JP2011501201A - 液体中の成分を検出するための装置 - Google Patents
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Abstract
【選択図】なし
Description
測定結果を迅速に得ることを意図し、血漿または血清および/またはその他の体液を試験するために、現在の方法および装置を使用すると、しばしば指標値のみを得ることができ、そして、高い頻度で、測定される液体成分の存在または不在に関する報告のみが作成され得る。例えば、試験ストリップは、検出限界内に物質が存在するか否かのみを示す。しかしながら、液体、例えば血液中の、物質の濃度または含有量に関する正確な測定値のみが、患者の特定の状態および適切な治療方法に関する情報を提供するので、これらの方法および装置は、患者からの試料における、特定の疾患および/または状態の診断には、しばしば適さない。
本発明は、好ましくは、血液中の成分を検出する、特に、血液中の成分の濃度を決定する装置に関連し、この装置は、測定領域、フィルターおよび/またはフィルター領域、成分と相互作用する少なくとも一つの検出試薬、液体を導入する開口部、測定領域と開口部の間に配置されるフィルター、および、液体流入領域を含み、液体流入領域および/またはフィルター領域は、好ましくはフィルムが含まれる、好ましくは弾性領域によって、少なくとも部分的に形成または限定される。液体流入領域は、好ましくは開口部とフィルターとの間に配置される。
例えば物質の“検出”とは、特に、物質の存在または不在を決定することを意味する。ここで、測定方法の検出限界は、望ましい精度内での結果を決定する。
本発明において、“血液中の成分”とは、特に、血液中に存在および/または溶解している物質である。物質は、特に、有機または無機、あるいはそれらの混合物であることができる。基本的に、その他の液体の成分もまた、本発明の装置を使用することによって決定することができる。ここで液体(fluid)とは、固体成分または懸濁物を含む液体(liquid)として理解される。好ましくは、液体とは体液である。体液は、例えば、血液、ある種の体液(liquor)、尿、漿液、唾液、精液、または、病的排泄物である。好ましくは、液体は水、特に蛇口、小川、または湖などからの水である。ここで、例えば、測定されたDNAが、微生物による水の汚染と関連するかどうかを、決定することが可能である。
例えば、特定の波長範囲の光によって励起され、そして、特定の波長範囲の光を発光する、好ましい検出試薬の使用のため、測定領域は、好ましくは、例えば、可視光および発光波長の光などを透過させることができる。
好ましくは、フィルターは、完全にグラスファイバーから作られてはいないが、グラスファイバーを含む。より好ましくは、グラスファイバーの容量または重量比率は、0%と、90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%または10%との間の範囲であるか、または、フィルターの約5%と50%との間の範囲であり、好ましくは、約10%と50%との間の範囲である。最も好ましくは、グラスファイバーを含まないフィルター材質である。血液のろ過において、フィルター材質は溶血を引き起こすべきではなく、そして、検体と結合すべきではない。
液体流入領域は、好ましくは、開口部と測定領域との間に、より好ましくは開口部とフィルターとの間に配置される。
“血漿”とは、好ましくは、特に、細胞(赤血球、白血球など)などの固体成分から分離され、かつ依然として凝固することが可能である、血液の液体相を意味する。
本発明に従って、基本的にいかなる物質も、適切な検出試薬を使用して検出することができる。好ましくは、検出または測定される成分は、生物中に生じる物質である。生物中に生じる物質は、有機または無機の性質であることができる。例えば、ミネラルまたは無機塩、微量元素、無機イオン、金属、および重金属などが、無機的なものである。
好ましくは、検出または測定される成分は、DNA、RNA、タンパク質、ホルモン、サイトカインを含む群から選択される生物学的分子である。後者の物質は、遊離であるか、あるいは、その他のタンパク質と結合していてもよい。例えば、血漿または血清中のDNAは、ヒストンおよび/またはエラスターゼ並びにマイクロサテライトの複合体としても生じることができる。さらに、検出または測定される成分は、好ましくは、その他の粒子で汚染された水試料における、無傷の、または、損なわれている細菌、ウイルスおよび/または寄生生物のDNA/RNAである。粒子は、ろ過過程によって除かれ、一方、微生物中に含まれる核酸は、適切な蛍光色素を使用して測定されることができる。
