JP2011517488A - 体液からのタンパク質を吸収するための装置 - Google Patents
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Abstract
Description
・歯周組織(例えば、歯周炎、インプラント周囲炎、歯根う蝕)の現在および将来の疾患;
・現在および将来の全身疾患(例えば、ウイルス性疾患);
・現在の及び予想される全身疾患(例えば、糖尿病、アレルギー);
・現在の急性疾患(感染);
・免疫状態(ワクチン接種);
・将来の疾患のリスク(フリーラジカル、免疫状態)。
1.不活性前駆体またはプロ形態(多形核顆粒球における貯蔵形態)、
2.活性化または活性形態、
3.抑制形態または複合形態。
・受容要素10が親水性であり、0.22μm〜5μm、特に0.5μm〜3μmの細孔径を有し、プラスチック材またはプラスチック材の混合物よりなり、特に、不活性プラスチック材または不活性プラスチック材の混合物よりなり、
・支持要素20が疎水性であり、受容要素10の表面の1つを少なくとも部分的または完全に覆い、
・該装置が更に、受容要素10の対表面に位置する識別要素40を含む、平面状装置5に関する。
該膜は一体型均質フィルムとして注型されている。該膜は、135℃、30psigまでで45分間高圧滅菌することにより滅菌されうる。該膜の完全性はバブルポイント試験により測定されうる。
基部要素70:ICIにより製造されたメリネックス(Melinex)539ポリエステルフィルム(175μm)。
結合材80:医学等級接着剤。
支持要素20:
製造番号: ARCARE7815
接着剤: AS110、アクリル医学等級接着剤
基体: 51μmポリエチレンフィルム(PET)
コーティング: シリコンPETコーティング
識別要素40: 着色フィルム。
鉗子でGCF収集ストリップを歯ポケット内に30秒間配置することによる標準的な方法に従い、GCFサンプルを集めた。識別要素40が前面を向き、該ストリップの2〜3mmのみが該ポケット内に留まるように、該GCFストリップは該ポケット内に配置されるべきである。30秒後、GCFを含有するストリップを1.5mlエッペンドルフチューブ内に配置する。
方法:ELISAを製造業者の指示(dentoELISA,dentognostics GmbH,Jena,Germany)に従い行った。該ELISAは、aMMP−8に対する2つの特異的モノクローナル(mab)抗体(K8708およびK8706)(Medix Biochemica,Finland)(Hanemaaijerら 1997)を使用するサンドイッチイムノアッセイ系に基づくものであった。簡潔に説明すると、自動ELISAコーティングプラットフォーム(Seramun,Germany)を使用して、96ウェル平底プレート(Nunc)を1μg/mlの濃度のmab K8708でコートした。希釈バッファー中で1:50で希釈することにより、臨床サンプルを調製した。全ての標準物および対照は、該ELISAの説明マニュアルに従い調製した。100μlの標準物、対照および希釈臨床サンプルを2通りの適当なウェル内に分注した。該プレートをフォイルで覆い、37℃で1時間インキュベートした。自動洗浄器を使用して、該プレートを洗浄バッファーで5回洗浄した。ポリ−ホースラディッシュペルオキシダーゼに結合した検出抗体(K8706)を0.25μg/mlの濃度で全ウェルに加えた。該プレートをフォイルで覆い、37℃で1時間インキュベートした。自動洗浄器を使用して、該プレートを洗浄バッファーで5回洗浄した。TMB基質(Seramun,Germany)を全ウェルに加え、該プレートを室温で15分間インキュベートした。反応を4% H2SO4により停止させ、吸光度をELISAリーダー(Tecan)において450/620nmで読み取った。各プレートにおいて、aMMP−8抗原(Invent,Germany)での検量線を常に含めた。
方法:aMMP−8抗原を陰性臨床サンプル中で希釈することにより、2つの「スパイク(spike)サンプル」を調製した。該スパイク化サンプルを高濃度(40μg/ml)および中濃度(10μg/ml)として分類した。1μlの各スパイク化サンプルをストリップ(n=36)上でピペッティングし、該ストリップを1.5ml エッペンドルフチューブ内に配置した。該エッペンドルフチューブを37℃(n=18)およびRT(n=18)でインキュベートした。aMMP−18抗原を吸収した後のストリップは吸収ストリップとして知られる。また、溶出パッファー(puffer)を含有するエッペンドルフチューブ内で1μlの各スパイク化サンプルを直接的にピペッティングし、それらを陽性対照として37℃(n=18)およびRT(n=18)でインキュベートした。溶出パッファー(puffer)を含有するエッペンドルフチューブ内で1μlの陰性臨床サンプル(スパイク化無し)を直接的にピペッティングし、それらを陰性対照として37℃(n=18)およびRT(n=18)でインキュベートした。
