JP2010532868A - 試験サンプル中の標的分子の蛍光検出の向上のためのシステムおよび方法 - Google Patents
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Abstract
Description
Claims (72)
- 照射装置による使用のための試験サンプル中の標的分子の蛍光検出を向上させる方法であって、
(a)電磁周波数(EMF)放射の吸収に、およびEMF放射の吸収に後続する第1の蛍光シグナルの発光に、効果的に適合する1つまたは複数の第1の蛍光体を提供する段階と、
(b)第1の蛍光シグナルの第1の入射部分の吸収に、および第1の蛍光シグナルから識別可能な第2の蛍光シグナルで、第1の入射部分の吸収に後続する第2の蛍光シグナルの発光に、効果的に適合する1つまたは複数の第2の蛍光体を提供する段階と、
を含み、
第1の蛍光体および第2の蛍光体が、試験サンプルとの効果的な組合せに、および標的分子が試験サンプル中に存在する場合、第2の蛍光体に対して第1の蛍光体を固定するような標的分子に対する固定に、適合し、
照射装置を介するEMF放射による少なくとも第1の蛍光体の効果的な照射に後続して、第1の蛍光体は第1の蛍光シグナルを発光し、標的分子が試験サンプル中に存在する場合、第2の蛍光体は第1の蛍光シグナルの第1の入射部分を吸収して第2の蛍光シグナルを発光し、
第1のスペクトルシグナルを、標的分子が試験サンプル中に存在する場合第2のスペクトルシグナルと共に、効果的に検出可能である、
ことを特徴とする方法。 - 段階(a)において、前記第1の蛍光体が、第1の蛍光シグナルに対応する第1の蛍光体の発光プロファイルによって特徴づけられ、段階(b)において、前記第2の蛍光体が、第1の蛍光体発光プロファイルと実質的に重複する第2の蛍光体の吸収プロファイルによって特徴づけられる、
ことを特徴とする請求項1に記載の方法。 - 段階(a)において、前記第1の蛍光体発光プロファイルが、約580ナノメーター(nm)の波長のピーク強度によって特徴づけられる、
ことを特徴とする請求項2に記載の方法。 - 段階(a)において、前記第1の蛍光体が、EMF放射に実質的に対応する第1の蛍光体の吸収プロファイルによって特徴づけられ、段階(b)において、前記第2の蛍光体が、第1の蛍光体の吸収プロファイルから実質的に離れる第2の蛍光シグナルに対応する第2の蛍光体の発光プロファイルによって特徴づけられる、
ことを特徴とする請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。 - 段階(a)において、前記第1の蛍光体が、マイクロビーズによって結合され、標的分子(試験サンプル中に存在する場合)に対して第1の蛍光体を固定するために、マイクロビーズおよび標的分子との効果的な結合に適合する生体認識分子(BRM)を提供する段階(c)を段階(a)の後にさらに含む、
ことを特徴とする請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。 - 段階(c)において、前記BRMが、1つまたは複数の抗体分子を含む、
ことを特徴とする請求項5に記載の方法。 - 標的分子としての1つまたは複数の一本鎖標的DNA分子の検出を目的とし、ならびに段階(c)において、前記BRMが、標的DNA分子に相補的なおよび効果的なハイブリダイズに適合する1つまたは複数の一本鎖生体認識DNA分子を含む、
ことを特徴とする請求項5に記載の方法。 - 段階(a)において、前記第1の蛍光体が、1つまたは複数の量子ドットタイプの量子ドットを含む、
ことを特徴とする請求項5〜7のいずれか一項に記載の方法。 - 段階(a)において、前記第1のスペクトルシグナルの強度が、マイクロビーズの各々によって結合される量子ドットの数に依存する、
ことを特徴とする請求項8に記載の方法。 - 段階(a)において、前記第1のスペクトルシグナルの色が、マイクロビーズの各々によって結合される量子ドットタイプのサイズに依存する、
ことを特徴とする請求項8および請求項9のいずれか一項に記載の方法。 - 段階(b)において、前記第2の蛍光体が、標的分子との実質的に効果的な直接的結合に適合する、
