JP2010154866A - 植物由来栄養素を含む動物細胞培養培地 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】少なくとも1つの植物由来栄養素、例えば、少なくとも1つの植物ペプチドおよび/または少なくとも1つの植物脂質および/または少なくとも1つの植物脂肪酸を含み、さらに、必要に応じて酵母細胞の酵素消化物または抽出物含有する、インビトロでの動物細胞の培養を支持し得る無血清細胞培養培地。および、これらの細胞培養培地処方物を用いるインビトロでの動物細胞培養方法。さらに、ウイルス生成のため、本培地の動物細胞の増殖のための使用。
【選択図】なし
Description
本発明は、一般的に、細胞培養培地処方物に関する。特に、本発明は、動物細胞のインビトロ培養を促進するための1つ以上の植物ペプチドを含む細胞培養培地処方物を提供する。本発明はまた、インビトロでの動物細胞の培養のための1つ以上の植物脂質および/または脂肪酸を含む培地処方物に関する。本発明の処方物はまた、1つ以上の植物ペプチドおよび1つ以上の植物脂質または脂肪酸を含み得る。本発明に従って、このような植物由来ペプチド、脂質、および/または脂肪酸は、1つまたは多数の動物由来培養培地成分の代替として使用され得る。本発明はまた、これらの植物栄養素に基づく培養培地を用いる動物細胞を培養するための方法を提供する。本発明の培地は、動物細胞におけるウイルス産生に特に適している。
細胞培養培地
細胞培養培地は、制御された人工的なインビトロ環境下での細胞の維持および増殖に必要な栄養素を提供する。細胞培養培地の特徴および組成は、特定の細胞の使用条件に依存して変化する。重要なパラメータには、浸透圧、pH、および栄養素処方物が含まれる。
血清または動物抽出物の使用のこれらの欠点を克服するために、多数の無血清培地が開発されている。これらの培地(これらはしばしば、単一細胞タイプの培地を支持するように特に処方される)は、規定された量の、精製された増殖因子、リポタンパク質、および血清または抽出補充物により通常提供される他のタンパク質を組み込む。このような培養培地中の成分(およびそれらの濃度)が正確に知られているので、これらの培地は、一般に、「規定された培養培地」と呼ばれ、そしてしばしば「無血清培地」または「SFM」と呼ばれる。内皮細胞、ケラチノサイト、単球/マクロファージ、繊維芽細胞、ニューロン、リンパ球、骨髄細胞、または肝細胞の培養を支持するために設計されたような多数のSFM処方物が市販されており、これらはLife Technologies,Inc.(Rockville,MD)から入手可能である。
SFM中の動物タンパク質の使用の限界を克服するために、いくつかの試みが、動物タンパク質を全く含まない動物細胞培養培地を構築するためになされてきた。例えば、いくつかの培養培地は、酵母細胞抽出物を基本培地に組み込み(例えば、英国特許出願番号第GB 901673号(特許文献1);Keay,L.,Biotechnol.Bioengin.17:745-764(1975)(非特許文献5)を参照のこと)、窒素および他の必須栄養素の供給源を提供した。別のアプローチに、おいて、コムギグルテンの加水分解物を、酵母抽出物の添加を伴うかまたは伴わないで使用してインビトロでの動物細胞増殖を促進した(日本国特許出願第JP2-49579号(特許文献2))。さらに他の培地が開発されており、この培地では血清が肉の酵素消化物か、またはタンパク質(例えば、α−ラクトアルブミンまたはカゼイン(例えば、ペプトン))で置換されており、これは細菌培養において伝統的に使用されてきている(Lasfargues,E.Y.ら、In Vitro 8(6):494-500(1973)(非特許文献6);Keay,L.,Biotechnol.Bioeng.17:745-764(1975)(非特許文献5);Keay,L.、Biotechnol.Bioeng.19:399-411(1977)(非特許文献7);Schlager,E.-J.,J.Immunol.Meth.194:191-199(1996)(非特許文献8))。しかし、これらのアプローチのうちで種々の動物細胞の培養に最適な培養培地を提供したものはない。実際、コムギペプチドを用いるアプローチは、多くの動物細胞および組織の培養にとって非常に好ましくないようである。なぜなら、コムギペプチドは、インビトロおよびインビボで(特に、ヒトを含むいくつかの哺乳動物の胃腸管の細胞および組織において)毒性であること、または毒性効果の増大を誘導することが知られているからである(Strober,W.ら、Ann.Int.Med.83:242-256(1975)(非特許文献9);Auricchio,S.ら、Pediatr.Res.22(6):703-707(1987)(非特許文献10))。さらに、特定の植物(コムギ、オオムギ、ライムギ、およびカラスムギを含む)からの抽出物は、動物細胞由来の無細胞系におけるタンパク質合成を阻害することが示されている(Coleman,W.H.およびRoberts,W.K.,Biochim.Biophys.Acta 696:239-244(1982)(非特許文献11))。これは、細胞培養培地におけるこれらの植物由来のペプチドの使用が、インビトロでの動物細胞の増殖を刺激するというよりはむしろ実際には阻害し得ることを示唆する。
定義
