽和または部分不飽和の環状非芳香族基をいい、本明細書において規定した１つ以上の置換基で置換されていてもよい。一部の特定の非限定的な実施形態において、シクロアルキル基を構成する炭素の数は３〜７個であり得る。

本明細書で用いる場合、「シクロアルケニル」は、シクロアルキル環系から１個以上の水素原子を、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含むように除去することによって誘導される部分不飽和シクロアルキル原子団をいう。

本明細書で用いる場合、「ハロゲン」または「ハライド」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子の任意の１つ以上を示す。

本明細書で用いる場合、「複素環式」は、少なくとも１個のヘテロ原子を含む（一部の特定の実施形態ではヘテロ原子が１〜４個であり、ヘテロ原子は、限定されないが、以下：窒素、酸素、イオウ、リン、ホウ素、塩素、臭素またはヨウ素の１つ以上であり得る）一価の飽和または部分不飽和の環状の芳香族または非芳香族炭素環基をいう。さらなる非限定的な実施形態では、複素（ｈｅｔｅｒｃｙｃｌｉｃ）環は、１〜１０個の炭素原子で構成され得る。

本明細書で用いる場合、「ヒドロキシル」は、下記の構造：−ＯＨを含む有機官能基（ｇｒｏｕｏｐ）を示す。

本明細書で用いる場合、「ホスホネート（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）」は、下記の構造：−ＰＯ_３Ｈ_２または−ＰＯ（ＯＨ）_２を含む有機官能基を示す。

本明細書で用いる場合、「ホスフェート（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ）」は、下記の構造：−ＯＰＯ_３Ｈ_２または−ＯＰＯ（ＯＨ）_２を含む有機官能基を示す。

本発明は、新規な化合物、該化合物を含む医薬組成物、およびグリセロール３−リン酸アシルトランスフェラーゼ（ＧＰＡＴ）の酵素活性を阻害することによる使用方法に関する。かかる化合物、組成物および方法は、さまざまな治療上有益な用途（例えば、限定されないが肥満の処置）を有する。この類型の本発明の化合物は、式Ｉ：

で構成され、式中、ｎは、０または１のいずれかである。Ａは、ＮＲ^１、ＯおよびＳからなる群より選択され、ここで、Ｒ^１は、Ｈ、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルコキシ、アルケニル、アリール、アルキルアリールまたはアリールアルキルのいずれかである。Ｘは、カルボキシレート残基、ホスホネート残基、ホスフェート残基、またはＣ_１〜Ｃ_１０アルキル残基からなる群より選択され、該アルキル残基は任意選択で、１つ以上のカルボキシレート残基、ホスホネート残基、またはホスフェート残基で置換されている。Ｙは、Ｃ_１〜Ｃ_２０アルキル、アルケニル、ハライド、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_２０アルコキシ、アリール、アルキルアリール、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニルまたは複素環からなる群より選択される。ＹがＣ_１〜Ｃ_２０アルキル、アルケニル、Ｃ_１〜Ｃ_２０アルコキシ、アリール、アルキルアリール、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニルまたは複素環である実施形態において、これは、１つ以上の位置がハライドで任意選択で置換されている。Ｚは、Ｈ、ヒドロキシル基、ハライド、アリール基、アルキルアリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基または複素環からなる群より選択される。Ｚがアリール基、アルキルアリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基または複素環である実施形態において、該環部分は、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル基、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルコキシ基、ヒドロキシル基、シアノ基、カルボキシレート基、ハライド、アリール基、アルキルアリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基または複素環から選択される１つ以上の置換基で置換されていてもよい。

一部の特定の実施形態では、Ｘが、カルボン酸残基またはホスホネート残基のいずれかで構成される。代替実施形態では、Ｘは、１つ以上の位置がホスホネート残基またはカルボキシレートのいずれかで置換されたＣ_１〜Ｃ_１０アルキル基を含むものであり得る。さらなる実施形態において、該アルキル基は１〜３個の炭素を含むものであり得る。前述の任意のものにおいて、Ｘは、フェニル環上に、スルホニルリンカーに対してオルト位、メタ位またはパラ位のいずれかに配置され得る。以下に示すように、一部の特定の非限定的な実施形態では、Ｘは、オルト位またはメタ位のいずれかを占める。

さらなる非限定的な実施形態では、Ｙが、ＣＨ_３、Ｃ_５Ｈ_１１、Ｃ_８Ｈ_１７、Ｃ_９Ｈ_１９、Ｃ_１４Ｈ_２９、およびＣ_１６Ｈ_３３のいずれかであり得るＣ_１〜Ｃ_２０アルキル基で構成される。あるいはまた、Ｙは、任意選択で１個以上のハロゲン原子で置換されたアリール環系で構成され得る。またさらなる代替実施形態では、Ｙは、アルキル部分がアリール環のＹの位置で連結されたアルキルアリール残基で構成される。該アルキル鎖は１〜３個の炭素原子を有するものであり得、一部の特定の実施形態では、１個または２個の炭素原子を有する。この後者の実施形態でのアリール残基は、１個以上のハロゲン原子で置換されていてもよい。

またさらなる非限定的な実施形態において、Ｚは、水素原子、ヒドロキシル基、ハロゲン原子、任意選択で置換されたアリール基または任意選択で置換された複素環のいずれかである。前述の任意のものにおいて、Ｚは、フェニル環上に、スルホニルリンカーに対してオルト位、メタ位またはパラ位のいずれかに配置され得る。以下に示すように、一部の特定の非限定的な実施形態では、Ｚは、フェニル環のスルホニルリンカーに対してメタ位またはパラ位のいずれかを占める。またさらなる実施形態において、Ｚは、スルホニルリンカーとＸの位置の両方に対してメタ位またはパラ位のいずれかを占める。

前述のことに基づき、本発明の化合物の一例はＣ−６７またはＦＳＧ６７であり、下記の構造：

で構成される。

別の実施形態において、本発明の化合物は、
下記の構造：

で構成され得る。

またさらなる実施形態において、本発明の化合物は、以下：

の１つ以上で構成され得る。

前述のことに基づき、式Ｉの一部の特定の非限定的な実施形態では、Ａが、ＮＲ^１（式中、Ｒ^１は上記規定の実施形態のいずれかである）で構成される。さらなる実施形態では、Ｒ^１は水素原子である。この目的のため、本発明の化合物の一部の特定の実施形態は、式ＩＩ：

（式中、ｎ、Ｘ、ＹおよびＺは各々、上記規定のいずれかの実施形態である）
で表されるものであり得る。

式Ｉの代替実施形態では、ｎが０で構成される。この目的のため、本発明の一部の特定の化合物は、式ＩＩＩ：

（式中、Ａ、Ｘ、ＹおよびＺは各々、上記規定のいずれかの実施形態である）
で表されるものであり得る。

式Ｉのまたさらなる実施形態では、Ｘが、フェニル環のスルホニルリンカーに対してオルト位、メタ位またはパラ位のいずれかのカルボン酸残基で構成される。したがって、本発明の一部の特定の化合物は、式ＩＶａ：

（式中、ｎ、Ａ、ＹおよびＺは各々、上記規定のいずれかの実施形態である）
で表されるものであり得る。

カルボン酸残基は、スルホニルリンカーに対してオルト位、メタ位またはパラ位のどの位置を占めていてもよいが、一部の特定の実施形態ではオルト位を占めている。この目的のため、本発明の一部の特定の化合物は、式ＩＶｂ：

同様に、Ｚはオルト位、メタ位またはパラ位のどの位置を占めていてもよいが、本発明の一部の特定の化合物では、Ｚは、以下の式ＩＶｃおよびＩＶｄ：

（式中、ｎ、Ａ、ＹおよびＺは各々、上記規定のいずれかの実施形態である）
に示すように、スルホニルリンカーとＸの両方に対してメタ位またはパラ位のいずれかを占めている。

前述のことに基づき、本発明の式ＩＶｃ〜ｄの化合物の構造は、以下：

の１つ以上で構成され得る。

式Ｉのさらなる実施形態では、Ｘが、ホスフェート基または１〜３個の炭素原子のいずれかを有するアルキル残基で構成され、ホスホネート基で置換されている。かかる本発明の化合物は、式Ｖ：

（式中、ｍは、０、１、２または３のいずれかで構成され、ｎ、Ａ、ＹおよびＺは各々、上記規定のいずれかの実施形態である）
で表されるものであり得る。

したがって、本発明の化合物は、以下：

の１つ以上で構成され得る。

前述の化合物の考えられ得る使用範囲が制限されることを望まないが、想定される臨床的治療適応症としては、限定されないが、肥満の処置または体重減少の誘導が挙げられる。本発明の１種類以上の小分子またはその医薬用の塩は、ＧＰＡＴ活性（特に、ｍｔＧＰＡＴ活性）の標的化および／または脂肪酸酸化の刺激によって肥満を処置および／または予防するために使用される組成物として合成および投与され得る。本発明の化合物は、当該技術分野で知られた方法を用いて、または本明細書において別の個所に具体的に示したようにして合成され得る。

特に記載のない限り、本発明の具体的な化合物に対する言及は、該化合物のあらゆる異性体形態を包含し、そのジアステレオマー、互変異性体、エナンチオマー、ラセミおよび／または他の混合物をすべて包含する。また、特に記載のない限り、具体的な化合物に対する言及は、そのイオン形態、塩、溶媒和物（例えば、水和物）、保護型形態、およびプロドラッグを包含する。この目的のため、該活性化合物の対応する塩（例えば、薬学的に許容され得る塩）を調製し、精製し、および／または取り扱うことが簡便であるか、または望ましい場合がある。薬学的に許容され得る塩の例は、Ｂｅｒｇｅら，１９７７，“ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙＡｃｃｅｐｔａｂｌｅＳａｌｔｓ，”Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．，第６６巻，第１〜１９頁に論考されており、その内容は、引用により本明細書に組み込まれる。

前述のことに基づき、本発明の１種類以上の化合物は、単独または別の活性成分との組合せのいずれかで、合成され得、治療用組成物として投与され得る。本発明の組成物は、ヒトおよび他の動物への投与用として、単位投薬形態、例えば、適当な量の該化合物を含む錠剤、カプセル剤、丸剤、粉末剤、顆粒剤、滅菌非経口液剤または懸濁剤、経口液剤または懸濁剤、水中油型および油中水型乳剤、坐剤ならびに液状の懸濁剤または液剤などで提示され得る。この目的のため、医薬組成物は、選択される投与経路に適合するように製剤化され得、投与経路に特定される成分が含有され得る。かかる医薬組成物の投与経路は、通常、一般的な５つの群：吸入、経口、経皮、非経口および坐剤に分けられる。一実施形態において、本発明の医薬組成物は、静脈内、皮内、筋肉内、髄腔内または皮下注射などの注射による非経口投与に適したものであり得る。あるいはまた、本発明の組成物は、本明細書に示したような、あるいは当該技術分野で知られたような経口投与のために製剤化され得る。

