JP2010503705A

JP2010503705A - ヒンダードエステル系の生分解性リンカーを有するポリアルキレンオキサイド

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Publication number: JP2010503705A
Application number: JP2009528515A
Authority: JP
Inventors: ザオ，ホン
Original assignee: Enzon Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Enzon Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2006-09-15
Filing date: 2007-09-15
Publication date: 2010-02-04
Also published as: AU2007296189A1; CN101534861A; EP2063912A4; MX2009002854A; US20090232833A1; US8268318B2; EP2063912A2; CA2662962A1; WO2008034119A2; KR20090083334A; CN101534861B; WO2008034119A3; IL197515A0

Abstract

本発明は、ヒンダードエステル部分を含むポリマー送達システムを提供する。ポリマー送達システムを作製する方法およびそれらを用いて哺乳類を治療する方法についても開示する。

Description

関連出願の説明

本出願は、参照により本開示に含まれる、２００６年９月１５日出願の米国仮特許仮出願第６０／８４４，９４２号の優先権の利益を主張するものである。

本発明は、ポリアルキレンオキサイドなどの改良された活性化ポリマーに関する。特に、本発明は、オリゴヌクレオチドを含む特定の生物活性部分のデリバリーを改善する、ヒンダードエステル部分を含む活性化ポリマーに関する。

長年にわたって、治療剤を体内に送り、それらの医薬のバイオアベイラビリティを改善するための多数の方法が提案されている。試みのうちの１つは、そのような医薬を可溶性輸送システムの一部として含めることである。そのような輸送システムは、永続的な複合体を基礎とする系またはプロドラッグを含みうる。特に、ポリマー輸送システムは、医薬の溶解性および安定性を改善しうる。たとえば、水溶性ポリアルキレンオキサイドの、タンパク質およびポリペプチドといった薬剤部分との複合体化が知られている。たとえば、参照により本開示に含まれる特許文献１を参照。特許文献１は、ＰＥＧで修飾された生理学的に活性なポリペプチドがインビボで循環期間が延長し、免疫原性および抗原性が低下することを開示する。

他の改善もまた実現されている。たとえば、ベンジル脱離系，トリメチルロック系などを含むポリマーを基礎とするドラッグデリバリープラットフォーム系が、ＥｎｚｏｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓおよびＺｈａｏ他によって、タンパク質、ペプチドおよび低分子を遊離可能に配送する方法として開示された。非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３も参照。前記のそれぞれの内容は参照により本開示に含まれる。

より近年に、ＰＥＧは、オリゴヌクレオチド、特に特定の標的メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）配列と相補的であるオリゴヌクレオチドとの複合体化について提案されている。一般的に、遺伝子転写の産物（たとえばｍＲＮＡ）と相補的な核酸配列は「アンチセンス」と表され、転写産物と同一の配列を有するかまたは転写産物として生じる核酸配列は「センス」と表される。たとえば、非特許文献４を参照。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、遺伝子の発現を調節するような方法で、遺伝子の全部または一部とハイブリダイズするように選択されうる。転写因子は転写の調節中に２本鎖ＤＮＡと相互作用する。

オリゴヌクレオチドはまた、特に、診断検査、研究用試薬、たとえばＰＣＲ法でのプライマーおよび他の実験手順において用途が見出されている。オリゴヌクレオチドは、目的の使用に合致するように誂えられた性質を含むようにカスタム合成されうる。このように、診断薬において、研究用試薬として、および治療薬としての有用性を高めるために、多数の化学修飾がオリゴマー化合物に導入されている。

オリゴヌクレオチド、特にアンチセンスオリゴヌクレオチドは治療剤として有望であるが、それらはヌクレアーゼに対して非常に感受性であり、標的細胞へ進入する前および後に急速に分解されうるため、未修飾アンチセンスオリゴヌクレオチドはインビボ系での使用に不適である。分解を担う酵素は大部分の組織に見出されるため、当該化合物を安定化し、この問題を救済する試みで、オリゴヌクレオチドへの修飾が行われている。最も広く試験された修飾は、オリゴヌクレオチド化合物の骨格部分に行われている。一般的に非特許文献５およびそれに引用される参考文献を参照。作製された多数の異なる骨格のうち、ホスホロチオエートだけが顕著なアンチセンス活性を示した。たとえば、非特許文献６を参照。骨格への硫黄原子の導入は酵素分解速度を遅らせる一方、それはまた同時に毒性を高める。窒素原子を加えることのもう１つの短所は、それが骨格をアキラルからキラルへ変化させ、および２^ｎ種類のジアステレオマーを結果として生じる点である。これはさらなる副作用を引き起こしうる。現在のアンチセンスオリゴヌクレオチドのさらなる短所は、それらはリン酸基に、主に親油性である細胞膜を通過する能力を阻害する、負電荷を有しうることである。化合物が細胞外に留まるのが長いほど、化合物はより分解され、結果として標的に到達する活性化合物がより少なくなる。現在のアンチセンス化合物のさらなる短所は、オリゴヌクレオチドが二次および高次溶液構造を形成する傾向にあることである。一旦これらの構造が形成されると、それらはさまざまな酵素、タンパク質、ＲＮＡ、およびＤＮＡの結合のための標的となる。これは、非特異的副作用、およびｍＲＮＡに結合する活性化合物の量の減少を結果として生じる。オリゴヌクレオチド療法を改善するための他の試みは、結合部分およびポリエチレングリコールを添加することを含んでいる。たとえば、非特許文献７、および特許文献２を参照。これらの例の両方で、修飾は、オリゴヌクレオチドを分解に対して安定化し、細胞透過性を高める目的で、本質的に永続的な結合部分の使用を含む。しかし、これらの試みの両方が、インビボ効力を全く提供できない。

低分子およびオリゴヌクレオチドのような治療剤をポリアルキレンオキサイドと複合体化するためには、ポリマーの末端水酸基をまず反応性官能基へ変換しなければならない。この過程はしばしば「活性化」と呼ばれ、産物は「活性化ポリアルキレンオキサイド」と呼ばれる。他のポリマーは同様に活性化される。

試みおよび進歩にかかわらず、活性化ポリマーのようなＰＥＧおよびポリマー複合体化法におけるさらなる改善がしたがって求められている。本発明はこの必要性などに対処する。

米国特許第４，１７９，３３７号明細書米国特許第４，９０４，５８２号明細書

Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｖｏｌ．４２，Ｎｏ．１８，３６５７−３６６７Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｖｏｌ．４７，Ｎｏ．３，７２６−７３４Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｖｏｌ．４３，Ｎｏ．３，４７５−４８７Ｃｒｏｏｋｅ，１９９２，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．，３２：３２９−３７６ＵｈｌｍａｎｎａｎｄＰｅｙｍａｎｎ，１９９０，ＣｈｅｍｉｃａｌＲｅｖｉｅｗｓ９０，ａｔｐａｇｅｓ５４５−５６１ＰａｄｍａｐｒｉｙａａｎｄＡｇｒａｗａｌ，１９９３，Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．３，７６１Ｋａｗａｇｕｃｈｉ，ｅｔａｌ．，Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ，ＳｐｅｃｉｆｉｃＢｉｎｄｉｎｇＡｃｔｉｖｉｔｙ，ａｎｄＰｌａｓｍａＣｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｎＭｉｃｅｏｆａｎＯｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＭｏｄｉｆｉｅｄａｔ５’−ＴｅｒｍｉｎａｌｗｉｔｈＰｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ），Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，１８（３）４７４−４７６（１９９５）

上記の問題を克服し、薬物送達方法を改善するため、新規の活性化ポリマーおよびそれを用いて作製される複合体が提供される。

本発明の一態様では、式（Ｉ）の化合物が提供され：

ここで：
Ａはキャップ基または：

であり；
Ｒ_１は実質的に非抗原性の水溶性ポリマーであり；
Ｌ_１およびＬ’_１は、独立して、Ｃ（＝Ｙ_１）またはＣ（＝Ｙ’_１）から４〜１０原子、好ましくは４〜８および非常に好ましくはＣ（＝Ｙ_１）またはＣ（＝Ｙ’_１）から４〜５原子に位置する自由電子対を有する、選択されるスペーサーであり；
Ｌ_２およびＬ’_２は独立して選択される二官能性リンカーであり；
Ｙ_１およびＹ’_１は独立してＯ、Ｓ、またはＮＲ_５であり；
Ｒ_２、Ｒ’_２、Ｒ_３、Ｒ’_３およびＲ_５は独立して、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−１９分岐鎖アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキル、Ｃ_１−６置換アルキル、Ｃ_２−６置換アルケニル、Ｃ_２−６置換アルキニル、Ｃ_３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ_１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１−６ヘテロアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ_１−６ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ_２−６アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ_２−６アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ_２−６置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシおよび置換アリールカルボニルオキシの中から選択され、またはＲ_２がＲ_３と共に、およびＲ’_２がＲ’_３と共に、独立して少なくとも３つの炭素を含む置換または非置換非芳香族環状炭化水素を形成し；
Ｒ_４およびＲ’_４は独立して、ＯＨ、脱離基、標的基、診断薬および生物活性部分の中から選択され；
（ｐ）および（ｐ’）は独立して、０または正の整数、好ましくは０または約１〜約３の整数、より好ましくは０または１であり、
Ｒ_２がＨである場合、Ｒ_３は少なくとも３つの炭素を有する置換または非置換炭化水素であり、さらに、Ｌ_１はＣ（Ｒ_２）（Ｒ_３）と同一でないことを条件とする。

本発明のこの態様の好ましい一実施形態では、実質的に非抗原性のポリマーはポリアルキレンオキサイドであり、より好ましくはポリエチレングリコール（以後ＰＥＧ）である。別の態様では、ＰＥＧは一方の末端がＣＨ_３基でキャップ化されている、すなわちｍＰＥＧであるか、一方別の実施形態では、下記の式に対応するもののようなビス活性化ＰＥＧが提供される：

本発明のさらに別の態様は、ヒンダードエステルを含む活性化ポリマーを作製する方法、前記を含むオリゴヌクレオチド複合体を含む複合体を作製する方法、および生物活性部分を含む複合体の有効量を、それを必要とする患者（哺乳類）へ投与することに基づく治療の方法を含む。

ここに記載のポリマー送達システムは、ポリマーと生物活性部分との間にエステル結合のような遊離可能な結合を形成しうる新規のリンカーを含む。ポリマー系はポリマーすなわちＰＥＧ骨格の一部として作られるヒンダード酸構造、およびポリマー上のＮＨＳエステルのような酸エステルとしての活性化に基づく。活性化形はヒドロキシまたはチオール基を含む部分と反応でき、遊離可能なエステル結合を形成する。