上記成分は、溶液中で共に混和されたとき、「基本培地」を形成する。しかし、他の基本培地は、本発明に従って等価に用いられ得る。本発明に従って、少なくとも1つのペプチド、抽出物、植物タンパク質の酵素消化物もしくは加水分解物、ならびに/または少なくとも1つの植物由来脂質および/もしくは脂肪酸が、本発明の完全培養培地を処方するために基本培地に添加される。
本発明の培地において培養され得る細胞は、動物起源の細胞(哺乳動物、鳥、昆虫、または魚から得られる細胞を含むがこれらに限定されない)である。本発明の培地中での培養に特に適切な噛乳動物細胞には、ヒト起源の細胞が含まれる。組織サンプルに由来する初代細胞、二倍体細胞系統、形質転換細胞または樹立した細胞株(例えば、HeLa)であり得る。これらのそれぞれは、随意に、罹患していてもよいし、または遺伝的に改変されていてもよい。他の哺乳動物細胞、例えば、ハイブリドーマ、CHO細胞、COS細胞、VERO細胞、HeLa細胞、293細胞、PER-C6細胞、K562細胞、MOLT-4細胞、M1細胞、NS-1細胞、COS-7細胞、MDBK細胞、MDCK細胞、MRC-5細胞、WI-38細胞、WEHI細胞、SP2/0細胞、BHK細胞(BHK-21細胞を含む)、およびそれらの誘導体もまた、本発明の培地における培養に適切である。特に、幹細胞およびインビトロでのウイルス産生に使用される細胞は、本発明の培地中で培養され得る。本発明の培地での培養に特に適切な昆虫細胞には、Spodoptera種(例えば、Spodoptera frugiperdaに由来するSf9またはSf2I)またはTrichoplusa種(例えば、Trichoplusa niに由来するHIGH FIVETMまたはMG1)に由来する細胞が含まれる。動物に由来するかまたは当該分野で日常的な方法を使用してインビトロもしくはインビボで構築される組織、器官、器官系、および生物は、同様に、本発明の培養培地において培養され得る。
本発明の培地中での培養のための動物細胞は、商業的に、例えば、ATCC(Rock ville,Maryland)、Cell Systems,Inc.(Kirkland,Washington)、またはInvitrogen Corporation(San Diego,Callfornia)から入手され得る。あるいは、細胞は、生検、剖検、提供(donation)、またはその他の外科手術的もしくは医学的手順を介して得られる動物組織のサンプルから直接単離され得る。
単離された細胞は、研究者らによって決定される実験条件に従ってプレートされ得る。下記の実施例は、特定の哺乳動物細胞の培養に有用な培養条件の少なくとも1つの機能的なセットを示す。しかし、所定の動物細胞タイプに最適なプレーティングおよび培養条件は、日常的な実験のみを使用して、当業者によって決定され得る。日常的な培養条件については、本発明を使用して、細胞は、付着因子なしで培養容器の表面にプレートされ得る。あるいは、容器は、天然、組換えもしくは合成の付着因子またはペプチドフラグメント(例えば、コラーゲンまたはフィブロネクチン、あるいはその天然または合成フラグメント)で予めコーティングされ得る。単離細胞はまた、天然もしくは合成の三次元支持体マトリクス(例えば、予め形成したコラーゲンゲルもしくは合成生体ポリマー物質)または細胞のフィーダー層に播種され得る。本発明の培地と共に付着因子または支持体マトリクスを使用することにより、血清補充のない場合の多くの付着依存性細胞の培養が増強される。
本発明の細胞培養培地はまた、本発明の培地および動物細胞を含む細胞培養組成物を作成するために使用され得る。このような組成物において好ましく使用される動物細胞には、哺乳動物、鳥、昆虫または魚から得られる細胞が含まれるがこれらに限定されない。このような組成物における使用に特に適切な哺乳動物細胞(ヒト起源のものを含む)は、組織サンプルに由来する初代細胞、二倍体細胞系統、形質転換細胞または樹立した細胞株(例えば、HeLa)であり得る。これらのそれぞれは、随意に、罹患していてもよいし、または遺伝的に改変されていてもよい。他の哺乳動物細胞、例えば、ハイブリドーマ、CHO細胞、COS細胞、VERO細胞、HeLa細胞、293細胞、PER-C6細胞、K562細胞、MOLT-4細胞、M1細胞、NS-1細胞、COS-7細胞、MDBK細胞、MDCK細胞、MRC-5細胞、WI-38細胞、SP2/0細胞、BHK細胞(BHK-21細胞を含む)、およびそれらの誘導体もまた、本発明の細胞培養組成物の形成における使用に適切である。このような組成物の形成における使用に特に適切な昆虫細胞には、Spodoptera種(例えば、Spodopiera frugiperdaに由来するSf9またはSf2I)またはTrichoplusa種(例えば、Trichoplusa niに由来するHIGH FIVETMまたはMG1)に由来する細胞が含まれる。動物に由来するかまたは当該分野で日常的な方法を使用してインビトロもしくはインビボで構築される組織、器官、器官系、および生物は、同様に、本発明の細胞培養組成物を形成するために使用され得る。これらの細胞培養組成物は、無血清培地における既製(ready-to-use)の動物細胞培養物を必要とする種々の医学適用(診断的適用および治療的適用を含む)、工業的適用、法医学的適用、および研究適用で使用され得る。
以下の実施例に各々において、以下の材料および方法を概して使用した。
