JP2007505094A5

JP2007505094A5 -

Info

Publication number: JP2007505094A5
Application number: JP2006525899A
Authority: JP
Filing date: 2004-09-13
Publication date: 2009-11-26

Claims

標的細胞からの分泌の阻害または低減のために、非細胞傷害性プロテアーゼ結合体を調製する方法であって、該方法が、
（Ａ）該標的細胞上のレセプターへのアゴニストの結合において該標的細胞からの分泌を増大するアゴニストを同定する工程であって、該レセプターが、エンドサイトーシスを受けて該標的細胞内のエンドソームに取り込まれる、工程；ならびに
（Ｂ）非細胞傷害性プロテアーゼ結合体を調製する工程であって、該結合体が、
（ｉ）工程（Ａ）によって同定されたアゴニストであって、該アゴニストが、該標的細胞上のレセプターに該結合体を結合させる、アゴニスト；
（ii）非細胞傷害性プロテアーゼまたは該プロテアーゼのフラグメントであって、該標的細胞の細胞外融合器官のタンパク質を切断し得る、プロテアーゼまたはプロテアーゼフラグメント；および
（iii）トランスロケーションドメインであって、該エンドソームの内部から該エンドソームの膜を横断して該標的細胞のサイトゾルへと、該プロテアーゼまたはプロテアーゼフラグメントをトランスロケートさせる、トランスロケーションドメイン
を含む、工程
を含む、方法。
標的細胞からの分泌の阻害または低減のために、非細胞傷害性プロテアーゼ結合体を調製する方法であって、該方法が、
（Ａ）該標的細胞上のレセプターへのアゴニストの結合において該標的細胞からの分泌を増大するアゴニストを同定する工程であって、該レセプターが、エンドサイトーシスを受けて該標的細胞内のエンドソームに取り込まれる、工程；ならびに
（Ｂ）非細胞傷害性プロテアーゼ結合体を調製する工程であって、該結合体が、
（ｉ）工程（Ａ）によって同定されたアゴニストであって、該アゴニストが、該標的細胞上のレセプターに結合体を結合させる、アゴニスト；
（ii）非細胞傷害性プロテアーゼまたは該プロテアーゼのフラグメントをコードするＤＮＡ配列であって、該標的細胞で発現可能であり、そしてそのように発現されたとき、該標的細胞の細胞外融合器官のタンパク質を切断し得るプロテアーゼまたはプロテアーゼフラグメントを提供する、ＤＮＡ配列；および
（iii）トランスロケーションドメインであって、該エンドソームの内部から該エンドソームの膜を横断して該標的細胞のサイトゾルへと、該プロテアーゼまたはプロテアーゼフラグメントをコードするＤＮＡ配列をトランスロケートさせる、トランスロケーションドメイン
を含む、工程
を含む、方法。
請求項１または２に記載の方法であって、前記工程（Ａ）が、
（Ａ）推定アゴニスト分子を同定する工程；
（Ｂ）該推定アゴニスト分子と前記標的細胞とを接触させる工程；および
（Ｃ）該標的細胞への該推定アゴニストの結合後に、該標的細胞からの分泌が増大することを同定することにより、該推定アゴニスト分子がアゴニストであることを確認する工程
を含む、方法。
工程（Ｃ）が、前記標的細胞への前記推定アゴニストの結合後に、該標的細胞からの分泌が増大することを検出する工程を含む、請求項３に記載の方法。
前記検出工程が、クロマトグラフィー、質量分光法、蛍光、ＥＬＩＳＡ／ＥＩＡ／ＲＩＡ技術、または放射性トレーサー技術を用いるアッセイによって実施される、請求項４に記載の方法。
前記プロテアーゼまたはそれらのプロテアーゼフラグメントが、クロストリジウム神経毒素プロテアーゼまたは該プロテアーゼ活性を有するそのフラグメントもしくは改変体である、請求項１に記載の方法。
前記プロテアーゼまたはそれらのプロテアーゼフラグメントが、ＩｇＡプロテアーゼまたは該プロテアーゼ活性を有するそのフラグメントもしくは改変体である、請求項１に記載の方法。