JP2011101643A - カンジダトロピカリス細胞及びその使用 - Google Patents
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- C12P7/62—Carboxylic acid esters
- C12P7/625—Polyesters of hydroxy carboxylic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12Y—ENZYMES
- C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
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Abstract
【解決手段】上記課題は、カンジダ トロピカリス細胞、特に株ATCC20336からのカンジダ トロピカリス細胞であって、その野生型に比較して、以下のA)、B)群を含む2つの群から選択されるイントロン不含の核酸配列によりコードされる少なくとも1つの酵素の減少した活性を有することを特徴とする細胞、その使用及びω−ヒドロキシカルボン酸及びω−ヒドロキシカルボン酸エステルの製造方法により解決された。
【選択図】なし
Description
A)配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号19、配列番号21、配列番号23、配列番号25、配列番号27、配列番号29、配列番号31、配列番号33、配列番号35、配列番号37、配列番号39、配列番号41、配列番号43、配列番号45、配列番号47、配列番号49、配列番号51、配列番号53、配列番号55、配列番号57、配列番号59、配列番号61、配列番号63、配列番号65及び配列番号67、特に配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号19、配列番号21、配列番号23、配列番号25、配列番号27、配列番号29、配列番号31、配列番号33、配列番号35、配列番号37、配列番号39、配列番号41、配列番号43、配列番号45、配列番号47、配列番号49及び配列番号51、極めて特に配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号19、配列番号21、配列番号23、配列番号25、及び配列番号27、
B)配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号19、配列番号21、配列番号23、配列番号25、配列番号27、配列番号29、配列番号31、配列番号33、配列番号35、配列番号37、配列番号39、配列番号41、配列番号43、配列番号45、配列番号47、配列番号49、配列番号51、配列番号53、配列番号55、配列番号57、配列番号59、配列番号61、配列番号63、配列番号65及び配列番号67、特に配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号19、配列番号21、配列番号23、配列番号25、配列番号27、配列番号29、配列番号31、配列番号33、配列番号35、配列番号37、配列番号39、配列番号41、配列番号43、配列番号45、配列番号47、配列番号49及び配列番号51、極めて特に配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号19、配列番号21、配列番号23、配列番号25、及び配列番号27の配列の1つに対して少なくとも80%、特に好ましくは少なくとも90%、より一層好ましくは少なくとも95%、最も好ましくは少なくとも99%同一である配列。
単一コロニーから出発して、YM培地(0.3%酵母エキス、0.3%麦芽エキス、0.5%ペプトン及び1.0%(w/w)グルコース)10mlを有する100mlのエルレンマイヤーフラスコを30℃で90rpmで24時間培養させた。次いで、この培養物から出発して、10mlを製造培地(1lにつき:25gグルコース、7.6gNH4Cl、1.5gNa2SO4、300mlの1mMリン酸カリウム緩衝液(pH7.0)、20mgZnSO4×7H2O、20mgMnSO4×4H2O、20mgニコチン酸、20mgピリドキシン、8mgチアミン、及び6mgパントテナート)100mlを有する1リットルのエルレンマイヤーフラスコ中へと接種した。これを24時間30℃で培養する。
−GAP(Deveroy, J. et al., Nucleic Acid Research 12 (1984),387頁, Genetics Computer Group University of Wisconsin, Medicine (Wi)、及び
−BLASTP、BLASTN及びFASTA(Altschul, S.et al., Journal of Molecular Biology 215 (1990),403-410頁。このBLASTプログラムは、the National Center for Biotechnology Information (NCBI)から、及び他の供給源から得ることができる(BLASTマニュアル, Altschul S. et al., NCBI NLM NIH Bethesda ND 22894; Altschul S. et al.、上述)。
期待閾値:10
ワードサイズ:28
マッチスコア:1
ミスマッチスコア:−2
ギャップコスト:リニア。
I)C.トロピカリス(C. tropicaiis)細胞、好ましくは、少なくとも部分的に、好ましくは完全に、そのβ−酸化が遮断されている細胞を提供する工程、及び
II)上述の核酸配列群A)及びB)から選択されるイントロン不含核酸配列の1つを含有する少なくとも1つの遺伝子を、この遺伝子中への外来DNA、特に選択マーカー遺伝子をコードするDNAの挿入、この遺伝子の少なくとも一部の欠失、この遺伝子配列中の点突然変異、及び、この遺伝子をRNA干渉の影響下におくこと、又は、この遺伝子部分、特にプロモーター領域の外来DNAでの交換により、改変する工程。
