JP2010280620A - 抗アレルギー剤およびその製造方法 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】発酵工程を経ていない大豆または大豆皮を原料とすることで、分子量が2,000以上であること、水溶性であること、および、pH4以下の酸または濃度5%以上の食塩水に溶解することを特徴とする抗アレルギー剤を得る。
【選択図】なし
Description
一般的にアレルギーとは、免疫学上4つに分類されるアレルギー反応においてI型に分類される即時性のものを言う。花粉・ダニ・卵・牛乳などに含まれるアレルゲンに接することより、ヒト等において免疫応答が誘導され、アレルギー原因抗体であるIgEが産生される。各アレルゲンに結合するIgEは体中に運搬された後、肥満細胞や好塩基球上に発現しているFc受容体を介して結合し、いつでもアレルギー症状を呈することができる状況となる。そして、再び体内に取り込まれたアレルゲンが、肥満細胞や好塩基球上に結合したIgEと架橋することにより、肥満細胞あるいは好塩基球に蓄えられていたヒスタミンの遊離とロイコトリエンの産生が促され、即時性のアレルギー症状が惹起されることが知られている。これまでに、このアレルギー症状の緩和・抑制・治療を目的として、多くの文献が報告されその中の一部は実際に利用されているものもある。
特許文献3には、大豆トリプシンインヒビターがダニのプロテアーゼを阻害することによりダニアレルギーを治療する効果があることが開示されている。大豆トリプシンインヒビターは生の大豆に含まれており加熱によって失活するものであり利用上制限がある。また、食品として多量に摂取することが健康上望ましいものではない。
特許文献4には、大豆に含まれるオリゴ糖であるスタキオースを有効成分とした抗アレルギー性組成物が、また、特許文献5にはイソフラボンと大豆サポニンを配合することを特徴とした抗アレルギー剤が開示されている。
また、大豆を含む原料に麹菌などの微生物を作用させて得られる発酵物を、水で抽出した物や、食塩水等を加え、さらに長期間発酵させて得られる醤油などの発酵物から、抗アレルギー作用を持つ高分子物質が得られることが知られている(特許文献1および2)。
また、発酵処理した大豆を利用した抗アレルギー性の組成物は特許文献6,7にも開示されている。
このように大豆の発酵物には抗アレルギー活性が存在することが知られ、その一部には、特許文献3,4,5で示された物質も含まれていることも想像できる。
また、特許文献1においては、原料処理の段階では存在しなかった抗アレルギー活性が、発酵によって新たに生成すること、および、高分子成分によるものであることが示されている。しかしながら、発酵物を得るためには、発酵するための設備が必要となり、時間もかかるため効率が悪いという問題があった。そのため、発酵工程を経ることなく大豆や大豆皮から、抗アレルギー作用を持つ高分子物質を得る方法の提供が望まれている。
(1)大豆または大豆皮から得られ、
分子量が2,000以上であること、
水溶性であること、および、
pH4以下の酸または濃度5%以上の食塩水に溶解すること、
を特徴とする抗アレルギー剤。
(2)上記(1)に記載の抗アレルギー剤の製造方法であって、
1)大豆または大豆皮から得られる原料を加熱する工程、
2)pH4以下の酸または濃度5%以上の食塩水に溶解する物質を抽出溶媒によって抽出する工程、
を含む抗アレルギー剤の製造方法
(3)抽出溶媒が、水、キレート剤水溶液、pH4以下の酸または濃度5%以上の食塩水のいずれか一つ以上である、上記(2)に記載の抗アレルギー剤の製造方法
(4)さらに、ペクチン分解酵素による処理工程を含む上記(2)または(3)に記載の抗アレルギー剤の製造方法。
(5)上記(2)〜(4)のいずれかの製造方法において、さらに、酸を中和する工程、キレート剤または塩を除去する工程、濃縮する工程、乾燥する工程のいずれか一つ以上を含む、抗アレルギー剤の製造方法。
本発明によれば、大豆やその加工副産物から発酵工程を経ずに抗アレルギー剤を製造することができ、非常に効率的である。また、従来産業廃棄物として処理されていた大豆皮などを原料として利用することも可能であり、資源の有効利用にもつながる。
例えば、本発明の抗アレルギー剤の製造方法として、大豆、大豆皮に抽出溶媒を加えて蒸煮あるいは煮熟してそのろ液や煮汁を回収する、熱処理した原料に抽出溶媒を加えて攪拌し、固液分離してそのろ液を得る、等の一般的な方法が挙げられる。また、大豆の調理加工における副産物である煮汁や、醤油などの製造過程で大豆を発酵する前の工程で発生する副産物の蒸煮汁を抽出液として利用することは、資源の有効利用の上で好ましい態様である。