ここに記載のヒンダードエステルを基礎とするポリマー輸送システムの１つの長所は、ポリマー送達システムが改善された安定性を有する点である。理論に縛られることなく、ポリマーと脱離基、生物活性部分および標的基のような部分との間で立体的に障害された環境にあるエステル結合は、エステル結合が塩基性水系媒体または酵素に曝露されることを阻害し、それによって当該共有結合を安定化する。ポリマー系の安定性は、標的基または生物活性部分への結合前の長期保存、および生物活性部分を含むポリマー複合体のより長い使用期限を可能にする。改善された安定性は費用効率を高める。

本発明に対応する活性化ポリマーの別の長所は、それらが、オリゴヌクレオチドおよび関連するアンチセンスまたは低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）化合物との使用に特によく適する点である。結合するオリゴヌクレオチドの近傍のヒンダードエステルの存在は、安定性の改善およびヌクレアーゼ分解に対する耐性を提供する。それはまた、毒性の低減およびオリゴヌクレオチド化合物のｍＲＮＡへの結合親和性の増大を助ける。本発明にしたがって作製される複合体は、アンチセンスオリゴヌクレオチド化合物を分解から保護する手段を提供し、高次構造の形成を防ぐ。さらに、ポリマー複合体は、当業者が十分量の活性アンチセンスオリゴヌクレオチド化合物を標的へ配送することを可能にする。

ヒンダードエステルを含む活性化ポリマーの別の長所は、それが、最適なオリゴヌクレオチドを当業者がより容易に複合体化することを可能にする点である。オリゴヌクレオチドまたは標的部分をヒンダードエステルで、ＰＥＧ化の前に修飾する必要は無い。オリゴはそのまま用いられ、目的のヒンダードエステル保護基を含む活性化ＰＥＧリンカーでＰＥＧ化される。

本発明に対応する活性化ポリマーのさらに別の長所は、それらが、オリゴヌクレオチドおよび関連するアンチセンス化合物との使用に特によく適する点である。結合するオリゴヌクレオチドの近傍のヒンダードエステルの存在は、安定性の改善およびヌクレアーゼ分解に対する耐性を提供する。それはまた、毒性の低減およびオリゴヌクレオチド化合物のｍＲＮＡへの結合親和性の増大を助ける。本発明にしたがって作製される複合体は、アンチセンスオリゴヌクレオチド化合物を分解から保護する手段を提供し、高次構造の形成を防ぐ。さらに、ポリマー複合体は、当業者が十分量の活性アンチセンスオリゴヌクレオチド化合物を標的へ配送することを可能にする。

本発明のいくつかの態様はオリゴヌクレオチドとの結合に関して記載されるが、１つ以上の「ヒンダード（立体障害）」基を含む活性化ポリマーは、ポリマー複合体化の分野において幅広い用途を有することが当業者に理解される。ポリマーの活性化形は、ＰＥＧのようなポリマーを、タンパク質、ペプチド、酵素、低分子などと遊離可能におよび永続的に結合するために使用されうる。

本発明の目的では、「生物活性部分」および「生物活性部分の残基」の語は、生物活性化合物が置換反応を受けた後に残る、輸送担体部分が結合される、生物活性化合物の部分を意味すると理解される。

別に定義されない限り、本発明の目的では：
「アルキル」の語は、直鎖、分岐鎖、置換、たとえばハロ−、アルコキシ−、およびニトロ−Ｃ_１−１２アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキルまたは置換シクロアルキル、などを含むと理解され；
「置換」の語は、官能基または化合物中に含まれる１つ以上の原子に１つ以上の別の原子を加えるかまたは置き換えることを含むと理解され；
「置換アルキル」の語は、カルボキシアルキル、アミノアルキル、ジアルキルアミノ、ヒドロキシアルキルおよびメルカプトアルキルを含むと理解され；
「置換シクロアルキル」の語は４−クロロシクロヘキシルといった部分を含み；アリールはナフチルといった部分を含み；置換アリールは３−ブロモフェニルといった部分を含み；アラルキルはトルイルといった部分を含み；ヘテロアルキルはエチルチオフェンといった部分を含み；
「置換ヘテロアルキル」の語は３−メトキシ−チオフェンといった部分を含み；アルコキシはメトキシといった部分を含み；およびフェノキシは３−ニトロフェノキシといった部分を含み；
「ハロ」の語はフルオロ、クロロ、ヨードおよびブロモを含むと理解され；
「十分量」および「有効量」の語は本発明の目的では、当業者に理解される効果として治療効果を達成する量を意味するものとする。

図１は、実施例１〜２に記載される合成の方法を図式的に示す。図２は、実施例３〜１１に記載される合成の方法を図式的に示す。図３は、実施例１２に記載される合成の方法を図式的に示す。図４は、実施例１３〜１５に記載される合成の方法を図式的に示す。図５は、実施例１６に記載される合成の方法を図式的に示す。

Ａ．概観
本発明の大部分の態様では、ここで含まれるポリマーは一般的に、実質的に非抗原性のポリマーとして説明される。この種のポリマーの中では、ポリアルキレンオキサイドが好ましく、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が非常に好ましい。限定のためでなく説明の便のために、本発明は時に、ＰＥＧを原型的なポリマーとして用いて記載される。しかし、当然、本発明の範囲は直鎖、実質的に直鎖、分岐鎖などでありうるさまざまなポリマーに適用可能である。わずかな必要条件の１つは、ポリマーがここに記載される目的のヒンダードエステル基を共有結合する手段を含むこと、およびそれが、結果として生じる中間体を、ポリマーを含む活性化リンカー、および結果として生じる複合体へ、ここに記載される条件下で変換するために必要な処理に耐えられることである。

前記にしたがって、式（Ｉ）の化合物が提供され：

ここで：
Ａはキャップ基または

であり；
Ｒ_１は実質的に非抗原性の水溶性ポリマーであり；
Ｌ_１およびＬ’_１は、独立して、Ｃ（＝Ｙ_１）またはＣ（＝Ｙ’_１）から４〜１０原子、好ましくは約４〜約８および非常に好ましくはＣ（＝Ｙ_１）またはＣ（＝Ｙ’_１）から約４〜約５原子に位置する自由電子対を有する、選択されたスペーサーであり；
Ｌ_２およびＬ’_２は独立して選択される二官能性リンカーであり；
Ｙ_１およびＹ’_１は独立してＯ、Ｓ、またはＮＲ_５であり；
Ｒ_２、Ｒ’_２、Ｒ_３、Ｒ’_３およびＲ_５は独立して、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−１９分岐鎖アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキル、Ｃ_１−６置換アルキル、Ｃ_２−６置換アルケニル、Ｃ_２−６置換アルキニル、Ｃ_３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ_１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１−６ヘテロアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ_１−６ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ_２−６アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ_２−６アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ_２−６置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシおよび置換アリールカルボニルオキシの中から選択され、またはＲ_２がＲ_３と共に、およびＲ’_２がＲ’_３と共に、独立して少なくとも３つの炭素を含む置換または非置換非芳香族環状炭化水素を形成し；
Ｒ_４およびＲ’_４は独立して、ＯＨ、脱離基、標的基、診断薬および生物活性部分の中から選択され；
（ｐ）および（ｐ’）は独立して、０または正の整数、好ましくは０または約１〜約３の整数、より好ましくは０または１であり；
Ｒ_２がＨである場合、Ｒ_３は少なくとも３つの炭素を有する置換または非置換炭化水素であり、さらに、Ｌ_１はＣ（Ｒ_２）（Ｒ_３）と同一でないことを条件とする。

本発明のこの態様の好ましい一実施形態では、実質的に非抗原性のポリマーはポリアルキレンオキサイドであり、より好ましくはポリエチレングリコール（以後ＰＥＧ）である。別の態様では、ＰＥＧは一方の末端がＣＨ_３基でキャップ化されている、すなわちｍＰＥＧである。他の随意的なキャップ基は、Ｈ、ＮＨ_２、ＯＨ、ＣＯ_２Ｈ、Ｃ_１−６アルコキシ、およびＣ_１−６アルキルを含む。好ましいキャップ基はメトキシ、およびメチルを含む。

別の実施形態では、式（ＩＩ）に対応するもののようなビス活性化ＰＥＧが提供される：

本発明のそれらの態様では、Ｒ_２、Ｒ’_２、Ｒ_３、Ｒ’_３およびＲ_５に対応する部分がおそらく置換されていると示される場合、置換について考えられる置換基は、たとえば、アシル、アミノ、アミド、アミジン、アラルキル、アリール、アジド、アルキルメルカプト、アリールメルカプト、カルボニル、カルボキシラート、シアノ、エステル、エーテル、ホルミル、ハロゲン、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、ヒドロキシ、イミノ、ニトロ、チオカルボニル、チオエステル、チオ酢酸、チオギ酸、アルコキシ、ホスホリル、ホスホナート、ホスフィナート、シリル、スルフヒドリル、硫酸、スルホナート、スルファモイル、スルホンアミド、およびスルホニルを含みうる。

好ましくは、Ｌ_１およびＬ’_１は、独立して、Ｃ（＝Ｙ_１）またはＣ（＝Ｙ’_１）から４〜８原子；より好ましくは４〜６原子に位置する自由電子対を有する、選択されるスペーサーであり；ＹおよびＹ’_１の両方がＯである。

本発明の別の一態様では、生物学的部分は、−ＯＨを含む部分および−ＳＨを含む部分を含む。

さらに別の一態様では、ＡはＨ、ＮＨ_２、ＯＨ、ＣＯ_２Ｈ、Ｃ_１−６アルコキシ、およびＣ_１−６アルキルの中から選択されうる。一部の好ましい実施形態では、Ａはメチル、エチル、メトキシ、エトキシ、Ｈ、およびＯＨでありうる。Ａはより好ましくはメチルまたはメトキシである。

Ｂ．実質的に非抗原性の水溶性ポリマー
ここに記載されるポリマー送達システムに用いられるポリマーは、ポリアルキレンオキサイド（ＰＡＯ）のように、好ましくは水溶性ポリマー、および実質的に非抗原性である。

本発明の一態様では、ここに記載される化合物は、直鎖、末端分岐鎖またはマルチアーム型のポリアルキレンオキサイドを含む。一部の好ましい実施形態では、ポリアルキレンオキサイドはポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールを含む。

ポリアルキレンオキサイドは、約２，０００〜約１００，０００、好ましくは約５，０００〜約６０，０００の平均分子量を有する。一部の態様では、ポリアルキレンオキサイドは、タンパク質またはオリゴヌクレオチドが結合されている場合は約５，０００〜約２５，０００、および好ましくは約１２，０００〜約２０，０００でありうるか、あるいは、医薬活性化合物（平均分子量１，５００未満のものといった低分子）がここに記載の化合物に使用される場合は約２０，０００〜約４５，０００、および好ましくは約３０，０００〜約４０，０００でありうる。

ポリアルキレンオキサイドはポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールを含む。より好ましくは、ポリアルキレンオキサイドはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。ＰＥＧは一般的に下記の構造で表され：
−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−
ここで（ｎ）は約１０〜約２，３００の整数であり；マルチアームポリマーが用いられる場合はポリマー枝の数に依存する。あるいは、本発明のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）残基部分は、下記の中から選択でき：