ことを特徴とする請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。 - 標的分子が試験サンプル中に存在する場合、標的分子に対して第2の蛍光体を固定するために、第2の蛍光体および標的分子との効果的に結合するようにされたマーカー分子を提供する段階(d)を段階(b)の後にさらに含む、
ことを特徴とする請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。 - 段階(d)において、前記マーカー分子が、1つまたは複数の抗原分子を含む、
ことを特徴とする請求項12に記載の方法。 - 標的分子としての1つまたは複数の一本鎖標的DNA分子の検出を目的とし、ならびに段階(d)において、前記マーカー分子が、標的DNA分子に相補的なおよび効果的なハイブリダイズに適合する1つまたは複数の一本鎖マーカーDNA分子を含む、
ことを特徴とする請求項12に記載の方法。 - 前記第2の蛍光体が、マーカーDNA分子の遠位端部部分に実質的に隣接して効果的に固定された、
ことを特徴とする請求項14に記載の方法。 - 前記第2の蛍光体が、1つまたは複数の蛍光色素を含む、
ことを特徴とする請求項11〜15のいずれか一項に記載の方法。 - 前記蛍光色素がシアニン−5(Cy5)分子色素を含む、
ことを特徴とする請求項16に記載の方法。 - 前記第1の蛍光体が、第2の蛍光体よりも高い発光波長を有する、
ことを特徴とする請求項1〜17のいずれか一項に記載の方法。 - 照射装置としてのレーザーによる使用を目的とし、および段階(a)において、前記EMF放射が、約488ナノメーター(nm)の波長を有する、
ことを特徴とする請求項1〜18のいずれか一項に記載の方法。 - 標的分子が試験サンプル中に存在する場合、前記標的分子が、試験サンプルとの第1の蛍光体および第2の蛍光体の効果的な組合せの後に、既定の最大距離にわたり実質的に減衰しない第1のスペクトルシグナルの放射束で、第1の蛍光体の既定の最大距離内に第2の蛍光体を固定する、
ことを特徴とする請求項1〜19のいずれか一項に記載の方法。 - 前記既定の最大距離が段階(a)で提供される第1の蛍光体に依存し、前記既定の最大距離が約10マイクロメートル(μm)未満である、
ことを特徴とする請求項20に記載の方法。 - 前記既定の最大距離が、約300ナノメーター(nm)程度である、
ことを特徴とする請求項21に記載の方法。 - 感染症の検出のための、請求項1〜22のいずれか一項に記載の方法。
- 癌の検出のための、請求項1〜22のいずれか一項に記載の方法。
- 嚢胞性繊維症の検出のための、請求項1〜22のいずれか一項に記載の方法。
- 生体分子分析における使用のための、請求項1〜25のいずれか一項に記載の方法。
- 生体分子分析としてのサンドイッチ分析における使用のための、請求項26に記載の方法。
- 段階(b)において、前記第2の蛍光体もまた、EMF放射の吸収に、およびEMF放射の吸収に後続する第2の蛍光シグナルの発光に効果的に適合する、
ことを特徴とする請求項1〜27のいずれか一項に記載の方法。 - 試験サンプルおよび第2の蛍光体と第1の蛍光体を効果的に組み合わせる段階(e)を段階(b)の後にさらに含む、
ことを特徴とする請求項1〜27のいずれか一項に記載の方法。 - BRM、試験サンプル、および第2の蛍光体とマイクロビーズを効果的に組み合わせる段階(e)を段階(c)の後にさらに含む、
ことを特徴とする請求項5〜10のいずれか一項に記載の方法。 - 試験サンプル、マーカー分子および第2の蛍光体と第1の蛍光体を効果的に組み合わせる段階(e)を段階(d)の後にさらに含む、
ことを特徴とする請求項12〜15のいずれか一項に記載の方法。 - 照射装置を介するEMF放射により少なくとも第1の蛍光体を効果的に照射する段階(f)を段階(e)の後にさらに含む、
ことを特徴とする請求項29〜31のいずれか一項に記載の方法。 - 段階(b)において、前記第2の蛍光体が、EMF放射の吸収に、およびEMF放射の吸収に後続する第2の蛍光シグナルの発光に効果的に適合し、照射装置を介するEMF放射により第1の蛍光体および第2の蛍光体を効果的に照射する段階(f)を段階(e)の後にさらに含む、
ことを特徴とする請求項29〜31のいずれか一項に記載の方法。 - 標的分子が試験サンプル中に存在する場合、第2のスペクトルシグナルと共に、第1のスペクトルシグナルを効果的に検出する段階(g)を段階(f)の後にさらに含む、
