JP2010531635A5 - - Google Patents
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Claims (28)
- 以下のa)酢酸キナーゼ、b)乳酸デヒドロゲナーゼ、c)アルコールデヒドロゲナーゼ、d)ピルビン酸ギ酸リアーゼ、e)メチルグリオキサールシンターゼ、f)ピルビン酸オキシダーゼ、g)クエン酸リアーゼ、h)アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、i)ギ酸輸送体、j)リン酸アセチルトランスフェラーゼ、k)リンゴ酸酵素、およびl)プロピオン酸キナーゼ/α−ケト酪酸ギ酸リアーゼをコードする標的遺伝子に対する遺伝的改変(該遺伝的改変は該標的遺伝子により生産されるポリペプチドの酵素活性を不活性化する)を含む、遺伝的に改変された細菌株。
- 大腸菌、Gluconobacter oxydans、Gluconobacter asaii、Achromobacter delmarvae、Achromobacter viscosus、Achromobacter lacticum、Agrobacterium tumefaciens、Agrobacterium radiobacter、Alcaligenes faecalis、Arthrobacter citreus、Arthrobacter tumescens、Arthrobacter paraffineus、Arthrobacter hydrocarboglutamicus、Arthrobacter oxydans、Aureobacterium saperdae、Azotobacter indicus、Brevibacterium ammoniagenes、divaricatum、Brevibacterium lactofermentum、Brevibacterium flavum、Brevibacterium globosum、Brevibacterium fuscum、Brevibacterium ketoglutamicum、Brevibacterium helcolum、Brevibacterium pusillum、Brevibacterium testaceum、Brevibacterium roseum、Brevibacterium immariophilium、Brevibacterium linens、Brevibacterium protopharmiae、Corynebacterium acetophilum、Corynebacterium glutamicum、Corynebacterium callunae、Corynebacterium acetoacidophilum、Corynebacterium acetoglutamium、Enterobacter aerogenes、Erwinia amylovora、Erwinia carotovora、Erwinia herbicola、Erwinia chrysanthemi、Flavobacterium peregrinum、Flavobacterium fucatum、Flavobacterium aurantinum、Flavobacterium rhenanum、Flavobacterium sewanense、Flavobacterium breve、Flavobacterium meningosepticum、ミクロコッカス種CCM825、Morganella morganii、Nocardia opaca、Nocardia rugosa、Planococcus eucinatus、Proteus rettgeri、Propionibacterium shermanii、Pseudomonas synxantha、Pseudomonas azotoformans、Pseudomonas fluorescens、Pseudomonas ovalis、Pseudomonas stutzeri、Pseudomonas acidovolans、Pseudomonas mucidolens、Pseudomonas testosteroni、Pseudomonas aeruginosa、Rhodococcus erythropolis、Rhodococcus rhodochrous、ロドコッカス種ATCC15592、ロドコッカス種ATCC19070、Sporosarcina ureae、Staphylococcus aureus、Vibrio metschnikovii、Vibrio tyrogenes、Actinomadura madurae、Actionomyces violaceochromogenes、Kitasatosporia parulosa、Streptomyces coelicolor、Streptomyces flavelus、Streptomyces griseolus、Streptomyces lividans、Streptomyces olivaceus、Streptomyces tanashiensis、Streptomyces virginiae、Streptomyces antibioticus、Streptomyces cacaoi、Streptomyces lavendulae、Streptomyces viridochromogenes、Aeromonas salmonicida、Bacillus pumilus、Bacillus circulans、Bacillus thiaminolyticus、Escherichia freundii、Microbacterium ammoniaphilum、Serratia marcescens、Salmonella typhimurium、Salmonella schottmulleriまたはXanthomonas citriである、請求項1に記載の遺伝的に改変された細菌株。
- 大腸菌である、請求項2に記載の遺伝的に改変された細菌株。