さらなる好ましい態様において、検出試薬は検出される成分と、直接的または間接的に相互作用する。直接的な相互作用は、好ましくは、DNAがDNAと結合する試薬を使用して検出される場合に生じ、結合は、共有結合または非共有結合であってよい。特定の物質が、DNAに共有結合することなく、二本鎖または一本鎖DNAにもまた、インターカレートする(インターカレーター)。部分的には、これだけが、物質に蛍光特性を与える。DNA中への集積、および特定波長の光の照射によって、定量的に測定することができ、かつ、DNA量と相関する、異なる波長の光を、これらの物質は発光する。蛍光色素は、インターカレーターと異なることも可能であり、DNAと接触させて、化学修飾によって測定することも可能である。別の好ましい態様において、検出試薬は、シアニン色素(Pico-GreenTM([2-[N-ビス-(3-ジメチルアミノプロピル)-アミノ]-4-[2,3-ジヒドロ-3-メチル-(ベンゾ-1,3-チアゾール-2-イル)-メチリデン]-1-フェニル-キノリン];Zipperら、2004;Nucleic Acids Research 32(12)も参照のこと)、TOTO(登録商標)-(例えば、1-1’-[1,3-プロパンジイルビス[(ジメチルイミノ)-3,1-プロパンジイル]]ビス[4-[(3-メチル-2(3H)-ベンゾチアゾールイリデン)メチル]]-テトラヨーダイド)、Alexa(登録商標)-(例えば、2,3,5,6-テトラフルオロフェニルエステル(Alexa Fluor(登録商標)488 5-TFP;Alexa色素の資料は、Berlierら (2003);J Histo Cytochem 51(12):1699-712より得られる)またはSytox(登録商標)色素(Invitrogenより購入される)およびSYBR(登録商標)色素(例えば、C32H37N4S+または[2-[N-(3-ジメチルアミノプロピル)-N-プロピルアミノ]-4-[2,3-ジヒドロ-3-メチル-(ベンゾ-1,3-チアゾール-2-イル)-メチリデン]-1-フェニル-キノリン];Invitrogenより購入される;Zipperら、2004;Nucleic Acids Research 32(12)もまた参照のこと)または、他には臭化エチジウム(例えばC21H20BrN3)をも含むグループから選択される。適当なシアニン色素のリストは、US 5,436,134およびUS 5,658,751に開示される。
基本的に、すべての蛍光色素分子を、発明にしたがって使用することができる。以下のリストは、完全ではないが、適当な蛍光色素分子の例を示す:1,5 IAEDANS、1,8-ANS、4-メチルウンベリフェロン、4’,6-ジアミジノ-2-フェニルインドール、5-(および6-)カルボキシ-2’,7’-ジクロロフルオレセインpH 9.0、5-カルボキシ-2,7-ジクロロフルオレセイン、5-カルボキシフルオレセイン(5-FAM)、5-カルボキシナフトフルオレセイン(pH 10)、5-カルボキシテトラメチルローダミン(5-TAMRA)、5-FAM(5-カルボキシフルオレセイン)、5-FAM pH 9.0、5-HAT(ヒドロキシトリプタミン)、5-ヒドロキシトリプタミン(HAT)、5-ROX(5-カルボキシ-X-ローダミン,トリエチルアンモニウム塩)、5-ROX(カルボキシ-X-ローダミン)、5-ROX pH 7.0、5-TAMRA(5-カルボキシテトラメチルローダミン)、6 JOE、6-カルボキシローダミン6G、6-カルボキシローダミン6G pH 7.0、6-カルボキシローダミン6G塩酸塩、6-CR 6G、6-HEX、SE pH 9.0、6-JOE、6-TET、SE pH 9.0、7-AAD(7-アミノ-アクチノマイシンD)、7-アミノ-4-メチルクマリン、7-アミノアクチノマイシンD(7-AAD)、7-ヒドロキシ-4-メチルクマリン、9-アミノ-6-クロロ-2-メトキシアクリジン、ABQ、酸性フクシン、ACMA、ACMA(9-アミノ-6-クロロ-2-メトキシアクリジン)、アクリジンホモ二量体、アクリジンオレンジ、アクリジンオレンジ + DNA、アクリジンオレンジ,DNA & RNA、アクリジンレッド、アクリジンイエロー、アクリフラビン、アクリフラビンフォイルゲンSITSA、エクオリン、AFP類、Alexa 405、Alexa 430、Alexa 488、Alexa 546、Alexa 568、Alexa 594、Alexa Fluor 350TM、Alexa Fluor 430抗体複合型pH 7.2、Alexa Fluor 430TM、Alexa Fluor 488抗体複合型pH 8.0、Alexa