ここで：
Ｙ_７１およびＹ_７３は独立してＯ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ_２、ＮＲ_７３または結合であり；
Ｙ_７２はＯ、Ｓ、またはＮＲ_７４であり；
Ｒ_{７１−７４}は独立して、Ｒ_２に使用されうる同一の部分であり；
（ａ７１）、（ａ７２）、および（ｂ７１）は独立して０または正の整数、好ましくは０〜６、およびより好ましくは１であり；
（ｎ）は約１０〜約２３００の整数である。

分岐鎖またはＵ−ＰＥＧ誘導体は、それぞれ参照により本開示に含まれる、米国特許第５，６４３，５７５号、同第５，９１９，４５５号、同第６，１１３，９０６号および同第６，５６６，５０６号の各明細書に記載される。そのようなポリマーの非限定的な一覧は、下記の構造を有するポリマー系（ｉ）〜（ｖｉｉ）に相当し：

ここで：
Ｙ_{６１−６２}は独立してＯ、ＳまたはＮＲ_６１であり；
Ｙ_６３はＯ、ＮＲ_６２、Ｓ、ＳＯまたはＳＯ_２であり
（ｗ６２）、（ｗ６３）および（ｗ６４）は独立して０または正の整数であり；
（ｗ６１）は０または１であり；
ｍＰＥＧはメトキシＰＥＧであり、
ここでＰＥＧは既に定義されており、およびポリマー部分の合計分子量は約２，０００〜約１００，０００であり；
Ｒ_６１およびＲ_６２は独立して、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−１９分岐鎖アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキル、Ｃ_１−６置換アルキル、Ｃ_２−６置換アルケニル、Ｃ_２−６置換アルキニル、Ｃ_３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ_１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１−６ヘテロアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ_１−６ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ_２−６アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ_２−６アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ_２−６置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシ、およびおよび置換アリールカルボニルオキシの中から選択される。

さらに別の一態様では、ポリマーは、マルチアームＰＥＧ−ＯＨまたは、開示が参照により本開示に含まれる日油株式会社（NOF Corp.）薬物送達システムカタログ第８版（２００６年４月）に記載される「スター型ＰＥＧ」製品を含む。そのマルチアームポリマー複合体は４以上のポリマーアームおよび好ましくは４または８のポリマーアームを含む。

説明目的で、および限定目的でなく、マルチアームポリエチレングリコール（ＰＥＧ）残基は下記であることができ：

ここで：
（ｘ）は０および正の整数、すなわち約０〜約２８であり；
（ｎ）は重合度である。

本発明の特定の一実施形態では、マルチアームＰＥＧは下記の構造を有し：

ここでｎは正の整数である。本発明の好ましい一実施形態では、ポリマーは約５，０００〜約６０，０００、および好ましくは１２，０００〜４０，０００の合計分子量を有する。

さらに別の特定の一実施形態では、マルチアームＰＥＧは下記の構造を有し：

ここでｎは正の整数である。本発明の好ましい一実施形態では、マルチアームポリマーの重合度（ｎ）は約２８〜約３５０であって、合計分子量約５，０００〜約６０，０００のポリマーを与え、および好ましくは約６５〜約２７０であって、合計分子量１２，０００〜４５，０００のポリマーを与える。これはポリマー鎖中の反復単位の数を表し、ポリマーの分子量に依存する。

ポリマーは、米国特許第５，１２２，６１４号または同第５，８０８，０９６号の各明細書に記載された活性化法を用いて、適当に活性化されたポリマーへ変換されうる。具体的には、そのようなＰＥＧは次式であることができ：

ここで：
（ｕ’）は約４〜約４５５の整数であり；残基の３つまでの末端部分がメチルまたは他の低級アルキルでキャップ化されている。

一部の好ましい実施形態では、４つすべてのＰＥＧ枝が、芳香族基の結合を円滑化するために、適当な活性化基へ変換されうる。変換前のそのような化合物は下記を含む：

ここで含まれるポリマー物質は、好ましくは室温にて水溶性である。そのようなポリマーの非限定的なリストは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコールといったポリアルキレンオキサイドホモポリマー、ポリオキシエチレン化ポリオール、その共重合体および、そのブロック共重合体の水溶性が維持されるならばブロック共重合体を含む。

別の一実施形態では、およびＰＡＯを基礎とするポリマーの代替として、１つ以上の有効に非抗原性の材料、たとえばデキストラン、ポリビニルアルコール、糖質を基礎とするポリマー、ヒドロキシプロピルメタクリルアミド（ＨＰＭＡ）、ポリアルキレンオキサイド、および／またはその共重合体が使用されうる。参照により本開示に含まれる、本発明と同一の譲受人に譲渡された米国特許第６，１５３，６５５号明細書も参照。ＰＥＧといったＰＡＯについてここで記載されたのと同一の種類の活性化が用いられることが当業者に理解される。前記の一覧は単に説明であり、ここに記載される性質を有するすべてのポリマー材料が考慮されることが当業者にさらに理解される。本発明の目的では、「実質的にまたは有効に非抗原性」とは、哺乳類において非毒性であり、認識可能な免疫応答を起こさないと本分野で理解されるすべての材料を意味する。

一部の態様では、末端アミン基を有するポリマーは、ここに記載される化合物を作製するのに使用されうる。末端アミンを含むポリマーを高純度で調製する方法は、それぞれ参照により本開示に含まれる米国特許出願公開第１１／５０８，５０７号および同第１１／５３７，１７２号の各明細書に記載される。たとえば、アジドを有するポリマーは、トリフェニルホスフィンといったホスフィンを基礎とする還元剤、またはＮａＢＨ_４といったアルカリ金属ボロヒドリド還元剤と反応する。あるいは、脱離基を含むポリマーは、メチル−ｔｅｒｔ−ブチルイミドジカルボナートのカリウム塩（ＫＮＭｅＢｏｃ）またはジ−ｔｅｒｔ−ブチルイミドジカルボナートのカリウム塩（ＫＮＢｏｃ_２）といった保護アミン塩と反応し、次いで保護アミン基が脱保護される。これらの製法によって作製された末端アミンを含むポリマーの純度は、約９５％より大きく、好ましくは９９％より大きい。

代替的な態様では、末端カルボン酸基を有するポリマーが、ここに記載されるポリマー送達システムに使用されうる。末端カルボン酸を有するポリマーを高純度で調製する方法は、参照により本開示に含まれる米国特許出願公開第１１／３２８，６６２号明細書に記載される。その方法は、ポリアルキレンオキサイドの三級アルキルエステルをまず調製、次いでそのカルボン酸誘導体への変換を含む。その工程のＰＡＯカルボン酸の調製の第一段階は、ポリアルキレンオキサイドカルボン酸のｔ−ブチルエステルといった中間体の形成を含む。この中間体は、ＰＡＯをハロ酢酸ｔ−ブチルと、カリウムｔ−ブトキシドといった塩基の存在下で反応させることによって形成される。一旦ｔ−ブチルエステル中間体が形成されると、ポリアルキレンオキサイドのカルボン酸誘導体は、９２％を上回る，好ましくは９７％を上回る，より好ましくは９９％を上回る、および非常に好ましくは純度９９．５％を上回る純度で容易に提供されうる。

Ｃ．ヒンダードエステル
本発明の目的では、「ヒンダード（立体障害）」は、Ｃ（＝Ｙ_１）の周囲の立体的に混み合った環境を意味するかまたは含むと理解される。そのような環境は、典型的には、環状または分岐鎖部分といった、嵩高い置換基を含めることによって作られうる。式（Ｉ）に記載のＣ（＝Ｙ_１）およびＣ（＝Ｙ’_１）に隣接するＣＲ_２Ｒ_３およびＣＲ’_２Ｒ’_３部分のそれぞれが、ヒンダードエステルを形成する。Ｒ_２、Ｒ’_２、Ｒ_３、Ｒ’_３およびＲ_５は、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−１９分岐鎖アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキル、Ｃ_１−６置換アルキル、Ｃ_２−６置換アルケニル、Ｃ_２−６置換アルキニル、Ｃ_３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ_１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１−６ヘテロアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ_１−６ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ_２−６アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ_２−６アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ_２−６置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシおよび置換アリールカルボニルオキシの中から選択されうる。Ｒ_２およびＲ_３（Ｒ’_２およびＲ’_３）の両方が同時にＨでない限り、Ｒ_２およびＲ_３（Ｒ’_２およびＲ’_３）について記載される可能な基のうち任意のものが使用されうる。Ｒ_２およびＲ_３（Ｒ’_２およびＲ’_３）のうち一方がＨである場合は、他方は少なくとも３つの炭化水素を含む。

好ましい一実施形態では、Ｒ_２、Ｒ’_２、Ｒ_３およびＲ’_３は、メチル、エチルおよびイソプロピルを含む。

代替的な一実施形態では、Ｒ_２がＲ_３と共に、およびＲ’_２がＲ’_３と共に、少なくとも３つの炭素を含む置換または非置換非芳香族環状炭化水素を形成しうる。

Ｄ．スペーサー：Ｌ_１およびＬ’_１
本発明の別の一態様では、ＣＲ_２Ｒ_３およびＣＲ’_２Ｒ’_３部分に結合するＬ_１およびＬ’_１スペーサーの自由電子対が隣接基作用を提供する。理論に縛られることなく、Ｃ（＝Ｙ_１）およびＣ（＝Ｙ’_１）から４〜１０原子に位置する自由電子対は、ここに記載されるポリマー送達システムからの生物活性部分、標的基および診断薬の放出速度を促進（修飾）する。

好ましい一実施形態では、Ｌ_１およびＬ’_１スペーサーは下記の中から選択でき：

ここで：
Ｒ_１１−Ｒ_１６は独立して、水素、アミノ、置換アミノ、アジド、カルボキシ、シアノ、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、シリルエーテル、スルホニル、メルカプト、Ｃ_１−６アルキルメルカプト、アリールメルカプト、置換アリールメルカプト、置換Ｃ_１−６アルキルチオ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−１９分岐鎖アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキル、Ｃ_１−６置換アルキル、Ｃ_２−６置換アルケニル、Ｃ_２−６置換アルキニル、Ｃ_３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ_１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１−６ヘテロアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ_１−６ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ_２−６アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ_２−６アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ_２−６置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシ、および置換アリールカルボニルオキシの中から選択され；
（ｓ）および（ｓ’）は独立して０または正の整数、好ましくは約１〜約４であり；
（ｒ）は０または１である。

あるいは、Ｌ_１およびＬ’_１基は下記の中から選択でき：

ここで
（ｐ）は１〜１２の整数であり；
（ｎ）およびｑは独立して正の整数、好ましくは約１〜８、およびより好ましくは約１〜４である。

さらに別の好ましい一実施形態では、Ｌ_１−２およびＬ’_１−２スペーサーの自由電子対は、Ｃ（＝Ｙ_１）およびＣ（＝Ｙ’_１）から４〜８原子に位置する。より好ましくは、電子対はＣ（＝Ｙ_１）およびＣ（＝Ｙ’_１）から４〜５原子に位置する。

