JP3485023B2 - ヌクレオシド化合物 - Google Patents
ヌクレオシド化合物Info
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Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は新規なヌクレオシド
化合物に関するものであり、本発明のヌクレオシド化合
物は、例えば、オリゴデオキシリボヌクレオチドの製造
中間原料として有機合成化学、生化学および医薬産業
上、有用な化合物である。 【０００２】 【従来の技術】これまでのオリゴデオキシリボヌクレオ
チドおよびオリゴリボヌクレオチドの合成に関しては、
固相合成法が採用されている。この方法は、各種有機溶
剤に不要な固相担体上で、逐次、ＤＮＡ鎖もしくはＲＮ
Ａ鎖を伸長させていくものである。上記固相合成法に
は、鎖長を伸長させる際、過剰に用いた試薬や溶媒等が
容易に除去できるという利点があり、そのため必要に応
じて過剰の試薬を用いることによって各素反応を１００
％近く進行させ、所望の配列を有するオリゴデオキシリ
ボヌクレオチドおよびオリゴリボヌクレオチドを製造す
ることができる。ＤＮＡ鎖あるいはＲＮＡ鎖を伸長させ
るためのヌクレオチド試薬としては、ケスターらが開発
したβ−シアノホスホロアミダイトを用い、固相担体と
しては多孔質ガラスを用いることが一般的である［エイ
チ・ケスター（H. Kster）ら、テトラヘドロン・レター
ズ（Tetrahedron Lett.），52, 5843（1983）. および
特許協力条約（PCT） WO97/42202を参照］。しかしなが
ら、上記の従来法には大きな制約がある。１つは固相上
での精密な反応制御が極めて難しいため、所望の反応規
模で設計する際には、その条件設定に多大な困難さを伴
うことである。また、使用する多孔質ガラスは極めて高
価である。さらに、過剰に試薬を用いることが基本であ
るため、大量にオリゴデオキシリボヌクレオチド類を得
たい場合、経済的に極めて不利になる。具体的には、多
孔質ガラスを利用して、１ミリモルを上回るような規模
に反応を設計し実施することは、技術的に容易なことで
はなく、多大なコストを要することになる。これらの問
題は、近年、オリゴデオキシリボヌクレオチド類を医薬
品用途で利用しようとした場合、その供給が事実上困難
なことを意味しており、深刻な問題とされている。 【０００３】 【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、オリ
ゴデオキシリボヌクレオチドおよびオリゴリボヌクレオ
チドの製造において、より入手が容易な固相担体を利用
して、大量にオリゴヌクレオチド類を得るための出発原
料、あるいは鎖長を伸長する基本構成単位（ビルディン
グブロック）として利用でき、オリゴヌクレオチド製造
上の中間生成物の分離・精製を容易にすることができる
新規なヌクレオシド化合物を提供することである。 【０００４】 【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく鋭意研究を行った結果、ヌクレオシドの保
護基部分にポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が導入さ
れたヌクレオシド化合物をオリゴデオキシリボヌクレオ
チドの製造に利用した場合、上記課題が解決されること
を見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発
明は、下記式（１）で表されるヌクレオシド化合物であ
る。 【０００５】 【化３】 【０００６】（式中、Ｒ1およびＲ2は水素原子またはヌ
クレオチド化学において通常用いられる保護基を示し、
Ｒ3は水素原子、水酸基、アルコキシ基またはトリアル
キルシリルオキシ基を示し、Ａは２価基でアリレン基ま
たはヘテロ原子を含んでもよい直鎖もしくは分岐鎖を含
むアルキレン基を示し、Ｂは下記式（２）のいずれかの
基を示し、ｎは３以上の整数を示す） 【０００７】 【化４】 【０００８】 【発明の実施の形態】本発明におけるヌクレオシド化合
物は、前記式（１）で表されるように、核酸塩基のアミ
ノ基またはイミノ基の保護基に、ポリエチレングリコー
ル鎖を含むことを特徴とする化合物である。前記式
（１）におけるＢとしては、前記式（２）で表されるア
デニン、グアニン、シトシン、チミンおよびウラシルの
誘導体が挙げられる。また、Ｒ1およびＲ2におけるヌク
レオチド化学において通常用いられる保護基としては、
４、４’−ジメトキシトリチル基、トリメチルシリル基
およびｔ−ブチルジメチルシリル基などが挙げられ、Ａ
としてはフェニレン基、メチレン基およびジメチルエチ
レン基などが挙げられる。 【０００９】本発明におけるヌクレオシド化合物は、例
えば、下記式（３）で表されるヌクレオシドと下記式
（４）で表されるポリエチレングリコールのカルボン酸
誘導体から製造することができる。 【００１０】 【化５】 【００１１】（式中、ＢおよびＲ3は前記式（１）と同
じである） 【００１２】 【化６】 【００１３】（式中、Ｘはハロゲン原子、アシルオキシ
基またはアゾリル基を示し、Ａおよびｎは前記式（１）
と同じである） 【００１４】また、前記式（３）で表される水酸基をト
リメチルシリル基で保護したヌクレオシドは、下記の方
法により製造することができる。即ち、ピリジン共沸を
施したデオキシリボヌクレオシドを不活性ガス雰囲気
下、ピリジンに懸濁させ、３〜５当量のトリメチルクロ
ロシランを、０℃〜室温の条件で、１５〜３０分反応さ
せる。この反応混合物は精製すること無く、次反応に用
いれば良い［ジー・エス・チー（G. S. Ti）ら、ジャー
ナルオブアメリカンケミカルソサイヤティー（J.Amer.
Chem. Soc.），104, 1316（1982）. を参照］。また、
前記式（４）に示したポリエチレングリコールのカルボ
ン酸誘導体は、以下の方法で製造することができる。ま
ず、市販のポリエチレングリコールモノメチルエーテル
を水酸化ナトリウムの存在下、トシルクロリドと反応さ
せることにより、ポリエチレングリコールモノメチルエ
ーテルのトシル化物を得る。次いで、炭酸カリウム、カ
リウム−ｔｅｒｔ−ブトキシドおよび水素化ナトリウム
等の塩基の存在下、上記トシル化物とアルコールもしく
はフェノール性水酸基を有するエステル類、例えば、４
−ヒドロキシ安息香酸メチル、グルコール酸メチル等を
アセトニトリルまたはテトラヒドロフラン中で加熱還流
すると、トシル化物はエーテル化物に変換し、これをア
ルカリ加水分解することによって、末端にカルボキシル
基を有するポリエチレングリコールモノメチルエーテル
が得られる。上記で得られたポリエチレングリコール誘
導体を塩化チオニルと加熱処理して酸クロリドとする
か、３級アミンの存在下、塩化ピバロイルと反応させ混
酸無水物とするか、またはＮ，Ｎ’−カルボジイミダゾ
ールと反応させアゾール誘導体とする。 【００１５】上記で得られた前記式（４）で表されるポ
リエチレングリコールのカルボン酸誘導体を、不活性ガ
ス雰囲気下、水酸基を保護したヌクレオシドと０℃〜４
０℃の温度範囲で２時間から２４時間程度反応させ、さ
らに、水酸基の脱保護を行えば、核酸塩基のアミノ基あ
るいはイミノ基の保護基としてポリエチレングリコール
を含む本発明のヌクレオシド化合物が得られる。なお、
イミノ基の保護基として導入する場合は、この反応にお
いて３級アミン、例えば、ジイソプロピルエチルアミン
を共存させると、速やかに反応が進行する。 【００１６】上記で得られるヌクレオシド化合物の生成
は、薄層クロマトグラフィーなどで確認でき、1Ｈ−核
磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを測定することによっ
て、その構造を同定することができる。 【００１７】本発明におけるヌクレオシド化合物は新規
化合物であり、この化合物はアセトニトリル、テトラヒ
ドロフラン、ピリジンおよび有機塩素系溶媒などには可
溶であり、これらポリエチレングリコールに対する良溶
媒を用いれば、種々の反応はすべて完全な溶液として実
施することが可能である。前記ヌクレオシド化合物は、
核酸塩基部分に導入したポリエチレングリコール鎖の性
質に従い、その溶解性を変化させることができる。ポリ
エチレングリコールモノメチルエーテルの数平均分子量
が１，５００以上の場合、特にエーテル類に難溶とな
る。このためヌクレオシド化合物やその誘導体を含む溶
液に、例えば、ジエチルエーテルまたはジイソプロピル
エーテルを適量加えると、それらが沈澱し、容易に回収
することができる。また、ポリエチレングリコールモノ
メチルエーテルの数平均分子量が１，５００以上の場合
はエタノールまたは２−プロパノールで再結晶し、回収
することも有効であり、高純度のものが回収できる。な
お、本発明のヌクレオシド化合物はオリゴヌクレオチド
類の合成に対して、末端出発原料としても、ヌクレオチ
ド鎖を構築するビルディングブロックとしても利用する
ことができる。 【００１８】 【実施例】以下、実施例により本発明の化合物について
詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定され
るものではない。実施例１から６では数平均分子量３５
０の、実施例７には数平均分子量２，０００のポリエチ
レングリコールモノメチルエーテルを用いた場合の実施
例を記載した。 【００１９】（合成例１）トシル−モノメトキシポリエ
チレングリコール ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＳＯ2Ｃ6Ｈ4ＣＨ3 数平均分子量（Ｍｎ）３５０のモノメトキシポリエチテ
ングリコール（８１ｇ，０．２３ｍｏｌ）をテトラヒド
ロフラン（８０ｍｌ）に溶解し、５Ｎ水酸化ナトリウム
水溶液（８０ｍｌ）を加え０℃に冷却した。この溶液に
テトラヒドロフラン（８０ｍｌ）に溶解したｐ−トルエ
ンスルホニルクロリド（６０ｇ，０．３１ｍｏｌ）を５
℃以下を維持しながら２時間かけて滴下した。滴下終了
後さらに２時間攪拌し、反応液を氷水（２００ｍｌ）に
投入した。クロロホルム（３×２００ｍｌ）で抽出し、
有機層を水洗（３×２００ｍｌ）、飽和食塩水（３００
ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。こ
の溶液の溶媒を留去するとトシル−モノメトキシポリエ
チレングリコールが得られた（１１４ｇ，収率９８．３
％）。なお、得られた化合物の1Ｈ ＮＭＲ（４００Ｍ
Ｈｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝７．８０（ｄ，Ｊ＝８．０
Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈ
ｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），４．１６（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，
２Ｈ，ＳＯ3ＣＨ2），３．８０−３．５０（ｍ），３．
３８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），２．２５（ｓ，３Ｈ，Ａ
ｒＣＨ3）であった。 【００２０】（合成例２）安息香酸−モノメトキシポリ
エチレングリコール ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＣ6Ｈ4ＣＯＯＨ 合成例１で得たトシル−モノメトキシポリエチレングリ
コール（１１４ｇ，０．２２６ｍｏｌ）を無水アセトニ
トリル溶液（１０００ｍｌ）に溶解し、これに４−ヒド
ロキシ安息香酸メチル（７６ｇ，０．５０ｍｏｌ）と炭
酸カリウム（６９ｇ，０．５０ｍｏｌ）を加えた。この
懸濁液をアルゴン気流下、２時間加熱還流し、放冷後氷
水５００ｍｌに加えた。クロロホルム（４×５００ｍ
ｌ）で抽出し、有機層を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液
（３×３００ｍｌ）で洗浄、水洗（５００ｍｌ）し、無
水硫酸マグネシウムで乾燥した。この溶液の溶媒を留去
すると安息香酸メチル−モノメトキシポリエチレングリ
コールが得られた（１０９ｇ，収率９８．７％）。得ら
れた化合物の1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）
は、δ＝７．９８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ
Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ
Ｈ），４．１８（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＯＣ
Ｈ2），３．８８（ｓ，３Ｈ，ＣＯ2ＣＨ3），３．８７
（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2），３．８５−
３．５０（ｍ），３．３８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3）であ
った。上記で得られた安息香酸メチル−モノメトキシポ
リエチレングリコール（１０９ｇ，０．２２５ｍｏｌ）
を１Ｎ水酸化ナトリウム（１０００ｍｌ）に溶解させ、
室温下、１終夜攪拌した。反応液はジエチルエーテル
（３×３００ｍｌ）で洗浄し、水層に濃塩酸１６０ｍｌ
を加えて酸性とし、クロロホルム（３×３００ｍｌ）で
抽出した。有機層は水洗（５００ｍｌ）し、無水硫酸マ
グネシウムで乾燥した。この溶液の溶媒を留去すると安
息香酸−モノメトキシポリエチレングリコールが得られ
た（１０４ｇ，収率９８．３％）。得られた化合物の1
Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝８．
０２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．９４
（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），４．２０
（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＯＣＨ2），３．８
８（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2），３．８０
−３．５０（ｍ），３．３８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3）で
あった。 【００２１】（合成例３）安息香酸クロリド−モノメト
キシポリエチレングリコール ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＣ6Ｈ4ＣＯＣｌ 合成例２で得られた安息香酸−モノメトキシポリエチレ
ングリコール（１０ｇ，２１．３ｍｍｏｌ）を無水トル
エン（４０ｍｌ）に懸濁させ、ここに塩化チオニル（１
０ｍｌ）を加えた。アルゴン気流下、３０分加熱還流
し、過剰の塩化チオニルと溶媒を留去すると、安息香酸
クロリド−モノメトキシポリエチレングリコールが得ら
れた。得られた化合物の1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，
ＣＤＣｌ3）は、δ＝８．０７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，
２Ｈ，ＡｒＨ），６．９９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２
Ｈ，ＡｒＨ），４．２３（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，
ＡｒＯＣＨ2），３．８９（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２
Ｈ，ＯＣＨ2），３．７９−３．５１（ｍ），３．３８
（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3）であった。安息香酸クロリド−
モノメトキシポリエチレングリコールは精製せず、溶媒
留去後さらに３時間以上減圧乾燥させたものを次反応に
そのまま用いた。 【００２２】（実施例１）２’−デオキシシチジンの核
酸塩基へのモノメトキシポリエチレングリコール修飾体
の導入 ピリジン共沸（２×２０ｍｌ）を施した２’−デオキシ
シチジンモノ塩酸塩（１３．１８ｇ，５２ｍｍｏｌ）
を、アルゴン雰囲気下、無水ピリジン（１２０ｍｌ）に
懸濁させ０℃に冷却した。ここにトリメチルクロロシラ
ン（１９．０ｍｌ，１５０ｍｍｏｌ）を添加し１５分攪
拌した。合成例２に示した方法で合成した安息香酸−モ
ノメトキシポリエチレングリコール（１７．６０ｇ，３
４．９ｍｍｏｌ）から合成例３の方法で合成した安息香
酸クロリド−モノメトキシポリエチレングリコールをア
ルゴン雰囲気下、無水ピリジン（８０ｍｌ）に溶解し、
これを先の反応溶液に添加し、室温にて２時間攪拌し
た。０℃に冷却し、蒸留水（１０ｍｌ）添加して反応を
停止し、約１／２に濃縮した後、０℃にて３０％アンモ
ニア水（２０ｍｌ）を加え２０分攪拌した。溶媒を留去
し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍｌ）を加
え、クロロホルム（３×１００ｍｌ）で抽出した。有機
層は水洗（２×２００ｍｌ）し、無水硫酸ナトリウムで
乾燥した。この溶液の溶媒を留去し、シリカゲルカラム
クロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝１０
０／５）で精製するとデオキシシチジンのＰＥＧ修飾体
が得られた（１８．８５ｇ，収率８２．４％）。得られ
た化合物の1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）
は、δ＝９．３０（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．４１
（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ６），７．８３（ｄ，
Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．４８（ｂｒ，１
Ｈ，Ｈ５），６．９２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ，Ａ
ｒＨ），６．２９−６．１０（ｍ，１Ｈ，Ｈ１'），
５．０７（ｂｒｓ，１Ｈ），４．７４−４．４０（ｂ
ｒ，２Ｈ），４．２７−４．００（ｍ，３Ｈ），４．０
０−３．４２（ｍ），３．３６（ｓ，３Ｈ，ＯＣ
Ｈ3），２．７０−２．５０（ｍ，１Ｈ，Ｈ２"），２．
３５−２．１８（ｍ，１Ｈ，Ｈ２'）であった。 【００２３】（実施例２）２’−デオキシアデノシンの
核酸塩基へのモノメトキシポリエチレングリコール修飾
体の導入 ピリジン共沸（２×２０ｍｌ）を施した２’−デオキシ
アデノシン（５．０２５ｇ，２０ｍｍｏｌ）を、アルゴ
ン雰囲気下、無水ピリジン（５０ｍｌ）に懸濁させ０℃
に冷却した。ここにトリメチルクロロシラン（１２．７
ｍｌ，１００ｍｍｏｌ）を添加し、室温下、１５分攪拌
した。合成例２に示した方法で合成した安息香酸−モノ
メトキシポリエチレングリコール（１０．０ｇ，２１．
３ｍｍｏｌ）から、合成例３の方法で合成した安息香酸
クロリド−モノメトキシポリエチレングリコールをアル
ゴン雰囲気下、無水ピリジン（５０ｍｌ）に溶解し、こ
れを先の反応溶液に添加し、１終夜攪拌した。再び０℃
に冷却し、蒸留水（１０ｍｌ）添加して反応を停止し、
約１／２に濃縮した後、０℃にて３０％アンモニア水
（２０ｍｌ）を加え１５分攪拌した。溶媒を留去し、飽
和炭酸水素ナトリウム水溶液を（１００ｍｌ）加え、ク
ロロホルム（３×１００ｍｌ）で抽出した。有機層は飽
和食塩水（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム
で乾燥した。この溶液の溶媒を留去し、シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝１
００／３→１００／５）で精製するとデオキシアデノシ
ンのＰＥＧ修飾体が得られた（５．５０ｇ，収率３９．
１％）。得られた化合物の1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，
ＣＤＣｌ3）は、δ＝９．４２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），
８．６８（ｓ，１Ｈ，Ｈ８），８．１９（ｓ，１Ｈ，Ｈ
２），７．９７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ
Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ
Ｈ），６．４７−６．３６（ｍ，１Ｈ，Ｈ１'），５．
７９−５．６５（ｍ，１Ｈ），４．７４（ｂｒ，１
Ｈ），４．３０−４．０３（ｍ，４Ｈ），３．９７−
３．４３（ｍ），３．３６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），
２．９６−２．８３（ｍ，１Ｈ，Ｈ２"），２．４５−
２．３５（ｍ，１Ｈ，Ｈ２'）であった。 【００２４】（実施例３）２’−デオキシアデノシンの
ＰＥＧ修飾体のトリチル化 ピリジン共沸（２×２０ｍｌ）を施した、実施例２で得
られたデオキシアデノシンのＰＥＧ修飾体（４．６４３
ｇ，６．５４ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下、無水ピ
リジン（３０ｍｌ）に溶解し０℃に冷却した。ここに
４,４’−ジメトキシトリチルクロリド（３．０ｇ，
９．０ｍｍｏｌ）を加えて、室温下、７５分攪拌した。
反応をメタノール（５ｍｌ）を加えて停止し、溶媒を留
去した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）を
加え、クロロホルム（３×５０ｍｌ）で抽出し、有機層
は水洗（５０ｍｌ）し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し
た。この溶液の溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（クロロホルム／メタノール＝１００／
３）で精製すると５’−ジメトキシトリチル−デオキシ
アデノシンのＰＥＧ修飾体が得られた（４．９７ｇ，収
率７５．７％）。得られた化合物の1Ｈ ＮＭＲ（４０
０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝９．４５（ｂｒｓ，１
Ｈ，ＮＨ），８．６６（ｓ，１Ｈ，Ｈ８），８．１６
（ｓ，１Ｈ，Ｈ２），７．９７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，
２Ｈ，ＡｒＨ），７．４２−７．０８（ｍ，９Ｈ，Ａｒ
Ｈ），６．９４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ
Ｈ），６．７３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，４Ｈ，Ａｒ
Ｈ），６．４８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ
１'），４．９８−４．６２（ｍ，２Ｈ），４．３０−
４．０８（ｍ，３Ｈ），３．９５−３．４２（ｍ），
３．３４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），２．９０−２．７５
（ｍ，１Ｈ，Ｈ２"），２．６８−２．４６（ｍ，１
Ｈ，Ｈ２' ）であった。 【００２５】（実施例４）チミジンの核酸塩基へのモノ
メトキシポリエチレングリコール修飾体の導入 ピリジン共沸（２×２０ｍｌ）を施したチミジン（３．
０３ｇ，１２．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下、無
水ピリジン（４０ｍｌ）に懸濁させ、ジイソプロピルエ
チルアミン（１０．９ｍｌ，６２．５ｍｍｏｌ）添加し
た。ここに室温下、トリメチルクロロシラン（４．０ｍ
ｌ，３１．２５ｍｍｏｌ）を添加し３０分攪拌した。合
成例３に示した方法で安息香酸−モノメトキシポリエチ
レングリコール（５．０ｇ，１０．６ｍｍｏｌ）から調
製した安息香酸クロリド−モノメトキシポリエチレング
リコールをアルゴン雰囲気下、無水ピリジン（５ｍｌ）
に溶解し、これを先の反応溶液に添加し、１終夜攪拌し
た。再び０℃に冷却し、飽和リン酸二水素カリウム水溶
液（４０ｍｌ）を添加して反応を停止し、クロロホルム
（３×１００ｍｌ）で抽出した。有機層は水洗（１００
ｍｌ）し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液の