それぞれの2つのストリップに関して、第0、1、4、7、15、21および31日に、溶出を行った。対照チューブも同様にして分離した。溶出サンプルおよび対照チューブを−20℃で貯蔵し、後の時点で一緒に試験した。溶出サンプルは、前記のとおりのELISAにおいて試験した。
方法:aMMP−8抗原を陰性臨床サンプル中で希釈することにより、1つの「スパイクサンプル」を調製した。該スパイク化サンプルを中濃度(10μg/ml)として分類した。aMMP−8抗原をストリップに吸収させるための2つの方法を用いた。
方法:
1.GCF採集:健常、歯肉炎および歯周炎罹患歯から標準的な方法(採集ストリップ)(Munjalら,2007;Mantylaら,2003)でGCFを集めた。各歯(同一部位)から、それぞれ30分間隔で4回、4つのサンプルを集めた。被験者は、サンプル採取前の1時間およびサンプル採集中は飲食しないよう通知された。
aMMP−8回収アッセイ:RTおよび4℃でインキュベートされた第0日および第14日における吸収ストリップから回収されたaMMP−8の濃度をそれぞれ図8aおよび8bに示す。4℃およびRTでインキュベートされ第0、4、7および14日に溶出された吸収ストリップから回収されたaMMP−8の濃度は同じ範囲内であったが、これは、実際の状態における少なくとも14日間にわたる該装置における該酵素の安定性を示している。
Claims (13)
- 体液からの、特に歯肉溝滲出液または涙液からの物質、特にタンパク質、例えば酵素を吸収するための平面状装置であって、受容要素(10)、支持要素(20)を含み、
・受容要素(10)が親水性であり、0.22μm〜5μm、特に0.5μm〜3μmの細孔径を有し、プラスチック材またはプラスチック材の混合物よりなり、特に、不活性プラスチック材または不活性プラスチック材の混合物よりなり、
・支持要素(20)が疎水性であり、受容要素(10)の表面の1つを少なくとも部分的に覆い、
該装置が更に、受容要素(10)の対表面に位置する識別要素(40)を含むことを特徴とする、平面状装置。 - 受容要素(10)が、0.6μm〜2.5μm、特に0.75μm〜1.75μmの細孔径を有する、請求項1記載の装置。
- 受容要素(10)が膜である、請求項1および/または2記載の装置。
- 該材がフルオロ炭化水素重合体、特にポリビニリデンフルオリド(PVDF)である、請求項1〜3のいずれか1項記載の装置。
- 識別要素(40)が該装置の円形化末端(30)の反対側に位置する、請求項1〜4のいずれか1項記載の装置。
- 該プラスチック材またはプラスチック材の混合物が1〜6GPa、特に2〜5、または1〜4GPaの弾性率(ヤング率)を有する、請求項1〜5のいずれか1項記載の装置。
- 支持要素(20)も、1〜4GPa、特に2〜3、または1〜2GPaの弾性率(ヤング率)を有するプラスチック材またはプラスチック材の混合物を含む、請求項1〜6のいずれか1項記載の装置。
- 該装置が、受容要素(10)において、そして好ましくは支持要素(20)においても、円形化末端(30)を有する、請求項1〜7のいずれか1項記載の装置。
- 該装置が、体液内の該装置の所望の浸漬深さを示す目印要素(60)を有する、請求項1〜8のいずれか1項記載の装置。
- 体液からの、特に歯肉溝滲出液または涙液からの溶出後の物質、特にタンパク質、例えば酵素、特にコラゲナーゼ、例えばマトリックスメタロプロテイナーゼ−8(MMP−8)、MMP−13、TNFα、インターロイキン1β(IL−1B)、オステオプロテゲリン(Osteoprotegerin)の吸収および/または貯蔵のための、請求項1〜9のいずれか1項記載の装置の使用であって、貯蔵期間が1〜31日間、特に7〜31日間または7〜21日間である、使用。
- 該酵素が1〜31日間、特に7〜31日間または7〜21日間の貯蔵期間にわたり、4℃〜42℃、特に4℃〜37℃または8℃〜20℃の温度で安定である、請求項10記載の装置の使用。
- 酵素の活性が貯蔵後にほぼ維持される、タンパク質、特に酵素の貯蔵のための、請求項10または11記載の装置の使用。
- 酵素、特に酵素のエピトープの免疫反応が貯蔵後にほぼ維持される、タンパク質、特に酵素を安定化させるための、請求項10または11記載の装置の使用。
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