好ましい態様に記載の好ましい実施形態は−Ｌ_１−Ｃ（Ｒ_２）（Ｒ_３）−Ｃ（＝Ｙ_１）−および−Ｌ’_１−Ｃ（Ｒ’_２）（Ｒ’_３）−Ｃ（＝Ｙ’_１）であり下記を含む：

別の一態様では、ここに記載されるポリマー送達システムは、Ｒ_２がＨであり、Ｌ_１がＣ（Ｒ_２）（Ｒ_３）と同一でない場合は、Ｒ_３が少なくとも３つの炭素を有する置換または非置換炭化水素であることを含む。

Ｅ．二官能性リンカー
ここに記載される化合物は二官能性リンカーを含みうる。二官能性リンカーは、アミノ酸、アミノ酸誘導体、またはペプチドを含む。アミノ酸は天然に存在するおよび非天然に存在するアミノ酸でありうる。天然に存在するアミノ酸の誘導体および類似体、およびさまざまな本分野で公知である非天然に存在するアミノ酸（ＤまたはＬ）、疎水性または非疎水性、もまた本発明の範囲内と考えられる。非天然に存在するアミノ酸の適当な非限定的な一覧は、２−アミノアジピン酸、３−アミノアジピン酸、ベータ−アラニン、ベータ−アミノプロピオン酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、ピペリジン酸、６−アミノカプロン酸、２−アミノヘプタン酸、２−アミノイソ酪酸、３−アミノイソ酪酸、２−アミノピメリン酸、２，４−アミノ酪酸、デスモシン、２，２−ジアミノピメリン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、Ｎ−エチルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、３−ヒドロキシプロリン、４−ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロ−イソロイシン、Ｎ−メチルグリシン、サルコシン、Ｎ−メチル−イソロイシン、６−Ｎ−メチル−リジン、Ｎ−メチルバリン、ノルバリン、ノルロイシン、およびオルニチンを含む。一部の好ましいアミノ酸残基は、グリシン、アラニン、メチオニンおよびサルコシンから選択され、より好ましくは、グリシンである。

あるいは、Ｌ_２およびＬ’_２は下記の中から選択でき：

ここで：
Ｒ_{２１−２９}は独立して、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_３−１２分岐鎖アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキル、Ｃ_１−６置換アルキル、Ｃ_３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ_１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１−６ヘテロアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、フェノキシおよび
Ｃ_１−６ヘテロアルコキシから選択され；
（ｔ）および（ｔ’）は独立して、０または正の整数、好ましくは０または約１〜約１２の整数、より好ましくは約１〜約８の整数、および非常に好ましくは１または２であり、
（ｖ）および（ｖ’）は独立して０または１である。

好ましい一実施形態では、Ｌ_２およびＬ’_２は下記の中から選択でき：

ここで（ｒ）および（ｒ’）は独立して０または１である。

さらに別の一実施形態では、二官能性リンカーは下記を含み：

ここで、
Ｙ_{１１−１９}は独立してＯ、ＳまたはＮＲ_４８であり；
Ｒ_{３１−４８}、Ｒ_{５０−５１}およびＡ_５１は独立して、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_３−１２分岐鎖シクロアルキル、Ｃ_３−８シクロアルキル、Ｃ_１−６置換アルキル、Ｃ_３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ_１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１−６ヘテロアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、フェノキシおよびＣ_１−６ヘテロアルコキシの中から選択され；
Ａｒはアリールまたはヘテロアリール部分であり；
Ｌ_{１１−１５}は独立して選択される二官能性スペーサーであり；
ＪおよびＪ’は独立して、標的細胞内へ能動輸送される部分、疎水性部分、二官能性結合部分およびその組み合わせの中から選択され；
（ｃ１１）、（ｈ１１）、（ｋ１１）、（１１１）、（ｍ１１）および（ｎ１１）は独立して選択される正の整数、好ましくは１であり；
（ａ１１）、（ｅ１１）、（ｇ１１）、（ｊ１１）、（ｏ１１）および（ｑ１１）は独立して０または正の整数、好ましくは１であり；
（ｂ１１）、（ｘ１１）、（ｘ’１１）、（ｆ１１）、（ｉ１１）および（ｐ１１）は独立して０または１である。

Ｆ．Ｒ_４およびＲ’_４基
１．脱離基
本発明の目的では、脱離基は、目的の標的上に、すなわち生物活性部分、診断薬、標的部分、二官能性スペーサー、中間体などに見られる求核試薬と反応できる基と理解されるべきである。標的はしたがって、タンパク質、ペプチド、酵素、ドキソルビシンのような天然にまたは化学的に合成された医薬分子、およびモノ保護ジアミンのようなスペーサー上に見られるＯＨまたはＳＨ基といった、置換のための基を含む。

ヒンダードエステルに結合した脱離基は、最適な生物活性部分、すなわち医薬活性化合物（低分子量化合物），オリゴヌクレオチドなどとの共有結合反応を可能にする。適当な脱離基は、当業者に明らかになる通り、無制限に、ハロゲン（Ｂｒ、Ｃｌ）、活性化エステル、環状イミドチオン、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミジル、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾリル，イミダゾール、トシラート、メシラート、トレシラート、ノシラート、Ｃ_１−Ｃ_６アルキルオキシ、Ｃ_１−Ｃ_６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、ｏ−ニトロフェノキシ、ｐ−ニトロフェノキシ、ペンタフルオロフェノキシ、１，３，５−トリクロロフェノキシ、および１，３，５−トリフルオロフェノキシまたは他の適当な脱離基を含む。

本発明の特に好ましい実施形態では、脱離基はＯＨ、メトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｐ−ニトロフェノキシおよびＮ−ヒドロキシスクシンイミジルの中から選択されうる。

２．生物活性部分
さまざまな生物活性部分が、ここに記載される活性化ポリマーに結合されうる。生物活性部分は、医薬活性化合物、酵素、タンパク質、オリゴヌクレオチド、抗体、モノクローナル抗体、１本鎖抗体およびペプチドを含む。

生物活性部分は、心血管治療薬、抗悪性腫瘍薬、ナイスタチンまたは抗感染薬およびアムホテラシンＢのような抗真菌薬、抗不安薬、胃腸薬、中枢神経系活性化薬、鎮痛薬、妊娠促進薬、避妊薬、抗炎症薬、ステロイド剤、抗尿酸症薬、血管拡張薬、および血管収縮薬などを含みうる。

本発明の一態様では、生物活性化合物は、動物、たとえば、ヒトを含む哺乳類の治療における、そのような治療が望まれる症状のための、医薬用途または診断用途に適する。

さらに別の一態様では、ヒドロキシル、またはチオールを含む生物活性部分は本発明の範囲内である。ここで包括に適する生物活性部分の種類についての制限は、担体部分と反応および結合しうる利用可能な少なくとも１つのヒドロキシルまたはチオール基が存在すること、およびここに記載のポリマー送達システムと複合体化された形で生物活性の顕著な損失が無いことだけである。

あるいは、本発明のポリマー輸送複合体化合物への組み込みに適する親化合物は、結合した化合物からの加水分解遊離後に活性でありうるか、または加水分解遊離後には活性ではないが、さらなる化学処理／反応を受けた後に活性となりうる。たとえば、ポリマー輸送システムによって血流へ配送される抗がん剤は、がんまたは腫瘍細胞に入るまで不活性のままであることが可能であり、がんまたは腫瘍細胞化学によって、たとえば、その細胞に特有の酵素反応によって、活性化される。

好ましい一実施形態では、ここに記載のポリマー輸送システムは、医薬活性化合物を含む。

本発明の目的では、医薬活性化合物は低分子量分子を含むことが意味されるものと理解されたい。典型的には、医薬活性化合物は分子量約１，５００未満である。そのような化合物の非限定的な一覧は、カンプトテシンおよびＳＮ３８またはイリノテカンといった類似体、ヒドロキシル−またはチオール−トポイソメラーゼＩインヒビター、タキサンおよびパクリタキセル誘導体、ＡＺＴおよびアシクロビルを含むヌクレオシド、ダウノルビシンおよびドキソルビシンを含むアントラサイクリン化合物、Ａｒａ−Ｃ（シトシンアラビノシド）およびゲムシタビンを含む関連代謝拮抗化合物などを含む。

別の好ましい一態様では、複合体化のための選択はオリゴヌクレオチドであり、複合体化後、標的はオリゴヌクレオチドの残基と呼ばれる。オリゴヌクレオチドは、任意の既知の、ホスホロジエステル骨格またはホスホロチオエート骨格を有するオリゴヌクレオチドおよびオリゴデオキシヌクレオチド、ロックされた核酸（ＬＮＡ）、ペプチド骨格を有する核酸（ＰＮＡ）、トリシクロＤＮＡ、２本鎖オリゴヌクレオチド（デコイＯＤＮ）、触媒ＲＮＡ配列（ＲＮＡｉ）、リボザイム、シュピーゲルマー、およびＣｐＧオリゴマーの中から選択されうる。

上記の群の化合物の「ポリヌクレオチド」（または「オリゴヌクレオチド」）は、たとえば、ジェナセンス（別名オブリメルセンナトリウム、ＧｅｎｔａＩｎｃ．（米国ニュージャージー州バークリーハイツ所在）製）と同一または実質的に同様のヌクレオチド配列を有するオリゴヌクレオチドを含む、オリゴヌクレオチドおよびオリゴデオキシヌクレオチドを含む。ジェナセンスは１８量体ホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチド、ＴＣＴＣＣＣＡＧＣＧＴＧＣＧＣＣＡＴ（配列番号：１）であり、ヒトｂｃｌ−２ｍＲＮＡの開始配列の最初の６個のコドンと相補的である（ヒトｂｃｌ−２ｍＲＮＡは本分野で公知であり、たとえば配列番号１９として参照により本開示に含まれる米国特許第６，４１４，１３４号明細書に記載される）。米国食品医薬品局（ＦＤＡ）は２０００年８月にジェナセンスをオーファンドラッグに指定した。

さらに、本発明に記載の有用なオリゴヌクレオチドおよびオリゴデオキシヌクレオチドは、下記を含むがそれらに限定されない：
天然ホスホロジエステル骨格またはホスホロチオエート骨格または任意の他の修飾骨格類似体を有するオリゴヌクレオチドおよびオリゴデオキシヌクレオチド；
ＬＮＡ（ロックされた核酸）；
ＰＮＡ（ペプチド骨格を有する核酸）；
トリシクロ−ＤＮＡ；
デコイＯＤＮ（２本鎖オリゴヌクレオチド）；
触媒ＲＮＡ配列；
リボザイム；
シュピーゲルマー（Ｌ−配座オリゴヌクレオチド）；
ＣｐＧオリゴマーなど、たとえば下記で開示されるもの：
参照により本開示に含まれる、Ｔｉｄｅｓ２００２，ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅａｎｄＰｅｐｔｉｄｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏｎｆｅｒｅｎｃｅｓ，Ｍａｙ６−８，２００２，ＬａｓＶｅｇａｓ，ＮＶおよび
Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ＆ＰｅｐｔｉｄｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１８ｔｈ＆１９ｔｈＮｏｖｅｍｂｅｒ２００３，Ｈａｍｂｕｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ。