Fluor 488ヒドラジド水、Alexa Fluor 488TM、Alexa Fluor 532TM、Alexa Fluor546TM、Alexa Fluor 568抗体複合型pH 7.2、Alexa Fluor 568TM、Alexa Fluor 594TM、Alexa Fluor 610 R-フィコエリスリンストレプトアビジンpH 7.2、Alexa Fluor 647 R-フィコエリスリンストレプトアビジンpH 7.2、Alexa Fluor 633TM、Alexa Fluor 647TM、Alexa Fluor 660TM、Alexa Fluor 680TM、Alexa Fluor 700、Alexa Fluor 750、アリザリンコンプレクソン、アリザリンレッド、アロフィコシアニン(APC)、AMC、AMCA-S、AMCA(アミノメチルクマリン)、AMCA-X、アミノアクチノマイシンD、アミノクマリン、アミノメチルクマリン(AMCA)、アニリンブルー、ステアリン酸アントロシル(anthrocyl stearate)、APC(アロフィコシアニン)、APC-Cy7、APTRA-BTC、APTS、Astrazon Brilliant Red 4G、Astrazon Orange R、Astrazon Red 6B、Astrazon Yellow 7 GLL、アタブリン、ATTO-TAGTM、CBQCA、ATTO-TAGTM FQ、オーラミン、オーロフォスフィン、オーロフォスフィンG、BAO 9(ビスアミノフェニルオキサジアゾール)、BCECF(高pH)、BCECF(低pH)、BCECF pH 5.5、BCECF pH 9.0、硫酸ベルベリン、ベータラクタマーゼ、BFP、BFP/GFP FRET、ビメイン(bimane)、ビス-アクリジンオレンジ、ビスベンズアミド、ビスベンズイミド(Hoechst)、ビス-BTC、Blancophor FFG、Blancophor SV、BOBO-3-DNA、BOBOTM-1(2,2’-[1,3-プロパンジイルビス[(ジメチルイミノ)-3,1-プロパンジイル-1(4H)-ピリジニル-4-イリデンメチリジン]]ビス[3-メチル]-テトラヨーダイド)、BOBOTM-3(C45H58I4N6S2)、Bodiby 492/515、Bodipy 493/503、Bodipy 500/510、Bodipy 505/515、Bodipy 530/550、Bodipy 542/563、Bodipy 558/568、Bodipy 564/570、Bodipy 576/589、Bodipy 581/591、Bodipy 630/650-X、Bodipy 650/665-X、Bodipy 665/676、Bodipy FI、Bodipy FL ATP、BODIPY FL複合型、BODIPY FL, MeOH、Bodipy FI-セラミド、Bodipy R6G SE、Bodipy TMR、Bodipy TMR-X複合型、Bodipy TMR-X, SE、Bodipy TR、Bodipy TR ATP、BODIPY TR-Xファラシジン(phallacidine)pH 7.0、Bodipy TR-X SE、BODIPY TR-X, MeOH、BODIPY TR-X, SE、BOPRO-3、BO-PRO-3-DNA、BO-PROTM-1、BO-PROTM-3、Brilliant Sulphoflavin FF、BTC, BTC-5N、カルセイン、カルセインブルー、カルセインpH 9.0、カルセイン/エチジウムホモ二量体、カルシウムクリムソン、カルシウムクリムソンCa2+、calcium crimsonTM、カルシウムグリーン、カルシウムグリーン-1、カルシウムグリーン-1 Ca2+、カルシウムグリーン-2、カルシウムグリーン-5N、カルシウムグリーン-C18、カルシウムオレンジ、カルコフロールホワイト、カルボキシ-X-ローダミン(5-ROX)、カスケードブルー、カスケードブルーBSA pH 7.0、cascade blueTM、カスケードイエロー、カスケードイエロー抗体複合型pH 8.0、カテコールアミン、CCF2(GeneBlazer)、CFDA、CFP、CFP(Cyan Fluorescent Protein)、CFP/YFP FRET、クロロフィル、クロモマイシンA、クロモマイシンA、CI-NERF pH 2.5、CI-NERF pH 2.5、CI-NERF pH 6.0、CI-NERF pH 6.0、CL-NERF、CMFDA、コエレンテラジン、コエレンテラジンcp、コエレンテラジンf、コエレンテラジンfcp、コエレンテラジンh、コエレンテラジンhcp、コエレンテラジンip、コエレンテラジンn、コエレンテラジンO、クマリンファロイジン、C-フィコシアニン、CPM、CTC、CTCフォルマザン、Cy2TM、Cy3.1 