A)本発明による前述の細胞と、カルボン酸又はカルボン酸エステル、特にカルボン酸又はカルボン酸エステルであって6〜24個、好ましくは8〜18個、とりわけ好ましくは10〜16個の炭素原子のカルボン酸の鎖長を有し、これが好ましくは線状、飽和かつ非置換であり、かつ、1〜4個の炭素原子のエステルのアルコール成分の鎖長を有するもの、とりわけドデカノン酸又はドデカノン酸メチルエステルを含有する媒体とを接触させる工程、
B)この細胞がこのカルボン酸又はカルボン酸エステルから相応するω−ヒドロキシカルボン酸又はω−ヒドロキシカルボン酸エステルを形成できる条件下で細胞を培養する工程、及び
C)場合により、この形成されたω−ヒドロキシカルボン酸又はω−ヒドロキシカルボン酸エステルを単離する工程を含む製造方法。
A)そのβ−酸化において少なくとも部分的に遮断された株ATTC20336のカンジダ トロピカリス細胞であって、その野生型に比較して、前述の核酸配列群A)及びB)から選択されたイントロン不含核酸配列によりコードされた少なくとも1つの酵素の減少した活性を有する細胞と、ドデカノン酸又はドデカノン酸メチルエステルを含有する媒体とを接触させる工程、
この場合に、この酵素の活性の減少は、前述の核酸配列群A)及びB)から選択される核酸配列の1つを含む遺伝子の改変により達成され、
この場合に、この改変はこの遺伝子中への選択マーカー遺伝子の挿入からなり、
B)この細胞がこのカルボン酸又はカルボン酸エステルから相応するω−ヒドロキシカルボン酸又はω−ヒドロキシカルボン酸エステルを形成できる条件下で細胞を培養する工程、及び
C)場合により、この形成されたω−ヒドロキシカルボン酸又はω−ヒドロキシカルボン酸エステルを単離する工程。
Claims (10)
- A)配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号19、配列番号21、配列番号23、配列番号25、配列番号27、配列番号29、配列番号31、配列番号33、配列番号35、配列番号37、配列番号39、配列番号41、配列番号43、配列番号45、配列番号47、配列番号49、配列番号51、配列番号53、配列番号55、配列番号57、配列番号59、配列番号61、配列番号63、配列番号65及び配列番号67
B)配列番号1、配列番号3、配列番号5、配列番号7、配列番号9、配列番号11、配列番号13、配列番号15、配列番号17、配列番号19、配列番号21、配列番号23、配列番号25、配列番号27、配列番号29、配列番号31、配列番号33、配列番号35、配列番号37、配列番号39、配列番号41、配列番号43、配列番号45、配列番号47、配列番号49、配列番号51、配列番号53、配列番号55、配列番号57、配列番号59、配列番号61、配列番号63、配列番号65及び配列番号67の配列の1つに対して少なくとも80%同一である配列
からなる2つの群A)及びB)から選択されるイントロン不含の核酸配列によりコードされる酵素の少なくとも1の、野生型に比較して減少した活性を有することを特徴とするカンジダ トロピカリス(Candida tropicalis)細胞。 - この酵素活性における低下が請求項1記載の核酸配列の1つを含有する遺伝子の改変により達成され、この改変が、この遺伝子中への外来DNAの挿入、この遺伝子の少なくとも一部の欠失、この遺伝子配列中の点突然変異、この遺伝子をRNA干渉の影響下におくこと、及び、この遺伝子部分、特にプロモーター領域の外来DNAでの交換を含む群から選択されていることを特徴とする請求項1記載のカンジダ トロピカリス細胞。
- 外来DNAが選択マーカー遺伝子であることを特徴とする請求項2記載のカンジダ トロピカリス細胞。
- この細胞がそのβ−酸化において少なくとも部分的に遮断されることを特徴とする請求項1から3までのいずれか1項記載のカンジダ トロピカリス細胞。
- カンジダ トロピカリス細胞が、カンジダ トロピカリスH41、カンジダ トロピカリスH41B、カンジダ トロピカリスH51、カンジダ トロピカリスH45、カンジダ トロピカリスH43、カンジダ トロピカリスH53、カンジダ トロピカリスH534、カンジダ トロピカリス534B、カンジダ トロピカリスH435、カンジダ トロピカリスATCC20962及びカンジダ トロピカリスHDC100を含む群、特にカンジダ トロピカリスATCC20962及びカンジダ トロピカリスHDC100からなる群から選択される株に由来することを特徴とする請求項1から4までのいずれか1項記載のカンジダ トロピカリス細胞。
- ω−ヒドロキシカルボン酸又はω−ヒドロキシカルボン酸エステルの製造のための請求項1から5までのいずれか1項記載の細胞の使用。
- I)C.トロピカリス(C. tropicaiis)細胞を提供する工程、及び
II)請求項1に記載の核酸配列群A)及びB)から選択される配列の1つを含有する少なくとも1つの遺伝子を、この遺伝子中への外来DNA、特に選択マーカー遺伝子をコードするDNAの挿入、この遺伝子の少なくとも一部の欠失、この遺伝子配列中の点突然変異、この遺伝子をRNA干渉の影響下におくこと、及び、この遺伝子部分、特にプロモーター領域の外来DNAでの交換により、改変する工程
を含む請求項1から5までのいずれか1項記載のC.トロピカリス細胞の製造方法。 - ω−ヒドロキシカルボン酸又はω−ヒドロキシカルボン酸エステル、特にω−ヒドロキシカルボン酸又はω−ヒドロキシカルボン酸エステルであって6〜24個の炭素原子のカルボン酸鎖長及び1〜4個の炭素原子のエステルのアルコール成分鎖長を有するもの、特に12−ヒドロキシドデカノン酸又は12−ヒドロキシドデカノン酸メチルエステルの製造方法であって、
a)請求項1から5のいずれか1項に記載の細胞と、カルボン酸又はカルボン酸エステルを含有する媒体とを接触させる工程、
b)この細胞がこのカルボン酸又はカルボン酸エステルから相応するω−ヒドロキシカルボン酸又はω−ヒドロキシカルボン酸エステルを形成できる条件下で細胞を培養する工程、及び
c)場合により、この形成されたω−ヒドロキシカルボン酸又はω−ヒドロキシカルボン酸エステルを単離する工程を含む製造方法。 - 請求項5に記載のそのβ−酸化において少なくとも部分的に遮断されている細胞を使用することを特徴とする請求項8記載の方法。
- ポリマーの製造のための、請求項8又は9に記載の方法により得られるω−ヒドロキシカルボン酸又はω−ヒドロキシカルボン酸エステルの使用。
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