MX2009002854A - Oxidos de polialquileno que tienen enlazadores biodegradables a base de ester impedido. - Google Patents

Oxidos de polialquileno que tienen enlazadores biodegradables a base de ester impedido.

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Abstract

La presente invención provee sistemas de suministro polimérico que incluyen porciones éster impedido; también se describen métodos para hacer los sistemas de suministro poliméricos y métodos de tratamiento de mamíferos usando los mismos.

Description

OXIDOS DE POLIALQUILENO QUE TIENEN ENLAZADORES BIODEGRADABLES A BASE DE ESTER IMPEDIDO REFERENCIA CRUZADA A SOLICITUD RELACIONADA Esta solicitud reclama el beneficio de prioridad de la solicitud de patente provisional de E.U.A. No. 60/844,942 presentada el 15 de septiembre de 2006, cuyo contenido se incorpora aquí por referencia.
CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a polímeros activados mejorados tales como óxidos de polialquileno. En particular, la invención se refiere a polímeros activados que contienen porciones de éster impedido que mejoran el suministro de ciertas porciones biológicamente activas incluyendo oligonucleótidos.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION Con los años, se han propuesto numerosos métodos para suministrar agentes terapéuticos en el cuerpo y mejorar la biodisponibilidad de esos agentes medicinales. Uno de los intentos es incluir los agentes medicinales como parte de un sistema de transporte soluble. Dichos sistemas de transporte pueden incluir sistemas a base de conjugado permanentes o profármacos. En particular, los sistemas de transporte poliméricos pueden mejorar la solubilidad y estabilidad de agentes medicinales. Por ejemplo, la conjugación de óxidos de polietileno solubles en agua con porciones terapéuticas tales como proteínas y polipéptidos es conocida. Véase, por ejemplo, patente de E.U.A. No. 4, 179,337 (la patente '337), cuya descripción se incorpora aquí por referencia. La patente '337 describe que polipéptidos fisiológicamente activos modificados con PEG circulan durante periodos prolongados in vivo, y tienen inmunogenicidad y antigenicidad reducida. También se han contemplado mejoras adicionales. Por ejemplo, los sistemas de plataforma de suministro de fármaco a base de polímero que contienen sistemas de eliminación de bencilo, sistemas de bloqueo de trimetilo, etc., fueron descritos por Enzon Pharmaceuticals y Zhao, et al. como un medio de suministrar liberablemente proteínas, péptidos y moléculas pequeñas. Véase también Greenwald, et al., J. Med. Chem. Vol. 42, No. 18, 3657-3667; Greenwald, et al., J. Med. Chem. Vol. 47, No. 3, 726-734; Greenwald, et al., J. Med. Chem. Vol. 43, No. 3, 475-487. El contenido de cada uno de los anteriores se incorpora aquí por referencia. Más recientemente, se ha propuesto PEG para conjugación con oligonucleótidos, especialmente oligonucleótidos que son complementarios a una secuencia de ARN mensajero (ARNm) objetivo específico. Generalmente, las secuencias de ácido nucleico complementarias de los productos de transcripción de gen (v.gr. , ARNm) se designan "de antisentido", y las secuencias de ácido nucleico que tienen la misma secuencia que la transcripción o que son producidas como la transcripción se designan "de sentido". Véase v.gr., Crooke, 1992, Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., 32: 329-376. Un oligonucleótido de antisentido se puede seleccionar para hibridar todo o una parte de un gen, de tal manera que modula la expresión del gen. Factores de transcripción interactúan con ADN de doble cadena durante la regulación de la transcripción. Los oligonucleótidos también han encontrado uso entre otros, en pruebas de diagnóstico, reactivos de investigación, v.gr., iniciadores en tecnología de PCR y otros procedimientos de laboratorio. Los oligonucleótidos pueden ser sintetizados de manera personalizada para contener propiedades que son ajustadas a un uso deseado. Por lo tanto, numerosas modificaciones químicas se han introducido en compuestos oligoméricos para incrementar su utilidad en diagnóstico, como reactivos de investigación y como entidades terapéuticas. Aunque los oligonucleótidos, especialmente oligonucleótidos de antisentido, muestran ser prometedores como agentes terapéuticos, son muy susceptibles a nucleasas y pueden ser rápidamente degradados antes y después de que entran a las células objetivo haciendo a los oligonucleótidos de antisentido no modificados inadecuados para usarse en sistemas in vivo. Debido a que las enzimas responsables de la degradación se encuentran en la mayoría de los tejidos, se han hecho modificaciones a los oligonucleótidos en un intento para estabilizar los compuestos y remediar este problema. Se han hecho las modificaciones más ampliamente probadas a la porción de estructura de base de los compuestos de oligonucleótido. Véase generalmente Uhlmann y Peymann, 1990, Chemical Reviews 90, en las páginas 545-561 y referencias citadas en la misma. Entre muchas estructuras de base diferentes hechas, sólo el fosforotioato mostró actividad de antisentido significativa. Véase, por ejemplo, Padmapriya y Agrawal, 1993, Bioorg. & Med. Chem. Lett. 3, 761 . Aunque la introducción de átomos de azufre a la estructura de base muestra la velocidad de degradación de enzima, también se incrementa la toxicidad al mismo tiempo. Otra desventaja de añadir átomos de azufre es que cambia la estructura de base de aquiral a quiral y da por resultado segundos diaestereómeros. Esto puede causar efectos colaterales adicionales. Aún más desventajas de los presentes oligonucleótidos de antisentido son que pueden portar una carga negativa en el grupo fosfato que inhibe la capacidad para pasar a través de la membrana celular principalmente lipofílica. Mientras más tiempo permanezca el compuesto fuera de la célula, más degradado se volverá dando por resultado que menos compuesto activo llegue al objetivo. Una desventaja adicional de los presentes compuestos de antisentido es que los oligonucleótidos tienden a formar estructuras de solución secundarias y de orden superior. Una vez que se forman estas estructuras, se convierten en objetivos de varias enzimas, proteínas, ARN y ADN para unión. Esto da por resultado efectos colaterales no específicos y cantidades reducidas de compuesto activo que se une a ARNm. Otros intentos para mejorar la terapia de oligonucleótido ha incluido la adición de una porción enlazadora y polietilenglicol. Véase, por ejemplo, Kawaguchi, et al., Stability, Specific Binding Activity, and Plasma Concentration in Mice of an Oligodeoxynucleotide Modified at 5'-Terminal with Poly(ethylene glycol), Biol. Pharm. Bull., 18(3) 474-476 (1995), y patente de E.U.A. No. 4,904,582. En estos dos ejemplos, las modificaciones implican el uso de porciones enlazadoras que son permanentes en naturaleza en un esfuerzo por estabilizar el oligonucleotido contra degradación e incrementar la permeabilidad de la célula. Sin embargo, estos dos esfuerzos no proveen ninguna eficacia in vivo. Para conjugar agentes terapéuticos tales como moléculas pequeñas y oligonucleótidos a óxidos de polietileno, los grupos terminales hidroxilo del polímero primero deben ser convertidos a grupos funcionales reactivos. Este proceso es frecuentemente referido como "activación" y el producto se denomina "óxido de polietileno activado". Otros polímeros son activados de manera similar. A pesar de los intentos y avances, por lo tanto se han buscado mejoras adicionales en tecnología de conjugación de PEG y polímero tales como polímeros activados. La presente invención enfrenta esta necesidad y otras.
BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION A fin de superar los problemas anteriores y mejorar la tecnología para suministro de fármacos, se proveen nuevos polímeros activados y conjugados hechos con los mismos. En un aspecto de la presente invención, se proveen compuestos de la fórmula (I): en donde: A es un grupo bloqueador o Ri es un polímero soluble en agua sustancialmente no antigénico; L-! y L'i son separadores independientemente seleccionados que tienen un par de electrones libres ubicados cuatro a diez átomos de preferiblemente 4 a 8 y muy preferiblemente 4 a 5 átomos d ? ?(=??); I_2 y L'2 son enlazadores bifuncionales independientemente seleccionados; Yi y ?'? son independientemente O, S, o NR5; R2, R'2, R3, R'3 y R5 son independientemente seleccionados de entre hidrógeno, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2.6, alquinilo de C2-6, alquilo ramificado de C3-19, cicloalquilo de C3-8, alquilo sustituido de Ci-6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2.6, cicloalquilo sustituido de C3-8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heterorilo sustituido, heteroalquilo de C1-6, heteroalquilo sustituido de Ci-6, alcoxi de C1-6, ariloxi, heteroalcoxi de Ci-6, heteroariloxi, alcanoilo de C2.6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo de C-2-6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi de C2-6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2-6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6 y arilcarboniloxi sustituido, o R2 junto con R3 y R'2 junto con R'3 independientemente forman un ciclohidrocarburo no aromático sustituido o no sustituido que contiene por lo menos tres carbonos; R4 y R'4 se seleccionan independientemente de entre OH, grupos residuales, grupos dirigidos a objetivo, agentes de diagnóstico y porciones biológicamente activas; y (p) y (?') son independientemente cero o un entero positivo, preferiblemente cero o un entero de aproximadamente 1 a aproximadamente 3, muy preferiblemente cero o 1 , siempre que R3 sea un hidrocarburo sustituido o no sustituido que tenga por lo menos tres carbonos cuando R2 es H, y además siempre que l_i no sea el mismo que C(R2)(R3). En ciertas modalidades preferidas de este aspecto de la invención, el polímero sustancialmente no antigénico es un óxido de polialquileno y muy preferiblemente es polietilengliol (de aquí en adelante PEG). En otros aspectos, el PEG es ya sea bloqueado en un extremo terminal con un grupo CH3, es decir, mPEG, mientras que en otras modalidades, PEGs bis-activados se proveen tales como aquellos correspondientes a la fórmula: Aspectos adicionales de la invención incluyen métodos para hacer los polímeros activados que contienen el éster impedido, métodos para hacer conjugados, incluyendo conjugados de oligonucleótido, que contienen el mismo así como métodos de tratamiento basados en administrar cantidades efectivas de conjugados que contienen una porción biológicamente activa a un paciente, (mamífero) que necesita la misma. Los sistemas de suministro poliméricos descritos aquí incluyen enlazadores novedosos que pueden formar un enlace liberable tal como un enlace de éster entre el polímero y la porción biológicamente activa. Los sistemas poliméricos se basan en una estructura de ácido impedido que es construida como parte del polímero, es decir, estructura de base de PEG, y activado como un éster de ácido tal como éster de NHS en el polímero. Las formas activadas pueden reaccionar con una porción que contiene grupo hidroxi o tiol para formar un enlace de éster liberable. Una ventaja de los sistemas de transporte poliméricos basados en éster impedido descritos aquí es que los sistemas de suministro poliméricos tienen estabilidad mejorada. Sin estar limitado por ninguna teoría, el enlace de éster en un ambiente esféricamente impedido entre el polímero y una porción tal como un grupo residual, una porción biológicamente activa y un grupo dirigido a objetivo puede inhibir el enlace de éster de ser expuesto a un medio acuoso básico o enzimas, y por lo tanto estabiliza el enlace covalente. La estabilidad de los sistemas poliméricos permite almacenamiento a largo plazo antes de unirse a grupos dirigidos a objetivo o porciones biológicamente activas, y vida de anaquel más larga para el conjugados polimérico que contiene porciones biológicamente activas. La estabilidad mejorada incrementa la eficacia en cuanto a costos. Aspectos adicionales de la invención incluyen métodos para hacer los polímeros activados que contienen el éster impedido, métodos para hacer conjugados, incluyendo conjugados de oligonucleótido que contienen el mismo así como métodos de tratamiento basados en administrar cantidades efectivas de conjugados que contienen una porción biológicamente activa a un paciente (mamífero) que necesita la misma. Otra ventaja de los polímeros activados correspondientes a la invención es que son especialmente bien adaptados para usarse con oligonucleotidos y compuestos de ARN de interferencia corto (ARNic) o antisentido relacionados. La presencia del grupo éster impedido en proximidad al oligonucleótido unido al mismo provee estabilidad y resistencia mejoradas a la degradación por nucleasa. También ayuda a disminuir la toxicidad e incrementar la afinidad de unión a ARNm de compuestos de oligonucleotido. Los conjugados hechos de conformidad con la invención proveen un medio para proteger compuestos de oligonucleotido de antisentido contra degradación, previniendo la formación de estructura de orden superior. Más aún, los conjugados de polímero permiten al experto en la técnica suministrar suficientes cantidades de compuestos de oligonucleotido de antisentido activos al objetivo. Otra ventaja de los polímeros activados que contienen los ésteres impedidos es que permite al experto en la técnica a conjugar más fácilmente oligonucleótidos de elección. No hay necesidad de modificar el oligonucleotido o porción objetivo con el éster impedido antes de pegilación. Este oligo se toma como tal y es pegilado con el enlazador de PEG activado que contiene el grupo protector de éster impedido deseado en el mismo. Otra ventaja más de los polímeros activados correspondientes a la invención es que están especialmente bien adaptados para usarse con oligonucleótidos y compuestos de antisentido relacionados. La presencia del grupo éster impedido en proximidad al oligonucleotido unido al mismo provee estabilidad y resistencia mejoradas a degradación por nucleasa. También ayuda a disminuir la toxicidad e incrementar la afinidad de unión a ARNm de compuestos de oligonucleotido. Los conjugados hechos de conformidad con la invención proveen un medio para proteger compuestos de oligonucleotido de antisentido contra degradación, previniendo la formación de estructuras de orden alto. Más aún, los conjugados de polímero permiten al experto en la técnica suministrar cantidades suficientes de compuestos de oligonucleótido de antisentido activos al objetivo. Aunque varios aspectos de esta invención se describen con respecto al enlace con oligonucleótidos, los expertos en la técnica apreciarán que los polímeros activados que contienen uno o más grupos "de impedimento" en los mismos tienen una amplia utilidad en el campo de conjugación de polímero. Las formas activadas del polímero se pueden usar para enlazar liberablemente y permanentemente polímeros tales como PEG a proteínas, péptidos, enzimas, moléculas pequeñas, etc. Para los propósitos de la presente invención, los términos "una porción biológicamente activa" y "un residuo de una porción biológicamente activa" significan aquella porción de un compuesto biológicamente activo que queda después de que el compuesto biológicamente activo ha sufrido una reacción de sustitución en la cual la porción de vehículo de transporte ha sido unida. A menos que se defina de otra manera, para los propósitos de la presente invención: el término "alquilo" incluirá alquilos de cadena recta, ramificada, sustituidos, v.gr., halógeno-, alcoxi-, y nitro-alquilos de CM2, cicloalquilos de C3.8 o cicloalquilos sustituidos, etc.; el término "sustituido" incluye añadir o reemplazar uno o más átomos contenidos dentro de un grupo funcional o compuesto con uno o más átomos diferentes; el término "alquilos sustituidos" incluye carboxialquilos, aminoalquilos, dialquilaminos, hidroxialquilos y mercaptoalquilos; el término "cicloalquilos sustituidos" incluye porciones tales como 4-clorociclohexilo; arilos incluyen porciones tales como naftilo; arilos sustituidos incluyen porciones tales como 3-bromofenilo; aralquilos incluyen porciones tales como toluilo; heteroalquilos incluyen porciones tales como etiltiofeno; el término "heteroalquilos sustituidos" incluyen porciones tales como 3-metoxi-tiofeno; alcoxi incluye porciones tales como metoxi; y fenoxi incluye porciones tales como 3-nitrofenoxi; el término "halógeno" incluirá fluoro, cloro, yodo y bromo; y los términos "cantidades suficientes " y "cantidades efectivas" para propósitos de la presente invención significarán una cantidad que logra un efecto terapéutico tal como es entendido por los expertos en la técnica.
DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION A. Generalidades En la mayoría de los aspectos de la invención, los polímeros incluidos aquí generalmente se describen como polímeros sustancialmente no antigénicos. Dentro de este género de polímeros, los óxidos de polietileno son referidos y los polietilenglicoles (PEG's) son los más preferidos. Para propósitos de facilidad de descripción y no de limitación, la invención algunas veces se describe usando PEG como el polímero prototípico. Sin embargo, cabe entender que el alcance de la invención es aplicable a una amplia variedad de polímeros que pueden ser lineales, sustancialmente lineales, ramificados, etc. Uno de los únicos requerimientos es que el polímero contenga el medio para unir covalentemente los grupos éster impedidos deseados descritos aquí y que pueda soportar el procesamiento requerido para transformar el intermediario resultante en el enlazador activado que contiene polímero y conjugado resultante bajo las condiciones descritas aquí. De conformidad con lo anterior, se proveen compuestos de la fórmula (I): en donde: A es un grupo bloqueador o F¡ 1 es un polímero soluble en agua sustancialmente no antigénico; ?-? y L'i son separadores independientemente seleccionados que tienen un par de electrones libres ubicados cuatro a diez átomos de ) o preferiblemente de aproximadamente 4 a aproximadamente 8 y muy preferiblemente de aproximadamente 4 a aproximadamente 5 átomos de C^Y o C^Y' ; l_2 y L'2 son enlazadores bifuncionales independientemente seleccionados; Yi y ?? son independientemente O, S, o NR5; R2, R'2, R3, R'3 y R5 son independientemente seleccionados de entre hidrógeno, alquilo de Ci.6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6> alquilo ramificado de C3-19» cicloalquilo de C3-8, alquilo sustituido de Ci-6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalquilo sustituido de C3-8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heterorilo sustituido, heteroalquilo de C1 -6, heteroalquilo sustituido de Ci-6, alcoxi de C1.6, ariloxi, heteroalcoxi de Ci-6, heteroariloxi, alcanoilo de C2.6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo de C2.6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi de C2.6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2.6) arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2.6 y arilcarboniloxi sustituido, o R2 junto con R3 y R'2 junto con R'3 independientemente forman un ciclohidrocarburo no aromático sustituido o no sustituido que contiene por lo menos tres carbonos; R4 y R'4 se seleccionan independientemente de entre OH, grupos residuales, grupos dirigidos a objetivo, agentes de diagnóstico y porciones biológicamente activas; y (p) y (?') son independientemente cero o un entero positivo, preferiblemente cero o un entero de aproximadamente 1 a aproximadamente 3, muy preferiblemente cero o 1 , siempre que R3 sea un hidrocarburo sustituido o no sustituido que tenga por lo menos tres carbonos cuando R2 es H, y además siempre que U no sea el mismo que C(R2)(R3). En ciertas modalidades preferidas de este aspecto de la invención, el polímero sustancialmente no antigénico es uno óxido de polialquileno y muy preferiblemente es polietilengliol (de aquí en adelante PEG). En otros aspectos, el PEG es ya sea bloqueado en un extremo terminal con un grupo CH3, es decir, mPEG. Otros grupos bloqueadores opcionales incluyen H, NH2, OH, CO2H, alcoxi de d-6 y alquilo de C1-6. Grupos bloqueadores preferidos incluyen metoxi y metilo. En otras modalidades, PEGs bis-activados se proveen tales como aquellos correspondientes a la fórmula (II): Dentro de esos aspectos de la invención, los sustituyentes contemplados para sustitución, en donde las porciones correspondientes a R2, R'2, R3> R'3 y R5 son indicadas como que son posiblemente sustituidas pueden incluir, por ejemplo, acilo, amino, amido, amidina, ara-alquilo, arilo, azido, alquilmercapto, arilmercapto, carbonilo, carboxilato, ciano, éster, éter, formilo, halógeno, heteroarilo, heterocicloalquilo, hidroxi, imino, nitro, tiocarbonilo, tioéster, tioacetato, tioformiato, alcoxi, fosforilo, fosfonato, fosfinato, sililo, sulfhidrilo, sulfato, sulfonato, sulfamoilo, sulfonamida, y sulfonilo.
Preferiblemente, L1 y ?_? son separadores independientemente seleccionados que tienen un par de electrones libres ubicados cuatro a ocho átomos de muy preferiblemente cuatro a seis; y tanto Y como ?? son O. En otro aspecto de la invención, las porciones biológicas incluyen porciones que contienen -OH y porciones que contienen -SH. En otro aspecto, A se puede seleccionar de entre H, NH2, OH, CO2H, alcoxi de Ci-6, y alquilos de Ci-6. En algunas modalidades preferidas, A puede ser metilo, etilo, metoxi, etoxi, H, y OH. A es muy preferiblemente metilo o metoxi.
B. Polímeros solubles en agua sustancialmente no anti énicos Los polímeros utilizados en los sistemas de suministro polimérico descritos aquí son polímeros preferiblemente solubles en agua y sustancialmente no antigénicos tales como óxidos de polialquileno (PAO's). En un aspecto de la invención, los compuestos descritos aquí incluyen un óxido de polialquileno lineal, terminalmente ramificado o de brazos múltiples. En algunas modalidades preferidas, el óxido de polialquileno incluye polietilenglicol y polipropilenglicol. El óxido de polialquileno tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 2,000 a aproximadamente 100,000 daltons, preferiblemente de aproximadamente 5,000 a aproximadamente 60,000 daltons. En algunos aspectos el óxido de polialquileno puede ser de aproximadamente 5,000 a aproximadamente 25,000, y preferiblemente de aproximadamente 12,000 a aproximadamente 20,000 daltons cuando las proteínas u oligonucleotidos son unidos o alternativamente de aproximadamente 20,000 a aproximadamente 45,000 daltons, y preferiblemente de aproximadamente 30,000 a aproximadamente 40,000 daltons cuando los compuestos farmacéuticamente activos (moléculas pequeñas) se utilizan en los compuestos descritos aquí. El óxido de polialquileno incluye polietilenglicoles y polipropilenglicoles. Muy preferiblemente, el óxido de polialquileno incluye polietilenglicol (PEG). PEG es generalmente representado por la estructura: -0-(CH2CH2O)n- en donde (n) es un entero de aproximadamente 10 a aproximadamente 2,300, y depende del número de brazos de polímero cuando se usan polímeros de brazos múltiples. Alternativamente, la porción de residuo de polietilenglicol (PEG) de la invención se puede seleccionar de entre: -Y71 -(CH2CH20)n-CH2CH2Y7i - , , y -Y71 -(CR7i R72)a72-Y73-(CH2)b71-0-(CH CH20)n-(CH2)b71 -Y73-(CR7iR72)a72-Y71 - , en donde: Y71 y Y73 son independientemente O, S, SO, SO2, NR73 o un enlace; Y72 es O, S, o NR74; R7i -74 son independientemente las mismas porciones que se pueden usar para R2; (a71 ), (a72), y (b71 ) son independientemente cero o un entero positivo, preferiblemente 0-6, y muy preferiblemente 1 ; y (n) es un entero de aproximadamente 10 a aproximadamente 2300. Ramificados o derivados de U-PEG se describen en las patentes de E.U.A Nos. 5,643,575, 5,919,455, 6,1 13,906 y 6,566,506, cuya descripción se incorpora aquí por referencia. Una lista no limitante de dichos polímeros corresponde a los sistemas de polímero (i) - (vii) con las siguientes estructuras: en donde: Y6i-62 son independientemente O, S o NR6i; Y63 es O, NR62, S, SO o SO2 (w62), (w63) y (w64) son independientemente 0 o un entero positivo; (w61 ) es 0 ó 1 ; mPEG es metoxi PEG en donde PEG es anteriormente definido y un peso molecular total de la porción de polímero es de aproximadamente 2,000 a aproximadamente 100,000 daltons; y P>61 y R62 se seleccionan independientemente de entre hidrógeno, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, alquilo ramificado de C3-19, cicloalquilo de C3-8, alquilo sustituido de Ci-6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2-6> cicloalquillo sustituido de C3.8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroalquilo de Ci-6, heteroalquilo sustituido de C1-6, alcoxi de C1-6, ariloxi, heteroalcoxi de Ci-6, heteroariloxi, alcanoilo de C2-6. arilcarbonilo, alcoxicarbonilo C2-6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi C2-6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2-6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6 y arilcarboniloxi. En otro aspecto, los polímeros incluyen productos de PEG-OH de brazos múltiples o "PEG de estrella" tales como aquellos descritos en el catálogo NOF Corp. Drug Delivery System, Ver. 8, Abril 2006, cuya descripción se incorpora aquí por referencia. Los conjugados de polímero de brazos múltiples contienen cuatro o más brazos de polímero y preferiblemente cuatro a ocho brazos de polímero. Para propósitos de ilustración y no de limitación, el residuo de polietilenglicol (PEG) de brazos múltiples puede ser H2C O — (CH2CH20)nH I HC 0 — (CH2CH20)nH CH2 0 I CH2 HC O — (CH2CH20)nH CH2 r o i CH2 HC O — (CH2CH20)nH H2C O — (CH2CH20)nH en donde: (x) es 0 y un entero positivo, es decir, de aproximadamente 0 a aproximadamente 28; y (n) es el grado de polimerización. En una modalidad particular de la presente invención, el PEG de brazos múltiples tiene la estructura: en donde n es un entero positivo. En una modalidad preferida de la invención, los polímeros tienen un peso molecular total de aproximadamente 5,000 Da a aproximadamente 60,000 Da, y preferiblemente de 12,000 Da a 40,000 Da. En otra modalidad particular, el PEG de brazos múltiples tiene la estructura: en donde n es un entero positivo. En una modalidad preferida de la invención, el grado de polimerización para el polímero de brazos múltiples (n) es de aproximadamente 28 a aproximadamente 350 para proveer polímeros que tienen un peso molecular total de aproximadamente 5,000 Da a aproximadamente 60,000 Da, y preferiblemente de aproximadamente 65 a aproximadamente 270 para proveer polímeros que tienen un peso molecular total de 12,000 Da a 45,000 Da. Esto representa el número de unidades de repetición en la cadena de polímero y depende