溶媒を留去し、無水ピリジン（４０ｍｌ）に溶解、０℃
に冷却し、フッ化水素−ピリジン（１０ｍｌ）をゆっく
りと滴下した。滴下後５分間攪拌し、飽和炭酸水素ナト
リウム水溶液（５０ｍｌ）で中和した。クロロホルム
（３×１００ｍｌ）で抽出し、有機層は飽和炭酸水素ナ
トリウム水溶液（３×１００ｍｌ）で洗浄、水洗（１０
０ｍｌ）し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液
の溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー
（クロロホルム／メタノール＝１００／３→１００／
５）で精製するとチミジンのＰＥＧ修飾体が得られた
（６．７３ｇ，９１．５％）。得られた化合物の1ＨＮ
ＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝７．８６
（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．７３
（ｓ，１Ｈ，Ｈ６），６．９８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，
２Ｈ，ＡｒＨ），６．２１（ｍ，１Ｈ，Ｈ１'），４．
３９（ｂｒ，１Ｈ），４．１９（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，
２Ｈ，ＡｒＯＣＨ2），３．９７−３．４１（ｍ），
３．３７（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），２．３８−２．１２
（ｍ，２Ｈ，Ｈ２'andＨ２"），１．９１（ｓ，３Ｈ，
ＣＨ3）であった。 【００２６】（実施例５）チミジンのＰＥＧ修飾体のト
リチル化 ピリジン共沸（２×２０ｍｌ）を施した、実施例４で得
られたチミジンのＰＥＧ修飾体（８．３０ｇ，１２．０
ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下、無水ピリジン（５０
ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却した。ここに４,４’−ジ
メトキシトリチルクロリド（５．０ｇ，１５．０ｍｍｏ
ｌ）を加えて、室温下、３時間攪拌した。反応をメタノ
ール（５ｍｌ）で停止し、溶媒を留去した。飽和炭酸水
素ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）を加え、クロロホル
ム（３×１００ｍｌ）で抽出し、有機層は飽和食塩水
（１００ｍｌ）で洗浄、水洗（１００ｍｌ）し、無水硫
酸ナトリウムで乾燥した。この溶液の溶媒を留去し、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メ
タノール＝１００／３）で精製すると５’−ジメトキシ
トリチル−チミジンのＰＥＧ修飾体が得られた（７．２
０ｇ，収率６０％）。得られた化合物の1Ｈ ＮＭＲ
（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝７．８５（ｄ，
Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．７３（ｓ，１
Ｈ，Ｈ６），７．４１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，Ａ
ｒＨ），７．３８−７．２０（ｍ，７Ｈ，ＡｒＨ），
６．９３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．
８４（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ，ＡｒＨ），６．３７
（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ１'），４．５５（ｂ
ｒ，１Ｈ），４．１５（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，Ａ
ｒＯＣＨ2），４．０３（ｂｒ，１Ｈ），３．８４
（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2），３．７８
（ｓ，６Ｈ，ＡｒＯＣＨ3），３．７２−３．４１
（ｍ），３．３５（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），２．４２−
２．２５（ｍ，２Ｈ，Ｈ２' andＨ２"），１．４３
（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）であった。 【００２７】（合成例４）フェニル酢酸−モノメトキシ
ポリエチレングリコール ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＣ6Ｈ4ＣＨ2ＣＯＯＨ トシル−モノメトキシポリエチレングリコール（６０
ｇ，０．１２ｍｏｌ）を無水アセトニトリル（４００ｍ
ｌ）に溶解し、４−ヒドロキシフェニル酢酸メチル（３
３ｇ，０．２０ｍｏｌ）と炭酸カリウム（２８ｇ，０．
２０ｍｏｌ）を加えた。この懸濁液をアルゴン気流下、
１８時間加熱還流し、放冷後氷水（３００ｍｌ）に加え
た。クロロホルム（３×２００ｍｌ）で抽出し、有機層
を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２×２００ｍｌ）で洗
浄、水洗（２００ｍｌ）の後、無水硫酸マグネシウムで
乾燥した。この溶液の溶媒を留去するとフェニル酢酸メ
チル−モノメトキシポリエチレングリコールが得られた
（５５．８ｇ，収率９４％）。フェニル酢酸メチル−モ
ノメトキシポリエチレングリコール（５５．８ｇ，０．
１１ｍｏｌ）を１Ｎ水酸化ナトリウム（５００ｍｌ）に
溶解し、室温下、１終夜攪拌した。反応液はジエチルエ
ーテル（２×２００ｍｌ）で洗浄し、水相に濃塩酸（８
０ｍｌ）を加えて酸性とし、クロロホルム（３×２００
ｍｌ）で抽出した。有機相は水洗（２００ｍｌ）し、無
水硫酸マグネシウムで乾燥した。この溶液の溶媒を留去
するとフェニル酢酸−モノメトキシポリエチレングリコ
ールが得られた（５０．８ｇ、収率９３％）。得られた
化合物の1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、
δ＝７．１８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），
６．８６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），４．
１０（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＯＣＨ2），
３．８３（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2），
３．７９−３．５８（ｍ），３．５５（ｓ，２Ｈ，Ａｒ
ＣＨ2），３．３７（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3）。13Ｃ ＮＭ
Ｒ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ＝１７６．０（Ｃ＝
Ｏ），１５７．９（ＡｒＣ），１３０．３（ＡｒＣ），
１２６．０（ＡｒＣ），１１４．７（ＡｒＣ），７１．
９，７０．８，７０．６，７０．５，７０．４，６９．
８，６７．４，５８．９（ＯＣＨ3），４０．１（Ａｒ
ＣＨ2）であった。 【００２８】（合成例５）グルコール酸−モノメトキシ
ポリエチレングリコール ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＣＨ2ＣＯＯＨ カリウム−ｔｅｒｔ−ブトキシド（１２．４３ｇ，１１
０ｍｍｏｌ）を含むテトラヒドロフラン溶液（１００ｍ
ｌ）に、０℃、アルゴン雰囲気下、グルコール酸メチル
（７．７ｍｌ，１００ｍｍｏｌ）加えた。３０分攪拌し
た後、無水テトラヒドロフラン（１００ｍｌ）に溶解し
たトシル−モノメトキシポリエチレングリコール（３
７．２ｇ，７３．８ｍｍｏｌ）を加え、１終夜加熱還流
した。反応液を氷水（２００ｍｌ）に投入し、クロロホ
ルム（３×２００ｍｌ）で抽出した。有機層は１Ｎ水酸
化ナトリウム水溶液（２×２００ｍｌ）で洗浄、水洗
（２００ｍｌ）の後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、
溶液の溶媒を留去するとグルコール酸メチル−モノメト
キシポリエチレングリコールが得られた（１７．３０
ｇ，収率５５．５％）。グルコール酸メチル−モノメト
キシポリエチレングリコール（１７．３０ｇ，４１ｍｍ
ｏｌ）を１Ｎ水酸化ナトリウム（２００ｍｌ）に溶解
し、室温下、１終夜攪拌した。反応液はジエチルエーテ
ル（２×２００ｍｌ）で洗浄し、水相に濃塩酸（２０ｍ
ｌ）を加えて酸性とし、クロロホルム（３×１５０ｍ
ｌ）で抽出した。有機相は水洗（１００ｍｌ）し、無水
硫酸マグネシウムで乾燥した。この溶液の溶媒を留去
し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホル
ム／メタノール＝１００／５）で精製するとグルコール
酸−モノメトキシポリエチレングリコールが１５．４２
ｇ（収率９２％）得られた。得られた化合物の1Ｈ Ｎ
ＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝４．１６
（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2ＣＯ），３．９０−３．４５
（ｍ），３．３８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3）であった。 【００２９】（合成例６）ヒドロキシピバリン酸−モノ
メトキシポリエチレングリコール ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＣＨ2Ｃ（ＣＨ3）ＣＯＯＨ カリウム−ｔｅｒｔ−ブトキシド（１４．６７ｇ，１２
０ｍｍｏｌ）を含むテトラヒドロフラン溶液（１００ｍ
ｌ）に、０℃、アルゴン雰囲気下、ヒドロキシピバリン
酸メチル（１２．８ｍｌ，１００ｍｍｏｌ）を加えた。
３０分攪拌した後、無水テトラヒドロフラン溶液１００
ｍｌに溶解したトシル−モノメトキシポリエチレングリ
コール（４０ｇ，８０ｍｍｏｌ）を加え、１５時間加熱
還流した。反応液を氷水（２００ｍｌ）に投入し、クロ
ロホルム（３×２００ｍｌ）で抽出した。有機相は１Ｎ
水酸化ナトリウム水溶液（２×２００ｍｌ）で洗浄、水
洗（２００ｍｌ）、飽和食塩水（２００ｍｌ）で洗浄の
後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。この溶液の溶媒
を留去するとヒドロキシピバリン酸メチル−モノメトキ
シポリエチレングリコールが得られた（３５．５ｇ，収
率９５．６％）。ヒドロキシピバリン酸メチル−モノメ
トキシポリエチレングリコール（４８ｇ，１０３ｍｍｏ
ｌ）を１Ｎ水酸化ナトリウム（５００ｍｌ）に溶解し、
室温下、１終夜攪拌した。反応液はジエチルエーテル
（３×１００ｍｌ）で洗浄し、水相に濃塩酸（８０ｍ
ｌ）を加えて酸性とし、クロロホルム（３×２００ｍ
ｌ）で抽出した。有機相は水洗（２００ｍｌ）し、無水
硫酸マグネシウムで乾燥した。この溶液の溶媒を留去
し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホル
ム／メタノール＝１００／５）で精製するとヒドロキシ
ピバリン酸−モノメトキシポリエチレングリコールが得
られた（３５．５ｇ，収率７６．６％）。得られた化合
物の1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝
３．９２−３．４５（ｍ），３．３８（ｓ，３Ｈ，ＯＣ
Ｈ3），１．２０（ｓ，６Ｈ，ＣＨ3）であった。 【００３０】（実施例６）２’−デオキシグアノシンの
核酸塩基へのモノメトキシポリエチレングリコール修飾
体の導入及びそのトリチル化 ピリジン共沸（２×２０ｍｌ）を施したデオキシグアノ
シン（２．８５ｇ，１０ｍｍｏｌ）を、０℃、アルゴン
雰囲気下、無水ピリジン（４０ｍｌ）に懸濁させ、トリ
メチルクロロシラン（６．３ｍｌ，５０ｍｍｏｌ）を添
加し室温で３０分攪拌した。別に良く乾燥したグルコー
ル酸−モノメトキシポリエチレングリコール（４．１６