8、Cy3.5TM、Cy3TM、Cy5.1 8、Cy5.5TM、Cy5TM、Cy7TM、シアン3、シアン6、シアンGFP、サイクリックAMP蛍光センサー(FiCRhR)、CyQuant、CyQUANT GR-DNA、ダブシル、ダンシル、ダンシルアミン、ダンシルカダベリン、ダンシルクロリド、ダンシルDHPE、ダンシルフルオリド、DAPI、ダポキシル、ダポキシル2、ダポキシル3、DCFDA、DCFH(ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテート)、DDAO、DHR(ジヒドロローダミン123)、di-4-ANEPPS、di-8 ANEPPS、di-8-ANEPPS(non-ratio)、di-8-ANEPPS-脂質、DiA(4-di-16-ASP)、ジクロロジヒドロフルオレセインジアセテート(DCFH)、DiD、DIDS、ジヒドロローダミン123(DHR)、ジヒドロエチジウム、Dil(DilC18(3))、DilC18(“DiD”)ジニトロフェノール、DiO(DiOC18(3))、DiR、DiR(DilC18(7))、DM-NERF(高pH)、DM-NERF pH 4.0、DM-NERF pH 7.0、DNP、ドーパミン、DsRed、Draq5、DTAF、DY-630-NHS、DY-635-NHS、EBFP、ECFP、eCFP(Enhanced Cyan Fluorescent Protein)、EGFP、eGFP(Enhanced Green Fluorescent Protein)、ELF 97、エオシン、エオシン抗体複合型pH 8.0、エリスロシン、エリスロシンITC、臭化エチジウム、エチジウムモノアジド、エチジウムホモ二量体、エチジウムホモ二量体-1(EthD-1)、エチジウムホモ二量体-1-DNA、エチジウムホモ二量体-2、オイクリシン(euchrysin)、EukoLiIght、ユーロピウム-(III)-クロリド、EYFP、eYFP(Enhanced Yellow Fluorescent Protein)、Fast Blue、FDA、フォイルゲン(パラローザニリン)、FIF(Formaldehyde Induced Fluorescence)、FITC、FITC抗体、FITC抗体複合型pH 8.0、フラゾオレンジ、fluo-3、fluo-3 Ca2+、fluo-4、フルオレセイン、フルオレセイン(FITC)、フルオレセイン0.1 M NaOH、フルオレセイン抗体複合型pH 8.0、フルオレセインデキストランpH 8.0、フルオレセインジアセテート、フルオレセインpH 9.0、フルオロ-エメラルド、フルオロ-ゴールド(ヒドロキシスチルバミジン)、フルオロ-ルビー、FluorX、FM 1-43、FM 1-43脂質、FM 1-43TM、FM 4-64、フラレッド Ca2+、フラレッド, 高Ca、フラレッド, 低Ca、フラレッドTM(高pH)、フラレッドTM/フルオ-3、フラ-2, 高カルシウム、フラ-2, 低カルシウム、フラ-2/BCECF、ゲナクリルブリリアントレッドB、ゲナクリルブリリアントイエロー10GF、ゲナクリルピンク3G、ゲナクリルイエロー5GF、GeneBlazer(CCF2)、GFP(S65T)、GFP赤方変位型(rsGFP)、GFP野生型, 非UV励起(wtGFP)、GFP野生型, UV励起(wtGFP)、GFPuv、グロキサン酸(gloxalic acid)、グラニュラーブルー、ヘマトポルフィリン、HcRed、ヨウ化ヘキシジウム、Hoechst 33258(ビス-ベンズイミド)、Hoechst 33258、Hoechst 33342、Hoechst 34580、HPTS、ヒドロキシクマリン、ヒドロキシスチルバミジン、ヒドロキシスチルバミジン(FluoroGold)、ヒドロキシトリプタミン、インド-1, 高カルシウム、インド-1, 低カルシウム、インドジカルボシアニン(DiD)、インドトリカルボシアニン(DiR)、イントラホワイト、Cf、JC-1、JO-JO-1(C47H56I4N8O2)、JO-PRO-1、LaserPro、laurodan、LDS 751、LDS 751(DNA)、LDS 751(RNA)、ロイコフォアPAF、ロイコフォアSF、ロイコフォアWS、リサミンローダミン、リサミンローダミンB、LIVE/DEAD Kit Animal