ことを特徴とする請求項32および請求項33のいずれか一項に記載の方法。 - 照射装置による使用のための、試験サンプル中の標的分子の蛍光検出の向上のためのシステムであって、
(a)電磁周波数(EMF)放射の吸収に、およびEMF放射の吸収に後続する第1の蛍光シグナルの発光に、効果的に適合する1つまたは複数の第1の蛍光体と、
(b)第1の蛍光シグナルの第1の入射部分の吸収に、および第1の蛍光シグナルから識別可能な第2の蛍光シグナルで、第1の入射部分の吸収に後続する第2の蛍光シグナルの発光に、効果的に適合する1つまたは複数の第2の蛍光体と、
を含み、
第1の蛍光体および第2の蛍光体が、試験サンプルとの効果的な組合せに、および標的分子が試験サンプル中に存在する場合、第2の蛍光体に対して第1の蛍光体を固定するような標的分子に対する固定に、適合し、
照射装置を介するEMF放射による少なくとも第1の蛍光体の効果的な照射に後続して、第1の蛍光体は第1の蛍光シグナルを発光し、標的分子が試験サンプル中に存在する場合、第2の蛍光体は第1の蛍光シグナルの第1の入射部分を吸収して第2の蛍光シグナルを発光し、
第1のスペクトルシグナルを、標的分子が試験サンプル中に存在する場合第2のスペクトルシグナルと共に、効果的に検出可能である、
ことを特徴とするシステム。 - 前記第1の蛍光体が、第1の蛍光シグナルに対応する第1の蛍光体発光プロファイルによって特徴づけられ、前記第2の蛍光体が、第1の蛍光体発光プロファイルと実質的に重複する第2の蛍光体吸収プロファイルによって特徴づけられる、
ことを特徴とする請求項35に記載のシステム。 - 前記第1の蛍光体発光プロファイルが、約580ナノメーター(nm)の波長のピーク強度によって特徴づけられる、
ことを特徴とする請求項36に記載のシステム。 - 前記第1の蛍光体が、EMF放射に実質的に対応する第1の蛍光体の吸収プロファイルによって特徴づけられ、前記第2の蛍光体が、第1の蛍光体の吸収プロファイルから実質的に離れる第2の蛍光シグナルに対応する第2の蛍光体の発光プロファイルによって特徴づけられる、
ことを特徴とする請求項35〜37のいずれか一項に記載のシステム。 - 前記第1の蛍光体が、マイクロビーズによって結合され、標的分子が試験サンプル中に存在する場合、標的分子に対して第1の蛍光体を固定するようなマイクロビーズおよび標的分子と効果的な結合に適合する生体認識分子(BRM)をさらに含む、
ことを特徴とする請求項35〜38のいずれか一項に記載のシステム。 - 前記BRMが、1つまたは複数の抗体分子を含む、
ことを特徴とする請求項39に記載のシステム。 - 標的分子としての1つまたは複数の一本鎖標的DNA分子の検出を目的とし、ならびに前記BRMが、標的DNA分子に相補的なおよび効果的なハイブリダイズに適合する1つまたは複数の一本鎖生体認識DNA分子を含む、
ことを特徴とする請求項39に記載のシステム。 - 前記第1の蛍光体が、1つまたは複数の量子ドットタイプの量子ドットを含む、
ことを特徴とする請求項39〜41のいずれか一項に記載のシステム。 - 前記第1のスペクトルシグナルの強度が、マイクロビーズの各々によって結合される量子ドットの数に依存する、
ことを特徴とする請求項42に記載のシステム。 - 前記第1のスペクトルシグナルの色が、マイクロビーズの各々によって結合される量子ドットタイプのサイズに依存する、
ことを特徴とする請求項42および請求項43のいずれか一項に記載のシステム。 - 前記第2の蛍光体が、標的分子との実質的に効果的な直接的結合に適合する、
ことを特徴とする請求項35〜44のいずれか一項に記載のシステム。 - 標的分子が試験サンプル中に存在する場合、標的分子に対して第2の蛍光体を固定するために、第2の蛍光体および標的分子と効果的に結合するようにされたマーカー分子をさらに含む、
ことを特徴とする請求項35〜44のいずれか一項に記載のシステム。 - 前記マーカー分子が、1つまたは複数の抗原分子を含む、
ことを特徴とする請求項46に記載のシステム。 - 標的分子としての1つまたは複数の一本鎖標的DNA分子の検出を目的とし、ならびに前記マーカー分子が、標的DNA分子に相補的であるとともに効果的なハイブリダイズに適合する1つまたは複数の一本鎖マーカーDNA分子を含む、