ｇ，１０ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下、無水アセトニ
トリル（２０ｍｌ）に溶解し、トリエチルアミン（１．
０ｍｌ，１０ｍｍｏｌ）と塩化ピバロイル（１．２３ｍ
ｌ，１０ｍｍｏｌ）を室温で加え、３０分攪拌した。こ
の反応溶液を先のヌクレオシドの溶液に加え、更に３時
間攪拌した。反応液は０℃として蒸留水（５ｍｌ）を加
えて反応を停止し、溶媒を約１／２減圧留去した後、０
℃で３０％アンモニア水（５ｍｌ）を加え１５分攪拌し
た。溶媒を減圧留去し、飽和食塩水（５０ｍｌ）加え、
クロロホルム（４×５０ｍｌ）で抽出した。有機層は飽
和食塩水（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム
で乾燥した。この溶液の溶媒を留去し、ピリジン共沸
（３×２０ｍｌ）を施した後、無水ピリジン（５０ｍ
ｌ）に溶解し、０℃で４,４'−ジメトキシトリチルクロ
リド（３．３８ｇ，１０．０ｍｍｏｌ）を加えて、室温
下、７５分攪拌した。反応はメタノール（５ｍｌ）で停
止し、溶媒を留去した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液
（１００ｍｌ）を加え、クロロホルム（３×１００ｍ
ｌ）で抽出し、有機層は飽和食塩水（１００ｍｌ）で洗
浄、水洗（１００ｍｌ）し、無水硫酸ナトリウムで乾燥
した。この溶液の溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロ
マトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝１００／
３）で精製すると５'−ジメトキシトリチル−デオキシ
グアノシンのＰＥＧ修飾体が得られた（５．９４ｇ，収
率６１％）。得られた化合物の1Ｈ ＮＭＲ（４００Ｍ
Ｈｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝１１．９５（ｂｒｓ，１
Ｈ，ＮＨ），１０．０２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．
３２（ｓ，１Ｈ，Ｈ８），６．２９（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈ
ｚ，１Ｈ，Ｈ１'），５．０５−４．６０（ｂｒ，３
Ｈ），４．２６（ｓ，１Ｈ，ＣＨ2），４．１２−３．
４２（ｍ），３．３７（ｓ，１Ｈ，ＣＨ3），２．６９
−２．４２（ｍ，２Ｈ，Ｈ２' andＨ２"）であった。 【００３１】（合成例７）トシル−モノメトキシポリエ
チレングリコール ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＳＯ2Ｃ6Ｈ4ＣＨ3 数平均分子量（Ｍｎ）２，０００のモノメトキシポリエ
チテングリコール（２５０ｇ，０．１２５ｍｏｌ）をテ
トラヒドロフラン（３００ｍｌ）に溶解し、２．５Ｎ水
酸化ナトリウム水溶液（８０ｍｌ）を加え０℃に冷却し
た。この溶液にテトラヒドロフラン（８０ｍｌ）に溶解
したｐ−トルエンスルホニルクロリド（３０ｇ，０．２
０ｍｏｌ）を５℃以下を維持しながら１時間かけて滴下
した。滴下終了後さらに３時間攪拌し、反応液を氷水
（５００ｍｌ）に投入した。クロロホルム（３×４００
ｍｌ）で抽出し、有機層を水洗（２×４００ｍｌ）、飽
和食塩水（４００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウ
ムで乾燥した。この溶液の溶媒を留去するとトシル−モ
ノメトキシポリエチレングリコールが得られた（２６０
ｇ，収率９６．７％）。得られた化合物の1Ｈ ＮＭＲ
（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝７．６０（ｄ，
Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．３５（ｄ，Ｊ＝
８．０Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），４．１６（ｔ，Ｊ＝４．
８Ｈｚ，２Ｈ，ＳＯ3ＣＨ2），３．８２−３．４５
（ｍ），３．３８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），２．４５
（ｓ，３Ｈ，ＡｒＣＨ3）であった。 【００３２】（合成例８）安息香酸−モノメトキシポリ
エチレングリコール ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＣ6Ｈ4ＣＯＯＨ トシル−モノメトキシポリエチレングリコール（２６０
ｇ，０．１２１ｍｏｌ）を無水アセトニトリル（７５０
ｍｌ）に溶解し、これに４−ヒドロキシ安息香酸メチル
（３８ｇ，０．２５ｍｏｌ）と炭酸カリウム（３５ｇ，
０．２５ｍｏｌ）を加えた。この懸濁液をアルゴン気流
下、２時間加熱還流し、放冷後氷水（５００ｍｌ）に加
えた。クロロホルム（１×６００ｍｌ，２×２００ｍ
ｌ）で抽出し、有機層を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液
（５×４００ｍｌ）、飽和食塩水（４００ｍｌ）で洗浄
し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。この溶液の溶媒
を留去すると安息香酸メチル−モノメトキシポリエチレ
ングリコールが得られた（２５０ｇ，収率９６．８
％）。得られた化合物の1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，
ＣＤＣｌ3）は、δ＝７．９８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，
２Ｈ，ＡｒＨ），６．９３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２
Ｈ，ＡｒＨ），４．１８（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，
ＡｒＯＣＨ2），３．９１−３．８５（ｍ，５Ｈ，ＣＯ2
ＣＨ3andＯＣＨ2），３．８５−３．４３（ｍ），３．
３８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3）であった。13Ｃ ＮＭＲ
（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝１６６．８（Ｃ
＝Ｏ），１６２．５（ＡｒＣ），１３１．５（Ａｒ
Ｃ），１２２．７（ＡｒＣ），１１４．２（ＡｒＣ），
７１．９，７０．９，７０．６，７０．３，７０．２，
６９．９，６７．６，５９．０（ＯＣＨ3），５１．８
（ＣＯ2ＣＨ3）であった。安息香酸メチル−モノメトキ
シポリエチレングリコール（２５０ｇ，０．１１７ｍｏ
ｌ）を１Ｎ水酸化ナトリウム（５００ｍｌ）に溶解し、
室温下、１終夜攪拌した。反応液はジエチルエーテル
（３×３００ｍｌ）で洗浄し、水層に濃塩酸（８０ｍ
ｌ）を加えて酸性とし、ジエチルエーテル（５×３００
ｍｌ）で洗浄、水層よりクロロホルム（３×５００ｍ
ｌ）で抽出した。有機層を水洗（５００ｍｌ）し、無水
硫酸マグネシウムで乾燥した。この溶液の溶媒を留去
し、残査を２−プロパノールから再結晶（３回）すると
安息香酸−モノメトキシポリエチレングリコールが得ら
れた（２１０ｇ，収率８３．９％）。得られた化合物の
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝８．０
１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．９４
（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），４．２０
（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＯＣＨ2），３．８
８（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＯＣＨ2），３．
８５−３．４３（ｍ），３．３８（ｓ，３Ｈ，ＯＣ
Ｈ3）であった。安息香酸−モノメトキシポリエチレン
グリコール（２５ｇ，１１．８ｍｍｏｌ）を無水トルエ
ン（５０ｍｌ）に懸濁させ、ここに塩化チオニル（１０
ｍｌ）を加えた。アルゴン気流下、４５分加熱還流し、
過剰の塩化チオニルと溶媒を留去すると、安息香酸クロ
リド−モノメトキシポリエチレングリコールが得られ
た。安息香酸クロリド−モノメトキシポリエチレングリ
コールは精製せず、溶媒留去後さらに１終夜減圧乾燥さ
せたものを次反応にそのまま用いた。 【００３３】（実施例７）２’−デオキシシチジンの核
酸塩基へのモノメトキシポリエチレングリコール修飾体
の導入 ピリジン共沸（２×２０ｍｌ）を施した２’−デオキシ
シチジンモノ塩酸塩（３．９５５ｇ，１５ｍｍｏｌ）
を、アルゴン雰囲気下、無水ピリジン（４０ｍｌ）に懸
濁させ、０℃に冷却した。ここにトリメチルクロロシラ
ン（９．５ｍｌ，７５ｍｍｏｌ）を添加し２０分攪拌し
た。合成例８に示した方法で安息香酸−モノメトキシポ
リエチレングリコール（２５．０ｇ，１１．８ｍｍｏ
ｌ）から調製した安息香酸クロリド−モノメトキシポリ
エチレングリコールをアルゴン雰囲気下、無水ピリジン
（５０ｍｌ）に溶解し、これを先の反応溶液に添加し、
室温にて２．５時間攪拌した。０℃に冷却し、蒸留水
（１０ｍｌ）を添加して反応を停止し、溶媒を減圧留去
して約１／２に濃縮した後、再び０℃に冷却し、３０％
アンモニア水（１０ｍｌ）を加え１５分攪拌した。溶媒
を留去し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍ
ｌ）を加え、クロロホルム（３×１００ｍｌ）で抽出し
た。有機層は水洗（２×１００ｍｌ）し、無水硫酸ナト
リウムで乾燥した。この溶液の溶媒を留去し、シリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノー
ル＝１００／２→１００／５）で精製するとデオキシシ
チジンのＰＥＧ修飾体が得られた（５．４７０ｇ，収率
２０％）。得られた化合物の1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨ
ｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝９．００（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｎ
Ｈ），８．４６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ６），
７．８７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．
５２（ｂｒ，１Ｈ，Ｈ５），６．９８（ｄ，Ｊ＝８．８
Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．２２（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈ
ｚ，１Ｈ，Ｈ１'），４．５８−４．５０（ｂｒ，２
Ｈ），４．３６−４．１５（ｍ，３Ｈ），４．１０−
３．４１（ｍ），３．３８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），
２．６２−２．５２（ｍ，１Ｈ，Ｈ２"），２．３７−
２．２３（ｍ，１Ｈ，Ｈ２'）であった。 【００３４】 【発明の効果】本発明のヌクレオシド化合物は、オリゴ
デオキシリボヌクレオチドおよびオリゴリボヌクレオチ
ドの製造において、ヌクレオチド鎖を構築する際の出発
原料として、あるいは鎖長を伸長する基本構成単位とし
て利用できる。本発明のヌクレオシド化合物は、これら
はポリエチレングリコールの良溶媒に対して可溶である
ことから、均一系での反応の実施が可能であり、従来の
固相法と比較すると、反応規模の調節は格段に容易にで
き、また、ヌクレオチド鎖構築において化学量論的反応
の実施も可能であるので、大過剰の試薬類の使用は必要
がなくなり、経済的にも有用性が認められる。
化合物に関するものであり、本発明のヌクレオシド化合
物は、例えば、オリゴデオキシリボヌクレオチドの製造
中間原料として有機合成化学、生化学および医薬産業
上、有用な化合物である。 【０００２】 【従来の技術】これまでのオリゴデオキシリボヌクレオ
チドおよびオリゴリボヌクレオチドの合成に関しては、
固相合成法が採用されている。この方法は、各種有機溶