本明細書で用いる場合、用語「医薬用希釈剤」と「医薬用担体」は同じ意味を有する。経口投与のためには、固形または液状いずれかの単位投薬形態が調製され得る。錠剤などの固形組成物の調製では、該化合物は、慣用的な成分、例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、ケイ酸アルミニウムマグネシウム、硫酸カルシウム、デンプン、ラクトース、アカシア、メチルセルロースなど、および医薬用希釈剤または担体として機能的に同様の物質と混合され得る。カプセル剤は、該化合物を不活性な医薬用希釈剤と混合し、この混合物を、適切な大きさの硬質ゼラチンカプセル内に充填することにより作製される。軟質ゼラチンカプセル剤は、該化合物のスラリーを、許容され得る植物油、軽流動ワセリンまたは他の不活性な油類とともに、機械によってカプセル封入することにより作製される。

シロップ剤、エリキシル剤および懸濁剤などの液状の単位投薬形態または経口投与も調製され得る。この形態は、水性ビヒクル中に糖類または別の甘味料、芳香フレーバー剤および保存料と一緒に溶解させてシロップ剤を形成したものであり得る。懸濁剤は、アカシア、トラガカント、メチルセルロースなどの懸濁化剤の補助を伴って、水性ビヒクルを用いて調製され得る。

非経口投与のためには、液状単位投薬形態は、該化合物と滅菌ビヒクルを用いて調製され得る。液剤の調製では、該化合物は、注射用水に溶解させ、濾過滅菌された後、適当なバイアルまたはアンプル内に充填され、密封され得る。局所麻酔剤、保存料および緩衝剤などの佐剤をビヒクルに溶解させてもよい。バイアル内に充填後、該組成物を凍結させてもよく、水分を真空下で除去してもよい。次いで、この凍結乾燥粉末は、バイアル内に密封され、使用前に再構成され得る。

用量および治療期間は、さまざまな要素、例えば、（１）患者の年齢、体重ならびに器官機能（例えば、肝機能および腎機能）；（２）処置対象の疾患の経過の性質および程度、ならびに既存の深刻な併発疾患状態および摂取している併用薬、ならびに（３）薬物関連パラメータ、例えば、投与経路、治癒がもたらされるのに必要な投与の頻度および期間、ならびに当該薬物の治療指数などに依存する。一般に、用量は、ほぼ１ｇｇ／ｍｌ〜１０μｇ／ｍｌの標的部位での有効濃度が得られることを目標とした１ｎｇ／ｍｌ〜１００ｎｇ／ｍｌの血清レベルが達成されるように選択される。このような要素を使用し、治療有効量は、対象の症状が改善および／または肥満もしくは肥満関連疾患が処置もしくは予防されるように投与され得る。治療有効量の決定は、特に、本明細書において提供する詳細な開示および実施例に鑑みると、充分当業者の能力の範囲内である。

実施例
実施例１−化合物５ａ〜５ｄの化学合成
化合物５ａ〜５ｄの合成は、本明細書の図１に示すスキーム１を用いて行なった。

反応条件：（ａ）ＮＢＳ，ｈν，ＣＨ_３ＣＮ；（ｂ）ＮａＮ_３，ＥｔＯＨ，還流；（ｄ）Ｃ_９Ｈ_１９ＳＯ_２ＣｌまたはＣ_５Ｈ_１１ＳＯ_２Ｃｌ，ピリジン，ＣＨ_２Ｃｌ_２，０℃〜室温；（ｅ）Ｋ^＋Ｏ⁻ｔ−Ｂｕ，Ｅｔ_２Ｏ，Ｈ_２Ｏ，０℃〜室温
第１の化合物群は、種々に置換されたメチル安息香酸メチルから誘導した。メタ−およびパラ−アミンは、文献のプロトコルに従うことにより作製した（Ｏｋａｄａ，Ｙ．ら，Ｂｒｏｍｉｎａｔｉｏｎｂｙｍｅａｎｓｏｆｓｏｄｉｕｍｍｏｎｏｂｒｏｍｏｉｓｏｃｙａｎｕｒａｔｅ（ＳＭＢＩ）。Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌｅｃ．Ｃｈｅｍ．２００３，１，２５０６−２５１１）。ＮＢＳ含有ＣＨ_３ＣＮでのメチル基のラジカル臭素化後、臭化物を、ＮａＮ_３含有ＥｔＯＨで還流することにより置換させた。シュタウディンガー条件下、アジドを遊離アミン３に環元し、次いで、これを、１−ペンタン−または１−ノナンスルホニルクロリド（既報（Ｂｌｏｔｎｙ，Ｇ．，Ａｎｅｗ，ｍｉｌｄｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｓｕｌｆｏｎｙｌｃｈｌｏｒｉｄｅｓ，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．２００３，４４，１４９９−１５０１）のようにして調製）にカップリングさせ得る。最後に、メチルエステル４を、水の存在下、カリウムｔ−ブトキシド（Ｅｔ_２Ｏ中）との反応によってカルボキシレート生成物５に変換させた。

４ａ〜ｄの一般手順．適切なアミン３ａ〜ｃ（１．２ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（４ｍＬ）攪拌溶液に、０℃で塩化スルホニル（１．３ｍｍｏｌ）を滴下した後、Ｅｔ_３Ｎ（１．３ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温まで昇温させ、その時点で、これを２〜３時間攪拌した。飽和ＮＨ_４Ｃｌ溶液を添加して反応液をクエンチし、混合物を３×１０ｍＬのＣＨ_２Ｃｌ_２で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、真空濃縮し、生成物をフラッシュクロマトグラフィー（２０％ＥｔＯＡｃ含有ヘキサン）によって精製した。

５ａ〜ｄの一般手順．０℃まで冷却したカリウムｔ−ブトキシド（５．８８ｍｍｏｌ）のＥｔ_２Ｏ（１５ｍＬ）攪拌懸濁液に水（１．４ｍｍｏｌ）を、シリンジによって添加した。このスラリーを５分間攪拌し、４ａ〜ｄ（０．６７ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を、出発物質が消失するまで（ＴＬＣ分析（２０％ＥｔＯＡｃ含有ヘキサン）による）室温で攪拌した。透明な２つの層が形成されるまで氷水を添加した。水層を分離し、１ＭＨＣｌで酸性化した。次いで、生成物をＥｔ_２Ｏ（３×２０ｍＬ）で抽出し、真空にてエバポレートし、５ａ〜ｄを得た。

４−（ペンチルスルホンアミドメチル）安息香酸５ａ．ｍｐ＝１８８〜１８９℃；

４−（ノニルスルホンアミドメチル）安息香酸５ｂ．ｍｐ＝１７８〜１８０℃；

３−（ペンチルスルホンアミドメチル）安息香酸５ｃ．ｍｐ＝１６０〜１６１℃；

３−（ノニルスルホンアミドメチル）安息香酸５ｄ．ｍｐ＝１５０〜１５１℃；

実施例２−化合物５ｅおよび５ｆの合成
化合物５ｅ〜５ｆの合成は、本明細書の図２に示すスキーム２を用いて行なった。

反応条件：（ａ）ＮＨ_３，ＭｅＯＨ，還流；（ｂ）ＮａＨ，ＲＳＯ_２Ｃｌ，ＤＭＦ，０℃〜室温；（ｃ）ＮａＯＨ，ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ，０℃〜室温
オルト置換カルボキシレートには、メタ−およびパラ−化合物とは異なるアプローチが必要であった。インドリノン６（オルトブロミドとアンモニアガス（ＭｅＯＨ中）との反応にて形成（Ｋｏｖｔｕｎｅｎｋｏ，Ｖ．Ａ．ら；Ｃｏｎｄｅｎｓａｔｉｏｎｏｆｏ−（ｂｒｏｍｏｍｅｔｈｙｌ）ｂｅｎｚｏｉｃａｃｉｄｗｉｔｈａｍｉｎｅｓ，ＵｋｒａｉｎｓｋｉｉＫｈｉｍｉｃｈｅｓｋｉｉＺｈｕｒｎａｌ１９８３，４９，１０９９−１１０３））は、ＮａＨ（ＤＭＦ中）によってアルカンスルホニルクロリドにカップリングされ、生成されたγ−ラクタム結合はＮａＯＨ（ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ中）によって容易に切断され、カルボン酸５ｅおよび５ｆが生成された。

７ａ〜ｂの一般手順．１．５ｍｍｏｌの６をＤＭＦ（８ｍＬ）に添加し、溶液を０℃まで冷却した。ＮａＨ（１．６５ｍｍｏｌ）を添加した後、塩化スルホニル（１．８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を攪拌し、室温まで昇温させた。反応の進行をＴＬＣ（２５％ＭｅＯＨ含有ＣＨＣｌ_３）によってモニタリングした。終了時、飽和塩化アンモニウム溶液を添加し（８０ｍＬ）、生成物をＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、真空にてエバポレートした。生成物をフラッシュクロマトグラフィー（２％ＭｅＯＨ含有ＣＨＣｌ_３）によって精製した。

５ｅ〜ｆの一般手順．７ａ〜ｂ（０．６６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３ｍＬ）に溶解させ、溶液を０℃まで冷却した。次いで、１ＭＮａＯＨ（１ｍＬ，１０当量）を添加し、溶液を攪拌し、室温まで昇温させた。反応の進行をＴＬＣ（１：１ＥｔＯＡｃ：ヘキサン）によってモニタリングした。出発物質が完全に反応したら、飽和ＮａＨＣＯ_３（３０ｍＬ）を添加し、溶液をＥｔＯＡｃで洗浄した。水相を１ＭＨＣｌでｐＨ３に酸性化し、生成物をＥｔＯＡｃで抽出し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、真空にてエバポレートした。

２−（ペンチルスルホンアミドメチル）安息香酸５ｅ．ｍｐ＝１００℃；

２−（ノニルスルホンアミドメチル）安息香酸５ｆ．ｍｐ＝７９〜８２℃；

実施例３−化合物１３ａ〜１３ｆの合成
化合物１３ａ〜１３ｆの合成は、本明細書の図３に示すスキーム３を用いて行なった。

反応条件：（ａ）ＮＢＳ，ｈν，ＣＨ_３ＣＮ；（ｂ）Ｐ（ＯＥｔ）_３，還流；（ｃ）Ｈ_２ＳＯ_４，ＥｔＯＨ，還流；（ｄ）Ｃ_９Ｈ_１９ＳＯ_２ＣｌまたはＣ_５Ｈ_１１ＳＯ_２Ｃｌ，ピリジン，ＣＨ_３ＣＮ，０℃〜室温；（ｅ）ＴＭＳＢｒ，ＣＨ_２Ｃｌ_２，室温．。