本発明に記載のオリゴヌクレオチドはまた、下記の表１に列記されるものを含む、本分野で公知の任意の適当なヌクレオチド類似体および誘導体を随意的に含みうる：

アンチセンスオリゴヌクレオチドおよび関連する化合物が、ヒンダードエステルを含むポリマーの結合のための好ましい標的として言及されているが、Ｒ_４またはＲ’_４は、ＰＥＧまたはポリマー付加から利益を受けることが知られているすべての適当な生物活性タンパク質、ペプチド、酵素、低分子などを含むことが意図される。

本発明で考慮されるオリゴヌクレオチドへの修飾は、たとえば、望ましいポリマーとのオリゴヌクレオチドの共有結合を可能にする官能基または部分での選択されたヌクレオチドへの付加またはその置換、および／または追加の電荷、分極率、水素結合、静電相互作用、および官能性をオリゴヌクレオチドへ組み込む官能性部分の付加または置換を含む。そのような修飾は、２'位糖修飾、５位ピリミジン修飾、８位プリン修飾、環外アミンでの修飾、４−チオウリジンの置換、５−ブロモまたは５−ヨードウラシルの置換、骨格修飾、メチル化、イソ塩基のイソシチジンおよびイソグアニジンといった塩基対の組み合わせ、および類似の組み合わせを含むがそれらに限定されない。オリゴヌクレオチド修飾はまた、キャップ化のような３'および５'修飾を含みうる。
ヌクレオシド類似体の例の構造を下記に提供する。それぞれ参照により本開示に含まれるＦｒｅｉｅｒ＆Ａｌｔｍａｎｎ；Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄＲｅｓ．，１９９７，２５，４４２９−４４４３およびＵｈｌｍａｎｎ；Ｃｕｒｒ．ＯｐｉｎｉｏｎｉｎＤｒｕｇＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２０００，３（２），２９３−２１３に記載されるヌクレオシド類似体のさらなる例を参照。

３．標的基
ここに記載される本発明と複合体化できる化合物は、標的基を含む。標的基は、受容体リガンド、抗体または抗体断片、一本鎖抗体、ターゲッティングペプチド、ターゲッティング糖質分子またはレクチンを含む。標的基は、ここに記載される化合物の、標的組織および細胞集団の結合または取り込みを促進する。たとえば、標的基の非限定的な一覧は、血管内皮細胞増殖因子、ＦＧＦ２、ソマトスタチンおよびソマトスタチン類似体、トランスフェリン、メラノトロピン、ＡｐｏＥおよびＡｐｏＥペプチド、フォンヴィルブラント因子およびフォンヴィルブラント因子ペプチド、アデノウイルス線維タンパク質およびアデノウイルス線維タンパク質ペプチド、ＰＤ１およびＰＤ１ペプチド、ＥＧＦおよびＥＧＦペプチド、ＲＧＤペプチド、葉酸などを含む。

４．診断薬
本発明の別の一態様は、随意的にここに記載されるポリマー送達システムと結合した診断タグを含んで調製される、タグが診断または造影目的で選択されることを特徴とする、複合体化合物を提供する。たとえば、適当なタグは、外科手術中に腫瘍組織の造影を可能にするために、本分野で標準的な任意の放射性同位体、放射線不透過標識、磁気共鳴標識、または磁気共鳴造影に適する他の非放射性同位体標識、蛍光型標識、紫外線、赤外線または電気化学刺激下で可視色を示すおよび／または蛍光を発しうる標識などと、任意の適当な部分、たとえば、アミノ酸残基を、結合することによって調製される。随意的に、診断タグが複合体化治療用部分に組み込まれおよび／または結合され、治療用生物活性材料の動物またはヒト患者中の分布の監視を可能にする。

本発明のさらに別の一態様では、本発明のタグ化複合体は、本分野で公知の方法によって、たとえば放射性標識を含む任意の適当な標識を用いて、容易に調製されうる。単に例として、これらは、インビボでの腫瘍細胞への選択的取り込みのための放射性免疫シンチグラフィー剤を製造するための、^１３１ヨウ素、^１２５ヨウ素、^９９ｍテクネチウムおよび／または^１１１インジウムを含む。たとえば、単に例として、参照により本開示に含まれる米国特許第５，３２８，６７９号；同第５，８８８，４７４号；同第５，９９７，８４４号；および同第５，９９７，８４５号の各明細書によって示されるものを含む、ペプチドをＴｃ−９９ｍへ結合するためのいくつかの本分野で公知の方法がある。

Ｇ．式に対応する好ましい実施形態
ここに記載の方法によって調製される一部の特定の実施形態は下記を含み：

ここで：
Ｒ_４はＯＨ、脱離基、標的基、診断薬および生物活性部分の中から選択され；
（ｚ）は約１〜約１０の正の整数であり；
（ｚ’）は０または約１〜約４の正の整数であり；
ｍＰＥＧは式：ＣＨ_３−Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−を有し；
ＰＥＧは、式：−Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−を有し；
（ｎ）は約１０〜約２，３００の正の整数である。

本発明に記載の好ましいポリマー化合物は下記を含み：

ここで、
薬物（Ｄｒｕｇ）は医薬活性化合物、酵素、タンパク質、抗体、モノクローナル抗体、一本鎖抗体およびペプチドであり；
すべての変数は先に定義されるとおりである。

Ｇ．活性化ポリマーおよびそれを用いて作製される複合体を作製する方法
本発明の一態様では、ヒンダードエステルを有するポリマー化合物は、末端にＯＨまたは脱離基を有するポリマー化合物を、遠位端に保護されたヒンダードエステルまたはヒンダード酸を有する求核試薬と複合体化することによって調製されうる。さらに結果として生じるポリマー化合物の脱保護および活性化は、本発明の化合物を提供する。本発明の末端基は、ＯＨまたはＳＨを含む部分とカップリングされうる状態であるカルボン酸形、またはＯＨまたはＳＨを含む部分との複合体化に際して置換されうる活性化形のどちらかでありうる。

あるいは、ＯＨまたはＳＨを含む化合物は、複合体化されてヒンダードエステル中間体を形成でき、それを今度は活性化ポリマーと反応させて、生物活性部分を有するヒンダードエステルを持つポリマー複合体となる。

説明のために、ヒンダードアシルまたはエステル部分を含むポリマー複合体を調製する方法は下記を含む：
式（ＩＩＩ）の化合物を：

式（ＩＶ）の化合物と

式（Ｖ）の化合物を生じるのに十分な条件下で反応させ：

ここで、
Ａ_１はキャップ基またはＭ_１であり；
Ａ_２はキャップ基または：

であり；
Ｍ_１は、ハロゲン、活性化カルボナート、イソシアナート、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル、トシラート、メシラート、トレシラート、ノシラート、ｏ−ニトロフェノキシ、イミダゾールおよび当業者に公知である他の脱離基といった脱離基であり；
Ｍ_２は−ＯＨ、−ＳＨ、または−ＮＨＲ_１０１であり；
Ｒ_１００はＯＨまたはＯＲ_１０１であり；ここで、Ｒ_１０１は水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−１９分岐鎖アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキル、Ｃ_１−６置換アルキル、Ｃ_２−６置換アルケニル、Ｃ_２−６置換アルキニル、Ｃ_３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ_１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１−６ヘテロアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ_１−６ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ_２−６アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ_２−６アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ_２−６置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシおよび置換アリールカルボニルオキシの中から選択され；
すべての他の変数は先に定義されるとおりである。

式（ＩＶ）に記載のヒンダードエステル部分の、ＰＥＧまたは他のポリマーへの結合は、当業者によく知られている標準的な化学合成法を用いて実施されうる。ＳＣ−ＰＥＧ、ＰＥＧ−アミン、ＰＥＧ酸などといった活性化ポリマー部分は、市販品を入手可能であるかまたは過度の実験なしに当業者によって合成されうる。

本発明の目的では、ヒンダードエステル部分の非限定的な一覧は下記を含む：

式（Ｖ）の化合物はさらに、−ＯＨまたは−ＳＨを含む部分と、式（Ｉａ）の化合物を生じるのに十分な条件下で、塩基およびカップリング剤の存在下で反応されうる：

ここで、
Ａ_３はキャップ基または：

であり；
Ｒ_１０３は、標的剤、診断薬および生物活性部分の中から選択され；すべての他の変数は先に定義されるとおりである。

本発明の目的では、Ｒ_１０３は、式（Ｖ）の化合物との反応を受けた後に残る、ＯＨまたはＳＨを含む部分と理解される。

あるいは、ここに記載される化合物は下記を含む方法によって調製されうる：
式（ＶＩ）の化合物を：

式（ＶＩＩ）の化合物と：

式（ＶＩＩＩ）の化合物を生じるのに十分な条件下で反応させ：

ここで：
Ａ_４はキャップ基またはＭ_４であり；
Ａ_５はキャップ基または：

であり；
Ｍ_３は−ＯＨ、ＳＨ、または−ＮＨＲ_１０５であり；
Ｍ_４は、ハロゲン、活性化カルボナート、イソシアナート、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル、トシラート、メシラート、トレシラート、ノシラート、ｏ−ニトロフェノキシ、イミダゾールおよび当業者に公知である他の脱離基といった脱離基であり；
Ｒ_１０４は生物活性部分、標的基および診断薬から選択され；
Ｒ_１０５は、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−１９分岐鎖アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキル、Ｃ_１−６置換アルキル、Ｃ_２−６置換アルケニル、Ｃ_２−６置換アルキニル、Ｃ_３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ_１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１−６ヘテロアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ_１−６ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ_２−６アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ_２−６アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ_２−６置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシおよび置換アリールカルボニルオキシの中から選択され；
すべての他の変数は先に定義されるとおりである。