- (a)クエン酸リアーゼ遺伝子と、以下のa)酢酸キナーゼ、b)乳酸デヒドロゲナーゼ、c)アルコールデヒドロゲナーゼ、d)ピルビン酸ギ酸リアーゼ、e)メチルグリオキサールシンターゼ、f)ピルビン酸オキシダーゼ、g)アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、h)ギ酸輸送体、i)リン酸アセチルトランスフェラーゼ、j)リンゴ酸酵素、および/またはk)プロピオン酸キナーゼ/α−ケト酪酸ギ酸リアーゼをコードする標的遺伝子の1以上に対する遺伝的改変;または
(b)クエン酸リアーゼ遺伝子、乳酸デヒドロゲナーゼ遺伝子、アルコールデヒドロゲナーゼ遺伝子、酢酸キナーゼ遺伝子、ギ酸輸送体遺伝子、ピルビン酸ギ酸リアーゼ遺伝子、メチルグリオキサールシンターゼ遺伝子、ピルビン酸オキシダーゼ遺伝子と、以下の標的遺伝子:a)アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ、b)リン酸アセチルトランスフェラーゼ、c)リンゴ酸酵素、および/またはd)プロピオン酸キナーゼ/α−ケト酪酸ギ酸リアーゼの1以上に対する遺伝的改変(該遺伝的改変は該遺伝子または該標的遺伝子により生産されるポリペプチドの酵素活性を不活性化する)
を含む、遺伝的に改変された細菌株。 - 大腸菌、Gluconobacter oxydans、Gluconobacter asaii、Achromobacter delmarvae、Achromobacter viscosus、Achromobacter lacticum、Agrobacterium tumefaciens、Agrobacterium radiobacter、Alcaligenes faecalis、Arthrobacter citreus、Arthrobacter tumescens、Arthrobacter paraffineus、Arthrobacter hydrocarboglutamicus、Arthrobacter oxydans、Aureobacterium saperdae、Azotobacter indicus、Brevibacterium ammoniagenes、divaricatum、Brevibacterium lactofermentum、Brevibacterium flavum、Brevibacterium globosum、Brevibacterium fuscum、Brevibacterium ketoglutamicum、Brevibacterium helcolum、Brevibacterium pusillum、Brevibacterium testaceum、Brevibacterium roseum、Brevibacterium immariophilium、Brevibacterium linens、Brevibacterium protopharmiae、Corynebacterium acetophilum、Corynebacterium glutamicum、Corynebacterium callunae、Corynebacterium acetoacidophilum、Corynebacterium acetoglutamium、Enterobacter aerogenes、Erwinia amylovora、Erwinia carotovora、Erwinia herbicola、Erwinia chrysanthemi、Flavobacterium peregrinum、Flavobacterium fucatum、Flavobacterium aurantinum、Flavobacterium rhenanum、Flavobacterium sewanense、Flavobacterium breve、Flavobacterium meningosepticum、ミクロコッカス種CCM825、Morganella morganii、Nocardia opaca、Nocardia rugosa、Planococcus eucinatus、Proteus rettgeri、Propionibacterium shermanii、Pseudomonas synxantha、Pseudomonas azotoformans、Pseudomonas fluorescens、Pseudomonas ovalis、Pseudomonas stutzeri、Pseudomonas acidovolans、Pseudomonas mucidolens、Pseudomonas testosteroni、Pseudomonas aeruginosa、Rhodococcus erythropolis、Rhodococcus rhodochrous、ロドコッカス種ATCC15592、ロドコッカス種ATCC19070、Sporosarcina ureae、Staphylococcus aureus、Vibrio metschnikovii、Vibrio tyrogenes、Actinomadura madurae、Actionomyces violaceochromogenes、Kitasatosporia parulosa、Streptomyces coelicolor、Streptomyces flavelus、Streptomyces griseolus、Streptomyces lividans、Streptomyces olivaceus、Streptomyces tanashiensis、Streptomyces virginiae、Streptomyces antibioticus、Streptomyces cacaoi、Streptomyces lavendulae、Streptomyces viridochromogenes、Aeromonas salmonicida、Bacillus pumilus、Bacillus circulans、Bacillus thiaminolyticus、Escherichia freundii、Microbacterium ammoniaphilum、Serratia marcescens、Salmonella typhimurium、Salmonella schottmulleriまたはXanthomonas citriである、請求項4に記載の遺伝的に改変された細菌株。