ホスホン酸アルキル１３ａ〜ｆの合成は、出発物質のトルイジンをビス−アシル化アニリン８として保護することから開始した（Ｂｒｏｗｎ，Ｊ．Ｊ．；Ｂｒｏｗｎ，Ｒ．Ｋ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｏ−ａｎｄｐ−ａｃｅｔａｍｉｄｏｂｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅｓ，Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．１９５５，３３，１８１９−１８２３）。ＮＢＳ（ＣＨ_３ＣＮ中）でのフリーラジカル臭素化により臭化ベンジル９を得、これを、亜リン酸トリエチルとのアルブーゾフ反応によってホスホネート１０に変換させた。アニリンを、還流させた酸性ＥｔＯＨ溶液に曝露することによって脱マスキング（ｕｎｍａｓｋ）した。アミンとアルカンスルホニルクロリドとのカップリングによりスルホンアミド１２を得た後、ホスホン酸部分を、ＴＭＳＢｒ（ＣＨ_２Ｃｌ_２中）での処置、続いてメタノール分解によって露出させた。

９ａ〜ｃの一般手順．８ａ〜ｃ（３１．３ｍｍｏｌ）をＣＨ_３ＣＮ（１５０ｍＬ）に溶解させ、ＮＢＳ（３１．３ｍｍｏｌ）を添加した。次いで、この溶液を２７５Ｗの太陽灯で還流加熱した。反応の進行をＴＬＣ（３０％ＥｔＯＡｃ含有ヘキサン）によってモニタリングした。次いで、この溶液を冷却し、真空にてエバポレートし、混合物をフラッシュクロマトグラフィー（３０％ＥｔＯＡｃ含有ヘキサン）によって精製した。

１０ａ〜ｃの一般手順．９ａ〜ｃ（２２．２ｍｍｏｌ）をＰ（ＯＥｔ）_３（２５ｍＬ，６．６当量）に溶解させ、５０℃まで加熱した還流冷却器により、溶液を１８時間還流加熱した。反応の進行をＴＬＣ（３０％ＥｔＯＡｃ含有ヘキサン）によってモニタリングした。次いで、反応混合物を冷却し、Ｐ（ＯＥｔ）_３を真空除去した。次いで、生成物をフラッシュクロマトグラフィー（２％ＭｅＯＨ含有ＣＨＣｌ_３）によって精製した。

１１ａ〜ｃの一般手順．濃Ｈ_２ＳＯ_４（３ｍＬ）を、１０ａ〜ｃ（９．７ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（６０ｍＬ）攪拌溶液に添加した。この溶液を１８時間還流加熱した。反応の進行をＴＬＣ（５％ＭｅＯＨ含有ＣＨＣｌ_３）によってモニタリングした。溶液を水（１００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（３０ｍＬ）で洗浄し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液で水相をｐＨ９にした。生成物をＥｔＯＡｃ（３×３０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、溶媒を真空除去した。

１２ａ〜ｂの一般手順．１１ａ（１．３６ｍｍｏｌ）をＣＨ_３ＣＮ（３．３ｍＬ）に溶解させ、次いで、ピリジン（１０．８ｍｍｏｌ）を添加した。この溶液を０℃まで冷却し、塩化スルホニル（１．６３ｍｍｏｌ）をシリンジによってゆっくりと添加した。溶液を室温まで昇温させた。反応の進行をＴＬＣ（５％ＭｅＯＨ含有ＣＨＣｌ_３）によってモニタリングした。終了時、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液を添加することにより反応液をクエンチした。生成物をＥｔＯＡｃ（３×５ｍＬ）で抽出し、１ＮＨＣｌで洗浄し、合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、真空濃縮した。生成物をフラッシュクロマトグラフィー（２％ＭｅＯＨ含有ＣＨＣｌ_３）によって精製した。

１２ｃ〜ｆの一般手順．塩化スルホニル（４．９ｍｍｏｌ）を、１１ｂ〜ｃ（３．３ｍｍｏｌ）のＣＨ_３ＣＮ（１３ｍＬ）溶液に０℃で滴下した。Ｅｔ_３Ｎ（３．６３ｍｍｏｌ）を滴下し、溶液を攪拌し、室温まで昇温させた。反応の進行をＴＬＣ（１０％ＭｅＯＨ含有ＣＨＣｌ_３）によってモニタリングした。終了時（約２時間）、飽和重炭酸ナトリウム溶液を添加することにより反応液をクエンチした。生成物をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、真空濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（２％ＭｅＯＨ含有ＣＨＣｌ_３）により生成物を得た。

１３ａ〜ｆの一般手順．ＴＭＳＢｒ（８．６ｍｍｏｌ）を、１２ａ〜ｆ（０．２７７ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）溶液に添加し、この溶液を室温で攪拌した。２４時間後、ＭｅＯＨ（３×１．６ｍＬ）を添加することにより反応液をクエンチした。溶液を真空濃縮し、飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（１０ｍＬ）に溶解させた。この溶液をＥｔ_２Ｏ（５ｍＬ）で洗浄し、次いで１ＮＨＣｌで酸性化した。生成物をＥｔ_２Ｏ（３×５ｍＬ）で抽出し、合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、真空乾燥させた。

２−（ペンチルスルホンアミド）ベンジルホスホン酸１３ａ．

２−（ノニルスルホンアミド）ベンジルホスホン酸１３ｂ．ｍｐ＝１０４〜１０６℃；

３−（ペンチルスルホンアミド）ベンジルホスホン酸１３ｃ．ｍｐ＝１２７〜１２８℃；

３−（ノニルスルホンアミド）ベンジルホスホン酸１３ｄ．ｍｐ＝１４９〜１５０℃；

４−（ペンチルスルホンアミド）ベンジルホスホン酸１３ｅ．ｍｐ＝１９８〜２００℃；

４−（ノニルスルホンアミド）ベンジルホスホン酸１３ｆ．ｍｐ＝２０１〜２０３℃；

実施例４−化合物１５ａ〜１５ｉの合成
化合物１５ａ〜１５ｉの合成は、本明細書の図４に示すスキーム４を用いて行なった。

反応条件：（ａ）ＲＳＯ_２Ｃｌ，ピリジン，ＣＨ_２Ｃｌ_２，０℃〜室温；（ｂ）Ｋ^＋Ｏ⁻ｔ−Ｂｕ，Ｅｔ_２Ｏ，Ｈ_２Ｏ，０℃〜室温
化合物１５ａ〜ｉは、市販の出発材料アニリンをさまざまな塩化スルホニルとカップリングさせることにより合成した。次いで、得られたスルホンアミド１４ａ〜ｉを、カリウムｔ−ブトキシドと水（エーテル中）での加水分解によって最終生成物に変換させた。アシル−ＣｏＡ基質のＣｏＡ部分を模倣させる試みにおいて、芳香族塩化スルホニルとともに、アルキル鎖に対して飽和Ｃ_９鎖を使用した。

１４ａ〜ｉの一般手順．出発物質アニリン（３．３ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１２ｍＬ）攪拌溶液に、０℃でピリジン（７．５当量）を添加した。次いで、塩化スルホニル（１．２当量）を、シリンジによってゆっくりと添加した。溶液を攪拌し、室温まで昇温させた。反応の進行をＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ含有ヘキサン）によってモニタリングした。終了時、反応液を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（４５ｍＬ）に注入し、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３×１５ｍＬ）で抽出し、１ＭＨＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機相を真空濃縮し、ＥｔＯＡｃ／ヘキサンからの再結晶によって１４ａ〜ｉを得た。

１５ａ〜ｉの一般手順．０℃まで冷却したカリウムｔ−ブトキシド（５．８８ｍｍｏｌ）のＥｔ_２Ｏ（１５ｍＬ）攪拌懸濁液に、シリンジによって水（１．４ｍｍｏｌ）を添加した。このスラリーを５分間攪拌し、１４ａ〜ｉ（０．６７ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を、出発物質が消失するまで（ＴＬＣ分析（２０％ＥｔＯＡｃ含有ヘキサン）による）室温で攪拌した。透明な２つの層が形成されるまで氷水を添加した。水層を分離し、１ＭＨＣｌで酸性化した。次いで、生成物をＥｔ_２Ｏ（３×２０ｍＬ）で抽出し、真空にてエバポレートし、１５ａ〜ｉを得た。

４−（ノニルスルホンアミド）安息香酸１５ａ．ｍｐ＝１９３〜１９４℃；

４−（フェニルスルホンアミド）安息香酸１５ｂ．ｍｐ＝１８６〜１８８℃；

４−（４−クロロフェニルスルホンアミド）安息香酸１５ｃ．ｍｐ＝２５４〜２５６℃；

３−（ノニルスルホンアミド）安息香酸１５ｄ．ｍｐ＝１８３〜１８４℃；

３−（フェニルスルホンアミド）安息香酸１５ｅ．ｍｐ＝２０３〜２０４℃；

３−（４−クロロフェニルスルホンアミド）安息香酸１５ｆ．ｍｐ＝２４２〜２４３℃；

Ｃ６７−２−（ノニルスルホンアミド）安息香酸１５ｇ．ｍｐ＝１２２〜１２４℃；

２−（フェニルスルホンアミド）安息香酸１５ｈ．ｍｐ＝２１３〜２１５℃；

２−（４−クロロフェニルスルホンアミド）安息香酸１５ｉ．ｍｐ＝２０２〜２０３℃；

実施例５−化合物１７ａ−１７ｆの合成
化合物１７ａ〜１７ｆの合成は、本明細書の図５に示すスキーム５を用いて行なった。

反応条件：（ａ）ＲＳＯ_２Ｃｌ，ピリジン，ＣＨ_２Ｃｌ_２，０℃〜室温；（ｂ）Ｋ^＋Ｏ⁻ｔ−Ｂｕ，Ｅｔ_２Ｏ，Ｈ_２Ｏ，０℃〜室温
化合物１７ａ〜ｆは、分子のアリールスルホンアミド部分におけるリンカーの長さの違いの効果を調べるために設計した。これらは、化合物（ｃｍｐｏｕｎｄ）１５ａ〜ｉと同様にして作製し、市販のアニリンを出発材料とし、ベンジルスルホニルクロリドまたはフェニルエチルスルホニルクロリドのいずれかにピリジン（塩化メチレン中）をカップリングさせてスルホンアミド１６ａ〜ｆを得た。次いで、メチルエステルを、カリウムｔ−ブトキシドと水（エーテル中）でカルボン酸１７ａ〜ｆに変換させた。

１６ａ〜ｆの一般手順．出発物質アニリン（３．３ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１２ｍＬ）攪拌溶液に、０℃でピリジン（７．５当量）を添加した。次いで、塩化スルホニル（１．２当量）をシリンジによってゆっくりと添加した。溶液を攪拌し、室温まで昇温させた。反応の進行をＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ含有ヘキサン）によってモニタリングした。終了時、反応液を飽和ＮａＨＣＯ_３（４５ｍＬ）に注入し、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３×１５ｍＬ）で抽出し、１ＭＨＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機相を真空濃縮し、得られた固形物をＥｔＯＡｃ／ヘキサンから再結晶させ、１６ａ〜ｆを得た。