ヒンダードエステルを含む基の、ポリマー部分との結合は、好ましくはカップリング剤の存在下で実施される。適当なカップリング剤の非限定的な一覧は、たとえばＳｉｇｍａ−ＡｌｄｒｉｃｈＣｈｅｍｉｃａｌ社のような製造者から入手可能な、または公知の方法で合成される、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣ）、任意の適当なジアルキルカルボジイミド、２−ハロ−１−アルキル−ピリジニウムハライド（向山試薬）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）、プロパンリン酸環状無水物（ＰＰＡＣＡ）およびジクロロリン酸フェニルなどを含む。
好ましくは、反応は、塩化メチレン、クロロホルム、ＤＭＦまたはその混合物といった不活性溶媒中で実施される。反応は好ましくは、酸が生じれば中和するための、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジン、トリエチルアミンなどといった塩基の存在下で実施されうる。反応は約０℃〜約２２℃（室温）の温度にて実施されうる。
Ｈ．治療の方法
本発明の別の一態様は、哺乳類におけるさまざまな症状のための治療の方法を提供する。その方法は、そのような治療を必要とする哺乳類へ、生物活性部分と複合体化された場合の、ここに記載される化合物の有効量を投与することを含む。ポリマー複合体化合物は、特に、哺乳類において、たとえば酵素補充療法、悪性腫瘍疾患などの、親化合物で治療されるものと同様の疾患を治療し、腫瘍量を低減し腫瘍の転移を防止しおよび腫瘍の再発／新生物増殖を防止するのに有用である。

投与されるポリマー複合体の量は、それに含まれる親分子の量に依存する。一般的に、治療法に使用されるポリマー複合体の量は、哺乳類において目的の治療結果を有効に達成する量である。当然、さまざまなポリマー複合体化合物の用量は、親化合物、ポリマーの分子量、インビボ加水分解の速度などに依存していくらか変化する。当業者は、臨床経験および治療適応に基づいて、選択されたポリマー輸送複合体の最適用量を決定する。実際の用量は過度の実験なしで当業者に明らかになる。

本発明の化合物は、哺乳類への投与のための１つ以上の適当な医薬組成物に含まれうる。医薬組成物は、当業者によく知られた方法にしたがって調製された溶液、懸濁液、錠剤、カプセルなどの形でありうる。また、そのような組成物の投与は、当業者の必要に応じて経口および／または非経口経路によることができると考えられる。組成物の溶液および／または懸濁液は、たとえば担体媒体として、たとえば、静脈、筋肉内、腹腔内、皮下注射などによる、本分野で公知の方法による組成物の注射または浸潤に使用されうる。そのような投与はまた、体腔または洞への注入による、および吸入および／または経鼻経路によることができる。本発明の好ましい態様では、しかし、ポリマー複合体はそれを必要とする哺乳類へ非経口的に投与される。

下記の実施例は本発明のさらなる理解を提供する役割を果たすが、本発明の範囲をいかなる方法でも制限しないことが意図される。実施例中に挙げられる太字の数字は、図１〜４に示すものに対応する。ＤＣＭ（ジクロロメタン）、ＤＩＰＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）、ＤＭＡＰ（４−ジメチルアミノピリジン）、ＤＭＦ（Ｎ、Ｎ’−ジメチルホルムアミド）、ＥＤＣ（１−（３−ジメチルアミノ−プロピル）−３−エチルカルボジイミド）、ＩＰＡ（イソプロパノール）、Ｍｍｔ（４−メトキシトリフェニルメチル）、ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド）、ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）、ＳＣＡ−ＳＨ（１本鎖抗体）、ＳＣ−ＰＥＧ（スクシンイミジルカルボナートポリエチレングリコール）、ＴＥＡＡ（酢酸テトラエチルアンモニウム）、ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）、およびＴＨＦ（テトラヒドロフラン）といった略語が実施例全体にわたって使用される。

一般的手順：
すべての反応は乾燥窒素またはアルゴン雰囲気下で実施される。市販試薬はさらなる精製なしに使用される。すべてのＰＥＧ化合物は使用前に減圧下でまたはトルエンとの共沸蒸留によって乾燥される。特記されない限り、^１３ＣＮＭＲスペクトルは７５．４６ＭＨｚにてＶａｒｉａｎＭｅｒｃｕｒｙ（登録商標）３００ＮＭＲ分光計および重水素化クロロホルムおよびピリジンを溶媒として用いて得られた。化学シフト（δ）はテトラメチルシラン（ＴＭＳ）の下方領域のｐｐｍで記録される。

ＨＰＬＣ法：
反応混合物、および中間体および最終産物の純度は、ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒＳｙｓｔｅｍＧｏｌｄ（登録商標）ＨＰＬＣ装置を用いて監視される。それはＺＯＲＢＡＸ（登録商標）３００ＳＢＣ８逆相カラム（１５０×４．６ｍｍ）またはＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＪｕｐｉｔｅｒ（登録商標）３００ＡＣ１８逆相カラム（１５０×４．６ｍｍ）を１６８ダイオードアレイＵＶ検出器と共に、アセトニトリル５〜８０％の勾配を含む０．０５Ｍ酢酸テトラエチルアンモニウム（ＴＦＡＡ）を用いて流速１ｍＬ／分にて使用する）。

実施例１．ＰＥＧ−ＨＥ−酸、化合物（３）の調製
ＳＣ−ＰＥＧ（化合物１、分子量４０ｋ、１．５ｇ、０．０３７５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（２０ｍＬ）に室温にて溶解した。その溶液へ、４−アミノ−２，２−ジメチル酪酸塩酸塩（化合物２、２６．４ｍｇ、０．１５８ｍｍｏｌ）、ジイソプロピルエチルアミン（４０μＬ、０．２２５ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１ｍＬ）を加えた。反応混合物を２０時間室温にてかくはんし、溶媒を減圧して一部除去した。残渣を、エーテル（４０ｍＬ）を添加することによって沈澱させて白色固体を得、それをアセトニトリル−ＩＰＡから再結晶して産物１．３５ｇを得た。^１３ＣＮＭＲ δ １７８．５，１５６．５，７０．６，６３．９，４０．３，４０．２，２５．６。

実施例２．ＰＥＧ−ＨＥ−パクリタキセル、化合物（５）の調製
化合物３（１．３ｇ、０．０３２２ｍｍｏｌ）をクロロホルム（２０ｍＬ）およびＤＭＦ（６ｍＬ）の混合物に溶解した。かくはんした溶液へ、パクリタキセル（化合物４、０．１６５ｇ、０．１９３２ｍｍｏｌ）を、次いでＤＭＡＰ（５１ｍｇ、０．４２０ｍｍｏｌ）を室温にて加えた。反応混合物を次いで−８℃に冷却し、ＥＤＣ（５０ｍｇ、０．２５８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温まで温まらせ、および２０時間かくはんした。ＤＭＦを含む溶媒を、ロータリーエバポレーター水浴温度３７℃以下で除去した。残った残渣へエーテルを加えて固体を得て、それをアセトニトリル−ＩＰＡから再結晶した：^１３ＣＮＭＲ δ ２０４，１７７，１７４，１７２，１７１，１７０，１６７，１２７−１３４（７シグナル），６３．８，５８．５，５５．０，３６−４６（６シグナル），９．５−２８（８シグナル）。

実施例３．Ｂｒ−ＨＥ−ＯＥｔ、化合物（８）の調製
ブチルリチウム（１．６Ｍを含むｔ−ＢｕＯＨ溶液、２００ｍＬ）を、イソ酪酸エチル（化合物６、３５ｇ）を含むＴＨＦ（５００ｍＬ）溶液へ−７８℃にて加え、および溶液を１時間同一温度にてかくはんした。１，５−ジブロモペンタンＤｉｂｒｏｍｏｐｅｔａｎｅ（化合物７、１００ｇ）を加え、および混合物を室温まで温まらせた。混合物を室温にて１時間かくはんし、炭酸水素ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）へ注いだ。有機層を蒸発した。残渣をシリカゲルカラムで精製し、１０％酢酸エチルを含むヘキサンで溶出して、目的産物を液体として与えた（２９．２ｇ、収率３６．７％）。

実施例４．Ｎ_３−ＨＥ−ＯＥｔ、化合物（９）の調製
７−ブロモ−２，２−ジメチルヘプタン酸エチル（化合物８、２６．５ｇ）を、アジ化ナトリウム（１３ｇ）を含むＤＭＦ（５００ｍＬ）と共に１００℃にて２時間加熱した。混合物を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムで精製し、１０％酢酸エチルを含むヘキサンで溶出して、目的産物を液体として与えた（２０．５ｇ、収率９０．３％）。

実施例５．Ｎ_３−ＨＥ−ＯＨ、化合物（１０）の調製
７−アジド−２，２−ジメチルヘプタン酸エチル（化合物９、２０．５ｇ）を、水酸化ナトリウム（１０ｇ、８５％）を含むエタノール（５００ｍＬ）と共に還流下で２時間加熱した。混合物を濃縮し、水（４００ｍＬ）を加えた。混合物を濃塩酸でｐＨ２へ酸性化し、酢酸エチル（５００ｍＬ）で抽出した。有機層を濃縮し、残渣をシリカゲルカラムで精製し、５０％酢酸エチルを含むヘキサンで溶出して、目的産物を液体として与えた（１７．１ｇ、収率９５％）。

実施例６．Ｎ_３−ＨＥ−Ｔ、化合物（１２）の調製
７−アジド−２，２−ジメチルヘプタン酸（化合物１０、８ｇ）をジクロロメタン（２００ｍＬ）に溶解した。シュウ酸クロリド（６．４ｇ）を加え、および混合物を２時間還流し、蒸発した。残渣をジクロロメタン（１００ｍｌＬ）に溶解し、３’−アセチルチミジン（化合物１１、５．８５ｇ）を含むピリジン（１００ｍＬ）に加えた。溶液を室温にて２４時間かくはんし、炭酸水素ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）へ注いだ。混合物をジクロロメタン（５００ｍＬ）で抽出し、有機層を濃縮した。残渣をシリカゲルカラムで精製し、５％メタノールを含むＤＣＭで溶出して、目的産物を無色固体として与えた（５．６ｇ、収率６１％）。

実施例７．ＮＨ_２−ＨＥ−Ｔ、化合物（１３）の調製
５’−（７−アジド−２，２−ジメチルヘプタノイル）３’−アセチルチミジン（化合物１２、４．６５ｇ）を、メタノール（２００ｍＬ）中で３０ｐｓｉ下でＰｄ／Ｃ（１０％、０．５ｇ）の存在下で１時間水素化した。混合物をろ過し、ろ液を蒸発して固体を与えた（４．４ｇ、収率１００％）。

実施例８．ＭｍｔＮＨ−ＨＥ−Ｔ、化合物（１４）の調製
５’−（７−アミノ−２，２−ジメチルヘプタノイル）３’−アセチルチミジン（化合物１３、４．４ｇ）、トリエチルアミン（４ｍｌ）および塩化４−メトキシトリチル（７．５ｇ）を、ピリジン（１００ｍＬ）中で１０時間かくはんした。メチルアミン（４０％、１０ｍＬ）を加え、および溶液を２時間かくはんした。混合物を炭酸水素ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）へ注ぎ、およびジクロロメタン（５００ｍＬ）で抽出した。有機層を濃縮した。残渣をシリカゲルカラムで精製し、５％メタノールを含むジクロロメタンで溶出して、目的産物を無色固体として与えた（４．９ｇ、収率７１％）。