20リットルの蒸留脱イオン水(以後「ddH2O」とする)を得、そして充分量(約200〜300ml)の5N HClを添加して、この水のpHを約0.80にまで低減させた。この水に微量元素(1000×ストックから)、L-アラニン(0.22g)、L-アルギニン・HCl(9.75g)、L-アスパラギン・HCl(1.02g)、L-アスパラギン酸(0.332g)、L-システイン・HCl-H2O(0.610g)、L-システイン・HCl(2.87g)、グリシン(0.188g)、L-グルタミン酸(0.268g)、L-ヒスチジン・HCl-H2O(1.707g)、L-イソロイシン(4284g)、L-ロイシン(4.511g)、L-リジン・HCl(5.640g)、L-メチオニン(1.266g)、L-フェニルアラニン(2.420g)、L-プロリン(1.00g)、L-セリン(1.261g)、L-スレオニン(3.260g)、L-トリプトファン(0.619g)、L-チロシン-二ナトリウム塩(3.429g)、L-バリン(3.434g)、チミジン(0.0070g)、グルタチオン(0.015g)、ピリドキサル・HCl(0.025g)、ピリドキシン・HCl(10.00062g)、チアミン・HCl(0.05g)、MgSO4(2.45g)、およびクエン酸鉄(III)キレート(0.015g)を加えた。この溶液を、約15分間にわたる磁気攪拌により緩和に混合した。次いで、この溶液のpHを、充分量(約20〜25ml)の5N NaOHを添加することにより約5.50に調整した。
初期研究を、動物細胞の培養を維持する動物タンパク質を完全に除いた培養培地を処方するように設計した。この目的のために、種々の非動物供給源の酵素加水分解物を、実施例1に記載のように基本培地中の補充物として試験した。コムギグルテンの加水分解物(HYPEP 4301 I、以下「コムギ加水分解物1」と命名する、およびHYPEP 8382、以下「コムギ加水分解物2」と命名する)、ダイズ(HY-SOY)、およびコメ(HYPEP 5115)、ならびにパン酵母抽出物(HY-YEST 444)を、Quest International(Norwich New York)から得、そして実施例1の基本培地に200mg/リットルで処方した。VERO細胞を種々の培地処方物中で培養し、そして細胞数を、上記の材料および方法に記載されるように決定し、そして補充していない基本培地(ネガティブコントロール)または500mg/リットルのヒト血清アルブミン(HSA)で補充した基本培地(ポジティブコントロール)中で得られた数と比較した。表2に示す結果は、培地処方物の各々について、3継代にわたる25cm2フラスコあたりの平均細胞数および相対増殖効率(RGE)を示す。RGEは、所定の培地処方物についての平均細胞数をHSAコントロールについての平均によって除することにより計算した。
これらの結果は、培養培地のための補充物として試験した植物ペプチドのなかで、コメの加水分解物が最も最適であったことを示す。酵母抽出物およびダイズ抽出物は単独で、細胞増殖をある程度維持したが、コメペプチド補充で得られた結果はダイズ抽出物または酵母抽出物で得られた結果よりも有意により高く、そしてコムギ抽出物についての結果より約3倍高かった。従って、コメ加水分解物が、動物細胞の培養に適した、動物タンパク質を含まない培養培地処方物における補充物として好ましい。
本発明の培池のための補充物としてのコメ加水分解物の効力をより詳細に試験するために、コメ加水分解物を、異なる濃度で基本培地に補充し;次いで、これらの培地を使用して上記に記載のようにVERO細胞増殖を試験した。細胞数を、補充しない基本培地(ネガティブコントロール)で得られた数か、または5%仔ウシ血清(FBS;ポジティブコントロール)を補充したEarleの改変Eagle培地(EMEM)と比較した。表3に示される結果は、培地処方物の各々についての平均細胞数および相対増殖効率(RGE)を示し;RGEは、実施例2に記載されるように計算した。本実施例において、コントロールは5%仔ウシ血清(FBS)を含んでおり、これは、VERO細胞を増殖させるために通常用いられているが、HSAよりも培地中においてあまり有効ではない。
以上をまとめると、本研究の結果は、100mg/リットルという低い濃度でコメ加水分解物を補充した基本培地の使用が、5%FBSを補充したEMEMの使用と少なくとも同様にVERO細胞の増殖を維持することを示す。従って、これらの結果は、100〜300mg/リットルの濃度でのコメ加水分解物が本発明の動物細胞培養培地を処方することにおける使用のための最適な補充物であることを示す。
非動物ペプチドおよびビタミンの本発明の培地のための補充物としてのさらなる供給源を試験するために、酵母、ダイズ、およびジャガイモの抽出物をQuest Internationalから得、そして異なる濃度で基本培地中に補充した。酵母抽出物(YE)はまた、コメ加水分解物との同時補充物として試験した。次いで、これらの培地を使用して上記に記載されるようにVERO細胞増殖を試験した。細胞数を、5%FBSで補充したEMEMで得られた細胞数と比較した。表4に示す結果は、培地処方物の各々についての平均細胞数および相対増殖効率(RGE)を示す。RGEは、実施例2に記載されるように計算した。
これらの結果は、100mg/リットルのYE、または200mg/リットルのジャガイモ抽出物またはダイズ抽出物のいずれかでの実施例1の基本培地への補充が、FBSを補充したポジティブコントロール培地とほぼ同様に動物細胞の増殖を維持することを示す。しかし、より高濃度のYEは、あまり最適ではなく、そしての最高濃度(6000mg/リットル)は、実際、細胞増殖を阻害し得た。従って、YE、およびダイズまたはジャガイモ加水分解物が、本発明の動物細胞培養培地の処方物のための非動物タンパク質の供給源として使用され得る。