剤に不要な固相担体上で、逐次、ＤＮＡ鎖もしくはＲＮ
Ａ鎖を伸長させていくものである。上記固相合成法に
は、鎖長を伸長させる際、過剰に用いた試薬や溶媒等が
容易に除去できるという利点があり、そのため必要に応
じて過剰の試薬を用いることによって各素反応を１００
％近く進行させ、所望の配列を有するオリゴデオキシリ
ボヌクレオチドおよびオリゴリボヌクレオチドを製造す
ることができる。ＤＮＡ鎖あるいはＲＮＡ鎖を伸長させ
るためのヌクレオチド試薬としては、ケスターらが開発
したβ−シアノホスホロアミダイトを用い、固相担体と
しては多孔質ガラスを用いることが一般的である［エイ
チ・ケスター（H. Kster）ら、テトラヘドロン・レター
ズ（Tetrahedron Lett.），52, 5843（1983）. および
特許協力条約（PCT） WO97/42202を参照］。しかしなが
ら、上記の従来法には大きな制約がある。１つは固相上
での精密な反応制御が極めて難しいため、所望の反応規
模で設計する際には、その条件設定に多大な困難さを伴
うことである。また、使用する多孔質ガラスは極めて高
価である。さらに、過剰に試薬を用いることが基本であ
るため、大量にオリゴデオキシリボヌクレオチド類を得
たい場合、経済的に極めて不利になる。具体的には、多
孔質ガラスを利用して、１ミリモルを上回るような規模
に反応を設計し実施することは、技術的に容易なことで
はなく、多大なコストを要することになる。これらの問
題は、近年、オリゴデオキシリボヌクレオチド類を医薬
品用途で利用しようとした場合、その供給が事実上困難
なことを意味しており、深刻な問題とされている。 【０００３】 【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、オリ
ゴデオキシリボヌクレオチドおよびオリゴリボヌクレオ
チドの製造において、より入手が容易な固相担体を利用
して、大量にオリゴヌクレオチド類を得るための出発原
料、あるいは鎖長を伸長する基本構成単位（ビルディン
グブロック）として利用でき、オリゴヌクレオチド製造
上の中間生成物の分離・精製を容易にすることができる
新規なヌクレオシド化合物を提供することである。 【０００４】 【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決すべく鋭意研究を行った結果、ヌクレオシドの保
護基部分にポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が導入さ
れたヌクレオシド化合物をオリゴデオキシリボヌクレオ
チドの製造に利用した場合、上記課題が解決されること
を見出し、本発明を完成するに至った。すなわち、本発
明は、下記式（１）で表されるヌクレオシド化合物であ
る。 【０００５】 【化３】 【０００６】（式中、Ｒ1およびＲ2は水素原子またはヌ
クレオチド化学において通常用いられる保護基を示し、
Ｒ3は水素原子、水酸基、アルコキシ基またはトリアル
キルシリルオキシ基を示し、Ａは２価基でアリレン基ま
たはヘテロ原子を含んでもよい直鎖もしくは分岐鎖を含
むアルキレン基を示し、Ｂは下記式（２）のいずれかの
基を示し、ｎは３以上の整数を示す） 【０００７】 【化４】 【０００８】 【発明の実施の形態】本発明におけるヌクレオシド化合
物は、前記式（１）で表されるように、核酸塩基のアミ
ノ基またはイミノ基の保護基に、ポリエチレングリコー
ル鎖を含むことを特徴とする化合物である。前記式
（１）におけるＢとしては、前記式（２）で表されるア
デニン、グアニン、シトシン、チミンおよびウラシルの
誘導体が挙げられる。また、Ｒ1およびＲ2におけるヌク
レオチド化学において通常用いられる保護基としては、
４、４’−ジメトキシトリチル基、トリメチルシリル基
およびｔ−ブチルジメチルシリル基などが挙げられ、Ａ
としてはフェニレン基、メチレン基およびジメチルエチ
レン基などが挙げられる。 【０００９】本発明におけるヌクレオシド化合物は、例
えば、下記式（３）で表されるヌクレオシドと下記式
（４）で表されるポリエチレングリコールのカルボン酸
誘導体から製造することができる。 【００１０】 【化５】 【００１１】（式中、ＢおよびＲ3は前記式（１）と同
じである） 【００１２】 【化６】 【００１３】（式中、Ｘはハロゲン原子、アシルオキシ
基またはアゾリル基を示し、Ａおよびｎは前記式（１）
と同じである） 【００１４】また、前記式（３）で表される水酸基をト
リメチルシリル基で保護したヌクレオシドは、下記の方
法により製造することができる。即ち、ピリジン共沸を
施したデオキシリボヌクレオシドを不活性ガス雰囲気
下、ピリジンに懸濁させ、３〜５当量のトリメチルクロ
ロシランを、０℃〜室温の条件で、１５〜３０分反応さ
せる。この反応混合物は精製すること無く、次反応に用
いれば良い［ジー・エス・チー（G. S. Ti）ら、ジャー
ナルオブアメリカンケミカルソサイヤティー（J.Amer.
Chem. Soc.），104, 1316（1982）. を参照］。また、
前記式（４）に示したポリエチレングリコールのカルボ
ン酸誘導体は、以下の方法で製造することができる。ま
ず、市販のポリエチレングリコールモノメチルエーテル
を水酸化ナトリウムの存在下、トシルクロリドと反応さ
せることにより、ポリエチレングリコールモノメチルエ
ーテルのトシル化物を得る。次いで、炭酸カリウム、カ
リウム−ｔｅｒｔ−ブトキシドおよび水素化ナトリウム
等の塩基の存在下、上記トシル化物とアルコールもしく
はフェノール性水酸基を有するエステル類、例えば、４
−ヒドロキシ安息香酸メチル、グルコール酸メチル等を
アセトニトリルまたはテトラヒドロフラン中で加熱還流
すると、トシル化物はエーテル化物に変換し、これをア
ルカリ加水分解することによって、末端にカルボキシル
基を有するポリエチレングリコールモノメチルエーテル
が得られる。上記で得られたポリエチレングリコール誘
導体を塩化チオニルと加熱処理して酸クロリドとする
か、３級アミンの存在下、塩化ピバロイルと反応させ混
酸無水物とするか、またはＮ，Ｎ’−カルボジイミダゾ
ールと反応させアゾール誘導体とする。 【００１５】上記で得られた前記式（４）で表されるポ
リエチレングリコールのカルボン酸誘導体を、不活性ガ
ス雰囲気下、水酸基を保護したヌクレオシドと０℃〜４
０℃の温度範囲で２時間から２４時間程度反応させ、さ
らに、水酸基の脱保護を行えば、核酸塩基のアミノ基あ
るいはイミノ基の保護基としてポリエチレングリコール
を含む本発明のヌクレオシド化合物が得られる。なお、
イミノ基の保護基として導入する場合は、この反応にお
いて３級アミン、例えば、ジイソプロピルエチルアミン
を共存させると、速やかに反応が進行する。 【００１６】上記で得られるヌクレオシド化合物の生成
は、薄層クロマトグラフィーなどで確認でき、1Ｈ−核
磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを測定することによっ
て、その構造を同定することができる。 【００１７】本発明におけるヌクレオシド化合物は新規
化合物であり、この化合物はアセトニトリル、テトラヒ
ドロフラン、ピリジンおよび有機塩素系溶媒などには可
溶であり、これらポリエチレングリコールに対する良溶
媒を用いれば、種々の反応はすべて完全な溶液として実
施することが可能である。前記ヌクレオシド化合物は、
核酸塩基部分に導入したポリエチレングリコール鎖の性
質に従い、その溶解性を変化させることができる。ポリ
エチレングリコールモノメチルエーテルの数平均分子量
が１，５００以上の場合、特にエーテル類に難溶とな
る。このためヌクレオシド化合物やその誘導体を含む溶
液に、例えば、ジエチルエーテルまたはジイソプロピル
エーテルを適量加えると、それらが沈澱し、容易に回収
することができる。また、ポリエチレングリコールモノ
メチルエーテルの数平均分子量が１，５００以上の場合
はエタノールまたは２−プロパノールで再結晶し、回収
することも有効であり、高純度のものが回収できる。な
お、本発明のヌクレオシド化合物はオリゴヌクレオチド
類の合成に対して、末端出発原料としても、ヌクレオチ
ド鎖を構築するビルディングブロックとしても利用する
ことができる。 【００１８】 【実施例】以下、実施例により本発明の化合物について
詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定され
るものではない。実施例１から６では数平均分子量３５
０の、実施例７には数平均分子量２，０００のポリエチ
レングリコールモノメチルエーテルを用いた場合の実施
例を記載した。 【００１９】（合成例１）トシル−モノメトキシポリエ
チレングリコール ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＳＯ2Ｃ6Ｈ4ＣＨ3 数平均分子量（Ｍｎ）３５０のモノメトキシポリエチテ
ングリコール（８１ｇ，０．２３ｍｏｌ）をテトラヒド
ロフラン（８０ｍｌ）に溶解し、５Ｎ水酸化ナトリウム
水溶液（８０ｍｌ）を加え０℃に冷却した。この溶液に
テトラヒドロフラン（８０ｍｌ）に溶解したｐ−トルエ
ンスルホニルクロリド（６０ｇ，０．３１ｍｏｌ）を５
℃以下を維持しながら２時間かけて滴下した。滴下終了
後さらに２時間攪拌し、反応液を氷水（２００ｍｌ）に
投入した。クロロホルム（３×２００ｍｌ）で抽出し、
有機層を水洗（３×２００ｍｌ）、飽和食塩水（３００
ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。こ
の溶液の溶媒を留去するとトシル−モノメトキシポリエ
チレングリコールが得られた（１１４ｇ，収率９８．３
％）。なお、得られた化合物の1Ｈ ＮＭＲ（４００Ｍ
Ｈｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝７．８０（ｄ，Ｊ＝８．０
Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈ
ｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），４．１６（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，
２Ｈ，ＳＯ3ＣＨ2），３．８０−３．５０（ｍ），３．
３８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），２．２５（ｓ，３Ｈ，Ａ
ｒＣＨ3）であった。 【００２０】（合成例２）安息香酸−モノメトキシポリ
エチレングリコール ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＣ6Ｈ4ＣＯＯＨ 合成例１で得たトシル−モノメトキシポリエチレングリ
コール（１１４ｇ，０．２２６ｍｏｌ）を無水アセトニ
トリル溶液（１０００ｍｌ）に溶解し、これに４−ヒド
ロキシ安息香酸メチル（７６ｇ，０．５０ｍｏｌ）と炭
酸カリウム（６９ｇ，０．５０ｍｏｌ）を加えた。この
懸濁液をアルゴン気流下、２時間加熱還流し、放冷後氷
水５００ｍｌに加えた。クロロホルム（４×５００ｍ
ｌ）で抽出し、有機層を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液
（３×３００ｍｌ）で洗浄、水洗（５００ｍｌ）し、無
水硫酸マグネシウムで乾燥した。この溶液の溶媒を留去
すると安息香酸メチル−モノメトキシポリエチレングリ
コールが得られた（１０９ｇ，収率９８．７％）。得ら
れた化合物の1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）
は、δ＝７．９８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ
Ｈ），６．９３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ
Ｈ），４．１８（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＯＣ
Ｈ2），３．８８（ｓ，３Ｈ，ＣＯ2ＣＨ3），３．８７
（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2），３．８５−
３．５０（ｍ），３．３８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3）であ
った。上記で得られた安息香酸メチル−モノメトキシポ
リエチレングリコール（１０９ｇ，０．２２５ｍｏｌ）
を１Ｎ水酸化ナトリウム（１０００ｍｌ）に溶解させ、