実施例９．ＭｍｔＮＨ−ＨＥ−Ｔ−ホスホロアミダイト、化合物（１５）の調製
５’−（７−[（ＭＭＴ−アミノ）−２，２−ジメチルヘプタノイル]チミジン（化合物１４、４．９ｇ）、Ｎ，Ｎ−テトライソプロピル−シアノエチルホスホラミダイト（３ｇ）およびテトラゾール（０．５ｇ）を含むアセトニトリル（５０ｍｌ）を一夜かくはんした。混合物を炭酸水素ナトリウム水溶液（５００ｍｌ）へ注ぎ、およびジクロロメタン（５００ｍｌ）で抽出した。有機層を濃縮した。残渣をシリカゲルカラムで精製し、５０％酢酸エチルを含むヘキサンで溶出して、目的産物を無色固体として与えた（４．５ｇ、収率７１％）。

実施例１０．ＮＨ_２−ＨＥ−オリゴ、化合物（１６）の調製
化合物１５をＴｒｉｌｉｎｋＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（カリフォルニア州）へ送り、オリゴ合成において最後のモノマーとして用いた。合成後にＭｍｔ基を脱保護し、オリゴをＲＰ−ＨＰＬＣによって精製し、遊離アミンとして化合物１６をＰＥＧ複合体化用に得た。オリゴヌクレオチドの配列はＴＣＴＣＣＣＡＧＣＧＴＧＣＧＣＣＡＴであった。

実施例１１．ＰＥＧ−ＨＥ−オリゴ、化合物（１７）の調製
化合物１６（１０ｍｇ、１．７μｍｏｌ）を含むＰＢＳ緩衝液（５ｍＬ、ｐＨ７．８）の溶液へ、ＳＣ−ＰＥＧ（化合物１、分子量３０ｋ、５２０ｍｇ、１７μｍｏｌ）を加え、および室温にて５時間かくはんした。反応混合物を水で希釈して５０ｍＬとし、２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液ｐＨ７．４（緩衝液Ａ）で予め平衡化されたＰｏｒｏｓＨＱ強陰イオン交換カラム（１０ｍｍ×１．５ｍｍ、ベッドボリューム〜１６ｍＬ）に負荷した。カラムを３〜４カラム体積の緩衝液Ａで洗浄して過剰のＰＥＧリンカーを除去した。次いで産物を、０から１００％の１ＭＮａＣｌを含む２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液ｐＨ７．４の緩衝液Ｂの１０分間の勾配、次いで１００％緩衝液Ｂで１０分間流速１０ｍＬ／分にて溶出した。溶出した産物を、ＨｉＰｒｅｐ脱塩カラム（５０ｍＬ）を用いて脱塩し、凍結乾燥して６ｍｇの産物を与えた。ＵＶで測定した複合体中のオリゴヌクレオチドの当量は６０％重量／重量であった。

実施例１２．ＰＥＧ−リンカー−ＨＥ−オリゴ化合物（１９）の調製
化合物１６（１０ｍｇ、１．７μｍｏｌ）を含むＰＢＳ緩衝液（５ｍＬ、ｐＨ７．８）の溶液へ、ＰＥＧ−リンカー−ＮＨＳ（化合物１８、分子量３０ｋ、５２０ｍｇ、１７μｍｏｌ）を加え、および室温にて５時間かくはんした。反応混合物を水で希釈して５０ｍＬとし、２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液ｐＨ７．４（緩衝液Ａ）で予め平衡化されたＰｏｒｏｓＨＱ強陰イオン交換カラム（１０ｍｍ×１．５ｍｍ、ベッドボリューム〜１６ｍＬ）に負荷した。カラムを３〜４カラム体積の緩衝液Ａで洗浄して過剰のＰＥＧリンカーを除去した。次いで産物を、０から１００％の１ＭＮａＣｌを含む２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液ｐＨ７．４の緩衝液Ｂの１０分間の勾配、次いで１００％緩衝液Ｂで１０分間流速１０ｍＬ／分にて溶出した。溶出した産物を、ＨｉＰｒｅｐ脱塩カラム（５０ｍＬ）を用いて脱塩し、凍結乾燥して固体とし、目的産物５ｍｇを与えた。ＵＶで測定した複合体中のオリゴヌクレオチドの当量は５０％重量／重量であった。

実施例１３．ＢｏｃＮＨ−ＨＥ−Ｔ、化合物（２２）の調製
４−Ｂｏｃ−アミノ−２，２−ジメチル酪酸（化合物２０、０．５０ｇ、２．１６ｍｍｏｌ）を、クロロホルム（１０ｍＬ）およびＤＭＦ（５ｍＬ）の混合物に溶解し、チミジン（化合物２１、０．７９ｇ、３．２５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を氷浴中で冷却し、ＥＤＣ（０．６２ｇ、３．２５ｍｍｏｌ）を、次いでＤＭＡＰ（０．４０ｇ、３．２５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を２０時間かくはんしながら室温に温まらせた。溶媒を減圧して除去し、残渣を酢酸エチルに懸濁し、０．１ＮＨＣｌ、および鹹水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧して除去して粗製油を得た。ｏｎシリカゲルでＤＣＭ／ＥｔＯＡｃ（４０：６０、ｖ／ｖ）を用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーは目的産物０．２８ｇを与えた：^１３ＣＮＭＲ δ １７７．２１，１６４．０８，１５６．４１，１５０．８０，１３５．４６，１１１．４９，８５．４３，８４．３０，８０．２１，７１．２８，６３．７７，４１．６７，４１．０８，４０．００，３７．６９，３６．９９，２８．８７，２６．１４，２５．５５，１３．０６。

実施例１４．ＮＨ_２−ＨＥ−Ｔ、化合物（２３）の調製
化合物２２（０．２５ｇ、０．５５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍＬ）に溶解し、ＴＦＡ（０．２５ｍＬ）を溶液へピペットで室温にて加えた。反応混合物を室温にて２０分間かくはんした。ＴＦＡを完全に除去するためにＤＣＭと同時蒸発することによって、溶媒およびＴＦＡを減圧して除去し、産物０．３２ｇをガラス質の固体として与えた：^１３ＣＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ） δ １７６．６１，１６４．２２，１５０．８１，１３６．４１，１３６．１８，１１０．８２，８５．１４，８５．０７，８４．１４，８３．９７，７０．９９，６４．５６，４１．３２，３９．３５，３７．１３，３６．９２，２５．１０，２４．９２，２４．７５，１２．０８，１１．９８。

実施例１５．ＰＥＧ−ＨＥ−Ｔ、化合物（２５）の調製
ｍＰＥＧ−リンカー−ＮＨＳ（化合物２４、分子量２０ｋ、０．５０ｇ、０．０２４６ｍｍｏｌ）および化合物２３（２６ｍｇ、０．０７３８ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（５ｍＬ）およびＤＭＦ（１ｍＬ）の混合物に溶解し、ＤＭＡＰ（１５ｍｇ、０．０１２３ｍｍｏｌ）を溶液に加えた。反応混合物を室温にて２．５時間かくはんした。溶媒を減圧して除去し、粗産物をエチルエーテルの添加によって沈澱した。固体をろ過によって回収し、アセトニトリル／ＩＰＡから再結晶して産物０．４３ｇを純白色固体として与えた：^１３ＣＮＭＲ δ １７７．９，１６８．０，１６４．０，１５０．９，１３４．９，１３３．１，１２９．８，１２８．１，１１０．２，８４．４，８３．９，７０．４，６７．８，６４．５，６３．２，６０．０，５８．７，４０．１，３９．４，３７．２，２５．２，２４．７，１６．１，１２．２。

実施例１６．ＰＥＧ−ＨＥ−Ｔ、化合物（２７）の調製
ｍＰＥＧ−ＮＨＳ（化合物２６、分子量２０ｋ、１ｇ、０．０４９２ｍｍｏｌ）および化合物２３（２６ｍｇ、０．１４７６ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１０ｍＬ）およびＤＭＦ（２ｍＬ）の混合物に溶解し、ＤＭＡＰ（３０ｍｇ、０．２４６ｍｍｏｌ）を溶液に加えた。反応混合物を室温にて２．５時間かくはんした。溶媒を減圧して除去し、粗産物をエチルエーテルの添加によって沈澱した。固体をろ過によって回収し、アセトニトリル／ＩＰＡから再結晶して産物０．９０ｇを白色固体として与えた：^１３ＣＮＭＲ δ １７８．２，１６２．９，１５６．０，１４９．５，１３４．６，１１０．３，８４．４，８３．４，７０．１，６９．１，６４．４，６３．５，６２．６，６１．２，５８．６，４０．６，４０．０，３９．４，３７．１，１２．２。

実施例１７．緩衝液およびラット血漿中のＰＥＧ複合体の安定性の測定
加水分解の速度は、Ｃ８逆相カラム（Ｚｏｒｂａｘ（登録商標）ＳＢ−Ｃ８）を使用して、（ａ）０．１Ｍ酢酸トリエチルアンモニウム緩衝液および（ｂ）アセトニトリルから成る勾配移動相を用いて得られた。流速１ｍＬ／ｍｉｎを用い、およびクロマトグラムはＵＶ検出器を用いてパクリタキセルについて２２７ｎｍ、およびオリゴヌクレオチドについて２６０ｎｍにて監視した。緩衝液中の加水分解については、ＰＥＧ誘導体を０．１ＭｐＨ７．４ＰＢＳまたは水に濃度５ｍｇ／ｍＬにて溶解し、一方、血漿中の加水分解については、誘導体を蒸留水に濃度２０ｍｇ／１００μＬにて溶解し、ラット血漿９００μＬをこの溶液に加えた。混合物を２分間ボルテックスし、２ｍＬガラスバイアルへ、各バイアルに部分標本１００μＬで分割した。溶液を３７℃にてさまざまな時間インキュベートした。メタノール−アセトニトリルの混合物（１：１、ｖ／ｖ、４００μＬ）を適当な間隔でバイアルに加え、および混合物を１分間ボルテックスし、次いで０．４５ｍｍフィルター膜を通してろ過した（随意的に次いで０．２ｍｍフィルター膜を通して２回目のろ過を行った）。ろ液の部分標本２０μＬをＨＰＬＣに注入した。ピーク面積に基づいて、未変化化合物およびＰＥＧ誘導体の量を推定し、異なる媒体中の各化合物の半減期を、ＰＥＧ誘導体の消失から直線回帰分析を用いて計算した。下記の表は実施例中の化合物についての安定性試験の結果を示す。