また、pH4以下の酸または濃度5%以上の食塩水に溶解する物質を抽出するための抽出溶媒としては、このような物質を抽出できる溶媒であればいずれの溶媒であっても良いが、pH4以下の酸または濃度5%以上の食塩水等が挙げられ、水、キレート剤水溶液等も含め、これらの一つ以上を抽出溶媒として用いることもできる。
抽出溶媒にキレート剤水溶液を利用する場合には、抗アレルギー活性を有する物質の回収率が向上でき、有用である。キレート剤としては、ヘキサメタリン酸やクエン酸、あるいはこれらの塩類が例示できる。
すなわち、酸または食塩を抽出溶媒として用いると、酸または食塩に溶解する物質のみを抽出することができる。また、酸または食塩を抽出溶媒として用いた場合に、十分に抽出されなかった場合には、これに水やキレート剤溶液を加え抽出した後、さらに酸または食塩を抽出溶媒として抽出すると、さらに酸または食塩に溶解する物質を得ることもできる。
抽出に用いる酸としては摂取して安全であるものならば特に制限はないが、塩酸、酢酸、クエン酸などの一般的に食品で利用されるものが例示できる。また、酢酸やクエン酸緩衝液等、pH4%以下の緩衝液も抽出に用いることができる。
また、原料として大豆皮などの副産物を用いる場合においては、抽出効率を高めるためにキレート剤を利用することは、製造のための経費を削減できるのでより有利な態様となる。
酸または食塩に溶解する物質を回収する方法としては、遠心分離、ろ過、圧搾などの一般的な固液分離技術が利用できる。これらの食塩や酸による処理によって発生した沈殿を除去した後の溶液は、そのまま抗アレルギー剤の有効成分として用いることもできる。
ここで、濃縮する工程には、エタノールを添加することによって発生する沈殿を採取する方法、加熱濃縮する方法、凍結乾燥やスプレードライによって濃縮する方法、減圧濃縮する方法、限外ろ過膜によって濃縮する方法等が挙げられ、これらを適宜利用することができる。また、キレート剤または塩を除去する工程には、透析や限外ろ過によって除去する方法が挙げられる。
透析や限外ろ過は本発明に関わる高分子物質が残存する分画サイズであればいずれも利用できるが、分画サイズ2,000程度以上の膜を使うことが望ましい。従って、本発明の抗アレルギー剤の有効成分は比較的高分子な物質であり、イソフラボン等の低分子物質ではない。
(1) そのままスプレードライによって乾燥させたところ4gの粉末が得られた。これを比較品Aとした。
(2) 塩酸でpH4に調整して約1時間放置後遠心分離を行って、沈殿物と溶液に分別した。沈殿物はそのまま凍結乾燥し、溶液は透析膜(分画分子量2,000、Spectrum社製CE透析チューブ)で透析後、スプレードライによって乾燥させたところ、沈殿物から約3g、溶液から約1gの乾燥粉末が得られた。それぞれ比較Bおよび発明品1−1とした。
(3) 食塩50gを加えて溶解させたのち遠心分離によって固液分離して沈殿物と溶液に分別した。ついで、食塩を除去するために、沈殿部は少量の水に溶解し、溶液部はそのままでそれぞれ透析膜(分画分子量2,000)により透析した。その後スプレードライすると、凍結乾燥すると沈殿部から約2.5g、溶液部から約0.8gの粉末が得られた。この粉末試料をそれぞれ比較品Cと発明品1−2とした。
<方法>
PCA反応抑制効果は、塩化ピクリルをハプテン(免疫原性を欠き、反応原性のみをもつ抗原)とし、Lavaudらの方法を一部改変して行った。
すなわち、1週間予備飼育した7週齢の雄性BALB/cマウス(日本クレア(株))6匹を1群とし、標準粉末飼料CE−2(日本クレア(株))に対し0.2%(w/w)となるように各種サンプルに混合した飼料を4日間自由摂取させた後、PCA反応抑制効果試験を行った。標準粉末飼料CE−2のみを与えた群を対照とした。
PCA反応抑制効果の試験は以下のように行った。2μgのanti−TNP IgE(BD Pharmingenブランド、日本ベクトン・ディッキンソン(株))を含む0.1%BSA(ナカライテスク(株))入りリン酸緩衝液100μLを、マウス尾静脈に注射し、30分間放置後、シックネスゲージ((株)尾崎製作所)を用いて耳の厚さを測定した(反応前耳厚とした)。0.8%塩化ピクリルを含むアセトン:オリーブオイル混合液(1:1(v/v))20μLをマウスの耳に塗布し、2時間放置後、シックネスゲージを用いて耳の厚さを再度測定した(反応後耳厚とした)。反応前後の耳厚の差を耳の腫れとし、各群6匹ずつの結果を統計的に検定して抗アレルギー効果を評価した。耳の腫れが小さいほど抗アレルギー効果が強いと判断された。