１７ａ〜ｆの一般手順．０℃まで冷却したカリウムｔ−ブトキシド（５．８８ｍｍｏｌ）のＥｔ_２Ｏ（１５ｍＬ）攪拌懸濁液に、シリンジによって水（１．４ｍｍｏｌ）を添加した。このスラリーを５分間攪拌し、１６ａ〜ｆ（０．６７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、出発物質が消失するまで（ＴＬＣ分析（２０％ＥｔＯＡｃ含有ヘキサン）による）室温で攪拌した。透明な２つの層が形成されるまで氷水を添加した。水層を分離し、１ＭＨＣｌで酸性化した。次いで、生成物をＥｔ_２Ｏ（３×２０ｍＬ）で抽出し、真空にてエバポレートし、１７ａ〜ｆを得た。

４−（フェニルメチルスルホンアミド）安息香酸１７ａ．ｍｐ＝２２１〜２２３℃；

４−（２−フェニルエチルスルホンアミド）安息香酸１７ｂ．ｍｐ＝２２２〜２２３℃；

３−（フェニルメチルスルホンアミド）安息香酸１７ｃ．ｍｐ＝２０５〜２０６℃；

３−（２−フェニルエチルスルホンアミド）安息香酸１７ｄ．ｍｐ＝１９９〜２００℃；

２−（フェニルメチルスルホンアミド）安息香酸１７ｅ．ｍｐ＝２１６〜２１９℃；

２−（２−フェニルエチルスルホンアミド）安息香酸１７ｆ．ｍｐ＝１５７〜１５９℃；

実施例６−化合物２１ａ〜２１ｃの合成
化合物２１ａ〜２１ｃの合成は、本明細書の図６に示すスキーム６を用いて行なった。

反応条件：（ａ）亜リン酸ジエチル，Ｅｔ_３Ｎ，Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４，ＥｔＯＨ，還流；（ｂ）Ｈ_２ＳＯ_４，ＥｔＯＨ，還流；（ｃ）Ｃ_８Ｈ_１７ＳＯ_２Ｃｌ，Ｅｔ_３Ｎ，ＣＨ_２Ｃｌ_２，０℃〜室温；（ｄ）ＴＭＳＢｒ，ＣＨ_２Ｃｌ_２，室温。

アリールホスホン酸２１ａ〜ｃの合成をスキーム６に示す。臭化アリール１８に対して、亜リン酸ジエチルとのパラジウム触媒型ハロゲン化アリールカップリングを行ない、ホスホネート官能性を付与した（Ｇｏｏｓｓｅｎ，Ｌ．Ｊ．，ｅｔ．ａｌ．；Ｄｅｚｆｕｌｉ，Ｍ．Ｋ．ＰｒａｃｔｉｃａｌＰｒｏｔｏｃｏｌｆｏｒｔｈｅＰａｌｌａｄｉｕｍ−ＣａｔａｌｙｚｅｄＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＡｒｙｌｐｈｏｓｐｈｏｎａｔｅｓｆｒｏｍＢｒｏｍｏａｒｅｎｅｓａｎｄＤｉｅｔｈｙｌＰｈｏｓｐｈｉｔｅ，Ｓｙｎｌｅｔｔ２００５，３，４４５）。次いで、アニリンを酸性エタノール中で還流することにより脱保護し、遊離アミンを市販のオクタンスルホニルクロリドとカップリングさせ、２０を得た。次いで、ホスホン酸ジエチルをＴＭＳＢｒで脱保護することにより最終化合物を得た。

１９ａ〜ｃの一般手順．出発物質の臭化物１８（１．９６ｍｍｏｌ）を、亜リン酸ジエチル（２．３５ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０４ｍｍｏｌ）、Ｅｔ_３Ｎ（２．９４ｍｍｏｌ）およびＥｔＯＨ（８ｍＬ）を入れた丸底フラスコに添加し、溶液を一晩（１６時間）還流加熱した。次いで、この溶液を３０ｍＬのＥｔＯＡｃで希釈し、５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ_３溶液、５０ｍＬのＨ_２Ｏで洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、真空濃縮した。次いで、生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ）によって精製した。

４−（オクチルスルホンアミド）フェニルホスホン酸２１ａ．ｍｐ＝１８５〜１８７℃；

３−（オクチルスルホンアミド）フェニルホスホン酸２１ｂ．ｍｐ＝１１２〜１１４℃；

２−（オクチルスルホンアミド）フェニルホスホン酸２１ｃ．ｍｐ＝９２〜９４℃；

実施例７−化合物２４ａ〜２４ｆの合成
化合物２４ａ〜２４ｆの合成は、本明細書の図７に示すスキーム７を用いて行なった。

反応条件：（ａ）ＲＳＯ_２Ｃｌ，ピリジン，ＣＨ_２Ｃｌ_２，０℃〜室温；（ｂ）Ｋ^＋Ｏ⁻ｔ−Ｂｕ，Ｅｔ_２Ｏ，Ｈ_２Ｏ，０℃〜室温。

化合物２４ａ〜ｃは、１５ｇをベースにし、アルキルスルホンアミドの長さの違いがオルト置換類似体に対してもたらす効果を調べるためのプローブとして設計した。飽和Ｃ_１６鎖を有する化合物（２４ｃ）は、該酵素が他の長鎖アシル−ＣｏＡよりもパルミトイル−ＣｏＡに対して顕著な優先性を示すため、１５ｇよりも有意に大きな阻害活性を示すであろうと考えた^１３。化合物２４ｄ〜ｆは、おそらく第２級アルコールの電子密度と類似しているであろうベンゼン環の４位の電気陰性基のグリセロール３−リン酸に対する役割を調べるために設計した。これらの化合物（２４ａ〜ｆ）はすべて、１５ａ〜ｆおよび１７ａ〜ｆを作製するために使用したものと同じ反応シーケンスで作製した。

２３ａ〜ｆの一般手順．出発物質アニリン（３．３ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１２ｍＬ）攪拌溶液に、０℃でピリジン（７．５当量）を添加した。次いで、塩化スルホニル（１．２当量）をシリンジによってゆっくりと添加した。溶液を攪拌し、室温まで昇温させた。反応の進行をＴＬＣ（２０％ＥｔＯＡｃ含有ヘキサン）によってモニタリングした。終了時、反応液を飽和ＮａＨＣＯ_３溶液（４５ｍＬ）に注入し、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３×１５ｍＬ）で抽出し、１ＭＨＣｌ（５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機相を真空濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（２０％ＥｔＯＡｃ含有ヘキサン）によって分離し、２３ａ〜ｆを得た。

２４ａ〜ｆの一般手順．０℃まで冷却したカリウムｔ−ブトキシド（５．８８ｍｍｏｌ）のＥｔ_２Ｏ（１５ｍＬ）攪拌懸濁液に、シリンジによって水（１．４ｍｍｏｌ）を添加した。このスラリーを５分間攪拌し、２３ａ〜ｆ（０．６７ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、出発物質が消失するまで（ＴＬＣ分析（２０％ＥｔＯＡｃ含有ヘキサン）による）室温で攪拌した。透明な２つの層が形成されるまで氷水を添加した。水層を分離し、１ＭＨＣｌで酸性化し、生成物をＥｔ_２Ｏ（３×２０ｍＬ）で抽出し、真空にてエバポレートした。必要であれば、次いで生成物を再結晶させ（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）、純粋な２４ａ〜ｆを得た。

２−（メチルスルホンアミド）安息香酸２４ａ．ｍｐ＝１８７〜１８９℃；

２−（テトラデシルスルホンアミド）安息香酸２４ｂ．ｍｐ＝１２０〜１２２℃；

２−（ヘキサデシルスルホンアミド）安息香酸２４ｃ．ｍｐ＝１２６〜１２８℃；

５−クロロ−２−（ノニルスルホンアミド）安息香酸２４ｄ．ｍｐ＝１０１〜１０３℃；

５−ヒドロキシ−２−（オクチルスルホンアミド）安息香酸２４ｅ．ｍｐ＝１４２〜１４４℃；

５−フルオロ−２−（オクチルスルホンアミド）安息香酸２４ｆ．ｍｐ＝１４１〜１４３℃；

実施例８−化合物４ａ〜ｔおよび７ａ〜ｔの合成
化合物４ａ〜ｔおよび７−ａ〜ｔの合成は、本明細書において、それぞれ図８および９に示したスキームを用いて行なった。

一般的なスズキ反応実験−０．２４７ｍｍｏｌの臭化アリールを、アルゴンをさっと通したバイアル内に入れ、Ｐｄ（ＰＰｈ_３）_４（１０ｍｇ）のトルエン（０．４０ｍＬ）溶液を添加した後、０．２５ｍＬの２ＭＮａ_２ＣＯ_３溶液を添加した。溶液を室温で５分間攪拌し、次いで、ボロン酸（１．２５当量）のＭｅＯＨ（０．４０ｍＬ）溶液を添加した。バイアルに蓋をし、９０℃まで２４時間加熱した。次いで反応液を室温まで冷却し、ＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈し、有機相を水相から分離し、有機相を真空濃縮した。粗製生成物をカラムクロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）によって精製し、所望のビス−アリール生成物を得た。

４ａ〜ｔおよび７ａ〜ｔの一般手順．０℃まで冷却したカリウムｔ−ブトキシド（２．００ｍｍｏｌ）のＥｔ_２Ｏ（８ｍＬ）攪拌懸濁液に、シリンジによって水（０．４ｍｍｏｌ）を添加した。このスラリーを５分間攪拌し、３ａ〜ｔまたは６ａ〜ｔ（０．２ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を、出発物質が消失するまで（ＴＬＣ分析（２０％ＥｔＯＡｃ含有ヘキサン）による）室温で攪拌した。透明な２つの層が形成されるまで氷水を添加した。水層を分離し、１ＭＨＣｌで酸性化した。次いで、生成物をＥｔ_２Ｏ（３×２０ｍＬ）で抽出し、真空にてエバポレートし、４ａ〜ｔおよび７ａ〜ｔを得た。さらなる精製が必要な場合は、生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｙ）。（１：１：８ＡｃＯＨ：ＥｔＯＡｃ：ヘキサン）によって精製した。

実施例８−インビトロ試験
上記のようにして作製した化合物を、グリセロール３−リン酸のアシル化を阻害する能力についてインビトロで評価した。ｍｔＧＰＡＴの添加によって開始させた^１４Ｃ−標識グリセロール３−リン酸とパルミトイル−ＣｏＡとのアシル化反応を、種々の濃度の該インヒビターの存在下、シンチレーション計数によって、より詳細に後述するようにして測定した。

ミトコンドリア内グリセロール３−リン酸アシルトランスフェラーゼの調製物を、^１４Ｃ−標識グリセロール３−リン酸、パルミトイル−ＣｏＡ、および種々の濃度のインヒビターを含むインキュベーション混合物に添加し、反応を開始させた。１０分後、クロロホルム、メタノールおよび１％過塩素酸を添加することにより反応を停止させた。５分後、さらにクロロホルムと過塩素酸を添加し、上側の水層を除去した。１％過塩素酸で３回洗浄後、有機層を窒素下でエバポレートし、存在する^１４Ｃの量を計数し、反応阻害の程度を調べた。データ点を３連で記録し、ＩＣ_５０値を、ＤＭＳＯビヒクル対照の存在下であるが、インヒビターの非存在下で観察されたｍｔＧＰＡＴ活性の５０％がもたらされるのに必要な試験インヒビターの量に基づいて計算した。