ことを特徴とする請求項46に記載のシステム。 - 前記第2の蛍光体が、マーカーDNA分子の遠位端部部分に実質的に隣接して効果的に固定される、
ことを特徴とする請求項48に記載のシステム。 - 前記第2の蛍光体が、1つまたは複数の蛍光色素を含む、
請求項45〜49のいずれか一項に記載のシステム。 - 前記蛍光色素が、シアニン−5(Cy5)分子色素を含む、
ことを特徴とする請求項50に記載のシステム。 - 前記第1の蛍光体が、第2の蛍光体よりも高い発光波長を有する、
ことを特徴とする請求項35〜51のいずれか一項に記載のシステム。 - 照射装置としてのレーザーによる使用を目的とし、および前記EMF放射が約488ナノメーター(nm)の波長を有する、
ことを特徴とする請求項35〜52のいずれか一項に記載のシステム。 - 標的分子が試験サンプル中に存在する場合、前記標的分子が、試験サンプルとの第1の蛍光体および第2の蛍光体の効果的な組合せに後続して、既定の最大距離にわたり実質的に減衰しない第1のスペクトルシグナルの放射束で、第1の蛍光体の既定の最大距離内に第2の蛍光体を固定する、請求項35〜53のいずれか一項に記載のシステム。
- 前記既定の最大距離が、第1の蛍光体に依存し、前記既定の最大距離が、約10マイクロメートル(μm)未満である、
ことを特徴とする請求項54に記載のシステム。 - 前記既定の最大距離が、約300ナノメーター(nm)程度である、
ことを特徴とする請求項55に記載のシステム。 - 感染症の検出のための、請求項35〜56のいずれか一項に記載のシステム。
- 癌の検出のための、請求項35〜56のいずれか一項に記載のシステム。
- 嚢胞性繊維症の検出のための、請求項35〜56のいずれか一項に記載のシステム。
- 生体分子分析における使用のための、請求項35〜60のいずれか一項に記載のシステム。
- 生体分子分析としてのサンドイッチ分析における使用のための、請求項61に記載のシステム。
- 前記第2の蛍光体がまた、EMF放射の吸収に、およびEMF放射の吸収に後続する第2の蛍光シグナルの発光に効果的に適合する、
ことを特徴とする請求項35〜61のいずれか一項に記載のシステム。 - 前記マイクロビーズが、BRM、試験サンプルおよび第2の蛍光体と効果的に組み合わせられる、
ことを特徴とする請求項39〜44のいずれか一項に記載のシステム。 - 前記第1の蛍光体が、試験サンプル、マーカー分子および第2の蛍光体と効果的に組み合わせられる、
ことを特徴とする請求項46〜49のいずれか一項に記載のシステム。 - 前記第2の蛍光体が、EMFの放射の吸収に、およびEMF放射の吸収に後続する第2の蛍光シグナルの発光に効果的に適合し、前記第1の蛍光体および前記第2の蛍光体が、照射装置を介するEMF放射により効果的に照射される、
ことを特徴とする請求項63および請求項64のいずれか一項に記載のシステム。 - 請求項1〜34のいずれか一項に記載の方法において、または請求項35〜65のいずれか一項に記載のシステムにおいて第1の蛍光体の1つとして使用される蛍光体。
- 請求項1〜34のいずれか一項に記載の方法において、または請求項35〜65のいずれか一項に記載のシステムにおいて第1の蛍光体の1つとして使用される量子ドット。
- 請求項1〜34のいずれか一項に記載の方法において、または請求項35〜65のいずれか一項に記載のシステムにおいて第2の蛍光体の1つとして使用される蛍光体。
- 請求項1〜34のいずれか一項に記載の方法において、または請求項35〜65のいずれか一項に記載のシステムにおいて第2の蛍光体の1つとして使用される蛍光色素。
- 請求項5〜10および請求項30のいずれか一項に記載の方法における、または請求項39〜44および請求項63のいずれか一項に記載のシステムにおける使用のためのマイクロビーズ。
- 請求項5〜10および請求項30のいずれか一項に記載の方法における、または請求項39〜44および請求項63のいずれか一項に記載のシステムにおける使用のための生体認識分子。
- 請求項12〜15および請求項31のいずれか一項に記載の方法における、または請求項46〜49および請求項64のいずれか一項に記載のシステムにおける使用のためのマーカー分子。
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