JP5794678B2 - グルカゴン様ペプチド−1分泌促進剤 - Google Patents
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Description
甘藷とは、ヒルガオ科に属する植物をいい、一般にサツマイモと呼ばれる。甘藷の品種は、特に限定されない。例えば、すいおう、ジョイホワイト、コガネセンガン、シロユタカ、サツマスターチ、アヤムラサキなどの品種が挙げられる。本明細書において「甘藷茎葉」とは、「甘藷の茎および甘藷の葉の少なくともいずれか」を指し、甘藷の葉のみ、甘藷の茎のみ、および甘藷の茎と葉との両方を含む。葉部と茎部とに篩別したものを用いてもよく、篩別しないものを用いてもよい。
甘藷茎葉は、品質安定性、長期保存性などの点から、加工(処理)が施され得る。本明細書において「甘藷茎葉加工物」とは、何らかの加工(処理)が施された甘藷茎葉をいう。処理としては、例えば、加熱処理、乾燥処理、粉末化処理、圧搾処理、抽出処理などが挙げられる。これらの処理は、1種のみを行ってもよく、2種以上を行ってもよい。収穫した甘藷茎葉は、付着した泥などを水で洗浄した後にこれらの処理に供され得る。以下、甘藷茎葉の処理について具体的に説明する。
加熱処理は、甘藷茎葉中の酵素の失活による品質の安定化、および甘藷茎葉の褪色を防ぐ目的で行われる。加熱処理としては、例えば、ブランチング処理、乾熱処理、マイクロウェーブ処理、赤外線または遠赤外線処理、水蒸気処理などが挙げられる。これら加熱処理のうち、ブランチング処理および水蒸気処理が好ましく用いられる。さらに、処理工程の便宜上、必要に応じて、甘藷茎葉を長径3〜30cm程度に裁断してから、各処理を行ってもよい。
乾燥処理は、加工前の甘藷茎葉の品質を保持するために、好ましく行われる。乾燥処理は、甘藷茎葉を、好ましくは上記の加熱処理を施した後、そのまま、またはペースト状および圧搾して搾汁にした後、当業者が通常用いる任意の乾燥方法を用いて行われる。乾燥処理は、乾燥方法に応じた乾燥機、例えば、熱風乾燥機、高圧蒸気乾燥機、電磁波乾燥機、凍結乾燥機、減圧濃縮機、噴霧乾燥機、直火式加熱機、回転式通風乾燥機などを用いて行われる。
粉末化処理は、乾燥後または未乾燥の甘藷茎葉のいずれに対しても行われ得る。甘藷茎葉は、上記の加熱処理が施されていることが好ましい。乾燥した甘藷茎葉を粉末化処理に供し、甘藷茎葉乾燥粉末とし得る。未乾燥の甘藷茎葉を粉砕して細片状、ペースト状などにしてから、乾燥処理に供し、甘藷茎葉粉末を生成し得る。甘藷茎葉は、茎部と葉部(葉身部および葉柄部を含む)とからなるので、粉末化処理は、粉砕の効率を上げる観点から、粗粉砕工程または微粉砕工程を経ることが好ましい。
甘藷茎葉を、好ましくは上記の加熱処理を施した後、圧搾機などに供し、搾汁を得ることもできる。
抽出は、甘藷茎葉の生茎葉または上記の加熱処理、乾燥処理、粉末化処理、圧搾処理などのいずれか少なくとも1つの処理が施された甘藷茎葉を溶媒と接触させることにより行われ得る。
甘藷茎葉(特に「すいおう」の甘藷茎葉)中のGLP−1分泌促進成分は、(i)甘藷茎葉加工物に含まれ、(ii)甘藷茎葉抽出物(特に、水抽出物(例えば、以下の調製例1の「熱水抽出物」)および含水エタノール抽出物(例えば、以下の調製例2の「含水エタノール抽出物」))中に含まれ、そして(iii)経口摂取後に胃内消化(ペプシン分解)を受けても、GLP−1分泌活性を維持し得る。さらに、GLP−1分泌促進成分は、甘藷茎葉の水溶性かつ活性炭非吸着画分(例えば、以下の調製例5に記載の「画分2」)および、水不溶性であるが含水エタノールに可溶性の画分(例えば、以下の調製例6に記載の「画分3」)中に含まれる。
甘藷茎葉粉末50gを量りとり、スパチュラで粉末を攪拌し、超音波で塊をほぐしながら、フラスコ内の常温(20℃)の純水に懸濁した。フラスコをオイルバス(98℃)上の沸騰水浴中に配置し、15〜20分おきに振り混ぜながら、2時間加熱した。粗熱を取った後、フラスコ内容物を吸引ろ過した。ろ液を回収し、減圧濃縮した(水温50℃)。得られた濃縮物を凍結乾燥し、粉末を得た(以下、単に「熱水抽出物」または「甘藷茎葉熱水抽出物」ともいう)。
甘藷茎葉粉末50gを量りとり、スパチュラで粉末を攪拌し、超音波で塊をほぐしながら、フラスコ内の常温(20℃)の60容量%含水エタノールに懸濁した。スターラーで粉末を攪拌しながら、常温(20℃)にて充分浸漬した(遮光はしなかった)。フラスコ内容物を吸引ろ過し、ろ液を回収し、減圧濃縮(水温40℃)した後、凍結乾燥し、粉末を得た(以下、単に「含水エタノール抽出物」または「甘藷茎葉含水エタノール抽出物」ともいう)。