del peso molecular del polímero. Los polímeros pueden ser convertidos a un polímero adecuadamente activado, usando las técnicas de activación descritas en las patentes de E.U.A Nos. 5,122,614 o 5,808,096. Específicamente, el PEG puede ser de la fórmula: en donde: (u') es un entero de aproximadamente 4 a aproximadamente 455; y hasta 3 porciones terminales del residuo es/son bloqueados con un metilo u otro alquilo inferior. En algunas modalidades preferidas, todos los cuatro brazos de PEG pueden ser convertidos a grupos activadores adecuados, para facilitar la unión a grupos aromáticos. Dichos compuestos antes de la conversión incluyen: Las sustancias poliméricas incluidas aquí son preferiblemente solubles en agua a temperatura ambiente. Una lista no limitante de dichos polímeros incluye homopolímeros de óxido de polialquileno tales como polietilenglicol (PEG) o polipropilenglicoles, polioles polioxietilenados, copolímeros de los mismos y copolímeros de bloque de los mismos, siempre que se mantenga la solubilidad en agua de los copolímeros de bloque. En una modalidad adicional y como una alternativa a polímeros a base de PAO, uno o más materiales efectivamente no antigénicos tales como dextrano, alcoholes polivinílicos, polímeros a base de carbohidratos, hidroxipropilmetacrilamida (HPMA), óxidos de polialquileno, y/o copolímeros de los mismos se pueden usar, Véase también patente de E.U.A. comúnmente cedida No. 6,153,655, cuyos contenidos se incorporan aquí por referencia. Los expertos en la técnica entenderán que el mismo tipo de activación se utiliza como se describe aquí para PAO's tal como PEG. Los expertos en la técnica se darán cuenta que la lista anterior es simplemente ilustrativa y que todos los materiales poliméricos que tienen las cualidades descritas aquí se contemplan. Para los propósitos de la presente invención, "sustancialmente o efectivamente no antigénico" significa todos los materiales entendidos en la técnica como siendo no tóxicos y que no inducen una respuesta inmunogénica apreciable en mamíferos. En algunos aspectos, los polímeros que tienen grupos amina terminal pueden ser utilizados para hacer los compuestos descritos aquí. Los métodos de preparación de polímeros que contienen aminas terminales en alta pureza se describen en las solicitudes de patente de E.U.A Nos. 1 1/508,507 y 1 1/537,172, cuyos contenidos se incorporan aquí por referencia. Por ejemplo, los polímeros que tienen azidas reaccionan con agente reductor a base de fosfina tal como trifenilfosfina o un agente reductor de borhidruro de metal alcalino tal como NaBH4. Alternativamente, los polímeros que incluyen grupos residuales que reaccionan con sales de amina protegidas tales como sal de potasio de imidodicarbonato de metil-ter-butilo (KNMeBoc) o la sal de potasio de imidodicarbonato de di-ter-butilo (KNBoc2) seguido por desprotección del grupo amino protegido. La pureza de los polímeros que contienen las aminas terminales formadas por estos procedimientos es mayor que aproximadamente 95% y preferiblemente mayor que 99%. En aspectos alternativos, los polímeros que tienen grupos ácido carboxílico terminal se pueden utilizar en los sistemas de suministro polimérico descritos aquí. Los métodos de preparación de polímeros que tienen ácidos carboxilicos terminales en alta pureza se describen en la solicitud de patente de E.U.A No. 1 1/328,662, cuyo contenido se incorpora aquí por referencia. Los métodos incluyen primero preparar un éster alquílico terciario de un óxido de polialquileno seguido por conversión al derivado de ácido carboxílico del mismo. El primer paso de la preparación de los ácidos carboxilicos de PAO del proceso incluyen formar un intermediario tal como éster ter-butílico de ácido carboxílico de óxido de polialquileno. El intermediario se forma haciendo reaccionar un PAO con un halogenoacetato de /-butilo en presencia de una base tal como í-butóxido de potasio. Una vez que el intermediario de éster f-butílico se ha formado, el derivado de ácido carboxílico del óxido de polialquileno puede ser fácilmente provisto en purezas que exceden 92%, preferiblemente que exceden 97%, muy preferiblemente que exceden 99% y muy preferiblemente aún que exceden 99.5% de pureza.
C. Esteres impedidos Para los propósitos de la presente invención, "impedidos" significa o incluye ambiente estéricamente sobrecargado alrededor de Dicho ambiente puede hacerse típicamente incluyendo sustituyentes volumétricos, tales como porciones cíclicas o ramificadas. Cada una de las porciones CR2R3 y CR'2R'3 adyacentes a de conformidad con la fórmula (I) forman ésteres impedidos. Los R2, R'2, R3, R'3 y R5 se pueden seleccionar de entre hidrógeno, alquilo de d-6, alquenilo de C2-6> alquinilo de C2-6, alquilo ramificado de C3-19, cicloalquilo de C3.8, alquilo sustituido de Ci-6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalquillo sustituido de C3.8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroalquilo de Ci-6, heteroalquilo sustituido de Ci-6, alcoxi de C^, ariloxi, heteroalcoxi de C1-6, heteroariloxi, alcanoilo de C2-6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo C2-6> ariloxicarbonilo, alcanoiloxi C2-6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2-6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6 y arilcarboniloxi. Cualquiera de los posibles grupos descritos aquí para R2 y R3 (R'2 y R'3) se pueden usar siempre que tanto R2 como R3 (R'2 y R'3) no sean simultáneamente H. Cuando uno de R2 y R3 (R'2 y R 3) es H, el otro contiene por lo menos tres hidrocarburos. En una modalidad preferida, R2, R'2, R3 y R'3 incluyen metilo, etilo e isopropilo. En una modalidad alternativa, R2 junto con R3 y R'2 junto con R'3 pueden formar un ciciohidrocarburo no aromático sustituido o no sustituido que contienen por lo menos tres carbonos.
D. Separadores: Lj_ y L En otro aspecto de la presente invención, pares de electrones libres de separadores U y L'i enlazados a las porciones CR2R3 y CR'2R'3 proveen efectos enquiméricos Sin estar limitado por ninguna teoría, los pares de electrones libres ubicados cuatro a diez átomos de facilitan (modifican) la velocidad de liberación de las porciones biológicamente activas, grupos dirigidos a objetivo y agentes de diagnóstico de los sistemas de suministro polimérico descritos aquí. En una modalidad preferida, los separadores de l_i y ?_? se pueden seleccionar de entre: -S(CR12R13)S- , -[C(=O)]r(CR12R13)s- , -NR1 i(CRi2Ri3)sO(CR14Ri5)s- , -NRi i(CRi2Ri3)sS(CR14Ri5)s- , -0(CR12Ri3)sO(CRi4Ri5)s'- , -0(CRi Ri3)sS(CRi4Ri5)s- , -0(CRi2Ri3)sN Ri 6(CR14R15)s- , -O(CRi2Ri30)s(CR14R1 5)s- , en donde: Rn-Ri6 se seleccionan independientemente de entre hidrógeno, amino, amino sustituido, azido, carboxi, ciano, halógeno, hidroxilo, nitro, éter silílico, sulfonilo, mercapto, alquilmercapto de C1-6, arilmercapto, arilmercapto sustituido, alquiltio sustituido de Ci-6, alquilos de d-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, alquilo ramificado de C3-19, cicloalquilo de C3-8, alquilo sustituido de Ci-6, alquenilo sustituido de C2.6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalqulo sustituido de C3-8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heteroalquilo de Ci-6, heteroalquilo sustituido de Ci-6, alcoxi de Ci-6, ariloxi, heteroalcoxi de Ci-6, heteroariloxi, alcanoilo de C2.6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo de C2.6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi de C2.6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2.6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6] ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2.6, y arilcarboniloxi; (s) y (s') son independientemente cero o un entero positivo, preferiblemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 4; y (r) es 0 ó 1 . Alternativamente, los grupos ?_? 1_? se pueden seleccionar de entre: -NH-(CH2-CH2-0)P-CH2-, -C(=0)-(CH2)n-, -NH-(CH2)n- , -S-(CH2)P- , -NH-(CH2)P-0-CH2- y -NH- C(=0)-(CH2)p-NH-C(=0)-(CH2)q- en donde (p) es un entero de 1 a 12; y (n) y q son independientemente un entero positivo, preferiblemente de aproximadamente 1 a 8, y muy preferiblemente de aproximadamente 1 a 4. En otra modalidad preferida, los pares de electrones de los separadores L,.2 y ?_?.2 están ubicados cuatro a ocho átomos de y C(=Y'i). Muy preferiblemente, los pares de electrones están ubicados cuatro a cinco átomos de C(=Yi) y Las modalidades preferidas de conformidad con el aspecto preferido son incluyen: En otro aspecto, los sistemas de suministro poliméricos descritos aquí incluyen que R3 es un hidrocarburo sustituido o no sustituido que tiene por lo menos tres carbonos cuando R2 es H, y l_i no es el mismo que C(R2)(R3).
E. Enlazadores bifuncionales Los compuestos descritos aquí pueden incluir enlazadores bifuncionales. Los enlazadores bifuncionales incluyen aminoácidos, derivados de aminoácido o péptidos. Los aminoácidos pueden estar entre los aminoácidos que ocurren naturalmente y que no ocurren naturalmente. Derivados y análogos de los aminoácidos que ocurren naturalmente, así como los diversos aminoácidos que no ocurren naturalmente conocidos en la técnica (D o L), hidrofóbicos o no hidrofóbicos también se contemplan dentro del alcance de la invención. Una lista no limitante adecuada de los aminoácidos que no ocurren naturalmente incluyen ácido 2-aminoadípico, ácido 3-aminoadípico, beta-alanina, ácido beta-aminopropiónico, ácido 2-aminobutírico, ácido 4-aminobutírico, ácido piperidínico, ácido 6-aminocaproico, ácido 2-aminoheptanoico, ácido 2-aminoisobutírico, ácido 3-aminoisobutírico, ácido 2-aminopimélico, ácido 2, 4-aminobutírico, desmosina, ácido 2,2-diaminopimélico, ácido 2,3-diaminopropiónico, N-etilglicina, N-etilasparagina, 3-hidroxiprolina, 4-hidroxiprolina, isodesmosina, alo-isoleucina, N-metilglicina, sarcosina, N-metil-isoleucina, 6-N-metil-lisina, N-metilvalina, norvalina, norleucina y ornitina. Algunos residuos de aminoácido preferidos se seleccionan de glicina, alanina, metionina y sarcosina, y muy preferiblemente glicina.