本発明の培地における補充物としての酵母抽出物の使用をより詳細に試験するために、YEの調製物またはYEの限外濾過物(「YEU」)を、100mg/リットルのコメ加水分解物の存在下または非存在下で基本培地に補充した。次いで、これらの培地を使用して、上記のようにVEROの細胞増殖を試験した。細胞数は、5%FBS(ポジティブコントロール)を補充したEMEMにおいて得られた細胞数と比較した。表5に示す結果は、培地処方物の各々についての平均細胞数および相対増殖効率(RGE)を示す;RGEは、実施例2に記載されるように計算した。
培養培地の性能に対する増殖因子濃度の効果を試験するために、組換えヒトEGFを、種々の濃度にて実施例1の基本培地に添加した。次いで、上記のように、これらの培地を用いてVERO細胞増殖を試験した。細胞数を、補充していない基本培地(ネガティブコントロール)において得られる細胞数、または5% FBSで補充したEMEM(ポジティブコントロール)と比較した。表6において示される結果は、各EGF濃度についての平均細胞数および相対的増殖効率(RGE)を示し;RGEを、実施例2において記載されるように計算した。
広範なEGF濃度でのこれらの最初の結果は、本培地中のEGFの10mg/リットルという濃度は、動物細胞の増殖を支持するために最適であることを示唆した。この効果をより詳しく試験するために、これらの実験を、より狭い範囲のEGF濃度で繰り返した。これらの研究の結果を、表7に示す。
本培養培地の性能をさらなる植物由来の栄養物を用いてさらに増強し得るか否かを決定するために、実施例1に記載のように作製され、実施例3に記載されるコメペプチドおよび1つ以上の植物由来脂質または脂肪酸処方物をさらに含む培養培地を用いて、VERO細胞を培養した。細胞を、T-25フラスコ内の、植物由来脂質もしくは脂肪酸を補充していない培養培地(コントロール)、またはMatreya,Inc.(Pleasant Gap,Pennsylvania)から得た、示された割合で存在する成分を有する、以下の植物脂質もしくは脂肪酸混合物のうちの1つを、5μg/ml、0.5μg/ml、または0.05μg/mlで補充した培養培地中にプレーティングした:
RM-1:パルミチン酸(6.0%)、ステアリン酸(3.0%)、オレイン酸(35.0%) 、リノール酸(50.0%)、リノレン酸(3.0%)、アラキドン酸(arachidate)(3.0%)
RM-2:パルミチン酸(7.0%)、ステアリン酸(5.0%)、オレイン酸(18.0%)、リノール酸(36.0%)、リノレン酸(34.0%)
RM-3:ミリスチン酸(11.0%)、パルミチン酸(4.0%)、ステアリン酸(3.0%)、オレイン酸(45.0%)、リノール酸(15.0%)、リノレン酸(3.0%)、アラキドン酸(3.0%)、ベヘン酸(3.0%)、エルカ酸(20.0%)、リグノセリン酸(3.0%)
RM-5:カプリル酸(7.0%)、カプリン酸(5.0%)、ラウリン酸(48.0%)、ミリスチン酸(15.0%)、パルミチン酸(7.0%)、ステアリン酸(3.0%)、オレイン酸(12.0%)、リノール酸(3.0%)RM-6:ミリスチン酸(2.0%)、パルミチン酸(30.0%)、パルミトレイン酸ステアリン酸(14.0%)、オレイン酸(41.0%)、リノール酸(7.0%)、リノレン酸(3.0%)
これらの結果は、これらの脂質/脂肪酸混合物を含まないコントロール培地と比較した場合、植物由来の脂質/脂肪酸混合物での培養培地の補充は、VERO細胞の増殖を増強することを示す。ほとんどの植物脂質/脂肪酸混合物の、培養培地中、0.05〜5μg/mlの濃度での使用は、3継代にわたってVERO細胞増殖における実質的な増加を誘導し、RM-1混合物は、各継代にて最も顕著な増加を明らかに提供した。先述の実施例からの結果とまとめると、これらの結果は、植物由来の栄養物の組み合わせ(例えば、植物ペプチド、および植物脂質または脂肪酸)を含む細胞培養培地は、哺乳動物細胞の培養および増殖を支持する際に有用であることを示す。
Claims (55)
- 少なくとも1つの植物由来ペプチドを含む細胞培養培地であって、ただし、該ペプチドはコムギ由来ではなく、ここで、該培地がインビトロで動物細胞の培養を支持し得る、細胞培養培地。
- 少なくとも1つの植物由来脂質または少なくとも1つの植物由来脂肪酸を含む細胞培養培地であって、該培地がインビトロでの動物細胞の培養を支持し得る、細胞培養培地。
- 前記ペプチドがコメ由来である、請求項1に記載の細胞培養培地。
- 前記培地が、酵母細胞の酵素消化物または抽出物をさらに含む、請求項1に記載の細胞培養培地。
- 前記培地が、酵母細胞の酵素消化物または抽出物をさらに含む、請求項2に記載の細胞培養培地。
- 酵母細胞の抽出物を含む細胞培養培地であって、ただし、該培地はコムギ由来植物ペプチドをさらに含まず、ここで、該培地がインビトロでの動物細胞の培養を支持し得る、細胞培養培地。
- 前記培地が、少なくとも1つの植物由来脂質または少なくとも1つの植物由来脂肪酸をさらに含む、請求項1または4〜6のいずれか1項に記載の細胞培養培地。
- 前記培地が1×培地処方物である、請求項1または4〜6のいずれか1項に記載の細胞培養培地。
- 前記培地が10×〜100×培地処方物である、請求項1または4〜6のいずれか1項に記載の細胞培養培地。