室温下、１終夜攪拌した。反応液はジエチルエーテル
（３×３００ｍｌ）で洗浄し、水層に濃塩酸１６０ｍｌ
を加えて酸性とし、クロロホルム（３×３００ｍｌ）で
抽出した。有機層は水洗（５００ｍｌ）し、無水硫酸マ
グネシウムで乾燥した。この溶液の溶媒を留去すると安
息香酸−モノメトキシポリエチレングリコールが得られ
た（１０４ｇ，収率９８．３％）。得られた化合物の1
Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝８．
０２（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．９４
（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），４．２０
（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＯＣＨ2），３．８
８（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2），３．８０
−３．５０（ｍ），３．３８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3）で
あった。 【００２１】（合成例３）安息香酸クロリド−モノメト
キシポリエチレングリコール ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＣ6Ｈ4ＣＯＣｌ 合成例２で得られた安息香酸−モノメトキシポリエチレ
ングリコール（１０ｇ，２１．３ｍｍｏｌ）を無水トル
エン（４０ｍｌ）に懸濁させ、ここに塩化チオニル（１
０ｍｌ）を加えた。アルゴン気流下、３０分加熱還流
し、過剰の塩化チオニルと溶媒を留去すると、安息香酸
クロリド−モノメトキシポリエチレングリコールが得ら
れた。得られた化合物の1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，
ＣＤＣｌ3）は、δ＝８．０７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，
２Ｈ，ＡｒＨ），６．９９（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２
Ｈ，ＡｒＨ），４．２３（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，
ＡｒＯＣＨ2），３．８９（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２
Ｈ，ＯＣＨ2），３．７９−３．５１（ｍ），３．３８
（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3）であった。安息香酸クロリド−
モノメトキシポリエチレングリコールは精製せず、溶媒
留去後さらに３時間以上減圧乾燥させたものを次反応に
そのまま用いた。 【００２２】（実施例１）２’−デオキシシチジンの核
酸塩基へのモノメトキシポリエチレングリコール修飾体
の導入 ピリジン共沸（２×２０ｍｌ）を施した２’−デオキシ
シチジンモノ塩酸塩（１３．１８ｇ，５２ｍｍｏｌ）
を、アルゴン雰囲気下、無水ピリジン（１２０ｍｌ）に
懸濁させ０℃に冷却した。ここにトリメチルクロロシラ
ン（１９．０ｍｌ，１５０ｍｍｏｌ）を添加し１５分攪
拌した。合成例２に示した方法で合成した安息香酸−モ
ノメトキシポリエチレングリコール（１７．６０ｇ，３
４．９ｍｍｏｌ）から合成例３の方法で合成した安息香
酸クロリド−モノメトキシポリエチレングリコールをア
ルゴン雰囲気下、無水ピリジン（８０ｍｌ）に溶解し、
これを先の反応溶液に添加し、室温にて２時間攪拌し
た。０℃に冷却し、蒸留水（１０ｍｌ）添加して反応を
停止し、約１／２に濃縮した後、０℃にて３０％アンモ
ニア水（２０ｍｌ）を加え２０分攪拌した。溶媒を留去
し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍｌ）を加
え、クロロホルム（３×１００ｍｌ）で抽出した。有機
層は水洗（２×２００ｍｌ）し、無水硫酸ナトリウムで
乾燥した。この溶液の溶媒を留去し、シリカゲルカラム
クロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝１０
０／５）で精製するとデオキシシチジンのＰＥＧ修飾体
が得られた（１８．８５ｇ，収率８２．４％）。得られ
た化合物の1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）
は、δ＝９．３０（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．４１
（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ６），７．８３（ｄ，
Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．４８（ｂｒ，１
Ｈ，Ｈ５），６．９２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ，Ａ
ｒＨ），６．２９−６．１０（ｍ，１Ｈ，Ｈ１'），
５．０７（ｂｒｓ，１Ｈ），４．７４−４．４０（ｂ
ｒ，２Ｈ），４．２７−４．００（ｍ，３Ｈ），４．０
０−３．４２（ｍ），３．３６（ｓ，３Ｈ，ＯＣ
Ｈ3），２．７０−２．５０（ｍ，１Ｈ，Ｈ２"），２．
３５−２．１８（ｍ，１Ｈ，Ｈ２'）であった。 【００２３】（実施例２）２’−デオキシアデノシンの
核酸塩基へのモノメトキシポリエチレングリコール修飾
体の導入 ピリジン共沸（２×２０ｍｌ）を施した２’−デオキシ
アデノシン（５．０２５ｇ，２０ｍｍｏｌ）を、アルゴ
ン雰囲気下、無水ピリジン（５０ｍｌ）に懸濁させ０℃
に冷却した。ここにトリメチルクロロシラン（１２．７
ｍｌ，１００ｍｍｏｌ）を添加し、室温下、１５分攪拌
した。合成例２に示した方法で合成した安息香酸−モノ
メトキシポリエチレングリコール（１０．０ｇ，２１．
３ｍｍｏｌ）から、合成例３の方法で合成した安息香酸
クロリド−モノメトキシポリエチレングリコールをアル
ゴン雰囲気下、無水ピリジン（５０ｍｌ）に溶解し、こ
れを先の反応溶液に添加し、１終夜攪拌した。再び０℃
に冷却し、蒸留水（１０ｍｌ）添加して反応を停止し、
約１／２に濃縮した後、０℃にて３０％アンモニア水
（２０ｍｌ）を加え１５分攪拌した。溶媒を留去し、飽
和炭酸水素ナトリウム水溶液を（１００ｍｌ）加え、ク
ロロホルム（３×１００ｍｌ）で抽出した。有機層は飽
和食塩水（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム
で乾燥した。この溶液の溶媒を留去し、シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝１
００／３→１００／５）で精製するとデオキシアデノシ
ンのＰＥＧ修飾体が得られた（５．５０ｇ，収率３９．
１％）。得られた化合物の1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，
ＣＤＣｌ3）は、δ＝９．４２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），
８．６８（ｓ，１Ｈ，Ｈ８），８．１９（ｓ，１Ｈ，Ｈ
２），７．９７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ
Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ
Ｈ），６．４７−６．３６（ｍ，１Ｈ，Ｈ１'），５．
７９−５．６５（ｍ，１Ｈ），４．７４（ｂｒ，１
Ｈ），４．３０−４．０３（ｍ，４Ｈ），３．９７−
３．４３（ｍ），３．３６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），
２．９６−２．８３（ｍ，１Ｈ，Ｈ２"），２．４５−
２．３５（ｍ，１Ｈ，Ｈ２'）であった。 【００２４】（実施例３）２’−デオキシアデノシンの
ＰＥＧ修飾体のトリチル化 ピリジン共沸（２×２０ｍｌ）を施した、実施例２で得
られたデオキシアデノシンのＰＥＧ修飾体（４．６４３
ｇ，６．５４ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下、無水ピ
リジン（３０ｍｌ）に溶解し０℃に冷却した。ここに
４,４’−ジメトキシトリチルクロリド（３．０ｇ，
９．０ｍｍｏｌ）を加えて、室温下、７５分攪拌した。
反応をメタノール（５ｍｌ）を加えて停止し、溶媒を留
去した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍｌ）を
加え、クロロホルム（３×５０ｍｌ）で抽出し、有機層
は水洗（５０ｍｌ）し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し
た。この溶液の溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（クロロホルム／メタノール＝１００／
３）で精製すると５’−ジメトキシトリチル−デオキシ
アデノシンのＰＥＧ修飾体が得られた（４．９７ｇ，収
率７５．７％）。得られた化合物の1Ｈ ＮＭＲ（４０
０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝９．４５（ｂｒｓ，１
Ｈ，ＮＨ），８．６６（ｓ，１Ｈ，Ｈ８），８．１６
（ｓ，１Ｈ，Ｈ２），７．９７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，
２Ｈ，ＡｒＨ），７．４２−７．０８（ｍ，９Ｈ，Ａｒ
Ｈ），６．９４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ，Ａｒ
Ｈ），６．７３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，４Ｈ，Ａｒ
Ｈ），６．４８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ
１'），４．９８−４．６２（ｍ，２Ｈ），４．３０−
４．０８（ｍ，３Ｈ），３．９５−３．４２（ｍ），
３．３４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），２．９０−２．７５
（ｍ，１Ｈ，Ｈ２"），２．６８−２．４６（ｍ，１
Ｈ，Ｈ２' ）であった。 【００２５】（実施例４）チミジンの核酸塩基へのモノ
メトキシポリエチレングリコール修飾体の導入 ピリジン共沸（２×２０ｍｌ）を施したチミジン（３．
０３ｇ，１２．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下、無
水ピリジン（４０ｍｌ）に懸濁させ、ジイソプロピルエ
チルアミン（１０．９ｍｌ，６２．５ｍｍｏｌ）添加し
た。ここに室温下、トリメチルクロロシラン（４．０ｍ
ｌ，３１．２５ｍｍｏｌ）を添加し３０分攪拌した。合
成例３に示した方法で安息香酸−モノメトキシポリエチ
レングリコール（５．０ｇ，１０．６ｍｍｏｌ）から調
製した安息香酸クロリド−モノメトキシポリエチレング
リコールをアルゴン雰囲気下、無水ピリジン（５ｍｌ）
に溶解し、これを先の反応溶液に添加し、１終夜攪拌し
た。再び０℃に冷却し、飽和リン酸二水素カリウム水溶
液（４０ｍｌ）を添加して反応を停止し、クロロホルム
（３×１００ｍｌ）で抽出した。有機層は水洗（１００
ｍｌ）し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液の
溶媒を留去し、無水ピリジン（４０ｍｌ）に溶解、０℃
に冷却し、フッ化水素−ピリジン（１０ｍｌ）をゆっく
りと滴下した。滴下後５分間攪拌し、飽和炭酸水素ナト
リウム水溶液（５０ｍｌ）で中和した。クロロホルム
（３×１００ｍｌ）で抽出し、有機層は飽和炭酸水素ナ
トリウム水溶液（３×１００ｍｌ）で洗浄、水洗（１０
０ｍｌ）し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。この溶液
の溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー
（クロロホルム／メタノール＝１００／３→１００／
５）で精製するとチミジンのＰＥＧ修飾体が得られた
（６．７３ｇ，９１．５％）。得られた化合物の1ＨＮ
ＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝７．８６
（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．７３
（ｓ，１Ｈ，Ｈ６），６．９８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，
２Ｈ，ＡｒＨ），６．２１（ｍ，１Ｈ，Ｈ１'），４．
３９（ｂｒ，１Ｈ），４．１９（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，
２Ｈ，ＡｒＯＣＨ2），３．９７−３．４１（ｍ），
３．３７（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），２．３８−２．１２
（ｍ，２Ｈ，Ｈ２'andＨ２"），１．９１（ｓ，３Ｈ，
ＣＨ3）であった。 【００２６】（実施例５）チミジンのＰＥＧ修飾体のト
リチル化 ピリジン共沸（２×２０ｍｌ）を施した、実施例４で得
られたチミジンのＰＥＧ修飾体（８．３０ｇ，１２．０
ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下、無水ピリジン（５０
ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却した。ここに４,４’−ジ
メトキシトリチルクロリド（５．０ｇ，１５．０ｍｍｏ
ｌ）を加えて、室温下、３時間攪拌した。反応をメタノ
ール（５ｍｌ）で停止し、溶媒を留去した。飽和炭酸水
素ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）を加え、クロロホル
ム（３×１００ｍｌ）で抽出し、有機層は飽和食塩水
（１００ｍｌ）で洗浄、水洗（１００ｍｌ）し、無水硫
酸ナトリウムで乾燥した。この溶液の溶媒を留去し、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メ
タノール＝１００／３）で精製すると５’−ジメトキシ
トリチル−チミジンのＰＥＧ修飾体が得られた（７．２
０ｇ，収率６０％）。得られた化合物の1Ｈ ＮＭＲ
（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝７．８５（ｄ，
Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．７３（ｓ，１
Ｈ，Ｈ６），７．４１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，Ａ
ｒＨ），７．３８−７．２０（ｍ，７Ｈ，ＡｒＨ），
６．９３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．
８４（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ，ＡｒＨ），６．３７
（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ１'），４．５５（ｂ
ｒ，１Ｈ），４．１５（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，Ａ
ｒＯＣＨ2），４．０３（ｂｒ，１Ｈ），３．８４
（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2），３．７８
（ｓ，６Ｈ，ＡｒＯＣＨ3），３．７２−３．４１
（ｍ），３．３５（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），２．４２−
２．２５（ｍ，２Ｈ，Ｈ２' andＨ２"），１．４３
（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）であった。 【００２７】（合成例４）フェニル酢酸−モノメトキシ
ポリエチレングリコール ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＣ6Ｈ4ＣＨ2ＣＯＯＨ トシル−モノメトキシポリエチレングリコール（６０
ｇ，０．１２ｍｏｌ）を無水アセトニトリル（４００ｍ
ｌ）に溶解し、４−ヒドロキシフェニル酢酸メチル（３
３ｇ，０．２０ｍｏｌ）と炭酸カリウム（２８ｇ，０．
２０ｍｏｌ）を加えた。この懸濁液をアルゴン気流下、
１８時間加熱還流し、放冷後氷水（３００ｍｌ）に加え
た。クロロホルム（３×２００ｍｌ）で抽出し、有機層
を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２×２００ｍｌ）で洗
浄、水洗（２００ｍｌ）の後、無水硫酸マグネシウムで
乾燥した。この溶液の溶媒を留去するとフェニル酢酸メ
チル−モノメトキシポリエチレングリコールが得られた
（５５．８ｇ，収率９４％）。フェニル酢酸メチル−モ
ノメトキシポリエチレングリコール（５５．８ｇ，０．
１１ｍｏｌ）を１Ｎ水酸化ナトリウム（５００ｍｌ）に
溶解し、室温下、１終夜攪拌した。反応液はジエチルエ
ーテル（２×２００ｍｌ）で洗浄し、水相に濃塩酸（８
０ｍｌ）を加えて酸性とし、クロロホルム（３×２００
ｍｌ）で抽出した。有機相は水洗（２００ｍｌ）し、無
水硫酸マグネシウムで乾燥した。この溶液の溶媒を留去
するとフェニル酢酸−モノメトキシポリエチレングリコ
ールが得られた（５０．８ｇ、収率９３％）。得られた
化合物の1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、
δ＝７．１８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），
６．８６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），４．
１０（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＯＣＨ2），
３．８３（ｔ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2），
３．７９−３．５８（ｍ），３．５５（ｓ，２Ｈ，Ａｒ
ＣＨ2），３．３７（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3）。13Ｃ ＮＭ
Ｒ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）δ＝１７６．０（Ｃ＝
Ｏ），１５７．９（ＡｒＣ），１３０．３（ＡｒＣ），
１２６．０（ＡｒＣ），１１４．７（ＡｒＣ），７１．
９，７０．８，７０．６，７０．５，７０．４，６９．
８，６７．４，５８．９（ＯＣＨ3），４０．１（Ａｒ
ＣＨ2）であった。 【００２８】（合成例５）グルコール酸−モノメトキシ
ポリエチレングリコール ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＣＨ2ＣＯＯＨ カリウム−ｔｅｒｔ−ブトキシド（１２．４３ｇ，１１
０ｍｍｏｌ）を含むテトラヒドロフラン溶液（１００ｍ
ｌ）に、０℃、アルゴン雰囲気下、グルコール酸メチル
（７．７ｍｌ，１００ｍｍｏｌ）加えた。３０分攪拌し
た後、無水テトラヒドロフラン（１００ｍｌ）に溶解し
たトシル−モノメトキシポリエチレングリコール（３
７．２ｇ，７３．８ｍｍｏｌ）を加え、１終夜加熱還流
した。反応液を氷水（２００ｍｌ）に投入し、クロロホ
ルム（３×２００ｍｌ）で抽出した。有機層は１Ｎ水酸
化ナトリウム水溶液（２×２００ｍｌ）で洗浄、水洗
（２００ｍｌ）の後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、
溶液の溶媒を留去するとグルコール酸メチル−モノメト
キシポリエチレングリコールが得られた（１７．３０
ｇ，収率５５．５％）。グルコール酸メチル−モノメト
キシポリエチレングリコール（１７．３０ｇ，４１ｍｍ
ｏｌ）を１Ｎ水酸化ナトリウム（２００ｍｌ）に溶解
し、室温下、１終夜攪拌した。反応液はジエチルエーテ
ル（２×２００ｍｌ）で洗浄し、水相に濃塩酸（２０ｍ
ｌ）を加えて酸性とし、クロロホルム（３×１５０ｍ
ｌ）で抽出した。有機相は水洗（１００ｍｌ）し、無水
硫酸マグネシウムで乾燥した。この溶液の溶媒を留去
し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホル
ム／メタノール＝１００／５）で精製するとグルコール
酸−モノメトキシポリエチレングリコールが１５．４２
ｇ（収率９２％）得られた。得られた化合物の1Ｈ Ｎ
ＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝４．１６
（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2ＣＯ），３．９０−３．４５
（ｍ），３．３８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3）であった。 【００２９】（合成例６）ヒドロキシピバリン酸−モノ
メトキシポリエチレングリコール ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＣＨ2Ｃ（ＣＨ3）ＣＯＯＨ カリウム−ｔｅｒｔ−ブトキシド（１４．６７ｇ，１２
０ｍｍｏｌ）を含むテトラヒドロフラン溶液（１００ｍ
ｌ）に、０℃、アルゴン雰囲気下、ヒドロキシピバリン
酸メチル（１２．８ｍｌ，１００ｍｍｏｌ）を加えた。
３０分攪拌した後、無水テトラヒドロフラン溶液１００
ｍｌに溶解したトシル−モノメトキシポリエチレングリ
コール（４０ｇ，８０ｍｍｏｌ）を加え、１５時間加熱
還流した。反応液を氷水（２００ｍｌ）に投入し、クロ
ロホルム（３×２００ｍｌ）で抽出した。有機相は１Ｎ
水酸化ナトリウム水溶液（２×２００ｍｌ）で洗浄、水
洗（２００ｍｌ）、飽和食塩水（２００ｍｌ）で洗浄の
後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。この溶液の溶媒
を留去するとヒドロキシピバリン酸メチル−モノメトキ
シポリエチレングリコールが得られた（３５．５ｇ，収
率９５．６％）。ヒドロキシピバリン酸メチル−モノメ
トキシポリエチレングリコール（４８ｇ，１０３ｍｍｏ
ｌ）を１Ｎ水酸化ナトリウム（５００ｍｌ）に溶解し、
室温下、１終夜攪拌した。反応液はジエチルエーテル
（３×１００ｍｌ）で洗浄し、水相に濃塩酸（８０ｍ
ｌ）を加えて酸性とし、クロロホルム（３×２００ｍ
ｌ）で抽出した。有機相は水洗（２００ｍｌ）し、無水
硫酸マグネシウムで乾燥した。この溶液の溶媒を留去
し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホル
ム／メタノール＝１００／５）で精製するとヒドロキシ
ピバリン酸−モノメトキシポリエチレングリコールが得
られた（３５．５ｇ，収率７６．６％）。得られた化合
物の1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝
３．９２−３．４５（ｍ），３．３８（ｓ，３Ｈ，ＯＣ
Ｈ3），１．２０（ｓ，６Ｈ，ＣＨ3）であった。 【００３０】（実施例６）２’−デオキシグアノシンの
核酸塩基へのモノメトキシポリエチレングリコール修飾
体の導入及びそのトリチル化 ピリジン共沸（２×２０ｍｌ）を施したデオキシグアノ
シン（２．８５ｇ，１０ｍｍｏｌ）を、０℃、アルゴン
雰囲気下、無水ピリジン（４０ｍｌ）に懸濁させ、トリ
メチルクロロシラン（６．３ｍｌ，５０ｍｍｏｌ）を添
加し室温で３０分攪拌した。別に良く乾燥したグルコー
ル酸−モノメトキシポリエチレングリコール（４．１６
ｇ，１０ｍｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下、無水アセトニ
トリル（２０ｍｌ）に溶解し、トリエチルアミン（１．
０ｍｌ，１０ｍｍｏｌ）と塩化ピバロイル（１．２３ｍ
ｌ，１０ｍｍｏｌ）を室温で加え、３０分攪拌した。こ
の反応溶液を先のヌクレオシドの溶液に加え、更に３時
間攪拌した。反応液は０℃として蒸留水（５ｍｌ）を加
えて反応を停止し、溶媒を約１／２減圧留去した後、０
℃で３０％アンモニア水（５ｍｌ）を加え１５分攪拌し
た。溶媒を減圧留去し、飽和食塩水（５０ｍｌ）加え、
クロロホルム（４×５０ｍｌ）で抽出した。有機層は飽
和食塩水（１００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウム
で乾燥した。この溶液の溶媒を留去し、ピリジン共沸