化合物５ａ〜ｆ、１３ａ〜ｆ、１５ａ〜ｉ、１７ａ〜ｆ、２１ａ〜ｃ、および２４ａ〜ｆの結果を、以下の表１〜３にまとめる。各化合物４ａ〜ｔおよび７ａ〜ｔの結果を、以下に個々にまとめる。

安息香酸５ａ〜ｆで得られたデータは、すべての場合で、スルホンアミドに対するカルボキシレートの位置とは関係なく、Ｃ_５飽和鎖よりも長鎖のＣ_９アルキル鎖の方が大きな阻害がもたらされたことを示す。該酸とスルホンアミドとの最も有効な配向は、５ｆ（ＩＣ_５０＝２２．７μＭ）の方が、５ｂ（ＩＣ_５０＝４３．９μＭ）または５ｄ（ＩＣ_５０＝２８．５μＭ）のどちらよりも良好なインヒビターであるため、オルト置換のようであった。また、ホスホン酸１３ａ〜ｆのアッセイデータでも、長鎖のＣ_９アルキル鎖の方が有効であることが示された。しかしながら、この化合物群では、該ホスホン酸と該アルキルスルホンアミド部分との配向の違いによる活性の有意差はみられない。この類型の最も活性な化合物は、メタ置換ホスホン酸である１３ｄ（ＩＣ_５０＝２３．７μＭ）であったが、１３ｂ（ＩＣ_５０＝３０．６μＭ）および１３ｆ（ＩＣ_５０＝３０．７μＭ）と比べてはるかに高いことはなかった。

ベンゼン環とスルホンアミドのイオウ間の距離は、メチレンリンカー１つとメチレンリンカー２つに有効な差がみられないため、これらの化合物の阻害活性に対して有意な効果をもたないようである。しかしながら、このようなリンカーメチレンを含むオルト置換化合物（１７ｅ〜ｆ）は、その他の置換型安息香酸（１７ａ〜ｄ）よりも有効であるようである。メタ化合物およびパラ化合物では、そのベンゼン環を該イオウに直接結合させると、阻害活性が大きくなるが、オルト化合物ではすべて同様である。ベンゼン環上にパラ塩化物が付加されると、パラ（１５ｃ）、メタ（１５ｆ）およびオルト化合物（１５ｉ）では、わずかな活性の増大がもたらされる。化合物１５ａ、１５ｄおよび１５ｇは、容易に取得可能な目的物であり、５ａ〜ｆにおいてベンゼン環とスルホンアミド間のメチレンリンカーの効果を調べることが可能であった。どの置換の場合も、これらの化合物は最も有効なＧＰＡＴインヒビターであり、オルト化合物（１５ｇ，Ｃ６７）で最も大きな活性（ＩＣ_５０＝８．１μＭ）が示された。このような結果に基づくと、単純なベンゼン環には長鎖アルキル鎖が好ましい。

１５ｇでの阻害活性の増大に鑑み、２種類の他の化合物群を調製した。第１の２１ａ〜ｃでは、安息香酸部分の代わりにアリールホスホン酸の有効性を調べる。インビトロでは、オルト置換型の酸（２１ｃ）は１５ｇよりも活性が低く、ホスホン酸部分の置換は、活性に対して有意に影響しないようである（表３）。作製したその他の化合物（２４ａ〜ｆ）により、アルキルスルホンアミドの鎖長、ならびにヘテロ原子をスルホンアミドに対してパラ位に付加する効果の重要性が示される。Ｃ_１鎖（２４ａ）ではＣ_９鎖よりも有意に低いインビトロ活性がもたらされるため、鎖長が長いことは、これらの化合物の活性に非常に重要なようである。化合物２４ｂおよび２４ｃは、天然状態では好ましいＣ_１６鎖が、これらの化合物において、他の鎖長（例えば、Ｃ_１４鎖）よりも好ましいかどうかを調べるために作製した。この場合、天然のアシル−ＣｏＡ基質で観察されたこととは対照的に、他の長鎖よりもＣ_１６化合物に対する優先性は観察されない。

化合物４ａ〜ｔおよび７ａ〜ｔ（上記の方法を用いて開発）の結果を以下に示す。

実施例９−インビボ試験
実験手順
ＤＩＯおよび痩せ型マウスモデル。動物実験はすべて、ジョンズ・ホプキンス大学医学部のＩＡＣＵＣによって確立された動物の保護および使用に関するガイドラインに従って行なった。ＤＩＯＣ５７ＢＬ６Ｊ雄マウスを、ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙ（ＢａｒＨａｒｂｏｒ，ＭＥ）から取得した。脂肪から６０％、炭水化物から２０％およびタンパク質から２０％のカロリーで構成された合成飼料（５．２ｋｃａｌ／ｇ）を、実験手順（Ｄ１２４９２ｉ，ＲｅｓｅａｒｃｈＤｉｅｔｓ，Ｉｎｃ．，ＮｅｗＢｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ）により離乳後に与えた。痩せ型動物の試験では、１２週齢のＣ５７ＢＬ６Ｊ雄マウス（ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＢａｒＨａｒｂｏｒ，ＭＥ）に、脂肪から１３％、炭水化物から５８％およびタンパク質から２９％のカロリーで構成された齧歯類用飼料（４．１ｋｃａｌ／ｇ）（ＰｒｏｌａｂＲＭＨ２５００，ＰＭＩＮｕｔｒｉｔｉｏｎＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＩｎｃ．，Ｂｒｅｎｔｗｏｏｄ，ＭＯ）を与えた。マウスを１２時間の明暗サイクル（２５℃）で１週間維持して馴化させた後、処置した。全試験において、ＦＳＧ６７（ＦＡＳｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ）は、ＲＰＭＩ１６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）に溶解させた。

短期試験では、６匹のＤＩＯまたは痩せ型マウスを、点灯からほぼ３時間経過後に、単回用量のＦＳＧ６７（２０ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）で処置した。動物の体重および飼料消費量を、処置の１８時間後に測定した。安楽死後、視床下部（ｈｙｐｏｔｈａｌｍｕｓ）を回収し、食欲促進性神経ペプチドおよび食欲不振誘発性神経ペプチドの遺伝子発現を調べた。長期試験では、ＤＩＯマウス４〜１０動物／群を、ＦＳＧ６７（５ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）またはＲＭＰＩビヒクルで毎日、表示した日数処置した。体重および飼料摂取量を毎日測定した。試験の一例では、マウスのコホートを、ＦＳＧ６７処置動物に消費させる量でのペアフィードとし、マウスを間接熱量測定（ＯｘｙｍａｘＥｑｕａｌＦｌｏｗＳｙｓｔｅｍ（登録商標），ＣｏｌｕｍｂｕｓＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｃｏｌｕｍｂｕｓ，ＯＨ）によりモニタリングした。ＶＯ２（ｍｌ／ｋｇ／時）およびＶＣＯ２（ｍｌ／ｋｇ／時）の測定を１５分毎に行ない、記録した。呼吸交換率（ＲＥＲ）は、Ｏｘｙｍａｘソフトウェア，バージョン５．９によって計算したものであり、ＶＯ２に対するＶＣＯ２の比率と定義される（３３）。処置過程の終了後、最終のＦＳＧ６７投与の４時間後に、動物をＣＯ_２吸入によって安楽死させた。すぐに組織を回収してＲＮＡ抽出を行なった。血清を収集し、グルコース、コレステロールおよびトリグリセリドの測定値について解析した（Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）。新鮮な肝臓組織を、液体Ｎ２中でスナップ凍結させ、切片を作製し、ヘマトキシリンおよびオイルレッドＯで染色してトリグリセリド滴を可視化した。

長期側脳室内カニューレ。化合物の脳室内（ｉ．ｃ．ｖ．）投与が必要とされる実験では、マウスの側脳室に対して片側に長期間留置カニューレを装着した。マウスを１週間の外科処置から戻した後、ｉ．ｃ．ｖ．神経ペプチドＹ（ＮＰＹ，ＡｍｅｒｉｃａｎＰｅｐｔｉｄｅＣｏ．，ＣＡ）に応答した飼料摂取量を測定することによりカニューレ留置を評価した。マウスには、ＮＰＹ（０．２５ηｍｏｌ／２μｌ注射）または滅菌０．９％生理食塩水ビヒクルをｉ．ｃ．ｖ．カニューレによって与え、明期の間の１時間、穀類系ペレットを摂取可能にした。ＮＰＹ後、少なくとも０．５ｇの飼料を摂取したマウスを実験に使用した。ビヒクル対照では、１１匹のマウスに、グルコース（Ｃａｍｂｒｅｘ，ＭＤ）なしのＲＰＭＩ−１６４０の２μＬの注射液を与えた。３日後、６匹のマウスに１００ｎｍｏｌ用量のＦＳＧ６７（ビヒクル中）を与え、一方、５匹のマウスには３２０ｎｍｏｌの該化合物を与えた。

脂肪過多のＱ−ＮＭＲ評価。ｉｐ投与による１０日間のＦＳＧ６７またはビヒクル処置後、ＤＩＯマウスを安楽死させ、死体を−８０℃で保存した。死体を解凍してＱ−ＮＭＲ分析を行なった。脂肪量、除脂肪量および水分量の測定は、ＭｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅＰａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙＰｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇＣｏｒｅ内で、ＥｃｈｏＭＲＩ−１００^ＴＭ（ＥｃｈｏＭｅｄｉｃａｌＳｙｓｔｅｍｓ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）を用いて行なった。

味覚嫌悪学習。試験の１０日前、１８匹の雄Ｃ５７／ＢＬ６マウスを、日中２時間の水分摂取のスケジュール下に置き、試験当日、マウスを３つの群に分け、水分ではなく０．１５％サッカリンナトリウムを３０分間摂取させた。サッカリン摂取の直後、マウスにＲＰＭＩビヒクルまたはＦＳＧ６７（５および２０ｍｇ／ｋｇ体重）をｉｐ注射し、残りの９０分間、水分を摂取させた。２４時間後、マウスに対して２時間、０．１５％サッカリンまたは水分の２瓶選択試験を行なった。両方の溶液の摂取量を記録し、データを、サッカリン嗜好性（１００×サッカリン摂取量／サッカリン摂取量＋水摂取量）で表示した。

リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ。ＤＩＯおよび痩せ型マウスの視床下部、肝臓およびＷＡＴを回収し、直ちに液体窒素中で凍結させた。既報（１３）のようにして全ＲＮＡを単離し、リアルタイム定量的ＲＴ−ＰＣＲを行なった。遺伝子特異的プライマーペアを、Ｐｒｉｍｅｒ３ソフトウェア（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ−ｇｅｎｏｍｅ．ｗｉ．ｍｉｔ．ｅｄｕ／ｃｇｉ−ｂｉｎ／ｐｒｉｍｅｒ／ｐｒｉｍｅｒ３＿ｗｗｗ．ｃｇｉ／）を用いて設計した。プライマーペアの配列を補足データ表１に示す。

