JP2011503160A5

JP2011503160A5 -

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Publication number: JP2011503160A5
Application number: JP2010533653A
Authority: JP
Filing date: 2008-11-13
Publication date: 2011-12-22
Anticipated expiration: 2028-11-13

Claims

サンプル中のプロテアーゼ酵素の検出方法であって、
（ｉ）該サンプルを、発色性アミノ酸を含むポリペプチド［該発色性アミノ酸はそのＮおよびＣ末端において少なくとも１つのアミノ酸に隣接しており、該発色性アミノ酸のアミン基が５未満のｐＫａを有し、および該発色性アミノ酸が共役アルデヒドと反応可能であり、ならびに該ポリペプチドが、該発色性アミノ酸のアミノ基を含むペプチド結合を切断し得る標的プロテアーゼに対する標的配列を含む］に曝し、該プロテアーゼに該ポリペプチドを切断させて断片［該断片はそのＮ末端に発色性アミノ酸を示す］を得る工程、
（ｉｉ）共役アルデヒドを、該発色性アミノ酸を含む該断片と反応させて、着色付加体を得る工程、および
（ｉｉｉ）該着色付加体を検出する工程であって、該着色付加体の存在が該サンプル中のプロテアーゼ酵素の存在を示す工程、
を含む方法。
発色性アミノ酸が、
ａ）該発色性アミノ酸のアミノ基の窒素原子に直接結合した芳香環部分を含む（該芳香環部分は場合によってフェニルまたはナフチル部分である）、および／または
ｂ）立体的な等価性において天然アミノ酸に合致している、
請求項１に記載の方法。
標的配列が、発色性アミノ酸を含む、請求項１または２に記載の方法。
共役アルデヒドが、置換ベンズアルデヒド、シンナムアルデヒド、トランス，トランスフェニルペンタジエナール、ＤＭＡＣまたはＤＭＡＢである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
ポリペプチドが該ポリペプチドのＣ末端もしくはＮ末端において又はその付近において固体支持体上に固定化されており、ポリペプチドが場合によって固体支持体に共有結合している、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
ポリペプチドのＣ末端もしくはＮ末端において又はその付近において第１および第２結合部分を更に含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
ポリペプチドが２〜１００アミノ酸長、または３〜４０アミノ酸長である、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
（ｉ）発色性アミノ酸を含むポリペプチドであって、該発色性アミノ酸がそのＮおよびＣ末端において少なくとも１つのアミノ酸に隣接しており、該発色性アミノ酸のアミン基が５未満のｐＫａを有し、および該発色性アミノ酸が共役アルデヒドと反応可能であり、ならびに該ポリペプチドが、該発色性アミノ酸のアミノ基を含むペプチド結合を切断し得る標的プロテアーゼに対する標的配列を含む前記ポリペプチド、および
（ｉｉ）該ポリペプチドが固定化され得る固体支持体、および場合によって
（ｉｉｉ）共役アルデヒド、
を含んでなる、サンプル中のプロテアーゼ酵素を検出するための製品。
発色性アミノ酸が、
ａ）該発色性アミノ酸のアミノ基の窒素原子に直接結合した芳香環部分を含む（該芳香環部分は場合によってフェニルまたはナフチル部分である）、および／または
ｂ）立体的な等価性において天然アミノ酸に合致している、
請求項８に記載の製品。
標的配列が、発色性アミノ酸を含む、請求項８または９に記載の製品。
共役アルデヒドが、置換ベンズアルデヒド、シンナムアルデヒド、トランス，トランスフェニルペンタジエナール、ＤＭＡＣまたはＤＭＡＢである、請求項８〜１０のいずれか一項に記載の製品。
ポリペプチドが該ポリペプチドのＣ末端もしくはＮ末端において又はその付近において固体支持体上に固定化されており、ポリペプチドが場合によって固体支持体に共有結合している、請求項８〜１１のいずれか一項に記載の製品。
ポリペプチドのＣ末端もしくはＮ末端において又はその付近において第１および第２結合部分を更に含む、請求項８〜１２のいずれか一項に記載の製品。
ポリペプチドが２〜１００アミノ酸長、または３〜４０アミノ酸長である、請求項８〜１３のいずれか一項に記載の製品。
固体支持体が、ヒンジにより連結された第１および第２シートを含み、ポリペプチドが第１シート上に固定化されており、および共役アルデヒドが第２シート上に位置していて、それらのシートを一緒に折り畳むことにより第１シートから第２シートへの物質の移動が可能となる、請求項８〜１４のいずれか一項に記載の製品。
製品が更に、第１シート上に固定化されたポリペプチドと、第２シート上に位置する共役アルデヒドとの間に介在し得る膜を含み、該膜が、閾サイズより大きなサイズを有する物質の、第１シートから第２シートへの通過を妨げ、該ポリペプチドが、該発色性アミノ酸を含む断片を遊離するようプロテアーゼ酵素により切断可能であり、該断片が該閾サイズより小さい、請求項１５に記載の製品。
固体支持体がクロマトグラフィー媒体を含む、請求項８〜１４のいずれか一項に記載の製品。
クロマトグラフィー媒体が更に、プロテアーゼ酵素による切断の後にポリペプチドから遊離可能な発色性アミノ酸を含む該ポリペプチドの断片に結合し得る断片結合性分子を含み、該ポリペプチドが指示区域において該クロマトグラフィー媒体上に固定化可能であり、ならびに該断片結合性分子が可視化区域において該クロマトグラフィー媒体上に固定化可能である、請求項１７に記載の製品。
ポリペプチドが第１および第２断片へと切断可能であり、第１断片が該発色性アミノ酸を含み、ならびに製品が更に、第２断片と結合可能な検出可能な標識、および該クロマトグラフィー媒体内または上に固定化された第１および第２捕捉分子を含み、第１捕捉分子が第１断片に結合可能であり、および第２捕捉分子が第２断片または該検出可能標識に結合可能である、請求項１７に記載の製品。
標識が、第２断片に結合可能な結合性成分を含む、請求項１９に記載の製品。
クロマトグラフィー媒体が、
ａ）試験ストリップ、または
ｂ）多孔性物質のカラム
を含む、請求項１７〜２０のいずれか一項に記載の製品。