Cells、LOLO-1(C47H54Br2I4N8S2)、LO-PRO-1、ルシファーイエロー、ルシファーイエロー, CH、リソトラッカーブルー、リソトラッカーブルー-ホワイト、リソトラッカーグリーン、リソトラッカーレッド、リソトラッカーイエロー、LysoSensorブルー、LysoSensorグリーン、LysoSensorグリーンpH 5.0、LysoSensorイエローpH 3.0、LysoSensorイエロー/ブルー、Magグリーン、Magdalaレッド(フロキシンB)、Mag-Furaレッド、Mag-Fura-2、Mag-Fura-5、Mag-Indo-1、マグネシウムグリーン、マグネシウムグリーンMg2+、マグネシウムオレンジ、マラカイトグリーン、マリーナブルー、Maxilon Brilliant Flavin 0 GFF、Maxilon Brilliant Flavin 8 GFF、メロシアニン、メトキシクマリン、MitoTrackerグリーン、MitoTrackerグリーンFM、MitoTrackerグリーンFM, MeOH、MitoTrackerオレンジ、MitoTrackerレッド、MitoTrackerレッド, MeOH、ミトラマイシン(mitramycin)、モノブロモバイマン、モノブロモバイマン(mBBr-GSH)、モノクロロバイマン, MPS(Methyl Green Pyronine Stilbene)、MRFP、NBD、NBDアミン、NBD-X、NBD-X, MeOH、NeuroTrace 500/525、緑色蛍光Nissl染色-RNA、Nileブルー, EtOH、Nileレッド、Nileレッド-脂質、Nissl、ニトロベンズオキサゾール、ノルアドレナリン、ニュークレアファストレッド、ニュークレアイエロー、Nylosan Brilliant Iavin E8G、OliGreen(登録商標)、オレゴングリーン、オレゴングリーン488、オレゴングリーン488抗体複合型pH 8.0、オレゴングリーン488-X、オレゴングリーン514、オレゴングリーン514抗体複合体pH 8.0、オレゴングリーンTM、オレゴングリーンTM 488、オレゴングリーンTM 500、オレゴングリーンTM 514、パシフィックブルー、パシフィックブルー抗体複合型pH 8.0、パラローザニリン(フォイルゲン)、PBFI、PE-Cy5、PE-Cy7、PerCP、PerCP-Cy5.5、PE-TexasRed[レッド613]、フロキシンB(Magdala red)、フォールワイト(phorwite)AR、フォールワイトBKL、フォールワイトRev、フォールワイトRPA、ホスフィン3R、PhotoResist、フィコエリスリンB[PE]、フィコエリスリンR[PE]、PicoGreen dsDNA定量試薬、PKH26(Sigma)、PKH67、PMIA、ポントクロムブルーブラック(pontochrome blue black)、POPO-1(2,2’-[1,3-プロパンジイルビス[(ジメチルイミノ)-3,1-プロパンジイル-1(4H)-ピリジニル-4-イリデンメチリデン]]-ビス[3-メチル]-テトラヨーダイド)、POPO-1-DNA、POPO-3、POPOTM-3ヨーダイド(2,2’-[1,3-プロパンジイルビス[(ジメチルイミノ)-3,1-プロパンジイル-1(4H)-ピリジニル-4-イリデン-1-プロペン-1-イル-3-イリデン]]ビス[3-メチル]-テトラヨーダイド)、PO-PRO-1、PO-PRO-1-DNA、PO-PRO-3、プリムリン、プロシオンイエロー、プロピジウムヨーダイド(PI)、プロピジウムヨーダイド-DNA、PyMPO、ピレン、ピロニン、ピロニンB、ピロザールブリリアントフラビン7GF、QSY 7、キナクリンマスタード、レッド613[PE-TexasRed]、レ
ゾルフィン、RH 414、Rhod-2、ローダミン、ローダミン110、ローダミン110 pH 7.0、ローダミン123、ローダミン123, MeOH、ローダミン5 GLD、ローダミン6G、ローダミンB、ローダミンB 200、ローダミンB エキストラ、ローダミンBB、ローダミンBG、ローダミングリーン、ローダミンファリシジン、ローダミンファロイジン、ローダミンレッド、ローダミンWT、ローダミングリーンpH 7.0、ロードールグリーンPOPO-1-DNA pH 8.0、リボグリーン、ローズベンガル、R-フィコシアニン、R-フィコエリスリン(PE)、R-フィコエリスリンpH 7.5、RsGFP、S65A、S65C、S65L、S65T、サファイアGFP、SBFI、セロトニン、Sevron Brilliant Red 2B、Sevron Brilliant Red 4G、Sevron Brilliant Red B、Sevron Orange、Sevron Yellow L、sgBFPTM、sgBFPTM(super