Alternativamente, L2 y L'2 se pueden seleccionar de entre -[C(=0)]v(CR22R23)t-NR26[C(=0)]v- , -[C(=0)]vO(CR22R23)t[C(=0)]v.- , -[C(=0)]vO(CR22R23),O[C(=O)]v- , -[C(=O)]vO(CR22R23),NR26[C(=O)]v- , -[C(=0)]vNR21(CR22R23)tO[C(=0)]v- , -[C(=0)]V(CR22R23),0-(CR28R29). [C(=0)]V.- , -[C(=0)]v(C R22R23)tNR26-(CR28R29)f[C(=0)]v- , -[C(=0)]v(CR22R23)tS-(CR28R29). [C(=0)]v- , -[C(=0)]vO(CR22R23)tO-(CR2eR29MC(=0)]v- , -[C(=O)]vO(CR22R23),NR26-(CR28R29)f[C(=O)]v- , -[C(=O)]vO(CR22R23).S-(CR28R29).'[C(=0)]v.- , -[C(=0)]vNR21 (CR22R23)tO-(CR28R29)r[C(=0)]v- , -[C(=0)]VNR21(CR22R23),NR26-(CR28R29),.[C(=0)]V- , -[C(=0)]vN R2l(CR22R23)tS-(CR28R29)t'[C(=O)]v.- , -[C(=O)]v(CR22R23CR28R290),NR26[C(=O)]v- , -[C(=0)]v(CR22R23CR28R290),[C(=0)]v- , -[C(=O)]vO(CR22R23CR28R290),NR26[C(=0)]v- , -[C(=0)]vO(CR22R23CR28R290),[C(=0)]v- , -[C(=0)]vNR21(CR22R23CR28R29O)tNR26[C(=O)]v- , -[C(=O)]vNR21(CR22R23CR28R290),[C(=0)]v.- , -[C(=O)]v(CR22R23CR28R290)t(CR24R25)t [C(=O)]v- , -[C(=0)]vO(CR22R23CR28R290)t(CR24R25),'[C(=0)]v- , -[C(=0)]vNR21 (CR22R23CR28R290),(CR24R25)t'[C(=0)]v- , -[C(=O)]v(CR22R23CR28R29O)t(CR24R25)rO[C(=0)]v- , -[C(=0)]v(CR22R23),(CR24R25CR28R29O),.[C(=O)]v.- , -[C(=0)]v(CR22R23),(CR24R25CR28R29O),.NR26[C(=O)]v- , -[C(=O)]vO(CR22R23CR28R290)t(CR24R25)t O[C(=0))v- ) -[C(=0)]vO(CR22R23),(CR24R25CR28R290) [C(=0)]v- , -[C(=0)]vNR21(CR22R23CR28R 90)t(CR24R25)t O[C(=O)]v- , -[C(=O)]vNR21(CR22R23),(CR24R25CR28R290), [C(=0)]v.- , en donde: R21-29 se seleccionan independientemente de entre hidrógeno, aqluilos de Ci-6, alquilos ramificados de C3-12, cicloalquilos de C3-8, alquilos sustituidos de Ci-6, cicloalquilos sustituidos de C3-8, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de Ci-6, heteroalquilos sustituidos de Ci-6, alcoxi de C-1 -6, fenoxi y heteroalcoxi de Ci-6; (t) y (f) son independientemente cero o un entero positivo, preferiblemente cero o un entero de aproximadamente 1 a aproximadamente 12, muy preferiblemente un entero de aproximadamente 1 a aproximadamente 8, y muy preferiblemente 1 ó 2; y (v) y (?') son independientemente cero o 1 . En una modalidad preferida, L2 y L'2 se pueden seleccionar de entre: -[C(=0)]rNH(CH2)2CH=N-NHC(=0)-(CH2)2- , -[C(=O)]rNH(CH2)2(CH2CH20)2(CH2)2NH[C(=0)]r - , -[C(=0)]rNH(CH2CH2)(CH2CH20)2NH[C(=O)] , -[C(=O)]rNH(CH2CH2)sNH(CH2CH2)s{C(=0)]r- , -[C(=0)]r NH(CH2CH2)sS(CH2CH2)s{C(=0)]r- , -[C(=0)]rNH(CH2CH2)(CH2CH20)[C(=0)] , -[C(=0)]rNH(CH2CH2)sO(CH2CH2)s.[C(=O)]r--[C(=0)]rNH(CH2CH20)(CH2)NH[C(=0)]r- , -[C(=O)]rNH(CH2CH20)2(CH2)[C(=O)]r- , -[C(=0)]rNH(CH2CH20)s(CH2)s.[C(=0)]r- , -[C(=0)]rNHCH2CH2NH[C(=0)] , -[C(=O)]rNH(CH2CH2)20[C(=O)> - , -[C(=0)]rNH(CH2CH20)[C(=0)]r- , -[C(=0)]rNH(CH2CH20)2[C(=0)]r- , -[C(=0)]rNH(CH2)3[C(=0)]r-- , -[C(=O)]rO(CH2CH20)2(CH2)[C(=O)]r- , -[C(=0)]rO(CH2)2NH(CH2)2[C(=0)]r- , -[C(=0)]rO(CH2CH20)2NH[C(=0)]r- , -[C(=0)]rO(CH2)20(CH2)2[C(=0)]r- , -[C(=0)]rO(CH2)2S(CH2)2[C(=0)]r.- , -[C(=0)]rO(CH2CH2)NH[C(=0)]r- , -[C(=0)]rO(CH2CH2)0[C(=0)] , -[C(=0)]rO(CH2)30[C(=O)]r- , -[C(=0)]rO(CH2)3[C(=0)] , -[C(=0)]rCH2NHCH2[C(=0)]r- , -[C(=0)]rCH2SCH2[C(=0)]r- , -[C(=O)]rS(CH2)3[C(=O)]r- , -[C(=O)]r(CH2)3[C(=O)]r- , — [C(=0)]rOCH2-(^ CH2NH[C(=0)]r.- -[C(=0)]rNHCH2-^^-CH2NH[C(=0)]r.- -[C(=0)]rNHCH2-H{^ cH20[C(=0)],— en donde (r) y (r') son independientemente cero o 1 . En otra modalidad, los enlazadores bifuncionales incluyen -É-S— S-5 -Val-Cit-, -Gly-Phe-Leu-Gly-, -Ala-Leu-Ala-Leu-, -Phe-Lys-, -Val-Cit-C(=0)-CH2OCH2-C(=0)-, -Val-Cit-C(=0)-CH2SCH2-C(=0)-, y -NHCH(CH3)-C(-0)-NH(CH2)6-C(CH3)2-C(=O)- en donde, Yn-19 son independientemente O, S o NR48; R31-48, R50-51 y A51 se seleccionan independientemente de entre hidrógeno, alquilos de C1.6, alquilos ramificados de C3-12, cicloalquilos de C3-8, alquilos sustituidos de C1-6, cicloalquilos sustituidos de C3-8, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de C -6, heteroalquilos sustituidos de d-6, alcoxi de C1-6, fenoxi y heteroalcoxi de d.6; Ar es una porción arilo o heteroarilo; L11-15 son separadores bifuncionales independientemente seleccionados; J y J' se seleccionan independientemente de entre porciones activamente transportadas hacia una célula objetivo, porciones hidrofóbicas, porciones de enlace bifuncional y combinaciones de las mismas; (c11), (h11), (k11), (111), (m11) y (n11) son enteros positivos independientemente seleccionados, preferiblemente 1; (a11), (e11), (g11), (j11), (o11) y (q11) son independientemente ya sea cero o un entero positivo, preferiblemente 1 ; y (b11), (x11), (x' 1), (f11), (¡11) y (p11) son independientemente cero o uno.
F. Grupos R v R'4 1. Grupos residuales Para los propósitos de la presente invención, los grupos residuales se entienden como aquellos grupos que son capaces de reaccionar con un nucléofilo encontrado en el objetivo deseado, es decir, una porción biológicamente activa, un agente de diagnóstico, una porción objetivo, un separador bifuncional, intermediario, etc. Los objetivos por lo tanto contienen un grupo para desplazamiento, tal como grupos OH o SH encontrados en proteínas, péptidos, enzimas moléculas terapéuticas naturalmente o químicamente sintetizadas tales como doxorubicina, y separadores tales como diaminas mono-protegidas. Los grupos residuales unidos al éster impedido permiten la reacción covalente a la porción biológicamente activa de elección, es decir, compuestos farmacéuticamente activos (compuestos de peso molecular bajo), oligonucleótidos, etc. Los grupos residuales adecuados incluyen, sin limitación, halógeno (Br, Cl), ásteres activados, imidotiona cíclica, N-hidroxisuccinimidilo, N-hidroxiftalimidila, N-hidroxibenzotriazolilo, imidazol, tosilato, mesilato, tresilato, nosilato, alquiloxi de CrC6, alcanoiloxi de C-i-C6, arilcarboniloxi, orto-nitrofenoxi, para-nitrofenoxi, pentafluorofenoxi, 1 ,3,5-triclorofenoxi, y 1 ,3,5-trifluorofenoxi u otros grupos residuales adecuados como es evidente para los expertos en la técnica. En modalidades particularmente preferidas de la invención, los grupos residuales se pueden seleccionar de entre OH, metoxi, ter-butoxi, para-nitrofenoxi y N-hidroxisuccinimidilo. 2. Porciones biológicamente activas Una amplia variedad de porciones biológicamente activas pueden ser unidas a los polímeros activados descritos aquí. Las porciones biológicamente activas incluyen compuestos farmacéuticamente activos, enzimas, proteínas, oligonucleótidos, anticuerpos, anticuerpos monoclonales, anticuerpos de una sola cadena y péptidos. Las porciones biológicamente activas pueden incluir agentes cardiovasculares, antineoplásicos, anti-infecciosos, antimicóticos tales como nistatin y anfotéricos B, agentes anti-ansiedad, agentes gastrointestinales, agentes activadores del sistema nervioso central, analgésicos, agentes de fertilidad, agentes anticonceptivos, agentes antiinflamatorios, agentes esteroidales, agentes anti-urecémicos, agents vasodilatadores y agentes vasoconstrictores, etc. En un aspecto de la invención, los compuestos biológicamente activos son adecuados para uso medicinal o de diagnóstico en el tratamiento de animales, v.gr., mamíferos, incluyendo humanos, para condiciones para las cuales se desea dicho tratamiento. En otro aspecto, las porciones biológicamente activas que contienen hidroxilo o tiol están dentro del alcance de la presente invención. Las únicas limitaciones sobre los tipos de porciones biológicamente activas adecuadas para incluirse aquí es que está disponible por lo menos un grupo hidroxilo o tiol que puede reaccionar y enlazarse con una porción de vehículo y que no hay pérdida sustancial de bioactividad en la forma de conjugado a los sistemas de suministro poliméricos descritos aquí. Alternativamente, los compuestos progenitores adecuados para incorporarse en los compuestos conjugados de transporte polimérico de la invención pueden ser activados después de liberación hidrolítica del compuesto enlazado, o no activados después de liberación hidrolítica pero que se activarán después de pasar por un proceso de reacción química posterior. Por ejemplo, un fármaco anticanceroso que es suministrado al torrente sanguíneo por el sistema de transporte polimérico, puede permanecer inactivo hasta entrar a una célula cancerosa o tumoral, después de lo cual es activado por la química de la célula cancerosa o tumoral, v.gr., por medio de una reacción enzimática única para esa célula. En una modalidad preferida, los sistemas de transporte polimérico descritos aquí incluyen compuestos farmacéuticamente activos. Para los propósitos de la presente invención, se entenderá que los compuestos farmacéuticamente activos incluyen moléculas de peso molecular bajo. Típicamente, los compuestos farmacéuticamente activos tienen un peso molecular menor que aproximadamente 1 ,500 daltons. Una lista no limitante de dichos compuestos incluye camptotecina y análogos tales como SN38 o ¡rinotecan, inhibidores de hidroxilo- o tiol- topolsomerasa I, taxanos y derivados de paclitaxel, nucleósidos incluyendo AZT y aciclovir, compuestos de antraciclina incluyendo daunorubicina y doxorubicina, compuestos antimetabolitos relacionados incluyendo Ara-C (arabinósido de citosina) y gemcitabina, etc. En otra modalidad preferida, la elección para conjugación es un oligonucleótido y después de la conjugación, el objetivo se refiere como un residuo de un oligonucleótido. Los oligonucleotidos se pueden seleccionar de entre cualquiera de los oligonucleotidos y oligodesoxinucleótidos conocidos con estructuras de base de fosforodiéster o estructuras de base de fosforotioato, ácidos nucleicos bloqueados (LNA), ácido nucleico con estructura de base peptídica (PNA), triciclo-ADN, oligonucleótido de doble cadena (decoy ODN), secuencia de ARN catalítica (RNAi), ribozimas, espiegelmeros, y oligómeros de CpG. El "polinucleótido" (u "oligonucleótido") del grupo anterior de compuesto incluye oligonucleotidos y oligodesoxinucleótidos, incluyendo por ejemplo un oligonucleótido que tiene la misma secuencia de nucleótidos o sustancialmente similar que Genasense (a/k/a oblimersen sodio, producido por Genta Inc., Berkeley Heights, NJ). Genasense es un oligonucleótido de antisentido de fosforotioato de 18-meros, TCTCCCAGCGTGCGCCAT (SEQ ID NO: 1 ), que es complementario a los primeros seis codones de la secuencia de iniciación del ARNm de bcl-2 humano (ARNm de bcl-2 humano es conocido en la técnica y se describe como, v.gr., como SEQ ID NO: 19 en la patente de E.U.A No. 6,414,134, incorporada aquí por referencia). La Administración de Alimentos y Fármacos de E.U.A. (FDA, por sus siglas en inglés) dio el estado de Genasense Orphan Drug en agosto de 2000. Además, oligonucleótidos y oligodesoxinucleótidos útiles de conformidad con la invención incluyen, pero no se limitan a los siguientes: Los oligonucleótidos y oligodesoxinucleótidos con estructura de base de fosforodiéster o estructura de base de fosforotioato naturales o cualesquiera otros análogos de estructura de base modificada; LNA (ácido nucleico bloqueado); PNA (ácido nucleico con estructura de base peptídica); triciclo-ADN; decoy ODN (oligonucleótido de doble cadena); secuencia de ARN catalítico; ribozimas; espiegelmeros (oligonucleótidos L-conformacionales); oligómeros de CpG y similares, tales como aquellos descritos en: Tides 2002, Oligonucleotide and Peptide Technology Conferences, 6-8 de Mayo de 2002, Las Vegas, NV y Oligonucleotide & Peptide Technologies, 18 y 19 de noviembre de 2003, Hamburgo, Alemania, cuyo contenido se incorpora aquí por referencia.