３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞３Ｔ３−Ｌ１細胞を３４に記載のようにして脂肪細胞に分化させた。分化の７日後、細胞を、表示した濃度のＦＳＧ６７で１８時間処置し、次いで、［１４Ｃ］パルミテートで２時間標識した。Ｆｏｌｃｈ抽出後、脂質を極性および無極性薄層クロマトグラフィーに供した（３５）。トリグリセリド画分およびホスファチジルコリン画分を、ホスホルイメージング（ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍａｇｉｎｇ）（Ｓｔｏｒｍ８４０，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｙｎａｍｉｃｓ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）により定量した。

統計解析。データはすべて、平均±平均の標準誤差で表示する。ＩＣ５０の測定は線形回帰により行なった。対応なしの両側ｔ−検定または二元配置ＡＮＯＶＡ検定を、記載のようにして、Ｐｒｉｓｍ４．０（ＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅ，ＳａｎＤｉｅｇｏ，ＣＡ）を用いて行なった。

ＦＳＧ６７はマウス３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞においてアシルグリセリド合成を低減させる
マウス３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞を使用し、アシルグリセリド合成に対するＦＳＧ６７の効果をインビトロで試験した。分化後７日目の３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞を、７．６μＭ〜６１μＭ（２．５〜２０μｇ／ｍｌ）の濃度のＦＳＧ６７で処置し、トリグリセリドおよびホスファチジルコリンの合成阻害のＩＣ５０値を、線形回帰を用いて測定した。ＩＣ５０値は、細胞内トリグリセリド合成では３３．９μＭ（ｐ＝０．０２３，ｒ２＝０．８６，ｎ＝３）、およびホスファチジルコリン合成では３６．３μＭ（ｐ＝０．０１５，ｒ２＝０．８９，ｎ＝３）であった。ホスファチジルコリンは３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞内で合成される主なリン脂質であったため、細胞内の全体的なリン脂質合成を代表する。これらのＩＣ５０値は、マウスのミトコンドリア内ＧＰＡＴ活性で報告されたＩＣ５０値２４．７μＭ（１２）と類似している。そのアシルグリセリド合成阻害と整合して、図１０は、ＦＳＧ６７処置の４８時間後、３Ｔ３−Ｌ１脂肪細胞におけるトリグリセリド蓄積の用量依存性低減を示す。ＦＳＧ６７処置細胞内では、ビヒクル処置対照と比べて脂肪滴が減少していることに注目されたい。したがって、ＦＳＧ６７は、ミトコンドリア調製物内でのそのＧＰＡＴ活性阻害と同様のＩＣ５０で、細胞内アシルグリセリド合成を阻害する。このような生化学的観察結果と一致して、ＦＳＧ６７により、培養脂肪細胞内でのトリグリセリド蓄積がかなり低減された。総合すると、これらの結果は、ＦＳＧ６７が細胞内ＧＰＡＴ活性を阻害することを示す。

痩せ型およびＤＩＯマウスの短期ＦＳＧ６７処置により、味覚嫌悪学習なしで体重が減少し、飼料消費量が減少した。ＦＳＧ６７によりアシルグリセリド合成がインビトロで低減されたため、本発明者らは、痩せ型マウスとＤＩＯマウスの両方を単回用量のＦＳＧ６７（２０ｍｇ／ｋｇｉ．ｐ．）で処置し、動物の体重および摂食行動に対する短期的効果を調べた。また、本発明者らは、飼料摂取量減少の原因が不快感であることが示唆され得るＣＴＡ応答がＦＳＧ６７によって誘発されるかどうかを調べるための試験である味覚嫌悪学習（ＣＴＡ）も行なった。８匹のＤＩＯおよび痩せ型マウスを、暗サイクルの開始時にＦＳＧ６７で処置した。２４時間以内に、ＦＳＧ６７を注射した痩せ型マウスは、体重が３．７±０．９％（１．０±０．２ｇ）減少したが、絶食マウスでは１５．５±０．７％（３．９±０．２ｇ）減少した（図１１ａ）。両群における体重の減少は、ビヒクル対照（これは、２．５±０．５％（０．６±０．１ｇ）増加した）と比べて有意であった（ｐ＜０．０００１，両側ｔ−検定）。また、ＦＳＧ６７処置により、飼料摂取量がビヒクル対照の３３％に減少した（ｐ＜０．０００１両側ｔ−検定）（図１１ｂ）。

ＦＳＧ６７によるＧＰＡＴ阻害によって、高脂肪飼料を摂取したＤＩＯマウスの体重が減少した。ＦＳＧ６７処置ＤＩＯマウスでは、体重が４．３±０．５％（１．７±０．２ｇ）減少したのに対し、絶食マウスでは５．３±０．４％（２．１±０．２ｇ）減少した（図１１ｃ）。２．５±０．６％（１．０±０．２ｇ）減少したビヒクル対照マウスと比較すると、ＦＳＧ６７処置マウス（ｐ＝０．０２６，両側ｔ−検定）および絶食マウス（ｐ＝０．００２，両側ｔ−検定）ではともに、体重減少は有意であった。ＦＳＧ６７により、ＤＩＯマウスの飼料消費量はビヒクル対照の４１．６％と有意に少なかった（図１１ｄ）。ＤＩＯと痩せ型ビヒクル対照群の平均飼料摂取量は相当異なる（それぞれ、１．２および４．２ｇ）（ｐ＜０．０００１，両側ｔ−検定）が、ＦＳＧ６７処置後の飼料摂取量の相対的減少量は、ＤＩＯ（ヒクル対照の４１．６％）と痩せ型マウス（ビヒクル対照の３３％）で異ならない（ｐ＝０．１９、フィッシャーの直接確率検定）。２瓶選択パラダイムを用いた８匹の痩せ型マウスの群でのＣＴＡ試験において、ＦＳＧ６７によるサッカリン摂取量の有意な低減は、５ｍｇ／ｋｇ（ｐ＝０．１２）でも２０ｍｇ／ｋｇでももたらされないことが示された（ｐ＝０．１０，両側ｔ−検定）。したがって、ＦＳＧ６７による飼料摂取量の低減は、疾病挙動によるものではなかった（図１１ｅ）。ＦＳＧ６７処置による明白な毒性は、痩せ型マウスでもＤＩＯマウスでもみとめられなかった。これらのデータは、痩せ型マウスとＤＩＯマウスの両方において、動物の体重の減少を伴う薬理学的ＧＰＡＴ阻害の明白な食欲不振誘発性効果を示す。

ＤＩＯマウスの長期ＦＳＧ６７処置により、体重と飼料消費量が可逆的に減少し、脂肪酸の酸化が増大した。長期処置に適したＦＳＧ６７の用量を調べるため、本発明者らは、４匹／群のＤＩＯマウスにおいて、１、２および５ｍｇ／ｋｇの毎日の腹腔内用量を用いた５日間の用量範囲試験を行なった（図１７）。５ｍｇ／ｋｇ用量により、ビヒクル対照と比べて３．９％の有意な体重減少がもたらされた（ｐ＝０．００８，二元配置ＡＮＯＶＡ）。この用量を、その後の長期処置実験に選択した。

第１の長期処置実験は、ＦＳＧ６７によって誘導される体重減少が可逆的であるかどうかを試験するために設計した。４匹のＤＩＯマウス／群をＦＳＧ６７またはビヒクルで２０日間処置した。全３２日間の試験で、ＦＳＧ６７処置によって動物が元の体重に戻るまで、体重と飼料消費量を毎日記録した。ＦＳＧ６７処置中（第０日〜第２０日）、マウスは体重が１０．３±０．６％減少したが、対照は４．０±０．５％増加した（ｐ＜０．０００１，二元配置ＡＮＯＶＡ）（図１２ａ）。平均飼料消費量は、ＦＳＧ６７処置中、ビヒクル対照と比べて（３．１±０．１ｇ）減少した（２．６±０．１ｇ／日，第１日〜第２０日）（ｐ＝０．０００８，二元配置ＡＮＯＶＡ）（図１２ｂ）。処置終了後、飼料消費量は、ＦＳＧ６７処置群では、平均３．５±０．１ｇ／日（第２１日〜第３２日）に増加し、ビヒクル対照３．２±０．１ｇ／日と比べて飼料摂取量の有意な増加を示す（ｐ＝０．００６，二元配置ＡＮＯＶＡ）。ＦＳＧ６７処置動物は、処置の終了から１１日後に処置前の平均体重になった（図１２ａ）。

第２の長期処置試験では、間接熱量測定を用いてＧＰＡＴ阻害時の代謝の変化を試験した。ＤＩＯマウス（８匹／群）をＦＳＧ６７（５ｍｇ／ｋｇ，ｉｐ）で処置するか、またはＦＳＧ６７処置動物のペアフィードとした。間接熱量測定を使用し、ペアフィード動物と処置動物間で、酸素消費量（ＶＯ２）および呼吸交換率（ＲＥＲ）の変化を測定した。１６日間の処置後、ＦＳＧ６７処置マウスは体重が９．５±０．６％減少し、ペアフィードでは５．５±０．９％減少したが、ビヒクル対照では３．５±１．３％増加した（図１２ｃ）。ＦＳＧ６７処置動物での体重減少は、ビヒクル対照動物およびペアフィード動物の両方と比べて有意であった（ｐ＜０．０００１，二元配置ＡＮＯＶＡ）。この場合も、ＦＳＧ６７処置により、ＦＳＧ６７処置群では、ビヒクル対照での３．１±０．１ｇ／日と比べて、飼料消費量が３３％、２．０±０．１ｇ／日有意に減少した（ｐ＜０．０００１，二元配置ＡＮＯＶＡ）（図１２ｄ）。ＦＳＧ６７処置により、平均ＶＯ２は処置前の値の１０６．５±１．１％に増大した。この値は、ペアフィードマウス（これは、処置前の値の８９．９±１．１％のＶＯ２減少を示した）と比べて有意に高かった（ｐ＜０．０００１，二元配置ＡＮＯＶＡ）（図１２ｅ）。ＲＥＲは、ペアフィード（０．７８２±０．００６）と比べてＦＳＧ６７処置マウス（０．７３２±０．００２）において低く（ｐ＜０．０００１，二元配置ＡＮＯＶＡ）（図１２ｆ）、ＦＳＧ６７処置動物では、燃料のための脂肪酸の使用が多いことを示す。ＦＳＧ６７処置動物におけるＶＯ２の増大とＲＥＲの低下の組合せは、脂肪酸の酸化およびエネルギー利用量の増大と整合し、これは、おそらく、ペアフィード対照と比べて体重が少ないことの一因である。