- 前記培地が、少なくとも1つのアミノ酸、少なくとも1つのビタミン少なくとも1つの無機塩、少なくとも1つの微量元素、少なくとも1つの植物脂質または脂肪酸、硫酸アデニン、ATP、デオキシリボース、エタノールアミン、D-グルコース、グルタチオン、N-[2-ヒドロキシエチル]ピペラジン-N'-[2-エタンスルホン酸](HEPES)、ヒポキサンチン、リノール酸、リポ酸、インシュリン、フェノールレッド、ホスホエタノールアミン、プトレシン、ピルビン酸ナトリウム、チミジン、ウラシル、およびキサンチンからなる成分の群から選択される、少なくとも1つの成分をさらに含む、請求項1または4〜6のいずれか1項に記載の細胞培養培地。
- 前記アミノ酸成分が、L-アラニン、L-アルギニン、L-アスパラギン、L-アスパラギン酸、L-シスチン、L-システイン、L-グルタミン酸、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-ロイシン、L-リジン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、およびL-バリンからなる群から選択される1つ以上のアミノ酸を含む、請求項10に記載の細胞培養培地。
- 前記ビタミン成分が、アスコルビン酸マグネシウム塩、ビオチン、塩化コリン、D-Ca++-パントテン酸、葉酸、i-イノシトール、メナジオン、ナイアシンアミド、ニコチン酸、パラアミノ安息香酸(PABA)、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、ビタミンAアセテート、ビタミンB12、およびビタミンD2からなる群から選択される1つ以上のビタミンを含む、請求項10に記載の細胞培養培地。
- 前記無機塩成分が、CaCl2、KCl、MgCl2、MgSO4、NaCl、NaHCO3、Na2HP04、NaH2PO4、およびクエン酸第二鉄キレートからなる群から選択される1つ以上の無機塩を含む、請求項10に記載の細胞培養培地。
- 前記微量元素成分が、バリウム、臭素、コバルト、ヨウ素、マンガン、クロム、銅、ニッケル、セレン、バナジウム、チタン、ゲルマニウム、モリブデン、シリコン、鉄、フッ素、銀、ルビジウム、スズ、ジルコニウウム、カドミウム、亜鉛、およびアルミニウムからなる群から選択される1つ以上の微量元素のイオンを含む、請求項10に記載の細胞培養培地。
- 硫酸アデニン、ATP、デオキシリボース、エタノールアミン・HCl、D-グルコース、グルタチオン、N-[2-ヒドロキシエチル]ピペラジン-N'-[2-エタンスルホン酸](HEPIES)、ヒポキサンチン、リノール酸、リポ酸、インシュリン、フェノールレッド、ホスホエタノールアミン、プトレシン、ピルビン酸ナトリウム、チミジン、ウラシル、キサンチン、L-アラニン、L-アルギニン、L-アスパラギン、L-アスパラギン酸、L-シスチン、L-システイン、L-グルタミン酸、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-ロイシン、L-リジン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン、アスコルビン酸マグネシウム塩、ビオチン、塩化コリン、D-Ca++-パントテン酸、葉酸、i-イノシトール、メナジオン、ナイアシンアミド、ニコチン酸、パラアミノ安息香酸(PABA)、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、ビタミンAアセテート、ビタミンB12、ビタミンD2、CaCl2、KCl、MgCl2、MgSO4、NaCl、NaHCO3、Na2HPO4、NaH2PO4、Ba(C2H3O2)2、KBr、CoCl2、KI、MnCl2、Cr(SO4)3、CuSO4、NiSO、H2SeO3、NaVO3、TiCl4、Ge02、(NH4)6Mo7O24、Na2SiO3、FeSO4、NaF、AgNO3、RbCl、SnCl2、ZrOCl2、CdSO4、ZnSO4、Fe(N03)3、AlCl3、およびクエン酸第二鉄キレートの成分、
ならびに少なくとも1つの植物由来ペプチドを含む細胞培養培地であって、ただし、該ペプチドがコムギ由来でなく、
ここで、各成分が、インビトロでの動物細胞の培養を支持する量で存在する、細胞培養培地。 - 硫酸アデニン、ATP、デオキシリボース、エタノールアミン・HCl、D-グルコース、グルタチオン、N-[2-ヒドロキシエチル]ピペラジン-N'-[2-エタンスルホン酸](HEPES)、ヒポキサンチン、リノール酸、リポ酸、インシュリン、フェノールレッド、ホスホエタノールアミン、プトレシン、ピルビン酸ナトリウム、チミジン、ウラシル、キサンチン、L-アラニン、L-アルギニン、L-アスパラギン、L-アスパラギン酸、L-シスチン、L-システイン、L-グルタミン酸、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-ロイシン、L-リジン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン、アスコルビン酸マグネシウム塩、ビオチン、塩化コリン、D-Ca++-パントテン酸、葉酸、i-イノシトール、メナジオン、ナイアシンアミド、ニコチン酸、パラアミノ安息香酸(PABA)、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、ビタミンAアセテート、ビタミンB12、ビタミンD2、CaCl2、KCl、MgCl2、MgSO4、NaCl、NaHCO3、Na2HPO4、NaH2PO4、Ba(C2H3O2)2、KBr、CoCl2、Kl、MnCl2、Cr(SO4)3、CuSO4、NiSO、H2SeO3、NaVO3、TiCl4、GeO2、(NH4)6Mo7O24、Na2SiO3、FeSO4、NaF、AgNO3、RbCl、SnCl2、ZrOCl2、CdSO4、ZnSO4、Fe(NO3)3、AlCl3、およびクエン酸第二鉄キレートの成分、