Oligonucleótidos de conformidad con la invención también pueden incluir opcionalmente cualesquiera análogos y derivados de nucleótidos conocidos en la técnica adecuados incluyendo aquellos listados en el cuadro 1 siguiente: CUADRO 1 Análogos y derivados de nucleótidos representativos 4-acetilcitidina 5-metoxiaminometil-2-tiouridina 5-(carboxihidroximetil)uridina beta, D-mannosilqueuosina 2'-O-metilocitidina 5-metoxicarbonilmetil-2-tiouridina 5-carboximetilaminometil-2- 5-metoxicarbonilmetiluridina tiouridina 5-carboximetilaminometiluridina 5-metoxiuridina Dihidrouridina 2-metiltio-N6-isopenteniladenosina 2'-O-metilpseudouridina N-((9-beta-D-ribofuranosil-2- metiltiopurina-6-il)carbamoil)treonina D-galactosilqueuosina N-((9-beta-D-ribofuranosilpurina-6-il)N- metilcarbamoil)treonina 2'-O-metilguanosina éster metílico de ácido uridina-5- oxiacético Inosina Acido uridina-5-oxiacético N6-isopenteniladenosina wibutoxosina 1 -metiladenosina pseudouridina 1 -metilpseudouridina queuosina 1 -metilguanosina 2-tiocitidina 1 -metilinosina 5-metil-2-tiouridina 2,2-dimetilguanosina 2-tiouridina 2-metiladenosina 4-tiouridina 2-metilguanosina 5-metiluridina 3-metilcitidina N-((9-beta-D-ribofuranosilpurina-6-il)- carbamoil)treonina 5-metilcitidina 2'-O-metil-5-metiluridina N6-metiladenosina 2'-0-metiluridina 7-metilguanosina wibutosina 5-metilaminometiluridina 3-(3-amino-3-carboxi-propil)uridina adenosina bloqueada histidina bloqueada guanosina bloqueada timina bloqueada uridina bloqueada metilcitidina bloqueada Aunque los oligonucleótidos de antisentido y compuestos relacionados se han mencionado como objetivos preferidos para la unión de los polímeros que contienen los ésteres impedidos, se pretende que R4 o R'4 incluyan todas las proteínas, péptidos, enzimas, moléculas pequeñas, etc., biológicamente activas conocidas para beneficio de unión a PEG o polímero.
Las modificaciones a los oligonucleótidos contempladas en la invención incluyen, por ejemplo, la adición a o sustitución de nucleótidos seleccionados con grupos o porciones funcionales que permiten el enlace covalente de un oligonucleotido a un polímero deseado, y/o la adición o sustitución de porciones funcionales que incorporan carga adicional, capacidad de polarización, unión de hidrógeno, interacción electrostática y funcionalidad a un oligonucleotido. Dichas modificaciones incluyen, pero no se limitan a modificaciones de azúcar en su posición 2', modificaciones de pirimidina en la posición 5, modificaciones de purina en la posición 8, modificaciones en aminas exocíclicas, sustitución de 4-tiouridina, sustitución de 5-bromo o 5-yodouracilo, modificaciones de estructura de base, metilaciones, combinaciones de pares de base tales como las ¡sobases isocitidina e isoguanidina, y combinaciones análogas. Las modificaciones de oligonucleótidos también puden incluir modificaciones 3' y 5' tales como bloqueo. Estructuras de análogos de nucleosido ilustrativas se proveen más adelante. Véase más ejemplos de análogos de nucleósidos descritos en Freier y Altmann; Nucí. Acid Res., 1997, 25, 4429-4443 y Uhlmann; Curr. Opinión in Drug Development, 2000, 3(2), 293-213, cuyos contenidos se incorporan aquí por referencia. 2'-(3-h¡droxi)propilo Boranofosfatos 3. Grupos dirigidos a objetivo Los compuestos que pueden conjugarse a la presente invención descritos aquí incluyen grupos dirigidos a objetivo. Los grupos dirigidos a objetivo incluyen ligandos de receptores, anticuerpos o fragmentos de anticuerpo, anticuerpos de una sola cadena, péptidos dirigidos a objetivo, moléculas de carbohidrato dirigidas a objetivo o Iecitinas. Los grupos dirigidos a objetivo mejoran la unión o absorción de los compuestos descritos aquí en un tejido y población de célulasnobjetivo. Por ejemplo, una lista no limitante de grupos dirigidos a objetivo incluye factor de crecimiento de células endoteliales vasculares, FGF2, somatostatina y análogos de somatostatina, transferrina, melanotropina, ApoE y péptidos de ApoE, factor de von Willebrand y péptidos de factor de von Willebrand, proteína de fibra adenoviral y péptidos de proteína de fibra adenoviral, PD1 y péptidos de PD1 , EGF y péptidos de EGF, péptidos de RGD, folato, etc. 4. Agentes de diagnóstico Un aspecto adicional de la invención provee los compuestos conjugados opcionalmente preparados con una etiqueta de diagnóstico enlazada al sistema de suministro polimérico descrito aquí, en donde la etiqueta se selecciona para propósitos de diagnóstico y formación de imagen. Por lo tanto, una etiqueta adecuada se prepara enlazando cualquier porción adecuada, v.gr., un residuo de aminoácido, a cualquier isótopo emisor estándar en la técnica, marcador radio-opaco, marcador de resonancia magnética u otros marcadores isotópicos no radioactivos adecuados para formación de imagen de resonancia magnética, marcadores de tipo fluorescencia, marcadores que presentan colores visibles y/o capaces de emitir fluorescencia bajo estimulación ultravioleta, infrarroja o electroquímica, para permitir la formación de imagen de un tejido tumoral durante procedimientos quirúrgicos, etc. Opcionalmente, la etiqueta de diagnoticos se incorpora en y/o es enlazada a una porción terapéutica conjugada, permitiendo el monitoreo de la distribución de un material biológicamente activo terapéutico dentro de un paciente animal o humano. En un aspecto adicional de la invención, sus conjugados objetivo de la invención se preparan fácilmente, por métodos conocidos en la técnica, con cualquier marcador adecuado, incluyendo, v.gr., marcadores de radioisótopos. Simplemente a manera de ejemplo, estos incluyen 131Yodo, 125 Yodo, 99mTecnetio y/o 11 lndio para producir agentes radioinmunoescinti-gráficos para absorción selectiva en células tumorales, in vivo. Por ejemplo, existe un número de métodos conocidos en la técnica para enlazar el péptido a Tc-99m, incluyendo simplemente a manera de ejemplo aquellos mostrados por las patentes de E.U.A. Nos. 5,328,679; 5,888,474; 5,997,844; y 5,997,845, incorporadas aquí por referencia.
G. Modalidades preferidas correspondientes a la fórmula Algunas modalidades particulares preparadas por los métodos descritos aquí incluyen: en donde: R4 se selecciona de entre OH, grupos residuales, grupos dirigidos a objetivo, agentes de diagnóstico y porciones biológicamente activas; (z) es un entero positivo de aproximadamente 1 a aproximadamente 10; (?') es cero o un entero positivo de aproximadamente 1 a aproximadamente 4; mPEG tiene la fórmula: CH3-O(CH2CH2O)n-; PEG tiene la fórmula -O(CH2CH2O)n-; y (n) es un entero positivo de aproximadamente 10 a aproximadamente 2,300. Los compuestos poliméricos preferidos de conformidad presente invención incluyen: en donde: fármaco es compuestos farmacéuticamente activos, enzimas, proteínas, anticuerpos, anticuerpos monoclonales, anticuerpos de una sola cadena y péptidos; y todas las variables se definieron anteriormente.
G. Métodos para hacer los polímeros activados y conjugados hechos con los mismos En un aspecto de la invención, el compuesto polimérico que tiene éster impedido se puede preparar conjugando un compuesto polimérico que tiene un OH o un grupo residual en el extremo terminal con un nucleófilo que tiene un éster impedido protegido o un ácido impedido en el extremo distal. La desprotección y activación posteriores del compuesto polimérico resultante proveerán el compuesto de la presente invención. El grupo terminal de la presente invención puede ser ya sea una forma de ácido carboxílico lista para ser acoplada con una porción que contiene OH o SH o una forma activada que puede ser remplazada al conjugar con la porción que contiene OH o SH. Alternativamente, un compuesto que contiene OH o SH puede ser conjugado para formar un intermediario de éster impedido, que a su vez reacciona con un polímero activado para el conjugado polimérico que tiene un éster impedido con una porción biológicamente activa. Para propósitos de ilustración, los métodos de preparación de un conjugado polimérico que contiene una porción acilo o éster impedido incluyen: hacer reaccionar un compuesto de la fórmula (III): i Mi (III) compuesto de la fórmula (IV) (IV) bajo condiciones suficientes para formar un compuesto de la fórmula (V): en donde: A1 es un grupo bloqueador o Mi ; A2 es un grupo bloqueador o Y , R2 R i 00 C C -2 'p R 3 es un grupo residual tal como halógenos, carbonatos activados, isocianato, N-hidroxisuccinimidilo, tosilato, mesilato, tresilato, nosilato, orto-nitrofenoxi, imidazol y otros grupos residuales conocidos por los expertos en la técnica; M2 es -OH. -SH, 0 -NHR101 ; R100 es OH o OR101 ; en donde, R101 se selecciona de entre hidrógeno, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-e, alquinilo de C2-6, alquilo ramificado de C3-19, cicloalquilo de C3-8, alquilo sustituido de Ci-6, alquenilo sustituido de C2.6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalquilo sustituido de C3.8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heterorilo sustituido, heteroalquilo de Ci-6, heteroalquilo sustituido de Ci-6, alcoxi de Ci-6, ariloxi, heteroalcoxi de Ci-6, heteroariloxi, alcanoilo de C2-6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo de C2-6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi de C2-6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2-6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2.6 y arilcarboniloxi sustituido; y todas las otras variables se definieron anteriormente. La unión de la porción éster impedida de conformidad con la fórmula (IV) al PEG u otro polímero se puede hacer usando técnicas de síntesis química estándares bien conocidas por los expertos en la técnica. La porción polímero activado tal como SC-PEG, PEG-amina, ácidos de PEG, etc. se pueden obtener de cualesquiera fuentes comerciales o las puede sintetizar un experto sin experimentación extraordinaria. Para el propósito de la presente invención, una lista no limitante de dicha porción éster impedida incluye: Los compuestos de la fórmula (V) pueden reaccionar además con una porción que contiene -OH o -SH en presencia de base y un agente de acoplamiento bajo condiciones suficientes para formar un compuesto de la fórmula (la): en donde: A3 es un grupo bloqueador o R103 se selecciona de entre agentes objetivo, agentes de diagnóstico y porciones biológicamente activas; y todas las otras variables se definieron anteriormente. Para propósitos de la presente invención, el R103 se deberá entender como la parte de la porción que contiene OH o SH que queda después de que ha pasado por una reacción con el compuesto de la fórmula (V). Alternativamente, los compuestos descritos aquí se pueden preparar por métodos que incluyen: hacer reaccionar un compuesto de la fórmula (VI): con un compuesto de la fórmula (VII): bajo condiciones suficientes para formar un compuesto de la fórmula (VIII): en donde A4 es un grupo bloqueador o M4; A5 es un grupo bloqueador o M3 es -OH , SH , o -N H R105; M4 es un grupo residual tal como halógenos, carbonatos activados, isocianato, N-hidroxisuccinimidilo, tosilato, mesilato, tresilato, nosilato, orto-nitrofenoxi, imidazol y otros grupos residuales conocidos por los expertos en la técnica; Ri 04 se selecciona de porciones biológicamente activas, grupos objetivo y agentes de diagnóstico Ríos se selecciona de entre hidrógeno, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6. alquinilo de C2-6, alquilo ramificado de C3-19, cicloalquilo de C3-8, alquilo sustituido de Ci -6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalquilo sustituido de C3-8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heterorilo sustituido, heteroalquilo de Ci -6, heteroalquilo sustituido de d-6, alcoxi de Ci -6, ariloxi, heteroalcoxi de Ci-6) heteroariloxi, alcanoilo de C2-6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo de C2-6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi de C2-6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2-6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2.6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C .6 y arilcarboniloxi sustituido; y todas las otras variables se definieron anteriormente. La unión del grupo que contiene éster impedido a la porción polímero preferiblemente se lleva a cabo en presencia de un agente de acoplamiento. Una lista no limitante de agentes de acoplamiento adecuados incluyen 1 ,3-diisopropilcarbodiimida (DIPC), cualesquiera dialquilcarbodiimidas adecuadas, halogenuros de 2-halogeno-1 -alquil-piridinio, (reactivos de Mukaiyama), 1 -(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC), anhídrido cíclico de ácido propanfosfonico (PPACA) y diclorofosfatos de fenilo, etc., que están disponibles, por ejemplo de fuentes comerciales tales como Sigma-Aldrich Chemical, o sintetizados usando técnicas conocidas. Preferiblemente, las reacciones se llevan a cabo en un solvente inerte tal como cloruro de metileno, cloroformo, DMF o mezclas de los mismos. Las reacciones preferiblemente se pueden conducir en presencia de una base, tal como dimetilaminopiridina (DMAP), diisopropiletiilamina, piridina, trietilamina, etc., para neutralizar cualesquiera ácidos generados. Las reacciones se pueden llevar a cabo a una temperatura de aproximadamente 0°C hasta aproximadamente 22°C (temperatura ambiente).