薬理学的ＧＰＡＴ阻害により、ＤＩＯマウスにおいて脂肪過多が低減され、脂質生成遺伝子の発現が下方調節された。ＦＳＧ６７により、ＤＩＯマウスにおいて脂肪酸の酸化が増大し、飼料摂取量が減少しため、本発明者らは、次に、Ｑ−ＮＭＲ分析を使用し、ＦＳＧ６７処置マウスと対照マウスにおける除脂肪量、脂肪量および水分量を測定し、ＦＳＧ６７処置による組織組成減損量（ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｎｏｆｔｈｅｔｉｓｓｕｅｌｏｓｓ）を調べた。さらなる長期処置実験において、１０匹のＤＩＯマウスをＦＳＧ６７（５ｍｇ／ｋｇ／日，ｉｐ）で処置し、１０匹にはビヒクルを１０日間与えた。ＦＳＧ６７処置マウスでは６．１±０．９ｇ（１３．１±１．９％）減少したが、ビヒクル対照では１．１±０．４ｇ（２．３±０．８％）減少した（ｐ＜０．０００１．二元配置ＡＮＯＶＡ）（図１８）Ｑ−ＮＭＲ分析により、ＦＳＧ６７処置動物ではビヒクル対照と比べて、脂肪量の４．０ｇ減少が測定された（ｐ＜０．０００１，両側ｔ−検定）が、除脂肪量または水分量には有意な変化はなかった（図１３ａ）。実験終了時、ＦＳＧ６７処置マウスはビヒクル対照よりも体重が４．４ｇ少なく、これにより、脂肪量の４．０ｇの差が説明され得る。したがって、ＧＰＡＴ阻害により、ＤＩＯマウスにおいて脂肪過多が選択的に低減される。

脂肪組織量の低減を担う機構をさらに調べるため、本発明者らは、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを使用し、ビヒクル対照、ペアフィードおよびＦＳＧ６７処置ＤＩＯマウス由来の白色脂肪組織における以下の重要な脂質生成遺伝子：脂肪酸シンターゼ（ＦＡＳ）（脂肪酸のデノボ還元的合成を担う（１３））、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ１（ＡＣＣ１）（脂質生成器官内で発現され、脂肪酸合成のためのＦＡＳの基質として使用されるマロニル−ＣｏＡを合成するＡＣＣの細胞質内異性体（１４））、ペルオキシソーム増殖因子活性化型受容体γ（ＰＰＡＲγ）（脂肪生成に重要な転写因子（１５））、脂質分配（１６）、および食後脂質貯蔵（１７））、ならびにＧＰＡＴの発現を、第２の間接熱量測定試験によって調べた（図１２ｃ参照）。１６日間の処置後、ＦＳＧ６７処置動物の白色脂肪組織のリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ解析により、ＡＣＣ１（対照に対してｐ＝０．０００５，ペアフィードに対してｐ＝０．０００４）、ＦＡＳ（対照に対してｐ＝０．０００１，ペアフィードに対してｐ＝０．０００７）、ＰＰＡＲγ（対照に対してｐ＝０．０３２，ペアフィードに対してｐ＝０．００１９）、およびＧＰＡＴ（対照に対してｐ＝０．００３４，ペアフィードに対してｐ＝０．０００２）の相当な下方調節が示された（図１３ｂ）。興味深いことに、脱共役タンパク質−２（ＵＣＰ２）発現は、ＦＳＧ６７処置動物の肝臓（対照に対してｐ＝０．０４３）と白色脂肪組織（ペアフィードに対してｐ＝０．０１３）の両方において増大し、これらもまた、脂肪酸の酸化の増大の一因であり得（１８）、Ｌ−ＣＰＴ−１発現は影響されなかった（図１９）。したがって、薬理学的ＧＰＡＴ阻害により、脂肪酸の酸化が増大して飼料摂取量が低減されるだけでなく、肝臓および白色脂肪組織においてＵＣＰ２が上方調節されるとともに、白色脂肪組織において脂質生成遺伝子の発現が下方調節され、これらはすべて、脂肪過多の選択的低減に有利なはずである。

ＦＳＧ６７により、ＤＩＯマウスにおいて、血清グルコースレベルとトリグリセリドレベルは相当低下したとともに、肝臓脂肪症が消散した。全身性の脂肪過多の低減と整合して、ＧＰＡＴ阻害により、ＤＩＯマウスにおいて肝臓脂肪症が逆転された。肝臓の凍結切片のオイルレッド−Ｏ染色により、ビヒクル処置動物では、大小のトリグリセリド滴の蓄積を特徴とする顕著な脂肪症が示された（図１４ａ）。脂肪症は、ペアフィード動物では少なく（図１４ｂ）、ＦＳＧ６７処置によりほぼ消散した（図１４ｃ）。炎症、壊死または肝細胞損傷は確認されなかった。肝臓内脂質生成遺伝子ＡＣＣ１、ＦＡＳおよびＧＰＡＴのリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ発現解析では、ＦＡＳ（対照に対してｐ＝０．００１６，ペアフィードに対してｐ＝０．０１８）およびＡＣＣ１（ペアフィードに対してｐ＝０．０３７）の発現の有意な低減が示されたが、ＧＰＡＴはそうではなく、これは、ＦＳＧ６７処置によるデノボ脂肪酸合成の下方調節を示す（図２０）。組織内トリグリセリドの減少に加え、血清グルコースレベル（１５３．３±１０．５ｍｇ／ｄＬ）も、ビヒクル対照マウス（２００．６±２２．２ｍｇ／ｄＬ，ｐ＝０．０３二元配置ＡＮＯＶＡ）およびペアフィード（１８９．０±２０．３ｍｇ／ｄＬ，ｐ＝０．０４，二元配置ＡＮＯＶＡ）の両方と比べて低かった。ＦＳＧ６７処置ＤＩＯマウスで見られた血清トリグリセリドレベル（１１１．３±１０．９ｍｇ／ｄＬ）が、ペアフィード（１３８．５±９．８ｍｇ／ｄＬ）またはビヒクル対照（１３８．８±１３．５ｍｇ／ｄＬ）と比べて低いことは、統計学的に有意ではなかった。コレステロールレベルには変化はなかった（図１４ｄ）。ＦＳＧ６７処置マウスにおける肝臓脂肪症の消散は、血中グルコースレベルの正常化の一因となり得る。

脳室内（ｉｃｖ）ＦＳＧ６７処置により、飼料消費量と体重が減少した。本発明者らは、ＦＳＧ６７のｉｃｖ投与により、ＧＰＡＴ阻害が中枢に作用して飼料摂取量を低減させるのかどうかを調べた。痩せ型マウスを、１００および３２０ｎｍｏｌ（５ｍｇ／ｋｇの全身性単回日用量のほぼ３００倍および１００倍少ない）用量のＦＳＧ６７ｉｃｖで処置した。２４時間以内に、１００ｎｍｏｌで処置したマウスは、０．７５±０．４ｇ（ｐ＝０．０１６）減少し、一方、３２０ｎｍｏｌ群は１．８±０．３ｇ（ｐ＝０．０００３）減少した。ビヒクル対照は、それぞれ、０．４３±０．１ｇおよび０．３３±０．１ｇ増加した（図１５ａ）。動物の体重は、有意なリバウンドなく４８時間以内に戻った（データ表示せず）。飼料摂取量の有意な減少は、３２０ｎｍｏｌ処置群でのみ、みられた（３．８±０．１ｇ対照，２．５±０．３ｇＦＳＧ６７，ｐ＝０．００５１）（図１５ｂ）。４８時間以内に動物は正常な摂食を開始し、３２０ｎｍｏｌ群では、第３日および第４日にわずかな摂食亢進がみられた（データ表示せず）。これらのデータは、ＧＰＡＴ阻害を伴う飼料消費量の減少には、ＣＮＳが大きく寄与している可能性を示す。さらに、１００ｎｍｏｌ群において、飼料摂取量の減少なく体重減少がみられたことは、飼料摂食行動の変化とは無関係な代謝に対する中枢の効果を示す。

短期および長期のＦＳＧ６７処置により、視床下部内神経ペプチドの発現が改変された。視床下部内ペプチドの発現を、単回用量のＦＳＧ６７で処置した痩せ型およびＤＩＯマウス（図１１参照）ならびに長期処置ＤＩＯマウス（図１２参照）において測定し、飼料摂取量の低減を担う機構をさらに評価（ａｓｓｅｓ）した。単回用量のＦＳＧ６７で処置した痩せ型マウスでは、食欲促進性の視床下部内神経ペプチドである神経ペプチド−Ｙ（ＮＰＹ）の発現は、絶食動物と比べて有意に低減された（ｐ＝０．０１２，両側ｔ−検定）とともに、アグーチ関連タンパク質（ＡｇＲＰ）の発現も、絶食（ｐ＝０．０２０，両側ｔ−検定）およびビヒクル対照（ｐ＝０．０００９，両側ｔ−検定）と比べてかなり低減され、飼料摂取量の短期間での低減と整合する（図１６ａ）。逆に、食欲不振誘発性神経ペプチドであるプロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）およびコカイン−アンフェタミン関連転写物（ＣＡＲＴ）のｍＲＮＡレベルは、飼料奪取または短期ＦＳＧ６７処置に影響されなかった。痩せ型マウスにおける所見とは対照的に、ＤＩＯマウスの単回用量でのＦＳＧ６７処置により、ＡｇＲＰ発現は、ビヒクル対照および飼料奪取動物よりも有意に高かった（データ表示せず）。注目すべきことに、飼料奪取によって、ＤＩＯマウスでは、痩せ型動物で見られたような視床下部内ＮＰＹまたはＡｇＲＰメッセンジャー（ｍｅｓｓａｇｅ）のレベルの増大はもたらされなかった。処置によるこの食欲促進性神経ペプチド発現増大のパターンは、空腹応答と整合し、ＤＩＯマウスにおける食欲促進性ペプチド発現のリバウンドを示している可能性があるか、またはＤＩＯマウスにおける神経ペプチドシグナル伝達の調節不全のさらなる例を示すものであり得る（１９）。しかしながら、長期処置ＤＩＯマウスでは、視床下部内神経ペプチド解析により、ＦＳＧ６７（ｐ＝０．００５２，両側ｔ−検定）とペアフィード動物（ｐ＝０．００７４，両側ｔ−検定）の両方において、ビヒクル対照と比べてＮＰＹ発現の有意な低減が示された（図１６ｂ）。このプロフィールは、短期処置した痩せ型マウスの方とより類似しており、長期処置ＤＩＯマウスにおける食欲応答の正常化を反映している可能性がある。