glow BFP)、sgGFPTM(スーパーグローGFP)、SITS、SITS(プリムリン)、SITS(スチルベンイソチオスルホン酸)、SNAFLカルセイン、SNAFL-1、SNAFL-2、SNARFカルセイン、SNARF1、グリーンナトリウム(sodium green)、グリーンナトリウムNa+、スペクトラム・レッド、SpectrumAqua、SpectrumGreen、SpectrumOrange、SPQ(6-メトキシ-N-(3-スルホプロピル)キノリニウム)、スチルベン、スルホローダミンB can C、スルホローダミンG Extra、SYBR(登録商標)Green、SYBR(登録商標)Green I、SYBR(登録商標)Green II、SYBR(登録商標)Gold、SYBR(登録商標)Safe DNA、SYPRO Ruby、SYTO 11、SYTO 12、SYTO 13、SYTO 13-DNA、SYTO 14、SYTO 15、SYTO 16、SYTO 17、SYTO 18、SYTO 20、SYTO 21、SYTO 22、SYTO 23、SYTO 24、SYTO 25、SYTO 40、SYTO 41、SYTO 42、SYTO 43、SYTO 44、SYTO 45、SYTO 45-DNA、SYTO 59、SYTO 60、SYTO 61、SYTO 62、SYTO 63、SYTO 64、SYTO 80、SYTO 81、SYTO 82、SYTO 83、SYTO 84、SYTO 85、SYTOX Blue、SYTOX Blue-DNA、SYTOX Green、SYTOX Orange、テトラサイクリン、テトラメチルローダミン(TRITC)、Texas RedTM、Texas Red-X POPO-1-DNA pH 7.2、Texas Red-XTM複合型、チアジカルボシアニン(DiSC3)、チアジンレッドR、チアゾールオレンジ、チオフラビン5、チオフラビンS、チオフラビンTCN、チオライト(thiolyte)、チノポールCBS(tinopol CBS)(カルコフロールホワイト)、TMR、TO-PRO(登録商標)-1ヨーダイド、TO-PRO(登録商標)-3ヨーダイド、TO-PRO-1、TO-PRO-1-DNA、TO-PRO-3、TO-PRO-5、TOTO-1(1-1’-[1,3-プロパンジイルビス[(ジメチルイミノ)-3,1-プロパンジイル]]ビス[4-[(3-メチル-2(3H)-ベンゾチアゾリリデン)メチル]]-テトラヨーダイド)、TOTO-1-DNA、TOTO-3(C53H62I4N6S2)、TriColor(PE-Cy5)、TRITCテトラメチルローダミンイソチオシアネート、True Blue、TruRed、ウルトラライト(ultralite)、ウラニンB、Uvitex SFC、wt GFP、WW 781、X-Rhod-1 Ca2+、X-ローダミン、XRITC、キシレンオレンジ、Y66F、Y66H、Y66W、イエローGFP、YFP、YO-PRO(登録商標)-1ヨーダイド、YO-PRO-1、YO-PRO-1-DNA、YO-PRO-3、YOYO-1(C49H58I4N6O2)、YOYO-1-DNA、YOYO-3(1,1’-[1,3-プロパンジイルビス[(ジメチルイミノ)-3,1-プロパンジイル]]ビス[4-[3-(3-メチル-2(3H)-ベンゾオキサ-ゾールイリデン)-1-プロペニル]]-テトラヨーダイド)。
Pico-GreenTMの用量は、約40μlの試料容量の測定につき、好ましくは約0.01から5μlの試薬、好ましくは0.05から2μl、さらに好ましくは0.1から0.5μlの試薬、最も好ましくは0.15から0.3μlの試薬である。使用される試薬量は、試料の容量に対して調製する。検出試薬が固体の形状で提供される場合、検出試薬のその含有量中の固体の量が、上述の容量中に溶解している固体の含有量に相当する。
さらに好ましい態様に従って、装置は、使い捨ての装置である。
ビリルビン、ヘモグロビン、または分散された脂質(ミセルも)を除去する(結合する)ことができる物質が、フィルター中に存在することができる。前記物質は、例えば、二酸化チタンまたはコレスチラミンなどであってよい。
さらに、キュベットは、好ましくは小型化されることができ、例えば、合成物質またはガラスの透明チューブからなり、そして、充填容量が約20から100μl、長さが約5から25 mm、そして内径が約1から4 mmである。
好ましくは、測定領域は、従来の(PCR)チューブの形を有するか、あるいは、従来の(PCR)チューブとして実現されているものであり、さらに好ましくは、残りの装置がそこに取り付けられる通気手段を含む。