（３×２０ｍｌ）を施した後、無水ピリジン（５０ｍ
ｌ）に溶解し、０℃で４,４'−ジメトキシトリチルクロ
リド（３．３８ｇ，１０．０ｍｍｏｌ）を加えて、室温
下、７５分攪拌した。反応はメタノール（５ｍｌ）で停
止し、溶媒を留去した。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液
（１００ｍｌ）を加え、クロロホルム（３×１００ｍ
ｌ）で抽出し、有機層は飽和食塩水（１００ｍｌ）で洗
浄、水洗（１００ｍｌ）し、無水硫酸ナトリウムで乾燥
した。この溶液の溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロ
マトグラフィー（クロロホルム／メタノール＝１００／
３）で精製すると５'−ジメトキシトリチル−デオキシ
グアノシンのＰＥＧ修飾体が得られた（５．９４ｇ，収
率６１％）。得られた化合物の1Ｈ ＮＭＲ（４００Ｍ
Ｈｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝１１．９５（ｂｒｓ，１
Ｈ，ＮＨ），１０．０２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．
３２（ｓ，１Ｈ，Ｈ８），６．２９（ｔ，Ｊ＝４．４Ｈ
ｚ，１Ｈ，Ｈ１'），５．０５−４．６０（ｂｒ，３
Ｈ），４．２６（ｓ，１Ｈ，ＣＨ2），４．１２−３．
４２（ｍ），３．３７（ｓ，１Ｈ，ＣＨ3），２．６９
−２．４２（ｍ，２Ｈ，Ｈ２' andＨ２"）であった。 【００３１】（合成例７）トシル−モノメトキシポリエ
チレングリコール ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＳＯ2Ｃ6Ｈ4ＣＨ3 数平均分子量（Ｍｎ）２，０００のモノメトキシポリエ
チテングリコール（２５０ｇ，０．１２５ｍｏｌ）をテ
トラヒドロフラン（３００ｍｌ）に溶解し、２．５Ｎ水
酸化ナトリウム水溶液（８０ｍｌ）を加え０℃に冷却し
た。この溶液にテトラヒドロフラン（８０ｍｌ）に溶解
したｐ−トルエンスルホニルクロリド（３０ｇ，０．２
０ｍｏｌ）を５℃以下を維持しながら１時間かけて滴下
した。滴下終了後さらに３時間攪拌し、反応液を氷水
（５００ｍｌ）に投入した。クロロホルム（３×４００
ｍｌ）で抽出し、有機層を水洗（２×４００ｍｌ）、飽
和食塩水（４００ｍｌ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウ
ムで乾燥した。この溶液の溶媒を留去するとトシル−モ
ノメトキシポリエチレングリコールが得られた（２６０
ｇ，収率９６．７％）。得られた化合物の1Ｈ ＮＭＲ
（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝７．６０（ｄ，
Ｊ＝８．０Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．３５（ｄ，Ｊ＝
８．０Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），４．１６（ｔ，Ｊ＝４．
８Ｈｚ，２Ｈ，ＳＯ3ＣＨ2），３．８２−３．４５
（ｍ），３．３８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），２．４５
（ｓ，３Ｈ，ＡｒＣＨ3）であった。 【００３２】（合成例８）安息香酸−モノメトキシポリ
エチレングリコール ＣＨ3Ｏ（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）nＣ6Ｈ4ＣＯＯＨ トシル−モノメトキシポリエチレングリコール（２６０
ｇ，０．１２１ｍｏｌ）を無水アセトニトリル（７５０
ｍｌ）に溶解し、これに４−ヒドロキシ安息香酸メチル
（３８ｇ，０．２５ｍｏｌ）と炭酸カリウム（３５ｇ，
０．２５ｍｏｌ）を加えた。この懸濁液をアルゴン気流
下、２時間加熱還流し、放冷後氷水（５００ｍｌ）に加
えた。クロロホルム（１×６００ｍｌ，２×２００ｍ
ｌ）で抽出し、有機層を１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液
（５×４００ｍｌ）、飽和食塩水（４００ｍｌ）で洗浄
し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。この溶液の溶媒
を留去すると安息香酸メチル−モノメトキシポリエチレ
ングリコールが得られた（２５０ｇ，収率９６．８
％）。得られた化合物の1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，
ＣＤＣｌ3）は、δ＝７．９８（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，
２Ｈ，ＡｒＨ），６．９３（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２
Ｈ，ＡｒＨ），４．１８（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，
ＡｒＯＣＨ2），３．９１−３．８５（ｍ，５Ｈ，ＣＯ2
ＣＨ3andＯＣＨ2），３．８５−３．４３（ｍ），３．
３８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3）であった。13Ｃ ＮＭＲ
（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝１６６．８（Ｃ
＝Ｏ），１６２．５（ＡｒＣ），１３１．５（Ａｒ
Ｃ），１２２．７（ＡｒＣ），１１４．２（ＡｒＣ），
７１．９，７０．９，７０．６，７０．３，７０．２，
６９．９，６７．６，５９．０（ＯＣＨ3），５１．８
（ＣＯ2ＣＨ3）であった。安息香酸メチル−モノメトキ
シポリエチレングリコール（２５０ｇ，０．１１７ｍｏ
ｌ）を１Ｎ水酸化ナトリウム（５００ｍｌ）に溶解し、
室温下、１終夜攪拌した。反応液はジエチルエーテル
（３×３００ｍｌ）で洗浄し、水層に濃塩酸（８０ｍ
ｌ）を加えて酸性とし、ジエチルエーテル（５×３００
ｍｌ）で洗浄、水層よりクロロホルム（３×５００ｍ
ｌ）で抽出した。有機層を水洗（５００ｍｌ）し、無水
硫酸マグネシウムで乾燥した。この溶液の溶媒を留去
し、残査を２−プロパノールから再結晶（３回）すると
安息香酸−モノメトキシポリエチレングリコールが得ら
れた（２１０ｇ，収率８３．９％）。得られた化合物の
1ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝８．０
１（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．９４
（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），４．２０
（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＯＣＨ2），３．８
８（ｔ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＯＣＨ2），３．
８５−３．４３（ｍ），３．３８（ｓ，３Ｈ，ＯＣ
Ｈ3）であった。安息香酸−モノメトキシポリエチレン
グリコール（２５ｇ，１１．８ｍｍｏｌ）を無水トルエ
ン（５０ｍｌ）に懸濁させ、ここに塩化チオニル（１０
ｍｌ）を加えた。アルゴン気流下、４５分加熱還流し、
過剰の塩化チオニルと溶媒を留去すると、安息香酸クロ
リド−モノメトキシポリエチレングリコールが得られ
た。安息香酸クロリド−モノメトキシポリエチレングリ
コールは精製せず、溶媒留去後さらに１終夜減圧乾燥さ
せたものを次反応にそのまま用いた。 【００３３】（実施例７）２’−デオキシシチジンの核
酸塩基へのモノメトキシポリエチレングリコール修飾体
の導入 ピリジン共沸（２×２０ｍｌ）を施した２’−デオキシ
シチジンモノ塩酸塩（３．９５５ｇ，１５ｍｍｏｌ）
を、アルゴン雰囲気下、無水ピリジン（４０ｍｌ）に懸
濁させ、０℃に冷却した。ここにトリメチルクロロシラ
ン（９．５ｍｌ，７５ｍｍｏｌ）を添加し２０分攪拌し
た。合成例８に示した方法で安息香酸−モノメトキシポ
リエチレングリコール（２５．０ｇ，１１．８ｍｍｏ
ｌ）から調製した安息香酸クロリド−モノメトキシポリ
エチレングリコールをアルゴン雰囲気下、無水ピリジン
（５０ｍｌ）に溶解し、これを先の反応溶液に添加し、
室温にて２．５時間攪拌した。０℃に冷却し、蒸留水
（１０ｍｌ）を添加して反応を停止し、溶媒を減圧留去
して約１／２に濃縮した後、再び０℃に冷却し、３０％
アンモニア水（１０ｍｌ）を加え１５分攪拌した。溶媒
を留去し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍ
ｌ）を加え、クロロホルム（３×１００ｍｌ）で抽出し
た。有機層は水洗（２×１００ｍｌ）し、無水硫酸ナト
リウムで乾燥した。この溶液の溶媒を留去し、シリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム／メタノー
ル＝１００／２→１００／５）で精製するとデオキシシ
チジンのＰＥＧ修飾体が得られた（５．４７０ｇ，収率
２０％）。得られた化合物の1Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨ
ｚ，ＣＤＣｌ3）は、δ＝９．００（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｎ
Ｈ），８．４６（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ６），
７．８７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），７．
５２（ｂｒ，１Ｈ，Ｈ５），６．９８（ｄ，Ｊ＝８．８
Ｈｚ，２Ｈ，ＡｒＨ），６．２２（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈ
ｚ，１Ｈ，Ｈ１'），４．５８−４．５０（ｂｒ，２
Ｈ），４．３６−４．１５（ｍ，３Ｈ），４．１０−
３．４１（ｍ），３．３８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），
２．６２−２．５２（ｍ，１Ｈ，Ｈ２"），２．３７−
２．２３（ｍ，１Ｈ，Ｈ２'）であった。 【００３４】 【発明の効果】本発明のヌクレオシド化合物は、オリゴ
デオキシリボヌクレオチドおよびオリゴリボヌクレオチ
ドの製造において、ヌクレオチド鎖を構築する際の出発
原料として、あるいは鎖長を伸長する基本構成単位とし
て利用できる。本発明のヌクレオシド化合物は、これら
はポリエチレングリコールの良溶媒に対して可溶である
ことから、均一系での反応の実施が可能であり、従来の
固相法と比較すると、反応規模の調節は格段に容易にで
き、また、ヌクレオチド鎖構築において化学量論的反応
の実施も可能であるので、大過剰の試薬類の使用は必要
がなくなり、経済的にも有用性が認められる。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(56)参考文献 Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ
ｅａｒｃｈ，1989年，Ｖｏｌ．17， Ｎ
ｏ．12，ｐ．4863−4871
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
C07H 19/06 - 19/10
C07H 19/16 - 19/207
C07H 21/00 - 21/04
ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
ＣＡ（ＳＴＮ)
ＣＡＯＬＤ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- (57)【特許請求の範囲】 【請求項１】下記式（１）で表されるヌクレオシド化合
物。 【化１】 （式中、Ｒ1およびＲ2は水素原子またはヌクレオチド化
学において通常用いられる保護基を示し、Ｒ3は水素原
子、水酸基、アルコキシ基またはトリアルキルシリルオ
キシ基を示し、Ａは２価基でアリレン基またはヘテロ原
子を含んでもよい直鎖もしくは分岐鎖を含むアルキレン
基を示し、Ｂは下記式（２）のいずれかの基を示し、ｎ
は３以上の整数を示す） 【化２】
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