甘藷茎葉粉末10gをpH1.85のリン酸緩衝液に懸濁し、ペプシン(シグマ社製)をこの乾燥粉末に対して0.5質量%の割合で添加した。この混合液を37℃にて10分間保持し、ペプシン処理を行った。沸騰浴中で20分間処理して酵素反応を停止後、水酸化カルシウムで中和し、遠心分離後の上清を凍結乾燥し、粉末を得た(以下、単に「ペプシン分解物(10分)」または「甘藷茎葉ペプシン分解物(10分)」ともいう)。
ペプシン処理時間を60分間としたこと以外は、調製例3と同様にして甘藷茎葉ペプシン分解物の粉末を得た(以下、単に「ペプシン分解物(60分)」または「甘藷茎葉ペプシン分解物(60分)」ともいう)。
GLP−1分泌試験を以下の手順で行った。まず、マウス大腸由来のGLP−1産生細胞株GLUTag(Dr. Daniel J. Drucker, Mount Sinai Hospital Samuel Lunenfeld Research Institute Banting and Best Diabetes Centre, University of Torontoより提供)を、48ウェルプレート中で、10%ウシ胎児血清(FBS)を含むダルベッコ改変イーグル培地にて、37℃、5%CO2存在下、サブコンフルエントになるまで2〜3日間培養した。続いて、ウェルから培養培地を取り除き、Hepesバッファー(140mM NaCl、4.5mM KCl、20mM Hepes、1.2mM CaCl2、1.2mM MgCl2、10mM D-グルコース、0.1% ウシ血清アルブミン(BSA)、pH 7.4)にてウェル中で細胞を洗浄した後、同Hepesバッファーに溶解した試験物質溶液80μLを各ウェルに添加し、37℃にて60分間インキュベートした。上清を回収し、800×gで4℃にて5分間、遠心分離して細胞を沈殿させ、その上清70μLを回収し、凍結保存した。凍結保存した上清を適宜解凍し、上清中のGLP−1濃度を、市販のEnzyme immuno assay kit(矢内原研究所製)を用いて定量した。上清中のGLP−1濃度(nM)をGLP−1産生細胞株GLUTagからのGLP−1分泌量とした。
ZeinH(トウモロコシ難消化性タンパク質Zeinのパパイン加水分解物:トウモロコシ由来ゼイン(東京化成工業株式会社製)を脱塩水に懸濁してpH7に調整し、パパイン(アサヒビール株式会社製)を基質に対して0.5質量%の割合で添加して55℃にて60分間処理し、煮沸によりパパインを失活させた後、遠心上清を凍結乾燥したもの;陽性コントロールとして使用);
甘藷茎葉粉末;
調製例1の熱水抽出物;
調製例2の含水エタノール抽出物;
調製例3の甘藷茎葉ペプシン分解物(10分);
調製例4の甘藷茎葉ペプシン分解物(60分)。
甘藷茎葉粉末100gを量りとり、粉末をスパチュラで攪拌し、超音波で塊をほぐしながら、フラスコ内の常温(20℃)の純水に懸濁した。スターラーで粉末を攪拌しながら、常温(20℃)にて充分浸漬した。その後遠心して上清を回収し、吸引ろ過して、ろ液および残渣を得た。ろ液を減圧濃縮して、得られた濃縮物を凍結乾燥し、粉末状の「水溶性画分」を得た。この「水溶性画分」を水に溶解させた後、活性炭カラムクロマトグラフィーに供し、次の2つの画分を得た。1つは、活性炭吸着物をメタノールおよびアセトンを用いて脱着させて溶出させた画分であり、これを画分1とする(「水溶性−活性炭吸着画分」)。もう1つは、活性炭に吸着せずに素通りした画分であり、これを、画分2とする(「水溶性−活性炭非吸着画分」)。
調製例5で得られた、吸引ろ過後の残渣を凍結乾燥し、粉末状の「水不溶性画分」を得た。この「水不溶性画分」に60容量%含水エタノールを添加して、次の2つの画分を得た。1つは、「水不溶性画分」を60容量%含水エタノールに懸濁および浸漬した後に得られたろ液であり、これを画分3とする(「水不溶性−60容量%エタノール溶解画分」)。もう1つは、「水不溶性画分」を60容量%含水エタノールに懸濁および浸漬した後に得られた残渣であり、これを画分4とする(「水不溶性−60容量%エタノール不溶画分」)。
試験物質として、ZeinH(陽性コントロールとして使用)、調製例1の熱水抽出物、調製例5の画分1および2、ならびに調製例6の画分3および4を用いたこと以外は、実施例1と同様にしてGLP−1分泌試験を行った。なお、試験物質は、熱水抽出物およびZeinHについては10mg/mL、そして画分1〜4については熱水抽出物10mg/mL相当量となるように調製した。
Claims (2)
- 甘藷茎葉の水溶性かつ活性炭非吸着成分、および、該甘藷茎葉の水不溶性かつ含水エタノール可溶性成分の少なくとも1つである、グルカゴン様ペプチド−1分泌促進剤。
- 前記含水エタノールが、エタノールの含有量が80容量%未満の含水エタノールである、請求項1に記載のグルカゴン様ペプチド−1分泌促進剤。
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