- 大腸菌である、請求項5に記載の遺伝的に改変された細菌株。
- 代謝的に進化されている、請求項1、2、3、4、5または6に記載の遺伝的に改変された細菌株。
- 前記標的遺伝子もしくはその一部、または前記の複数の標的遺伝子もしくはそれらの一部が欠失、フレームシフト突然変異、点突然変異、停止コドンの挿入またはそれらの組合せにより不活性化されている、請求項1 に記載の遺伝的に改変された細菌株。
- 外因性の遺伝子もしくはそのフラグメントを含まない、または天然の遺伝子のみを含む、請求項1 に記載の遺伝的に改変された細菌株。
- 1)遺伝的に改変された細菌株が不活性化された以下の遺伝子:a)フマル酸レダクターゼ;b)ATPシンターゼ;c)2−ケトグルタル酸デヒドロゲナーゼ;d)コハク酸デヒドロゲナーゼ;e)グルコース輸送体;f)イソクエン酸リアーゼレプレッサーの1以上を有していなくともよく;かつ/または2)遺伝的に改変された株がリンゴ酸デヒドロゲナーゼ、ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ、ピルビン酸カルボキシラーゼおよび/またはクエン酸シンターゼをコードし、かつ/または過剰発現するプラスミドまたは多重コピープラスミドを含まない、請求項1 に記載の遺伝的に改変された細菌株。
- 代謝的に進化されている、請求項 8、9または10 に記載の遺伝的に改変された細菌株。
- a)少なくとも200mM、250mM、300mM、350mM、400mM、450mM、500mM、550mM、600mM、650mMまたは700mM濃度のコハク酸;
b)少なくとも200mM、250mM、300mM、350mM、400mM、450mM、500mM、550mM、600mM、650mMまたは700mM濃度のフマル酸;
c)少なくとも200mM、250mM、300mM、350mM、400mM、450mMまたは500mM 濃度のマレイン酸
を生産する、請求項1〜6または8〜10のいずれか一項に記載の遺伝的に改変された細菌株。 - KJ012、KJ017、KJ032、KJ044、KJ059、KJ060、KJ070、KJ071、KJ072、KJ073、KJ076、KJ079、KJ091、KJ098、KJ104、KJ110、KJ119、KJ122またはKJ134である、遺伝的に改変された細菌株。
- 遺伝的に改変された細菌株を培養するまたは増殖させる方法であって、請求項1 に記載の1以上の遺伝的に改変された細菌株を培養培地に接種すること、および該遺伝的に改変された細菌株を培養するまたは増殖させることを含む、方法。
- コハク酸、フマル酸またはマレイン酸を生産する方法であって、請求項1 に記載の1以上の遺伝的に改変された細菌株を、コハク酸またはマレイン酸またはフマル酸の生産を可能とする条件下で培養することを含む、方法。
- 前記の1以上の遺伝的に改変された細菌株がKJ012、KJ017、KJ032、KJ044、KJ059、KJ060、KJ070、KJ071、KJ072、KJ073、KJ076、KJ079、KJ091、KJ098、KJ104、KJ110、KJ119、KJ122またはKJ134である、請求項15に記載の方法。
- 前記の遺伝的に改変された細菌株が無機塩培地で培養される、請求項14〜16のいずれか一項に記載の方法。
- 無機塩培地が2%〜20%(w/v)の間の炭水化物を含む、請求項17に記載の方法。
- 無機塩培地が2%、2.5%、3%、3.5%、4%、4.5%、5%、5.5%、6%、6.5%、7%、7.5%、8%、8.5%、9%、9.5%、10%、10.5%、11%、11.5%、12%、12.5%、13%、13.5%、14%、14.5%、15%、15.5%、16%、16.5%、17%、17.5%、18%、18.5%、19%、19.5%または20%(w/v)の糖を含む、請求項18に記載の方法。
- 炭水化物がグルコース、フルクトース、キシロース、アラビノース、ガラクトース、マンノース、ラムノース、スクロース、セロビオース、ヘミセルロースまたは組合せである、請求項18または請求項19に記載の方法。
- コハク酸またはマレイン酸の収率が90%以上である、請求項15〜20のいずれか一項に記載の方法。
- 収率が少なくとも90%、90.5%、91%、91.5%、92%、92.5%、93%、93.5%、94%、94.5%、95%、95.5%、96%、96.5%、97%、97.5%、98%、98.5%または99%である、請求項21に記載の方法。
- 前記の遺伝的に改変された細菌株が少なくとも200mM、250mM、300mM、350mM、400mM、450mM、500mM、550mM、600mM、650mMまたは700mMの濃度のコハク酸を生産する、請求項15 に記載の方法。
- 前記の遺伝的に改変された細菌株が少なくとも200mM、250mM、300mM、350mM、400mM、450mMまたは500mM濃度のマレイン酸を生産する、請求項15 に記載の方法。
- 前記の遺伝的に改変された細菌株が少なくとも200mM、250mM、300mM、350mM、400mM、450mM、500mM、550mM、600mM、650mMまたは700mM濃度のフマル酸を生産する、請求項15 に記載の方法。
- 増殖培地がコハク酸、マレイン酸またはフマル酸のための基質としてグリセロールを含む、請求項14 または15に記載の方法。
- 前記培地がコハク酸、マレイン酸またはフマル酸の生産のための基質としてグリセロールをさらに含む、請求項18 に記載の方法。
- 請求項1 に記載の1以上の遺伝的に改変された細菌株と培地を含む組成物。
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