第一検出試薬は、好ましくは、装置内の、例えば、そこに通じる液体チャネルなどの、測定領域の上流の領域、フィルター領域、または、混合チャンバーにおいて、提供される。第一検出試薬が測定される物質に結合することができるように、測定領域に入る前に、血液または分離された血漿または血清を、第一検出試薬と接触させる必要がある。検出される物質と第一検出試薬との複合体は、次に、血漿または血清と共に測定領域に入り、そこで、測定領域の特定の領域に固定されている第二検出試薬と結合する。この場所における複合体の集積によって、測定される成分を検出することができる。余分な第一検出試薬は0、血清または血漿に均一に分布したままである。全体の溶液に分布している第一検出試薬の濃度を反映する、対照値を測定することができる。この対照値は、閾値または限界値として、適当な測定装置内にソフトウェアを使用してプログラムすることもできる。この二段階反応の場合、検出において使用される両方の試薬は、検出試薬と呼ばれるが、第一検出試薬は、上述の通り、測定される成分に結合する際に、その検出可能特性を変化させなければならない。しかしながら、第一検出試薬は、この特性を示すことが望ましい。両方の検出試薬は、測定される成分に直接結合し、そして、成分の実際の検出または測定は、第一検出試薬の検出によって行われ、一方、第二検出試薬は、抗原をある位置に固定し、そして、この位置は、抗原を含有する液体による限定されたかん流によって起こる増幅の後、写真・光学的測定にかけられる。
本発明はさらに、好ましくは本発明の装置を使用することにより、血液中の成分の検出の方法、特に、血液中の成分の濃度の測定の方法に関連する。この方法には、(a)測定領域、フィルター、および検出試薬を有する装置の提供、(b)装置への液体の導入、および(c)装置を使用する、成分の検出または濃度の測定、の段階が含まれる。成分の検出または濃度の測定の段階は、従来の測定手段、好ましくは、蛍光光度計を使用して、好ましくは実行される。
特に図1に関連する、上記の記述は、図2から図6(または図7)に従う好ましい態様にもまた、類推的に当てはまる。図2から図4に従う好ましい態様は、図1に関して記述される装置の構造および操作様式の観点において、基本的に一致する装置を示すが、しかしながら、いくつかの測定領域3、好ましくは2つまたは3つの測定領域を含み、これらの測定領域を、異なる様式で配置することができる。一般的な構造および操作の様式に従って、図1の上記の記述について参照される。いくつかの測定領域3を含む設計に関連して、共通のフィルター領域5からのびる異なる測定領域または液体チャネル7、および流れの方向に従って、測定領域3、通気チャネル13および通気領域15は、複数の並行する測定または検出または決定を実行するために適しており、測定領域3および/または液体チャネル7のいずれも、同じまたは異なる検出試薬を含むことができることのみが、指摘される。
図12bは、図12aの装置に充填後の概略図を示す。図12cは、図12aおよび図12bの広い側面の図を示す。装置は弾性の壁面を有し、これは好ましくはフィルムによって形成されるか、または1つまたはそれ以上のフィルム領域を含み、そして、液体流入領域5並びにろ液領域を限定する。フィルター4は、装置の壁面に密着するかまたは、折り畳まれていてもよい。両方の状態において、壊れやすい可能性のあるフィルター膜を、機械的に支持する。開口部9を通って液体流入領域に注入することによって、および、特に好ましい態様において、液体流入領域の上流にバルブが存在するすることによって、液体流入領域とフィルターを超えたろ過領域との間に圧力差が存在する。フィルターの下流の領域、例えば、ろ液領域および/または測定領域もまた、弾性フィルムによって形成される場合、本発明のこの好ましい態様は、都合の良いことに、特に小さいデッドスペース容積をもたらし、そして、結果として、測定を実行するために、非常に少量のろ液が必要とされる。この装置はさらに、ろ液の伝達、測定、および/または除去に適する、例えばキャピラリーまたは開口部17を含む。
Claims (33)
- 測定領域、フィルタおよび/またはフィルタ領域、成分との相互作用のための少なくとも1つの検出試薬、液体を導入す得るための開口を含み、
ここで、フィルタは、開口と測定領域、ならびに液体注入領域のあいだに配置され、液体注入領域および/またはフィルタ領域は少なくとも部分的には好ましくは伸縮性の領域により形成されまたは限定され、この伸縮性の領域は好ましくはフィルムを含む、血液成分の検出のための、特に血液中の成分濃度を測定するための、装置。 - 液体注入領域が、開口と測定領域とのあいだ、好ましくは開口とフィルタとのあいだに配置される、請求項1に記載の装置。