Claims

式Ｉ：
（式中、
ｎは、０または１のいずれかである；
Ａは、ＮＲ^１、ＯおよびＳからなる群より選択され、ここで、Ｒ^１は、Ｈ、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルコキシ、アルケニル、アリール、アルキルアリールおよびアリールアルキルからなる群より選択される；
Ｘは、カルボキシレート残基、ホスホネート残基、ホスフェート残基およびＣ_１〜Ｃ_１０アルキル残基からなる群より選択され、該アルキル残基は任意選択で、カルボキシレート残基、ホスホネート残基およびホスフェート残基からなる群より選択される１つ以上の残基で置換されている；
Ｙは、Ｃ_１〜Ｃ_２０アルキル、アルケニル、ハライド、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_２０アルコキシ、アリール、アルキルアリール、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニルおよび複素環（これらはいずれも、任意選択で１つ以上の位置がハロゲンで置換されている）からなる群より選択される；ならびに
Ｚは、Ｈ、ヒドロキシル基、ハライド、アリール基、アルキルアリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基および複素環（これらはいずれも、任意選択で１つ以上の位置が、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル基、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルコキシ基、ヒドロキシル基、シアノ基、カルボキシレート基、ハライド、アリール基、アルキルアリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基および複素環からなる群より選択される置換基のうちの１つまたは組合せで置換されている）からなる群より選択される）
を含む化合物。
Ａが、Ｒ^１が水素であるＮＲ^１で構成される、請求項１に記載の化合物。
Ｘがカルボン酸残基で構成される、請求項１に記載の化合物。
Ｘがホスホネート残基で構成される、請求項１に記載の化合物。
Ｘが、ホスホネート残基またはカルボキシレート残基で置換されたメチルまたはエチル残基で構成される、請求項１に記載の化合物。
Ｘが、フェニル環のスルホニルリンカーに対してオルトまたはメタ位にある、請求項１に記載の化合物。
Ｙが、ＣＨ_３、Ｃ_５Ｈ_１１、Ｃ_８Ｈ_１７、Ｃ_９Ｈ_１９、Ｃ_１４Ｈ_２９、およびＣ_１６Ｈ_３３からなる群より選択されるＣ_１〜Ｃ_２０アルキル基で構成される、請求項１に記載の化合物。
Ｙが、アリール、アルキルアリールおよびアリールアルキル残基（これらはいずれも、任意選択で１個以上のハロゲン原子で置換されている）からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
Ｙが４−ＣｌＰｈで構成される、請求項８に記載の化合物。
Ｙが、Ｃ_１〜Ｃ_３炭素原子を有するアルキルアリール残基で構成される、請求項１に記載の化合物。
前記アルキルアリール残基のアリール部分が１個以上のハロゲン原子で置換されている、請求項１０に記載の化合物。
Ｚが、Ｈ、Ｆ、ＣｌまたはＯＨからなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
Ｚが、任意選択で置換されたアリール基または任意選択で置換された複素環で構成される、請求項１に記載の化合物。
からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
式ＩＶａ：
（式中、
ｎは、０または１のいずれかである；
Ａは、ＮＲ^１、ＯおよびＳからなる群より選択され、ここで、Ｒ^１は、Ｈ、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルコキシ、アルケニル、アリール、アルキルアリールおよびアリールアルキルからなる群より選択される；
Ｙは、Ｃ_１〜Ｃ_２０アルキル、アルケニル、ハライド、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_２０アルコキシ、アリール、アルキルアリール、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニルおよび複素環（これらはいずれも、任意選択で１つ以上の位置がハロゲンで置換されている）からなる群より選択される；ならびに
Ｚは、Ｈ、ヒドロキシル基、ハライド、アリール基、アルキルアリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基および複素環（これらはいずれも、任意選択で１つ以上の位置が、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル基、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルコキシ基、ヒドロキシル基、シアノ基、カルボキシレート基、ハライド、アリール基、アルキルアリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基および複素環からなる群より選択される置換基のうちの１つまたは組合せで置換されている）からなる群より選択される）
を含む化合物。
Ａが、Ｒ^１が水素であるＮＲ^１で構成される、請求項１５に記載の化合物。
Ｙが、ＣＨ_３、Ｃ_５Ｈ_１１、Ｃ_８Ｈ_１７、Ｃ_９Ｈ_１９、Ｃ_１４Ｈ_２９、およびＣ_１６Ｈ_３３からなる群より選択されるＣ_１〜Ｃ_２０アルキル基で構成される、請求項１５に記載の化合物。
Ｙが、アリール、アルキルアリールおよびアリールアルキル残基（これらはいずれも、任意選択で１個以上のハロゲン原子で置換されている）からなる群より選択される、請求項１５に記載の化合物。
Ｙが４−ＣｌＰｈで構成される、請求項１８に記載の化合物。
Ｙが、Ｃ_１〜Ｃ_３炭素原子を有するアルキルアリール残基で構成される、請求項１５に記載の化合物。
前記アルキルアリール残基のアリール部分が１個以上のハロゲン原子で置換されている、請求項２０に記載の化合物。
Ｚが、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＯＨ、任意選択で置換されたアリール基、および任意選択で置換された複素環からなる群より選択される、請求項１５に記載の化合物。
ＣＯＯＨがフェニル環のスルホニルリンカーに対してオルトまたはメタ位にある、請求項１５に記載の化合物。
Ｚが、フェニル環のスルホニルリンカーに対してメタ位またはパラ位のいずれかである、請求項１５に記載の化合物。
からなる群より選択される、請求項１５に記載の化合物。
式ＩＶｂ：
（式中、
ｎは、０または１のいずれかである；
Ａは、ＮＲ^１、ＯおよびＳからなる群より選択され、ここで、Ｒ^１は、Ｈ、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルコキシ、アルケニル、アリール、アルキルアリールおよびアリールアルキルからなる群より選択される；
Ｙは、Ｃ_１〜Ｃ_２０アルキル、アルケニル、ハライド、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_２０アルコキシ、アリール、アルキルアリール、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニルおよび複素環（これらはいずれも、任意選択で１つ以上の位置がハロゲンで置換されている）からなる群より選択される；ならびに
Ｚは、Ｈ、ヒドロキシル基、ハライド、アリール基、アルキルアリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基および複素環（これらはいずれも、任意選択で１つ以上の位置が、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル基、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルコキシ基、ヒドロキシル基、シアノ基、カルボキシレート基、ハライド、アリール基、アルキルアリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基および複素環からなる群より選択される置換基のうちの１つまたは組合せで置換されている）からなる群より選択される）
を含む化合物。
Ａが、Ｒ^１が水素であるＮＲ^１で構成される、請求項２６に記載の化合物。
Ｙが、ＣＨ_３、Ｃ_５Ｈ_１１、Ｃ_８Ｈ_１７、Ｃ_９Ｈ_１９、Ｃ_１４Ｈ_２９、およびＣ_１６Ｈ_３３からなる群より選択されるＣ_１〜Ｃ_２０アルキル基で構成される、請求項２６に記載の化合物。
Ｙが、アリール、アルキルアリールおよびアリールアルキル残基（これらはいずれも、任意選択で１個以上のハロゲン原子で置換されている）からなる群より選択される、請求項２６に記載の化合物。
Ｙが４−ＣｌＰｈで構成される、請求項２９に記載の化合物。
Ｙが、Ｃ_１〜Ｃ_３炭素原子を有するアルキルアリール残基で構成される、請求項２６に記載の化合物。
前記アルキルアリール残基のアリール部分が１個以上のハロゲン原子で置換されている、請求項３１に記載の化合物。
Ｚが、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＯＨ、任意選択で置換されたアリール基、および任意選択で置換された複素環からなる群より選択される、請求項２６に記載の化合物。
Ｚが、フェニル環のスルホニルリンカーに対してオルト位にある、請求項２６に記載の化合物。
からなる群より選択される、請求項２６に記載の化合物。
式Ｖ：
（式中、
ｎは、０または１のいずれかである；
ｍは、０、１、２または３のいずれかである；
Ａは、ＮＲ^１、ＯおよびＳからなる群より選択され、ここで、Ｒ^１は、Ｈ、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルコキシ、アルケニル、アリール、アルキルアリールおよびアリールアルキルからなる群より選択される；
Ｙは、Ｃ_１〜Ｃ_２０アルキル、アルケニル、ハライド、ヒドロキシル、Ｃ_１〜Ｃ_２０アルコキシ、アリール、アルキルアリール、アリールアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニルおよび複素環（これらはいずれも、任意選択で１つ以上の位置がハロゲンで置換されている）からなる群より選択される；ならびに
Ｚは、Ｈ、ヒドロキシル基、ハライド、アリール基、アルキルアリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基または複素環（これらはいずれも、任意選択で１つ以上の位置が、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルキル基、Ｃ_１〜Ｃ_１０アルコキシ基、ヒドロキシル基、シアノ基、カルボキシレート基、ハライド、アリール基、アルキルアリール基、アリールアルキル基、シクロアルキル基、シクロアルケニル基または複素環からなる群より選択される置換基のうちの１つまたは組合せで置換されている）からなる群より選択される）
を含む化合物。
Ａが、Ｒ^１が水素であるＮＲ^１で構成される、請求項３６に記載の化合物。
Ｙが、ＣＨ_３、Ｃ_５Ｈ_１１、Ｃ_８Ｈ_１７、Ｃ_９Ｈ_１９、Ｃ_１４Ｈ_２９、およびＣ_１６Ｈ_３３からなる群より選択されるＣ_１〜Ｃ_２０アルキル基で構成される、請求項３６に記載の化合物。
Ｙがアリール残基で構成される、請求項３６に記載の化合物。
前記アリール残基が１個以上のハロゲン原子で置換されている、請求項３９に記載の化合物。
Ｙが、Ｃ_１〜Ｃ_３炭素原子を有するアルキルアリール残基で構成される、請求項３６に記載の化合物。
前記アルキルアリール残基のアリール部分が１個以上のハロゲン原子で置換されている、請求項４１に記載の化合物。
Ｚが、Ｈ、Ｆ、Ｃｌ、ＯＨ、任意選択で置換されたアリール基、および任意選択で置換された複素環からなる群より選択される、請求項３６に記載の化合物。
（ＣＨ_２）_ｍＰＯ_３Ｈ_２が、フェニル環のスルホニルリンカーに対してオルト位にある、請求項３６に記載の化合物。
Ｚが、フェニル環のスルホニルリンカーに対してパラ位にある、請求項３６に記載の化合物。
からなる群より選択される、請求項３６に記載の化合物。
医薬用希釈剤と、請求項１、１５、２６および３６のいずれか１項に記載の化合物を含む医薬組成物。
前記化合物が
からなる群より選択される、請求項４７に記載の医薬組成物。
前記化合物が
からなる群より選択される、請求項４７に記載の医薬組成物。
有効量の請求項４７に記載の医薬組成物を被験体に投与することを含む、該被験体において体重減少を誘導する方法。
前記医薬組成物が
からなる群より選択される１種類以上の化合物を含む、請求項５０に記載の方法。
該医薬組成物が
からなる群より選択される１種類以上の化合物を含む、請求項５０に記載の方法。
有効量の請求項４７に記載の医薬組成物を被験体に投与することを含む、該被験体においてグリセロール３−リン酸アシルトランスフェラーゼ活性を阻害する方法。
前記医薬組成物が
からなる群より選択される１種類以上の化合物を含む、請求項５３に記載の方法。
前記医薬組成物が
からなる群より選択される１種類以上の化合物を含む、請求項５３に記載の方法。
有効量の請求項４７に記載の医薬組成物を被験体に投与することを含む、該被験体において脂肪酸の酸化を増大させる方法。
前記医薬組成物が
からなる群より選択される１種類以上の化合物を含む、請求項５６に記載の方法。
前記医薬組成物が
からなる群より選択される１種類以上の化合物を含む、請求項５６に記載の方法。