H. Métodos de tratamiento Otro aspecto de la presente invención provee métodos de tratamiento para varias condiciones médicas en mamíferos. Los métodos incluyen administrar, al mamífero que necesita dicho tratamiento, una cantidad efectiva de un compuesto descrito aquí cuando se conjuga a una porción biológicamente activa. Los compuestos de conjugado polimérico son útiles para, entre otras cosas, tratar enfermedades que son similares a aquellas que son tratadas con el compuesto progenitor, v.gr., terapia de reemplazo de enzima, enfermedad neoplásica, reducción de carga de tumor, prevención de metástasis de neoplasmas y prevención de recurrencias de crecimientos de tumor/neoplásicos en mamíferos. La cantidad del conjugado polimérico que se administra dependerá de la cantidad de la molécula progenitora incluida en el mismo. Generalmente, la cantidad de conjugado polimérico usada en los métodos de tratamiento es aquella cantidad que efectivamente logra el resultado terapéutico deseado en mamíferos. Naturalmente, las dosis de los diversos compuestos de conjugado polimérico variarán algo dependiendo del compuesto progenitor, peso molecular del polímero, velocidad de hidrólisis in vivo, etc. Los expertos en la técnica determinarán la dosis óptima de los conjugados de transporte poliméricos seleccionados con base en la experiencia clínica y la indicación de tratamiento. Las dosis reales serán evidentes para el experto en la técnica sin experimentación extraordinaria. Los compuestos de la presente invención se pueden incluir en una o más composiciones farmacéuticas adecuadas para administrarse a mamíferos. Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de una solución, suspensión, tableta, cápsula o similar, preparadas de conformidad con métodos bien conocidos en la técnica. Cabe contemplar también que la administración de dichas composiciones puede ser por vías oral y/o parenteral dependiendo de las necesidades del experto en la técnica. Una solución y/o suspensión de la composición se puede utilizar, por ejemplo, como un vehículo para inyección o infiltración de la composición por métodos de la técnica anterior, v.gr., por inyección intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutánea y similares. Dicha administración también puede ser por infusión en un espacio o cavidad corporal, así como por inhalación y/o vía intranasal. En aspectos preferidos de la invención, sin embargo, los conjugados poliméricos son parenteralmente administrados a mamíferos que necesitan los mismos.
EJEMPLOS Los siguientes ejemplos sirven para proveer apreciación adicional de la invención pero de ninguna manera pretenden restringir el alcance de la invención. Los números en negritas mencionados en los ejemplos corresponden a aquellos mostrados en la los esquemas A-E. Las abreviaturas se usan en todos los ejemplos tales como, DCM (diclorometano), DIPEA (diisopropiletilamina), DMAP (4-dimetilaminopiridina), DMF (?,?'- dimetílformamida), EDC (1 -(3-dimetilamino-propil)-3-etilcarbodiimida), IPA (isopropanol), Mmt (4-metoxitrifenilmetilo), NHS (N-hidroxisuccinimida), PEG (polietilenglicol), SCA-SH (anticuerpo de una sola cadena), SC-PEG (polietilenglicol de succinimidilcarbonato), TEAA (acetato de tetraetilammonio), TFA (ácido trifluoroacético) y THF (tetrahidrofurano). Procedimientos generales. Todas las reacciones se llevan a cabo bajo una atmósfera de nitrógeno seco o argón. Los reactivos comerciales se usan sin purificación adicional. Todos los compuestos de PEG se secan bajo vacío o por destilación azeotrópica a partir de tolueno antes de usarse. Los espectros de 13C RMN se obtuvieron a 75.46 MHz usando un espectrómetro de RMN Varían Mercury®300 NMR y cloroformo deuterado y piridina como los solventes a menos que se especifique otra cosa. Los desplazamientos químicos (d) se reportan en partes por millón (ppm) desde tetrametilsilano (TMS). Método de CLAR. Las mezclas de reacción y la pureza de los intermediarios y productos finales son monitoreados por un instrumento de CLAR Beckman Coulter System Gold®. Utiliza una columna de fase inversa de C8 (150 x 4.6 mm) ZORBAX® 300SB o una columna de fase inversa de C18 (150 x 4.6 mm) Phenomenex Júpiter® 300A con un detector de UV 168 Diode Array, usando un gradiente de 5-80 % de acetonitrilo en acetato de tetraetilamonío 0.05 M (TFAA) a una velocidad de flujo de 1 ml/min.) ESQUEMA A Métodos de síntesis descritos en los ejemplos 1-2 ESQUEMA B Métodos de síntesis descritos en los ejemplos 3-11 SC-PEG (1) H2N^^^^X O-T-C-T-C-C-C-A-G-C-G-T-G-C-G-C-C-A-T O 16 mPEG^^OYN^^ ^YO-T-C-T-C-C-C-A-G-C-G-T-G-C-G-C-C-A-T O O 17 mPEG = CH30-(CH2CH20)n| ESQUEMA C Métodos de síntesis descritos en el ejemplo 12 19 mPEG = CH30-(CH2CH20)n.
ESQUEMA D Métodos de síntesis descritos en los ejemplos 13-15 25 mPEG = CH30-(CH2CH20)n.
ESQUEMA E Métodos de síntesis descritos en el ejemplo 16 27 mPEG = CH30-(CH2CH20)n EJEMPLO 1 Preparación de PEG-HE-ácido, compuesto (3) SC-PEG (compuesto 1 , PM. 40 kDa, 1 .5 g, 0.0375 mmoles) se disolvió en DCM (20 mi) a temperatura ambiente. A la solución, se añadió clorhidrato de ácido 4-amino-2,2-dimetilbutírico (compuesto 2, 26.4 mg, 0.158 mmoles), diisopropiletilamina (40 µ?, 0.225 mmoles) y DMF (1 mi). La mezcla de reacción se agitó durante 20 horas a temperatura ambiente y el solvente se removió parcialmente bajo vacío. El residuo se precipitó añadiendo éter (40 mi) para dar un sólido blanco que se recristalizó a partir de acetonitrilo-IPA para obtener 1 .35 g de producto: 13C RMN 5 178.5, 156.5, 70.6, 63.9, 40.3, 40.2, 25.6.
EJEMPLO 2 Preparación de PEG-HE-paclitaxel, compuesto (5) El compuesto 3 (1 .3 g, 0.0322 mmoles) se disolvió en una mezcla de cloroformo (20 mi) y DMF (6 mi). A la solución agitada se añadió paclitaxel (compuesto 4, 0.165 g, 0.1932 mmoles) seguido por DMAP (51 mg, 0.420 mmoles) a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se enfrió después a -8 °C, y se añadió EDC (50 mg, 0.258 mmoles). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente y se agitó durante 20 horas. Los solventes incluyendo DMF se removieron en un evaporador giratorio y la temperatura del baño de agua no excedió 37°C. Al residuo restante se añadió éter para obtener un sólido que se recristalizó a partir de acetonitrilo-IPA: 13C RMN 5 204, 177, 174, 172, 171 , 170, 167, 127-1 34 (7 señales), 63.8, 58.5, 55.0, 36-46 (6 señales), 9.5-28 (8 señales).
EJEMPLO 3 Preparación de Br-HE-OEt, compuesto (8) Butil-litio (solución 1 .6 M en t-BuOH, 200 mi) se añadió a una solución de isobutirato de etilo (compuesto 6, 35 g) en THF (500 mi) a -78°C y la solución se agitó durante 1 hr a la misma temperatura. Se añadió 1 ,5-dibromopetano (compuesto 7, 100 g) y la mezcla se dejó calentar a temperatura ambiente. La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora y se vació en bicarbonato de sodio acuoso (500 mi). La capa orgánica se evaporó. El residuo se purificó por una columna sobre gel de sílice, eluido con 10% de acetato de etilo en hexano para dar el producto deseado como un líquido (29.2 g, rendimiento 36.7%).
EJEMPLO 4 Preparación de N3-HE-OEt, compuesto (9) 7-Bromo-2,2-dimetilheptanoato de etilo (compuesto 8, 26.5 g) se calentó con azida de sodio (13 g) en DMF (500 mi) a 100°C durante 2 horas. La mezcla se concentró y el residuo se purificó por una columna sobre gel de sílice, eluido con 10% de acetato de etilo en hexano para dar el producto deseado como un líquido (20.5 g, rendimiento 90.3%).
EJEMPLO 5 Preparación de Ng-HE-OH, compuesto ( 0) 7-Azido-2,2-dimetilheptanoato de etilo (compuesto 9, 20.5 g) se calentó con hidróxido de sodio (10 g, 85%) en etanol (500 mi) bajo reflujo durante 2 horas. La mezcla se concentró y se añadió agua (400 mi). La mezcla se acidificó con ácido clorhídrico concentrado a pH 2 y se extrajo con acetato de etilo (500 mi). La capa orgánica se concentró y el residuo se purificó por una columna sobre gel de sílice, eluido con 50% de acetato de etilo en hexano para dar el producto deseado como un líquido (17.1 g, rendimiento 95%).
EJEMPLO 6 Preparación de Ng-HE-T, compuesto (12) Acido 7-azido-2,2-d¡metilheptanoico (compuesto 10, 8 g) se disolvió en diciorometano (200 mi). Se añadió cloruro de oxalilo (6.4 g) y la mezcla se puso a reflujo durante 2 hr y se evaporó. El residue se disolvió en diciorometano (100 mi) y se añadió en 3'-acetiltomidina (compuesto 11 , 5.85 g) en piridina (100 mi). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 24 horas y se vació en bicarbonato de sodio acuoso (500 mi). La mezcla se extrajo con diciorometano (500 mi) y la capa orgánica se concentró. El residuo se purificó por una columna sobre gel de sílice, eluido con 5% de metanol en DCM para dar el producto deseado como un sólido incoloro (5.6 g, rendimiento 61 %).
EJEMPLO 7 Preparación de NHg-HE-T, compuesto (13) 5'-(7-Azido-2,2-dimetilheptanoil) 3'-acetiltimidina (compuesto 12, 4.65 g) se hidrogenó en metanol (200 mi) bajo 2.109 kg/cm2 en presencia de Pd/C (10%, 0.5 g) durante 1 hr. La mezcla se filtró y el filtrado se evaporó para dar un sólido (4.4 g, rendimiento 100%).