ならびに少なくとも1つの植物由来脂質または少なくとも1つの植物由来脂肪酸を含む細胞培養培地であって、
ここで、各成分が、インビトロでの動物細胞の培養を支持する量で存在する、細胞培養培地。 - 硫酸アデニン、ATP、デオキシリボース、エタノールアミン・HCl、D-グルコース、グルタチオン、N-[2-ヒドロキシエチル]ピペラジン-N'-[2-エタンスルホン酸](HEPIES)、ヒポキサンチン、リノール酸、リポ酸、インシュリン、フェノールレッド、ホスホエタノールアミン、プトレシン、ピルビン酸ナトリウム、チミジン、ウラシル、キサンチン、L-アラニン、L-アルギニン、L-アスパラギン、L-アスパラギン酸、L-シスチン、L-システイン、L-グルタミン酸、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-ロイシン、L-リジン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン、アスコルビン酸マグネシウム塩、ビオチン、塩化コリン、D-Ca++-パントテン酸、葉酸、i-イノシトール、メナジオン、ナイアシンアミド、ニコチン酸、パラアミノ安息香酸(PABA)、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、ビタミンAアセテート、ビタミンB12、ビタミンD2、CaCl2、KCl、MgCl2、MgSO4、NaCl、NaHCO3、Na2HPO4、NaH2PO4、Ba(C2H3O2)2、KBr、CoCl2、KI、MnCl2、Cr(SO4)3、CuSO4、NiSO、H2SeO3、NaVO3、TiCl4、GeO2、(NH4)6Mo7O24、Na2SiO3、FeSO4、NaF、AgNO3、RbCl、SnCl2、ZrOCl2、CdSO4、ZnSO4、Fe(NO3)3、AlCl3、およびクエン酸第二鉄キレートの成分、
ならびに酵母細胞の抽出物を含む細胞培養培地であって、ただし、該培地がコムギ由来植物ペプチドをさらに含まず、
ここで、各成分が、インビトロでの動物細胞の培養を支持する量で存在する、細胞培養培地。 - 前記培地が、酵母細胞の酵素消化物または抽出物をさらに含む、請求項15または請求項16に記載の細胞培養培地。
- 少なくとも1つの植物由来脂質または少なくとも1つの植物由来脂肪酸をさらに含む、請求項15に記載の細胞培養培地。
- 少なくとも1つの植物由来脂質または少なくとも1つの植物由来脂肪酸をさらに含む、請求項17に記載の細胞培養培地。
- 少なくとも1つの植物由来ペプチドを動物細胞培養培地と合わせることによって得られる細胞培養培地であって、ただし、該植物由来ペプチドがコムギ由来ではなく、ここで、該培地はインビトロでの動物細胞の培養を支持し得る、細胞培養培地。
- 少なくとも1つの植物由来脂質または少なくとも1つの植物由来脂肪酸を動物細胞培養培地と合わせることによって得られる細胞培養培地であって、ここで、該培地はインビトロでの動物細胞の培養を支持し得る、細胞培養培地。
- 前記ペプチドがコメ由来である、請求項21に従って得られる細胞培養培地。
- 前記培地が、前記動物細胞培養培地を酵母細胞の酵素消化物または抽出物とさらに合わせることによって得られる、請求項21に従って得られる細胞培養培地。
- 前記培地が、前記動物細胞培養培地を酵母細胞の酵素消化物または抽出物とさらに合わせることによって得られる、請求項22に従って得られる細胞培養培地。
- 前記培地が、前記動物細胞培養培地を少なくとも1つの植物由来脂質または少なくとも1つの植物由来脂肪酸とさらに合わせることによって得られる、請求項21または請求項24に従って得られる細胞培養培地。
- 前記培地が、硫酸アデニン、ATP、デオキシリボース、エタノールアミン・HCl、D-グルコース、グルタチオン、N-[2-ヒドロキシエチル]ピペラジン-N'-[2-エタンスルホン酸](HEPES)、ヒポキサンチン、リノール酸、リポ酸、インシュリン、フェノールレッド、ホスホエタノールアミン、プトレシン、ピルビン酸ナトリウム、チミジン、ウラシル、キサンチン、L-アラニン、L-アルギニン、L-アスパラギン、L-アスパラギン酸、L-シスチン、L-システイン、L-グルタミン酸、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-ロイシン、L-リジン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン、アスコルビン酸マグネシウム塩、ビオチン、塩化コリン、D-Ca++-パントテン酸、葉酸、i-イノシトール、メナジオン、ナイアシンアミド、ニコチン酸、パラアミノ安息香酸(PABA)、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、ビタミンAアセテート、ビタミンB12、ビタミンD2、CaCl2、KCl、MgCl2、MgSO4、NaCl、NaHCO3、Na2HPO4、NaH2PO4、Ba(C2H3O2)2、KBr、CoCl2、KI、MnCl2、Cr(SO4)3、CuSO4、NiSO、H2SeO3、NaVO3、TiCl4、GeO2、(NH4)6Mo7O24、Na2SiO3、FeSO4、NaF、AgNO3、RbCl、SnCl2、ZrOCl2、CdSO4、ZnSO4、Fe(NO3)3、AlCl3、およびクエン酸第二鉄キレートからなる群から選択される1つ以上のさらなる成分を合わせることによって得られる、請求項21または22に従って得られる細胞培養培地であって、