- 検出または測定される成分が、生物中で生じる物質である、請求項1または2に記載の装置。
- 検出または測定される成分が、DNA、RNA、タンパク質、ホルモン、サイトカインを含む群から選択される生体分子である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の装置。
- 検出または測定される成分が、薬剤(medicament)または薬物(drug)である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の装置。
- 測定領域中の成分の存在および/または濃度を、発光、蛍光、自己蛍光、化学発光、電気化学発光、スペクトル吸収測光および/または生物発光の手段により測定することができる、請求項1〜5のいずれか1項に記載の装置。
- フィルタを通過させて血液の固形成分を分離するように、そして特に血液の固相と液相とを互いに分離するように、フィルタを適合させる、請求項1〜6のいずれか1項に記載の装置。
- 血液に対して環境気圧以上の圧力を生じるように、液体注入領域を適合させる、請求項1〜7のいずれか1項に記載の装置。
- 圧力条件下にて、フィルタを介して測定領域中に血液を導入する様に適合される、請求項1〜8のいずれか1項に記載の装置。
- 環境気圧以下の圧力が、装置中に行き渡っている、請求項1〜9のいずれか1項に記載の装置。
- 検出試薬が、測定領域中に提供される、請求項1〜10のいずれか1項に記載の装置。
- 検出試薬が、成分と直接的または間接的に相互作用する、請求項1〜11のいずれか1項に記載の装置。
- 測定される成分と相互作用する場合、検出試薬がその光学特性を変化する、請求項1〜12のいずれか1項に記載の装置。
- 検出試薬が、Pico-GreenTM、Alexa色素、エチジウムブロマイド、およびSYBR(登録商標)またはSytox(登録商標)色素を含む群から選択される、請求項1〜13のいずれか1項に記載の装置。
- 開口が一方向性バルブを含む、請求項1〜14のいずれか1項に記載の装置。
- 開口がLuerロックを含む、請求項1〜15のいずれか1項に記載の装置。
- 使い捨て装置である、請求項1〜16のいずれか1項に記載の装置。
- フィルタが血液から血清または血漿を分離するように適合される、請求項1〜17のいずれか1項に記載の装置。
- 商業的に入手可能な検出装置と適合性である、請求項1〜18のいずれか1項に記載の装置。
- 商業的に入手可能なキュベットまたは別の商業的に入手可能な測定容器の寸法を有し、そして好ましくは約10 mmの直径および/または約50 mm±15 mmの長さを有するか、または商業的に入手可能なキュベットのサイズへのアダプターの手段により適合される、請求項1〜19のいずれか1項に記載の装置。
- 少なくとも1つの排出手段を含む、請求項1〜20のいずれか1項に記載の装置。
- 排出手段が、狭開先(narrow groove)またはナローギャップの手段により、測定チャンバと接続される、請求項1〜21のいずれか1項に記載の装置。
- 装置の測定領域が、チューブの形状であり、好ましくは排出手段を含む、請求項1〜22のいずれか1項に記載の装置。
- 装置が、少なくとも第2の測定領域を含む、請求項1〜23のいずれか1項に記載の装置。
- 空試験値または較正値を提供するための少なくとも1つの領域を含む、請求項1〜24のいずれか1項に記載の装置。
- 測定される成分が、2つの検出試薬と相互作用する、請求項1〜25のいずれか1項に記載の装置。
- 第1の検出試薬が、測定領域の上流の装置中に備えられる、請求項26に記載の装置。
- 第2の検出試薬が、測定領域中の特定の領域に固定化される、請求項26または27に記載の装置。
- 測定領域および検出試薬を有する装置を提供する工程、装置中に血液を導入する工程、そして装置を使用することにより成分の濃度を検出しまたは測定する工程、
を含む、好ましくは請求項1〜28のいずれか1項に記載の装置を使用することによる、血液中の成分を検出するための、特に血液中の成分濃度を測定するための、方法。 - 血液をシリンジによって導入し、ここで好ましくはフィルタリングのために必要とされる圧力を適用する、請求項29に記載の方法。
- 血液中の成分を測定するための、請求項1〜28のいずれか1項に記載の装置および/または請求項29または30に記載の使用。
- 請求項1〜28のいずれか1項に記載の装置および蛍光標準を含むキット。
- 検出または測定される成分が、タンパク質である、請求項1〜28のいずれか1項に記載の装置。
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