EJEMPLO 8 Preparación de MmtNH-HE-T, compuesto (14) 5'-(7-Amino-2,2-dimetilheptanoil) 3'-acetiltimidina (compuesto 13, 4.4 g), trietilamina (4 mi) y cloruro de 4-metoxitritilo (7.5 g) se agitaron en piridina (100 mi) durante 10 hr. Se añadió metilamina (40%, 10 mi) y la solución se agitó durante 2 hr. La mezcla se vació en bicarbonato de sodio acuoso (500 mi) y se extrajo con diclorometano (500 mi). La capa orgánica se concentró. El residuo se purificó por una columna sobre gel de sílice, eluido con 5% de metanol en diclorometano para dar el producto deseado como un sólido incoloro (4.9 g, rendimiento 71 %).
EJEMPLO 9 Preparación de MmtNH-HE-T-fosforoamidita, compuesto (15) 5'-(7-[(MMT-Amino)-2,2-dimetilheptanoil]timidina (compuesto 14, 4.9 g), ?,?-tetraisopropil-cianoetil fosforamidita (3 g) y tetrazol (0.5 g) en acetonitrilo (50 mi) se agitó durante la noche. La mezcla se vació en bicarbonato de sodio acuoso (500 mi) y se extrajo con diclorometano (500 mi). La capa orgánica se concentró. El residuo se purificó por una columna sobre gel de sílice, eluido con 50% de acetato de etilo en hexano para dar el producto deseado como un sólido incoloro (4.5 g, rendimiento 71 %).
EJEMPLO 10 Preparación de NHg-HE-Oligo, compuestos (16) El compuesto 15 se transfirió a Trilink Biotechnologies, CA para usarse como el último monómero en la síntesis de oligo. El grupo Mmt fue desprotegido después de la síntesis y el oligo se purificó por CLAR-FI y el compuesto 16 como la amina libre se obtuvo para conjugación de PEG. La secuencia de oligonucleótido fue TCTCCCAGCGTGCGCCAT.
EJEMPLO 1 1 Preparación de PEG-HE-Oligo, compuestos (17) A una solución del compuesto 16 (10 mg, 1 .7 µ?t???Te) en regulador de pH PBS (5 mi, pH 7.8) se añadió SC-PEG (compuesto 1 , PM 30 kDa, 520 mg, 17 µ?t???ße) y se agitó a temperatura ambiente durante 5 hr. La mezcla de reacción se diluyó a 50 mi con agua y se cargó en una columna de intercambio de aniones fuerte Poros HQ (10 mm x 1 .5 mm, volumen de lecho - 16 mi) que fue pre-equilibrada con 20 mM de regulador de pH Tris-HCI, pH 7.4 (regulador de pH A). La columna se lavó con 3-4 volúmenes de columna de regulador de pH A para remover el exceso de enlazador de PEG. Después el producto fue eluido con un gradiente de 0 a 100 % de NaCI 1 M en 20 mM de regulador de pH Tris-HCI, pH 7.4, regulador de pH B en 10 min, seguido por 100 % de regulador de pH B durante 10 min a una velocidad de flujo de 10 ml/min. El producto eluido se desaló usando una columna desaladora HiPrep (50 mi) y se liofilizó para dar 6 mg del producto. El equivalente de oligonucleótido en el conjugado medido por UV fue 60%, p/p.
EJEMPLO 12 Preparación de PEG-enlazador-HE-Oligo compuesto ( 9) A una solución del compuesto 16 (10 mg, 1 .7 µ????) en regulador de pH PBS (5 mi, pH 7.8) se añadió PEG-enlazador-NHS (compuesto 18, PM 30 kDa, 520 mg, 17 µ????) y se agitó a temperatura ambiente durante 5 hr. La mezcla de reacción se diluyó a 50 mi con agua y se cargó en una columna de intercambio de aniones fuerte Poros HQ, (10 mm x 1 .5 mm, volumen de lecho ~ 16 mi) que fue pre-equilibraada con 20 mM de regulador de pH Tris-HCI, pH 7.4 (regulador de pH A). La columna se lavó con 3-4 volúmenes de regulador de pH A de columna para removee el exceso de enlazador de PEG. Después el producto fue eluido con un gradiente de 0 a 100 % de NaCI 1 M en 20 mM de regulador de pH Tris-HCI, pH 7.4, regulador de pH B en 10 min, seguido por 100 % de regulador de pH B durante 10 min a una velocidad de flujo de 10 ml/min. El producto eluido se desaló usano columna desaladora de HiPrep (50 mi) y se liofilizó a sólido para dar 5 mg del producto deseado. El equivalente de oligonucleótido en el conjugado medido por UV fue 50%, p/p.
EJEMPLO 13 Preparación de BocNH-HE-T, compuesto (22) Acido 4-Boc-amino-2,2-dimetibutírico (compuesto 20, 0.50 g, 2.1 6 mmoles) se disolvió en una mezcla de cloroformo (10 mi) y DMF (5 mi), y se añadió timidina (compuesto 21 , 0.79 g, 3.25 mmoles). La mezcla de reacción se enfrió en un baño de hielo, y se añadió EDC (0.62 g, 3.25 mmoles), seguido por DMAP (0.40 g, 3.25 mmoles). La mezcla de reacción se dejó calentar a temperatura ambiente durante 20 horas con agitación. El solvente se removió bajo vacío y el residuo se suspendió en acetato de etilo, se lavó con HCI 0.1 N y salmuera. La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio anhidro y el solvente se removió bajo vacío para dar un aceite crudo. La cromatografía en columna instantánea sobre gel de sílice usando DCM / EtOAc (40:60, v/v) dio 0.28 g del producto deseado: 13C RMN d 177.21 , 164.08, 156.41 , 150.80, 135.46, 1 1 1 .49, 85.43, 84.30, 80.21 , 71 .28, 63.77, 41 .67, 41 .08, 40.00, 37.69, 36.99, 28.87, 26.14, 25.55, 13.06.
EJEMPLO 14 Preparación de NH?-HE-T, compuestos (23) El compuesto 22 (0.25 g, 0.55 mmoles) se disolvió en DCM (5 mi), y a la solución se añadió TFA (0.25 mi) mediante una pipeta a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 20 minutos. Los solventes y TFA fueron removidos bajo vacío co-evaporando con DCM para remover TFA completamente y para dar 0.32 g del producto como un sólido vitreo: 3C RMN (CD3CN) d 176.61 , 164.22, 150.81 , 136.41 , 1 36.18, 1 10.82, 85.14, 85.07, 84.14, 83.97, 70.99, 64.56, 41.32, 39.35, 37.13, 36.92, 25.10, 24.92, 24.75, 12.08, 1 1 .98.
EJEMPLO 15 Preparación de PEG-HE-T, compuestos (25) mPEG-enlazador-NHS (compuesto 24, PM. 20k, 0.50g, 0.0246 mmoles) y compuesto 23 (26 mg, 0.0738 mmoles) se disolvieron en una mezcla de DCM (5 mi) y a la solución se añadió DMF (1 mi), y DMAP (15 mg, 0.0123 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2.5 horas. El solvente se removió bajo vacío, y el producto crudo se precipitó mediante la adición de éter etílico. El sólido se recogió por filtración y se recristalizó a partir de acetonitrilo/IPA para dar 0.43 g del producto como un sólido blanco puro: 13C RMN d 177.9, 168.0, 164.0, 150.9, 134.9, 133.1 , 129.8, 128.1 , 1 10.2, 84.4, 83.9, 70.4, 67.8, 64.5, 63.2, 60.0, 58.7, 40.1 , 39.4, 37.2, 25.2, 24.7, 16.1 , 12.2.
EJEMPLO 16 Preparación de PEG-HE-T, compuestos (27) mPEG-NHS (compuesto 26, PM. 20k, 1 g, 0.0492 mmoles) y compuesto 23 (26 mg, 0.1476 mmoles) se disolvieron en una mezcla de DCM (10 mi) ya la solución se añadió DMF (2 mi), y DMAP (30 mg, 0.246 mmoles). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2.5 horas. El solvente se removió bajo vacio, y el producto crudo se precipitó mediante la adición de éter etílico. El sólido se recogió por filtración y se recristalizó a partir de acetonitrilo/IPA para dar 0.90 g del producto como un sólido blanco: 13C RMN 6 178.2, 162.9, 156.0, 149.5, 134.6, 1 10.3, 84.4, 83.4, 70.1 , 69.1 , 64.4, 63.5, 62.6, 61 .2, 58.6, 40.6, 40.0, 39.4, 37.1 , 12.2.
EJEMPLO 17 Determinación de estabilidad de conjugados de PEG en regulador de pH y plasma de rata Las velocidades de hidrólisis se obtuvieron utilizando una columna de fase inversa de C8 (Zorbax® SB-C8) usando una fase móvil en gradientes que consistía de (a) regulador de pH de acetato de trietilamonio 0.1 M y (b) acetonitrilo. Se usó una velocidad de flujo de 1 ml/min, y se monitorearon cromatogramas usando un detector de UV a 227 nm para paclitaxel y 260 nm para oligonucleótidos. Para hidrólisis en regulador de pH, derivados de PEG se disolvieron en PBS 0.1 M, pH 7.4, o agua a una concentración de 5 mg/ml, mientras que para hidrólisis en el plasma, los derivados se disolvieron en agua destilada a una concentración de 20 mg / 100 µ? y a esta solución se añadieron 900 µ? de plasma de rata. La mezcla se sometió a acción de remolino durante 2 min y se dividió en viales de vidrio de 2 mi con 100 µ? de la alícuota por cada vial. Las soluciones se incubaron a 37°C durante varios períodos. Una mezcla de metanol - acetonitrilo (1 :1 , v/v, 400 µ?) se añadió a un vial en el intervalo apropiado y la mezcla se sometió a acción de remolino durante 1 min, seguido por filtración a través de membrana de filtro de 0.45 mm (opcionalmente seguido por una segunda filtración a través de membrana de filtro de 0.2 mm). Una alícuota de 20 µ? del filtrado se inyectó en el CLAR. Con base en el área pico, se estimaron las cantidades de compuesto nativo y derivado de PEG, y la vida media de cada compuesto en diferentes medios se calculó usando análisis de regresión lineal a partir de la desaparición de derivado de PEG. El cuadro siguiente muestra el resultado del estudio de estabilidad para compuestos en los ejemplos.
CUADRO Resultado de estudio de estabilidad de conjugados de PEG Compuesto t½ e PBS (hr) \¼ en plasma de rata (hr) Compuesto 5 7.94 8.06 Compuesto 17 >24 >24 Compuesto 19 >24 16.0

Claims (25)

NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES
1.- Un compuesto de la fórmula (I): (I) en donde: A es un grupo bloqueador o Ri es un polímero soluble en agua sustancialmente no antigénico; U y 1_? son separadores independientemente seleccionados que tienen un par de electrones libres ubicados cuatro a diez átomos de ?(=? o 0(=??), preferiblemente 4 a 8 y muy preferiblemente 4 a 5 átomos de o 0(=??); I_2 y L'2 son enlazadores bifuncionales independientemente seleccionados; Yi y ?? son independientemente O, S, o NR5; R2, R'2) R3, R'3 y R5 son independientemente seleccionados del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C .6, alquilo ramificado de C3-19, cicloalquilo de C3.8) alquilo sustituido de 01-6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalquilo sustituido de C3-8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heterorilo sustituido, heteroalquilo de Ci-6, heteroalquilo sustituido de Ci-6, alcoxi de Ci-6, ariloxi, heteroalcoxi de 0 .$, heteroariloxi, alcanoilo de C2-6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo de C2-6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi de C2-6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2.6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2.6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6 y arilcarboniloxi sustituido, o R2 junto con R3 y R'2 junto con R'3 independientemente forman un ciclohidrocarburo no aromático sustituido o no sustituido que contiene por lo menos tres carbonos; R4 y R'4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de OH, grupos residuales, grupos dirigidos a objetivo, agentes de diagnóstico y porciones biológicamente activas; y (p) y (?') son independientemente cero o un entero positivo, preferiblemente cero o un entero de aproximadamente 1 a aproximadamente 3, muy preferiblemente cero o 1 , siempre que R3 sea un hidrocarburo sustituido o no sustituido que tenga por lo menos tres carbonos cuando R es H, y además siempre que l_i no sea el mismo que C(R2)(R3).
2.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque el grupo residual se selecciona del grupo que consiste de OH, halógenos, ésteres activados, imidotiona cíclica, N-hidroxisuccinimidilo, para-nitrofenoxi, N-hidroxiftalimida, N-hidroxibenzotriazolilo, imidazol, tosilo, mesilo, tresilo, nosilo, alquiloxi de CrC6, alcanoiloxi de CrC6, arilcarboniloxi, orto-nitrofenoxi, para-nitrofenoxi, pentafluorofenoxi, 1 ,3,5-triclorofenoxi y 1 ,3,5-trifluorofenoxi.