ここで、各成分が、インビトロでの動物細胞の培養を支持する量で存在する、細胞培養培地。 - 酵母細胞の抽出物を動物細胞培養培地と合わせることによって得られる細胞培養培地であって、ただし、該動物細胞培養培地はコムギ由来ペプチドを含まず、ここで、該培地はインビトロでの動物細胞の培養を支持し得る、細胞培養培地。
- 前記細胞培養培地が、前記動物細胞培養培地を少なくとも1つの植物由来脂質または少なくとも1つの植物由来脂肪酸とさらに合わせることによって得られる、請求項28に従って得られる、細胞培養培地。
- 前記培地が、硫酸アデニン、ATP、デオキシリボース、エタノールアミン・HCl、D-グルコース、グルタチオン、N-[2-ヒドロキシエチル]ピペラジン-N'-[2-エタンスルホン酸](HEPES)、ヒポキサンチン、リノール酸、リポ酸、インシュリン、フェノールレッド、ホスホエタノールアミン、プトレシン、ピルビン酸ナトリウム、チミジン、ウラシル、キサンチン、L-アラニン、L-アルギニン、L-アスパラギン、L-アスパラギン酸、L-シスチン、L-システイン、L-グルタミン酸、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-ロイシン、L-リジン、L-メチオニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン、アスコルビン酸マグネシウム塩、ビオチン、塩化コリン、D-Ca++-パントテン酸、葉酸、i-イノシトール、メナジオン、ナイアシンアミド、ニコチン酸、パラアミノ安息香酸(PABA)、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、ビタミンAアセテート、ビタミンB12、ビタミンD2、CaCl2、KCl、MgCl2、MgSO4、NaCl、NaHCO3、Na2HPO4、NaH2PO4、Ba(C2H3O2)2、KBr、CoCl2、KI、MnCl2、Cr(SO4)3、CuSO4、NiSO、H2SeO3、NaVO3、TiCl4、GeO2、(NH4)6Mo7O24、Na2SiO3、FeSO4、NaF、AgNO3、RbCl、SnCl2、ZrOCl2、CdSO4、ZnSO4、Fe(NO3)3、AlCl3、およびクエン酸第二鉄キレートからなる群から選択される1つ以上のさらなる成分を合わせることによって得られる、請求項28に従って得られる動物細胞培養培地であって、
ここで、各成分が、インビトロでの動物細胞の培養を支持する量で存在する、動物細胞培養培地。 - 前記植物由来脂質または脂肪酸が、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキジン酸、ミリスチン酸、ベヘン酸、エルカ酸、リグノセリン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリル酸、およびパルミトオレイン酸、ならびにそれらの組合せからなる群から選択される、請求項2、13、21、22、またば29のいずれか1項に記載の細胞培養培地。
- 前記植物由来脂質または脂肪酸が、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキジン酸、ミリスチン酸、ベヘン酸、エルカ酸、リグノセリン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリル酸、およびパルミトオレイン酸、ならびにそれらの組合せからなる群から選択される、請求項26に記載の細胞培養培地。
-
前記動物細胞が、昆虫細胞、トリ細胞、哺乳動物細胞、および魚細胞からなる動物細胞の群から選択される、請求項1、2、6、15〜17、21、22、または28のいずれか1項に記載の細胞培養培地。 - 前記昆虫細胞が、Spodoptera spp.またはTrichoplusa spp.由来である、請求項33に記載の細胞培養培地。
- 前記哺乳動物細胞が、ヒト細胞、ハイブリドーマ細胞、CHO細胞、BHK細胞、COS細胞、VERO細胞、HeLa細胞、293細胞、PER-C6細胞、K562細胞、MOLT-4細胞、M1細胞、NS-1細胞、COS-7細胞、MDBK細胞、MDCK細胞、MRC-5細胞、WI-38細胞、WEHI細胞、SP2/0細胞、またはそれらの誘導体である、請求項33に記載の細胞培養培地。
- 動物細胞を培養する方法であって、以下の工程:
(a)該動物細胞を、請求項1、3、4、15、19、21、23、または24のいずれか1項に記載の細胞培養培地と接触させる工程;および
(b)該動物細胞の培養を支持するのに適した条件下で、該動物細胞を培養する工程、
を包含する、方法。 - 動物細胞を培養する方法であって、以下の工程:
(a)該動物細胞を、請求項2、5、16、20、22、25、または29のいずれか1項に記載の細胞培養培地と接触させる工程;および
(b)該動物細胞の培養を支持するのに適した条件下で、該動物細胞を培養する工程、
を包含する、方法。 - 動物細胞を培養する方法であって、以下の工程:
(a)該動物細胞を、請求項6、17、または28のいずれか1項に記載の細胞培養培地と接触させる工程;および