これら試料の1%水溶液に、等量の濃度10%の食塩水またはpH4の酢酸緩衝液を加えると、比較品A、B、およびCはいずれの場合でも直ちに不溶化(ゲル化)したが、発明品1−1および発明品1−2はpH4の酢酸緩衝液あるいは濃度10%の食塩水を加えてもほとんど変化がなく溶解した状態であった。従って、発明品1−1および発明品1−2はpH4以下の酸または濃度5%以上の食塩水に溶解する抗アレルギー剤であることが確認された。
比較品Aは発明品1−1および発明品1−2の成分も含有しているが、添加量を4倍量に増やしても抗アレルギー活性は認められなかったことから、食塩あるいは酸性化によって不溶物を除去することが重要であると考えられた。比較品Aの物質は胃の中で有効成分も巻き込んで凝集するため効果が発揮されないことも考えられるが原因は不明であった。
実施例1と同様の方法によって、発明品2のPCA抑制活性を評価した結果、表2に示したように、有意な抑制活性が認められた。酸性処理した残渣からPCA抑制活性が得られたことから、抽出溶剤としてキレート剤を使うことにより効率的に抽出できることが確認された。
実施例1と同様の方法によって、発明品3のPCA抑制反応を評価した結果、表3に示したように、比較品Aに比べてあきらかなPCA反応抑制活性が表れた。
実施例1と同様の方法によって、発明品4のPCA抑制反応を評価した結果、表4に示したように、コントロールに比べてあきらかなPCA反応抑制活性が表れた。
実施例1と同様の方法によって、発明品5のPCA抑制反応を評価した結果、表5に示したように、コントロールに比べてあきらかなPCA反応抑制活性が表れた。また、本発明品5は、pH4の酢酸緩衝液中および濃度5%以上の食塩水に緩やかに溶解することが確認された。
他の200mlに等量の95%エタノールを加えて混合し、発生した沈殿物を遠心分離によって回収し、少量の水に溶解して透析によってクエン酸およびエタノールを除去した。これを二等分して一部は水で100mlにして発明品6−2とし、他の一部を凍結乾燥すると約0.5gの乾燥物が得られ発明品6−3とした。
発明品6−1,6−2の液体品は、水の代わりに摂取させる方法で検定した。すなわち、液体試料を給水器に分注後、オートクレーブにて殺菌し、4日間自由摂取させた後、PCA反応抑制効果試験を行った。水のみを与えた群を対照とした。また、実施例1と同様の方法によって、発明品6−3のPCA抑制反応を評価した。その結果、表5に示したように、コントロールに比べてあきらかなPCA反応抑制活性が表れた。
実施例1と同様の方法によって、発明品7のPCA抑制反応を評価した結果、表6に示したように、コントロールに比べてあきらかなPCA反応抑制活性が表れた。
粉砕した大豆皮に3%クエン酸水溶液(pH2以下)を加えて90℃で3時間煮熟し圧搾、ろ過して澄明な抽出液を得た。この抽出液を限外ろ過膜(分画分子量6,000)で約1/3量になるまで濃縮するとともにクエン酸を除去し、スプレードライして発明品9を得た。実施例1と同様にして本発明品9の抗アレルギー活性を測定したところ、表8に示したように有意に耳の腫れを抑制した。また、本発明品9はpH4の酢酸緩衝液中および濃度5%以上の食塩水に緩やかに溶解することが確認された。
発明品9をゼラチンカプセルに0.5gずつ充填し、食品用、医薬用として利用できる抗アレルギー剤とした。
このカプセルを1日に3〜6粒摂取することにより花粉症や通年性アレルギーの予防や治療効果が期待できる。
Claims (5)
- 大豆または大豆皮から得られ、
分子量が2,000以上であること、
水溶性であること、および、
pH4以下の酸または濃度5%以上の食塩水に溶解すること、
を特徴とする抗アレルギー剤。 - 請求項1に記載の抗アレルギー剤の製造方法であって、
1)大豆または大豆皮から得られる原料を加熱する工程、
2)pH4以下の酸または濃度5%以上の食塩水に溶解する物質を抽出溶媒によって抽出する工程、
を含む抗アレルギー剤の製造方法 - 抽出溶媒が、水、キレート剤水溶液、pH4以下の酸または濃度5%以上の食塩水のいずれか一つ以上である、請求項2に記載の抗アレルギー剤の製造方法
- さらに、ペクチン分解酵素による処理工程を含む請求項2または3に記載の抗アレルギー剤の製造方法。
- 請求項2〜4のいずれかの製造方法において、さらに、酸を中和する工程、キレート剤または塩を除去する工程、濃縮する工程、乾燥する工程のいずれか一つ以上を含む、抗アレルギー剤の製造方法。
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