3.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R4 y R'4 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de OH, metoxi, tert-butoxi, para-nitrofenoxi y N-hidroxisuccinimidilo.
4.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque la porción biológicamente activa se selecciona del grupo que consiste de porciones que contienen -OH y porciones que contienen -SH.
5. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque la porción biológicamente activa se selecciona del grupo que consiste de compuestos farmacéuticamente activos, enzimas, proteínas, anticuerpos, anticuerpos monoclonales, anticuerpos de una sola cadena y péptidos.
6. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque U y ?_? a se seleccionan independientemente del grupo que consiste de: -NR (CR12Ri3)s-, -S(CRi2Ri3)s-, -O(CRi2 i3)s-, -NRH -NRi 1(CRi2R13)sNRi6(CRi4R15)s-, -NR1 1(CR12R13O)s(CR14R15)s-, -O(CR12Ri3)sO(CR14R15)s-, -O(CR12Ri3)sS(CR14R15)s'-, -O(CR12Ri3)SNR16(CR14R15)S~, -O(CRi2Ri3O)s(CRi Ri5)s -> en donde: R-1 1 -R16 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, amino, amino sustituido, azido, carboxi, ciano, halógeno, hidroxilo, nitro, éter silílico, sulfonilo, mercapto, alquilmercapto de Ci-6, arilmercapto, arilmercapto sustituido, alquiltio de Ci-6 sustituido, alquilos de Ci-6, alquenilos de C2-6, alquinilos de C2-6, alquilo ramificado de C3-19, cicloalquilo de C3-8, alquilo sustituido de Ci-6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalquilo sustituido de C3-8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heterorilo sustituido, heteroalquilo de C1 -6, heteroalquilo sustituido de C .e, alcoxi de Cis, ariloxi, heteroalcoxi de C1 -6, heteroariloxi, alcanoilo de C2-6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo de C2-6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi de C2-6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2.6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2_6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6 y arilcarboniloxi sustituido; (s) y (s') son independientemente cero o un entero positivo; y (r) es O ó 1 .
7.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque L2 y L'2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de: -[C(=O)]rNH(CH2)2CH=N-NHC(=O)-(CH2)2-, -[C(=0)]rNH(CH2)2(CH2CH20)2(CH2)2NH[C(=0)]r-, -[C(=0)]rNH(CH2CH2)(CH2CH20)2NH[C(=0)] , -[C(=0)]rNH(CH2CH2)sNH(CH2CH2)s [C(=0)]r-, -[C(=0)]r NH(CH2CH2)sS(CH2CH2)s [C(=0)]r-, -[C(=0)]rNH(CH2CH2)(CH2CH2O)[C(-0)] , -[C(=0)]rNH(CH2CH2)sO(CH2CH2)s [C(=0)]r-, -[C(=0)]rNH(CH2CH20)(CH2)NH[C(=O)] , -[C(=0)]rNH(CH2CH20)2(CH2)[C(=0)]r-, -[C(=0)]rNH(CH2CH20)s(CH2)s-[C(=0)]r-, -[C(=0)]rNHCH2CH2NH[C(=0)]r--, -[C(=0)]rNH(CH2CH2)20[C(=0)]r' -, -[C(=0)]rNH(CH2CH20)[C(=0)]r-, -[C(=0)]rNH(CH2CH20)2[C(=0)]r -[C(=0)]rNH(CH2)3[C(=O)]r-, -[C(=O)]rO(CH2CH20)2(CH2)[C(=0)] -[C(=0)]rO(CH2)2NH(CH2)2[C(=0)]r- -[C(=0)]rO(CH2CH20)2NH[C(=0)]r- -[C(=0)]rO(CH2)20(CH2)2[C(=0)]r-, -[C(=0)]rO(CH2)2S(CH2)2[C(=0)]r -[C(=0)]rO(CH2CH2)NH[C(=0)]r-, -[C(=0)]rO(CH2CH2)0[C(=0)],- -[C(=0)]rO(CH2)3NH[C(=0)]r-, -[C(=0)]rO(CH2)30[C(=0)]r- -[C(=0)]rO(CH2)3[C(=0)]r-, -[C(=0)]rCH2NHCH2[C(=0)]r- -[C(=0)]rCH2OCH2[C(=0)]r-, -[C(=O)]rCH2SCH2[C(=0)], -[C(=0)]rOCH2-^^-CH20[C(=0)]r— donde (r) y (r') son independientemente cero ó 1 .
8.- El compuesto de conformidad con la reivindicación caracterizado además porque L2 y L'2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de: - -s— s-5- -Val-Cit-, -Gly-Phe-Leu-Gly-, -Ala-Leu-Ala-Leu-, -Phe-Lys-, -Val-Cit-C(=O)-CH2OCH2-C(=O)-, -Val-Cit-C(=O)-CH2SCH2-C(=O)-, y -NHCH(CH3)-C(=O)-NH(CH2)6-C(CH3)2-C(=O)- en donde, ?11-19 son independientemente O, S o NR48; R3i-48, R50-51 y A51 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilos de Ci-6, alquilos ramificados de C3-12, cicloalquilos de C3-8, alquilos sustituidos de C -6, cicloalquilos sustituidos de C3-8, arilos, arilos sustituidos, aralquilos, heteroalquilos de Ci-6, heteroalquilos sustituidos de Ci-6) alcoxi de C -6, fenoxi y heteroalcoxi de C-i-6-, Ar es una porción arilo o heteroarilo; Ln-i5 son separadores bifuncionales independientemente seleccionados; J y J' se seleccionan independientemente del grupo que consiste de porciones activamente transportadas hacia una célula objetivo, porciones hidrofobicas, porciones de enlace bifuncional y combinaciones de las mismas; (c11), (h11), (k11), (111), (m11) y (n11) son enteros positivos independientemente seleccionados, preferiblemente 1; (a11), (e11), (g11 ), (j11), (o11) y (q11) son independientemente ya sea cero o un entero positivo, preferiblemente 1; y (b1 1 ), (x1 1 ), (x'1 ), (f1 1 ), (¡1 1 ) y (p 1 ) son independientemente cero o uno.
9. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque L2 y L'2 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de un aminoácido, un derivado de aminoácido, y un péptido.
10. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque -L1-C(R2)(R3)-C(=Y )- y -L'1-C(R'2)(R'3)-C(=Y' ) se seleccionan independientemente del grupo que consiste de:
1 1 .- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque tiene la fórmula (II): (II).
12. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque A se selecciona del grupo que consiste de H, NH2, OH, CO2H, alcoxi de d-6 y alquilo de C1-6.
13. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque Ri comprende un óxido de polialquileno lineal, terminalmente ramificado o de brazos múltiples.
14. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 13, caractenzado además porque el óxido de polialquileno se selecciona del grupo que consiste de polietilenglicoi y polipropilenglicol.
15. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado además porque el óxido de polialquileno se selecciona del grupo que consiste de -Y7i-(CH2CH2O)n-CH2CH2Y7i-, -Y7-i-(CH2CH2O)n-CH2C(=Y72)-Y71-, -Y7i-C(=Y72)-(CH2)a71-Y73-(CH2CH2O)n-CH2CH2-Y73-(CH2)a71-C(=Y72)-Y71-, y -Y7i-(CR71R72)a72-Y73-(CH2)b71-O-(CH2CH2O)n-(CH2)b71-Y73-(CR71 R72)a72-Y7 -, en donde: Y7i y Y 3 son independientemente O, S, SO, SO2, NR73 o un enlace; Y72 es O, S, o NR74; R7i-74 son independientemente las mismas porciones que se pueden usar para R2; (a71 ), (a72), y (b71 ) son independientemente cero o un entero positivo; y (n) es un entero de aproximadamente 10 a aproximadamente 2300.
16. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado además porque el óxido de polialquileno es un polietilenglicoi de la fórmula, -O-(CH2CH2O)n-, en donde (n) es un entero de aproximadamente 10 a aproximadamente 2,300.
17. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R-i tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 2,000 a aproximadamente 100,000 daltons.
18. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R-i tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 5,000 a aproximadamente 60,000 daltons.
19. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R-? tiene un peso molecular promedio de aproximadamente 5,000 a aproximadamente 25,000 daltons o de aproximadamente 20,000 a aproximadamente 45,000 daltons.
20. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2, R'2) R3 y R'3 se seleccionan independientemente del grupo que consiste de metilo, etilo e isopropilo.
21. - El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , seleccionado del grupo que consiste de: 108 en donde: R4 se selecciona del grupo que consiste de OH, grupos residuales, grupos dirigidos a objetivo, agentes de diagnóstico y porciones biológicamente activas; (z) es un entero positivo de aproximadamente 1 a aproximadamente 10; (?') es cero o un entero positivo de aproximadamente 1 a aproximadamente 4; mPEG tiene la fórmula: CH3-O(CH2CH2O)n-; PEG tiene la fórmula -O(CH2CH2O)n-; y (n) es un entero positivo de aproximadamente 10 a aproximadamente 2,300.
22.- El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , seleccionado del grupo que consiste de: 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 i22 ??? ??? en donde: fármaco es compuestos farmacéuticamente activos, enzimas, proteínas, anticuerpos, anticuerpos monoclonales, anticuerpos de una sola cadena y péptidos; (z) es un entero positivo de aproximadamente 1 a aproximadamente 10; (?') es cero o un entero positivo de aproximadamente 1 a aproximadamente 4; mPEG tiene la fórmula: CH3-O(CH2CH2O)n-; PEG tiene la fórmula -O(CH2CH2O)n-; y (n) es un entero positivo de aproximadamente 10 a aproximadamente 2,300.
23.- Un método de preparación de un conjugado polimérico que contiene una porción acilo o éster impedido que comprende: hacer reaccionar un compuesto de la fórmula (III): (III) con un compuesto de la fórmula (IV) bajo condiciones suficientes para formar un compuesto de la fórmula (V): (V) en donde: Ai es un grupo bloqueador o M-r, A2 es un grupo bloqueador o R-i es un polímero soluble en agua sustancialmente no antigénico; M-i es un grupo residual; M2 es -OH, SH, o -NHR 0i; R100 se selecciona del grupo que consiste de OH, o OR101 ; L-i y L2 son separadores independientemente seleccionados que tienen un par de electrones libres ubicados cuatro a diez átomos de Yi y ?? son independientemente O, S, o NR5; y R2, R3, R5) y R10o se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo de Ci-6, alquenilo de C2-6, alquinilo de C2-6, alquilo ramificado de C3-19, cicloalquilo de C3-8, alquilo sustituido de C1-6, alquenilo sustituido de C2-6, alquinilo sustituido de C2-6, cicloalquilo sustituido de C3-8, arilo, arilo sustituido, heteroarilo, heterorilo sustituido, heteroalquilo de C -6, heteroalquilo sustituido de Ci-6, alcoxi de C1-6, ariloxi, heteroalcoxi de C -6, heteroariloxi, alcanoilo de C2-6, arilcarbonilo, alcoxicarbonilo de C2-6, ariloxicarbonilo, alcanoiloxi de C2-6, arilcarboniloxi, alcanoilo sustituido de C2-6, arilcarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2.6, ariloxicarbonilo sustituido, alcanoiloxi sustituido de C2-6 y arilcarboniloxi sustituido, o R2 junto con R3 y R'2 junto con R'3 independientemente forman un ciclohidrocarburo no aromático sustituido o no sustituido que contiene por lo menos tres carbonos; (p) es cero o un entero positivo; siempre que R3 sea un hidrocarburo sustituido o no sustituido que tenga por lo menos tres carbonos cuando R2 es H, y además siempre que l_i no sea el mismo que C(R2)(R3).
24.- El método de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado además porque comprende: activar y hacer reaccionar el compuesto de la fórmula (V): con una porción que contiene -OH o -SH: bajo condiciones suficientes para formar un compuesto de la fórmula (la) (la) en donde: A3 es un grupo bloqueador o R103 se selecciona del grupo que consiste de agentes objetivos, agentes de diagnóstico y porciones biológicamente activas; y todas las otras variables son las mismas que se definen en la reivindicación 24.
25.- El uso de un compuesto de la fórmula (I) de conformidad con la reivindicación 1 , para preparar un medicamento para tratar cáncer, enfermedad neoplásica, carga de tumor, metástasis de neoplasmas y recurrencia de crecimientos de tumor/neoplásicos en un mamífero, en donde FU.es una porción biológicamente activa.
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