(b)該動物細胞の培養を支持するのに適した条件下で、該動物細胞を培養する工程、
を包含する、方法。 - 前記培養培地における前記ペプチドがコメ由来である、請求項36に記載の方法。
- 前記植物由来脂質または脂肪酸が、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキジン酸、ミリスチン酸、ベヘン酸、エルカ酸、リグノセリン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリル酸、およびパルミトオレイン酸、ならびにそれらの組合せからなる群から選択される、請求項37に記載の方法。
- 前記動物細胞が、昆虫細胞、トリ細胞、哺乳動物細胞、および魚細胞からなる動物細胞の群から選択される、請求項36に記載の方法。
- 前記動物細胞が、昆虫細胞、トリ細胞、哺乳動物細胞、および魚細胞からなる動物細胞の群から選択される、請求項37に記載の方法。
- 前記動物細胞が、昆虫細胞、トリ細胞、哺乳動物細胞、および魚細胞からなる動物細胞の群から選択される、請求項38に記載の細胞培養培地。
- 請求項1、2、6、15〜17、21、22、または28のいずれか1項に記載の細胞培養培地、および動物細胞を含む、組成物。
- 前記動物細胞が、昆虫細胞、トリ細胞、哺乳動物細胞、および魚細胞からなる動物細胞の群から選択される、請求項44に記載の組成物。
- 前記哺乳動物細胞が、ヒト細胞、ハイブリドーマ細胞、CHO細胞、BHK細胞、COS細胞、VERO細胞、HeLa細胞、293細胞、PER-C6細胞、K562細胞、MOLT-4細胞、M1細胞、NS-1細胞、COS-7細胞、MDBK細胞、MDCK細胞、MRC-5細胞、WI-38細胞、WEHI細胞、SP2/0細胞、またはそれらの誘導体である、請求項44に記載の組成物。
- 細胞培養培地の全ての動物由来成分が非動物由来成分と置換される、該細胞培養培地を生成するための方法であって、該方法は、動物由来成分を含まない基本細胞培養培地を少なくとも1つの非コムギ由来植物ペプチドと合わせる工程を包含し、ここで、各成分がインビトロでの動物細胞の培養を支持する量で存在する、方法。
- 細胞培養培地の全ての動物由来成分が非動物由来成分と置換される、該細胞培養培地を生成するための方法であって、該方法は、動物由来成分を含まない基本細胞培養培地を少なくとも1つの植物由来脂質または少なくとも1つの植物由来脂肪酸と合わせる工程を包含し、ここで、各成分がインビトロでの動物細胞の培養を支持する量で存在する、方法。
- 細胞培養培地の全ての動物由来成分が非動物由来成分と置換される、該細胞培養培地を生成するための方法であって、該方法は、動物由来成分を含まない基本細胞培養培地を酵母細胞の抽出物または酵素消化物と合わせる工程を包含し、ここで、各成分がインビトロでの動物細胞の培養を支持する量で存在する、方法。
- 前記基本細胞培養培地が、硫酸アデニン、ATP、デオキシリボース、エタノールアミン・HCl、D-グルコース、グルタチオン、N-[2-ヒドロキシエチル]ピペラジン-N'-[2-エタンスルホン酸](HEPES)、ヒポキサンチン、リノール酸、リポ酸、インシュリン、フェノールレッド、ホスホエタノールアミン、プトレシン、ピルビン酸ナトリウム、チミジン、ウラシル、キサンチン、L-アラニン、L-アルギニン、L-アスパラギン、L-アスパラギン酸、L-シスチン、L-システイン、L-グルタミン酸、グリシン、L-ヒスチジン、L-イソロイシン、L-ロイシン、L-リジン、L-メチ[オニン、L-フェニルアラニン、L-プロリン、L-セリン、L-スレオニン、L-トリプトファン、L-チロシン、L-バリン、アスコルビン酸マグネシウム塩、ビオチン、塩化コリン、D-Ca++-パントテン酸、葉酸、i-イノシトール、メナジオン、ナイアシンアミド、ニコチン酸、パラアミノ安息香酸(PABA)、ピリドキサル、ピリドキシン、リボフラビン、チアミン、ビタミンAアセテート、ビタミンB12、ビタミンD2、CaCl2、KCl、MgCl2、MgSO4、NaCl、NaHCO3、Na2HPO4、NaH2PO4、Ba(C2H3O2)2、KBr、CoCl2、KI、MnCl2、Cr(SO4)3、CuSO4、NiSO、H2SeO3、NaVO3、TiCl4、GeO2、(NH4)6Mo7O24、Na2SiO3、FeSO4、NaF、AgNO3、RbCl、SnCl2、ZrOCl2、CdSO4、ZnSO4、Fe(NO3)3、AlCl3、およびクエン酸第二鉄キレートからなる成分の群から選択される1つ以上の成分を含む、請求項47〜49のいずれか1項に記載の方法。
- 前記植物由来ペプチドがコメ由来である、請求項47に記載の方法。
- 前記植物由来脂質または脂肪酸が、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキジン酸、ミリスチン酸、ベヘン酸、エルカ酸、リグノセリン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリル酸、およびパルミトオレイン酸、ならびにそれらの組合せからなる群から選択される、請求項48に記載の方法。
- 請求項47に記載の方法に従って生成される、細胞培養培地。
- 請求項48に記載の方法に従って生成される、細胞培養培地。
- 請求項49に記載の方法に従って生成される、細胞培養培地。
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