CN104880442B - 一种测定盐酸多巴胺的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种测定盐酸多巴胺的方法。于7支10mL比色管中分别加入0.00、0.05、0.1、0.2、0.5、0.9、1.3mL 7.0×10－4～9.0×10－ 4mol/L的盐酸多巴胺溶液，再在每支管中加入0.5～3.0mL pH12.0～13.0的氯化钾‑氢氧化钠缓冲液和0.2～0.9mL 1.0×10－5mol/L的荧光桃红溶液；以不加盐酸多巴胺的溶液为试剂空白，用二次蒸馏水定容至刻度，静置20分钟后，于荧光光度计上，以536nm为激发波长，551nm为发射波长，用1cm荧光比色皿，分别测定含盐酸多巴胺溶液的荧光值F和试剂空白的荧光值F0，计算差值ΔF=F0‑F；另取盐酸多巴胺注射液1支转入100mL容量瓶中并定容，同法测定荧光值，计算出注射液中盐酸多巴胺的含量。本发明灵敏度高、线性范围宽、操作简便。
Description
技术领域
本发明涉及盐酸多巴胺的测定方法，特别是荧光桃红荧光猝灭法测定盐酸多巴胺的方法。
背景技术
多巴胺(Dopamine, DA)是一种最重要的儿茶酚胺，在中枢神经系统及肾脏系统中起着关键的作用。体内的多巴胺分泌失调将导致心脏病、精神分裂症和帕金森氏症等疾病(《基础神经药理学》，邹冈，科学出版社,1999年，203页)。盐酸多巴胺水溶性好、可增强心肌收缩力，增加排血量，并大量用于心肌梗塞、创伤、内毒素败血症、心脏手术、肾功能衰竭、充血性心力衰竭等引起的休克综合征。因此，建立一种灵敏、快速、简单的多巴胺检测方法，对生物分析、生理学、临床医学以及相关药物的质量控制研究具有十分重要的意义。目前，测定多巴胺的方法有电化学法（多巴胺在聚刚果红修饰电极上的伏安行为及其测定，陈伟等，《福建医科大学学报》, 2005年39卷1期，61～64页）、色谱法（基于新型硼酸固相萃取柱的多巴胺色谱分析方法，段语晖等，《分析化学》, 2013年41卷3期，406～411页）、化学发光法(流动注射化学发光法测定制剂和血浆的盐酸多巴胺，唐玉海等，《分析测试学报》,2006年25卷1期，119～121页)等。而荧光法具有分析灵敏度高、方法简便、仪器价廉等优点，常应用于药物分析检测。荧光桃红（RA）是一种性能优异的强荧光物质，常作为荧光试剂用于定量分析，但目前应用荧光桃红测定盐酸多巴胺的方法尚未见报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种荧光桃红荧光猝灭法测定盐酸多巴胺的方法。
具体步骤为：
在7支10mL比色管中分别加入0.00、0.05、0.1、0.2、0.5、0.9、1.3mL 7.0×10－4～9.0×10－4mol/L的盐酸多巴胺(DA)溶液，再在每支比色管中都分别加入0.5～3.0mLpH12.0～13.0的氯化钾-氢氧化钠缓冲溶液和0.2～0.9mL 1.0×10－5mol/L的荧光桃红（RA）溶液；以不加盐酸多巴胺的溶液为试剂空白，二次蒸馏水定容至刻度，摇匀，静置20分钟后，于荧光光度计上，设置激发波长为536nm，发射波长为551nm，激发和发射狭缝均为2.5nm，电压为600V，用1cm荧光比色皿，分别测定含盐酸多巴胺溶液的荧光强度值F和试剂空白的荧光强度值F0，计算荧光强度差值ΔF= F0-F； 其荧光强度差值ΔF与盐酸多巴胺浓度C在4.03～105μmol/L范围内成线性关系，线性回归方程为：ΔF=2.532C+19.04（C为盐酸多巴胺的浓度，单位为μmol/L）, 相关系数0.9992，检出限为1.26μmol/L；另取盐酸多巴胺注射液1支，全部转移至100mL容量瓶中，用二次蒸馏水定容至刻度，取0.1～0.3mL溶液同法测定荧光强度值，计算出盐酸多巴胺注射液中盐酸多巴胺的含量。