Claims

式（Ｉ）：

の化合物であって、
ここで、
Ａはキャップ基または：

であり；
Ｒ_１は実質的に非抗原性の水溶性ポリマーであり；
Ｌ_１およびＬ’_１は、独立して、Ｃ（＝Ｙ_１）またはＣ（＝Ｙ’_１）から４〜１０原子、好ましくは４〜８および非常に好ましくはＣ（＝Ｙ_１）またはＣ（＝Ｙ’_１）から４〜５原子に位置する自由電子対を有する、選択されるスペーサーであり；
Ｌ_２およびＬ’_２は独立して選択される二官能性リンカーであり；
Ｙ_１およびＹ’_１は独立してＯ、Ｓ、またはＮＲ_５であり；
Ｒ_２、Ｒ’_２、Ｒ_３、Ｒ’_３およびＲ_５は独立して、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−１９分岐鎖アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキル、Ｃ_１−６置換アルキル、Ｃ_２−６置換アルケニル、Ｃ_２−６置換アルキニル、Ｃ_３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ_１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１−６ヘテロアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ_１−６ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ_２−６アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ_２−６アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ_２−６置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシおよび置換アリールカルボニルオキシからなる群より選択され、またはＲ_２がＲ_３と共に、およびＲ’_２がＲ’_３と共に、独立して、少なくとも３つの炭素を含む置換または非置換非芳香族環状炭化水素を形成し；
Ｒ_４およびＲ’_４は独立して、ＯＨ、脱離基、標的基、診断薬および生物活性部分からなる群より選択され；
（ｐ）および（ｐ’）は独立して、０または正の整数、好ましくは０または約１〜約３の整数、より好ましくは０または１であり；
ただしＲ_２がＨである場合、Ｒ_３は少なくとも３つの炭素を有する置換または非置換炭化水素であり、さらに、Ｌ_１はＣ（Ｒ_２）（Ｒ_３）と同一でないことを条件とする、
化合物。
前記脱離基が、ＯＨ、ハロゲン、活性化エステル、環状イミドチオン、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル、ｐ−ニトロフェノキシ、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾリル、イミダゾール、トシル、メシル、トレシル、ノシル、Ｃ_１−６アルキルオキシ、Ｃ_１−６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、ｏ−ニトロフェノキシ、ペンタフルオロフェノキシ、１，３，５−トリクロロフェノキシおよび１，３，５−トリフルオロフェノキシからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
Ｒ_４およびＲ’_４が独立して、ＯＨ、メトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｐ−ニトロフェノキシおよびＮ−ヒドロキシスクシンイミジルからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
前記生物活性部分が−ＯＨを含む部分および−ＳＨを含む部分からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
前記生物活性部分が、医薬活性化合物、酵素、タンパク質、抗体、モノクローナル抗体、一本鎖抗体およびペプチドからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
Ｌ_１およびＬ’_１が独立して、

からなる群より選択され、
ここで、
Ｒ_１１−Ｒ_１６が独立して、水素、アミノ、置換アミノ、アジド、カルボキシ、シアノ、ハロ、ヒドロキシル、ニトロ、シリルエーテル、スルホニル、メルカプト、Ｃ_１−６アルキルメルカプト、アリールメルカプト、置換アリールメルカプト、置換Ｃ_１−６アルキルチオ、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−１９分岐鎖アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキル、Ｃ_１−６置換アルキル、Ｃ_２−６置換アルケニル、Ｃ_２−６置換アルキニル、Ｃ_３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ_１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１−６ヘテロアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ_１−６ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ_２−６アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ_２−６アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ_２−６置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシ、および置換アリールカルボニルオキシからなる群より選択され；
（ｓ）および（ｓ’）は独立して０または正の整数であり；
（ｒ）が０または１である
ことを特徴とする、請求項１記載の化合物。
Ｌ_２およびＬ’_２が独立して、下記からなる群より選択され：

ここで、（ｒ）および（ｒ’）が独立して０または１である
ことを特徴とする、請求項１記載の化合物。
Ｌ_２およびＬ’_２が独立して、下記からなる群より選択され：

ここで、
Ｙ_{１１−１９}が独立してＯ、ＳまたはＮＲ_４８であり；
Ｒ_{３１−４８}、Ｒ_{５０−５１}およびＡ_５１が独立して、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_３−１２分岐鎖シクロアルキル、Ｃ_３−８シクロアルキル、Ｃ_１−６置換シクロアルキル、Ｃ_３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ_１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１−６ヘテロアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、フェノキシおよびＣ_１−６ヘテロアルコキシからなる群より選択され；
Ａｒがアリールまたはヘテロアリール部分であり；
Ｌ_{１１−１５}が独立して選択される二官能性スペーサーであり；
ＪおよびＪ’が独立して、標的細胞内へ能動輸送される部分、疎水性部分、二官能性結合部分およびその組合せからなる群より選択され；
（ｃ１１）、（ｈ１１）、（ｋ１１）、（ｌ１１）、（ｍ１１）および（ｎ１１）が独立して選択される正の整数であり；
（ａ１１）、（ｅ１１）、（ｇ１１）、（ｊ１１）、（ｏ１１）および（ｑ１１）が独立して０または正の整数であり；
（ｂ１１）、（ｘ１１）、（ｘ’１１）、（ｆ１１）、（ｉ１１）および（ｐ１１）が独立して０または１である
ことを特徴とする、請求項１記載の化合物。
Ｌ_２およびＬ’_２が独立して、アミノ酸，アミノ酸誘導体，およびペプチドからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
−Ｌ_１−Ｃ（Ｒ_２）（Ｒ_３）−Ｃ（＝Ｙ_１）−および−Ｌ’_１−Ｃ（Ｒ’_２）（Ｒ’_３）−Ｃ（＝Ｙ’_１）が独立して：

からなる群より選択されることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
式（ＩＩ）：

を有することを特徴とする請求項１記載の化合物。
Ａが、Ｈ、ＮＨ_２、ＯＨ、ＣＯ_２Ｈ、Ｃ_１−６アルコキシおよびＣ_１−６アルキルからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
Ｒ_１が、直鎖、末端分岐鎖またはマルチアーム型のポリアルキレンオキサイドを含むことを特徴とする、請求項１記載の化合物。
前記ポリアルキレンオキサイドが、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレングリコールからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１３記載の化合物。
前記ポリアルキレンオキサイドが：

からなる群より選択され、
ここで：
Ｙ_７１およびＹ_７３が独立してＯ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ_２、ＮＲ_７３または結合であり；
Ｙ_７２がＯ、Ｓ、またはＮＲ_７４であり；
Ｒ_{７１−７４}が独立して、Ｒ_２に使用されうる同一の部分であり；
（ａ７１）、（ａ７２）、および（ｂ７１）が独立して０または正の整数であり；
（ｎ）が約１０〜約２３００の整数である
ことを特徴とする、請求項１３記載の化合物。
前記ポリアルキレンオキサイドが、式：−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−のポリエチレングリコールであり、
ここで（ｎ）が約１０〜約２，３００の整数である
ことを特徴とする、請求項１３記載の化合物。
Ｒ_１が平均分子量約２，０００〜約１００，０００であることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
Ｒ_１が平均分子量約５，０００〜約６０，０００であることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
Ｒ_１が平均分子量約５，０００〜約２５，０００または約２０，０００〜約４５，０００であることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
Ｒ_２、Ｒ’_２、Ｒ_３およびＲ’_３が独立して、メチル、エチルおよびイソプロピルからなる群より選択されることを特徴とする、請求項１記載の化合物。
式：

からなる群より選択され、
ここで：
Ｒ_４がＯＨ、脱離基、標的基、診断薬および生物活性部分からなる群より選択され；
（ｚ）が約１〜約１０の正の整数であり；
（ｚ’）が０または約１〜約４の正の整数であり；
ｍＰＥＧが式：ＣＨ_３−Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−を有し；
ＰＥＧが式：−Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−を有し、
（ｎ）が約１０〜約２，３００の正の整数である
ことを特徴とする、請求項１記載の化合物。
式：

からなる群より選択され、
ここで：
薬物（ｄｒｕｇ）が医薬活性化合物、酵素、タンパク質、抗体、モノクローナル抗体、一本鎖抗体およびペプチドであり；
（ｚ）が約１〜約１０の正の整数であり；
（ｚ’）が０または約１〜約４の正の整数であり；
ｍＰＥＧが式：ＣＨ_３−Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−を有し；
ＰＥＧが式：−Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−を有し、
（ｎ）が約１０〜約２，３００の正の整数である
ことを特徴とする、請求項１記載の化合物。
ヒンダードアシルまたはエステル部分含有ポリマー複合体を調製する方法であって、ここで該方法は、
式（ＩＩＩ）の化合物：

を、式（ＩＶ）の化合物：

と、式（Ｖ）の化合物を生じるのに十分な条件下で反応させる工程を有してなり：

ここで：
Ａ_１がキャップ基またはＭ_１であり；
Ａ_２がキャップ基または：

であり；
Ｒ_１が実質的に非抗原性の水溶性ポリマーであり；
Ｍ_１が脱離基であり；
Ｍ_２が−ＯＨ、ＳＨ、または−ＮＨＲ_１０１であり；
Ｒ_１００が、ＯＨ、またはＯＲ_１０１からなる群より選択され；
Ｌ_１およびＬ_２が、独立して、Ｃ（＝Ｙ_１）またはＣ（＝Ｙ’_１）から４〜１０原子に位置する自由電子対を有する、選択されるスペーサーであり；
Ｙ_１およびＹ’_１が独立してＯ、Ｓ、またはＮＲ_５であり；
Ｒ_２、Ｒ_３、Ｒ_５、およびＲ_１００が独立して、水素、Ｃ_１−６アルキル、Ｃ_２−６アルケニル、Ｃ_２−６アルキニル、Ｃ_３−１９分岐鎖アルキル、Ｃ_３−８シクロアルキル、Ｃ_１−６置換アルキル、Ｃ_２−６置換アルケニル、Ｃ_２−６置換アルキニル、Ｃ_３−８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ_１−６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１−６ヘテロアルキル、Ｃ_１−６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ_１−６ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ_２−６アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ_２−６アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ_２−６置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ_２−６置換アルカノイルオキし、置換アリールカルボニルオキシからなる群より選択され、またはＲ_２がＲ_３と共に、およびＲ’_２がＲ’_３と共に、独立して少なくとも３つの炭素を含む置換または非置換非芳香族環状炭化水素を形成し；
（ｐ）が０または正の整数であり；
Ｒ_２がＨである場合はＲ_３は少なくとも３つの炭素を有する置換または非置換炭化水素であり、さらに、Ｌ_１はＣ（Ｒ_２）（Ｒ_３）と同一でないことを条件とする、
方法。
（Ｖ）の化合物：

を、 −ＯＨまたは−ＳＨを含む部分：
と、式（Ｉａ）の化合物：

を生じるのに十分な条件下で、活性化および反応させる工程を有してなり、
ここで：
Ａ_３はキャップ基または：

であり；
Ｒ_１０３は標的剤，診断薬および生物活性部分からなる群より選択され；
すべての他の変数は請求項２３に定義されるのと同一である
ことを特徴とする請求項２３記載の方法。
生体活性部分と結合した場合の式（Ｉ）の化合物を有効量で、それらを必要とする患者へ投与することを含む、哺乳類を治療する方法。