本发明测定方法灵敏度高、线性范围宽、操作简便。
附图说明
图1为本发明实施例空白与1.05×10-4 mol/L盐酸多巴胺的荧光光谱图。
图中标记a：pH13.0 KCl-NaOH – 0.7μmol/L RA的激发光谱；b：pH13.0 KCl-NaOH– 0.7μmol/L RA的发射光谱；c：pH13.0 KCl-NaOH – 0.7μmol/L RA-1.05×10-4mol/L DA的发射光谱。
具体实施方式
实施例：
在7支10mL比色管中分别加入0.00、0.05、0.1、0.2、0.5、0.9、1.3mL 8.068×10- 4mol/L的盐酸多巴胺溶液，再在每支比色管中都分别加入2.5mL pH13.0的氯化钾-氢氧化钠缓冲溶液和0.7mL 1.0×10－5mol/L的荧光桃红溶液，以不加盐酸多巴胺的溶液为试剂空白，二次蒸馏水定容至刻度，摇匀，静置20分钟。于荧光分光光度计上（Cary Eclipse型，美国Varian公司），设置激发波长为536nm，发射波长为551nm，激发和发射狭缝均为2.5nm，电压为600V，用1cm荧光比色皿，分别测定含盐酸多巴胺溶液的荧光强度值F和试剂空白的荧光强度值F0，计算荧光强度差值ΔF= F0-F； 其荧光强度差值ΔF与盐酸多巴胺浓度C在4.03～105μmol/L范围内成线性关系，线性回归方程为：ΔF=2.532C+19.04（C为盐酸多巴胺的浓度，单位为μmol/L）, 相关系数0.9992，检出限为1.26μmol/L。另取两个厂家(广东白云山明兴制药有限公司和上海禾丰制药厂，规格：盐酸多巴胺含量20mg/2mL)生产的盐酸多巴胺注射液各一支，分别全部转移至100mL容量瓶中，用二次蒸馏水定容至刻度，各取0.2mL溶液同法测定荧光强度值，计算出盐酸多巴胺注射液中盐酸多巴胺的含量，同时做了加标回收实验，结果见表1。
表1：盐酸多巴胺注射液测定结果（n=5）
| 样品 | 测定值(mg/2mL) | RSD(%) | 标示量(mg/2mL) | 回收率( %) |
| 1 | 20.06 | 1.35 | 20 | 108.15 |
| 2 | 19.91 | 1.36 | 20 | 108.56 |
Claims (1)
1.一种测定盐酸多巴胺的方法，其特征在于具体步骤为：
在7支10mL比色管中分别加入0.00、0.05、0.1、0.2、0.5、0.9、1.3mL 7.0×10－4～9.0×10－4mol/L的盐酸多巴胺溶液，再在每支比色管中都分别加入0.5～3.0mL pH12.0～13.0的氯化钾-氢氧化钠缓冲溶液和0.2～0.9mL 1.0×10－5mol/L的荧光桃红溶液；以不加盐酸多巴胺的溶液为试剂空白，二次蒸馏水定容至刻度，摇匀，静置20分钟后，于荧光光度计上，设置激发波长为536nm，发射波长为551nm，激发和发射狭缝均为2.5nm，电压为600V，用1cm荧光比色皿，分别测定含盐酸多巴胺溶液的荧光强度值F和试剂空白的荧光强度值F0，计算荧光强度差值ΔF= F0-F； 其荧光强度差值ΔF与盐酸多巴胺浓度C在4.03～105μmol/L范围内成线性关系，线性回归方程为：ΔF=2.532C+19.04，C为盐酸多巴胺的浓度，单位为μmol/L, 相关系数0.9992，检出限为1.26μmol/L；另取盐酸多巴胺注射液1支，全部转移至100mL容量瓶中，用二次蒸馏水定容至刻度，取0.1～0.3mL溶液同法测定荧光强度值，计算出盐酸多巴胺注射液中盐酸多巴胺的含量。
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